KR101708369B1

KR101708369B1 - 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주 및 유산균인 락토바실러스 플란타럼 균주의 혼합 배양에 의한 박테리아 셀룰로오스 제조방법

Info

Publication number: KR101708369B1
Application number: KR1020140126621A
Authority: KR
Inventors: 양경월; 김경민; 김지현; 김상철; 강희건; 손진수
Original assignee: (주)제주사랑농수산
Priority date: 2014-09-23
Filing date: 2014-09-23
Publication date: 2017-02-20
Also published as: KR20160035264A

Abstract

본 발명은 박테리아 셀룰로오스의 제조시 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주 및 유산균인 락토바실러스 플란타럼 균주의 혼합 배양함에 의해 박테리아 셀룰로오스의 생산성을 향상시킬 있는 박테리아 셀룰로오스의 제조방법을 개시한다.

Description

글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주 및 유산균인 락토바실러스 플란타럼 균주의 혼합 배양에 의한 박테리아 셀룰로오스 제조방법{Method for Producing Bacterial Cellulose by Culturing Gluconacetobacter sp. gel_SEA623-2 Strain and Lactobacillus plantarum Strain}

본 발명은 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주 및 유산균인 락토바실러스 플란타럼 균주의 혼합 배양에 의한 박테리아 셀룰로오스 제조방법에 관한 것이다.

셀룰로오스는 자연계에서 가장 풍부하게 존재하는 천연 고분자이며 재생 가능 자원으로서 D-glucose가 β-1,4 결합에 의하여 중합된 사슬 상의 다당류이다. 주로 식물에 의해 생성되나 일부 algae, fungi 그리고 Acetobacter, Agrobacterium, Pseudomonas, Rhizobium 속 등 다양한 세균에서 생합성이 확인되었으며(Matthysse et al .,1981; Ko et al .,2000) 그 중에서도 당으로부터 초산발효를 통해 식초를 만드는 초산균인 Acetobacter 속이 셀룰로오스 생산력이 가장 우수하다고 보고된 바 있다(Son et al ., 2000; Ko et al .,2000).

박테리아 셀룰로오스(BC)를 생성하는 초산균으로는 A. xylinum, G. hansenii 등이 알려져 있으며 특히, Acetobacter xylinum 의해 생산되는 셀룰로오스가 대표적이고 셀룰로오스 생산력이 가장 우수한 균주로 많은 연구가 진행되어왔다(Matsuoka et al ., 1996; Lee et al .,2005). 박테리아 셀룰로오스 생성균으로 Gluconacetobacter sp.의 분리는 비교적 최근에 연구가 진행되고 있으며 16S rRNA 염기서열을 이용하여 분자계통분류학적으로 Acetobacter 속으로부터 재분류 되었다(Lee et al .,2002; Choi et al .,2004). 박테리아 셀룰로오스는 식물 유래 셀룰로오스와는 달리 리그닌, 헤미셀룰로오스가 전혀 포함되지 않는 순수 상태로 생성되며(Klemm et al .,2001; Jung et al .,2003) 강도, 보수성 및 결착성이 높아 화학적으로 안정하고 독성이 낮은 특성으로 인하여 고강도용 공업 재료, 복합 섬유 및 의료용 재료 등 다양한 용도로 활용이 가능하다(Jeon et al .,2013; Cho et al.,2014).

박테리아 셀룰로오스의 생산성 향상을 위해 유전적으로 안전한 미생물의 분리, 균주 개량, 최적 배지 및 배양 조건에 관련된 연구가 보고되고 있으며(Lee et al.,2003; Mikkelsen et al .,2009; Park et al .,2010) pH 3~4의 배양액으로 30~35℃ 정치배양이 유리하다는 점은 대체적으로 일치하고 있다(Choi et al.,2004). 또한 glucose, fructose등의 탄소원과 TCA cycle에 관여하는 lactate, pyruvate, succinate등을 기본배지에 첨가하여 박테리아 셀룰로오스의 생산량을 증가시키는 연구가 보고되고 있으며(Matsuoka et al .,1996; Naritomi et al .,1998; Choi et al.,2004) A. xylinum 의 경우 fructose 이외에 lactate를 배지에 첨가하여 박테리아 셀룰로오스 생산성을 증가시켰다고 보고되었으나(Matsuoka et al .,1996; Naritomi et al .,1998) G. hansenii의 경우에는 lactate의 농도가 높아지면 생산량을 감소시키며 succinate 또한 박테리아 셀룰로오스 생산에 거의 영향을 미치지 않는다는 연구가 보고되어(Jung et al .,2003; Jang et al .,2005) 차이를 나타내고 있다.

