KR101663576B1 - phloretine sulfonate and compositions for improving skin conditions comprising phloretine sulfonate - Google Patents
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Abstract
본 발명은 플로레틴 술폰산염(Phloretin sulfonate) 및 이를 유효성분으로 포함하는 피부상태 개선용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 플로레틴 술폰산염은 플로레틴에 비하여 친수성이 우수한 물질로서 자외선 및 산화적 스트레스로부터 피부 세포를 보호하는 효과 및 멜라닌 생성 증진 효과가 매우 우수하며, 세포독성 및 피부 부작용이 없으므로, 자외선에 의한 피부 보호 용도 및 피부저색소증 치료, 예방 및 개선을 위한 피부상태 개선용 조성물로서 의약품, 화장품, 및 식품에 유용하게 사용할 수 있다.The present invention relates to a phloretin sulfonate and a composition for improving skin condition comprising the same as an effective ingredient. The floretine sulfonate of the present invention is superior in hydrophilicity to floretine, and has excellent effect of protecting skin cells from ultraviolet rays and oxidative stress and enhancing melanin production, and has no cytotoxicity and skin side effects. Therefore, A composition for improving the skin condition for the purpose of treatment, prevention and improvement of hypocholesterolemia and skin hypersensitivity. The composition can be useful for medicines, cosmetics, and foods.
Description
본 발명은 신규한 플로레틴 유도체에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 제품 안정성이 우수하고 피부에 대한 부작용 없이 안전하게 사용될 수 있으며 자외선 보호효과, 저색소증 개선효과가 우수한 플로레틴 술폰산염 및 이를 유효성분으로 포함하는 조성물에 관한 것이다.
More particularly, the present invention relates to novel phloretin sulfonic acid salts which are excellent in product stability and can be safely used without adverse effects on the skin and have excellent ultraviolet protection effect and hypochromatosis improving effect, ≪ / RTI >
21세기에 들어서면서 모든 분야에서 천연유래의 물질에 대한 요구가 증가하고 있다. 그러나 천연에서 얻어진 대부분의 물질은 기존 유기합성으로 얻어진 물질들보다 대체로 색이나 향이 좋지 않고 불안정하며 물질 자체도 불안정하여 장기보관이 어려워 상업화하기 어려운 경우가 대부분이다. 특히 천연성분 중 일부는 의약, 생활용품 및 화장품 등으로 적용 시 물이나 적정용매에 잘 녹지 않거나, 시간이 지나면서 침전되거나 녹았을 때 활성을 잃어버리는 실활성 문제 때문에 상업화하기 어려웠다.
In the 21st century, there is an increasing demand for materials of natural origin in all fields. However, most of the materials obtained from natural sources are generally unstable due to poor color or aroma, and unstable materials themselves. Particularly, some of the natural ingredients are difficult to commercialize because they are insoluble in water or an appropriate solvent when applied to medicines, household products, and cosmetics, or are inactivated when they are precipitated or melted over time.
대부분의 생활용품 및 화장품 등은 비용적 측면이나 사용상의 편의 때문에 물과 같은 저렴한 용매를 주 용매로 사용한다. 따라서 유효성분이 물에 잘 녹으면 제품화가 용이하다. 또한 기름에 녹는 경우도 가용화방법을 사용하면 큰 어려움 없이 제형의 개발이 가능하기 때문에 제품화가 쉬운 편이다. 반면에, 물에 완전히 녹지 않더라도 계면활성제나 여러 가지 용매 등의 화합물을 적당히 부가하여 강제로 물에 녹이거나 현탁시킬 수 있어도 상업화가 가능하다. 그러나 플로레틴은 물이나 기름에 난용성인 문제점을 가지고 있다. 0.1% 이상의 농도에서 충분한 양의 계면활성제나 용매를 사용한 에멀젼이나 기타 현탁액에서도 시간이 지나면서 변색이나 침전이 발생하고 가용화된 액상제형(의약, 화장품, 식품, 생활용품)에서도 단 기간 내에 침전이 발생된다. 침전이 발생하면 어떠한 경우에도 활성이 소실된다.Most household products and cosmetics use cheap solvents such as water as the main solvent because of their cost and ease of use. Therefore, if the active ingredient is well dissolved in water, it is easy to commercialize. In addition, even if it is dissolved in oil, it is easy to commercialize the product because the formulation can be developed without difficulty using the solubilization method. On the other hand, even if it is not completely dissolved in water, a compound such as a surfactant or various solvents can be appropriately added to make it commercially viable even if it can be dissolved or suspended in water. However, phloretin has the problem of being poor in water or oil. Even in emulsions or other suspensions using a sufficient amount of surfactant or solvent at a concentration of 0.1% or more, discoloration or precipitation occurs over time, and solubilized liquid formulations (medicines, cosmetics, foods, household products) do. When precipitation occurs, the activity is lost in any case.
따라서 용해도가 우수한 용매를 사용한 시험관 시험에서는 우수한 효능을 나타내지만 대량 생산 시에는 난용성으로 인하여 액상제품 적용에 어려움을 겪는 대표적인 물질이, 플로레틴이다. 따라서 이 물질의 난용성을 개선하여 물 또는 기름에 잘 녹으면서 동시에 활성을 잃지 않도록 제조할 수 있다면 충분한 상업적 사용이 가능하다.
Therefore, floretine is a representative substance that exhibits excellent efficacy in a test tube test using a solvent having excellent solubility but is difficult to apply in a liquid product due to poor solubility in mass production. Therefore, sufficient commercial use is possible if it can be manufactured so as to improve the poor solubility of this substance and dissolve well in water or oil, while at the same time not losing its activity.
이에 본 발명자들은 플로레틴이 생리, 생화학적으로 여러 가지 효과가 있으나 물리적 특성인 물과 기름에 녹지 않는 난용성을 개선시키면서도 그 생리학적 및 생화학적 효과가 더욱 증대한 신규한 물질을 개발하고자 노력하였으며, 그 결과 본 발명을 완성하게 되었다.
Accordingly, the present inventors have sought to develop a new material that has various physiological and biochemical effects on the physiological and biochemical effects of floretine, while improving physical properties such as water and oil-insoluble solubility As a result, the present invention has been completed.
따라서, 본 발명의 하나의 목적은 신규한 플로레틴 유도체로서 난용성이 개선되고 세포독성이 없는 플로레틴 술폰산염(Phloretin sulfonate)을 제공하는 것이다.Accordingly, one object of the present invention is to provide a novel phloretin derivative, which has poor solubility and is free from cytotoxicity, such as phloretin sulfonate.
또한, 본 발명의 다른 하나의 목적은 상기한 신규 물질인 플로레틴 술폰산염을 포함하는 피부 상태 개선 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a skin condition improving composition comprising the novel substance, a floretine sulfonate.
또한, 본 발명의 다른 하나의 목적은 상기한 피부 상태 개선 조성물을 포함하는 화장료, 식품 및 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.
Another object of the present invention is to provide a cosmetic, a food and a pharmaceutical composition comprising the above-described skin condition improving composition.
