KR101693752B1 - 발효 도라지 사탕 및 이의 제조방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 도라지에 발효균을 접종하여 발효시킨 후 얻은 발효 도라지 추출물을 포함하는 약초 혼합물; 및 사탕 기제를 포함하는 천식 또는 객담 개선용 발효 도라지 사탕 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명에 의하면, 발효된 도라지 추출물에 한방 약초를 혼합하여 부작용을 최소화하면서, 기관지 천식 증상 및 객담 개선하고 염증을 효과적으로 억제할 수 있고, 휴대 및 복용이 용이하며 복용량이 일정하여 일상 생활에서 천식 및 객담 증상을 용이하게 관리할 수 있다.
Description
본 발명은 발효 도라지 사탕 및 이의 제조방법에 관한 것이고, 더욱 상세하게는 발효균을 이용하여 발효시킨 발효 도라지를 이용하여 천식, 객담 및 염증 개선에 효과적이고, 사탕으로 제조되어 휴대 및 복용이 용이하며 복용량이 일정한 장점이 있는 발효 도라지 사탕 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
천식이란 폐 속에 있는 기관지가 아주 예민해진 상태로, 때때로 기관지가 좁아져서 숨이 차고 가랑가랑 하는 숨소리가 들리면서 기침을 심하게 하는 증상을 나타내는 병을 말하는데, 기관지의 알레르기 염증 반응 때문에 발생하는 알레르기 질환이다. 이런 증상들은 반복적으로, 발작적으로 나타나며 유전적 요인과 환경적 요인이 합쳐져서 나타난다. 공기가 흐르는 길인 기관지의 염증으로 기관지 점막이 부어 오르고 기관지 근육이 경련을 일으키면서 기관지가 막혀서 숨이 차게 된다.
이러한 천식은 그 원인에 따라 다르지만 공해 등과 같은 환경 오염이 심각해지는 현대에 와서는 발병의 연령대가 낮아지고 그 증상 또한 장기화되는 등 천식의 심각성이 극대화되고 있는 실정이다.
그러나, 이와 같은 천식은 그 원인이 매우 다양할 뿐만 아니라, 치료 후에도 재발병하는 등 그 치료에 문제점이 있다. 또한 천식의 증상은 주로 기침, 가래 또는 호흡 곤란에 의한 숨가쁨으로 나타나는데, 치료에 따른 이들 증상의 완화가 더딜 뿐 아니라 그 예방이 어려운 문제점이 있다. 따라서 일상에서 증상을 잘 조절하고 폐기능을 정상화하여 일상 생활을 정상적으로 유지하도록 하고, 치료 방법에 의한 부작용을 최소화하는 것이 중요하다.
한편, 한방자원을 이용한 기능성 식품의 개발은 생약재에 함유되어 있는 여러가지 생리활성 물질을 부작용을 최소화하면서 국민의 건강유지나 증진 및 질병의 예방과 치료에 활용할 수 있도록 하는 중요한 의미를 지닌다.
대한민국 특허등록 제10-0519485호(2005.10.06)에는 생약재 추출물을 이용한 무설탕 생약캔디의 조성물 및 그의 제조방법에 관해 기재되어 있다. 그런데, 이러한 종래 기술들은 한방에서의 사용되는 처방전을 기본으로 하여 가격이 비싸고 공정이 복잡하고, 실제적으로 활용이 용이하지 않은 한계가 있다.
본 발명의 목적은 발효된 도라지 추출물을 이용하여 기관지 천식 증상을 개선하고 거담작용을 가지면서 염증을 억제할 수 있는 약리작용이 있는 발효 도라지 사탕을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은, 발효된 도라지 추출물을 이용하여 기관지 천식 증상을 개선하고 거담작용을 가지면서 염증을 억제할 수 있는 약리작용이 있는 발효 도라지 사탕을 효율적으로 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 더욱 명확하게 된다.