본 발명에서는 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주에 의해 박테리아 셀룰로오스를 제조함에 있어서 김치에서 분리한 Lactobacillus plantarum 균주를 혼합 배양함으로써 박테리아 셀룰로오스의 생산성을 높일 수 있는 기술을 개시한다.

본 발명의 목적은 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주 및 유산균인 락토바실러스 플란타럼 균주의 혼합 배양에 의한 박테리아 셀룰로오스 제조방법을 제공하는 데 있다.

본 발명은 아래의 실시예에서 확인되는 바와 같이, 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주(Gluconacetobacter sp. gel_SEA623-2 (KACC 91526P))를 이용하여 박테리아 셀룰로오스를 제조할 때 상기 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주와 함께 유산균인 락토바실러스 플란타럼 균주(Lactobacillus plantarum JL-KC09 (KCCM 80077))를 혼합 배양할 경우 박테리아 셀룰로오스의 생산성이 향상됨을 확인함으로써 완성된 것이다.

상기에서 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2는 농업유전자원정보센터 미생물은행에 2010년 2월 4일자로 기탁번호 KACC 91526P로 기탁되어 있는 균주이다.

전술한 바를 고려할 때, 본 발명은 (a) 탄소원 및 보조 탄소원을 함유하는 박테리아 셀룰로오스 제조용 배지를 제조하는 단계, (b) 이 배지에 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주를 접종하는 단계, (c) 접종 후 호기적 조건에서 배양하는 단계, 및 (d) 그 배양액으로부터 박테리아 셀룰로오스를 수득하는 단계를 포함하되, 상기 (b) 단계에서 유산균인 락토바실러스 플란타럼을 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주와 함께 접종하는 것을 특징으로 한다.

또 본 명세서에서, "%(v/v)"는 본 명세서에서 특별히 달리 언급하지 않는 한, 부피 백분율에 의한 농도(v/v) 표현으로서 당업계에 알려진 바와 같이 일정 부피의 용액 중에 녹아 있는 일정 부피의 용질을 의미한다. 예컨대 10%(v/v)는 용액 100㎖에 용질 10㎖가 용해되어 있다는 것이 된다. 따라서 본 발명의 방법에 있어서, 아세트산이 배지에 1.0%(v/v)로 첨가된다고 할 때 정제수 등의 여타 배지 성분 99.0 ㎖(v/v)와 아세트산 1.0 ㎖(v/v)가 혼합된다는 의미로서 이해될 수 있다.

본 발명의 방법에 있어서, 상기 (a) 단계의 박테리아 셀룰로오스 제조용 배지의 탄소원으로서는 글루코오스, 수크로오스, 말토오스, 프룩토오스, 락토오스, 자일로오스, 갈락토오스, 아라비노오스, 글리세롤, 이들 성분이 포함되어 있는 전분, 전분 가수분해물 등이 사용될 수 있다. 이들 탄소원은 단독으로 또는 2종 이상의 혼합물로 상기 배지에 포함될 수 있으며, 단독으로 배지에 포함되든, 2종 이상의 혼합물로 배지에 포함되든 5%(v/v) 내지 20%(v/v)의 범위로 배지에 포함될 수 있다. 전분이나 전분 가수분해물 등 천연물 또는 천연물 가공물을 탄소원으로 사용할 경우 타 미생물에 의한 원치 않는 발효를 방지하기 위해서 이들 탄소원을 멸균하여 사용할 수 있다. 멸균은 고온·고압 멸균법, 자외선 조사 등 당업계에 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있다.

