KR101741002B1 - 항산화 활성을 갖는 펩타이드 및 이를 포함하는 조성물 - Google Patents

항산화 활성을 갖는 펩타이드 및 이를 포함하는 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 서열번호 1 내지 6으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 아미노산 서열을 가지는, 항산화 활성을 갖는 펩타이드를 제공한다. 본 발명의 펩타이드는 우수한 항산화 활성을 가지며, 이를 이용하여 식품, 의약품 및 화장품 조성물에 다양하게 활용할 수 있다.

Description

항산화 활성을 갖는 펩타이드 및 이를 포함하는 조성물{Peptide having antioxidant activity and composition comprising thereof}
본 발명은 항산화 활성을 갖는 기능성 펩타이드 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 라디칼 소거능이 우수한 항산화 활성을 갖는 기능성 펩타이드 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
인간을 포함한 생물은 호흡이라는 과정을 통하여 에너지를 얻고 신진대사를 하는 과정에서 흡입된 산소의 약 2%를 "산소독"이라고 불리는 활성산소(reactive oxygen species: ROS)로 변환시켜 지니고 있게 된다. 활성산소는 불안정한 성격을 띠고 있으며, 따라서 주위의 물질과 반응성이 아주 강해 세포내 단백질이나 지질분자는 물론이고 유전정보를 함유한 DNA에 산화적 손상을 입히며 결과적으로는 세포에 치명적인 손상을 입히는 것으로 알려져 있다.
상기와 같은 활성산소가 질병 유발이나 생체방어기구에 이상이 초래되거나 각종 물질적, 화학적 요인들에 의하여 생성량이 생체에 정상범위 이상으로 용량을 초과하게 될 경우 산화적 스트레스(oxidative stress)가 야기된다. 산화적 스트레스가 노화를 비롯하여 각종 질환(암, 동맥경화, 염증성 질환, 심혈관 질환 등)을 일으키는 중요한 원인임이 입증됨으로써 활성산소 소거활성을 갖는 항산화성 생체 기능 물질이 노화 억제 및 질환의 치료제로서 가능성이 크게 부각되고 있다(손 등, 식품과학과 산업, 30:22-29, 1997). 따라서 산화적 스트레스에 의한 노화 및 각종 질병의 치료제 기능을 지닐 수 있는 새로운 항산화성 생체기능물질 개발이 요구되고 있다. 일반적으로 현재 사용하고 있는 항산화제는 합성 항산화제와 천연 항산화제로 구분되는데, 대표적인 합성 항산화제인 butylated hydroxytoluene (BHT)은 동물실험에서 기형 발생 또는 암 발생에 관여하는 것으로 보고되고 있어(Branen etal., Amer. Oil Chem. Soc., 52;59-63, 1975) 뛰어난 항산화 효과에 반해 그로 인한 부작용 역시 문제시되고 있다. 반면 천연 항산화제는 합성 항산화제와 비교했을 때 부작용이 거의 없어 식품첨가물 또는 약품으로 현재 α-tocopherol이 사용되고 있지만, 비싼 가격과 지용성이라는 이용 상의 제약으로 인해 대체 천연 항산화제의 개발이 요구되고 있는 실정이기에 이에 관한 연구가 활발히 이루어지고 있다(Lee et al., Korean J. Food Preserv., 11;126-129, 2004, Lee etal., J. Life Sci., 18;1106-1114, 2008).
한편, 항산화제 연구는 의약분야, 식품분야, 화장품 분야 및 농업분야 등 다방면의 분야에서 이용될 수 있기 때문에 매우 큰 파급효과를 기대할 수 있다.
또한 최근에는 고기능성 바이오 원료를 이용한 화장품 개발도 활발히 이루어지고 있다. 이 중 대표적인 것으로 펩타이드 소재를 들 수 있다. 펩타이드 내 아미노산 서열이 가지는 배열 및 구조에 따라 생체 내 혹은 피부에서 생리활성을 가지게 되어 생물학적 제제로서의 펩타이드는 화장품 소재, 의약품 소재로서 산업적 응용가능성이 높다.