본 발명의 일 측면에 따르면, 본 발명은 도라지에 효모균을 접종하여 발효시킨 후 얻은 발효 도라지 추출물을 포함하는 약초 혼합물; 및 사탕 기제를 포함하는 천식 또는 객담 개선용 발효 도라지 사탕 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 본 발명은 도라지에 효모균을 접종하여 발효시키는 단계; 상기 발효된 도라지를 멸균 후 건조한 후 분쇄하여 발효 도라지 분말을 얻는 단계; 및 상기 발효 도라지 분말에 사탕 기제를 혼합하여 사탕으로 제조하는 단계를 포함하는 발효 도라지 사탕의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면에 따르면, 본 발명은 상기 발효 도라지 사탕의 제조방법에 의해 제조된 발효 도라지 사탕을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 발효된 도라지 추출물에 한방 약초를 혼합하여 부작용을 최소화하면서, 기관지 천식 증상 및 객담 개선하고 염증을 효과적으로 억제할 수 있다.
또한, 본 발명의 일 실시예에 의하면, 사탕 형태로 제조되어 휴대 및 복용이 용이하며 복용량이 일정하여 일상 생활에서 천식 및 객담 증상을 용이하게 관리할 수 있다.
나아가 본 발명의 일 실시예에 의하면, 일상 생활에서 용이하게 구할 수 있는 도라지를 활용하고 상대적으로 단순한 공정에 의해 경제적으로 천식 개선, 거담 작용 및 항염증 효과가 있는 사탕을 제조할 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 발효 도라지 사탕의 제조방법을 나타낸 흐름도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 발효 도라지 사탕의 제조방법 중 도라지 발효와 추출물을 준비하는 과정을 나타낸 흐름도이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 발효 도라지 사탕의 제조방법 중 발효 도라지(FPR)의 도라지(PR) 대비 거담 효과 증가를 나타낸 그림이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 발효 도라지 사탕의 제조방법 중 발효 도라지(FPR)의 도라지(PR) 대비 염증억제 작용의 증가를 나타낸 그림이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 발효 도라지 사탕의 제조방법 중 발효 도라지(FPR)의 천식 유도 생쥐 혈중 IgE 생산의 억제효과를 나타낸 그림이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 발효 도라지 사탕의 제조방법 중 발효 도라지(FPR)의 천식 유도 생쥐 혈중 SOD 증가효과를 나타낸 그림이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 발효 도라지 사탕의 제조방법 중 발효 도라지(FPR)의 천식 유도 생쥐 혈중 MDA 감소효과를 나타낸 그림이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 발효 도라지 사탕의 제조방법 중 도라지 발효와 추출물을 준비하는 과정을 나타낸 흐름도이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 발효 도라지 사탕의 제조방법 중 발효 도라지(FPR)의 도라지(PR) 대비 거담 효과 증가를 나타낸 그림이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 발효 도라지 사탕의 제조방법 중 발효 도라지(FPR)의 도라지(PR) 대비 염증억제 작용의 증가를 나타낸 그림이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 발효 도라지 사탕의 제조방법 중 발효 도라지(FPR)의 천식 유도 생쥐 혈중 IgE 생산의 억제효과를 나타낸 그림이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 발효 도라지 사탕의 제조방법 중 발효 도라지(FPR)의 천식 유도 생쥐 혈중 SOD 증가효과를 나타낸 그림이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 발효 도라지 사탕의 제조방법 중 발효 도라지(FPR)의 천식 유도 생쥐 혈중 MDA 감소효과를 나타낸 그림이다.
이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.
본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시 예를 가질 수 있는바, 특정 실시 예들을 도면에 예시하고 상세한 설명에 상세하게 설명하고자 한다. 그러나 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.
