KR101686679B1 - 퀴나졸린 유도체 - Google Patents

Abstract

본 발명은 벤조퓨란 치환체를 가지는 퀴나졸린 유도체에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이 화합물들 중 하나를 이용하여 혈관신생관련 질병을 치료하는 방법을 기재하고 있다.

Description

퀴나졸린 유도체{QUINAZOLINE DERIVATIVES}

본 발명은 키나아제 삽입 도메인 수용체(kinase insert domain receptor)의 활성을 저해하는 퀴나졸린 화합물에 관한 것이다.

혈관신생(angiogenesis)은 이미 존재하고 있는 맥관(vessel)으로부터 새로운 혈관이 자라는 생리학적 과정이다. 그것은 건강한 피험자가 상처를 회복, 즉 손상(injury) 또는 상해(insult) 후 조직에 혈류를 복구시키기 위하여 일어나는 것이다.

과도한 혈관신생은 암(cancer), 노화관련 황반변성(age-related macular degeneration) 및 만성 염증성 질병과 같은 어떤 병리학적 질환에 의하여 유발될 수 있다. 그 결과, 새로운 혈관들은 병든 조직 및 파괴된 정상 조직들에 혈류를 공급한다. 암에서, 새로운 혈관들은 또한 종양 세포가 다른 장기에서 순환기관 및 로지(lodge) 내로 탈출할 수 있게 한다.

혈관내피 성장인자(vascular endothelial growth factor; VEGF), 동종이량체 당단백질(homodimeric glycoprotein) 및 그것의 수용체들, 예를 들어, 키나아제 삽입 도메인 수용체(kinase insert domain receptor; KDR)는 중요한 혈관신생 경로를 구성한다. 연구들은 KDR의 저해가 내피 세포의 아포토시스(apoptosis)를 일으켜 혈관신생을 억제함을 보여주었다. 루빈 등을 참조하라(Rubin M. Tuder, Chest, 2000; 117-281). KDR 저해제는 따라서 혈관신생-관련 질병을 치료하기 위한 잠재적 후보물질이다.

본 발명은 퀴나졸린 화합물이 키나아제 삽입 도메인 수용체를 저해하는 효과가 있다는 것을 발견하여 본 발명을 완성하였다.

상기와 같은 문제를 해결하기 위하여, 본 발명은 일반식 (I)의 퀴나졸린 화합물을 제공한다.

본 발명은 또한 유효량의 상기 일반식 (I)의 퀴나졸린 화합물을 이를 필요로 하는 피험자에게 투여함으로써 혈관신생을 저해하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 혈관신생관련 질병(예를 들어, 암, 노화관련 황반변성 또는 만성 염증성 질환)을 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명의 퀴나졸린 화합물은 KDR과 접촉할 때 이 수용체의 활성을 저해할 수 있으므로 혈관신생을 저해하고 혈관신생관련 질병을 가지는 피험자를 치료하는데 사용될 수 있다.

요약

본 발명은 다수의 퀴나졸린 화합물들이 KDR의 활성을 저해한다는 발견에 기초하고 있다.

본 발명의 하나의 양상은 하기 일반식 (I)의 퀴나졸린 화합물에 관한 것이며,

[일반식 I]

각각의 R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉ 및 R₁₀은 독립적으로 수소, 할로(halo), 니트로(nitro), 아미노(amino), 시아노(cyano), 하이드록시(hydroxy), 알킬(alkyl), 알키닐(alkynyl), 아릴(aryl), 시클로알킬(cycloalkyl), 헤테로시클로알킬(heterocycloalkyl), 헤테로아릴(heteroaryl), 알콕시(alkoxy), 알킬티오(alkylthio), 알킬카르보닐(alkylcarbonyl), 카르복시(carboxy), 알콕시카르보닐(alkoxycarbonyl), 카르보닐아미노(carbonylamino), 술포닐아미노(sulfonylamino), 아미노카르보닐(aminocarbonyl) 또는 아미노술포닐(aminosulfonyl)이고, 또는 R₃ 및 R₄는 이들이 부착된 탄소원자와 함께 N, O 및 S로부터 선택된 1-3 헤테로 원자를 선택적으로 포함하는 4- 내지 7-원(membered)의 포화된 고리, 불포화된 고리 또는 방향족 고리를 형성하고, X는 O, S 또는 NR이며, 여기에서 R은 H, 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 헤테로아릴, 알킬카르보닐, 알콕시카르보닐, 아미노카르보닐 또는 아미노술포닐이고, Z는 N 또는 C-CN이다.

