KR101660638B1 - Fxr 저해제를 유효성분으로 포함하는 리스테리아증의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 FXR 저해제를 유효성분으로 포함하는 리스테리아증의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 파르네소이드 엑스 수용체(farnesoid X receptor; FXR)는 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes) 감염을 촉진시키는 활성이 있어, FXR의 저해제를 사용 시 리스테리아 모노사이토제네스에 의해서 일어나는 세균 감염증인 리스테리아의 치료제로 사용할 수 있는 효과가 있다.

Description

FXR 저해제를 유효성분으로 포함하는 리스테리아증의 예방 또는 치료용 조성물{Composition for preventing or treating listeriosis comprising FXR inhibitor}

본 발명은 FXR 저해제를 유효성분으로 포함하는 리스테리아증의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

자연계에서 흔하게 발견되고 인수공통 전염병을 유발하는 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)는 인체 감염시 초기 가벼운 두통 및 복통을 유발하는 식중독을 유발하나 인체 중추 신경계로 감염될 경우 구토, 발열, 불안 등을 포함한 전구증상과 전형적인 뇌수막염, 패혈증 또는 뇌염 등 리스테리아증을 유발하여 인간의 생명을 치명적으로 위협하는 고위험 병원성 미생물이다. 리스테리아증의 주증세인 뇌수막염은 주로 노년과 면역부전 환자에게서 나타나며, 1차 패혈증 또는 심내막염을 유발하기도 한다. 특히, 임산부는 정상인에 비해 약 20배 이상 높은 감염 위험성을 보이며, 리스테리아 모노사이토제네스 감염은 조기 분만, 자연유산, 사산, 태아 감염 등을 유발하며, 감염 산모 및 태아는 뇌수막염 혹은 심내막염 등의 심각한 합병증을 일으켜 사망에 이르게 하는 것으로 알려져 있다. 리스테리아 모노사이토제네스는 저온과 고온(0 - 45℃)에서 성장이 가능하고, 잠복기가 70 - 90일에 달하며, 치사율이 20 - 30％에 달하여 매년 전 세계적으로 병원성 리스테리아 모노사이토제네스에 의한 리스테리아 감염 질환 환자 및 사망자가 증가하고 있는 가운데 일상생활에서 흔히 접하게 되는 가공식품, 샐러드, 조리기구, 다양한 농축산물 등 일반 환경 내 어디든 존재하고 있어 수시로 국민 건강을 위협하고 있다.
상기한 바와 같이 인체에 치명적인 질환을 유발하는 리스테리아증을 효과적으로 치료할 수 있는 치료제가 필요한 실정이나 아직 리스테리아증의 치료에는 항생제를 사용하는 치료가 주가 되고 있다. 한편, 최근에는 항생제 남용에 대한 문제점이 대두되고 있어, 리스테리아증의 치료에 효과가 좋으면서도 인체에 안정성이 있는 치료제의 개발이 절실히 요구되고 있는 실정이다.

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한국공개특허 2008-0078779

이에 본 발명자들은 리스테리아증의 치료를 위해 다양한 연구를 하던 중 FXR가 리스테리아 모노사이토제니스(Listeria monocytogenes) 감염을 촉진시킴을 확인함으로써 FXR의 저해제를 사용 시 리스테리아 균을 억제킬 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명의 목적은 FXR(farnesoid X receptor) 유전자의 발현 억제제 또는 FXR(farnesoid X receptor) 단백질의 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 리스테리아증(listeriosis) 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 (a) 리스테리아증이 의심되는 환자의 생물학적 시료로부터 FXR 유전자의 발현 수준 또는 상기 유전자가 코딩하는 단백질의 수준을 측정하는 단계; 및 (b) 상기 유전자의 발현 수준 또는 상기 유전자가 코딩하는 단백질의 수준을 정상 대조구 시료의 해당 유전자의 발현 수준 또는 단백질 수준과 비교하는 단계를 포함하는 리스테리아의 발병을 예측 또는 진단하기 위한 정보를 제공하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 시험관 내에서 FXR 유전자 또는 단백질이 발현되는 세포 내에서 시험물질을 처리하고 FXR 유전자의 발현 또는 단백질의 활성을 측정하는 단계를 포함하는, 리스테리아증의 치료제를 스크리닝 하는 방법을 제공하는 것이다.

상술한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 FXR(farnesoid X receptor) 유전자의 발현 억제제 또는 FXR(farnesoid X receptor) 단백질의 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 리스테리아증(listeriosis) 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 FXR는 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes) 균에서 과발현될 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 억제제는 FXR에 특이적인 안티센스 올리고뉴클레오타이드, siRNA, 앱타머 또는 항체일 수 있다.

또한, 본 발명은 (a) 리스테리아증이 의심되는 환자의 생물학적 시료로부터 FXR 유전자의 발현 수준 또는 상기 유전자가 코딩하는 단백질의 수준을 측정하는 단계; 및 (b) 상기 유전자의 발현 수준 또는 상기 유전자가 코딩하는 단백질의 수준을 정상 대조구 시료의 해당 유전자의 발현 수준 또는 단백질 수준과 비교하는 단계를 포함하는 리스테리아의 발병을 예측 또는 진단하기 위한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 측정은 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcriptase-polymerase chain reaction), 실시간 중합효소 연쇄반응(real time-polymerase chain reaction), 웨스턴 블럿, 노던 블럿, ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석(RIA: radioimmunoassay), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion) 및 면역침전분석법(immunoprecipitation assay)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.