본 발명의 일 측면에 의하면, 본 발명은 도라지에 효모균을 접종하여 발효시킨 후 얻은 발효 도라지 추출물을 포함하는 약초 혼합물; 및 사탕 기제를 포함하는 천식 또는 객담 개선용 발효 도라지 사탕 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, '도라지'는 초롱꽃과에 속하는 여러해살이풀 또는 그 뿌리로서, 수분 85%, 단백질 1.8%, 지질 0.2%, 다질 10.4%, 섬유 2.4% 및 회분 0.5%를 함유하고 있다. 도라지는 당분과 섬유질이 많고 철분과 칼슘이 많은 우수한 알칼리성 식품이다. 도라지 뿌리에는 단백질, 당분, 칼슘, 철분, 회분 및 인과 같은 무기질을 포함하고 있으며, 비타민 B1 및 B2를 포함한 다양한 비타민을 포함하고 있는 알칼리성 식품이다. 도라지는 항산화, 기억력개선, 콜레스테롤 저하, 혈압상승 억제, 혈당상승 억제, 혈소판응집 억제, 항균작용, 항알레르기작용, 모세혈관 저항성 증가, 중추신경 흥분작용, 항천식, 거담작용, 감기예방 및 항암 등에 있어서 약리 효과를 보인다. 도라지의 주요 약리성분은 트리테르페노이드(triterpenoid)계 사포닌으로 밝혀졌으며 기관지분비를 항진시켜 가래를 삭히는 효능이 있다. 도라지에서만 특별히 관찰되는 사포닌 성분은 진정, 해열, 진통, 진해, 거담, 혈당 강하, 콜레스테롤 대사개선, 항콜린, 항암작용 및 위산분배 억제효과 등 여러 약리 효과가 있는 것으로도 밝혀져 있다. 또한, 도라지에 함유된 이눌린(inulin) 성분은 생쥐를 이용한 항암 실험에서 강력한 항암 활성을 보였다.
본 발명에 있어서, 상기 발효균은 한약재 발효 산물의 교미교취를 통한 복약순응도를 증대시키며, 효과적인 발효를 위해서 사카로마이세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae C-2)를 주모로 사용하는 것이 바람직하다. 본 발명에 의한 발효 도라지는 항천식, 항염증, 및 거담 작용 등이 매우 우수한 것으로 나타났다(도 3 내지 도 7 참조).
본 발명에 있어서, '사탕 기제'는 공지된 바와 같이 설탕, 물엿을 의미하며, 사탕 제조에 있어서 공지 기술에 따라 부재료로 구연산, 포도당, 멘톨, 비타민 C 등이 포함될 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 약초 혼합물은 소염 작용 또는 항균 작용이 있는 생강 및 곽향 중 하나 이상을 포함하는 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, '생강(Zingiber officinale Roscoe)'은 외떡잎식물 생강목 생강과의 여러해살이풀로서, 이의 뿌리는 식용 및 약용으로 사용된다. 생강의 주성분은 α-진기베렌(zingiberene), α-쿠르구메넨(curcumene), 진거알콜(zingiberol), 페릴알데하이드(perill aldehyde), 네날(neral), 제라니올 알데히드(geranial), 베타피넨(β-pinene), 2-보르네올(2-borneol), 시트랄(citral), 가란갈 테르펜 락톤(galanolactone) 외에 매운성분으로서 6-진저롤 (6-gingerol)이 있으며 아스파르트산(aspartic acid), 글루타메이트(glutamic acid), 세린(serine)과 기타 아미노산을 함유하고 있다. 미네랄로써 칼슘, 철, 마그네슘, 망간, 인, 칼륨, 셀렌, 아연이 있으며 비타민으로서는 B1, B2, B3, B6, C 등이 있다. 생강의 약리효과는 수침액에서 개의 황산동에 의한 구토의 억제작용이 있으며, 에탄올 추출물에서 토끼의 위의 긴장거하와 선동운동의 억제하고, 모르모트 적출 회장에서 항히스타민 작용을 나타내었으며, 진정, 진통, 위 운동억제, 프로스타글라딘(prostaglandin) 생합성 저해작용(6-gingerol), 및 진해작용이 있다.
본 발명에 있어서, '곽향(Teucrium veronicoides Maxim.)'은 배초향이라고도 하고, 강한 향기를 풍기는 방향성 식물이다. 맵고 따뜻한 약성을 가지며 해열, 발한, 위액분비 촉진, 연동운동 촉진, 신장혈류 개선, 구취제거, 항진균작용 및 소화작용에 효과가 있다.