상기 기재된 화합물들은 하나 또는 그 이상의 하기 특징들을 가질 수 있다: X는 O, NH 또는 N-CH₃이고; R₇은 -C(O)NR_aR_b이고, 각각 R_a 및 R_b는 독립적으로 H, 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴이거나, R_a 및 R_b는 질소 원자와 함께 1-3 헤테로원자를 포함하는 3-8원 고리(3-8 membered ring)를 나타내며; R₆는 알킬(예를 들어, 메틸)이고; 또는 각각의 R₃ 및 R₄는 알콕시(예를 들어, 메톡시)이다. 상기 화합물들 중 하나의 서브셋(subset)에서, 각각의 R_a 및 R_b는 독립적으로 H, 알킬(예를 들어, 메틸), 또는 시클로알킬(예를 들어, 시클로프로필)이다.

본원에서 상기 용어 "알킬(alkyl)"은 1-10의 탄소 원자를 포함하는 직쇄 또는 분지쇄의 탄화수소를 말한다. 알킬기의 예는 메틸(methyl), 에틸(ethyl), n-프로필(n-propyl), i-프로필(i-propyl), n-부틸(n-butyl), i-부틸(i-butyl) 및 t-부틸(t-butyl)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 상기 용어 "알콕시(alkoxy)"는 -O-알킬을 말한다.

본원에서 상기 용어 "알케닐(alkenyl)"은 하나 또는 그 이상의 C=C 이중결합을 포함하는 C_{2 -10} 직쇄 또는 분지쇄의 탄화수소를 말한다. 알케닐기의 예는 비닐(vinyl), 2-프로페닐(2-propenyl) 및 2-부테닐(2-butenyl)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

본원에서 상기 용어 "알키닐(alkynyl)"은 하나 또는 그 이상의 C≡C 삼중결합을 포함하는 C_{2 -10} 직쇄 또는 분지쇄의 탄화수소를 말한다. 알키닐기의 예는 에티닐(ethynyl), 2-프로피닐(2-propynyl) 및 2-부티닐(2-butynyl)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

상기 용어 "아릴(aryl)"은 6-탄소 모노시클릭(monocyclic), 10-탄소 바이시클릭(bicyclic), 14-탄소 트리시클릭(tricyclic) 방향족 고리 시스템을 말하며, 여기에서 각 고리는 1 내지 4개의 치환체를 가진다. 아릴기의 예는 페닐(phenyl), 나프틸(naphthyl) 및 안트라세닐(anthracenyl)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

상기 용어 "시클로알킬(cycloalkyl)"은 3 내지 12개의 탄소를 가지는 포화되고 부분적으로 불포화된 시클릭 탄화수소를 말한다. 시클로알킬기의 예는 시클로프로필(cyclopropyl), 시클로부틸(cyclobutyl), 시클로펜틸(cyclopentyl), 시클로펜테닐(cyclopentenyl), 시클로헥실(cyclohexyl), 시클로헥세닐(cyclohexenyl), 시클로헵틸(cycloheptyl) 및 시클로옥틸(cyclooctyl)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

상기 용어 "헤테로아릴(heteroaryl)"은 하나 또는 그 이상의 (O, N 또는 S와 같은) 헤테로원자를 가지는 방향족 5-8원 모노시클릭, 8-12원 바이시클릭, 또는 11-14원 트리시클링 고리 시스템을 말한다. 헤테로아릴기의 예는 피리딜(pyridyl), 퓨릴(furyl), 이미다졸릴(imidazolyl), 벤지미다졸릴(benzimidazolyl), 피리디디닐(pyrimidinyl), 티에닐(thienyl), 퀴놀리닐(quinolinyl), 인돌릴(indolyl) 및 티아졸릴(thiazolyl)을 포함한다.