하나의 양태로서, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 플로레틴 술폰산염(Phloretin sulfonate)에 관한 것이다.In one aspect, the present invention relates to a phloretin sulfonate represented by the following general formula (1).
[화학식 1][Chemical Formula 1]
페놀계 물질인 플로레틴은 생리, 생화학적으로 여러 가지 효과가 있는 것으로 알려져 있으나 용매에 대한 난용성의 물리적 특성으로 인하여 의약품, 화장품, 식품에서 상용화된 경우는 소수에 불과하다. 이에 본 발명자들은 플로레틴의 난용성 문제를 해결하고 상용화할 수 있는 신규 물질을 개발하고자 하였으며, 그 결과 상기 화학식 1로 표시되는 플로레틴 술폰산염을 개발하였다.
The phenolic substance, floretine, is known to have various physiological and biochemical effects, but only a few are commercialized in pharmaceuticals, cosmetics and food products due to the physical properties of solvents. Accordingly, the present inventors have developed a new material capable of solving the poor solubility problem of floretine and commercializing it. As a result, the floretine sulfonate represented by the above formula (1) has been developed.
본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 플로레틴 술폰산염(Phloretin sulfonate)은 하기 반응식과 같이 제조할 수 있다.The phloretin sulfonate represented by the above formula (1) of the present invention can be prepared according to the following reaction formula.
[반응식][Reaction Scheme]
구체적으로, 플로레틴 1g 당 2L 황산(sulfuric acid) 용액을 넣고 0℃에서 2시간 동안 반응시킨다. 이후 상기 반응물을 염화나트륨(NaCl) 포화용액에 떨어트려주고, 4시간 동안 반응시키면 붉은 색의 침전물이 생긴다. 이 침전물을 여과지에 여과시킨 후 1 M의 탄산나트륨(Na2CO3) 용액으로 한번 세척해준다. 다음으로 상기 세척된 침전물을 실리카 겔 컬럼에서 CH2Cl2/MeOH (gradient)용매로 용출시켜 소분획을 얻은 후, 분획의 재결정을 통해 플로레틴 술폰산염을 얻을 수 있다.
Specifically, 2 L of sulfuric acid solution is added per gram of phloretin, and the reaction is carried out at 0 ° C for 2 hours. Then, the reaction product is dropped into a saturated solution of sodium chloride (NaCl) and reacted for 4 hours to form a red precipitate. The precipitate is filtered on a filter paper and washed once with 1 M sodium carbonate (Na 2 CO 3 ) solution. Next, the washed precipitate is eluted with a CH 2 Cl 2 / MeOH gradient solvent in a silica gel column to obtain a small fraction, and then the fraction is recrystallized to obtain a floretine sulfonate.
본 발명의 플로레틴 술폰산염은 실시예에서 볼 수 있는 바와 같이, 플로레틴에 비하여 친수성이 증가하여 난용성의 문제가 없이 의약품, 화장품, 식품으로의 제형이 용이하며, 세포독성이 플로레틴에 비하여 현저히 낮은 안전한 물질이다.
As can be seen from the examples of the present invention, the phloretin sulfonic acid salt of the present invention is easy to formulate into medicines, cosmetics and foods without the problem of poor solubility due to increased hydrophilicity as compared with floretine, It is a significantly low-safety material.
다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 플로레틴 술폰산염(Phloretin sulfonate)을 유효성분으로 포함하는 피부 상태(skin conditions) 개선용 조성물을 제공한다.
In another aspect, the present invention provides a composition for improving skin conditions comprising phloretin sulfonate represented by Formula 1 as an active ingredient.
본 발명에 있어서, 상기 "피부상태 개선"은 피부 상태의 모든 형태의 호전 및 양호화를 의미하며, 바람직하게는 자외선에 의한 피부를 보호하고/거나 피부저색소증을 예방, 개선, 및 치료하는 것을 말한다.In the present invention, the above-mentioned "improvement of skin condition" means improvement and improvement of all forms of skin condition, preferably protecting skin by ultraviolet rays and / or preventing, It says.
따라서, 본 발명의 피부상태 개선용 조성물은 구체적인 일 양태로서, 자외선보호 용도를 갖는다. 본 발명의 조성물은 세포독성도 낮으면서, 자외선으로부터 피부세포를 보호하며, 특히 자외선으로부터 피부를 보호하는 기능을 하는 멜라닌세포를 활성화시켜 피부보호 효능을 발휘한다. 이러한 본 발명의 조성물의 효능은 하기의 실시예로부터 명확하게 알 수 있다. 본 발명에 있어서, 상기 자외선보호 용도는 상술한 용도와 더불어 통상적인 피부 보호용도(광노화 억제, 피부진정효과, 피부흑화유도 효과, 피부암예방효과)를 포함하는 것으로 해석된다.Therefore, the composition for improving the skin condition of the present invention has a UV protection use as a specific embodiment. The composition of the present invention protects skin cells from ultraviolet rays while having low cytotoxicity, and particularly, activates melanocytes that protect skin from ultraviolet rays, thereby exhibiting skin protection efficacy. The efficacy of such a composition of the present invention can be clearly understood from the following examples. In the present invention, the ultraviolet ray shielding application is interpreted to include conventional skin protection uses (suppression of photoaging, skin soothing effect, skin blackening inducing effect, skin cancer prevention effect) in addition to the above-mentioned uses.
또한, 본 발명의 피부상태 개선용 조성물은 구체적인 일 양태로서, 피부저색소증 개선 용도를 갖는다. 본 명세서에서 용어 "저색소증 개선"은 멜라닌 세포나 멜라닌 색소합성 기능에 이상이 생겨 멜라닌 생성이 감소되어 야기되는 백반증, 백모 등의 피부 트러블을 개선하는 작용을 의미한다.In addition, the composition for improving skin condition of the present invention has a use for improving skin hypocholality as a specific embodiment. As used herein, the term " hypochromatosis improvement "means an action to improve skin troubles such as vitiligo and white fever caused by abnormal melanin cell or melanin pigment synthesis function and reduced melanin production.
본 발명의 피부 저색소증 개선에서, 플로레틴 술폰산염은 인체유래 멜라닌세포의 멜라닌 생성을 증가시키고, 산화적 스트레스로 인한 멜라닌 세포의 세포사를 억제하는 효과를 나타내며, 안정성이 높고, 시간 경과에 따른 성분 함량의 변화가 거의 없으며 피부 자극 유발 등의 부작용이 거의 없다.
In the improvement of skin hypochromatosis according to the present invention, the phloretin sulfonic acid salt increases the melanin production of melanocytes derived from human body, exhibits an effect of inhibiting the cell death of melanocytes due to oxidative stress, has a high stability, There is almost no change in the content of ingredients, and there are few side effects such as skin irritation.