따라서 본 발명은 뛰어난 항산화 활성을 갖는 기능성 펩타이드를 제공하고자 한다. 또한, 이를 이용한 식품, 약학 또는 화장품 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명은 장관 내 소화효소를 이용하여 가수분해된, 라디칼 소거능 또는 항산화 능력이 우수한 펩타이드 또는 이의 용도를 제공하고자 한다.
또한 본 발명은 계육 가수분해물을 이용한 항산화 활성을 갖는 펩타이드를 제조하는 방법을 제공하고자 한다.
본 발명은 서열번호 1 내지 6으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 아미노산 서열을 가지는, 항산화 활성을 갖는 펩타이드를 제공한다.
본 발명의 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드는 Glu-Val-Glu-Leu-Lys-Glu 이다.
본 발명의 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드는 Glu-Asn-Lys-Ser-Glu-Leu-Ser-Gln 이다.
본 발명의 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드는 Trp-Ile-Leu-Glu-Glu 이다.
본 발명의 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드는 Gln-Glu-Val-Cys-Gly-Thr-Asp-Gly-Val-Thr 이다.
본 발명의 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드는 Gln-Asp-Asp-Val-Ala-Val-Pro-Gln 이다.
본 발명의 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드는 Thr-Gly-Ser-Ser-Asn-Leu-Trp-Val-Pro 이다.
본 발명은 바람직하게 상기 서열번호 4 및/또는 6의 아미노산 서열을 갖는, 항산화 활성이 우수한 펩타이드를 제공한다.
본 명세서에서 사용된 항산화 활성이라는 용어는, 세포내 대사 또는 자외선의 영향으로 인한 산화적 스트레스에 따라 반응성이 높은 자유 라디칼(free radical) 또는 활성산소종(reactive oxygen species;ROS)에 의한 세포의 산화를 억제하는 것을 말하며, 자유 라디칼 또는 활성산소종을 제거하여 이로 인한 세포의 손상이 감소되는 것을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 계육(鷄肉)이라 함은, 닭의 살 부위를 의미하며, 바람직하게 닭의 가슴살 부위를 의미한다. 계육의 가슴살은 결체 조직이나 지방의 함량이 낮고 근섬유단백질의 함량이 높아 펩타이의 수율이 높다.
본 발명의 발명자들은 다양한 축산물 유래 기능성 펩타이드에 대한 연구를 거듭한 결과, 계육 가수분해물로부터 분리한 펩타이드의 항산화 활성을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.
특히 본 발명의 발명자들은 장관 내 소화효소를 이용하여 계육을 가수분해하여 얻은 펩타이드가 우수한 항산화 활성을 갖는다는 것을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다. 바람직하게 상기 장관 내 소화효소는 펩신, 판크레아틴 또는 이들의 혼합물일 수 있다.
상기 펩신은 위(stomach)의 주세포(chief cell)에서 분비되는 소화효소(digestive enzyme)이며, 상기 판크레아틴은 주로 돼지의 췌장에서 얻은 전분소화력, 단백소화력 및 지방소화력이 있는 효소제이다.
계육을 상기 장과 내 소화효소로 처리한 후 일정 시간 배양하며 가수분해물을 얻을 수 있다.