상기 용어 "헤테로시클로알킬(heterocycloalkyl)"은 하나 또는 그 이상의 (O, N 또는 S와 같은) 헤테로원자를 가지는 비방향족 3-8원 모노시클릭, 8-12원 바이시클릭 또는 11-14원 트리시클릭 고리 시스팀을 말한다. 헤테로시클로알킬기의 예는 피페라지닐(piperazinyl), 피롤리디닐(pyrrolidinyl), 디옥사닐(dioxanyl), 모폴리닐(morpholinyl) 및 테트라하이드로퓨라닐(tetrahydrofuranyl)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 헤테로시클로알킬은 단당류(saccharide) 고리, 예를 들어 글루코실(glucosyl)일 수 있다.

본원에서 언급된 알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 알콕시는 치환 및 비치환된 부분들(moieties) 모두를 포함한다. 치환체의 예는 할로(halo), 하이드록실(hydroxyl), 아미노(amino), 시아노(cyano), 니트로(nitro), 머캅토(mercapto), 알콕시카르보닐(alkoxycarbonyl), 아미도(amido), 카르복시(carboxy), 알칸술포닐(alkanesulfonyl), 알킬카르보닐(alkylcarbonyl), 카르바미도(carbamido), 카르바밀(carbamyl), 카르복실(carboxyl), 티오우레이도(thioureido), 티오시아나토(thiocyanato), 술폰아미도(sulfonamido), 알킬(alkyl), 알케닐(alkenyl), 알키닐(alkynyl), 알킬옥시(alkyloxy), 아릴(aryl), 헤테로아릴(heteroaryl), 시클로알킬(cycloalkyl), 헤테로시클로알킬(heterocycloalkyl)을 포함하지만 이에 제한되지 않으며, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알킬옥시, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬 및 헤테로시클로알킬은 더 치환될 수 있다.

상기에 기재된 퀴나졸린 화합물은 그것들의 약제학적으로 허용가능한 염, 용매 화합물(solvate) 및 적용할 수 있다면 프로드러그를 포함한다.

본 발명의 화합물의 예는 하기와 같이 나타내진다:

본 발명의 다른 양상은 유효량의 상기에 기재된 것과 같은 일반식 (I)의 퀴나졸린 화합물을 이를 필요로 하는 피험자에게 투여함으로써 혈관신생을 저해하는 방법에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 양상은 혈관신생관련 질병(예를 들어, 암, 노화관련 황반변성 또는 만성 염증성 질환)을 치료하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 유효량의 하나 또는 그 이상의 본 발명의 퀴나졸린 화합물을 혈관신생관련 질병을 가지는 피험자에게 투여하는 것을 포함한다. 암의 예는 폐암(lung cancer), 대장암(colon-cancer), 유방암(breast cancer), 난소암(ovarian cancer), 고환암(prostate cancer), 위암(stomach cancer), 신장암(kidney cancer), 간암(liver cancer), 뇌암(brain cancer), 골수암(bone cancer) 및 백혈병(leukemia)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 만성 염증성 질환의 예는 (크론병(Crohn's disease) 및 궤양성 대장염(ulcerative colitis)과 같은) 염증성 장질환(inflammatory bowel disease), 류마티스성 관절염(rheumatoid arthritis), 루프스(lupus), 건선(psoriasis) 및 당뇨병(diabetes mellitus)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

또한 본 발명의 범위 내에 (1) 혈관신생관련 질병(예를 들어, 암 또는 노화관련 황반변성 또는 만성 염증성 장질환과 같은)을 치료하는데 사용하기 위한, 하나 또는 그 이상의 상기에 기재된 퀴나졸린 화합물 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물, 및 (2) 상기 질병을 치료하기 위한 약제를 제조하기 위한 하나 또는 그 이상의 퀴나졸린 화합물의 용도가 있다.

