KR101720582B1 - 엽록체 염기서열을 이용한 Ｓｏｌａｎｕｍ ｎｉｇｒｕｍ과 감자（Ｓ．ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）를 포함한 다른 Ｓｏｌａｎｕｍ 종의 구별 마커 및 구별 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 까마중과 감자를 비롯한 가지속 식물을 구별하기 위한 마커에 관한 것이다. 또한 본 발명은 까마중 및 가지속 식물을 구별하기 위한 프라이머 세트를 제공하는 것이다. 또한 본 발명은 대상 시료에서 게놈 DNA를 분리하는 단계; 상기 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 상기 프라이머 세트를 이용하여 PCR(polymerase chain reaction)을 수행하여 표적 서열을 증폭하는 단계; 및 상기 증폭 산물을 동정하는 단계;를 포함하는, 까마중 및 가지속 식물을 구별하는 방법에 관한 것이다.

Description

엽록체 염기서열을 이용한 Ｓｏｌａｎｕｍ ｎｉｇｒｕｍ과 감자（Ｓ．ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）를 포함한 다른 Ｓｏｌａｎｕｍ 종의 구별 마커 및 구별 방법 {MARKERS FOR DISCRIMINATION OF SOLANUM NIGRUM FROM OTHER SOLANUM SPECIES INCLUDING POTATO(S. TUBEROSUM) USING CHLOROPLAST SEQUENCES AND METHOD}

본 발명은 까마중과 가지속 식물을 구별하기 위한 위한 마커, 상기 마커를 증폭하기 위한 프라이머 세트 및 이를 이용한 검출방법에 관한 것이다.

Solanum nigrum은 감자(S. tuberosum)를 포함한 900종이 넘는 식물을 포함하고 있는 가지속에 속한 야생식물로 약용성분을 함유하고 있어 예로부터 약용작물로써 그 가치를 인정받았으며, 또한 감자재배 시 문제가 되고 있는 역병에 저항성이 보여 이를 활용한 감자의 품종 육성에 활용되고 있다. 하지만 염색체의 구성이 6배체로 4배체인 감자와 다른 EBN (Endorsperm Balanced Number)를 가지고 있어 불화합성을 보임에 따라 전통적인 교배육종 방법을 적용하여 품종 육성을 불가능하여 주로 체세포 융합(Somatic hybrid) 방법을 이용하여 품종 육성에 활용되고 있다. 이에 따라 S. nigrum과 S. tuberosum 간의 체세포

융합이 이루어졌을 때, 두 종간의 체세포 융합이 정상적으로 이루어진 융합체의 선발이 선제적으로 이루어져야 하나 이를 선발할 판별 기술이 존재하지 않아, 가장 효율적인 검정방법인 분자마커를 활용한 방법이 필요한 실정이다.

종 특이적인 분자마커를 활용하여 융합체를 선발할 수 있는 방법으로는 RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism), RAPD(Randomly Amplified Polymorphic DNA), AFLP(Amplified Fragment Length Polymorphism), SSR(Simple Sequence Repeat) 등 다양한 방법이 존재한다. 이 중 RFLP에 의한 방법은 분자마커의 표지를 위해 방사선 동위원소를 사용해야 하며, 이외의 방법은 PCR(Polymerase Chain Reaction)을 이용한 보다 효율적인 방법으로 10-25여 개의 뉴클레오티드로 구성된 작은 올리고뉴클레오타이드(이하 프라이머)를 대상 생물체의 DNA 또는 RNA와 결합시켜 DNA 중합효소를 이용하여 특정 영역의 염기서열을 증폭하는 방법이다. 이러한 방법은 소량의 DNA로 간편하고 빠르게 결과를 확인할 수 있다는 장점을 가지고 있다. 하지만, RAPD 방법은 비특이적 PCR의 결과로 정확하고 재현성 있는 결과를 얻기가 어렵고 SSR 방법은 단순 DNA 반복 서열인 초위성체(microsatellite)를 대상으로 함에 따라 종 간 또는 종 내에서 다양한 변이를 보이고 있어 종간 구분에 있어 정확한 결과를 얻기가 어려우며, AFLP 방법은 높은 DNA 다형성(polymorphism)으로 인해 특이적 분자마커의 발굴 가능성은 높으나, 최종 결과물을 얻기까지의 DNA digestion, Adaptor ligation, Selective amplification 등 여러 단계의 실험이 요구되고 비용이 많이 들어 효율적이지 못하다. 뿐만 아니라 앞서 언급된 분자마커의 경우 분자마커 개발의 기반이 genomic DNA(gDNA)일 경우에는 그 가능성이 높으나, 종내 또는 종간의 염기서열 동질성이 높은 chloroplast DNA(cpDNA) 또는 mitochontrial DNA(mtDNA)일 경우 종 특이적 분자마커 개발이 쉽지 않다. 이에 반해 In/del(insertion or deletion)을 이용한 방법은 PCR 반응만으로 특정영역의 염기서열 분석이 가능하며, 특정 위치에 있는 DNA의 염기서열 분석을 통해 종간 염기서열의 삽입 또는 결실을 기반으로 PCR 프라이머를 제작하여 특정영역대의 염기서열로부터 종 특이적 분자마커 개발이 용이하다.

현재까지 Solanum 속, 특히 까마중을 특이적으로 구별하기 위한 분자마커 기술은 전무한 실정으로, 이에 따라 본 발명자들은 까마중(S. nigrum )을 S. tuberosum을 포함한 다른 가지속(Solanum sp.) 식물과 구별하기 위한 In/del 분자마커를 발명하기에 이르렀다.

1.Chung H-J, Jung JD, Park H-W, Kim J-H, Cha HW, Min SR, Jeong W-J and Liu JR (2006) The complete chloroplast genome sequences of Solanum tuberosum and comparative analysis with Solanaceae species identified the presence of a 241-bp deletion in cultivated potato chloroplast DNA sequence. Plant Cell Rep. 25:1369-1379 2.Filiz E (2012) Phylogeny of some Solanum species (Solanaceae) based on complete chloroplast genomes (cpDNA) and individual chloroplast genes. Res. in Biotechnol. 3:33-41 3.Daniell H, Lee S-B, Grevich J, Saski C, Quesada-Vargas T, Guda C, Tomkins J and Jansen RK (2006) Complete chloroplast genome sequences of Solanum bulbocastanum, Solanum lycopersicum and comparative analysis with other Solanaceae genomes. Theor. Appl. Genet. 112:1503-1518

본 발명의 목적은 까마중(Solanum nigrum)과 가지속(Solanum sp.) 식물을 구별하기 위한 마커를 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 까마중(Solanum nigrum)과 가지속(Solanum sp.) 식물을 구별하기 위한 프라이머 세트를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 까마중(Solanum nigrum)을 특이적으로 선별하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 까마중(Solanum nigrum)과 가지속(Solanum sp.) 식물을 구별하는 방법을 제공하는 것이다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 서열번호 1 및 2; 서열번호 3 및 4; 서열번호 5 및 6; 서열번호 7 및 8; 서열번호 9 및 10; 서열번호 11 및 12; 서열번호 13 및 14; 서열번호 15 및 서열번호 16; 서열번호 17 및 서열번호 18; 서열번호 19 및 서열번호 20; 서열번호 21 및 서열번호 22; 서열번호 23 및 서열번호 24; 서열번호 25 및 서열번호 26; 서열번호 27 및 서열번호 28; 및 서열번호 29 및 서열번호 30; 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 프라이머 세트를 포함하는 까마중(Solanum nigrum)과 가지속(Solanum sp.) 식물을 구별하기 위한 프라이머 세트를 제공한다.

본 명세서에서 사용되는 용어, “까마중”은 학명 “Solanum nigrum“으로 감자(S. tuberosum)를 포함한 900종이 넘는 식물을 포함하고 있는 가지속에 속한 야생식물로 약용성분을 함유하고 있어 예로부터 약용작물로써 그 가치를 인정받았으며, 또한 감자재배 시 문제가 되고 있는 역병에 저항성이 보여 이를 활용한 감자의 품종 육성에 활용되고 있다. 하지만 염색체의 구성이 6배체로 4배체인 감자와 다른 EBN (Endorsperm Balanced Number)를 가지고 있어 불화합성을 보임에 따라 전통적인 교배육종 방법을 적용하여 품종 육성을 불가능하여 주로 체세포 융합(Somatic hybrid) 방법을 이용하여 품종 육성에 활용되고 있다.

본 발명의 구체예에서, 상기 프라이머는 본 발명의 상세한 설명의 표 3에 표시된 어느 하나 이상의 염기서열로 이루어진 까마중(Solanum nigrum)과 가지속(Solanum sp.) 식물을 구별하기 위한 마커를 증폭하기 위한 프라이머일 수 있다.

상기 마커는 In/del 마커일 수 있다. 용어 “In/del(Insertion Deletion) 마커”는 까마중의 유전체에서 염기의 삽입 또는 결실이 일어난 부위를 말하며, 본 발명의 까마중 및 가지속 식물을 구별하기 위한 분자 지표로 사용된다. 본 명세서에서 In/del 또는 Indel 로 혼용되어 사용될 수 있다.

까마중의 엽록체 전체 유전자 염기서열 분석을 위하여 차세대염기서열분석(NGS, Next Generation Sequencing)를 수행하여 엽록체 유전자 지도를 완성할 수 있다. 본 과정은 까마중의 전체 게놈 DNA를 추출하고 엽록체 유전체를 어셈블리하여 콘틱(contig)을 작성하여 수행할 수 있다.

구체적으로 본 발명은, 서열번호 서열번호 1 및 2; 서열번호 3 및 4; 서열번호 5 및 6; 서열번호 7 및 8; 서열번호 9 및 10; 서열번호 11 및 12; 서열번호 13 및 14; 서열번호 15 및 서열번호 16; 서열번호 17 및 서열번호 18; 서열번호 19 및 서열번호 20; 서열번호 21 및 서열번호 22; 서열번호 23 및 서열번호 24; 서열번호 25 및 서열번호 26; 서열번호 27 및 서열번호 28; 및 서열번호 29 및 서열번호 30; 으로 표시된 프라이머 세트로 이루어진 까마중(Solanum nigrum)과 가지속(Solanum sp.) 식물을 구별하기 위한 프라이머 세트를 제공한다. 상기 프라이머 세트는 상기 In/del 마커를 증폭하기 위한 정방향 및 역방향 프라이머를 포함할 수 있다. 보다 상세하게는, 상기 까마중(Solanum nigrum)과 가지속(Solanum sp.) 식물을 구별하기 위한 프라이머 세트는 까마중과 가지속 식물의 유전체의 삽입-결실 부위(In/del, Insertion and Deletion) 부위를 이용하여 까마중(Solanum nigrum)과 가지속(Solanum sp.) 식물을 구별할 수 있는 프라이머 세트를 의미하며, 바람직하게는 까마중(Solanum nigrum)과 가지속(Solanum sp.) 식물을 구별할 수 있도록 유전자를 증폭할 수 있는 프라이머 세트일 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 용어, "프라이머"는 카피하려는 핵산 가닥에 상보적인 단일 가닥 올리고뉴클레오티드 서열을 말하며, 프라이머 연장 산물의 합성을 위한 개시점으로서 작용할 수 있다. 상기 프라이머의 길이 및 서열은 연장 산물의 합성을 시작하도록 허용해야 한다. 프라이머의 구체적인 길이 및 서열은 요구되는 DNA 또는 RNA 표적의 복합도 (complexity) 뿐만 아니라 온도 및 이온 강도와 같은 프라이머 이용 조건에 의존할 것이다.

본 발명의 상기 In/del(insertion deletion) 마커 및 상기 마커를 증폭하기를 위한 프라이머를 사용하여 PCR 증폭하는 경우, 다형화 현상을 나타나게 함으로써 고밀도 유전자지도 제작에는 충분하지 않은 SSR 마커의 단점을 보완하면서 까마중(Solanum nigrum)과 가지속(Solanum sp.) 식물을 쉽게 구별할 수 있는 장점을 갖는다.