본 발명의 다른 실시예에 따르면, 상기 펩타이드를 포함하는 항산화용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 허용가능한 첨가제를 더 포함할 수 있으며, 이때 약학적으로 허용가능한 첨가제로는 전분, 젤라틴화 전분, 미결정셀룰로오스, 포비돈, 콜로이달실리콘디옥시드, 인산수소칼슘, 락토오스, 만니톨, 엿, 아라비아고무, 전호화전분, 옥수수전분, 분말셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 오파드라이(opary), 전분글리콜산나트륨, 카르나우바 납, 합성규산알루미늄, 스테아린산, 스테아린산마그네슘, 스테아린산알루미늄, 스테아린산칼슘, 백당, 덱스트로스, 소르비톨 및 탈크 등이 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 약학적으로 허용가능한 첨가제는 상기 조성물에 대해 0.1-90 중량부 포함되는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 약학적 조성물은 실제 임상 투여 시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 통상 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 펩타이드에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스, 락토오스 또는 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 액상파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 피부 외용 또는 복강내 주사, 직장내 주사, 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하다.
본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하며, 일일 투여량은 본 발명의 펩타이드의 양을 기준으로 0.0001-100 ㎎/㎏이고, 바람직하게는 0.001-10 ㎎/㎏이며, 하루 1-6 회 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
또 다른 실시예에 따르면, 상기 펩타이드를 포함하는 항산화용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 건강식품 조성물은 본 발명의 펩타이드를 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.
본 발명의 건강식품 조성물의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 펩타이드를 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 단당류, 말토오스, 수크로스와 같은 이당류, 및 덱스트린, 시클로덱스트린과 같은 다당류, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01-0.04 g, 바람직하게는 약 0.02-0.03 g 이다.
본 발명의 건강식품 조성물은 상기 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강식품 조성물 100 중량부당 0.01-0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 발명의 다른 실시예에 따르면, 상기 펩타이드를 포함하는 항산화용 화장품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부외용제 또는 화장품 등으로 제형화될 수 있다. 상기 피부 외용제는 연고제, 경고제, 스프레이제, 현탁액, 유액, 크림, 젤 등을 포함하는 것일 수 있다. 상기 화장품은 기초화장품, 메이크업 화장품, 바디 화장품, 면도용 화장품 등을 포함하는 것일 수 있다. 상기 기초화장품의 예로는 크림, 화장수, 팩, 마사지 크림, 유액 등이 있으며, 상기 메이크업 화장품의 예로는 파운데이션, 메이크업 베이스, 립스틱, 아이새도, 아이라이너, 마스카라, 아이브로우 펜슬 등이 있으며, 바디 화장품의 예로는, 비누, 액체 세정제, 입욕제, 선스크린 크림, 선 오일 등이 있으며, 면도용 화장품의 예로는 애프터셰이브로션, 셰이빙 크림 등이 있다.
상기 본 발명의 화장료 조성물은 상기 펩타이드 이외에, 통상의 화장품에 사용 가능한 모든 종류의 성분, 예컨대 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제, 보습제, 점증제, 부형제, 희석제, 무기염류 및 합성 고분자 물질 등을 추가로 포함할 수 있으며, 그 함량은 최종 제품의 용도 및 사용 목적에 따라 적절하게 조절될 수 있다.
본 발명은 우수한 항산화 활성을 갖는 기능성 펩타이드를 제공할 수 있다.
본 발명의 항산화 활성이 우수한 기능성 펩타이드는 식품, 의약품 또는 화장품 분야 등 다양한 분야에서 활용될 수 있다.
도 1은 장관 내 소화효소를 이용하여 가수분해한 계육 분해물의 단백질 분해도를 나타낸 사진이다. M; marker, C; control (no enzyme treated), P0; pepsin 0 h, P2; pepsin 2 h, PP1; pepsin 2 h + pancreatin 1 h, PP2; pepsin 2 h + pancreatin 2 h, PP3; pepsin 2 h + pancreatin 3 h, PP4; pepsin 2 h + pancreatin 4 h, PP5; pepsin 2 h + pancreatin 5 h, PP6; pepsin 2 h + pancreatin 6 h, PP7; pepsin 2 h + pancreatin 7 h, PP8; pepsin 2 h + pancreatin 8 h
도 2는 계육 가수분해물의 항산화 활성을 보여주는 그래프이다.
도 2a는 ABTS assay의 결과를 나타내고, 도 2b는 ORAC assay 결과를 나타낸다.
