CN115341048B - 一种与苹果属植物根皮苷有无性状相关的分子标记及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种与苹果属植物根皮苷有无性状相关的分子标记及应用。具体而言，本发明提供了一种与苹果属植物根皮苷有无性状相关的InDel分子标记，还提供与苹果属植物根皮苷有无性状相关的上述InDel分子标记在苹果属根皮苷分子标记辅助育种中的应用，本发明在苗期就可以判断苹果属植物根皮苷有无这一性状，大副节省育种时间和占地面积。
Description
技术领域
本申请属于生物分子检测及育种领域，具体涉及一种与苹果属植物根皮苷有无性状相关的分子标记及应用。
背景技术
根皮苷属于类黄酮中的二氢查尔酮类化合物，由根皮素A环2'位葡萄糖基化生成。根皮苷主要存在于蔷薇科苹果属大部分植物中。根皮苷味苦，但其同分异构体三叶苷(由根皮素A环4'位葡萄糖基化生成)则是天然的甜味剂，在食品加工领域应用前景广泛。目前，在大多数含有三叶苷的苹果属种质资源的叶片、花瓣、果实等组织器官中，经常伴随含有大量的根皮苷。在利用这些种质资源进行三叶苷分离提纯过程中，根皮苷作为杂质，不容易被有效分离去除，极大的影响了三叶苷分离纯化效率。因此，如果选育高三叶苷含量而根皮苷含量极低的苹果新品种或新种质，则有利于在较低的成本下进行三叶苷的分离纯化。然而，由于根皮苷普遍存在于大部分苹果属植物中，如果利用传统的杂交育种选育不含根皮苷的苹果新品种或新种质，亲本及杂交后代筛选方式时间长，占地面积大，育种周期很长。
分子标记辅助选择育种(marker assisted selection,MAS)是利用与目标基因紧密连锁的分子标记来鉴定不同个体的基因型，进而辅助选择育种，加快育种效率。因此，该技术被广泛应用于作物遗传改良和品种选育中。如果利用DNA分子标记对根皮苷有无这一性状进行早期选择，对于苹果属植物根皮苷育种而言，可以大幅提高亲本和杂交后代的筛选效率，进而提高育种效率，意义重大。
有鉴于此，提出本发明。
发明内容
本申请拟解决的技术问题是；现有技术存在的苹果属根皮苷育种亲本及杂交后代筛选方式时间长，占地面积大，育种周期长的等问题。为解决上述问题，本申请提供一种与苹果属植物根皮苷有无性状相关的大片段插入缺失(InDel)分子标记。
在前期研究结果表明，调控苹果属植物根皮素发生A环2’位糖基化生成根皮苷的基因是PGT1(Genebank登录号NM_001328723.1)；并且，PGT1的氨基酸序列在有无根皮苷的苹果属种质资源中没有明显区别。这表明，苹果属植物根皮苷的合成即根皮苷有无这一性状与PGT1基因的编码区不相关。本申请研究结果表明，苹果属植物根皮苷的合成即根皮苷有无这一性状受单基因调控，且是受PGT1顺式作用原件即启动子区域的调控。
因此，本发明具体提供如下技术方案：
本发明首先提供一种与苹果属植物根皮苷有无性状相关的InDel分子标记，所述InDel分子标记位于寒富苹果参考基因组(HFTH1.genome)15号染色体上51836264处，对应PGT1起始密码子ATG上游158bp至上游基因LEA之间的PGT1启动子区域3555bp的大片段缺失，具体序列为如下任一：
1)如SEQ ID NO.4所示DNA序列；
2)包含SEQ ID NO.4所示DNA序列；
3)与SEQ ID NO.4具有至少80％，优选至少90％，更优选至少95％同源性的DNA序列，且序列来源于苹果属植物。
本发明还提供一种与苹果属植物根皮苷有无性状相关的InDel分子标记的应用：
1)鉴定苹果属植物根皮苷性状；
2)预测苹果属植物根皮苷性状；
3)在苹果属根皮苷分子标记辅助育种中的应用。
本发明还提供一种检测上述的InDel分子标记的试剂在鉴定或预测苹果属植物根皮苷性状中的应用，或在苹果属根皮苷分子标记辅助育种中的应用。
进一步的，试剂种类包括但不限于pcr类试剂、基因芯片类试剂或测序试剂。
在一些实施方式中，所述试剂包含SEQ ID NO.5和6所示引物对。
本发明还提供一种用于扩增检测上述InDel分子标记的引物对,所述分子标记的正向引物位于寒富苹果参考基因组(HFTH1.genome)15号染色体上51836264(即PGT1基因起始密码子ATG(51836106)上游158bp)的上游，反向引物位于参考基因组(HFTH1.genome)15号染色体上51836264的下游；
优选的，所述分子标记的正向引物位于参考基因组(HFTH1.genome)15号染色体的51842406-51841914，位于基因PGT1起始密码子ATG上游5808-6300bp；反向引物位于参考基因组15号染色体的51836264-51834654，位于基因PGT1起始密码子上游158bp-下游1452bp；
更优选的，所述分子标记的正向引物位于参考基因组(HFTH1.genome.)15号染色体的51841991-51841961，位于基因PGT1起始密码子ATG上游5855-5885bp；反向引物位于参考基因组15号染色体的51835648-51835618，位于基因PGT1起始密码子下游458-488bp.所述引物对序列如SEQ ID NO.4和5所示。
上述引物对均用于验证PGT1起始密码子ATG上游158bp至上游基因LEA(胚胎发育晚期丰富蛋白)之间的PGT1启动子区域3555bp的大片段缺失。
本发明还提供一种苹果属植物根皮苷性状检测试剂盒，包含上述任一所述的引物对。
本发明还提供一种预测苹果属植物根皮苷性状有无的方法，利用上述引物对或试剂盒对苹果属植物进行检测。
本发明还提供一种预测苹果属植物根皮苷性状有无的方法，以苹果属植物的基因组DNA为模板，以上述引物对为扩增引物，进行PCR扩增，对扩增产物进行电泳检测，若能够扩增出上述InDel分子标记，则待测苹果属植物含有根皮苷；
在一些实施方式中，采用SEQ ID NO.4和5所述引物对进行扩增，鉴于其扩增片段包含了部分PGT1和LEA等序列片段，实践中若在6000-8000bp之间出现扩增条带，则待测苹果属植物含有根皮苷；或在1000-1500bp左右出现条带则待测苹果属植物不含有根皮苷；在一些具体针对特定苹果属品种的实施方式中，若单独出现6374bp或同时出现6374bp和1139bp两个条带，则待测苹果属植物含有根皮苷；若只出现1139bp一个条带，则待测苹果属植物不含有根皮苷。
与现有技术相比，本发明至少具有如下优势：
1)本发明发现一种全新的苹果属根皮根分子标记，可应用在苹果属根皮苷分子标记辅助育种中。
2)本发明公开的苹果属植物根皮苷有无性状相关的PGT1顺式作用原件区域的标记，为苹果属植物根皮苷特异种质或品种选育过程中的分子标记辅助选择提供一个新的分子标记，选择携带这种PGT1顺式作用原件区域突变标记的苹果属植物作为亲本进行杂交育种，然后获得杂交后代，克隆获得杂交后代中的PGT1顺式作用原件区域，研究其多态性；研究PGT1顺式作用原件区域标记与苹果属植物根皮苷有无性状的关系，从中筛选出含PGT1顺式作用原件区域的标记。基于PGT1顺式作用原件区域的分子标记可以很好地解决苹果属植物根皮苷育种过程中的生产占地面积大、选育周期长等上述问题，大幅提高育种选择效率及准确性，适于产业推广。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1：利用InDel分子标记在山定子(含有根皮苷)和变叶海棠(不含有根皮苷)中进行包括PGT1启动子在内的大片段基因序列多态性克隆。
图2：利用InDel分子标记在山定子，变叶海棠中克隆包括PGT1启动子在内的大片段基因序列与寒富参考基因组(含有根皮苷)中该InDel分子标记间的基因序列比对结果。图中，黑色线条标记的序列为PGT1的CDS区域，黑色双线条标记的为PGT1起始密码子ATG的位置，灰色线条标记的为变叶海棠与参考基因组相比，共有的158bp的序列。
图3：利用InDel分子标记对25个苹果原生种资源的鉴定结果。图中1-3为不含有根皮苷的苹果原生种，M为DNA Marker,4-25为含有根皮苷的苹果原生种。
图4：利用InDel分子标记对杂交后代的鉴定结果。图中1-14为不含有根皮苷的杂交后代；15-20为含有根皮苷的杂交后代；21为母本，冬红海棠，含有根皮苷；22为父本，绚丽海棠，含有根皮苷；M为DNA Marker。
具体实施方式
下面将结合附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
以下术语或定义仅仅是为了帮助理解本发明而提供。这些定义不应被理解为具有小于本领域技术人员所理解的范围。
除非在下文中另有定义，本发明具体实施方式中所用的所有技术术语和科学术语的含义意图与本领域技术人员通常所理解的相同。虽然相信以下术语对于本领域技术人员很好理解，但仍然阐述以下定义以更好地解释本发明。
如本发明中所使用，术语“包括”、“包含”、“具有”、“含有”或“涉及”为包含性的(inclusive)或开放式的，且不排除其它未列举的元素或方法步骤。术语“由…组成”被认为是术语“包含”的优选实施方案。如果在下文中某一组被定义为包含至少一定数目的实施方案，这也应被理解为揭示了一个优选地仅由这些实施方案组成的组。