본 발명의 구체예에서, 상기 서열번호 1 및 2; 서열번호 3 및 4; 서열번호 5 및 6; 서열번호 7 및 8; 서열번호 9 및 10; 서열번호 11 및 12; 및 서열번호 13 및 14; 로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 프라이머 세트는 까마중을 특이적으로 검출하는 것일 수 있다. 또한 상기 서열번호 15 및 서열번호 16; 서열번호 17 및 서열번호 18; 서열번호 19 및 서열번호 20; 서열번호 21 및 서열번호 22; 서열번호 23 및 서열번호 24; 서열번호 25 및 서열번호 26; 서열번호 27 및 서열번호 28; 및 서열번호 29 및 서열번호 30; 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 프라이머 세트는 까마중을 제외한 가지속 식물을 특이적으로 검출하는 것일 수 있다.

본 발명의 상기 가지속 식물은 가장 바람직하게 감자(Solanum tuberosum), Solanum candolleanum, Solanum kurtzianum 및 Solanum pinnatisectum으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명은 또한,

i) 대상 시료에서 게놈 DNA를 분리하는 단계;

ii) 상기 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 서열번호 1 및 2; 서열번호 3 및 4; 서열번호 5 및 6; 서열번호 7 및 8; 서열번호 9 및 10; 서열번호 11 및 12; 및 서열번호 13 및 14; 로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 프라이머 세트를 이용하여 PCR(polymerase chain reaction)을 수행하는 단계; 및

iii) 상기 PCR 산물을 동정하는 단계; 를 포함하는, 까마중(Solanum nigrum)을 특이적으로 검출하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한,

i) 대상 시료에서 게놈 DNA를 분리하는 단계;

ii) 상기 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 서열번호 1 및 2; 서열번호 3 및 4; 서열번호 5 및 6; 서열번호 7 및 8; 서열번호 9 및 10; 서열번호 11 및 12; 서열번호 13 및 14; 서열번호 15 및 서열번호 16; 서열번호 17 및 서열번호 18; 서열번호 19 및 서열번호 20; 서열번호 21 및 서열번호 22; 서열번호 23 및 서열번호 24; 서열번호 25 및 서열번호 26; 서열번호 27 및 서열번호 28; 및 서열번호 29 및 서열번호 30; 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 프라이머 세트를 이용하여 PCR(polymerase chain reaction)을 수행하는 단계; 및

iii) 상기 PCR 산물을 동정하는 단계; 를 포함하는, 까마중(Solanum nigrum)과 가지속 식물을 구별하는 방법을 제공한다.

본 발명의 구체예에서, 상기 구별방법은 상기 서열번호 1 및 2; 서열번호 3 및 4; 서열번호 5 및 6; 서열번호 7 및 8; 서열번호 9 및 10; 서열번호 11 및 12; 및 서열번호 13 및 14;로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 프라이머 세트로 증폭된 PCR 산물인 경우 까마중으로 판별하고, 상기 서열번호 15 및 서열번호 16; 서열번호 17 및 서열번호 18; 서열번호 19 및 서열번호 20; 서열번호 21 및 서열번호 22; 서열번호 23 및 서열번호 24; 서열번호 25 및 서열번호 26; 서열번호 27 및 서열번호 28; 및 서열번호 29 및 서열번호 30; 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 프라이머 세트로 증폭된 PCR 산물인 경우 가지속 식물로 판별하는 것일 수 있다.

본 발명의 상기 방법을 이용하는 경우, 까마중과 가지속 식물을 구별할 수 있으며, 구체적으로 까마중 및 가지속 식물의 체세포 융합체를 특이적으로 검출할 수 있다. 본 발명의 상기 방법은 바람직하게 까마중 (S. nigrum)과 감자(S. tuberosum) 간의 체세포 융합이 이루어졌을 때, 두 종간의 체세포 융합이 정상적으로 이루어진 융합체의 선발할 판별방법을 제공한다.

상기 방법에서 게놈 DNA의 추출은 당업계에서 통상적으로 사용되는 페놀/클로로포름 추출법, SDS 추출법 (Tai et al., Plant Mol. Biol. Reporter, 8: 297-303, 1990), CTAB 분리법(Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide; Murray et al., Nuc. Res., 4321-4325, 1980), 또는 상업적으로 판매되는 DNA 추출 키트를 이용하여 수행할 수 있다.

상기 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 상기한 프라이머 세트를 이용하여 증폭 반응을 수행하여 표적 서열을 증폭할 수 있다. 표적 핵산을 증폭하는 방법은 중합효소연쇄반응(PCR), 리가아제 연쇄반응(ligase chain reaction), 핵산 서열 기재 증폭(nucleic acid sequence-based amplification), 전사 기재 증폭 시스템(transcription-based amplification system), 가닥 치환 증폭(strand displacement amplification) 또는 Qβ 복제효소(replicase)를 통한 증폭 또는 당업계에 알려진 핵산 분자를 증폭하기 위한 임의의 기타 적당한 방법이 있다. 이 중에서, PCR이란 중합효소를 이용하여 표적 핵산에 특이적으로 결합하는 프라이머 쌍으로부터 표적 핵산을 증폭하는 방법이다. 이러한 PCR 방법은 당업계에 잘 알려져 있으며, 상업적으로 이용가능한 키트를 이용할 수도 있다. PCR은 PCR 반응에 필요한 당업계에 공지된 여러 성분을 포함하는 PCR 반응 혼합액을 이용하여 수행될 수 있다. 상기 PCR 반응 혼합액에는 분석하고자 하는 가지과 식물에서 추출된 게놈 DNA와 본 발명에서 제공되는 프라이머 세트 이외에 적당량의 DNA 중합효소, dNTP, PCR 완충용액 및 물을 포함한다. 상기 PCR 완충용액은 트리스-HCl(Tris-HCl), MgCl₂, KCl 등을 포함한다.

상기 증폭된 표적 서열은 검출가능한 표지 물질로 표지될 수 있다. 일 구현예에서, 상기 표지 물질은 형광, 인광 또는 방사성을 발하는 물질일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 바람직하게는, 상기 표지 물질은 Cy-5 또는 Cy-3이다. 표적 서열의 증폭시 프라이머의 5'-말단에 Cy-5 또는 Cy-3를 표지하여 PCR을 수행하면 표적 서열이 검출가능한 형광 표지 물질로 표지될 수 있다. 또한, 방사성 물질을 이용한 표지는 PCR 수행시　32P 또는　35S 등과 같은 방사성 동위원소를 PCR 반응액에 첨가하면 증폭 산물이 합성되면서 방사성이 증폭 산물에 혼입되어 증폭 산물이 방사성으로 표지될 수 있다. 표적 서열을 증폭하기 위해 이용된 하나 이상의 프라이머 세트는 상기에 기재된 바와 같다.

본 발명의 방법은 상기 증폭 산물을 동정하는 단계를 포함한다. 상기 증폭 산물의 동정은 In/del 마커의 경우에는 증폭 산물을 겔 전기영동함으로써 수행될 수 있다. 전기영동은 증폭 산물의 크기에 따라 아가로스 겔 전기영동 또는 아크릴아미드 겔 전기영동을 이용할 수 있다.

또한 본 발명은, 본 발명의 프라이머를 포함하는 까마중과 가지속 식물을 구별하기 위한 키트를 제공한다. 상기 키트는 증폭 반응을 수행하기 위한 시약 및 필요에 따라 제한효소를 포함할 수 있으며, 상기 증폭 반응을 수행하기 위한 시약은 내열성 DNA 중합효소, dNTPs, 및 버퍼를 포함할 수 있다. 상기 dNTP 혼합물은 dATP, dCTP, dGTP, dTTP를 포함하며, 내열성 DNA 중합효소는 Taq DNA 중합효소, Tth DNA 중합효소 등 시판되는 내열성 중합효소를 이용할 수 있다. 또한, 본 발명의 키트는 최적의 반응 수행 조건을 기재한 사용자 설명서를 추가로 포함할 수 있다.

또한 본 발명은 상기 프라이머 세트를 포함하는 까마중과 가지속 식물을 구별하기 위한 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 상기 프라이머 세트 외에 추가적으로 반응 시약을 포함시킬 수 있으며, 상기 반응 시약은 혼성화에 사용되는 완충용액, RNA로부터 cDNA를 합성하기 위한 역전사효소, cNTPs 및 rNTP(사전 혼합형 또는 분리 공급형), 형광 염색제의 화학적 유도제와 같은 표식시약, 세척 완충용액 등으로 구성될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 구체예에서, 엽록체 염기서열을 이용해 까마중과 가지속 식물에 특이적인 Indel 마커를 개발하였으며, 이를 증폭하기 위한 프라이머 세트를 개발하였다. 또한 본 발명의 구체예에서, 상기 프라이머 및 상기 방법을 이용하여 PCR을 수행함으로써 까마중과 가지속 식물에 특이적인 밴드가 검출되는 것을 확인함으로써 까마중 및 가지속 식물을 정확히 검출할 수 있었다.

본 발명의 마커, 프라이머 및 까마중 및 가지속 식물을 구별하는 방법을 활용하는 경우, 까마중과 재배종 감자를 체세포 융합하여 제조된 융합체를 대상으로 까마중과 재배종 감자의 세포질의 융합 여부 또는 까마중과 재배종 감자의 엽록체 DNA의 융합 여부를 정확히 판단할 수 있다.

도 1은 본 발명의 구체예에 따른 차세대염기서열분석(NGS)를 이용해 까마중(S. nigrum)의 엽록체 유전자 염기서열의 분석 방법에 대한 모식도를 나타낸다.
도 2는 본 발명의 구체예에 따른 까마중의 엽록체 유전자 지도 및 감자 엽록체 유전체와의 Indel 영역에서 분자마커 개발을 위해 프라이머가 제작된 7개 지역을 나타낸다 (filled triangle로 Indel 영역 표시, 1번부터 15번).
도 3은 본 발명의 구체예에 따른 NGS를 이용한 까마중의 콘틱(contig) 작성 결과를 나타낸다. NGS 데이터를 이용하여 assembly 결과 4개의 contig로 구분되었으며 전체 155,432 bp로 구성되었음을 나타낸다.
도 4는 본 발명의 구체예에 따른 까마중의 엽록체 염기서열과 감자(S. tuberosum), 토마토(S. lycopersicum), 담배(Nicotiana tabacum)의 엽록체 염기서열과 비교하여 IR, SSR 및 LSC의 경계 영역의 차이를 나타낸다.
도 5는 본 발명의 구체예에 따른 까마중, 감자, 토마토, 담배, 야생감자(S. bulbocastanum) 등 5종의 엽록체 염기서열의 계통수(系統樹, phylogenic tree)를 나타낸다.
도 6은 본 발명의 구체예에 따른 까마중과 감자 또는 다른 야생감자를 구별하기 위한 엽록체 게놈상의 DNA 마커를 증폭하기 위한 프라이머를 나타낸다.
도 7은 본 발명의 구체예에 따른 15개 조합의 Indel 마커와 PCR 방법을 이용해 까마중과 감자 또는 다른 야생감자를 구별한 전기영동 결과를 나타낸다 (1~7: 까마중(S. nigrum) 특이적 마커; 8~15: 까마중을 제외한 감자(S. tuberosum)와 다른 야생감자(S. candolleanum, S. kurtzianum, S. pinnatisectum) 에서 보편적으로 나타나는 마커; M: DNA 마커 ladder; N1~N4: S. nigrum; T: S. tuberosum; C: S. candolleanum; K: S. kurtzianum; P: S. pinnatisectum).