본 발명의 상세한 하나 또는 그 이상의 구현들을 하기 상세한 설명에 설명한다. 본 발명의 다른 특징, 주제 및 이점들은 상세한 설명 및 청구항들로부터 명백해질 것이다.

상세한 설명

본 발명의 퀴나졸린 화합물은 당업계에 잘 알려진 방법에 의해 상용의 출발 물질로부터 합성될 수 있다. 예를 들면, 하기의 도식 1에 나타낸 것과 같이, 그것은 본 발명의 화합물을 얻기 위하여 벤조퓨란(benzofuran) 화합물과 적절한 4-클로로-퀴나졸린 유도체(4-chloro-quinazoline derivative)가 결합할 수 있다.

[도식 1]

따라서, 얻어진 상기 화합물은 본 발명의 다른 화합물을 제공하기 위하여 그것들의 말단 위치(peripheral position)에서 더 변경될 수 있다.

원하는 퀴나졸린 화합물을 합성하는데 유용한 합성 화학의 변형들이 기재되어 있다(예를 들어, R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3^rd Ed., John Wiley and Sons (1999); L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); and L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995) 및 그것들의 후속판).

사용하기 전에, 상기 화합물들은 컬럼 크로마토그래피(column chromatography), HPLC(high performance liquid chromatography), 결정화(crystallization) 또는 다른 적절한 방법에 의해 정제될 수 있다.

본 발명의 퀴나졸린 화합물은 KDR과 접촉할 때 이 수용체의 활성을 저해한다. 따라서, 유효량의 하나 또는 그 이상의 이 화합물들은 혈관신생을 저해하고 혈관신생관련 질병을 가지는 피험자를 치료하는데 사용될 수 있다.

상기 용어 "유효량(an effective amount)"는 피험자에게 의도된 효과를 제공하기 위해 요구되는 퀴나졸린 화합물의 양을 말한다. 유효량은 투여 방법, 첨가제 사용량 및 다른 양물과의 병용 가능성에 따라 당업자에 의해 인식되므로 변경될 수 있다. 상기 용어 "치료(treating)"는 혈관신생관련 질병을 가지거나, 상기 질병의 증상을 가지거나, 상기 질병에 걸리기 쉬운 성향을 가지는 피험자에게 상기 질병을 치료하고(cure), 치유하고(heal), 완화하고(alleviate), 경감하고(relieve), 제거하고(alter), 고치고(remedy), 개선하고(ameliorate, improve) 또는 질병에 영향을 주기 위하여, 하나 또는 그 이상의 상기 기재된 퀴나졸린 화합물을 투여하는 것을 말한다.

이 방법을 수행하기 위하여, 본 발명의 하나 또는 그 이상의 퀴나졸린 화합물을 가지는 조성물은 경구적으로(orally), 비경구적으로(parenterally), 흡입 스프레이에 의해 또는 이식된 저장소(implanted reservoir)를 통하여 투여될 수 있다. 본원에 사용된 것으로서 상기 용어 "비경구적(parenterally)"은 피하(subcutaneous), 피내(intracutaneous), 정맥내(intravenous), 근육내(intramuscular), 관절강내(intraarticular), 동맥내(intraarterial), 활액막내(intrasynovial), 흉골내(intrasternal), 척추강내(intrathecal), 병변내(intralesional) 및 두개내(intracranial) 주사 또는 주입 기술을 포함한다.