본 발명의 조성물에 포함되는 플로레틴 술폰산염은 전체 조성물을 기준으로 하여 0.0001 내지 15.0중량%, 보다 바람직하게는 0.001내지 10중량%, 보다 더 바람직하게는 0.001 내지 5 중량%의 함량으로 포함된다. 플로레틴 술폰산염의 함량이 0.0001 중량% 미만일 때는 플로레틴 술폰산염의 자외선 보호 효과 및 피부 저색소증 개선 효과가 미약하고, 15.0 중량%를 초과하는 경우에는 함량의 증가에 따른 효과의 증가가 매우 미약하고, 제형상의 안정성이 확보되지 않는 문제점이 있다.
The floretine sulfonic acid salt contained in the composition of the present invention is contained in an amount of 0.0001 to 15.0 wt%, more preferably 0.001 to 10 wt%, and even more preferably 0.001 to 5 wt%, based on the total composition. When the content of the phloretin sulphonic acid salt is less than 0.0001% by weight, the effect of protecting the ultraviolet rays and improving the hypocholesterolemic effect of the phloretin sulphonic acid salt is weak. When the content is more than 15.0% by weight, There is a problem that the stability of the shape is not ensured.
하나의 구체적인 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 화장료 조성물로 사용할 수 있다.According to one specific embodiment, the composition of the present invention can be used as a cosmetic composition.
본 발명에 따른 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 플로레틴 술폰산염 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 가용화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.The ingredients contained in the cosmetic composition according to the present invention include the components conventionally used in cosmetic compositions in addition to the phloretin sulfonic acid salt as an active ingredient and include conventional antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments, Supplements, and carriers.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 영양 크림, 수렴 화장수, 유연 화장수, 로션, 에센스, 영양젤 또는 마사지 크림의 제형으로 제조될 수 있다.The cosmetic composition according to the present invention may be prepared into any of the formulations conventionally produced in the art, for example, a solution, a suspension, an emulsion, a paste, a gel, a cream, a lotion, a powder, a soap, But are not limited to, cleansing, oils, powder foundations, emulsion foundations, wax foundations and sprays. More specifically, it can be prepared as a nutritional cream, a convergent lotion, a soft lotion, a lotion, an essence, a nutritional gel or a massage cream.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트검, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a paste, a cream or a gel, an animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tragacanth gum, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc, Can be used.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.When the formulation of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component. In the case of a spray, in particular, / Propane or dimethyl ether.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 가용화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.When the formulation of the present invention is a solution or emulsion, a solvent, a solubilizing agent or an emulsifying agent is used as a carrier component, and examples thereof include water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, , 3-butyl glycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or sorbitan fatty acid esters.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라가칸트검 등이 이용될 수 있다.In the case where the formulation of the present invention is a suspension, a carrier such as water, a liquid diluent such as ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, Cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tragacanth gum, etc. may be used.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is an interfacial active agent-containing cleansing, the carrier component may include aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyltaurate, sarcosinate, fatty acid amide Ether sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, lanolin derivatives, or ethoxylated glycerol fatty acid esters.
다른 하나의 구체적인 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 약제학적 조성물로 사용될 수 있다.According to another specific embodiment, the composition of the present invention can be used as a pharmaceutical composition.
본 발명의 조성물이 약제학적 조성물로 제조되는 경우, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명에 따른 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. When the composition of the present invention is manufactured from a pharmaceutical composition, the pharmaceutical composition according to the present invention includes a pharmaceutically acceptable carrier. The pharmaceutically acceptable carrier to be contained in the pharmaceutical composition according to the present invention is one which is usually used at the time of formulation, and includes lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, acacia rubber, calcium phosphate, , Calcium silicate, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose, water, syrup, methylcellulose, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. But is not limited thereto.
본 발명에 따른 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention may further comprise a lubricant, a wetting agent, a sweetening agent, a flavoring agent, an emulsifier, a suspending agent, a preservative, etc. in addition to the above components. Suitable pharmaceutically acceptable carriers and formulations are described in detail in Remington ' s Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995).
본 발명에 따른 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 바람직하게는 비경구 투여, 보다 바람직하게는 도포에 의한 국부 투여(topical application) 방식으로 적용된다.The pharmaceutical composition according to the present invention can be administered orally or parenterally, and is preferably applied by parenteral administration, more preferably topical application by application.
본 발명에 따른 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은 성인 기준으로 0.001-100 ㎎/kg 범위 내이다. 또한 외용제인 경우에는 성인 기준으로 1.0 내지 3.0 ml의 양으로 1일 1회 내지 5회 도포하여 1개월 이상 계속 하는 것이 좋다. 다만, 상기 투여량은 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다.The appropriate dosage of the pharmaceutical composition according to the present invention may vary depending on such factors as the formulation method, the administration method, the age, body weight, sex, pathological condition, food, administration time, administration route, excretion rate, It can be prescribed. The dosage of the pharmaceutical composition of the present invention is within the range of 0.001-100 mg / kg on an adult basis. When the composition is an external preparation, it is preferably applied in an amount of 1.0 to 3.0 ml on an adult basis once to five times a day, and continued for 1 month or more. However, the dose is not intended to limit the scope of the present invention.
본 발명에 따른 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
The pharmaceutical composition according to the present invention may be formulated into a unit dosage form by using a pharmaceutically acceptable carrier and / or excipient according to a method which can be easily carried out by a person having ordinary skill in the art to which the present invention belongs. Or may be manufactured by penetrating into a multi-dose container. The formulations may be in the form of solutions, suspensions, syrups or emulsions in oils or aqueous media, or in the form of excipients, powders, powders, granules, tablets or capsules, and may additionally contain dispersing or stabilizing agents.
또 다른 하나의 구체적인 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 약제학적 조성물로 사용될 수 있다.According to another specific embodiment, the composition of the present invention can be used as a pharmaceutical composition.
본 발명의 조성물이 식품 조성물로 제조되는 경우, 유효성분으로서 플로레틴 술폰산염뿐만 아니라, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.When the composition of the present invention is prepared with a food composition, it contains not only the phloretin sulfonic acid salt as an active ingredient but also a component which is ordinarily added at the time of food production, for example, a protein, a carbohydrate, a fat, a nutrient, And flavoring agents. Examples of the above-mentioned carbohydrates are monosaccharides such as glucose, fructose, and the like; Disaccharides such as maltose, sucrose, oligosaccharides and the like; And polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin and the like, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol and erythritol. Natural flavorings such as tau martin and stevia extract (e.g., rebaudioside A and glycyrrhizin) and synthetic flavorings (saccharine, aspartame, etc.) can be used as flavorings.
예컨대, 본 발명에 따른 식품 조성물이 드링크제로 제조되는 경우에는 본 발명의 플로레틴 술폰산염 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 두충 추출액, 대추 추출액, 감초 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.
For example, when the food composition according to the present invention is prepared as a drink, it may contain citric acid, liquid fructose, sugar, glucose, acetic acid, malic acid, juice, mulberry extract, jujube extract, licorice extract, Can be included.
또 다른 하나의 구체적인 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 식품 조성물로 사용될 수 있다.According to another specific embodiment, the composition of the present invention can be used as a food composition.