본 발명의 방법에 있어서, 상기 (a) 단계의 박테리아 셀룰로오스 제조용 배지가 탄소원으로서 수크로오스만을 포함할 때 8%(v/v) 내지 10%(v/v), 바람직하게는 아래의 실시예에서와 같이 8.8%(w/v)로 포함하여 제조되는 것이 바람직하다.

또 본 발명의 방법에 있어서, 상기 (a) 단계의 박테리아 셀룰로오스 제조용 배지의 보조 탄소원으로서는 박테리아 셀룰로오스 생산 미생물인 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주의 생육이나 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주에 의한 박테리아 셀룰로오스의 생산에 있어 필수적인 성분은 아니나 박테리아 셀룰로오스 생산 미생물인 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주의 생육 및/또는 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주에 의한 박테리아 셀룰로오스의 생산을 촉진시키기 위하여 첨가되는 성분으로 예컨대 젖산, 구연산, 숙신산, 시트르산, 아세트산, 에탄올, 포름산, 말산, 피부르산 등이 사용될 수 있으며, 나아가 이들 성분 중 하나 이상을 본래 포함하고 있거나 이들 성분 중 하나 이상의 성분이 인위적으로 첨가된 감즙(Kim SY, et al., Appl Biochem Biotechnol., 129-132, 705-15, 2006), 감식초(Kim SY, et al., Appl Biochem Biotechnol., 129-132, 705-15, 2006), 사과즙(Lee OS, et al., J. Kor. Soc. Food Sci. Nutr., 31(4), 572-577, 2002), 포도즙(Son CJ, et al., J. Appl. Microbiol. Biotechnol., 12(5), 722-728, 2002), 맥주 폐액(Park JK, et al., Kor Chem Eng Res., 44(1), 52-57, 2006), 코코넛 부산물(Jonas R, et al., Polym Degrad Stab., 59, 101-106, 1998), 파인애플 과즙(일본 특허출원 제1999-299034호 참조) 등을 들 수 있다. 이들 보조 탄소원도 단독으로 또는 2종 이상 혼합되어 배지에 포함될 수 있다. 바람직하게는 아래의 실시예에서와 같이 아세트산과 에탄올을 사용하는 경우이며, 이들 함량은 아세트산은 0.5 내지 2.0%(v/v), 에탄올은 0.5 내지 2.0%(v/v)로 포함되는 경우이다. 가장 바람직하게는 아래의 실시예에서와 같은 함량으로 포함되는 경우이다.

또 본 발명의 방법에 있어서, 상기 (a) 단계의 박테리아 셀룰로오스 제조용 배지는 박테리아 셀룰로오스의 생산 수율을 향상시키기 위하여 첨가물로서 감귤 착즙액을 추가로 포함할 수 있다. 바람직한 감귤 착즙액의 첨가 범위는 2%(v/v) 내지 14%(v/v)이며, 특히 아래의 실시예에서와 같이 10%(v/v)로 첨가되는 것이 바람직하다.

본 명세서에서, 본 명세서에서, "감귤 착즙액"은 감귤 과실을 과피를 제거한 기계적으로 분쇄·압착하여 얻어진 것으로 여기서 감귤 과실은 과육과 과피를 포함하는 감귤 원과 또는 과피가 제거된 감귤 과육일 수 있다. 감귤 원과를 사용하였을 경우, 감귤 과피에 함유된 펙틴을 분해함으로써 접종될 미생물인 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주에 의한 이용이 용이하도록 그 펙틴을 분해하기 위한 펙틴분해효소를 압착 전의 감귤 분쇄액에 첨가하여 반응시키는 단계가 추가될 수 있으며, 과육 및/또는 과피의 셀룰로오스를 분해할 목적으로 셀룰라아제를 압착 전의 감귤 분쇄액에 첨가하여 반응시키는 단계도 추가될 수 있다. 여기서 감귤은 유럽 남부 등지에서 재배되는 시트론(citron), 미국 캘리포니아 등지에서 재배되는 레몬(lemon), 열대 지방 등지에서 재배되는 문단이나 자몽 등의 문단류, 미국의 플로리디 등지에 재배되는 문단의 돌연변이종인 그레이프 프루트(grape fruit), 인도, 이탈리아 등지에서 재배되는 광귤(sour orange), 인도 등 세계 각지에서 재배되는 당귤, 중국이나 우리나라에서 재배되는 유자(柚子), 우리나라 제주도 등에서 재배되는 귤, 중국 등에서 재배되는 금감, 기타 탱귤 등을 모두 포함하는 의미이다. 바람직하게는 제주도에서 재배되고 있는 하귤(Citrus natsudaidai Hayata), 온주 밀감(Citrus unshiu), 진귤, 한라봉, 진지향, 천혜향, 당유자 등을 의미하며, 특히 아래의 실시예에서 사용된 온주 밀감(Citrus unshiu)을 의미한다.