在提及单数形式名词时使用的不定冠词或定冠词例如“一个”或“一种”，“所述”，包括该名词的复数形式。
本发明中的术语“大约”、“大体”表示本领域技术人员能够理解的仍可保证论及特征的技术效果的准确度区间。该术语通常表示偏离指示数值的±10％，优选±5％。
此外，说明书和权利要求书中的术语第一、第二、第三、(a)、(b)、(c)以及诸如此类，是用于区分相似的元素，不是描述顺序或时间次序必须的。应理解，如此应用的术语在适当的环境下可互换，并且本发明描述的实施方案能以不同于本发明描述或举例说明的其它顺序实施。
本发明通过研究发现，苹果属植物根皮苷的合成即根皮苷有无这一性状受单基因调控，且是受PGT1顺式作用原件即启动子区域的调控。
本发明所述的InDel分子标记是通过通过比较山定子(含有根皮苷)和变叶海棠(不含有根皮苷)的幼嫩叶片中的PGT1顺式作用原件启动子区域的基因差异获得。
经与参考基因组比较分析，本发明所述的与苹果属植物根皮苷有无性状相关的InDel分子标记位于寒富苹果参考基因组(HFTH1.genome)15号染色体上51836264处，对应PGT1起始密码子ATG上游158bp至上游基因LEA之间的PGT1启动子区域3555bp的大片段缺失，其核心序列为如下任一：1)如SEQ ID NO.4所示DNA序列；2)包含SEQ ID NO.4所示DNA序列；3)与SEQ ID NO.4具有至少80％，优选至少90％，更优选至少95％同源性的DNA序列。可以理解，但凡来源于苹果属植物，大体包含了SEQ ID NO.4的序列理论上都属于本发明的范畴。比如，鉴于物种序列差异，即便同属于苹果树的物种，其在SEQ ID NO.4两端或序列4内部都有可能存在个别碱基差异(我们定义为SEQ ID NO.4衍生序列，简称衍生序列)，在本发明证实其为与苹果属植物根皮苷有无性状的InDel分子标记情况下，本领域可以预期，这些衍生序列同样可以用于苹果属植物根皮苷性状鉴定。
本发明的与苹果属植物根皮苷有无性状相关的InDel分子标记的应用，包括但不限于：1)鉴定苹果属植物根皮苷性状；2)预测苹果属植物根皮苷性状；3)在苹果属根皮苷分子标记辅助育种中的应用；4)调控苹果树植物的PGT1基因表达等。
本发明的检测上述的InDel分子标记的试剂在鉴定或预测苹果属植物根皮苷性状中的应用，或在苹果属根皮苷分子标记辅助育种中的应用。可以理解，但凡能够用于检测上述分子标记的试剂种类都属于本发明范畴，包括但不限于pcr类试剂、基因芯片类试剂或测序试剂等。
而本发明的用于扩增检测上述InDel分子标记的引物对可以是任意能够扩增出上述核心InDel分子标记的引物对，只要其满足能够用于验证PGT1起始密码子ATG上游158bp至上游基因LEA(胚胎发育晚期丰富蛋白)之间的PGT1启动子区域3555bp的大片段缺失的都属于本发明范畴。因为，本发明的引物对可以是如下任一：所述分子标记的正向引物位于寒富苹果参考基因组(HFTH1.genome)15号染色体上51836264(即PGT1基因起始密码子ATG(51836106)上游158bp)的上游，反向引物位于参考基因组(HFTH1.genome)15号染色体上51836264的下游。而考虑到引物设计的难以性问题，本发明的所述分子标记的正向引物位于参考基因组(HFTH1.genome)15号染色体的51842406-51841914，位于基因PGT1起始密码子ATG上游5808-6300bp；反向引物位于参考基因组15号染色体的51836264-51834654，位于基因PGT1起始密码子上游158bp-下游1452bp；在一些更优选的，如本发明的具体实施例中提及，所述分子标记的正向引物位于参考基因组(HFTH1.genome.)15号染色体的51841991-51841961，位于基因PGT1起始密码子ATG上游5855-5885bp；反向引物位于参考基因组15号染色体的51835648-51835618，位于基因PGT1起始密码子下游458-488bp，具体序列如SEQID NO.5和6所示。
本领域可以理解，在确定了相应的分子标记位置和序列的情况下，设计并合成相应能够扩增的引物对本领域技术人员来说并不困难。
本发明的预测苹果属植物根皮苷性状有无的方法，可以是任意通过检测上述InDel分子标记有无的生物学方法。比如，这种方法可以是pcr方法：是以苹果属植物的基因组DNA为模板，以上述引物对为扩增引物，进行PCR扩增，对扩增产物进行电泳检测，若能够扩增出上述InDel分子标记，则待测苹果属植物含有根皮苷；在一些具体实施方式中，采用SEQ ID NO.4和5所述引物对进行扩增，鉴于其扩增片段包含了部分PGT1和LEA等序列片段，实践中若在6000-8000bp之间出现扩增条带，则待测苹果属植物含有根皮苷；或在1000-1500bp左右出现条带则待测苹果属植物不含有根皮苷；在一些特定苹果属比如包括寒富苹果属在内的的实施例中，若单独出现6374bp或同时出现6374bp和1139bp两个条带，则待测苹果属植物含有根皮苷；若只出现1139bp一个条带，则待测苹果属植物不含有根皮苷。
下面为具体的实施例。实施例以苹果属植物根皮苷有无性状相关的PGT1基因标记及其辅助育种技术的建立为例，对本发明的技术内容进行详细说明。
实施例1苹果属植物PGT1启动子序列多态性分析
本实施例具体步骤如下：
1、基因组DNA提取：
选取两个苹果原生种品种：山定子(含有根皮苷)和变叶海棠(不含有根皮苷)的幼嫩叶片，利用植物基因组提取试剂盒(TianGen)提取基因组DNA。
2、PGT1启动子克隆：
利用设计合成的正向引物
和反向引物PGT1pro-Indel-R；5'-CTCGGTGGTTTTGGTTTGCTCATCGATCTTG-3'(SEQ ID NO.6)进行包括PGT1启动子在内的大片段基因序列的克隆。
PCR反应体系为20ul:
PCR扩增程序如下：
PCR扩增产物用1％琼脂糖凝胶进行电泳，用DNA纯化试剂盒(TIANgel Midipurification Kit，天根生物)回收目的片段。将回收目的片段连接到pMD19-T载体上(pMD19-T vector cloning kit,TaKaRa),并转化到DH5α大肠杆菌感受态细胞中，在氨苄青霉素的平板上过夜培养并挑取单克隆，进行菌液PCR筛选鉴定。对筛选出来的阳性克隆进行测序。
通过琼脂糖凝胶电泳，发现在山定子中克隆得到的包括PGT1启动子在内的片段大小与参考基因组大小一致，在6000-8000bp之间，但在变叶海棠中克隆得到的包括PGT1启动子在内的片段大小只有1000-1500bp(图1)。
测序结果发现在山定子中克隆得到的包括PGT1启动子在内的基因序列大小为7450bp(SEQ ID NO.1)；而在变叶海棠中克隆得到的包括PGT1启动子在内的基因序列大小为1139bp(SEQ ID NO.2)，具体参见图2。
经分析，与如下寒富参考基因组序列SEQ ID NO.3比较可以看出，上述序列仅CDS区域及ATG上游158bp基因序列一致，随后的序列则完全比对不上。因该引物对克隆的序列中包括2172bp的LEA基因序列(SEQ ID NO.3中斜体部分)，完整的3713bp PGT1启动子序列(SEQ ID NO.3中阴影部分)以及PGT1 488bp的CDS区域(SEQ ID NO.3阴影之后的序列)。因而，对于PGT1启动子区域，变叶海棠与参考基因组相比，除ATG上游158bp序列相同，其上游出现了一个3555bp的大片段缺失；该大片段缺失即为可以用于区分两种启动子的核心结构区域(对应SEQ ID NO.3中用阴影加粗的部分)，该3555bp的大片段缺失即定义为本发明的InDel序列SEQ ID NO.4。
寒富参考基因组中引物PGT1pro-Indel-F/R之间的基因序列SEQ ID NO.3(6374bp)
实施例2苹果属植物根皮苷有无与PGT1启动子多态性关联性分析
为进一步确定苹果属植物中根皮苷有无的性状与PGT1启动子序列多态性的关系，收集国内外25个苹果属原生种(表1)，采取幼嫩叶片，进行基因组DNA提取。利用该引物对在25个材料中克隆包括PGT1启动子在内的大片段并进行琼脂糖凝胶电泳。结果如图2，发现在含有根皮苷的原生种(4-25)中，克隆得到的PGT1启动子大小均与参考基因组(含有根皮苷)大小一致。由于品种的差异性，不同品种中的包括PGT1启动子在内的该大片段大小有一定差异，但都能得到大小均位于6000-8000bp之间的条带。而在不含有根皮苷的原生种(1-3)中，克隆只能得到包括PGT1启动子在内的大小位于1000-1500bp之间的条带，无大小位于6000-8000bp之间的条带。因此该结果表明，苹果属植物野生种质资源含有根皮苷这一性状与具有正常的PGT1启动子(能够克隆得到大小位于6000-8000bp之间的条带)密切相关，而不含有根皮苷的性状与PGT1启动子中大片段缺失(克隆只能得到包括PGT1启动子在内的大小位于1000-1500bp之间的条带)密切相关。
表1：25个苹果原生种的名称及根皮苷有无性状的具体信息
实施例3利用PGT1启动子多态性进行杂交后代有无根皮苷的性状筛查