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 이 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예 1: 까마중, 감자 및 가지속 구별용 프라이머 선발을 위한 까마중 엽록체 분석

까마중의 엽록체 전체 유전자 염기서열 분석을 위하여 차세대염기서열분석(NGS, Next Generation Sequencing)을 수행하여 엽록체 유전자 지도를 완성하였다. 본 과정은 까마중의 total genomic DNA를 추출하고 Illumina Hiseq용 library를 구축하였다. 구축된 library는 Illumina Highseq을 이용하여 시퀀싱 후 평균 read length 100bp 이상, Q-score 20이상을 대상으로 엽록체 유전체를 assembly하여 contig를 작성하였다. Assembly된 contig는 유전자은행에 보고된 가지과 식물을 reference로 이용하여 유전자를 예측하고 구조를 결정지었다(도 1 및 2). 그 결과 까마중은 4개의 contig로 구분되었으며 전체 155,432bp로 구성되어 있으며 총 133개의 유전자를 포함하고 있음을 확인하였다 (도 2 및 도 3).

실시예 2: 까마중, 감자 및 가지속 구별용 프라이머 선발을 위한 까마중, 감자, 토마토, 담배 및 야생감자의 엽록체 유전체 비교 및 계통수 확인

본 발명의 Indel 마커 개발을 위해, 까마중(S. nigrum) 의 엽록체 염기서열(KM489055)을 유전자은행(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)에 등록되어 있는 담배(Nicotiana tabacum , NC_001879), 토마토(S. lycopersicum, NC_007898), 야생감자 1종(S. bulbocastanum , NC_007943) 및 감자(S. tuberosum, NC_008096)의 염기서열과 비교하여, IR, SSR 및 LSC 경계 영역 차이를 확인하였다(도 4). 또한 상기 5종의 엽록체 염기서열의 계통수(phylogenic tree)를 확인하였다(도 5). 그 결과 까마중은 담배와 같은 분기군(clade)에 위치하였으며 두번째로 토마토와 인접한 것으로 나타났으며 감자와 야생감자 1종(S. bulbocastanum)은 가장 먼 분기군으로 분류됨을 확인하였다 (도 5).

실시예 3: 까마중, 감자 및 가지속 식물 구별용 프라이머 디자인 및 마커 선발

본 발명의 마커 선별을 위하여 까마중(S. nigrum), 감자 및 기타 가지속 식물의 생식질을 수집하였다. 하기 표 1의 No. 1~4의 까마중 생식질은 대구대학교 원예학과에서 수집되었고, No. 5~8의 감자(S. tuberosum)와 기타 야생종 생식질은 고령지농업연구센터에서 수집되어 유지하였다 (표 1).

까마중, 감자 및 야생종 유전자원

No.	Code	Species	Accession No.	Origin
1	GS8	S. nigrum	-	Korea
2	GS7	S. nigrum	-	Korea
3	DG1	S. nigrum	-	Korea
4	DG2	S. nigrum	-	Korea
5	PT56	S. tuberosum	-	Korea
6	SC4-1	S. candolleanum	PI 210035	Peru
7	SK-5	S. kurtzianum	PI 578236	Argentina
8	SP-4	S. pinnatisectum	PI 190115	Mexico

z; 까마중(S. nigrum) 생식질인 No. 1~4는 대구대학교 원예학과에서 수집했으며, 감자(S. tuberosum)와 기타 야생종 생식질인 No. 5~8이 고령지농업연구센터에서 수집함.

이후, S. nigrum의 엽록체 전체 염기서열을 유전은행(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)에 등록된 S. tuberosum, S. lycopersicum, S. bulbocastanum, N. tabacum의 엽록체 전체 염기서열과 Sequence alignment를 통하여 타 4종의 엽록체 염기서열과 비교하여 S. nigrum에 특이적으로 나타나는 In/del 정보를 분석하였다.

비교 대상인 4종의 가지과 식물에서는 동일한 엽록체 염기서열을 보이면서 S. nigrum에 특이적인 5bp 이상의 in/del 부위는 주로 유전자 사이의 부위(inter-genic region)에서 나타났으며, 6bp부터 310bp까지로 나타났고 (표 2, 표 3), 22개의 삽입부위와 13개의 결실 부위를 포함한 35개의 in/del이 나타남을 확인하였다. 하기 표 2는 표 3에 개시된 1-15번까지의 각각의 번호에서 indel이 존재하는 위치, 사이즈 및 이를 이용해 primer를 제작한 영역을 나타낸다. Species는 S. nigrum과 S. tuberosum 서열을 비교하였을 때 insert가 있는 종의 염기서열 포지션을 기준으로 분리하였다.

S. nigrum과 S. tuberosum의 In/del 정보

No.	Species	Position		Si ze (bp)	Region
		start	end
Indel_1f, 8f, 9f	S. nigrum	246	258	13	IGS: trnH, psbA
Indel_2f, 10f	S. nigrum	9,713	9,719	7	IGS: trnS, trnG
Indel_3f, 11f	S. tuberosum	14,794	14,807	14	IGS: atpH, atpI
Indel_4f, 12f	S. tuberosum	94,875	94,880	6	IGS: ycf2, ycf15
Indel_5f, 13f	S. tuberosum	45,983	46,292	310	IGS: ycf3, trnS
Indel_6f, 14f	S. tuberosum	62,490	62,500	11	IGS: ycf4, cemA
Indel_7f, 15f	S. tuberosum	64,816	65,025	210	IGS: petA, psbJ
Indel_7r	S. tuberosum	65,642	65,650	9	IGS: petA, psbJ
Indel_8r	S. tuberosum	2,097	2,107	11	IGS: psbA, matK
Indel_9r	S. tuberosum	3,089	3,097	9	CDS: matK
Indel_10r	S. tuberosum	9,979	9,987	9	IGS: trnS, trnG
Indel_15r	S. tuberosum	65,542	65,551	10	IGS: petA, psbJ

(f: forward primer, r: reverse primer)

이하 표 3은 까마중(S. nigrum)과 감자(S. tuberosum) In/del 지역의 유전자 염기서열을 나타낸다. (In/del 지역은 두 종의 엽록체 염기서열을 비교하여 insert가 존재하는 영역을 이탤릭체, 볼드체 및 음영으로 표시; 프라이머 서열은 볼드체와 밑줄로 표시)