또 본 발명의 방법에 있어서, 상기 (a) 단계의 박테리아 셀룰로오스 제조용 배지는 질소원을 추가로 포함할 수 있다. 질소원으로서는 효모 추출물(yeast extract), 소이톤(soytone), 펩톤(peptone), 트립톤(tryptone), 맥아 추출물(malt extract), 콩 분말, 콩 비지 분말, 청국장 분말, 된장 분말 등의 천연 질소원, 또는 황산암모늄, 염화암모늄, 인산암모늄 등의 암모늄염, 질산염, 유레아 등의 유·무기 질소원이 사용될 수 있다. 이들 질소원도 1종 이상 혼합하여 사용될 수 있으며, 배지에 0.1%(v/v) 내지 8.0%(v/v)의 범위로 포함될 수 있다. 천연 질소원을 사용할 경우 천연 탄소원을 사용할 경우와 관련하여 설명한 바와 동일한 이유에서 멸균하여 사용하는 것이 바람직하다.

또 본 발명의 방법에 있어서, 상기 (a) 단계의 박테리아 셀룰로오스 제조용 배지는 접종될 미생물이 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주인 점을 고려할 때 그 pH는 pH 3 내지 7.0, 특히 pH 3 내지 6 범위인 것이 바람직하다.

또 본 발명의 방법에 있어서, 상기 (a) 단계의 박테리아 셀룰로오스 제조용 배지는 무기염류와 미량원소를 추가로 포함하여 제조될 수 있다. 사용될 수 있는 무기염류로서는 인산수소나트륨, 황산마그네슘, 염화철, 칼슘염, 망간염, 코발트염, 몰리브텐산염, 킬레이트금속염 등을 들 수 있으며, 미량원로소로서는 아미노산, 비타민, 지방산, 핵산, 아황산 펄프 폐액 등을 들 수 있다. 이들 무기염류와 미량원소는 1종 이상 혼합하여 사용될 수 있으며, 0.001%(v/v) 내지 3.0%(v/v)의 범위로 배지에 포함될 수 있다.

또 본 발명의 방법에 있어서, 상기 (a) 단계에서 박테리아 셀룰로오스 제조용 배지가 제조된 후에는 멸균 단계가 추가로 포함될 수 있다. 이러한 멸균 단계는 타 미생물의 오염을 방지하기 위한 것이며, 결과적으로 박테리아 셀룰로오스 생산 수율을 높이기 위한 것이다. 멸균 방법은 고온·고압 멸균법, 자외선 조사 등 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용할 수 있다.

또 본 발명의 방법에 있어서, 상기 (b) 단계의 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주는 그 접종 전에 그 활성화를 위해서 전 배양 후 접종되는 것이 바람직하다. 전 배양에서 바람직한 배지 성분, 그 성분의 조성, 전 배양 조건, 전 배양 기간, 전 배양액의 접종량 등은 아래의 실시예를 참조할 수 있다.

또 본 발명의 방법에 있어서, 상기 (b) 단계의 락토바실러스 플란다럼 균주의 접종도 그 접종 전에 그 활성화를 위해서 전 배양 후 접종되는 것이 바람직하다. 마찬가지로 전 배양에서 바람직한 배지 성분, 그 성분의 조성, 전 배양 조건, 전 배양 기간, 전 배양액의 접종량 등도 아래의 실시예를 참조할 수 있다.