본 발명의 조성물이 식품 조성물로 제조되는 경우, 유효성분으로서 플로레틴 술폰산염뿐만 아니라, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시리진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.When the composition of the present invention is prepared with a food composition, it contains not only the phloretin sulfonic acid salt as an active ingredient but also a component which is ordinarily added at the time of food production, for example, a protein, a carbohydrate, a fat, a nutrient, And flavoring agents. Examples of the above-mentioned carbohydrates are monosaccharides such as glucose, fructose, and the like; Disaccharides such as maltose, sucrose, oligosaccharides and the like; And polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin and the like, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol and erythritol. Natural flavors such as tau Martin and stevia extract (e.g., rebaudioside A and glycyrrhizin) and synthetic flavors (saccharin, aspartame, etc.) can be used as flavorings.
예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제로 제조되는 경우에는 본 발명의 플로레틴 술폰산염 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 두충 추출액, 대추 추출액, 감초 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.
For example, when the food composition of the present invention is prepared as a drink, it additionally contains citric acid, liquid fructose, sugar, glucose, acetic acid, malic acid, juice, mulberry extract, jujube extract, licorice extract, etc., .
다른 하나의 양태로서, 본 발명은 또한 상기 피부상태 개선용 조성물을 개체에 투여하여 개체의 자외선에 의한 피부 손상, 피부저색소증 등과 같은 피부상태를 개선하거나 억제하는 방법을 제공한다. In another aspect, the present invention also provides a method for improving or suppressing skin conditions such as skin damage, hypotonia, etc., caused by ultraviolet rays of an individual by administering the composition for improving skin condition to the individual.
본 발명에 있어서, '개체'는 피부의 불량한 상태, 예를 들어 자외선에 의한 피부 손상, 피부 저색소증 등을 개선 또는 예방하고자 하는 인간을 포함한 포유동물, 예를 들어 개, 돼지, 말, 소 등을 의미한다.In the present invention, the term 'individual' refers to a mammal, including a human, such as a dog, a pig, a horse, a cattle, or the like which is intended to improve or prevent a poor condition of the skin, for example, skin damage caused by ultraviolet rays, And the like.
본 발명에 있어서, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 개체에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 활성 물질이 표적 대상, 예를 들어, 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.In the present invention, "administering" means introducing a predetermined substance into an individual by any appropriate method, and the administration route of the composition of the present invention is either oral or parenteral ≪ / RTI > The composition of the present invention may also be administered by any device capable of transferring the active substance to a target subject, for example, a cell.
본 발명의 상기 방법에 의하여 상술한 개체의 자외선에 의한 피부 손상, 피부 저색소증 등과 같은 피부상태 또는 이들로부터 발생하는 질환, 질병 또는 이상은 본 발명의 피부상태 개선용 조성물의 개체 내 투여에 의하여 개선, 호전, 예방 또는 치료 등의 목적을 달성할 수 있음은 상술한 내용 및 하기에 기술된 실시예 등을 통하여 당업계의 통상의 지식을 가진 자에 의하여 이해될 것임은 물론이다.
The skin condition, such as skin damage, hypochlorite caused by ultraviolet light of the above-mentioned individual of the present invention, or diseases, diseases or abnormalities resulting therefrom, It will be understood by those skilled in the art that the object of the present invention can be attained by the person skilled in the art through the above description and the embodiments described below.
한편, 본 발명의 구체적 실시예에서 플로레틴 술폰산염에 대한 피부누적 자극시험 결과 플로레틴 술폰산염은 천연물질로서 인체에 무해한 물질임이 밝혀졌다. 따라서, 본 발명의 플로레틴 술폰산염은 독성 및 부작용이 거의 없으므로 장기간 사용 시에도 안심하고 사용할 수 있으며, 특히 상기한 바와 같은 화장료, 약제학적 및 식품 조성물에 안전하게 적용할 수 있다.
On the other hand, in a specific example of the present invention, the skin stimulation test for the phloretin sulfonate showed that the floretine sulfonate was a harmless substance as a natural substance. Therefore, the phloretin sulfonic acid salt of the present invention has little toxicity and side effects, so that it can be safely used for long-term use, and can be safely applied to cosmetic, pharmaceutical and food compositions as described above.
본 발명의 플로레틴 술폰산염(Phloretin sulfonate)은 친수성이 우수한 물질로서 세포독성이 없으므로, 상기 플로레틴 술폰산염을 의약품, 화장품, 및 식품의 제형에서 유용하게 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 플로레틴 술폰산염은 자외선 및 산화적 스트레스로부터 피부 세포를 보호하는 효과 및 멜라닌 생성 증진 효과가 매우 우수하며, 세포독성 및 피부 부작용이 없으므로, 자외선에 의한 피부 보호 용도 및 피부저색소증 치료, 예방 및 개선을 위한 피부상태 개선용 조성물로서 의약품, 화장품, 및 식품에 유용하게 사용할 수 있다.
Since the phloretin sulfonate of the present invention is a material having excellent hydrophilicity and is not cytotoxic, the phloretin sulfonate can be usefully used in pharmaceuticals, cosmetics, and foods. In addition, the floretine sulfonate of the present invention has excellent effects of protecting skin cells from ultraviolet rays and oxidative stress and enhancing melanin production, and is free from cytotoxicity and skin side effects. Therefore, it can be used for protecting skin by ultraviolet rays, The composition for improving skin condition for the treatment, prevention and improvement of the skin can be usefully used in medicines, cosmetics, and foods.
도 1은 플로레틴과 플로레틴 술폰산염의 HPLC 분석 결과를 나타낸 그림이다.
도 2a는 플로레틴과 플로레틴 술폰산염의 세포독성 효과를 관찰한 그림이다.
도 2b는 플로레틴과 플로레틴 술폰산염을 농도별로 각질형성세포(HaCaT)에 처리하고 자외선을 조사한 경우 세포 보호 효과를 관찰한 그림이다.
도 2c는 플로레틴 술폰산염을 농도별로 각질형성세포(HaCaT)에 처리하고 자외선을 조사한 경우의 세포 보호 효과를 현미경으로 관찰한 그림이다.
도 3은 본 발명의 유효성분인 플로레틴 술폰산염에 의한 인체멜라닌 세포의 멜라닌 합성 촉진 효과를 나타내는 그림이다.
도 4는 본 발명의 유효성분인 플로레틴 술폰산염의 처리 농도를 증가시킴에 따라 H2O2에 의해 유도되는 멜라닌생성세포의 세포사가 억제되는 효과를 나타내는 그림이다.FIG. 1 is a graph showing the results of HPLC analysis of a floretine and a phloretin sulfonic acid salt. FIG.
FIG. 2A is a graph showing cytotoxic effects of floretin and a floretine sulfonate salt. FIG.
FIG. 2B is a graph showing the cell protection effect when ultraviolet light is applied to the keratinocyte (HaCaT) treated with phloretin and phloretin sulphonic acid salt at different concentrations.