이에 한정되는 것은 아니나, 상기 약초 혼합물은 약초 혼합물 100 중량부에 도라지 발효추출물 50 ~ 60 중량부, 생강분말 20 ~ 25 중량부, 및 곽향분말 20 ~ 25 중량부를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 의하면, 본 발명은 도라지에 효모균을 접종하여 발효시키는 단계; 상기 발효된 도라지를 멸균 후 건조한 후 분쇄하여 발효 도라지 분말을 얻는 단계; 및 상기 발효 도라지 분말에 사탕 기제를 혼합하여 사탕으로 제조하는 단계를 포함하는 발효 도라지 사탕의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에서는 상기 발효 도라지 분말을 에탄올에 침지하여 추출하고 여과한 뒤 농축한 발효 도라지 농축액으로부터 건고물을 얻는 단계를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 발효 도라지 사탕의 제조방법의 흐름도를 나타낸 도 1 및 도 2를 참고하여 본 발명에 따른 제조방법을 보다 더 상세히 설명한다.
본 발명에 따른 발효 도라지 사탕의 제조방법은 준비된 약초 중 발휘하고자 하는 약리 효과에 따라 필요한 것을 선별한 후 일부 약초는 상온에서 침지하여 추출하고, 나머지 약초는 분쇄하여 분말화한 뒤 혼합하여 사탕의 원료로 사용하는 것을 특징으로 한다.
이때, 상온에서의 추출로 얻은 농축액을 건조시킨 추출 건고물 및 농축된 약리성분을 함유하고 있는 분쇄된 분말은 약초가 지닌 치유적 기능을 갖는 고유의 향을 유지하며, 상온 추출 건고물 또는 분말을 혼합한 발효 도라지 사탕은 농축된 약리 성분 및 치유적 기능을 가진다.
도 1에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 발효 도라지 사탕의 제조방법은 약초 및 사탕재료를 준비하는 단계(S100); 상기 약초 중 필요한 것을 선택하여 발효하고 멸균, 건조시킨 뒤 추출하여 건고물을 얻는 단계 또는 상기 약초 중 필요한 것을 선택한 뒤 분쇄하여 분말을 얻는 단계(S200); 사탕 제조에 필요한 기제와 부원료를 준비하는 단계(S300); 상기 추출 건고물과 상기 분말 및 사탕재료를 혼합하여 혼합물을 얻는 단계(S400); 상기 혼합물을 용융하는 단계(S500); 상기 용융 결과물을 성형하는 단계(S600); 상기 성형물을 선별하는 단계(S700); 및 사탕을 제조하는 단계(S800);를 포함할 수 있다.
각각의 단계를 구체적으로 살펴보면 다음과 같다.
약초 및 사탕 재료를 준비하는 단계(S100)는 도라지, 곽향, 생강 등(반드시 이에 제한되지 않음)을 좋은 품질의 것으로 선별하고, 세척한 다음 잘 말려 준비해 놓는 원재료 준비단계이다. 이때, 각 약초들의 성질과 특징에 따라 시기별로 좋은 약초를 채취 보관하고 필요시 적정량을 사용하는 것이 바람직하다. 각각의 약초 혼합 비율 및 처리과정은 후술하는 해당 부분의 설명으로 쉽게 이해할 수 있다.
다음으로, 상기 약초 중 필요한 것을 선택하여 발효하고 멸균, 건조시킨 뒤 추출하여 건고물을 얻는 단계 및 상기 약초 중 필요한 것을 선택한 뒤 분쇄하여 분말을 얻는 단계(S200)는 준비된 약초 중 필요한 효능이 발휘되게 선택된 약초를 발효하여 추출하고 건조시키는 과정이다.
이에 대하여, 도 2를 참고하여 보다 구체적인 과정을 살펴본다.
도 2에 나타난 바와 같이, 준비된 도라지를 발효 재료로 준비한다(S210).
다음으로, 이와 같이 준비된 도라지는 발효균에 발효시킨다(S220). 본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 도라지는 발효균을 접종시켜 발효시킨다. 상기 발효균은 한약재 발효 산물의 교미교취를 통한 복약순응도를 증대시키고 효과적인 발효를 위해서 사카로마이세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae C-2)를 주모로 사용하는 것이 바람직하다. 또한, 발효과정에서 항온 및 항습을 유지시키기 위해 온도 25 ~ 37 ℃, 습도 70 ~ 80%를 유지하는 것이 바람직하다. 상기의 발효과정은 36 ~ 48시간을 거쳐 완성된다.