경구 조성물은 정제(tablets), 캡슐(capsules), 에멀전(emulsions) 및 수성 현탁액(aqueous suspensions), 분산액(dispersion) 및 용액(solutions)을 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 경구적으로 허용가능한 투약 형태일 수 있다. 정제를 위해 일반적으로 사용되는 담체는 락토오스(lactose) 및 옥수수 전분(corn starch)을 포함한다. 마그네슘 스테아레이트(magnesium stearate)와 같은 윤활제(lubricating agents) 또한 전형적으로 정제에 첨가된다. 캡슐 형태로 경구 투여하는데 유용한 희석제는 락토오스와 건조 옥수수 전분을 포함한다. 수성 현탁액 또는 에멀전이 경구로 투여되는 경우, 활성 성분은 유화제(emulsifying agent) 또는 현탁제(suspending agents)와 함께 오일상(oil phase)으로 현탁되거나 용해될 수 있다. 원한다면, 어떤 감미료(sweetening), 향료(flavoring) 또는 착색제(coloring agent)가 첨가될 수 있다.

멸균된 주사가능한 조성물(예를 들어, 수성 또는 유성 현탁액)은 적절한 분산제(dispersing agents) 또는 (예를 들어, 트윈 80(Tween 80)과 같은) 습윤제(wetting agents) 및 현탁제(suspending agents)를 사용하여 당업계에 공지된 기술에 따라 제형화할 수 있다. 상기 멸균된 주사가능한 제조물은 또한 예를 들어 1,3-부탄디올 용액과 같은 무독성의 비경구적으로 허용가능한 희석제 또는 용매에 용해된 멸균된 주사가능한 용액 또는 현탁액일 수 있다. 허용가능한 비히클(vehicles) 및 용매들 중에서 사용될 수 있는 것은 만니톨(mannitol), 물(water), 링거액(Ringer's solution) 및 등장성 염화나트륨 용액(isotonic sodium chloride solution)이다. 게다가, 멸균된 고정유(fixed oil)는 통상적으로 용매 또는 현탁 매질(medium)(예를 들어, 합성 모노- 또는 디-글리세라이드)로서 사용된다. 올레산(oleic acid) 및 그것의 글리세라이드 유도체들과 같은 지방산은 특히 그것들의 폴리옥시에틸화된 형태에서 올리브 오일 또는 피마자유와 같은 중성의 약제학적으로 허용가능한 오일과 같이 주사가능한 제조물에 유용하다. 이러한 오일 용액 또는 현탁액은 또한 장쇄 알콜 희석제 또는 분산제(dispersant), 또는 카르복시메틸 셀룰로오스(carboxymethyl cellulose) 또는 유사한 분산제를 포함할 수 있다.

흡입 조성물은 약제학적 제형의 당업계에 잘 알려진 기술에 따라 제조될 수 있으며, 당업계에 공지된 벤질 알콜 또는 다른 적절한 방부제, 생체이용율을 강화시키기 위한 흡수 촉진제, 플루오르화탄소(fluorocarbon) 및/또는 다른 용해제 또는 분산제를 사용하여 식염수로서 제조될 수 있다.

국부(topical) 제형은 오일, 크림, 로션, 연고 등의 형태로 제형화될 수 있다. 상기 조성물을 위한 적절한 담체는 식물성 또는 미네랄 오일, 백색 페트롤라툼(white petrolatum)(백색의 부드러운 파라핀), 분지쇄 지방 또는 오일, 동물성 지방 및 (C12보다 큰) 고분자량 알콜을 포함한다. 바람직한 담체는 활성 성분이 녹을 수 있는 것이다. 유화제, 안정화제, 보습제(humectants) 및 항산화제(antioxidants) 또한 원한다면 색 또는 향을 첨가하는 약제에 더하여 포함될 수 있다. 부가적으로, 이 국부 제형에 경피 침투 강화제(transdermal penetration enhancers)가 사용될 수 있다. 이러한 강화제의 예는 미국 등록특허번호 제3,989,816호 및 제4,444,762호에서 찾을 수 있다. 크림은 바람직하게는 아몬드 오일과 같은 소량의 오일에 용해된 혼합 활성 성분이 혼합되는 미네랄 오일, 자가유화 밀랍(self-emulsifying beewax) 및 물의 혼합으로부터 제형화된다. 이러한 크림의 예는 약 40부의 물, 약 20부의 밀랍, 약 40부의 미네랄 오일 및 1부의 아몬드 오일을 포함하는 것이다. 연고는 따뜻하고 부드러운 파라핀과 함께 아몬드 오일과 같은 식물성 오일에 활성 성분의 용액을 혼합하고, 상기 혼합물을 냉각시킴으로써 제형화될 수 있다. 이러한 연고의 예는 약 30 중량%의 아몬드 오일 및 약 70 중량%의 백색의 부드러운 파라핀을 포함하는 것이다.