까마중(S. nigrum)과 감자(S. tuberosum) In/del 지역의 유전자 염기서열

마커	위치	염기서열
		S. nigrum	S. tuberosum
Indel_1, 8, 9	trnH ~ mat K	TTCTTTCTTATTTCAATGATATTATTATTTCGATTATTATTTC AA AGATAAGAATATG AGATAAGAA TATGAAGTCAAAATTGTATTTTTTGTGAAATGAAATAAAAAAGATATAATAACATTAGCAACAAGAGGAACAAGTTATATTTCTACAATTTTCAATAAATAGAAAATCAAAATCGAATACTCAATCATGAATAAATGCAGGCAAATACCCTCTCCTTCTTTTTCTATAATGTAAACAAAAAAGTCTATGTCAGTAAAATACTAGGAAATTAATAAAGAAAAAGAAAAAAAGAAAGGAGCAATAGCACCCTCTTGATAGAACAAGAAAATGGTTATTGCTCCTTTCTTTTCAAAACCTCCTATAGACTAGGCTGGGATCTTATCCATTTGTAGATGGAGCTTCGATAGCAGCTAGGTCTAGAGGGAAGTTATGAGCATTACGTTCATGCATAACTTCCATACCAAGGTTAGCACGGTTGATGATATCAGCCCAAGTGTTAATTACACGACCCTGACTGTCAACTACAGATTGGTTG AAATTGAAACCATTTAGGTTGAAA GCCATAGTGCTAATACCTAAAGCGGTAAACCAGATACCTACTACAGGCCAAGCAGCTAGGAAGAAGTGTAACGAACGAGAGTTGTTGAAACTAGCATATTGGAAGATCAATCGGCCAAAATAACCATGAGCGGCTACGATATTATAAGTTTCTTCCTCTTGACCGAATCTGTAACCTTCATTAGCAGATTCATTTTCTGTGGTTTCCCTGATCAAACTAGAAGTTACCAAGGAACCATGCATAGCACTGAATAGGGAGCCGCCGAATACACCAGCCACGCCTAACATGTGAAATGGGTGCATAAGGATGTTGTGCTCAGCCTGGAATACAATCATGAAATTGAAAGTACCAGAGATTCCTAGAGGCATACCATCAGAAAAACTTCCTTGACCGATTGGGTAGATCAAGAAAACTGCGGTAGCAGCTGCAACAGGAGCTGAATATGCAACAGCAATCCAAGGTCGCATACCCAGACGGAAGCTAAGCTCCCACTCACGACCCATGTAACAAGCTACGCCAAGTAAGAAGTGTAGAACAATTAGTTCATAAGGACCACCGTTGTATAACCATTCATCAACGGATGCCGCTTCCCAGATTGGGTAAAAATGTAAACCTATAGCTGCAGAAGTAGGAATAATGGCACCGGAAATAATATTGTTTCCGTAAAGTAGAGACCCTGAAACAGGTTCACGAATACCATCAATGTCTACTGGAGGAGCAGCAATGAAGGCAATAATAAATACAGAAGTTGCCGTCAATAAGGT	TTCTTTCTTATTTCAATGATATTATTATTTTGATT ATTATTTCAAAGATAAGAATATG GAACAATTAGTTCATAAGGACCACCGTTGTATAACCATTCATCAACGGATGCCGCTTCCCAGATTGGGTAAAAATGTAAACCTATAGCTGCAGAAGTAGGAATAATGGCACCGGAAATAATGTTGTTTCCGTAAAGTAGAGACCCTGAAACAGGTTCACGAATACCATCAATGTCTACTGGAGGAGCAGCAATGAAGGCAATAATAAATACAGAAGTTGCCGTCAATAAGGTAGGGATCATCAAAAC
		AATGATCCAATCAAAGGAATAATTGGAACAAGGGTATCGAACTTCTTAATTGGATTATTGATTAGAAATGAATTTTCTAACATTTGACTACGTACCATTGAATGATTTAGTCGCACACTTGAAAGATAGCCCATAAAGTCACGGGAATGGTTGGATAATTGGTTTATATGGATCCTTCCTGTGTGAAAGTACATAGAAAAATGACATTGCCAAAAATTGACAAGGTAAAATTTCCATTTATTCATCAAAAGAAACGTCCCTTTTGAAGCCAGAATTGATTTTCCTTCATACCTAACATAATGGATGAAAGGGTCCTTGAATAACCAGAGGGTAACCTGAAAATGCTTAGCAAAGACTTCTACAAGACGTTCTATTTTTCCATAGAAATATATTCGTTCAAGAAGGGCTCCAAAAGATGTTGATCGTAAATGAGAAGATTGGTTCCGTAGAAAGACGAAAGTGGATTCGCATTCATATACATAAGAATTATATAAGAAGAAGAAGAATCTTTGAGTTTTTTTTGAAAAGGAGTAACCGGGCTTCTTTGAAGTAATAAGACTACAATATTCGTGGAGAAAGAATCGTAATAAATG	ACCAAACCATCCAATGTAAAGACGGTTTTCAGTGCTAGTTATCCAGTTACAGAAGCGACCCCATAGGCTTTCGCTTTCGCGTCTCTCTAAAATTGCAGTCATGGTAAAATCTTGGTTTATTTAATCATCAGGGACTCCCAAGCACACGAGTTTTCTACAAATCAAAATAGAAAATGAAAGGCTTGTTATTCAACAGTATAACATGACTTATATACTCGTGTCAACCAAGGTGTATGTGGATCTATTCAAATTTTTAATGAAGTTGATTGGAAAAATACGGACTTCTCTACAGAGAATTAGAATTTCGATATGATAGTGGGTTGCCCGGGATTCGAACCCGGAACTAGTCGGATGGAGTAGATAAGTTCCTTGTTAAATAAAATAAATGTTAATCTTAAATTAAATAAACAAGTAAAGATCCCTCCCCAAGCCGTGCTTGCACTTTTCATTGCACACGGCTTTCCCTATGTATACATCAGTTCCTTTCTTATAGAAATTAGAAAGACTTAAAAAAGTTGAATACTCAGTTGATTTACCCCTTATTAGTATTACAATCAGCATTTCAGAATAGTGAAAATTTTTGATCT CTTCGTCATTTA TTCGTCAT TTA GAAAATCTAAGAATGAATCATTGATAATTCGCCAGATCATTGATACAAAAAATATCCAAATACCAAATCCGACTTCTATATACTCCCCACAAACTAGACGAAGCTCGTGGGAAGGTCAAAGAAAGAACTTGTTCTTCCGACGTTAAGAATTCTTCCAATAATTCCGAGCCCGATCTTTTCAAAAAAGTGCGTACAGTACTTTTGTGTTTCCGAGCTAAAGTTCTAGCACAAGAAAGTCGAAGTATATACTTTATTCGATATAAAGTCTTTTTTTTGGAAGATCCGCTATAATAATGAAAAAGATTTCTGCATATACGCCCAAATCGGTCAATAATATCAGAATCTGATAAATCGGACCAAACTGGTTTACTAATGGGATGCCCTAATACGGTACAAAAGTGTGCTTTAGCTAATGATCCAATCAAAGGAATAATTGGAACAAGGGTCTCGAACTTCTTAATTGGATTATTGATTAGAAATGAATTTTCTAACATTTGACTACGTACCATTGAATGATTTAGTCGCACACTTGAAAGATAGCCCATAAAGTCACGGGAATGGTTGGATAATTGGTTTATATGGATCCTTCCTGTGTGAAAGTACATAGAAAAATGACATTGCCAAAAATTGACAAGGTAAAATTTCCATTTATTCATCAAAGGAAACGTCCCTTTTGAAGCCAGAATTGATTTTCCTTCATACCTAACATAATGCATGAAAGGATCCTTGAATAACCATAGGGTAACCTGAAAATCCTTAGCAAAGACTTCTACAAGACGTTCTATTTTTCCATAGAAATATATTCGTTCAAGAAGGGCTCCAAAAGATGTTGATCGTAAATGAGAAGATTGGTTCCGTAGAAAGACGAAAGTGGATTCGCATTCATATACATAAGAATTATATAAGAAGAAGAAGAATCTTTGATTTTTTTTTGAAAAGGAGTAACCGGGCTTCTTTGAAGTAATAAGA C TATTCAAAT TACAATA TTCGT GGAGAAAGAATCGTAATAAATG
마커	위치	염기서열
		S. nigrum	S. tuberosum
Indel_2, 10	trnS- trnG	TAGAATCCCCCTCTTCTAGAAGGATCATCTACAAAGCTATTCG TTTTATCTGT ATTCAGA ATTCAGA CCAAAAGCTGACATAGATGTTATGGGTAGAATTCTTTTTTTTTTTCGAATTTTGTTCACATCTTAGATCTCTAAATTGACTCATCTCCATAAAGGAGCCGAATGAAACCAAAGTTTCATGTTCGGTTTTGAATTAGAGACGTTAAAAATAATGAATCGACGTCGACTATAACCCCTAGCCTTCCAAGCTAACGATGCGGGTTCGATTCCCGCTACCCGCTCTATATCTATTTATTCTAAATATTTTAATCTATTCATTAAATCAAATTTAGGTTATTAGTATTAGTACATCATTGAATATACAATTCCAAAAATTCTTTCACATCTGATTCTTTCTGTTTTTTTTTTTTTCAAACAAAAAGTTCAAATACGAAAAAAAATCAGAATGAAAAGCGTCCATTGTCTAATGGATAGGACAGAGGTCTTCTAAACCTTTGGTATAGGTTCAAATCCTATTGGACGCAATTTATTTCCATATATATATATATTTTTTAGATTTCGATAGCAAGAAAGACTGTTTGAATATTTGAATCCAAGATGCTTAATTCCTTTTTTTATTAAGATTAAGACAAAAGTGATAAA TATTTCTTTATGCTTGTTCCT GAAGTATAAAACGGTCCATTTGTTCCTGAATAGCT	TAGAATCCCCCTCTTCTAGAAGGATCATCTACAAAGCTATTC GTTTTATCTGTATTCAGACC AAAAGCTGACATAGATGTTATGGGTAGAATTCTTTTTTTTTTTCGAATTTTGTTCACATCTTAGATCTATAAATTGACTCATCTCCATAAAGGAGCCGAATGAAACCAAAGTTTCATGTTCGGTTTTGAATTAGAGACGTTAAAAATAATGAATCGACGTCGACTATAACCCCTAGCCTTCCAAGCTAACGATGCGGGTTCGATTCCCGCTACCCGCTCTATATCTATTTATTCTAAATATTTG AATCT ATTCATTAA ATTCATTAA ATCAAATTTAGGTTATTAGTATTAGTACATCATTGAATATACAATTCAAAATTAGTACATCATTGAATATACAATTCAAAAAATTCTTTCATATCTGATTCTTTCTGTTTTTTTTTTTCAAACAAAAAGTTAAAATACGAAAAAAAAAAATCAGAATGAAAAGCGTCCATTGTCTAATGGATAGGACAGAGGTCTTCTAAACCTTTGGTATAGGTTCAAATCCTATTGGACGCAATTTATTTCCATATATATATATTTTTTTAGATTTCGATAACAAGAAAGACTGTTTGAATATTTGAATCCAAGATGCTTAAGTCCTTTTTTTATTAAGATTAAGACAAAAGTGATAAATATTTCTTTATGCTTGTTCCTGAAGTATAAAACGGTCCATTTGTTCCTGAATAGCT
마커	위치	염기서열
		S. nigrum	S. tuberosum
Indel_3, 11	atpH- atpI	ATATTAAGTGAAGGAAAGG GGAATTTTAGGAAAAAGATTTTTTTCC CCTTACTCTTTAATATCATCGTAATTTTTTTGCTATCACTCTAGATCGTATATAGCATAGTTGTATATTTAGATTCCCCTATTCTATTCCGTAAGTTTAGTAATTCTCTTGAGCCACCTACCATATACATTTATACATTGCTGTGGGCTAAGCTAAAAAAGACTATTTCAATGATGGCCCTCCATGGATTCACCTATATAAGCCGCGGCTAAAGTTGCAAAAATAAGAGCTTGAATACCACTTGTAAATAATCCAAGGAGCATGACAGGTATAGGAACTACTAAGGGTACTAAAGAAACAAGAACAACAACTACTAATTCATCAGCTAAGATATTCCCGAAAAGTCGAAAACTAAGTGATAAAGGTTTTGTGAAATCTTCTAAGATGTTAATGGGTAAAAGGATTGGGGTTGGTTGAATATATTTTCCGAAATAACCTAATCCCC TTTTTGTAAGACC CGCATAGAAATAT GCCGCGGATGTGAGTAAA	ATATTAAGTGAAGGAAAGG GGAATTTTAGGAAAA AGATCTTTGTT TTT AGATCTTTTTCCCCTTACTCTTTAATATCATCGTAATGTTTTTGCTATCACTCTAGATCGTATATAGCATAGTTGTATATTTAGATTCCCCTATTCTATTCCGTAAGTTAAGTAATTCTCTTGAGCCACCCACCATATACATTTATACATTGCTGTGGGCTAAGCTAAAAAAGACTATTTCAATGATGGCCCTCCATGGATTCACCTATATAAGCCGCGGCTAAAGTTGCAAAAATAAGAGCTTGAATACCACTTGTAAATAATCCAAGGAGCATGACAGGTATAGGAACTACTAAGGGTACTAAAGAAACAAGAACAACAACTACTAATTCATCAGCTAAGATATTCCCGAAAAGTCGAAAACTAAGTGATAAAGGTTTTGTGAAATCTTCTAAGATGTTAATGGGTAAAAGGATTGGGGTTGGTTGAATATATTTTCCGAAATAACCTAATCCCT TTTTTGTAAGACCCGCATAGAAATAT GCCACGGATGTGAGTAAA
마커	위치	염기서열
		S. nigrum	S. tuberosum
Indel_4, 12	ycf2- ycf15	GAAAGA TATGTGGCCATGGGATTAAGT GGAACAGAATTGACTGGGTGGTAGAGTCGTGGAAACGCTTGTTTCTTCCATATTTTGGACCTTAGCTCCATGGAAGAATATGTTACTGCTGAAACACGGAAGAATTGAAATCTTAGATCAAAACACTATGTATGGATGGTATGAACTGCCTAAACAAGAATTCTTGAACAGCAAACAACCAGTTCAGATATTCACGACCAAGAAGTACTGGATTCTCTTTCGGATAGGCCCTGAAAGGAGAAGGAAGGCTGGAATGCCAACAGGCGTCTATTATATTGAATTTACCCGATAGTCCCCATTTTGGGAACGTCCAGTGCCAAAGTCACTGAATGGGTAAGTCGCCAATCCCTGGACTATGTAATGTACTTTATCTGCTGGGTTACGGGCGGACGATTTTAAAGAGGACTCCCCATTCATTAGATAGAGAAGATCACCAAGATTTCGCGATCCGCTGCCGAATTTATTCCAATTCCAAGAGCTC GGATCGAATAATCGGTATTGA TATACCGATTCGATCCGAGCTCTCTTATTGAGAATGC	GAAAGA TATGTGGCCAT GAAAGA GGG ATTAAGTGGAACAGAATTGACTGGGTGGTAGAGTCGTGGAAACGCTTGTTTCTTCCATATTTTGGACCTTAGCTCCATGGAAGAATATGTTACTGCTGAAACACGGAAGAATTGAAATCTTAGATCAAAACACTATGTATGGATGGTATGAACTGCCTAAACAAGAATTCTTGAACAGCAAACAACCAGTTCAGATATTCACGACCAAGAAGTACTGGATTCTCTTTCGGATAGGCCCTGAAAGGAGAAGGAAGGCTGGAATGCCAACAGGCGTCTATTATATTGAATTTACCCGATAGTCCCCATTTTGGGAACGTCCAGTGCCAAAGTCACTGAATGGGTAAGTCGCCAATCCCTGGACTATGTAATGTACTTTATCTGCTGGGTTACGGGCGGACGATTTTAAAGAGGACTCCCCATTCATTAGATAGAGAAGATCACCAAGATTTCGCGATCCGCTGCCGAATTTATTCCAATTCCAAGAGCTC GGATCGAATCGGTATATCAAT ACCGATTCGATCCGAGCTCTCTTATTGAGAATGC
마커	위치	염기서열
		S. nigrum	S. tuberosum
Indel_5, 13	ycf3- trnS	TTCTGGTATGGAATCATAGTCTATATAA TTACAATTATGATTTAGGGGTCATAAT CATTATGTAGGAGAGATGGCCGAGTGGTTGAAGGCGTAGCATTGGAACTGCTATGTAGGCTTTTGTTTACCGAGGGTTCGAATCCCTCTCTTTCCGTACCTTCGCTTAATTCACCAATTTTACTAACAACAAGGGCTCAAATAGCAATGGATACCATTATTCCAACAGCTAGACCCTTCTTTGATCTAAAGATATAGATTCTCAATTCCTAATTGCTGTGACGCGTAAAATAGAATACTAAAAAATAATCATAATCAAAATACTGGAAAGAAAAGAGTAGACAAGGAATGAAAATAGATCCTTGGTCTATGATACAAAAATGGGGGAAATCTAGATCAAACTCGGATTTATCTTACTTAACTTACTTAACCTTGGGTTAATTTACTTCGCCT AAAGGGAAGAAAATT TTGCG AACCCTTGGTTTTA	TTCTGGTATGGAATCATAGTCTATATAATTACAGTTATGATTTA AGAGTATCCATTAACTATAGTCTAAAAGATATAGACCATCAATCAGTTGATTCGTTCTACTTCATTGAATTAATCCGTTATAAAAATAGAAAAATATCAGAAAAAGAAGGGAACGTTGTTTTTGCAAACATGAATTGAATTTTTTTGAACAATTTTTCGTAAAAATTGTATCTTTATCCCGGAGCCTCGAAGGAAAGAAAAACCGTTCTTTGCTTTGACTTTGATGACAAATTTTCAGTTAAAATGGATTGGTCGTACCTATCCAATAATGGA ATATGGATTATGACTGACTCGCTA TTCACTCGGTTTT GGGGTCATAATCATTATGTAGGAGAGATGGCCGAGTGGTTCAAGGCGTAGCATTGGAACTGCTATGTAGGCTTTTGTTTACCGAGGGTTCGAATCCCTCTCTTTCCGTACCTTCGCTTAATTCACCAATTTTACTAACAACAAGGGCTCAAATAGCATTGGATACCATTATTCCAACAGCTAGACCCTTCTTTGATCTAAAGATATAGATTCTCAATTCCTAATTGCTGTGACGCGTAAAATAGAATACTAAAAAATAATCATAATCAAAATACTGGAAAGAAAAGAATAGACAAGGAATGAAAATAGATCCTTGGTCTATGATACAAAAATGGGGGAAATCTAGATCAAACTCGGATTGATCGTACTTAACTTACTTAACCTTGGGTTAATTTACTTCGCCT AAAGGGAAGAAATTTTTGCG AACCCTTGGTTTTA
마커	위치	염기서열
		S. nigrum	S. tuberosum
Indel_6, 14	ycf4- cemA	ATCATCCTAATATCTTTCCCTTAATTAT TCTATTCCTGACAGTGAAATTT TTGCGAAATATTGGATATTTTGATAGCAAAGGAGTTCTTTCGTCTCAAAATCTGAATAATATTCATTACTTAAAGTGGTTCTTTCGATCATTCATCGAAAGGAGACACTTGATTTTGAATTTGACCAATTGAGATATCAGGAAACAATATTCTTAATTTCTTCATTCGAAGTGAATTCTTAGCCTATTTCTGTATTCTTTCTAGATTCAAAGACTAACCACAAAATCACAAAGAAAATAGATTCATAAGTTCTAGACCTTGTATAAAACTCATGTGTGTAAGAAATATTCGATCGCATAGAGTGTACGAATGGGTTGATTAACAATTCACAGACGAAAAAATGGCAAAAAAGAAAGCATTCACTCCCCTTTTCTATCTTGCATCTATAGTATTTTTGCCCTGGTGGATTTCTTTCTCAGTTAATAAATGTCTGGAATCTTGGGTTACTAATTGGTGGAATACTG GGCAATCCGAAATTTTCTT GAATAATATTCAAGAAAAGAGTCTTCTAGAAAAAT	ATCATCCTAATATCTTTCCCTCAATTATTCTA TTCCTGA CTATGGGTAAT CAG TGAAATTTTTTCGAAATATTGGATATTTTGATAGCAAAGGAGTTCTTTCGTCTCAAAATCTGAATAATATTCATTACTTAAAGTGGTTCTTTCGATCATTCATCGAAAGGATACACTTTATTTTTAATTTGACCAATTGAGATATCAGGAAACAATATTCTAAATTTCTTCATTCGAAGTGAATTCTTAGCCTATTTCTGTATTCTTTCTAGATTCAAAGACTAACCACAAAATCACAAAGAAAATAGATTCATAAGTTCGATACCTTGTATAAAACTCATGTGTGTAAGAAATATTCGATCGCATAGAGTGTACGAATGGGTTGATTAACAATTTACAGACGAAAAAATGGCAAAAAAGAAAGCATTCACTCCTCTTTTCTATCTTGCATCTATAGTATTTTTGCCCTGGTGGATTTCTTTCTCAGTTAATAAATGTCTGGAATCTTGGGTTACTAATTGGTGGAATACTG GGCAATCCCAAATTGTCTT GAATAATATTCAAGAAAAGAGTCTTCTAGAAAAAT
마커	위치	염기서열
		S. nigrum	S. tuberosum
Indel_7, 15	petA- psbJ	AAAAAAATGAAATTA TGAAAACTCCTCGAAATAGAA AGAAAGTCAAATTTGTCTAAATACTAGACATAAGGAAGCGGGGGATAAATGCGAGGAAGAAAAAATTATAGGAGGGGTTATTTGTCTTCCTAGTCTTCGACACAAGAAAGGGGTGTAGAAAAATCCTTTTTTCTTGTGTCGAAACGAAAGAGTAATGATTTTTGATCCTGTTTGTTAAAAATTCCTAGTCTTGGTTTCAATTTTTCCAGATGTATCAGAAACCCTACGCCCACCCACTTTACATATAATATACCTACTGGTGGACAAACAAAACAAAAAAAGAGAGGAAATTTTATTAATTAACTAAAACTTCTTCAATCAACTTATCTTATAAAAAATTTGATGATGAAATAGGAAAACAATAAAAAATAAATAGAGTAATGTAATATAGAGAGTAAGGTTCTACATTAGATTAGTATAGAAAGGATTTGCACGCTATCTAATATATGATAGCAGCCAAGAAATTGAGTGATTCCTTCTTTCTTCCAACTTAGAAAGTACCGATAAATACTATCATATAAAAAGAAGAGGTGGTCTGACTAACTCAATGAAGTGAATTTTTCAAAAACAT GATCAGAAAAATGGAGTTTTTAA A AAGAAAAAGAAATCCATTT	AAAAAAATGAAATTATGAAAACTCC TTTGTCTTATTTATACTCTTCTTCAAAATCTACATACTATGTGGTACAAGGGATTCCCAGCATCTCGTAGAAAAAGAGTATGTAATGTA GATTTTGAAGAAGAGTATTTGG CTTTCATTTATTTTGATTTAGTTTTTTTTAATTGGAGTAGTGTAACTATGTTACTATTGCCAGATTTCACTGCCATAAAACGTATCAATAGTTTTCTAT TCTAAATAGAAAGAAAGTCAAATTTGTCTAAATACTAGACATAAGGAAGCGGGGGATAAATGCGGGGAAGAAAAAATTCTAGCAGGGATTATTTGTCTTCCTAGTCTTCGACACAAGAAAGGGGTGTAGAAAAATCCTTTTTTCTTGTGTCGAAACGAAAGAGTAATGATTCTTGATCCTGTTTGTTAAAAATTCCTAGTCTTGGTTTCAATTTTTCCAGATGTATCAGAAACCCTACACCTACCCCCTTACATATAATATATGAATTGGTGGACAAACAAAACAAAAAAGAGAGGAAATTTTATTAATTAAATAAAACTTCTTCAATCAACTTATCTTATAAAAAATTTGATGATGAAATAGGAAAACAATAAAAAATAAATAGAGTAATGTAATATAGAGAGTGTAATATAGAGAGTAAGGTTCTACATTAGATTAGTATAGAAAGGATTTGCACGCTATCTAATATATGATAGCAGCCAAGAAATTGAGTGATTCCTTCTTTCT TCCAACTTT GAAAGTACTG G AAAGTACCGATAGATACTATCATATAAAAAGAAGAGGTGGTCTGACTAACTCAATGAAGCGAATTTTTCAAAAACATGCTCAGAAAAAT GAGAAAAAT GGAGTTTTTGAAAAGAAAAAGAAATCCATTT