도 3은 항산화 기능성 펩타이드의 아미노산 서열 확인을 위한 분리 정제 과정에서 Ⅲ번 분획에서 가장 높은 항산화 활성이 나타난 결과를 보여주는 그래프이다. 가수분해물 PP2를 reverse phase-high performance liquid chromatography (RP-HPLC)를 수행한 결과(a) 및 분획물의 항산화활성(ABTS) 을 보여주는 그래프이다.
도 4는 항산화 활성을 갖는, 계육 가수분해물 PP2의 LC-ESI-MS/MS spectrum 을 나타낸 것이다.
a; Sequence: EVELKE, Charge: +1, MH+: 746.35706 Da, RT: 15.05 min, b; Sequence: ENKSELSQ, Charge: +1, MH+: 934.44189 Da, RT: 19.79 min, c; Sequence: WILEE, Charge: +1, MH+: 689.33789 Da, RT: 18.60 min, d; Sequence: QEVCGTDGVT, Charge: +1, MH+: 1008.46710 Da, RT: 18.35 min, e; Sequence: QDDVAVPQ, Charge: +1, MH+: 871.42920 Da, RT: 14.85 min, f; Sequence: TGSSNLWVP, Charge: +1, MH+: 960.45496 Da, RT: 20.47 min (Charge: +1 : charge state, MH+: ionized molecular weight, RT: retention time)
도 5는 합성 펩타이드의 항산화 활성을 나타낸 그래프이다.
도 5a는 ABTS assay 결과를, 도 5b는 ORAC assay 결과를 나타낸다.
이하, 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위하여 하기 실시예 등을 들어 설명한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며 본 발명의 범위가 아래에서 상술하는 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 본 발명의 구체적 이해를 돕기 위해 예시적으로 제공되는 것이다.
실시예 1. 장관 내 소화효소를 이용한 계육의 가수분해
계육을 80℃ 항온수조에서 심부온도가 75℃에 도달하도록 가열한 후 상온에서 방랭하였다. 가열한 계육 5g에 물 40ml을 가하고, 펩신 0.3% 첨가한 후 염산(HCl)을 이용하여 pH를 2.0으로 조절하여 37℃에서 2시간동안 가수분해 한 후, 다시 판크레아틴 0.3%를 첨가하고 NaOH를 이용하여 pH를 8.0으로 조절하여 37℃에서 2시간 간격으로 8시간까지 가수분해하였다. 가수분해물은 10,000 × g에서 20분간 원심분리한 후 상층액을 여과지(Whatman No.1, 110 mm ø pore size 11 μm)를 이용하여 여과하였다. 여과액은 전기영동법(SDS-PAGE)을 이용하여 펩타이드 분해도를 확인한 후 다시 한외여과법을 이용하여 분자량 3kDa 미만의 펩타이드를 분리하였다.
도 1은 장관 내 소화효소(펩신 및 판크레아틴)를 이용하여 가수분해한 계육 분해물의 단백질 분해도를 나타냈다. 도 1에서 확인할 수 있듯이, 펩신 및 판크레아틴을 처리하여 단백질이 분해되고, 펩신 및 판크레아틴의 처리 시간별로 가수분해물의 크기에 차이가 있다는 것을 알 수 있었다.
실시예 2. ABTS 및 ORAC assay 를 통한 항산화 활성 실험
- ABTS radical scavenging assay
계육 가수분해물의 자유전자단 소거능에 의한 항산화력은 Chang 등(2013)과 Re 등(1999)의 ABTS 분석방법을 이용하여 측정하였다. ABTS 용액을 준비하여 16시간 동안 암소에 보관한 후 ABTS 용액 950μL과 계육 가수분해물 50μL를 혼합하여 30℃에서 30분간 반응시킨 후 730nm의 파장에서 흡광도를 측정하였다. 표준곡선 작성을 위하여 gallic acid가 사용되었으며, 계육 가수분해물의 자유전자단 소거능(%)은 [(대조구 흡광도-시료 흡광도) / 대조구 흡광도] × 100의 수식을 이용하여 계산하여 gallic acid equivalent(GE)로 표시하였다(Chang 등 2013; Kim 등, 2013).