약제학적 조성물에서 담체는 제형의 활성 성분에 적합하고(바람직하게는, 그것을 안정화시킬 수 있고) 치료될 피험자에 해롭지 않아야 한다는 점에서 "허용가능(acceptable)" 해야만 한다. 예를 들면, (하나 또는 그 이상의 활성 퀴나졸린 화합물의 추출물과 함께 특이적이고 더욱 가용성인 복합체를 형성하는) 시클로덱스트린(cyclodextrins)과 같은 가용화제는 활성 성분의 운반을 위한 약제학적 첨가제로서 사용될 수 있다. 다른 담체의 예는 콜로이드성 실리콘 디옥사이드(colloidal silicon dioxide), 마그네슘 스테아레이트(magnesium stearate), 셀룰로오스(cellulose), 소디움 라우릴 설페이트(sodium lauryl sulfate) 및 D&C Yellow #10을 포함한다.

KDR의 활성을 저해하거나 VEGF의 활성을 저해하는 데 있어서 상기 기재된 퀴나졸린 화합물의 효능을 사전 평가하기 위하여 적절한 시험관내(in vitro) 검정이 사용될 수 있다. 상기 화합물들은 시험관내 검정에 의하여 혈관신생관련 질병을 치료하는데 있어서의 그것의 효능을 위하여 더 시험될 수 있다. 예를 들면, 상기 화합물들은 암을 가진 동물(예를 들어, 마우스 모델)에 투여될 수 있고, 그 후 그것의 치료학적 효과가 평가된다. 그 결과에 기초하여, 적절한 투약 범위 및 투여 방법 또한 결정될 수 있다.

추가적인 언급 없이, 상기 서술은 본 발명을 충분히 가능하게 한다. 따라서, 하기의 특정 예들은 단지 실례로서만 해석되며, 어떠한 방법으로도 나머지 명세서를 제한하지 않는다.

실시예 1 : 6-(6,7- 디메톡시퀴나졸린 -4- 일옥시 )-N,2- 디메틸벤조퓨란 -3- 카르복사마이드 (6-(6,7- dimetoxyquinazolin -4- yloxy )-N,2- dimethylbenzofuran -3-carboxamide)의 합성

2ml의 CH₃CN에 용해시킨 4-클로로-6,7-디메톡시퀴나졸린(4-choloro-6,7-dimethoxyquinazoline)(1당량) 용액에 6-하이드록시-N,2-디메틸벤조퓨란-3-카르복사마이드(6-hydroxy-N,2-dimethylbenzofuran-3-carboxamide)(1당량) 및 K₂CO₃(1.5당량)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 10시간 동안 교반하면서 환류시켰다. 용매를 증발시킨 후, 잔류물을 물로 세척하고 MgSO₄로 건조시킨 후, 여과하고 농축시키고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 85%의 수율로 얻었다.

¹H NMR (DMSO-d₆, 400MHz) δ:2.49 (s, 3H), 2.81 (d, J=8.4 Hz, 3H,10), 3.97 (s, 3H), 3.98 (s, 3H), 7.24 (dd, J=2.0, 8.4 Hz, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.61 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.79 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.96 (m, 1H), 8.52 (s, 1H).

MS(m/e): 394.1 (M+1).

실시예 2 : 6-(6,7- 디메톡시퀴나졸린 -4- 일아미노 )-N,2- 디메틸벤조퓨란 -3- 카르복사마이드 (6-(6,7- dimethoxyquinazolin -4- ylamino )-N,2- dimethylbenzofuran -3-carboxamide)의 합성

이 화합물은 실시예 1에 기재된 것과 유사한 방법으로 제조하였다.