为进一步明确PGT1启动子序列多态性是否在遗传群体中与根皮苷有无紧密连锁，利用冬红海棠(含有根皮苷)和绚丽海棠(含有根皮苷)进行杂交后，构建F1代遗传群体。对650个杂交后代进行幼嫩叶片的采集，利用高效液相色谱仪对每个单株进行根皮苷有无性状鉴定，发现在遗传群体中共有324个单株含有根皮苷，326个单株不含有根皮苷。根皮苷性状分离比为1:1，符合孟德尔遗传规律。
利用实施例1中的分子标记引物对SEQ ID NO.4和5对两个父母本和随机选择的22个杂交后代进行基因型分析。研究发现在父母本和6个含有根皮苷的后代中均克隆得到6000-8000bp和1000-1500bp两种大小的片段(杂合基因型)，而在14个不含有根皮苷的后代中仅克隆得到1000-1500bp的片段(图3)。说明在遗传群体中PGT1启动子序列多态性与根皮苷有紧密连锁。
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。
序列表
<110> 西北农林科技大学
<120> 一种与苹果属植物根皮苷有无性状相关的分子标记及应用
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 7450
<212> DNA
<213> 山定子(malus baccata)
<400> 1
cagagggaag aaggtcatca gctgcagcat gctggggatc aggaagttat tgtgaaaaat 60
gggcacaggg tggttgtcgt ggagtacgac gagcatggcc accacaaaac caaagtctca 120
atctcgccgg aacacggcca tccaccccga agagagtctt cttccttatc cgaaaatgaa 180
gtatcgtcgc cctcgaagat ttctagggcg ttcgacaact ccatggaaaa catcaaagaa 240
gccgcctctg gtcttgccaa ctttggccaa ggccatggcg agggtcacag tccgaaagag 300
ctcatgtgcg atgcctacgg aagatgcaag cacaaaattg caagtgctat cgagaccaaa 360
aaggagattt gtaaggagac cgcacacggg gcaaaagagg cggcccataa ggtaggtgag 420
gcggcgcaca gggcaggcga ggcggtcgaa aatatgtacg agagggcgaa agatacggtg 480
tcggataagg cgcacgaggt tgaggaaact gctagagacc caatggaaaa agcaaagaac 540
gcctccaaga cggccaagga catgggggac acgttggcgg aaaaagcaaa agaagctaaa 600
gagaccgagg aggaagcagc ttttaaggtg aaggctggag cggaggagct caaaagtgac 660
ttggctgaaa aagcgaaaga agcgaaagag actgcggagg aagcagctgg taaggttaag 720
gctggagcgg aggagctcaa aagtgggacc cagaagaggc tgcatcagtc gagggacaaa 780
gtaagagagt tctggtacgg tgcattcagg tccatagcat cgggtgactt actggagggt 840
ttgatgtccg tggcgcatct gttcgggctg gctacggctt acggaatgtg catgtggatt 900
acgttcgtgt cgagccacgt gttggcgtgg agtctgccgc cgcagcagtt tgggatggta 960
cagagcaaga tttacaaggt ttatttcaag gccatggcgt atagtgttgg gatggcattg 1020
ttgggtcatc tgtggagaca tagaagctcg ttgtttcgag ggaaggccgc ggatatgttg 1080
cagaactata atcttatcgc tgctctttcc atgatcttat tcaatatgat gtacttggag 1140
cctcgatcca ctaaggtaat cgtcaacaaa aaattatata gaatcatata taagttgcat 1200
gtctggtgtt catatactat attaatggca tgcttgtatc gaccactagc tttttattat 1260
tttgtatttc ggaatcacgg aacaattagt gctctgatat tcttatgatt ttatcctgat 1320
gtagattgtt ttgatataat tactttgttt atgctgtgat atcgttcgga ggattttgtc 1380
ttccagcaga tttggctctg gtgtgtgcca ttccctgatc cccttcacag gcatgattgt 1440
ttatcgtcaa tacgttcttg gtcatctgtg tttatagttc gacatgagca cttgaaacaa 1500
ttcgcgagtc tggaacccta tatttttcac agtttgtgca ttataattgg gggccatcag 1560
catagttcat tgcgttgaag gtctttctgc ttttctatta ttgttactga tacaatgaca 1620
aggatttcta tagctactag gcatacttta aaattgcctt gtatgttaat tactcggcgt 1680
tttggatgga atttggctgt ccgtgtttcc ttgtttttta gcagctctgc taaactcgcc 1740
ttcattttca gtcttgttgc agtgttccaa gtaatttcat ttatgctctt gcgcgtgtgc 1800
ttggtccgtg tgtatttgct ctcattgcat agaatgtgcg tgcaggtgat gtttgagaga 1860
atgaagatcg agaaggaaga aggaagagga agagagagag tacatgttga tgccagaatc 1920
agcagggagg ctggccagca gcagcagcag cagactacca ctgaaggcga accctcaatc 1980
acgacgcccc cacaagtctc gaggagggag caacaggtgg ttgagcctga tattgagagg 2040
cttaacgaga tgcgtgagag gctgaagaag ctaaatacat gttcgtcgtt cctcaacatc 2100
gcgtcactaa tggctcttag ctggcatctt gtgtatcttg cccagcacct ccccagttca 2160
tgctgttgat aaggacttgg attcggagaa tctctttgct tgtcgcagat aattatgtgt 2220
tttaatgctg ttcttttttg tgtttgtgaa gttgatattt ttggtaactt tcgatatgat 2280
acttgtacca tagctgtaat gaaagatatg gagtcagact gctgcacttg ttcttatgtg 2340
aagttacatg aattaacgct ggctacatct tctgtgtttt tccttttttc gcctggatga 2400
gggtatccga tccttcatct tagtccagat tctaacagac tgcgtgtgaa tgaatcaaca 2460
ccctaaacta acaaggctct ccgcactgcg ggggttgggt agcgtctatc gtaggcagtc 2520
ttacttcact tttgctaatg ggttgtttca acatatttta ccgaggagca acatgttcgt 2580
aacgtcaagg ctcactctca tttagaatca ttcttggatc gatcccgttt agtaaccaaa 2640
taaaagatgt tgagatgtgt cattgaccaa aagaatgctt gttttgctga accaaaaaat 2700
tggctcatgt gtaaggaatg caaacatcaa agaatctgta ccttctcagt gaaccttcta 2760
ctgtaaaaaa tctaatagaa tctgtcaagc attttgaaat atgcctacaa gaaaggacta 2820
gccttcgatc atttgaagcc gttagttctt ccatagaagg tgacgaagct tcggaatgaa 2880