FIG. 2c is a microscopic observation of the cytoprotective effect of treating the horny cells (HaCaT) treated with the phloretin sulfonic acid salt at different concentrations and irradiating ultraviolet rays.
FIG. 3 is a graph showing the effect of promoting melanin synthesis of human melanocytes by the floretine sulphonate salt as an active ingredient of the present invention.
FIG. 4 is a graph showing the effect of suppressing the cell death of melanin-producing cells induced by H 2 O 2 by increasing the treatment concentration of the active ingredient of the present invention, the floretine sulfonic acid salt.
이하, 실시예를 들어 본 발명을 보다 구체적으로 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 더욱 상세히 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시 예에 의해 한정되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. It is to be understood by those skilled in the art that these embodiments are only for explaining the present invention in more detail and that the scope of the present invention is not limited by these embodiments in accordance with the gist of the present invention.
실시예 1: 플로레틴 술폰산염의 제조Example 1: Preparation of phloretin sulfonic acid salt
플로레틴 274g에 548L 황산 용액을 넣고 0℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 2시간 후 상기 반응물을 염화나트륨 포화용액 1000 L에 떨어뜨린 후 4시간 동안 반응시켜 붉은 색의 침전물을 생성하였다. 이 침전물을 여과지에 여과시킨 후 1M의 탄산소듐(Na2CO3) (Sigma, USA) 용액으로 1회 세척하였다. 이후 실리카겔 컬럼에서 CH2Cl2/MeOH (gradient) 용매로 용출시켜 3개의 소분획물 (E1-E3)을 얻을 수있었다. E2 분획을 재결정하여 플로레틴 술폰산염(271g)을 제조하였다 (Yield 56.7%).
548 L of sulfuric acid solution was added to 274 g of phloretin, and the reaction was carried out at 0 ° C for 2 hours. After 2 hours, the reaction mixture was dropped to 1000 L of a saturated sodium chloride solution and reacted for 4 hours to form a red precipitate. The precipitate was filtered through filter paper and washed once with 1 M sodium carbonate (Na 2 CO 3 ) (Sigma, USA). Three small fractions (E1-E3) were obtained by eluting with a CH 2 Cl 2 / MeOH gradient solvent on a silica gel column. The E2 fraction was recrystallized to prepare a floretine sulfonate (271 g) (Yield 56.7%).
실시예 2: 플로레틴과 플로레틴 술폰산염의 HPLC 분석Example 2: HPLC analysis of phloretin and phloretin sulfonic acid salt
HPLC 분석은 Waters HPLC system(Waters, MA, USA)을 사용하였으며, Luna C18 column (150mm×4.6mm, 5 μm,PHENOMENEX)에 분석시료를 10 μL씩 주입하여 사용하였다. 이동상으로는 10 mM sodium phosphate buffer 와 acetonitrile (70:30, v/v) 혼합용액을 사용하였다. 이때 유속은 1.0 mL/min로 하였고, UV 검출기의 285 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다. 도 1에서 보는 것처럼 플로레틴과 플로레틴 술폰산염의 RT값이 각각 10.797, 2.165분으로 분리능이 양호하였다. 이는 플로레틴에서 플로레틴 술폰산염으로 변화시 극성이 증가한 결과로 해석된다. (플로레틴 술폰산염 > 플로레틴)
HPLC analysis was performed using a Waters HPLC system (Waters, MA, USA) and 10 μL of the analytical sample was injected into a Luna C18 column (150 mm × 4.6 mm, 5 μm, PHENOMENEX). For the mobile phase, 10 mM sodium phosphate buffer and acetonitrile (70:30, v / v) solution were used. At this time, the flow rate was set to 1.0 mL / min, and the absorbance of the UV detector was measured at a wavelength of 285 nm. As shown in FIG. 1, the RT values of phloretin and phloretin sulphonate were 10.797 and 2.165 min, respectively. This is interpreted as a result of an increase in polarity when changing from floretine to floretine sulfonate. (Floretine sulfonate> floretine)
실시예Example 3: 3: 플로레틴과With florettin 플로레틴Florettin 술폰산염의Sulfonate 수용성 ( Water soluble ( WaterWater solubilitysolubility ) 측정) Measure
플로레틴과 플로레틴 술폰산염의 수용성 측정은 Li 등 [Cabohyd.. Res. 2004, 339, 2789-2797]의 방법을 따랐다.Determination of the water solubility of phloretin and phloretin sulphonate is carried out according to Li et al. [Cabohyd. Res. 2004, 339, 2789-2797.
상기 표 1에서 보는 것처럼 플로레틴의 수용성은 7μg/mL인 반면 플로레틴 술폰산염은 187292 μg/mL이였다. 이는 술폰화를 통해 플로레틴의 수용성이 증가하였음을 보여준다.
As shown in Table 1, the solubility of phloretin was 7 μg / mL, while the content of phloretin sulphonate was 187292 μg / mL. This shows that sulfonation increased the solubility of floretine.
실시예Example 4: 4: 플로레틴Florettin 술폰산염의Sulfonate 세포독성 및 자외선 보호 효과 측정 Measuring cytotoxicity and ultraviolet protection effect
플로레틴 술폰산염이 각질형성세포(HaCaT)에 세포독성 효과를 미치는지 여부와 자외선에 의해 유도된 세포독성을 억제할 수 있는지를 플로레틴과 비교하였다.Whether the phloretin sulphonate has a cytotoxic effect on keratinocytes (HaCaT) and whether it can inhibit ultraviolet-induced cytotoxicity was compared with that of floretin.
각질형성세포는 DMEM 기본배지에 페니실린-스트렙토마이신 및 혈청으로 구성된 배지 내에서 배양한다. 12-well plate에 well당 1 × 105 개로 접종한 후 5 % CO2, 37℃ 하에서 세포가 well 바닥에 약 80 % 이상 부착될 때까지 배양하였다.The keratinocytes are cultured in medium consisting of penicillin-streptomycin and serum in DMEM basal medium. The cells were inoculated in a 12-well plate at 1 × 10 5 cells per well and cultured at 37 ° C in 5% CO 2 until cells were attached to the bottom of the wells at about 80%.