표 2의 in/del을 대상으로 까마중과 가지속 식물을 구분하기 위하여 염기서열을 비교한 후 (표 3) 까마중에서 특이적으로 증폭이 가능한 7개 지역과 까마중 이외 가지속에서 보편적으로 증폭이 가능한 8개의 지역을 증폭할 수 있는 프라이머를 제작하였다 (표 4).

까마중 및 가지속 식물의 엽록체 게놈상의 In/del 마커를 증폭하기 위한 프라이머

마커	Indel size Forward/ Reverse(bp)	Position Forward (/Reverse)	특성 Forward (/Reverse)	Primer sequence		Expected size(bp)
				Forward	Reverse	Solanum nigrum	Solanum tuberosum
Indel_1	13/0	trnH, psbA	IGS	AAAGATAAGAATATGAGATAAGAA	TTTCAACCTAAATGGTTTCAATTT	523	-
Indel_2	7/0	trnS, trnG	IGS	TTTTATCTGTATTCAGAATTCAGA	AGGAACAAGCATAAAGAAATA	626	-
Indel_3	14/0	atpH, atpI	IGS	GGAATTTTAGGAAAAAGATTTTTTTCC	ATATTTCTATGCGGGTCTTACAAAAA	498	-
Indel_4	6/0	ycf2, ycf15	IGS	TATGTGGCCATGGGATTAAGT	TCAATACCGATTATTCGATCC	523	-
Indel_5	310/0	ycf3, trnS	IGS	TTACAATTATGATTTAGGGGTCATAAT	CGCAAAATTTTCTTCCCTTT	439	-
Indel_6	11/0	ycf4, cemA	IGS	TCTATTCCTGACAGTGAAATTT	AAGAAAATTTCGGATTGCC	505	-
Indel_7	210/9	petA, psbJ	IGS	TGAAAACTCCTCGAAATAGAA	TTTAAAAACTCCATTTTTCTGATC	616	-
Indel_8	13/11	trnH, psbA/ psbA, matK	IGS/ IGS	ATTATTTCAAAGATAAGAATATG	ATGACGAATAAATGACGAAG	-	1,902
Indel_9	13/9	trnH, psbA/ matK	IGS/ CDS	ATTATTTCAAAGATAAGAATATG	ACGAATATTGTAATTTGAATAG	-	2,896
Indel_10	7/9	trnS, trnG	IGS	GTTTTATCTGTATTCAGACC	TTAATGAATTTAATGAATAGATT	-	287
Indel_11	14/0	atpH, atpI	IGS	GGAATTTTAGGAAAAAGATCTTTGTT	ATATTTCTATGCGGGTCTTACAAAAA	-	512
Indel_12	6/0	ycf2, ycf15	IGS	TATGTGGCCATGAAAGAGGG	ATTGATATACCGATTCGATCC	-	529
Indel_13	310/0	ycf3, trnS	IGS	ATATGGATTATGACTGACTCGCTA	CGCAAAATTTTCTTCCCTTT	-	460
Indel_14	11/0	ycf4, cemA	IGS	TTCCTGACTATGGGTAATCAG	AAGAAAATTTCGGATTGCC	-	512
Indel_15	210/10	petA, psbJ	IGS	GATTTTGAAGAAGAGTATTTGG	CCAGTACTTTCAAAGTTGGA	-	648

상기 표에서,

Indel_1 마커 증폭용 프라이머 서열: 정방향 프라이머(서열번호 1), 역방향 프라이머(서열번호 2);

Indel_2 마커 증폭용 프라이머 서열: 정방향 프라이머(서열번호 3), 역방향 프라이머(서열번호 4);

Indel_3 마커 증폭용 프라이머 서열: 정방향 프라이머(서열번호 5), 역방향 프라이머(서열번호 6);

Indel_4 마커 증폭용 프라이머 서열: 정방향 프라이머(서열번호 7), 역방향 프라이머(서열번호 8);

Indel_5 마커 증폭용 프라이머 서열: 정방향 프라이머(서열번호 9), 역방향 프라이머(서열번호 10);

Indel_6 마커 증폭용 프라이머 서열: 정방향 프라이머(서열번호 11), 역방향 프라이머(서열번호 12);

Indel_7 마커 증폭용 프라이머 서열: 정방향 프라이머(서열번호 13), 역방향 프라이머(서열번호 14);

Indel_8 마커 증폭용 프라이머 서열: 정방향 프라이머(서열번호 15), 역방향 프라이머(서열번호 16);

Indel_9 마커 증폭용 프라이머 서열: 정방향 프라이머(서열번호 17), 역방향 프라이머(서열번호 18);

Indel_10 마커 증폭용 프라이머 서열: 정방향 프라이머(서열번호 19), 역방향 프라이머(서열번호 20);

Indel_11 마커 증폭용 프라이머 서열: 정방향 프라이머(서열번호 21), 역방향 프라이머(서열번호 22);

Indel_12 마커 증폭용 프라이머 서열: 정방향 프라이머(서열번호 23), 역방향 프라이머(서열번호 24);

Indel_13 마커 증폭용 프라이머 서열: 정방향 프라이머(서열번호 25), 역방향 프라이머(서열번호 26);

Indel_14 마커 증폭용 프라이머 서열: 정방향 프라이머(서열번호 27), 역방향 프라이머(서열번호 28);

Indel_15 마커 증폭용 프라이머 서열: 정방향 프라이머(서열번호 29), 역방향 프라이머(서열번호 30); 이다.