다음으로, 발효된 도라지를 가열하여 멸균시킨다(S230). 본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 가열 멸균은 상기 멸균은 110 ~ 130 ℃의 온도 조건, 바람직하게는 121 ± 10 ℃의 온도 조건에서, 30 ~ 40분 동안 수행될 수 있으며, 상기의 온도 조건 및 멸균 시간은 예비실험에서 얻은 조건이다. 즉 1기압 이상에서 30~40분간 증자할 때 시간대비 효율성을 극대화할 수 있었다.
다음으로, 멸균된 상기 도라지를 건조, 분쇄시킨다(S240). 본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 건조는 60 ℃에서 진행되는 것이 바람직하고, 이와 같은 온도 조건은 분무건조기의 수율과 약효 소실을 최소화하는 조건으로 예비실험에서 얻은 조건이다.
다음으로, 건조, 분쇄된 발효 도라지를 분말로 사탕제조에 이용할 수도 있으나, 에탄올로 추출, 농축하여 추출 건고물로 제조한다(S250). 본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 발효 도라지 추출은 상온의 온도 조건에서, 발효 도라지 분말을 70 ~ 90% 에탄올에 5 ~ 10일 동안 침지하며 교반을 수행할 수 있다. 바람직하게는 상기 발효 도라지 추출은 발효 도라지 분말을 80% 에탄올에 7일 동안 침지하여 수행할 수 있다.
다시 도 1을 참조하면, 사탕의 재료를 준비하는 단계(S300)에서는 사탕 제조에 필요한 기제와 부재료를 준비한다. 이에 한정되는 것은 아니나, 사탕 기제로는 설탕 및 물엿이, 부재료는 포도당, 구연산, 멘톨, 비타민 C 등이 준비될 수 있다.
다음 배합하는 단계(S400)에서는 약초 혼합물 100 중량부에 도라지 발효추출물 50 ~ 60 중량부, 생강분말 20 ~ 25 중량부, 곽향분말 20 ~ 25 중량부로 배합될 수 있다. 이에 한정되는 것은 아니나, 본 발명의 일 실시예에 의하면, 설탕 50 중량%, 물엿 40~45 중량%, 발효 도라지 추출물 0.5 ~ 1.0 중량 %, 곽향분말 0.2 ~ 0.4 중량 %, 생강분말 0.2 ~ 0.4중량%, 포도당 8.6 ~ 10.4 중량%, 구연산 0.2 ~ 0.4 중량%, 멘톨 0.2 ~ 0.4 중량%, Vit C 0.1 ~ 0.5 중량%으로 배합될 수 있다.
다음 사탕제조의 공지 기술에 따라 상기 혼합물을 용융하고(S500), 상기 용융 결과물을 성형하고(S600) 및 상기 성형물을 선별하여(S700), 사탕을 제품화한다(S800).
이하에서는 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다 할 것이다.
실시예
1. 발효 도라지 사탕의 제조
도라지, 생강, 및 곽향을 세척 건조하여 약초 혼합물의 원재료를 준비하였다.
다음으로, 도라지를 건조 후 발효균주로서 효모(Saccharomyces cerevisae C-2)를 중량 대비 5%로 접종하여 온도 37℃, 습도 75%를 유지하며 48시간 배양하였다. 발효의 확인은 48시간 배양한 시료에서 총균수를 측정하여 발효를 확인하였다.
발효된 상기 도라지를 121℃에서 30분간 멸균하였다. 멸균된 상기 도라지를 60℃에서 건조시켰다. 상기 건조 도라지를 상온에서 80% 에탄올에서 넣어 추출하여 여과 후 농축하였다. 상기 약초 혼합물 중량기준 각각 20%에 해당량의 건조된 생강, 곽향을 곱게 갈아 분쇄시킨 뒤 교반하여 약재분말을 완성하였다.