자외선 보호효과를 측정하기 위해 자외선 조사 24 시간 전에 플로레틴과 플로레틴 술폰산염을 농도별로 첨가하였다. 자외선 조사군과 함께 비조사군의 무처리군을 대조군으로 준비하였다. 배양액을 PBS로 바꾸어주고 자외선 (UVB 20mJ/cm2)을 조사하였다. 자외선 조사 후 배양액으로 바꾸어주고 48시간을 더 배양 하고 배양 마지막 날 MTT assay를 이용해 세포생존력을 측정하였다. In order to measure the ultraviolet protection effect, phloretin and phloretin sulfonic acid salt were added by concentration 24 hours before ultraviolet irradiation. The untreated control group was prepared as a control group together with the ultraviolet irradiation group. The culture medium was changed to PBS and irradiated with ultraviolet rays (
그 결과를 도 2a, 2b, 및 2c에 나타내었다. 먼저, 도 2a의 자외선을 조사하지 않은 경우의 세포생존력 측정 결과에서 볼 수 있듯이, 플로레틴이 50ppm에서 세포독성을 보이는데 반해, 플로레틴술폰산염은 200ppm까지 세포독성을 보이지 않았다. 그리고, 도 2b의 자외선을 세포에 조사한 경우의 세포생존력 측정 결과에서 볼 수 있듯이, 플로레틴에 비하여 플로레틴 술폰산염이 자외선에 의해 유도된 각질형성 세포의 세포사를 처리농도 의존적으로 억제시키는 효과가 있음을 나타내었다. 한편, 도 2c에 상기 도 2b의 플로레틴 술폰산염에 의한 세포의 자외선 보호 효과를 현미경으로 관찰한 결과를 나타내었다.The results are shown in Figures 2a, 2b, and 2c. First, as can be seen from the results of the cell viability measurement in the case of not irradiating the ultraviolet ray of FIG. 2A, the phloretin exhibits cytotoxicity at 50 ppm, whereas the phloretin sulfonate exhibits no cytotoxicity up to 200 ppm. As can be seen from the results of cell viability measurement in the case of irradiating ultraviolet rays to cells as shown in FIG. 2B, the effect of phloretin sulphonate on cell death of keratinocytes induced by ultraviolet rays Respectively. On the other hand, FIG. 2c shows microscopic observation of the ultraviolet protection effect of the cells on the floretine sulfonate of FIG. 2b.
상기 실험 결과로부터, 플로레틴은 세포독성이 있음에 반하여 플로레틴 술폰산염은 세포독성이 없으며, 자외선에 의해 유도된 각질형성세포의 세포사를 플로레틴은 억제시키지 못함에 반하여 플로레틴 술폰산염은 농도 의존하여 효과적으로 억제시킬 수 있음을 알 수 있었다.
From the above experimental results, it can be seen that phloretin is not cytotoxic while phloretin is cytotoxic, whereas phloretin is not cytotoxic, while phloretin does not inhibit the cell death of keratinocytes induced by ultraviolet light, It can be effectively suppressed.
실시예Example 5: 5: 플로레틴Florettin 술폰산염에Sulfonate 의한 by 인체멜라닌Human melanin 세포의 멜라닌 생성 증진효과 측정 Measurement of melanin production enhancing effect of cells
인체 멜라닌세포(melanocyte)를 이용하여 플로레틴 술폰산염에 의한 멜라닌 생성 효과를 측정하였다. 본 실험에서 사용된 인체 멜라닌세포는 Cascade Biologics사로부터 구입한 Human epidermal melanocyte(신생아유래) 세포이며, 이를 동일 회사로부터 구입한 Human Melanocyte Growth supplement를 포함한 Medium 254배지에서 배양하였다. 구체적으로, Human epidermal melanocytes를 6-well plate에 well당 2 × 105 개로 접종한 후 5% CO2, 37℃ 하에서 세포가 well 바닥에 약 80 % 이상 부착될 때까지 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 시료를 적당 농도로 희석해서 배지에 처리한 후 5% CO2, 37℃ 하에서 이틀에 한 번 배지를 갈아주면서 5일간 배양하였다. 플로레틴 술폰산염의 농도범위는 세포독성이 없는 10 μg/mL, 50 μg/mL, 100 μg/mL, 200 μg/mL로 결정하였다. 처리가 끝난 후 배지를 제거하고 PBS(phosphated buffer saline)로 세척한 후, 이것을 트립신으로 처리하여 세포를 회수하였다. 회수된 세포는 hematocytometer를 이용하여 세포수를 측정한 후 각 처리 그룹별 세포수를 동수로 맞추어 2 mL 튜브에 나눠담은 뒤 5,000 내지 10,000 rpm으로 10분간 원심분리한 다음 상등액을 제거하여 펠렛(pellet)을 얻었다. 이 세포 펠렛을 60℃에서 건조한 후, 10% DMSO가 함유된 1M 수산화나트륨액 100 ㎕를 넣어 60 ℃ 항온조에서 세포내 멜라닌을 얻었다. 이 액을 가지고 microplate reader로 490 nm에서 흡광도를 측정하였고, 그 결과를 도 3에 나타내었다. 도 3에서 볼 수 있는 바와 같이, 플로레틴 술폰산염 처리농도에 따라 멜라닌 합성양이 증가하는 것을 관찰할 수 있었다.
Melanin production by phloretin sulfonate was measured using human melanocyte (melanocyte). The human melanocytes used in this experiment were human epidermal melanocyte (newborn-derived) cells purchased from Cascade Biologics and cultured in Medium 254 medium containing Human Melanocyte Growth supplement purchased from the same company. Specifically, human epidermal melanocytes were inoculated in a 6-well plate at 2 × 10 5 cells per well and cultured at 37 ° C in 5% CO 2 until cells were attached to the bottom of the wells at about 80% or more. After the culture, the medium was removed, the sample was diluted to a proper concentration, treated with the medium, and incubated at 37 ° C in 5% CO 2 for 5 days while changing the medium every other day. The concentrations of phloretin sulphonate were determined to be 10 μg / mL, 50 μg / mL, 100 μg / mL, and 200 μg / mL, respectively, without cytotoxicity. After the treatment, the medium was removed, washed with PBS (phosphatized buffer saline), and treated with trypsin to recover the cells. The recovered cells were counted using a hematocytometer, and the cell numbers of each treatment group were adjusted to the same number. The cells were then divided into 2-mL tubes, centrifuged at 5,000 to 10,000 rpm for 10 minutes, and the supernatant was removed to remove pellets. ≪ / RTI > The cell pellet was dried at 60 ° C., and 100 μl of a 1 M sodium hydroxide solution containing 10% DMSO was added thereto to obtain intracellular melanin in a 60 ° C. thermostatic chamber. The absorbance of this solution was measured at 490 nm with a microplate reader, and the results are shown in FIG. As can be seen from FIG. 3, it was observed that the amount of melanin synthesis increased with the concentration of the treatment with the floretine sulfonate.