실시예 4: 본 발명의 마커를 이용한 까마중 및 가지속 식물의 구별

상기 실시예 3에 따른 총 15세트의 프라이머를 이용하여 까마중 및 감자 및 야생감자를 포함하는 가지속 식물의 DNA를 이용하여 PCR을 수행하였다. 까마중(S. nigrum) 생식질은 1~4가 대구대학교 원예학과에서 수집되었고, 감자(S. tuberosum) 및 기타 야생 감자 종 S. candolleanum , S. kurtzianum, S. pinnatisectum의 생식질은 고령지농업연구센터에서 수집하여 이용하였다.

PCR 조건은 다음과 같다: 1) 예비변성 95℃ 5분, 2) 35 사이클 (변성 95℃ 30초, 어닐링 55℃ 30초, 연장 72℃ 1분), 3) 최종 연장 72℃ 10분. PCR 조건은 DNA 20ng/ul의 농도를 2ul, 10pmol의 forward와 reverse 프라이머를 각각 1.0ul씩 첨가 후 제넷바이오에서 판매되는 DNA taq polymerase, dNTP, buffer 등의 시약 및 멸균수를 첨가하여 전체 반응 용액이 25ul가 되도록 조절하여 PCR을 수행하였다.

PCR 후 1.0% 아가로스 젤상에서 전기영동한 결과(도 7) 본 발명의 Indel_1 내지 Indel_7 마커를 특이적으로 증폭하는 프라이머 세트에 의해 까마중의 선별이 가능하며, Indel_8 내지 Indel_15 마커를 특이적으로 증폭하는 프라이머 세트에 의해 까마중 외의 감자및 기타 야생감자를 포함하는 가지속 식물의 선별이 가능함을 알 수 있었다.

이상으로 본 발명의 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 이 기술분야의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