다음으로, 상기 약재 분말(생강, 곽향)과 사탕 기제(설탕, 물엿)와 부재료로서 구연산, 포도당, 멘톨, Vitamin C을 배합하였다. 이때 배합은 설탕 50 중량%, 물엿 40~45 중량%, 발효 도라지 추출물 0.5 ~ 1.0 중량 %, 곽향분말 0.2 ~ 0.4 중량 %, 생강분말 0.2 ~ 0.4 중량%, 포도당 8.6 ~ 10.4 중량%, 구연산 0.2 ~ 0.4 중량%, 멘톨 0.2 ~ 0.4 중량%, Vit C 0.1 ~ 0.5 중량%으로 하였다.
다음으로, 상기 배합물을 성형하고, 성형된 성형물을 선별하여 발효 도라지 사탕을 제조하였다.
이와 같이 완성된 발효 도라지 사탕은 발효 도라지 분말을 사용할 경우 백색 바탕에 황갈색의 점이 나타나있는 반투명의 타원형 모양이고, 발효 도라지 추출물을 사용할 경우 미색의 반투명의 원형으로 양자 모두 은은한 멘톨 향이 났다.
상기의 발효 도라지 사탕에 사용된 약초의 배합 의의는 하기의 표 1과 같다.
| 약재명 | 배합의의 |
| 발효도라지 | 항알레르기천식작용, 거담작용, 소염작용 |
| 생강 | 소염작용 |
| 곽향 | 항균작용 |
본 발명에 의한 발효 도라지(
FPR
)의 거담 효과(도 3)
발효도라지 추출물의 거담활성을 측정하기 위하여, 수컷 ICR 마우스를 정상군(normal), 시료 투여군(sample)으로 각각 2군으로 나누었다. 정상군은 살린(saline) 100μL를 경구 투여하였다.
실험군은 도라지 및 발효도라지 추출액을 각 500mg/kg 농도로 경구 투여하였다. 각 군을 경구투여 1시간 경과 후 0.2㎖의 페놀레드 (phenol red) 10mg/kg을 복강 주사하였다. 각 군의 생쥐는 30분 경과 후 디메틸에테르(dimethylether)를 이용하여 마취시키고 복부 대동맥을 절단하여 방혈시킨 후 기관(trachea) 전체를 절제하였다. 분리된 기관을 1㎖의 생리식염수에 넣어 30분 간 조직을 세척 및 분탕 (washing/ vortexing) 한 후 그 세정액을 원심분리(10,000rpm, 5min, 실온)하였다. 분리한 상층액으로부터 0.9㎖를 취하여 이 용액에 0.1㎖의 1M NaOH를 가하여 발색시켰다. 이 용액을 흡광도 546nm에서 측정하여 기도로부터 추출된 페놀레드를 측정하였다. 이를 적출한 기도의 무게로 나누어 기도에 대한 페놀레드의 비율을 구하여 기도에서의 점액분비량을 구하였다.
도 3에 나타난 바와 같이, 대조군을 100으로 간주할 때 500mg/kg 투여군 기준, 생도라지 투여군은 118±2.4, 발효 도라지 투여군은 130.1±4.0으로 나타나 발효 도라지의 거담작용이 10.2% 증가한 것으로 나타났다.
본 발명에 의한 발효 도라지(
FPR
) 염증억제 효과(도 4)
트립신(trypsin, Difico Co.) 20ug/ml 및 시료를 각각 1/15M Phosphate buffer(pH 7.6)에 용해시킨 용액을 각각 40μl 씩 취하여 37℃에서 20분간 가온하였다. 여기에 1.0% casein 용액 0.4ml씩 가한 후 37℃에서 20분간 incubation하고 5% trichloroacetic acid 1mL씩 가하여 반응을 종료시키고 0.05M HCL 40μl를 가한 후 3,000rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 얻었다. 각 상등액 0.5ml씩을 취하고 0.5M NaOH 1ml 씩 가한 후 phenol 시약 0.3ml 씩을 가한 다음 37℃ 수욕 중에서 15분간 incubation하고 다시 원심분리하여 얻은 상등액을 660nm에서 흡광도를 측정하여 억제율을 산출하였다.