실시예Example 6: 6: 플로레틴Florettin 술폰산염에Sulfonate 의한 by 인체멜라닌Human melanin 세포 보호효과 측정 Measurement of cell protection effect
백반증의 정확한 원인은 밝혀져 있지 않으나 심리적인 스트레스, 정신적인 충격, 일광화상이, 사고나 수술 등의 물리적인 외상을 받은 후, 임신, 내부장기 이상이나 기타 질병 후에 생긴 경우가 많이 보고되어 있다. 활성산소인 과산화수소(hydrogen peroxide ; H2O2)가 역시 백반증의 원인으로 알려져 있다(Experimental Dermatology, 17, 139-160, 2008). 멜라닌세포의 칼슘 항상성과 카테콜아민 생성 증가 등으로 표피 내의 과산화수소가 증가하며, 백반증 환자에서는 과산화수소를 제거하는 catalase가 부족해 멜라닌 세포가 활성산소에 쉽게 손상되어 면역학적인 공격대상이 된다(J Invest Dermatol 97:1081-1085, 1991). 이런 이론에 근거하여 pseudocatalase 등의 항산화제를 사용하여 백반증의 악화를 막고 병의 호전을 유도하기도 한다.Although the exact cause of vitiligo is not known, many cases have been reported after physical trauma such as psychological stress, mental shock, sunburn, accident or surgery, pregnancy, internal organs or other diseases. Active oxygen, hydrogen peroxide (H 2 O 2 ), is also known to cause vitiligo (Experimental Dermatology, 17, 139-160, 2008). In patients with vitiligo, the lack of catalase to remove hydrogen peroxide causes melanin cells to be easily damaged by reactive oxygen species, leading to an immunological attack (J Invest Dermatol 97: 1081 -1085, 1991). Based on these theories, antioxidants such as pseudocatalase may be used to prevent the worsening of vitiligo and lead to improvement of the disease.
본 실험에서는 멜라닌 세포에서 H2O2에 의해 유도된 세포사를 플로레틴 술폰산염이 억제할 수 있는지 여부를 세포생존력시험을 통해 알아보았다. 구체적으로, Human epidermal melanocytes를 6-well plate에 well당 2 × 105개로 접종한 후 5% CO2, 37℃ 하에서 세포가 well 바닥에 약 80 % 이상 부착될 때까지 배양하였다. 배양 후 H2O2 200μM과 플로레틴 술폰산염을 농도별로 배지에 처리한 후 5% CO2, 37℃ 하에서 2일간 배양하였다. 배양 마지막 날 MTT assay를 이용해 세포생존력을 측정하였고, 그 결과를 도 4에 나타내었다. 도 4에서 볼 수 있는 바와 같이, 플로레틴 술폰산염은 H2O2에 의해 유도된 멜라닌 형성세포의 세포사를 농도 의존적으로 억제시켰다.
In this experiment, cell viability was examined to determine whether floretine sulfonate inhibits H 2 O 2 - induced cell death in melanocytes. Specifically, human epidermal melanocytes were inoculated in a 6-well plate at 2 × 10 5 cells per well and cultured at 37 ° C in 5% CO 2 until cells were attached to the bottom of the wells at about 80% or more. After culturing, 200 μM H 2 O 2 and phloretin sulfonic acid salt were added to the culture medium and cultured at 37 ° C. in 5% CO 2 for 2 days. Cell viability was measured using the MTT assay at the end of the culture, and the results are shown in FIG. As can be seen from Fig. 4, the floretine sulfonate inhibited the cell death of melanocytes induced by H 2 O 2 in a concentration-dependent manner.
실시예Example 7: 7: 플로레틴Florettin 술폰산염의Sulfonate 인체 피부에 대한 안전성 확인 실험 Safety test for human skin
7-1. 플로레틴 술폰산염을 포함한 피부외용제의 제조7-1. Preparation of external skin preparation containing phloretin sulphonate
상기와 같이 미백효과가 우수하다고 판명된 플로레틴 술폰산염이 인체피부에도 안전한지 확인하기 위하여, 플로레틴 술폰산염을 함유한 피부외용제를 제조하고 이에 의한 피부 안전성 검증 실험을 수행하였다.In order to confirm that the phloretin sulphonate salt which is proved to be excellent in the whitening effect as described above is safe for human skin, a skin external preparation containing phloretin sulphonate was prepared and a skin safety verification experiment was conducted thereon.
플로레틴 술폰산염을 함유한 피부외용제는 하기 표 2의 성분함량으로 제조하였다. 하기 표 2에서 대조군은 플로레틴 술폰산염을 포함하지 않은 피부외용제이며, 각각 시험군 1과 시험군 2는 플로레틴 술폰산염을 0.1% 및 1% 포함한 피부외용제이다.The external preparation for skin containing the phloretin sulphonate salt was prepared with the ingredient contents shown in Table 2 below. In the following Table 2, the control group is an external preparation for skin which does not contain a phloretin sulphonic acid salt. Test group 1 and test group 2 are external preparations for skin containing 0.1% and 1% of phloretin sulphonate.
피부외용제 제조를 위하여, 정제수, 글리세린, 부틸렌글리콜을 혼합하고 70℃에서 용해하였으며(수상파트), 상기 세 성분과 트리메탄올아민을 제외한 나머지 성분을 70 ℃에서 용해하였다(유상파트). 상기 오일파트를 수상파트에 첨가하고 호모믹서(일본 Tokushu Kika사)로 교반하여 1차 유화하였고, 여기에 트리메탄올아민을 최종 첨가하였다. 혼합액에 생성된 기포를 제거한 후, 실온으로 냉각시켜 피부외용제를 제조하였다.
For the preparation of external preparation for skin, purified water, glycerin, and butylene glycol were mixed and dissolved at 70 캜 (water part), and the other components except for trimethanolamine were dissolved at 70 캜 (oil part). The oil part was added to the water-based part, and the mixture was firstly emulsified by stirring with a homomixer (Tokushu Kika, Japan), and trimethanolamine was finally added thereto. After the bubbles generated in the mixed solution were removed, the mixture was cooled to room temperature to prepare an external preparation for skin.
7-2. 피부누적 자극 시험7-2. Skin Cumulative Stimulation Test
상기 실시예 6-1에서 제조한 각 피부외용제를 사용하여 건강한 30명의 성인을 대상으로 윗팔뚝 부위에 격일로 총 9회의 24시간 누적첩포를 시행하는 것에 의하여 플로레틴 술폰산염이 피부에 자극을 주는지의 여부를 측정하였다.Using the skin external preparations prepared in Example 6-1, a total of 9 times of cumulative epidermal patches were administered to 30 healthy adults on the upper forearm every other day for a total of 24 hours so that the floretine sulphonate stimulates skin Were measured.
첩포 방법은 핀 챔버(Finn chamber, Epitest Ltd, 핀란드)를 이용하였다. 챔버에 상기 각 피부외용제를 15ul씩 적하한 후 첩포를 실시하였다. 매회 피부에 나타난 반응의 정도를 아래의 공식을 이용하여 점수화 하였으며, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.
A pin chamber (Finn chamber, Epitest Ltd, Finland) was used as the deposition method. 15 [mu] l of each of the external preparations for skin was dropped into the chamber, followed by applying a patch. The degree of skin reaction on each occasion was scored using the following formula, and the results are shown in Table 5 below.
[실험식 1][Experimental Equation 1]
평균반응도=[[반응지수×반응도/총피검자수×최고점수(4점)]×100 ]÷검사회수 (9회)
Average response rate = [[Reaction index × response rate / total number of subjects × maximum score (4 points)] × 100] ÷ number of tests (9 times)
이 때, 반응도에서 ±는 1점, +는 2점, ++는 4점의 점수를 부여하며, 평균반응도가 3 미만일 때 안전한 조성물로 판정하였다.
At this time, ±, 1, 2, and ++ were given a score of ±, 1, and 4, respectively, and a safe composition was determined when the average degree of reaction was less than 3.