catgggcata ctgtgtgatc ttacgagtga ttcgcccttg taagccgtta aaagtgtcat 2940
aatactgttt aaattacgca tcgaagcgaa aattatctta acctaaaaca catttgctat 3000
gagcataact gaaagatgaa aactacgttt attcaggtaa acgaaaataa aagtacattt 3060
gggacaatgc actatgctct ctgctcacaa agtttatttt gaattggttg aattactaca 3120
cctccggaca ccaaattagc cttggttgtc gtcaacgact cccaccctct tatcagaatc 3180
aactcccgca tcaacttggt tgcgccccac gtaacaacca agatacaaca gaagattttc 3240
ataaacttaa aactcgtaga ctatgataac aaacaacaac aaaatcataa cctcaagcaa 3300
cataaaccag accatcgttg ccgccacatc ttatggccct aaataaaagt tgagacaatc 3360
gtaattaaac taagtcacag ttgtgtgaat ttaacaattg ttatccacaa atgttttatt 3420
caattcgtgg ctaaaaagaa agatacgtgg cacatctctt gaccaatcgt aatactatat 3480
tagaaaaaca agataaagaa taaaaataac acataaaaag acaaacaaat cgtggtcaac 3540
ttccttgtcg ttttgattga ctagtgtttt cctcttaaca aattagttgg ggcgcacctg 3600
ccattcacca acattatttc tctccagttg agtttctgtt ctcaatcact tcaaattgcg 3660
gcacaaaaag cgatacacaa gcaaatcata acaaagtcta aaatatcgat aatatcagaa 3720
atatcgtaat agaaaaatac gaaaatttca atagaaatat cgagatatta tcgatatcaa 3780
taaaaattga ataaaaacca cgaaaattgt aagaaaaact tggaaatttt tattgaaact 3840
ttgcaggatg tttatttagt caattatcta ttagtttatc acaaaaaatt agaaggaaat 3900
gtattacatg atggatttaa ccgatttaag ttgattatat agcgagctag caaacattgt 3960
gagtgtaaaa aatatgtagt aattaatgaa agaagtttaa acacaccata atcatttata 4020
tataatgaat tagtacaata ttttacactt tatacattcc atggtaagat atatgagtca 4080
tttagtacca catagagttc ctatcacggt ctaaaatatc gatgatatcg gaaatatcag 4140
tagtccaaaa acacgaaaat tttgatggaa atattaagat aatatcgata ttttagacct 4200
tgatcataac caccaccagc agtagcagct gccgccatgg gagacgccat tgtgctgtac 4260
gcagctccgg ggatggggca catcatgttt tgattatggg taataagcag aagttacaag 4320
aactttggaa catggttcga gccactcata tccgcaatta aaaataaaaa aatattttat 4380
tattttataa acaaattaat attttaatat gaattgcctg aattatttag tttagaggtg 4440
aaaatgcatt ttgatagtta ctgttcactg cctatagtcc aaagataatt taggggtgga 4500
gttactctta gtaaaaaaga ttggattgga ataatttaat aattacttta aggtatatta 4560
aaaaatgaaa ataaaaaaat tgaccaactt taaatgtatg ggttatgtaa cttatgttta 4620
gttacgcttt atagaattta attttgataa tacgctcaat gtaatttaaa aatcactaac 4680
tttactttat gaaaattaaa atttgtctga ttttactatg tttttatttt ttattttctt 4740
tctgatgtgg atgggtaaaa atgtaatttc atatgtttaa tttggctaca cttcacactt 4800
catccactaa aactcaattt aatcctcact tctatagaaa ctctattagc tcttatgttt 4860
tcacattttt aattggtcga tagaactttc attacaacca atattagtat aaggcccaaa 4920
atgaacctga taaacaatag ataaagtaaa aggtcaaagt aaagtgagaa tagcaaccca 4980
agatacaaca ggagatcttt aggccatctc caaccgaggg ctggccagag ggctcgtttg 5040
agccctctag ccctccaaga ttccccaaga tattaatatt ttaatgaaca gtacagggcc 5100
atatttgcct ccgtctccaa ccgagggcca gagggccaaa gggctcgttt tagtcctgtc 5160
ataaaaaacc gtcttcaacc gagggccaaa gggccatagg accaaacata atttattatt 5220
taaatttaaa aactataaca acttaaattt aaaaacaaca acttatattt aaacactaca 5280
aattaaattt aaaaacaaca ttaacttaaa tttaaaaatt acaacgactt aaatttaata 5340
tccataatca atatcatctt catcatccgc cattgtagga gtatagtcag aggtaaacaa 5400
ttgccgccga gccataattt cttttttttt cctatcaaaa taggccttac tcattggagt 5460
gtaatccgaa gtgttccttt ccatattctt atcatccatc tcttcttgtc tttgtttggc 5520
tcgctcttca tgtctacact tcctttcttc cgcatcgcgg gcattttgct ccgccagtaa 5580
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ttagaaaata tattgaagga aatattgaga aatatattga aggaaatatt gaaaaatatt 5940
gaagaaggaa atattgcaaa tgaagtgaag aattgaaaga acttcactat atttatagaa 6000
gaaaaaaatg tttaaaataa attaaaaaaa caaaaaaacc aacggctagt aatgtttaaa 6060
ataaattaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaac aaaaaaaaaa aaaataaaaa aaaaaaaaaa 6120
aaaaaaaacc aaccaacggc tagctgactc agctagccgt tatattcaaa aacaattcaa 6180
actattagtg tcggttataa ccgacacgaa tagcagaaca attaaaaaaa aaaagaggtc 6240
ttcaatgctg tcggttttaa ccgacagcaa taggaaatca ttaaaaaaaa aaatagccag 6300
ccagtcctcc agccctccag ccctctctga tcccgtgggg ccctcccaga ttccagagcc 6360
ctctggccta gccctcggtt ggagacggtt ttagggctat tttcggccat ctggccctct 6420