도 4에 나타난 바와 같이, 소염작용(트립신 저해 IC50) 비교하면, 도라지 추출물(PR)은 56.87, 발효 도라지 추출물(FRP)는 25.87로 소염작용효과가 119% 증가한 것으로 나타났다.
본 발명에 의한 발효 도라지(
FPR
)의 천식 유도 생쥐 혈중
IgE
생산의 억제효과(도 5)
먼저 난알부민 (ovalbumin, chicken egg albumin; OVA) 1 ㎎을 PBS와 수산화알루미늄 겔(Al(OH)3gel)을 1:1 로 혼합한 용액 100ul를 실험 시작일과 14일째 마우스의 복강내 주사하였다. 마지막 복강 주사 7일 후 즉, 실험시작 21일째 마우스를 15×18×20㎝ 크기의 아크릴 상자 안에 넣고 5% 농도의 OVA 용액을 nebulizer (0.25ml/min)를 이용하여 매일 1일 1회, 1회 30분간 3일 동안 분무함으로써 호흡을 경유한 알레르기성 면역반응을 유도하였다. 실험군으로, 생리식염수만을 투여한 정상군(Normal), 난알부민(OVA) 감작을 시킨 대조군(Control), 면역반응이 유발된 대조군에 도라지 80% 에탄올 추출물(PR)을 500㎎/㎏과 발효 도라지 80% 에탄올 추출물(FPR) 500㎎/㎏ 용량으로 투여한 실험군(PR 500, FPR 500) 및 대조약물로써 항히스타민제인 케토티펜(Ketotifen)을 10㎎/㎏ 복강 투여한 양성대조군(Ketotifen 10)으로 나누었으며, 각 군당 6마리의 마우스를 사용하였다. 길경 및 길경발효추출물과 케토티펜은 OVA 분무전에 투여하였다. 실험 23일째 약물투여 및 OVA 분무 후에 동물을 마취시킨 뒤 심장채혈로 혈액을 수집하였으며, 수집된 혈액은 3,000 rpm에서 15분간 원심 분리함으로써 혈청을 분리한 뒤 -80℃로 보관한 뒤 혈청 분석에 이용하였다.
OVA 처치한 생쥐에서 분리한 혈청에서 IgE를 측정하기 위하여 ELISA kit(Mouse IgE ELISA Set BD)을 사용하여 생산량을 측정하였다. 즉, Capture 항체를 coating 완충용액에 희석하여 microwell에 coating한 후 4℃에서 overnight하였다. 각 well을 3회 washing 완충용액으로 세척한 후 혈청을 100μL씩 분주하였다. 2시간 동안 실온에서 방치한 후 5회 washing 완충용액으로 세척한 다음 antibody Avidin-HRP conjugated 100μL를 처리하고, 1시간 실온에서 방치한 후 다시 세척하였다. 여기에 TMB 기질을 100μL씩 분주하고 암소에서 30분간 방치한 후 50μL의 stop 용액을 처리한 후 ELISA reader 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.
도 5에 나타난 바와 같이 도라지 에탄올 80% 추출물 500mg/kg 투여군 (PR 500)과 발효 도라지 에탄올 80% 추출물 500mg/kg 투여군 (FPR 500) 에서는 각각 18.7% 와 27.3%를 억제하는 것으로 나타나, 발효도라지의 IgE 억제효과가 8.5% 증가한 것으로 나타났다.
본 발명에 의한 발효 도라지(
FPR
)의 천식 유도 생쥐 혈중
SOD
증가효과(도 6)
혈중 SOD농도는 Superoxide Dismutase assay kit(706002, Cayman)를 이용하여 분석하였다. 96-wellplate에 Radical Detector 200㎕씩 넣고 standard 와 Sample 희석액을 10㎕ 넣은 후, Xanthine oxidase를 20㎕를 넣고 잘 혼합한 후, 실온의 shaker 위에 20분간 두었다. Spectrophotometer plate reader를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다. Standard와 Sample을 주어진 공식에 대입하여 혈중 SOD농도를 계산하였다.
도 6에 나타난 바와 같이 도라지 에탄올 80% 추출물 500mg/kg 투여군 (PR 500)과 발효 도라지 에탄올 80% 추출물 500mg/kg 투여군 (FPR 500)에서 SOD 활성이 각각 38.2% 와 40.4%으로 나타나, 발효도라지의 SOD 활성이 도라지에 비해 2.2% 증가한 것으로 나타났다.