상기 표 2에서 시험군 1의 경우, ±, +, ++에 해당하는 사람의 수가 각각 1명, 0명, 0명이었고, 그 외 나머지는 반응이 나타나지 않았다. 상기 기재된 식에 따라 계산하면 평균 반응도가 3이하가 되어 안전한 조성물로 판단되었다. In Table 2, in test group 1, the numbers of persons corresponding to ±, +, and ++ were 1, 0, and 0, respectively. When calculated according to the above-described formula, the average degree of reaction was 3 or less, and it was judged as a safe composition.
상기 표 3에 기재된 바와 같이, 플로레틴 술폰산염(시험군 1)를 포함한 피부외용제는 대조군을 포함한 피부 외용제와 같이 뚜렷한 누적자극 양상을 나타내지 않았으며 인체 피부에 안전한 물질로 판정되었다.
As shown in Table 3, the external preparation for skin including the phloretin sulphonate (Test group 1) did not exhibit a clear cumulative stimulation pattern like the external preparation for skin including the control group, and was judged to be safe for human skin.
하기에 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.Examples of formulations for the composition of the present invention are illustrated below.
제제예 1 : 화장료 제제Formulation Example 1: Cosmetic preparation
1. 유연화장수 (함량 : 중량%) 1. Flexible life (content:% by weight)
플로레틴 술폰산염 0.010.0 > 0.01 < / RTI >
글리세린 3.0Glycerin 3.0
부틸렌 글리콜 2.0Butylene glycol 2.0
프로필렌 글리콜 2.0Propylene glycol 2.0
카복시비닐폴리머 0.1Carboxyvinyl polymer 0.1
에탄올 10.0Ethanol 10.0
트리에탄올아민 0.1Triethanolamine 0.1
방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수 잔량Preservative, trace pigment, trace flavor and trace amount of purified water
총계 100.0
Total 100.0
2. 영양화장수 (함량 : 중량%)2. Nourishing lotion (content:% by weight)
플로레틴 술폰산염 0.010.0 > 0.01 < / RTI >
밀납 4.0Beeswax 4.0
폴리소르베이트 60 1.5
소르비탄세스퀴올레이트 0.5Sorbitan sesquioleate 0.5
유동파라핀 5.0Liquid paraffin 5.0
스쿠알란 5.0Squalane 5.0
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 5.0Caprylic / Capric Triglyceride 5.0
글리세린 3.0Glycerin 3.0
부틸렌 글리콜 3.0Butylene glycol 3.0
프로필렌 글리콜 3.0Propylene glycol 3.0
카복시비닐폴리머 0.1Carboxyvinyl polymer 0.1
트리에탄올아민 0.2Triethanolamine 0.2
방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수 잔량Preservative, trace pigment, trace flavor and trace amount of purified water
총계 100.0
Total 100.0
3. 영양크림 (함량 : 중량%)3. Nourishing cream (content:% by weight)
플로레틴 술폰산염 0.010.0 > 0.01 < / RTI >
밀납 10.0Wax 10.0
폴리소르베이트 60 1.5
소르비탄세스퀴올레이트 0.5Sorbitan sesquioleate 0.5
유동파라핀 10.0Liquid paraffin 10.0
스쿠알란 5.0Squalane 5.0
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 5.0Caprylic / Capric Triglyceride 5.0
글리세린 5.0Glycerin 5.0
부틸렌 글리콜 3.0Butylene glycol 3.0
프로필렌 글리콜 3.0Propylene glycol 3.0
트리에탄올아민 0.2Triethanolamine 0.2
방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수 잔량Preservative, trace pigment, trace flavor and trace amount of purified water
총계 100.0
Total 100.0
4. 맛사지 크림 (함량 : 중량%)4. Massage cream (content:% by weight)
플로레틴 술폰산염 0.010.0 > 0.01 < / RTI >
밀납 10.0Wax 10.0
폴리소르베이트 60 1.5
소르비탄세스퀴올레이트 0.8Sorbitan sesquioleate 0.8
유동파라핀 40.0Liquid paraffin 40.0
스쿠알란 5.0Squalane 5.0
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 4.0Caprylic / Capric Triglyceride 4.0
글리세린 5.0Glycerin 5.0
부틸렌 글리콜 3.0Butylene glycol 3.0
프로필렌 글리콜 3.0Propylene glycol 3.0
트리에탄올아민 0.2Triethanolamine 0.2
방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수 잔량Preservative, trace pigment, trace flavor and trace amount of purified water
총계 100.0
Total 100.0
5. 팩 (함량 : 중량%)5. Pack (content:% by weight)
플로레틴 술폰산염 0.010.0 > 0.01 < / RTI >
폴리비닐알콜 13.0Polyvinyl alcohol 13.0
소듐카복시메틸셀룰로스 0.2Sodium carboxymethylcellulose 0.2
알란토인 0.1Allantoin 0.1
에탄올 5.0Ethanol 5.0
노닐페닐에테르 0.3Nonyl phenyl ether 0.3
방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수 잔량Preservative, trace pigment, trace flavor and trace amount of purified water
총계 100.0
Total 100.0
제제예Formulation example 2 : 약학적 제제 2: Pharmaceutical preparation
1. 산제의 제조1. Manufacturing of powder
플로레틴 술폰산염 2g2 g of phloretin sulfonic acid salt
유당 1gLactose 1g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
The above components were mixed and packed in airtight bags to prepare powders.
2. 정제의 제조2. Preparation of tablets
플로레틴 술폰산염 100 ㎎100 mg of phloretin sulfonate
옥수수전분 100 ㎎
유 당 100 ㎎100 mg of milk
스테아린산 마그네슘 2 ㎎2 mg of magnesium stearate
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
After mixing the above components, tablets were prepared by tableting according to a conventional method for producing tablets.
3. 캡슐제의 제조3. Preparation of capsules
플로레틴 술폰산염 100 ㎎100 mg of phloretin sulfonate
옥수수전분 100 ㎎
유 당 100 ㎎100 mg of milk
스테아린산 마그네슘 2 ㎎2 mg of magnesium stearate
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.After mixing the above components, the capsules were filled in gelatin capsules according to the conventional preparation method of capsules.
Claims (9)
[화학식 1]
[Chemical Formula 1]
3. The cosmetic composition according to claim 2, wherein the skin hypochloremia is vitiligo or white moth.
The composition of claim 2 or 3, wherein the composition is in the form of a solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, surfactant-containing cleansing, oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation, ≪ RTI ID = 0.0 > and / or < / RTI > spray.
[화학식 1]
[Chemical Formula 1]
7. The pharmaceutical composition according to claim 6, wherein the skin hypochromatosis is vitiligo or white moth.
[화학식 1]
[Chemical Formula 1]
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Non-Patent Citations (2)
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| J. Agric. Food Chem., 1977, Vol.25, pp.763-772* |
| 논문 1 : Fourth Military Medical University, Master’s thesis, 2013, HanYong* |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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