ggacccttcg gttggagatg gccttacaaa cttaatcggt aggctgcaat aataaataac 6480
aaaaatactc taatctcaaa caacataaat cagaccgtcg ctgccgccac atcaaaataa 6540
ggcccaaaat gaacccgata aataacaaat aaagtaaaag gtccaaataa aatgagaata 6600
acaatccaaa atacaacgaa agatcctcac aatcttaatc agtaggctgc aataataaat 6660
aacaaaaaag actcttatct caaacagcat aaatcagata cgtggcacat ctcttgacca 6720
atcgtaacac tatagtagaa aacaagataa aaaaataaaa agacaaacaa atcatggtca 6780
acttccttgt cgttttgatt gactagagtt ttcctcctaa caaattagtt ggggcgcacc 6840
tgccattcgc caccattatt tctcttcagt tgaatttctg ttctcaaatc actttaaatt 6900
gcagtacaaa acgcgacaca caaacaaatc ataaccacca ccaccagtcg cagctgccgc 6960
catgggagac gtcattgtac tgtacgcatc tccagggatg gggcacatca tcgccatggt 7020
ggagctgggc aagttcattg tccaccgcta cggcccccac aaattctcca tcaccattct 7080
ctacacctgc ggcagcattg tcgacaccgc tagcatcccc gtctacatcc gccgcatctc 7140
ccactcccac cctttcattt ccttccgcca attccctcgc gtcaccaata atattacccg 7200
aaacataagc gtccccgcaa tcacgttcga tttcatccgc cagaacgatc ctcatgtccg 7260
cagtgccctc caagaaatct ctaaatccgc caccgttcgc gccttcatca tcgacctctt 7320
ctgcacctcc gctcttccca tagggaagga attcaacatc ccaacatact acttctgcac 7380
ttctggagcc gcaattcttg ctgctttttt gtatttgccc aagatcgatg agcaaaccaa 7440
aaccaccgag 7450
<210> 2
<211> 1139
<212> DNA
<213> 变叶海棠(malus toringoides)
<400> 2
cagagggaag aaggtcatca gctgcagcat gctggggatc aggaagtcat tgtgaaaaat 60
gggcacaggg tggttgtcgt tagacctgta aacggagagg agaagagtgc gaagagagag 120
acactgaaag tctgaaacat ttcaatatgt gagggcgaag gagtctgagt actgagatct 180
caaataaggg aaaacctgat ggttttaatt gtcaaaaacc atgggcgctg atggttttga 240
tggactggaa ggatctcaaa tatatatttt atactgaagc ttttgatgaa aaaaacaata 300
tatatatata tatattttat attgaagcat ggacataaag tggtggacgg gtgatgtgat 360
tttcatgaac tgggttctca aatatatatt ttatattgaa gcacggaccc aaagtggtgg 420
acgggtgatg tgattttgat gcactgagat cgcaaatata tattttatgt tgaagccatg 480
gagccaagta gtgttttcct cctaagaaat tagttggcgc gcacccgcca ttcaccaaca 540
ttatttctct tcagtagaat ttctgttctc aaatcacttt aaattgcagt acaaaacgcg 600
acacacaaac aaatcattca taaccaccac cgccagtcgc agctgccgcc atgggagacg 660
tcattgtact gtacgcatct ccagggattg ggcacatcgt cgccatggtg gagctgggca 720
agttcattgt ccaccgccac ggcccccaca aattctccat caccattctc tacacctgcg 780
gcagcattgt cgacaccgct agcatccccg tctacatccg ccgcatctcc cactcccacc 840
ctttcatttc cttccgccaa ttccctcgcg tcaccaataa tattacccga aacataagcg 900
tccccgcaat cacgttcgac ttcatccgcc agaacgatcc tcatgtccgc agtgccctcc 960
aagaaatctc taaatccgcc accgttcgcg ccttcgtcat cgacctcttc tgcacctccg 1020
ctcttcccat agggaaggaa ttcaacatcc caacatacta cttctgcact tctggtgccg 1080
caattcttgc tgcttttttg tatttgccca agatcgatga gcaaaccaaa accaccgag 1139
<210> 3
<211> 6374
<212> DNA
<213> 苹果(Malus domestica)
<400> 3
cagagggaag aaggtcatca gctgcggcat gctggggatc aggaagtcat tgtgaaaaat 60
gggcacaggg tggttgtcgt ggagtacaac gagcatggcc accacaaaac caaagtctca 120
atctcgccgg aacacggcca tccaccccgc acagagtctt cttccttctc cgaaaatgaa 180
gtatcgtcgc cctcgaagat ttctagggcg ttcgacaact ccatggaaaa catcaaagaa 240
gccgcctctg gtctcgccaa ctttggccaa ggccatggcg agggtcacag tccgaaagaa 300
ctcatgtgcg atgcctgcgg aaaatgcaag cacaacattg caagtgctat cgagaccaaa 360
aaggagattt gtaaggagac cgcacacggg gcaaaggagg cggcacataa ggtaggtgag 420
gcggcgcaca gggtacgcga ggcggtcgaa aatgtgtacg agagggcgaa agatacggtg 480
tcggataagg cgcacgaggt tgaggaaact gctagagacc caatggaaaa agcaaagaac 540
gcctccaaga cggccaagga catgggtgac acgttggcgg aaaaagcaaa agaagctaaa 600
gagaccgcgg aggaggcagc ttttaaggtg aaggctggag cggaggagct caaaagtgac 660
ttggctgaaa aagcgaaaga agcgaaagag actgcggagg aagcagctgg taaggttaag 720
gctggagcgg aggagctcaa aagtgggacc cagaagaggc tgcatcagtc gagggacaaa 780
ataagagagt tctggtacgg tgcattcagg tccatagcat cgggtgactt actggagggt 840
ttgatgtccg tgacgcatct attcgggctg gctacggctt acggaatgtg catgtggatt 900
acgttcgtgt cgagccacgt gttggcgtgg agtctgccgc cgcagcagtt tgggatggta 960
cagagcaaga tttacaaggt ttatttcaag gccatggcgt atagcgttgg gatggcattg 1020
ttgggtcatc tgtggagaca tagaagctcg ttgtttcgag ggaaggcggc ggatatgttg 1080