- ORAC assay
계육 가수분해물의 산소라디칼 흡착능(ORAC)에 의한 항산화력은 Ou 등(2001)과 Davalos 등(2004)에 기초한 ORAC 분석키트(미국 Cell Biolabs 사)를 이용하여 측정하였다. 검량 곡선을 작성하기 위하여 항산화 활성 비교 표준액으로 Trolox를 0, 2.5, 5, 10, 20, 30, 40, 50μM 농도로 희석하였다. 시료 25μL 을 96-well plate의 well에 분주한 후 150μL의 fluorescein을 분주한다. 반응용액을 혼합한 후 37℃에서 30분간 반응시킨 후 자유전자단 지시용액(free radical initiator solution) 25μL을 첨가하여 교반한 후 microplate reader로 480과 520nm에서 형광도를 측정한다. 형광도의 감소비율은 37℃에서 매 2분 간격으로 60분간 측정하여 기록하였고, 모든 실험은 3회 반복하여 그 ORAC값은 시료 1g당 μM Trolox equivalent(μM TE/g)으로 나타내었다.
실시예 3. 계육 분해물의 항산화 활성 실험
상기 항산화 활성 실험방법을 이용하여, 펩신 및 판크레아틴에 의해 가수분해된 계육의 가수분해물에 대해 항산화 활성을 확인하여 그 결과를 도 2에 나타냈다.
도 2에서 확인할 수 있듯이, 계욱 가수분해물의 항산화 활성은 PP2에서 가장 높게 나타난 것을 알 수 있다.
실시예 4. 항산화 기능성 펩타이드의 분리정제
PP2 가수분해물로부터 항산화 기능성 분획의 분리-정제를 위해 reverse phase-high performance liquid chromatography(RP-HPLC)법을 이용하여 하기 표1의 조건으로 수행하였다.
column
Temperature
Flow rate
Run time
Injection volume
UV		 C18 (2.2 cm × 10 cm, GRACE VYDAC, USA)
30℃
2.0 mL/min
60 min
100 uL
215 nm
Gradient Solvent A (DDW) (%) Solvent B (ACN) (%)
0.0-0.0 min 100 0
0.0-30.0 min 50 50
30.1-60.0 min 5 95
그 결과는 도 3에 나타냈다. 도 3에서 확인할 수 있듯이, Ⅲ번 분획에서 가장 높은 항산화 활성이 관찰되었다(도 3 b 참고).
실시예 5. 항산화 활성을 갖는 펩타이드의 동정
PP2-Ⅲ 분획으로부터 항산화 기능성 펩타이드의 아미노산서열 분석을 위하여 질량분석(LC-ESI-MS/MS)을 하기 표2의 방법으로 실시하였다. 시료 2μL를 LC-nano ESI-MS/MS 시스템에 주입하여 Zorbax 300SB-C18 trap column에 1차로 모은 후 6분간 98%의 용매 A와 2%의 용매 B로 분당 5μL의 유속으로 흘려보낸 후 분당 300μL의 유속으로 Zorbax 300SB-C18 capillary column을 이용하여 분리하였다. 이 때, 이동상은 10분간 용매 B가 35에서 90%가 되도록 증가시켰고, 마지막 5분간은 용매 B가 90%가 되도록 하였다. 분리된 펩타이드는 이산화규소가 코팅된 팁을 통해 2,000eV에서 이온분무하였으며, 질량데이터는 200에서 2,000 m/z 범위에서 Analyst QS 2.0 software를 이용하여 자동으로 획득하였다.