또 본 발명의 방법에 있어서, 상기 (c) 단계의 배양은 배양 온도는 10 내지 40℃의 범위, 특히 25 내지 35℃ 범위인 것이 바람직하며, 배양 기간은 5일 내지 20일, 특히 아래의 실시예에서와 같이 14일인 것이 바람직하다.

또 본 발명의 상기 (c) 단계의 배양에서, 호기적 조건을 만들어주기 위한 산소 농도는 1~100%, 특히 20 내지 80%인 범위인 것이 바람직하다.

또 본 발명의 상기 (c) 단계의 배양에서, 배양 방법은 정치배양법과 연속배양법 모두 가능하며, 바람직하게는 정치배양법을 사용할 수 있다.

전술한 바의 본 발명의 방법에 의하여 얻어진 박테리아 셀룰로오스는 일반 박테리아 셀룰로오스와 마찬가지로 화상 치료, 창상 치료, 궤양 치료, 염증 치료, 항생제, 마취제 등의 약물 전달 용도 등의 의약품, 보습 용도 등의 화장품, 식감 향상 용도 등의 식품, 충진제 용도 등의 제지 등의 제품 소재로 활용될 수 있다.

전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주를 이용한 박테리아 셀룰로오스 제조방법을 제공할 수 있다. 본 발명에 따르면 유산균인 락토바실러스 플란타럼을 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주와 혼합 배양함으로써 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주에 의한 박테리아 셀룰로오스 생산 수율을 높일 수 있는 효과가 있다.

이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 > 유산균 혼합 배양에 의한 박테리아 셀룰로오스의 제조

1. 사용 균주

본 실험에 사용한 박테리아 셀룰로오스의 생성균은 국립원예특작과학원 제주감귤시험장에서 분양받은 Gluconacetobacter sp. gel_SEA623-2(KACC 91526P)를 이용하였으며, 유산균은 김치에서 분리한 Lactobacillus plantarum JL-KC09 (KCCM 80077)를 이용하였다.

2. 배지 조성

박테리아 셀룰로오스의 생성균인 Gluconacetobacter sp. gel_SEA623-2의 단독 배양 배지(Single Culture, SC)와 유산균인 Lactobacillus plantarum JL-KC09와의 혼합 배양 배지(Mixed Culture, MC)는 감귤 착즙액(Citrus juice), 슈크로오스, 에탄올, 아세트산 및 정제수를 이용하여 제조하였으며, 이들 각 성분의 구체적인 함량은 아래의 [표 1](아래 표에서 %는 모두 v/v임)과 같다. 아래의 [표 1]에서 아세트산의 농도가 박테리아 셀룰로오스의 생성능에 미치는 영향을 살펴보기 위하여 아세트산의 농도를 0.5%씩 1.0%까지 높여가며 배지를 조성하였다.

상기 배지 조성 중 Gluconacetobacter sp. gel_SEA623-2의 전배양액 조성과 동일하게 아세트산이 1% 첨가된 배지를 대조군(Control)로 하여 통계적 유의성을 분석하였다.

3. 배양

박테리아 셀룰로오스를 제조하기 위하여, 상기 [표 1]의 단독 배양 배지에 전배양한 Gluconacetobacter sp. gel_SEA623-2만을 1%(v/v) 접종하였고, 혼합 배양 배지에는 상기 Gluconacetobacter sp. gel_SEA623-2를 1%(v/v) 접종하는 이외에 전배양한 Lactobacillus plantarum JL-KC09 (KCCM 80077)를 1%(v/v)를 추가로 접종하여 30℃에서 14일 동안 배양하였다.

상기에서 Gluconacetobacter sp. gel_SEA623-2의 전배양액은 상기 [표 1]에서 아세트산이 1% 첨가된 배지 즉 감귤 착즙액(Citrus juice) 10%, 슈크로오스 용액(용매: 정제수) 88.0%, 에탄올 1.0%, 아세트산 1.0%로 조정된 배지에서 배양병 입구를 살균된 filter paper(HYUNDAI Micro)로 덮은 후 30℃에서 5일간 정치배양하여 본 배양을 위한 종균(Seed)으로 사용하였으며, Lactobacillus plantarum JL-KC09은 MRS broth 선택배지에서 35℃, 150rpm 의 속도로 24시간 동안 진탕배양한 것을 사용하였다

< 실험예 > 박테리아 셀룰로오스의 생산성의 평가

박테리아 셀룰로오스의 생산성은 박테리아 셀룰로오스 겔 두께와 건조 중량을 측정하여 평가하였다.