¹H NMR (DMSO-d₆, 400MHz)δppm: 2.74 (s, 3H), 2.83 (d, J=8.4 Hz, 3H), 3.95 (s, 3H), 3.98 (s,3H), 7.20 (s, 1H), 7.60 (dd, J=8.4, 2.0 HZ, 1H), 7.75 (d, J=8.4 HZ, 1H), 7.89 (s, 2H), 8.22 (d, J=2 Hz, 1H), 8.50 (s, 1H), 9.65 (s, 1H).

MS(m/e): 393.15 (M+l).

실시예 3 : N-(2-(디메틸아미노)에틸)-6-(6,7- 디메톡시퀴나졸린 -4- 일옥시 )-2-메 틸벤조퓨 란-3- 카르복사마이드 (N-(2-( dimethylamino ) ethyl )-6-(6,7-dimethoxyquinazolin-4-yloxy)-2-methylbenzofuran-3-carboxamide)의 합성

이 화합물은 실시예 1에 기재된 것과 유사한 방법으로 제조하였다.

¹H NMR (DMSO-de, 400 MHz): 8.54 (s, 1H), 7.85 (bs, 1H), 7.84-7.83 (d, J =2.8 Hz, 1H ), 7.66 (s, 1H ), 7.60 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.29-7.27 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.00 (d, J= 2.8 Hz, 6H), 2.67 (s, 3H), 2.64-2.51 (m, 8H), 1.02 (bs, 6H).

MS (m/e): 479.5 (M+l).

실시예 4 : N- 시클로프로필 -6-(6,7- 디메톡시퀴나졸린 -4- 일옥시 )-2- 메틸벤조퓨란 -3- 카르복사마이드 (N- cyclopropyl -6-(6,7- dimethoxyquinazolin -4- yloxy )-2-methylbenzofuran-3-carboxamide)의 합성

이 화합물은 실시예 1에 기재된 것과 유사한 방법으로 제조하였다.

¹U NMR (DMSO-de, 400 MHz): 8.53 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.72-7.70 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.63-7.61 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.26-7.24 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.00(d, J= 2.8 Hz, 6H), 2.88 (bs, 1H), 2.61 (s, 3H), 0.74-0.73 (d, J= 5.6 Hz, 2H), 0.63 (bs, 2H).

MS (m/e): 420.4 (M+1).

실시예 5 : 6-(6,7- 비스(2-메톡시에톡시)퀴나졸린 -4- 일옥시 )-N,2- 디메틸벤조퓨란 -3- 카르복사마이드 (6-(6,7- bis (2- methoxyethoxy )quinazolin-4- yloxy )-N,2-dimethylbenzofuran-3-carboxamide)의 합성

이 화합물은 실시예 1에 기재된 방법에 따라 제조하였다.

MS(m/e): 482.2 (M+l).

실시예 6 : KDR 키나아제 활성의 저해

Z'-LYTE^TM Tyr1 펩티드 어세이 킷(Invitrogen, Carlsbad, CA, U.S.A., Cat. PV3190)을 사용하여 테스트 화합물에 의한 KDR 키나아제 활성의 저해를 평가하였다.

제조사에 의해 추천된 방법에 따라 상기 검정을 수행하였다.

간단하게는, DMSO(10mM)에 용해시킨 각 테스트 화합물을 8% DMSO를 포함하는 증류수를 사용하여 1:4로 희석하였다. 검정색 384-웰 플레이트(black 384-well plate; Thermolabsystems, Cambridge, U.K., Cat. 7805)에서 2.5μl/웰로 상기 용액을 테스트 웰에 놓고, 3개는 대조군 웰(C1, C2 및 C3)로 하였다. 쿠마린-플루오르세인(coumarin-fluorescein)으로 이중표지된 펩티드 기질인 상기 Z'-LYTE^TM Tyr1 펩티드를 KDR 촉매성 도메인(catalytic domain)(Invitrogen, Cat. PV3660)과 함께 혼합하였다. 5μl의 포스포르(phosphor)-Tyr1 펩티드를 C3 웰에 첨가하였다. 2.5μl의 50μM ATP를 테스트 화합물 및 C2 웰에 첨가하였고, 2.5μl의 1.33 × 키나아제 버퍼(1 × buffer : 50mM HEPES, pH 7.5, 0.01% Brij-35, 5mM MgCl₂, 5mM MnCl₂, 및 1mM EGTA)를 C1 및 C3 웰에 첨가하였다. 상기 플레이트를 1000rpm으로 짧게 돌려 상기 용액이 웰의 바닥까지 잘 혼합되도록 한 후, 밀봉하여 1시간 동안 25℃에서 250rpm으로 흔들어주었다.