Column
Temperature
Flow rate
Run time
Injection volume
UV		 ZORBAX 300SB-C18(300μm i.d. × 5mm, 5μm particle size, 100 Å pore size), Agilent technologies
ZORBAX 300SB-C18(75μm i.d. × 150mm, 3.5μm particle size, 100 Å pore size), Agilent technologies
30℃
0.25 mL/min
135 min
2 uL
215 nm 혹은 280 nm
Gradient Solvent A (%)
[water/acetonitrile (98:2, v/v) with 0.1% formic acid]		 Solvent B (%)
[water/ACN (2:98, v/v) with 0.1% formic acid]
0.0 - 0.0 min 100 0
0.0 - 6 min 98 2
6 - 16 min Sol. A : Sol. B = 35 ～ 90
16 - 21 min 0 100
그 결과 하기 표 3과 같이, 총 6 종의 펩타이드가 동정되었다.
No . Molecular weight ( Da ) Amino acid sequence Fraction No .
1 746.35706 EVELKE
(Glu-Val-Glu-Leu-Lys-Glu)		 PP2-S-FIII
2 934.44189 ENKSELSQ
(Glu-Asn-Lys-Ser-Glu-Leu-Ser-Gln)		 PP2-S-FIII
3 689.33948 WILEE
(Trp-Ile-Leu-Glu-Glu)		 PP2-S-FIII
4 1008.46710 QEVCGTDGVT
(Gln-Glu-Val-Cys-Gly-Thr-Asp-Gly-Val-Thr)		 PP2-S-FIV
5 871.42920 QDDVAVPQ
(Gln-Asp-Asp-Val-Ala-Val-Pro-Gln)		 PP2-S-FIII
6 960.45496 TGSSNLWVP
(Thr-Gly-Ser-Ser-Asn-Leu-Trp-Val-Pro)		 PP2-S-FIV
상기 펩타이드들의 LC-ESI-MS/MS 결과는 도 4에 나타냈다.
실시예 6. 합성 펩타이드의 항산화 활성 실험
상기 표 3에서 확인할 수 있듯이, 동정 결과 총 6종의 펩타이드가 확인되었다. 항산화 활성이 확인된 펩타이드와 동일한 아미노산 서열을 갖는 인공 펩타이드를 합성하여, 합성된 인공 펩타이드의 항산화 활성을 확인하였다.
실험은 가수분해물의 항산화 활성을 확인한 방법과 동일하게 ABTS 및 ORAC assay를 이용하여 확인하였다.
<110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT : RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> Peptide having antioxidant activity and composition comprising thereof <130> P14-368 <160> 6 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide1 <400> 1 Glu Val Glu Leu Lys Glu 1 5 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide2 <400> 2 Glu Asn Lys Ser Glu Leu Ser Gln 1 5 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide3 <400> 3 Trp Ile Leu Glu Glu 1 5 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide4 <400> 4 Gln Glu Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr 1 5 10 <210> 5 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide5 <400> 5 Gln Asp Asp Val Ala Val Pro Gln 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide6 <400> 6 Thr Gly Ser Ser Asn Leu Trp Val Pro 1 5

Claims (8)

  1. 서열번호 3, 4, 및 6으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 아미노산 서열인, 항산화 활성을 갖는 펩타이드.
  2. 삭제
  3. 제1항에 있어서, 상기 펩타이드는 계육의 장관 내 소화효소를 이용한 가수 분해물로부터 유래한 것을 특징으로 하는, 항산화 활성을 갖는 펩타이드.
  4. 제3항에 있어서, 상기 장관 내 소화효소는 펩신 및 판크레아틴인 것을 특징으로 하는 펩타이드.
  5. 제3항에 있어서, 상기 계육은 닭의 가슴살 부위인 것을 특징으로 하는 펩타이드.
  6. 삭제
  7. 제1항의 펩타이드를 포함하는 항산화용 건강기능식품 조성물.
  8. 제1항의 펩타이드를 포함하는 항산화용 화장품 조성물.
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