<110> Industry Academic Cooperation Foundation, Daegu University, <120> MARKERS FOR DISCRIMINATION OF SOLANUM NIGRUM FROM OTHER SOLANUM SPECIES INCLUDING POTATO(S. TUBEROSUM) USING CHLOROPLAST SEQUENCES AND METHOD <130> P15U10D0006 <160> 44 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_1_Forward primer <400> 1 aaagataaga atatgagata agaa 24 <210> 2 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_1_Reverse primer <400> 2 tttcaaccta aatggtttca attt 24 <210> 3 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_2_Forward primer <400> 3 ttttatctgt attcagaatt caga 24 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_2_Reverse primer <400> 4 aggaacaagc ataaagaaat a 21 <210> 5 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_3_Forward primer <400> 5 ggaattttag gaaaaagatt tttttcc 27 <210> 6 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_3_Reverse primer <400> 6 atatttctat gcgggtctta caaaaa 26 <210> 7 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_4_Forward primer <400> 7 tatgtggcca tgggattaag t 21 <210> 8 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_4_Reverse primer <400> 8 tcaataccga ttattcgatc c 21 <210> 9 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_5_Forward primer <400> 9 ttacaattat gatttagggg tcataat 27 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_5_Reverse primer <400> 10 cgcaaaattt tcttcccttt 20 <210> 11 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_6_Forward primer <400> 11 tctattcctg acagtgaaat tt 22 <210> 12 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_6_Reverse primer <400> 12 aagaaaattt cggattgcc 19 <210> 13 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_7_Forward primer <400> 13 tgaaaactcc tcgaaataga a 21 <210> 14 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_7_Reverse primer <400> 14 tttaaaaact ccatttttct gatc 24 <210> 15 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_8_Forward primer <400> 15 attatttcaa agataagaat atg 23 <210> 16 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_8_Reverse primer <400> 16 atgacgaata aatgacgaag 20 <210> 17 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_9_Forward primer <400> 17 attatttcaa agataagaat atg 23 <210> 18 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_9_Reverse primer <400> 18 acgaatattg taatttgaat ag 22 <210> 19 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_10_Forward primer <400> 19 gttttatctg tattcagacc 20 <210> 20 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_10_Reverse primer <400> 20 ttaatgaatt taatgaatag att 23 <210> 21 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_11_Forward primer <400> 21 ggaattttag gaaaaagatc tttgtt 26 <210> 22 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_11_Reverse primer <400> 22 atatttctat gcgggtctta caaaaa 26 <210> 23 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_12_Forward primer <400> 23 tatgtggcca tgaaagaggg 20 <210> 24 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_12_Reverse primer <400> 24 attgatatac cgattcgatc c 21 <210> 25 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_13_Forward primer <400> 25 atatggatta tgactgactc gcta 24 <210> 26 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_13_Reverse primer <400> 26 cgcaaaattt tcttcccttt 20 <210> 27 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_14_Forward primer <400> 27 ttcctgacta tgggtaatca g 21 <210> 28 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_14_Reverse primer <400> 28 aagaaaattt cggattgcc 19 <210> 29 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_15_Forward primer <400> 29 gattttgaag aagagtattt gg 22 <210> 30 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Indel_15_Reverse primer <400> 30 ccagtacttt caaagttgga 20 <210> 31 <211> 2948 <212> DNA <213> Solanum nigrum <400> 31 ttctttctta tttcaatgat attattattt cgattattat ttcaaagata agaatatgag 60 ataagaatat gaagtcaaaa ttgtattttt tgtgaaatga aataaaaaag atataataac 120 attagcaaca agaggaacaa gttatatttc tacaattttc aataaataga aaatcaaaat 180 cgaatactca atcatgaata aatgcaggca aataccctct ccttcttttt ctataatgta 240 aacaaaaaag tctatgtcag taaaatacta ggaaattaat aaagaaaaag aaaaaaagaa 300 aggagcaata gcaccctctt gatagaacaa gaaaatggtt attgctcctt tcttttcaaa 360 acctcctata gactaggctg ggatcttatc catttgtaga tggagcttcg atagcagcta 420 ggtctagagg gaagttatga gcattacgtt catgcataac ttccatacca aggttagcac 480 ggttgatgat atcagcccaa gtgttaatta cacgaccctg actgtcaact acagattggt 540 tgaaattgaa accatttagg ttgaaagcca tagtgctaat acctaaagcg gtaaaccaga 600 tacctactac aggccaagca gctaggaaga agtgtaacga acgagagttg ttgaaactag 660 catattggaa gatcaatcgg ccaaaataac catgagcggc tacgatatta taagtttctt 720 cctcttgacc gaatctgtaa ccttcattag cagattcatt ttctgtggtt tccctgatca 780 aactagaagt taccaaggaa ccatgcatag cactgaatag ggagccgccg aatacaccag 840 ccacgcctaa catgtgaaat gggtgcataa ggatgttgtg ctcagcctgg aatacaatca 900 tgaaattgaa agtaccagag attcctagag gcataccatc agaaaaactt ccttgaccga 960 ttgggtagat caagaaaact gcggtagcag ctgcaacagg agctgaatat gcaacagcaa 1020 tccaaggtcg catacccaga cggaagctaa gctcccactc acgacccatg taacaagcta 1080 cgccaagtaa gaagtgtaga acaattagtt cataaggacc accgttgtat aaccattcat 1140 caacggatgc cgcttcccag attgggtaaa aatgtaaacc tatagctgca gaagtaggaa 1200 taatggcacc ggaaataata ttgtttccgt aaagtagaga ccctgaaaca ggttcacgaa 1260 taccatcaat gtctactgga ggagcagcaa tgaaggcaat aataaataca gaagttgccg 1320 tcaataaggt agggatcatc aaaacaccaa accatccaat gtaaagacgg ttttcagtgc 1380 tagttatcca gttacagaag cgaccccata ggctttcgct ttcgcgtctc tctaaaattg 1440 cagtcatggt aaaatcttgg tttatttaat catcagggac tcccaagcac acaagttttc 1500 tacaaatcaa aatagaaaat ggaaggcttg ttattcaaca gtataacatg acttatatac 1560 tcgtgtcaac caagctgtat ctggatctat tcaaattttt aatgaagttg attggaaaaa 1620 tccggacttc tctacagaga attagaattt cgatatgata gtgggttgcc cgggattcga 1680 acccggaact agtcggatgg agtagataag ttccttgtta aataaactaa atgttaatct 1740 taaattaaat aaacaagtaa agatccctcc ccaagccgtg cttgcacttt tcattgcaca 1800 cggctttccc tatgtataca tcagttcctt tcttatagaa attagaaaga cttaaaaaag 1860 ttgaatactc agttgattta ccccttatta gtattacaat caacatttca gaatagttaa 1920 aatttttgat ctcttcgtca tttagaaaat ctaagaatga atcattgata attcgccaga 1980 tcattgatgc aaaaaatatc caaataccaa atccgacttc tatatactcc ccacaaacta 2040 gacgaagctc gtgggaaggt caaagaaaga acttgttctt ccgacgttaa gaattcttcc 2100 aataattccg agcccgatct tttcaaaaaa gtgcgtacag tacttttgtg tttccgagct 2160 aaagttctag cacaagaaag tcgaagtata tactttattc gatataaagt cttttttttg 2220 caagatccgc tataataatg aaaaagattt ctgcatatac gcccaaatcg gtcaataata 2280 tcagaatctg ataaatcgga ccaaaccggt ttactaatgg gatgccctaa tacggtacaa 2340 aagtgtgctt tagctaatga tccaatcaaa ggaataattg gaacaagggt atcgaacttc 2400 ttaattggat tattgattag aaatgaattt tctaacattt gactacgtac cattgaatga 2460 tttagtcgca cacttgaaag atagcccata aagtcacggg aatggttgga taattggttt 2520 atatggatcc ttcctgtgtg aaagtacata gaaaaatgac attgccaaaa attgacaagg 2580 taaaatttcc atttattcat caaaagaaac gtcccttttg aagccagaat tgattttcct 2640 tcatacctaa cataatggat gaaagggtcc ttgaataacc agagggtaac ctgaaaatgc 2700 ttagcaaaga cttctacaag acgttctatt tttccataga aatatattcg ttcaagaagg 2760 gctccaaaag atgttgatcg taaatgagaa gattggttcc gtagaaagac gaaagtggat 2820 tcgcattcat atacataaga attatataag aagaagaaga atctttgagt tttttttgaa 2880 aaggagtaac cgggcttctt tgaagtaata agactacaat attcgtggag aaagaatcgt 2940 aataaatg 2948 <210> 32 <211> 2953 <212> DNA <213> Solanum tuberosum <400> 32 ttctttctta tttcaatgat attattattt tgattattat ttcaaagata agaatatgaa 60 gtaaaaattg tattttttgt gaaatgaaat aaaaaagata tagtaacatt agcaacaaga 120 ggaacaagtt atatttctac aattttaaat aaatagaaaa taaaaatcga atactcaatc 180 atgaataaat gcaagcaaat accctctctt tctttttcga taatgtaaac aaaaaagtct 240 atgtcagtaa aatactagga aattaataaa gaaaaaaaaa aagaaaggag caatagcacc 300 ctcttgacag aacaagaaaa tgattattgc tcctttcttt tcaaaacctc ctatagacta 360 ggctgggatc ttatccattt gtagatggag cttcgatagc agctaggtct agagggaagt 420 tatgagcatt acgttcatgc ataacttcca taccaaggtt agcacggttg atgatatcag 480 cccaagtgtt aattacacga ccctgactgt caactacaga ttggttgaaa ttgaaaccat 540 ttaggttgaa agccatagtg ctgataccta aagcggtaaa ccagatacct actacaggcc 600 aagcagctaa gaagaagtgt aacgaacgag agttgttgaa actagcatat tggaagatca 660 atcggccaaa ataaccatga gcggctacga tattataagt ttcttcctct tgaccgaatc 720 tgtaaccttc attagcagat tcattttctg tggtttccct gatcaaacta gaagttacca 780 aggaaccatg catagcactg aatagggagc cgccgaatac cccagctacg cctaacatgt 840 gaaatgggtg cataaggatg ttgtgctcag cctggaatac aatcatgaaa ttgaaagtac 900 cagagattcc tagaggcata ccatcagaaa aacttccttg accaattggg tagatcaaga 960 aaactgcggt agcagctgca acaggagctg aatatgcaac agcaatccaa ggtcgcatac 1020 ccagacggaa gctaagctcc cactcacgac ccatgtaaca agctacgcca agtaagaagt 1080 gtagaacaat tagttcataa ggaccaccgt tgtataacca ttcatcaacg gatgccgctt 1140 cccagattgg gtaaaaatgt aaacctatag ctgcagaagt aggaataatg gcaccggaaa 1200 taatgttgtt tccgtaaagt agagaccctg aaacaggttc acgaatacca tcaatgtcta 1260 ctggaggagc agcaatgaag gcaataataa atacagaagt tgccgtcaat aaggtaggga 1320 tcatcaaaac accaaaccat ccaatgtaaa gacggttttc agtgctagtt atccagttac 1380 agaagcgacc ccataggctt tcgctttcgc gtctctctaa aattgcagtc atggtaaaat 1440 cttggtttat ttaatcatca gggactccca agcacacgag ttttctacaa atcaaaatag 1500 aaaatgaaag gcttgttatt caacagtata acatgactta tatactcgtg tcaaccaagg 1560 tgtatgtgga tctattcaaa tttttaatga agttgattgg aaaaatacgg acttctctac 1620 agagaattag aatttcgata tgatagtggg ttgcccggga ttcgaacccg gaactagtcg 1680 gatggagtag ataagttcct tgttaaataa aataaatgtt aatcttaaat taaataaaca 1740 agtaaagatc cctccccaag ccgtgcttgc acttttcatt gcacacggct ttccctatgt 1800 atacatcagt tcctttctta tagaaattag aaagacttaa aaaagttgaa tactcagttg 1860 atttacccct tattagtatt acaatcagca tttcagaata gtgaaaattt ttgatctctt 1920 cgtcatttat tcgtcattta gaaaatctaa gaatgaatca ttgataattc gccagatcat 1980 tgatacaaaa aatatccaaa taccaaatcc gacttctata tactccccac aaactagacg 2040 aagctcgtgg gaaggtcaaa gaaagaactt gttcttccga cgttaagaat tcttccaata 2100 attccgagcc cgatcttttc aaaaaagtgc gtacagtact tttgtgtttc cgagctaaag 2160 ttctagcaca agaaagtcga agtatatact ttattcgata taaagtcttt tttttggaag 2220 atccgctata ataatgaaaa agatttctgc atatacgccc aaatcggtca ataatatcag 2280 aatctgataa atcggaccaa actggtttac taatgggatg ccctaatacg gtacaaaagt 2340 gtgctttagc taatgatcca atcaaaggaa taattggaac aagggtctcg aacttcttaa 2400 ttggattatt gattagaaat gaattttcta acatttgact acgtaccatt gaatgattta 2460 gtcgcacact tgaaagatag cccataaagt cacgggaatg gttggataat tggtttatat 2520 ggatccttcc tgtgtgaaag tacatagaaa aatgacattg ccaaaaattg acaaggtaaa 2580 atttccattt attcatcaaa ggaaacgtcc cttttgaagc cagaattgat tttccttcat 2640 acctaacata atgcatgaaa ggatccttga ataaccatag ggtaacctga aaatccttag 2700 caaagacttc tacaagacgt tctatttttc catagaaata tattcgttca agaagggctc 2760 caaaagatgt tgatcgtaaa tgagaagatt ggttccgtag aaagacgaaa gtggattcgc 2820 attcatatac ataagaatta tataagaaga agaagaatct ttgatttttt tttgaaaagg 2880 agtaaccggg cttctttgaa gtaataagac tattcaaatt acaatattcg tggagaaaga 2940 atcgtaataa atg 2953 <210> 33 <211> 704 <212> DNA <213> Solanum nigrum <400> 33 tagaatcccc ctcttctaga aggatcatct acaaagctat tcgttttatc tgtattcaga 60 attcagacca aaagctgaca tagatgttat gggtagaatt cttttttttt ttcgaatttt 120 gttcacatct tagatctcta aattgactca tctccataaa ggagccgaat gaaaccaaag 180 tttcatgttc ggttttgaat tagagacgtt aaaaataatg aatcgacgtc gactataacc 240 cctagccttc caagctaacg atgcgggttc gattcccgct acccgctcta tatctattta 300 ttctaaatat tttaatctat tcattaaatc aaatttaggt tattagtatt agtacatcat 360 tgaatataca attccaaaaa ttctttcaca tctgattctt tctgtttttt tttttttcaa 420 acaaaaagtt caaatacgaa aaaaaatcag aatgaaaagc gtccattgtc taatggatag 480 gacagaggtc ttctaaacct ttggtatagg ttcaaatcct attggacgca atttatttcc 540 atatatatat atatttttta gatttcgata gcaagaaaga ctgtttgaat atttgaatcc 600 aagatgctta attccttttt ttattaagat taagacaaaa gtgataaata tttctttatg 660 cttgttcctg aagtataaaa cggtccattt gttcctgaat agct 704 <210> 34 <211> 736 <212> DNA <213> Solanum tuberosum <400> 34 tagaatcccc ctcttctaga aggatcatct acaaagctat tcgttttatc tgtattcaga 60 ccaaaagctg acatagatgt tatgggtaga attctttttt tttttcgaat tttgttcaca 120 tcttagatct ataaattgac tcatctccat aaaggagccg aatgaaacca aagtttcatg 180 ttcggttttg aattagagac gttaaaaata atgaatcgac gtcgactata acccctagcc 240 ttccaagcta acgatgcggg ttcgattccc gctacccgct ctatatctat ttattctaaa 300 tatttgaatc tattcattaa attcattaaa tcaaatttag gttattagta ttagtacatc 360 attgaatata caattcaaaa ttagtacatc attgaatata caattcaaaa aattctttca 420 tatctgattc tttctgtttt tttttttcaa acaaaaagtt aaaatacgaa aaaaaaaaat 480 cagaatgaaa agcgtccatt gtctaatgga taggacagag gtcttctaaa cctttggtat 540 aggttcaaat cctattggac gcaatttatt tccatatata tatatttttt tagatttcga 600 taacaagaaa gactgtttga atatttgaat ccaagatgct taagtccttt ttttattaag 660 attaagacaa aagtgataaa tatttcttta tgcttgttcc tgaagtataa aacggtccat 720 ttgttcctga atagct 736 <210> 35 <211> 535 <212> DNA <213> Solanum nigrum <400> 35 atattaagtg aaggaaaggg gaattttagg aaaaagattt ttttcccctt actctttaat 60 atcatcgtaa tttttttgct atcactctag atcgtatata gcatagttgt atatttagat 120 tcccctattc tattccgtaa gtttagtaat tctcttgagc cacctaccat atacatttat 180 acattgctgt gggctaagct aaaaaagact atttcaatga tggccctcca tggattcacc 240 tatataagcc gcggctaaag ttgcaaaaat aagagcttga ataccacttg taaataatcc 300 aaggagcatg acaggtatag gaactactaa gggtactaaa gaaacaagaa caacaactac 360 taattcatca gctaagatat tcccgaaaag tcgaaaacta agtgataaag gttttgtgaa 420 atcttctaag atgttaatgg gtaaaaggat tggggttggt tgaatatatt ttccgaaata 480 acctaatccc ctttttgtaa gacccgcata gaaatatgcc gcggatgtga gtaaa 535 <210> 36 <211> 549 <212> DNA <213> Solanum tuberosum <400> 36 atattaagtg aaggaaaggg gaattttagg aaaaagatct ttgtttttag atctttttcc 60 ccttactctt taatatcatc gtaatgtttt tgctatcact ctagatcgta tatagcatag 120 ttgtatattt agattcccct attctattcc gtaagttaag taattctctt gagccaccca 180 ccatatacat ttatacattg ctgtgggcta agctaaaaaa gactatttca atgatggccc 240 tccatggatt cacctatata agccgcggct aaagttgcaa aaataagagc ttgaatacca 300 cttgtaaata atccaaggag catgacaggt ataggaacta ctaagggtac taaagaaaca 360 agaacaacaa ctactaattc atcagctaag atattcccga aaagtcgaaa actaagtgat 420 aaaggttttg tgaaatcttc taagatgtta atgggtaaaa ggattggggt tggttgaata 480 tattttccga aataacctaa tccctttttt gtaagacccg catagaaata tgccacggat 540 gtgagtaaa 549 <210> 37 <211> 566 <212> DNA <213> Solanum nigrum <400> 37 gaaagatatg tggccatggg attaagtgga acagaattga ctgggtggta gagtcgtgga 60 aacgcttgtt tcttccatat tttggacctt agctccatgg aagaatatgt tactgctgaa 120 acacggaaga attgaaatct tagatcaaaa cactatgtat ggatggtatg aactgcctaa 180 acaagaattc ttgaacagca aacaaccagt tcagatattc acgaccaaga agtactggat 240 tctctttcgg ataggccctg aaaggagaag gaaggctgga atgccaacag gcgtctatta 300 tattgaattt acccgatagt ccccattttg ggaacgtcca gtgccaaagt cactgaatgg 360 gtaagtcgcc aatccctgga ctatgtaatg tactttatct gctgggttac gggcggacga 420 ttttaaagag gactccccat tcattagata gagaagatca ccaagatttc gcgatccgct 480 gccgaattta ttccaattcc aagagctcgg atcgaataat cggtattgat ataccgattc 540 gatccgagct ctcttattga gaatgc 566 <210> 38 <211> 569 <212> DNA <213> Solanum tuberosum <400> 38 gaaagatatg tggccatgaa agagggatta agtggaacag aattgactgg gtggtagagt 60 cgtggaaacg cttgtttctt ccatattttg gaccttagct ccatggaaga atatgttact 120 gctgaaacac ggaagaattg aaatcttaga tcaaaacact atgtatggat ggtatgaact 180 gcctaaacaa gaattcttga acagcaaaca accagttcag atattcacga ccaagaagta 240 ctggattctc tttcggatag gccctgaaag gagaaggaag gctggaatgc caacaggcgt 300 ctattatatt gaatttaccc gatagtcccc attttgggaa cgtccagtgc caaagtcact 360 gaatgggtaa gtcgccaatc cctggactat gtaatgtact ttatctgctg ggttacgggc 420 ggacgatttt aaagaggact ccccattcat tagatagaga agatcaccaa gatttcgcga 480 tccgctgccg aatttattcc aattccaaga gctcggatcg aatcggtata tcaataccga 540 ttcgatccga gctctcttat tgagaatgc 569 <210> 39 <211> 481 <212> DNA <213> Solanum nigrum <400> 39 ttctggtatg gaatcatagt ctatataatt acaattatga tttaggggtc ataatcatta 60 tgtaggagag atggccgagt ggttgaaggc gtagcattgg aactgctatg taggcttttg 120 tttaccgagg gttcgaatcc ctctctttcc gtaccttcgc ttaattcacc aattttacta 180 acaacaaggg ctcaaatagc aatggatacc attattccaa cagctagacc cttctttgat 240 ctaaagatat agattctcaa ttcctaattg ctgtgacgcg taaaatagaa tactaaaaaa 300 taatcataat caaaatactg gaaagaaaag agtagacaag gaatgaaaat agatccttgg 360 tctatgatac aaaaatgggg gaaatctaga tcaaactcgg atttatctta cttaacttac 420 ttaaccttgg gttaatttac ttcgcctaaa gggaagaaaa ttttgcgaac ccttggtttt 480 a 481 <210> 40 <211> 791 <212> DNA <213> Solanum tuberosum <400> 40 ttctggtatg gaatcatagt ctatataatt acagttatga tttaagagta tccattaact 60 atagtctaaa agatatagac catcaatcag ttgattcgtt ctacttcatt gaattaatcc 120 gttataaaaa tagaaaaata tcagaaaaag aagggaacgt tgtttttgca aacatgaatt 180 gaattttttt gaacaatttt tcgtaaaaat tgtatcttta tcccggagcc tcgaaggaaa 240 gaaaaaccgt tctttgcttt gactttgatg acaaattttc agttaaaatg gattggtcgt 300 acctatccaa taatggaata tggattatga ctgactcgct attcactcgg ttttggggtc 360 ataatcatta tgtaggagag atggccgagt ggttcaaggc gtagcattgg aactgctatg 420 taggcttttg tttaccgagg gttcgaatcc ctctctttcc gtaccttcgc ttaattcacc 480 aattttacta acaacaaggg ctcaaatagc attggatacc attattccaa cagctagacc 540 cttctttgat ctaaagatat agattctcaa ttcctaattg ctgtgacgcg taaaatagaa 600 tactaaaaaa taatcataat caaaatactg gaaagaaaag aatagacaag gaatgaaaat 660 agatccttgg tctatgatac aaaaatgggg gaaatctaga tcaaactcgg attgatcgta 720 cttaacttac ttaaccttgg gttaatttac ttcgcctaaa gggaagaaat ttttgcgaac 780 ccttggtttt a 791 <210> 41 <211> 568 <212> DNA <213> Solanum nigrum <400> 41 atcatcctaa tatctttccc ttaattattc tattcctgac agtgaaattt ttgcgaaata 60 ttggatattt tgatagcaaa ggagttcttt cgtctcaaaa tctgaataat attcattact 120 taaagtggtt ctttcgatca ttcatcgaaa ggagacactt gattttgaat ttgaccaatt 180 gagatatcag gaaacaatat tcttaatttc ttcattcgaa gtgaattctt agcctatttc 240 tgtattcttt ctagattcaa agactaacca caaaatcaca aagaaaatag attcataagt 300 tctagacctt gtataaaact catgtgtgta agaaatattc gatcgcatag agtgtacgaa 360 tgggttgatt aacaattcac agacgaaaaa atggcaaaaa agaaagcatt cactcccctt 420 ttctatcttg catctatagt atttttgccc tggtggattt ctttctcagt taataaatgt 480 ctggaatctt gggttactaa ttggtggaat actgggcaat ccgaaatttt cttgaataat 540 attcaagaaa agagtcttct agaaaaat 568 <210> 42 <211> 579 <212> DNA <213> Solanum tuberosum <400> 42 atcatcctaa tatctttccc tcaattattc tattcctgac tatgggtaat cagtgaaatt 60 ttttcgaaat attggatatt ttgatagcaa aggagttctt tcgtctcaaa atctgaataa 120 tattcattac ttaaagtggt tctttcgatc attcatcgaa aggatacact ttatttttaa 180 tttgaccaat tgagatatca ggaaacaata ttctaaattt cttcattcga agtgaattct 240 tagcctattt ctgtattctt tctagattca aagactaacc acaaaatcac aaagaaaata 300 gattcataag ttcgatacct tgtataaaac tcatgtgtgt aagaaatatt cgatcgcata 360 gagtgtacga atgggttgat taacaattta cagacgaaaa aatggcaaaa aagaaagcat 420 tcactcctct tttctatctt gcatctatag tatttttgcc ctggtggatt tctttctcag 480 ttaataaatg tctggaatct tgggttacta attggtggaa tactgggcaa tcccaaattg 540 tcttgaataa tattcaagaa aagagtcttc tagaaaaat 579 <210> 43 <211> 650 <212> DNA <213> Solanum nigrum <400> 43 aaaaaaatga aattatgaaa actcctcgaa atagaaagaa agtcaaattt gtctaaatac 60 tagacataag gaagcggggg ataaatgcga ggaagaaaaa attataggag gggttatttg 120 tcttcctagt cttcgacaca agaaaggggt gtagaaaaat ccttttttct tgtgtcgaaa 180 cgaaagagta atgatttttg atcctgtttg ttaaaaattc ctagtcttgg tttcaatttt 240 tccagatgta tcagaaaccc tacgcccacc cactttacat ataatatacc tactggtgga 300 caaacaaaac aaaaaaagag aggaaatttt attaattaac taaaacttct tcaatcaact 360 tatcttataa aaaatttgat gatgaaatag gaaaacaata aaaaataaat agagtaatgt 420 aatatagaga gtaaggttct acattagatt agtatagaaa ggatttgcac gctatctaat 480 atatgatagc agccaagaaa ttgagtgatt ccttctttct tccaacttag aaagtaccga 540 taaatactat catataaaaa gaagaggtgg tctgactaac tcaatgaagt gaatttttca 600 aaaacatgat cagaaaaatg gagtttttaa aaagaaaaag aaatccattt 650 <210> 44 <211> 891 <212> DNA <213> Solanum tuberosum <400> 44 aaaaaaatga aattatgaaa actcctttgt cttatttata ctcttcttca aaatctacat 60 actatgtggt acaagggatt cccagcatct cgtagaaaaa gagtatgtaa tgtagatttt 120 gaagaagagt atttggcttt catttatttt gatttagttt tttttaattg gagtagtgta 180 actatgttac tattgccaga tttcactgcc ataaaacgta tcaatagttt tctattctaa 240 atagaaagaa agtcaaattt gtctaaatac tagacataag gaagcggggg ataaatgcgg 300 ggaagaaaaa attctagcag ggattatttg tcttcctagt cttcgacaca agaaaggggt 360 gtagaaaaat ccttttttct tgtgtcgaaa cgaaagagta atgattcttg atcctgtttg 420 ttaaaaattc ctagtcttgg tttcaatttt tccagatgta tcagaaaccc tacacctacc 480 cccttacata taatatatga attggtggac aaacaaaaca aaaaagagag gaaattttat 540 taattaaata aaacttcttc aatcaactta tcttataaaa aatttgatga tgaaatagga 600 aaacaataaa aaataaatag agtaatgtaa tatagagagt gtaatataga gagtaaggtt 660 ctacattaga ttagtataga aaggatttgc acgctatcta atatatgata gcagccaaga 720 aattgagtga ttccttcttt cttccaactt tgaaagtact ggaaagtacc gatagatact 780 atcatataaa aagaagaggt ggtctgacta actcaatgaa gcgaattttt caaaaacatg 840 ctcagaaaaa tgagaaaaat ggagtttttg aaaagaaaaa gaaatccatt t 891