제조사에 의해 제공된 설명서에 따라 발색시약(development reagent)을 1:128로 희석하였다. 5μl의 희석된 발색시약을 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 1000rpm으로 돌려 상기 용액이 웰의 바닥까지 잘 섞이도록 한 후, 밀봉하고 2시간 동안 25℃에서 250rpm으로 흔들어주었다.

5μl의 정지시약을 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 1000rpm으로 돌린 후, 밀봉하여 2분간 25℃에서 250rpm으로 흔들어주었다. 여기(excitation) 400nm/방출 445nm 및 520nm에서, 각 웰에서의 용액의 형광 방출을 VictorTM3 마이크로-플레이트 리더(VictorTM3 micro-plate reder)로 측정하였다.

방출비(emission ratio) 및 인산화(phosphrylation; "Phos") 퍼센트를 하기 식으로 계산하였다:

여기에서, C_{100 %} = 100% 인산화 대조군의 평균 쿠마린 방출 시그널

C_{0 %} = 0% 인산화 대조군의 평균 쿠마린 방출 시그널

F_100% = 100% 인산화 대조군의 평균 플루오르세인 방출 시그널

F_0% = 100% 인산화 대조군의 평균 플루오르세인 방출 시그널

저해율(inhibition ratio)은 하기와 같이 계산하였다:

저해율% = (C2 웰에서의 인산화 - 테스트 웰에서의 인산화)/(C2 웰에서의 인산화) × 100%

IC₅₀(KDR 키나아제 활성을 50%로 저해하기 위해 요구되는 농도) 값을 저해율에 기초하여 계산하여 얻었다.

그 결과는 화합물 1-5가 KDR의 활성을 저해함을 보여주었다. 테스트된 화합물은 0.001 내지 10μM 범위의 IC₅₀ 값을 가진다.

다른 구현들

본 명세서에 기재된 모든 특징들은 임의의 조합으로 결합될 수 있다. 본 명세서에 기재된 각 특징은 동일하고, 동등하거나 유사한 목적을 제공하는 대안적인 특징으로 대체될 수 있다. 따라서, 특별히 언급하지 않는 한, 기재된 각 특징은 일반적인 일련의 동등하거나 유사한 특징의 예일 뿐이다.

상기 서술로부터, 당업자들은 본 발명의 필수 특성들을 쉽게 확인할 수 있으며, 그것들의 의도 및 범위를 벗어나는 일 없이 그것을 다양한 용도 및 조건에 대하여 개조하기 위하여 발명을 다양하게 변화 및 변경할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물에 대하여 구조적으로 유사한 화합물들이 만들어질 수 있고, 본 발명을 실행하기 위하여 사용될 수 있다. 따라서, 다른 구현들 또한 청구항 내에 있다.

Claims (26)

1. 

   및

   

   로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염.
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23. 제1항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 암(cancer), 노화관련 황반변성(age-related macula degeneration) 또는 만성 염증성 질환(chronic inflammatory disease)으로부터 선택되는 혈관신생관련 질병을 치료하기 위한 약제학적 조성물.
24. 삭제
25. 삭제
26. 제23항에 있어서,
    유효량의 상기 제1항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염은 혈관 내피 성장인자(vascular endothelial growth factor)와 접촉하여 혈관 내피 성장인자의 활성을 저해하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.