cagaactata atcttatcgc tgctctttcc atgatcttat tcaatatgat gtacttggag 1140
cctcgatcca ctaaggtaat cgtcaacaaa aaattatata gaatcatata taagttgtat 1200
gtctggtgtt catatactat attaatggca tgcttgtatc gaccactagc tttttattat 1260
tttgtatttc ggaatcacgg aacaattagt gctctgatat tcttatgatt ttatcctgat 1320
gtagattgtt ttgatataat tactttgttt atgctgtgat atcgttcgga ggattttgtc 1380
ttccagcaga tttggctctg gtgcgtgcca ttcccagatc cccttcacag gcatgattgt 1440
taatcgtcaa tacgttcttg gtcatctgtg tttatagttc gacatgagca cttgaaacaa 1500
ttcgcgagtc tggaacccta tatttttcac agtttgtgca ttataattgg gggccatcag 1560
catagttcgt tgcgttgaag gtctttctgc ttttctatta ttgttactga tacaatgaca 1620
agtatttcta tagctactag gcatacttta aaattgcctt gtatgttaat tactcggcgt 1680
tttggatgga atttggctgt ccgtgtttcc ttgtttttca gcagctctgc taaactcgcc 1740
ttcattttca gtcttgttgc agtgttccaa gtaatttcat ttatgctctt gcgtgtgtgc 1800
ttggtccgtg tgtatttgct ctcattgcat agaatgtgcg tgcaggtgat gtttgagaga 1860
atgaagatcg agaaggaaga aggaagagga agagagagag tacatattga tgccagaatc 1920
agcagggagg ctggccagca gcagcagcag cagcagacta ccactgaagg cgaaccctca 1980
atcacgacgc ctccacaagt cttgaggagg gagcaacagg tggttgagcc tgatattgag 2040
aggcttaacg agatgcgtga gaggctgaag aagctaaata catgttcgtc gttcctcaac 2100
atcgcgtcac taatggctct tagctggcat cttgtgtatc ttgcccagca cctccccagt 2160
tcatgctgtt gataaggact tggattcgga gaatctcttt gcttgtcgca gataattatt 2220
tgtttgtaaa gttgatgttt ttggtaactt tcgatatgat acttgtacca tagctgtaat 2280
gaaagatatg gagtcagact gctgcacttg ttcttatgtg aagttacatg aattaacgct 2340
ggctacatct tctgtgtttt tcctttcttt ttcgcctgga tgagggtatc ggatccttca 2400
tcttagtcca gattctaaca cagactgcgt gtgaatgaat caacacccta aactaacaag 2460
gttctccgca ttgcgagggt tgggtaacgt aggcagtctt acttcacttt tgcaaatggg 2520
ttgtttcaac atatttcacc gaggagcaac atgttcgtaa cgtcaaggct cactctcatt 2580
tagaatcatt cttggatcga tcccgtttag taaccaaata aaagatgttg agatgtgtca 2640
ttgaccaaaa gaatgcttgt tttgctgaac caaaaaattg gctcatgtgt aaggaatgca 2700
aacatcaaag aatctgtacc ttctcagtga accttctact gtaaaaaatc taatagaatc 2760
tgtcaagcat tttgaaatat gcctacaaga aagtactagc cttcgatcat ttgaagccgt 2820
tagttaaata tgcctacaag aaaggactaa ccttcgatca tttgaagccg ttagttcttc 2880
catagaaggt gacgaagctt cggaatgaac aggggcatac tgtgtgatct tacgagtgat 2940
tcgcccttgt aagccgttca aagtgtcata atactgttta aattacgtag aaaattatct 3000
taacctaaaa cacctttgct atgagcataa ctgaaagatg aaaactacgt ttattcaggt 3060
aaaagaaaat aaaagtacat ttgggacaat gcactatgct ctctgctcac aaagtttatt 3120
ttgaaaggaa aactaacgaa aagggcttga aaactttgag ttttaatgat aaggacaaaa 3180
taaatggtaa agtgaatagt accaagtttg actttttagt aaaaaaaata tggtttttcg 3240
ttaaagtgaa cagtactgtg ggcttttcgt taaaactccc tattttgaat tggttgaatt 3300
actatacctc cagacaccaa attagccttg gttgtcgtca acgactccca ccctctcatc 3360
agaatcaact cccgcatcaa cttggttgcg ccacacagca acccaagata caacagaaga 3420
cctttgcaaa cttaaactcg taaactatga taacaaacaa gaacaaaatc ataacctcaa 3480
gcagtataaa ccagaccgtc gttgccgcca ctatggccct aaataaaagt tgagacaatc 3540
gtaattaaac taagtgacaa atgtatgaat ttaacaattg ttatacacaa atgttttatt 3600
caaaggaaaa ctaatgcaaa gggcttgaaa actttgagtt ttaatgataa ggacaaaata 3660
aagggtaaag tgaatagtac catgattgac tttttagtgt aaaaatatgg tttttcgtta 3720
aagtgaacag taccgggtgc ttttcgttaa agttcccttt attcaattca tggctaaaaa 3780
gaaagatacg tggcacatct cttgaccaat cgtaatacta tattagaaaa acaagataaa 3840
gaataaaaat aacacataaa aagacaaaca aatcgtggtc aacttccttg tcgttttgat 3900
tgactagtgt tttcctctta acaaattagt tggggcgcac ctgccattca ccaacattat 3960
ttctcttcgg ttgaatttcc gttctcaatc acttcaaatt gcggcacaaa acgcgataca 4020
caagcaattt ataactaagg tctaaaatat caatgatatc gaaaattttg atagaaatat 4080
tgggatatta tcgatatcga taaaaattga ataaaaacca cggaaattgt aagaaaaact 4140
tgaaaaattt tattgaaact ttgcaggatg tttatttagt caattatcta ttagtttatc 4200
acaaaaaatt ggaaggaatt gcattgcatg atggatttaa ctgatttaag ttgattatat 4260
agcgagttgg caaacattgt gagtgtagaa aatatgtagt aattaattaa agaagtttaa 4320
acacaccata atcatttata tataatgaat tagtataata ttttacactt tatacattcc 4380
atggtaagat acatgagtga cttagtacca cataaagttc ctatcaaggt ctaaatatcg 4440