Claims (10)

1. 서열번호 1 및 2로 표시되는 염기서열로 이루어진 프라이머 세트를 포함하는, Solanum tuberosum, Solanum candolleanum, Solanum kurtzianum 및 Solanum pinnatisectum으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 가지속(Solanum sp.) 식물과 까마중(Solanum nigrum)을 구별하기 위한 프라이머 세트로,
   상기 프라이머 세트는 엽록체 유전자들 사이(intergenic region)에 존재하는 삽입/결실(Insetion/Deletion) 부위를 특이적으로 검출하는 것을 특징으로 하는 프라이머 세트.
2. 제1항에 있어서,
   상기 프라이머 세트는 서열번호 3 및 4; 서열번호 5 및 6; 서열번호 7 및 8; 서열번호 9 및 10; 서열번호 11 및 12; 서열번호 13 및 14; 서열번호 15 및 서열번호 16; 서열번호 17 및 서열번호 18; 서열번호 19 및 서열번호 20; 서열번호 21 및 서열번호 22; 서열번호 23 및 서열번호 24; 서열번호 25 및 서열번호 26; 서열번호 27 및 서열번호 28; 및 서열번호 29 및 서열번호 30으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 프라이머 세트를 더 포함하는 것인, Solanum tuberosum, Solanum candolleanum, Solanum kurtzianum 및 Solanum pinnatisectum으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 가지속(Solanum sp.) 식물과 까마중(Solanum nigrum)을 구별하기 위한 프라이머 세트.
3. 삭제
4. 삭제
5. i) 대상 시료에서 게놈 DNA를 분리하는 단계;
   ii) 상기 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 서열번호 1 및 2로 표시되는 염기서열로 이루어진 프라이머 세트를 이용하여 PCR(polymerase chain reaction)을 수행하는 단계; 및
   iii) 상기 PCR 산물을 동정하는 단계; 를 포함하는, Solanum nigrum, Solanum tuberosum, Solanum candolleanum, Solanum kurtzianum 및 Solanum pinnatisectum으로 이루어진 가지속(Solanum sp.) 식물로부터 까마중(Solanum nigrum)을 구별하는 방법으로,
   상기 프라이머 세트는 엽록체 유전자들 사이(intergenic region)에 존재하는 삽입/결실(Insetion/Deletion) 부위를 특이적으로 검출하는 것을 특징으로 하는, 방법.
6. 제5항에 있어서,
   상기 프라이머 세트는 서열번호 3 및 4; 서열번호 5 및 6; 서열번호 7 및 8; 서열번호 9 및 10; 서열번호 11 및 12; 서열번호 13 및 14; 서열번호 15 및 서열번호 16; 서열번호 17 및 서열번호 18; 서열번호 19 및 서열번호 20; 서열번호 21 및 서열번호 22; 서열번호 23 및 서열번호 24; 서열번호 25 및 서열번호 26; 서열번호 27 및 서열번호 28; 및 서열번호 29 및 서열번호 30으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 프라이머 세트를 더 포함하는 것인, Solanum tuberosum, Solanum candolleanum, Solanum kurtzianum 및 Solanum pinnatisectum으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 가지속(Solanum sp.) 식물과 까마중(Solanum nigrum)을 구별하는 방법.
7. 제6항에 있어서, 상기 검출 방법은 상기 서열번호 1 및 2; 서열번호 3 및 4; 서열번호 5 및 6; 서열번호 7 및 8; 서열번호 9 및 10; 서열번호 11 및 12; 및 서열번호 13 및 14;로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 프라이머 세트로 증폭된 PCR 산물인 경우 까마중으로 판별하고, 상기 서열번호 15 및 서열번호 16; 서열번호 17 및 서열번호 18; 서열번호 19 및 서열번호 20; 서열번호 21 및 서열번호 22; 서열번호 23 및 서열번호 24; 서열번호 25 및 서열번호 26; 서열번호 27 및 서열번호 28; 및 서열번호 29 및 서열번호 30으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 프라이머 세트로 증폭된 PCR 산물인 경우 가지속 식물로 판별하는 것을 특징으로 하는, Solanum tuberosum, Solanum candolleanum, Solanum kurtzianum 및 Solanum pinnatisectum으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 가지속(Solanum sp.) 식물로부터 까마중(Solanum nigrum)을 구별하는 방법.
8. 제6항에 있어서, 상기 대상 시료는 Solanum tuberosum, Solanum candolleanum, Solanum kurtzianum 및 Solanum pinnatisectum으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 가지속(Solanum sp.) 식물과 까마중(Solanum nigrum)의 체세포 융합체인 것을 특징으로 하는 방법.
9. 제1항의 프라이머 세트를 포함하는 Solanum tuberosum, Solanum candolleanum, Solanum kurtzianum 및 Solanum pinnatisectum으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 가지속(Solanum sp.) 식물과 까마중(Solanum nigrum)을 구별하기 위한 키트.
10. 제1항의 프라이머 세트를 포함하는 Solanum tuberosum, Solanum candolleanum, Solanum kurtzianum 및 Solanum pinnatisectum으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 가지속(Solanum sp.) 식물과 까마중(Solanum nigrum)을 구별하기 위한 조성물.

Images