본 발명에 의한 발효 도라지(
FPR
)의 천식 유도 생쥐 혈중
MDA
감소효과(도 7)
혈중 Malondialdehyde(MDA)는 Enzyme-linked Immunosorbent assay kit(E90597Ge, UscnLife)를 이용하여 분석하였다. 96-wellplate에 Sample과 Standard 희석액 50㎕에 Detection Reagent A 용액 50㎕를 넣고 37℃에서 1시간 반응시켰다. Wash buffer로 3회 세척한 후, Detection Reagent B 용액을 100㎕ 씩 넣고 37℃에서 30분간 반응시켰다. Wash buffer로 5회 세척한 후, 90㎕의 Substrate Solution을 각각 넣고 빛을 차단하여 37℃에서 20분간 반응시켰다. 마지막으로 50㎕의 Stop solution으로 반응을 중지하고, Spectrophotometer plate reader를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정한다. Sample의 혈중 MDA농도는 Standard curve에 준하여 계산하였다.
도 7에 나타난 바와 같이 도라지 에탄올 80% 추출물 500mg/kg 투여군 (PR 500)과 발효 도라지 에탄올 80% 추출물 500mg/kg 투여군 (FPR 500)에서 혈중 MDA 생성량이 각각 28.1% 와 23.9%으로 나타나, 발효도라지의 MDA 저해활성이 도라지에 비해 4.2% 증가한 것으로 나타났다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였으나, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 균등물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
Claims (13)
- 도라지에 발효균을 접종하여 발효시킨 후 얻은 발효 도라지 추출물을 포함하는 약초 혼합물; 및
설탕, 물엿 또는 이의 혼합물을 포함하고,
상기 약초 혼합물은 약초 혼합물 100 중량부에 도라지 발효추출물 50 ~ 60 중량부, 생강분말 20 ~ 25 중량부, 및 곽향분말 20 ~ 25 중량부를 포함하는 천식 또는 객담 개선용 발효 도라지 사탕 조성물. - 삭제
- 삭제
- 도라지에 발효균을 접종하여 발효시키는 단계;
상기 발효된 도라지를 멸균 후 건조한 후 분쇄하여 발효 도라지 분말을 얻는 단계;
상기 발효 도라지 분말에 설탕, 물엿 또는 이의 혼합물을 혼합하여 사탕으로 제조하는 단계; 및
상기 발효 도라지 분말에 생강 및 곽향 분말을 혼합하여 약초 혼합물을 얻는 단계를 포함하고,
상기 약초 혼합물은 약초 혼합물 100 중량부에 도라지 발효 추출물 50 ~ 60 중량부, 생강분말 20 ~ 25 중량부, 및 곽향분말 20 ~ 25 중량부를 포함하는 발효 도라지 사탕의 제조방법. - 삭제
- 삭제
- 제4항에 있어서, 상기 발효 도라지 분말을 에탄올에 침지하여 추출하고 여과한 뒤 농축한 발효 도라지 농축액으로부터 건고물을 얻는 단계를 더 포함하는 발효 도라지 사탕의 제조방법.
- 제7항에 있어서,
상기 발효 도라지 추출은 상온의 온도 조건에서, 발효 도라지 분말을 70 ~ 90% 에탄올에 5 ~ 10일 동안 침지하며 교반을 수행하는 발효 도라지 사탕의 제조방법. - 삭제
- 삭제
- 제4항에 있어서,
상기 발효는 25 ~ 37 ℃, 습도 70 ~ 80%를 유지하며, 36 ~ 48시간 동안 수행하는 발효 도라지 사탕의 제조방법. - 제4항에 있어서,
상기 멸균은 110 ~ 130 ℃의 온도 조건에서, 30 ~ 40분 동안 수행하는 발효 도라지 사탕의 제조방법. - 제4항, 제7항, 제8항, 제11항 및 제12항 중 어느 한 항에 따른 방법에 의해 제조된 발효 도라지 사탕.
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