atgatatcga aaatatcggt agtccaaaaa tacagaaatt tcaataaaaa tatcgggata 4500
atatcgatat ttaaaccttg atcataacca ccaccaacag tagcagctgc cgccatggga 4560
gacgccattg tgctgtacgc agctctaggg atggggcaca tcatgttttg attacaggta 4620
ataagcagaa gttacaagaa ctttggaaga tggttcgagc cactcacatc cgaaatttaa 4680
aaataaaaaa aaaattatta ttttataaac aaattcatat tttaatatga attgcctgaa 4740
ttattcagtt taaaggtgaa aatgcatttt ggtagttact gttcactgcc ttcctcaata 4800
acttagagag taatagtcta gagataattt aggggtggag ttactcttag taaaaagatt 4860
gaattggaat aatttaataa ttactttaag gtatattaaa aaatgaaaat aaaaaaattg 4920
accaacttaa aatgtatggg ttatgtaact tatgtttagt tacgctttct agaatttaat 4980
tttgataata cgctcagctc aatgtaattc aaaaatcaca actttacttt atgaaaatta 5040
aaatttgttc gattttatta tgtttttatt ttttttattt tctttctgat gtggatgggt 5100
aaaaatgtaa tatcataggt ttaatttggc tacgcttcat aaaacttggt ctgatcacac 5160
tttatccact aatactcaat ttaatcctca ctctctagaa actcgattag ctcttatgtt 5220
ttcacatttt taattggtcg atagaacttt cattacaacc aaaattagta taaggcccaa 5280
aatgaacctg ataaacaaca gataaagtaa aaggtcaaag taaagtgaga atagcaaccc 5340
aagatacaac ggaagatcct tacaaactta atcagtaggc tgcaataata aataacaaaa 5400
atactctaat ctcaaacaac ataaatcaga ccgttgctgc cgctgcatca atataaggcc 5460
taaaatgaac ccgataaaca acaaataaag taaaaggtcc aagtaaaatg aaaatagcaa 5520
ccaaaataca acggaagatg taggctgcaa taataaataa caaaaaagac tcttatctca 5580
aacagcataa atcagatacg tggcacatct cttgaccaat cgtaatacta tactagaaaa 5640
caagataaga aaataaaaat aaaaaataaa aataaaaaat aaaaagacaa acaaatcatg 5700
gtcaacttcc ttgtcgtttt ggttgactag ttttttcctc ctaacaaatt agttggggcg 5760
cacctgccat tcacctacat tatttctctt cagttgaatt tctgttctca aatcacttta 5820
aattgcagta caaaacgcga cacacaaaca aatcataacc accaccacca gtcgcagctg 5880
ccgccatggg agacgtcatt gtactgtacg catctccggg gatggggcac atcgtctcca 5940
tggtggagct gggcaagttc attgtccacc gctacggccc ccacaaattc tccatcacca 6000
ttctctacac ctgcggcagc attgtcgaca ccgctagcat ccccgtctac atccgccgca 6060
tctcccactc ccaccctttc atttccttcc gccaattccc tcgcgtcacc aataatatta 6120
cccgaaacat aagcgtcccc gcaatcacgt tcgacttcat ccgccagaac gatcctcatg 6180
tccgcagtgc cctccaagaa atctctaaat ccgccaccgt tcgcgccttc atcatcgacc 6240
tcttctgcac ctccgctctt cccataggga aggaattcaa catcccaaca tactacttct 6300
gcacttctgg agccgcaatt cttgctgctt ttttgtattt gcccaagatc gatgagcaaa 6360
ccaaaaccac cgag 6374
<210> 4
<211> 3555
<212> DNA
<213> 山定子(Malus baccata)
<400> 4
taaggacttg gattcggaga atctctttgc ttgtcgcaga taattatttg tttgtaaagt 60
tgatgttttt ggtaactttc gatatgatac ttgtaccata gctgtaatga aagatatgga 120
gtcagactgc tgcacttgtt cttatgtgaa gttacatgaa ttaacgctgg ctacatcttc 180
tgtgtttttc ctttcttttt cgcctggatg agggtatcgg atccttcatc ttagtccaga 240
ttctaacaca gactgcgtgt gaatgaatca acaccctaaa ctaacaaggt tctccgcatt 300
gcgagggttg ggtaacgtag gcagtcttac ttcacttttg caaatgggtt gtttcaacat 360
atttcaccga ggagcaacat gttcgtaacg tcaaggctca ctctcattta gaatcattct 420
tggatcgatc ccgtttagta accaaataaa agatgttgag atgtgtcatt gaccaaaaga 480
atgcttgttt tgctgaacca aaaaattggc tcatgtgtaa ggaatgcaaa catcaaagaa 540
tctgtacctt ctcagtgaac cttctactgt aaaaaatcta atagaatctg tcaagcattt 600
tgaaatatgc ctacaagaaa gtactagcct tcgatcattt gaagccgtta gttaaatatg 660
cctacaagaa aggactaacc ttcgatcatt tgaagccgtt agttcttcca tagaaggtga 720
cgaagcttcg gaatgaacag gggcatactg tgtgatctta cgagtgattc gcccttgtaa 780
gccgttcaaa gtgtcataat actgtttaaa ttacgtagaa aattatctta acctaaaaca 840
cctttgctat gagcataact gaaagatgaa aactacgttt attcaggtaa aagaaaataa 900
aagtacattt gggacaatgc actatgctct ctgctcacaa agtttatttt gaaaggaaaa 960
ctaacgaaaa gggcttgaaa actttgagtt ttaatgataa ggacaaaata aatggtaaag 1020
tgaatagtac caagtttgac tttttagtaa aaaaaatatg gtttttcgtt aaagtgaaca 1080
gtactgtggg cttttcgtta aaactcccta ttttgaattg gttgaattac tatacctcca 1140
gacaccaaat tagccttggt tgtcgtcaac gactcccacc ctctcatcag aatcaactcc 1200
cgcatcaact tggttgcgcc acacagcaac ccaagataca acagaagacc tttgcaaact 1260
taaactcgta aactatgata acaaacaaga acaaaatcat aacctcaagc agtataaacc 1320