박테리아 셀룰로오스 겔 두께는 배양액 상층에 형성된 백색의 겔 두께(thickness)를 기준으로 가장 두꺼운 부분과 가장 얇은 부분 두 곳을 측정하여 평균값(mm)으로 나타내었고, 건조 중량(dry weight)은 박테리아 셀룰로오스를 세척한 후 건조기(OF-22, 팜스웰바이오)에 넣고 60℃의 온도에서 24시간 건조하여 남은 건조체의 중량을 기준으로 미세저울(FX-300i, AND)을 이용하여 소수점 둘째 자리까지 측정하였다.

배지의 아세트산 농도에 따른 단독 배양 배지 및 혼합 배양 배지에서 배양 7일째 및 14일째 건조 중량과 박테리아 셀룰로오스 겔 두께를 측정한 결과를 산도와 pH와 함께 아래의 [표 2] 및 [표 3]에 나타내었다.

[배양 7일째 박테리아 셀룰로오스 겔 두께와 건조 중량]

[배양 14일째 박테리아 셀룰로오스 겔 두께와 건조 중량]

상기의 결과들을 참조하여 볼 때, 배양 7일째의 경우 아세트산이 첨가되지 아니한 단독 배양 배지에서의 박테리아 셀룰로오스의 건조 중량과 두께가 각각 28.13±1.59 g/L 및 8.17±1.04 mm로 가장 생산성이 높았으나, 배양 14일째의 경우 모든 아세트산의 첨가 농도에 있어 혼합 배양 배지에서의 박테리아 셀룰로오스의 건조 중량과 두께가 모두 높은 결과를 보였으며, 특히 아세트산이 0.5%로 첨가된 혼합 배양 배지에서의 박테리아 셀룰로오스의 건조 중량과 두께가 가장 높은 결과를 보여 아세트산이 0.5%로 첨가된 혼합 배양 배지를 사용하여 14일 동안 배양하는 것이 Gluconacetobacter sp. gel_SEA623-2와 Lactobacillus plantarum JL-KC09 (KCCM 80077)를 혼합 배양하여 박테리아 셀룰로오스를 생산할 때 가장 최적의 조건임을 알 수 있다.

통계처리

실험 결과는 SPSS 12.0 통계분석 프로그램을 이용하여 평균 및 표준편차를 구하였으며, 분산 분석과(ANOVA)과 Duncan multiple range test를 실시하여 P<0.05 수준에서 박테리아 셀룰로오스 건조중량과 두께의 유의적 차이를 검증하였다.

Claims

(a) 탄소원 및 보조 탄소원을 함유하는 박테리아 셀룰로오스 제조용 배지를 제조하는 단계,
(b) 이 배지에 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주(기탁번호 KACC 91526P)와 락토바실러스 플란타럼 JL-KC09 균주(기탁번호 KCCM 8007)를 접종하는 단계,
(c) 접종 후 호기적 조건에서 배양하는 단계, 및
(d) 그 배양액으로부터 박테리아 셀룰로오스를 수득하는 단계를 포함하되,
상기 (a) 단계의 배지는 보조 탄소원으로서 아세트산을 0.5%(v/v)를 함유하며,
상기 (c) 단계의 배양은 접종 후 14일 이상 이루어지는 것을 특징으로 하는
박테리아 셀룰로오스의 제조방법.
삭제
삭제
제1항에 있어서,
상기 (a) 단계의 배지는 탄소원으로서 슈크로오스를 8.8%(v/v) 포함하고, 보조탄소원으로 에탄올을 1.0%(v/v) 포함하며, 또 감귤즙을 10.0%(v/v) 포함하며, 나머지는 잔량의 정제수로 이루어진 것을 특징으로 하는 박테리아 셀룰로오스의 제조방법.