agaccgtcgt tgccgccact atggccctaa ataaaagttg agacaatcgt aattaaacta 1380
agtgacaaat gtatgaattt aacaattgtt atacacaaat gttttattca aaggaaaact 1440
aatgcaaagg gcttgaaaac tttgagtttt aatgataagg acaaaataaa gggtaaagtg 1500
aatagtacca tgattgactt tttagtgtaa aaatatggtt tttcgttaaa gtgaacagta 1560
ccgggtgctt ttcgttaaag ttccctttat tcaattcatg gctaaaaaga aagatacgtg 1620
gcacatctct tgaccaatcg taatactata ttagaaaaac aagataaaga ataaaaataa 1680
cacataaaaa gacaaacaaa tcgtggtcaa cttccttgtc gttttgattg actagtgttt 1740
tcctcttaac aaattagttg gggcgcacct gccattcacc aacattattt ctcttcggtt 1800
gaatttccgt tctcaatcac ttcaaattgc ggcacaaaac gcgatacaca agcaatttat 1860
aactaaggtc taaaatatca atgatatcga aaattttgat agaaatattg ggatattatc 1920
gatatcgata aaaattgaat aaaaaccacg gaaattgtaa gaaaaacttg aaaaatttta 1980
ttgaaacttt gcaggatgtt tatttagtca attatctatt agtttatcac aaaaaattgg 2040
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catttatata taatgaatta gtataatatt ttacacttta tacattccat ggtaagatac 2220
atgagtgact tagtaccaca taaagttcct atcaaggtct aaatatcgat gatatcgaaa 2280
atatcggtag tccaaaaata cagaaatttc aataaaaata tcgggataat atcgatattt 2340
aaaccttgat cataaccacc accaacagta gcagctgccg ccatgggaga cgccattgtg 2400
ctgtacgcag ctctagggat ggggcacatc atgttttgat tacaggtaat aagcagaagt 2460
tacaagaact ttggaagatg gttcgagcca ctcacatccg aaatttaaaa ataaaaaaaa 2520
aattattatt ttataaacaa attcatattt taatatgaat tgcctgaatt attcagttta 2580
aaggtgaaaa tgcattttgg tagttactgt tcactgcctt cctcaataac ttagagagta 2640
atagtctaga gataatttag gggtggagtt actcttagta aaaagattga attggaataa 2700
tttaataatt actttaaggt atattaaaaa atgaaaataa aaaaattgac caacttaaaa 2760
tgtatgggtt atgtaactta tgtttagtta cgctttctag aatttaattt tgataatacg 2820
ctcagctcaa tgtaattcaa aaatcacaac tttactttat gaaaattaaa atttgttcga 2880
ttttattatg tttttatttt ttttattttc tttctgatgt ggatgggtaa aaatgtaata 2940
tcataggttt aatttggcta cgcttcataa aacttggtct gatcacactt tatccactaa 3000
tactcaattt aatcctcact ctctagaaac tcgattagct cttatgtttt cacattttta 3060
attggtcgat agaactttca ttacaaccaa aattagtata aggcccaaaa tgaacctgat 3120
aaacaacaga taaagtaaaa ggtcaaagta aagtgagaat agcaacccaa gatacaacgg 3180
aagatcctta caaacttaat cagtaggctg caataataaa taacaaaaat actctaatct 3240
caaacaacat aaatcagacc gttgctgccg ctgcatcaat ataaggccta aaatgaaccc 3300
gataaacaac aaataaagta aaaggtccaa gtaaaatgaa aatagcaacc aaaatacaac 3360
ggaagatgta ggctgcaata ataaataaca aaaaagactc ttatctcaaa cagcataaat 3420
cagatacgtg gcacatctct tgaccaatcg taatactata ctagaaaaca agataagaaa 3480
ataaaaataa aaaataaaaa taaaaaataa aaagacaaac aaatcatggt caacttcctt 3540
gtcgttttgg ttgac 3555
<210> 5
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
cagagggaag aaggtcatca gctgcagcat g 31
<210> 6
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
ctcggtggtt ttggtttgct catcgatctt g 31
Claims (8)
1.一种与苹果属植物根皮苷有无性状相关的InDel分子标记，其特征在于，所述InDel分子标记序列如SEQ ID NO.4所示。
2.权利要求1所述分子标记的应用，其特征在于，为如下任一：
1）鉴定苹果属植物根皮苷性状中的应用；
2）预测苹果属植物根皮苷性状中的应用；
3）在苹果属根皮苷分子标记辅助育种中的应用。
3.检测权利要求1所述的InDel分子标记的试剂在鉴定或预测苹果属植物根皮苷性状中的应用，或在苹果属根皮苷分子标记辅助育种中的应用，所述试剂种类包括但不限于pcr类试剂、基因芯片类试剂或测序类试剂。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂包含引物对，所述引物对序列如SEQ ID NO.5和6所示。
5.一种用于扩增检测权利要求1所述InDel分子标记物的引物对，其特征在于，所述引物对序列如SEQ ID NO.5和6所示。
6.一种苹果属植物根皮苷性状检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求5所述的引物对。
7.一种预测苹果属植物根皮苷性状有无的方法，其特征在于，利用权利要求5所述引物对或权利要求6所述的试剂盒对苹果属植物进行检测。
8.一种预测苹果属植物根皮苷性状有无的方法，其特征在于，以苹果属植物的基因组DNA为模板，以权利要求5所述引物对为扩增引物，进行PCR扩增，对扩增产物进行电泳检测，若能够扩增出权利要求1所述InDel分子标记，则待测苹果属植物含有根皮苷性状。
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Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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| CN115341048B true CN115341048B (zh) | 2023-04-28 |
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Family Applications (1)
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-
2021
- 2021-11-01 CN CN202111287268.4A patent/CN115341048B/zh active Active
Also Published As
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