또한 본 발명은 시험관 내에서 FXR 유전자 또는 단백질이 발현되는 세포 내에서 시험물질을 처리하고 FXR 유전자의 발현 또는 단백질의 활성을 측정하는 단계를 포함하는, 리스테리아증의 치료제를 스크리닝 하는 방법을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 시험물질이 FXR 유전자의 발현 또는 단백질의 활성을 저해하는 경우, 상기 시험물질을 리스테리아증의 치료제로 판정하는 단계를 더 추가하는 것일 수 있다.

본 발명의 파르네소이드 엑스 수용체(farnesoid X receptor; FXR)는 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes) 감염을 촉진시키는 활성이 있어, FXR의 저해제를 사용 시 리스테리아 모노사이토제네스에 의해서 일어나는 세균 감염증인 리스테리아의 치료제로 사용할 수 있는 효과가 있다.

도 1A는 BMM 세포를 FXR agonist으로 전처리한 후 리스테리아 균으로 감염시킨 후 리스테리아 균의 수를 측정한 결과이다.
도 1B는 FXR이 결손된 BMM 세포에서 리스테리아 균의 수를 측정한 결과이다.
도 2는 FXR 결손 마우스 군을 대상으로 리스테리아 균을 주입 후 3일 후 마우스를 치사시킨 후 간 및 비장의 리스테리아 균의 수를 측정한 결과이다.

리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)는 식중독 리스테리아 감염증 발병의 원인균이다. 리스테리아 모노사이토제네스는 그람양성, 비아포형성균으로 4℃ 내지 50℃사이에서 증식하는 통성 혐기성 간균이다. 인체 리스테리아 감염증은 대부분 산발적으로 발생되며, 감염원과 통로는 주로 오염된 식품이다.

리스테리아균은 보통 토양과 식물, 하수 오물 등에서 서식한다. 이와 같은 서식 특성 때문에 생야채와 냉장을 필요로 하는 치즈 및 육류 등이 이 균에 오염될 위험이 상대적으로 높다. 리스테리아균에 의한 질병은 리스테리아증(listeriosis)이라 불리는데 일반적인 항생제를 사용해 이를 치료하는 것이 보통이다.

리스테리아증은 후진국에서 특히 많이 발생하며 에이즈와 같은 질병으로 인해 면역계(immune system)가 약화된 사람에게는 뇌막염(meningitis)까지 유발시킬 수 있다. 리스테리아증은 리스테리아균이 위를 통해 장과 혈류로 침투하면서 발병된다. 일단 혈류까지 리스테리아균이 침투하면 중추신경계(central nervous system)와 태반(placenta)까지 이 균이 확산될 수 있다.

한편, 상기 리스테리아증의 치료제로는 페니실린 G, 암피실린, 겐타마이신과 같은 항생제가 사용되고 있다. 그러나, 리스테리아증은 그 감염증세가 뚜렷하지 않으며 치료제로 사용되는 상기 항생제에 대한 리스테리아 균주의 내성으로 인해 새로운 리스테리아증의 예방 및 치료방법이 절실히 요구되고 있다.

이에 본 발명자들은 리스테리아증을 예방 또는 치료하기 위하여 다양한 연구를 진행하던 중 FXR가 리스테리아 모노사이토제니스(Listeria monocytogenes) 감염을 촉진시킴을 확인함으로써 FXR의 저해제를 사용 시 리스테리아 균을 억제킬 수 있음을 확인하였다.

따라서, 본 발명은 FXR(farnesoid X receptor) 유전자의 발현 억제제 또는 FXR(farnesoid X receptor) 단백질의 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 리스테리아증(listeriosis) 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명의 조성물에서 유효성분으로 사용될 수 있는 FXR(farnesoid X receptor) 억제제는 안티센스 올리고뉴클레오티드, RNAi, siRNA, shRNA, 앱타머, 항체, 단일사슬 가변영역 단편, 저분자량의 화합물 또는 천연추출물을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에서 상기 "안티센스 올리고뉴클레오타이드란 용어는 특정 mRNA의 서열에 상보적인 핵산 서열을 함유하고 있는 DNA 또는 RNA 또는 이들의 유도체를 의미하고, mRNA 내의 상보적인 서열에 결합하여 mRNA의 단백질로의 번역을 저해하는 작용을 한다. 본 발명의 안티센스 서열은 상기 유전자의 mRNA에 상보적이고 상기 mRNA에 결합할 수 있는 DNA 또는 RNA 서열을 의미하며, 상기 mRNA의 번역, 세포질내로의 전위(translocation), 성숙(maturation) 또는 다른 모든 전체적인 생물학적 기능에 대한 필수적인 활성을 저해할 수 있다.

또한, 상기 안티센스 핵산은 효능을 증진시키기 위하여 하나 이상의 염기, 당 또는 골격(backbone)의 위치에서 변형될 수 있다(De Mesmaeker et al., Curr Opin Struct Biol., 5, 3, 343-55, 1995). 핵산 골격은 포스포로티오에이트, 포스포트리에스테르, 메틸 포스포네이트, 단쇄 알킬, 시클로알킬, 단쇄 헤테로아토믹, 헤테로시클릭 당간 결합 등으로 변형될 수 있다. 또한, 안티센스 핵산은 하나 이상의 치환된 당 모이어티(sugar moiety)를 포함할 수 있다. 안티센스 핵산은 변형된 염기를 포함할 수 있다. 변형된 염기에는 하이포크잔틴, 6-메틸아데닌, 5-메틸피리미딘(특히 5-메틸시토신), 5-하이드록시메틸시토신(HMC), 글리코실 HMC, 젠토비오실 HMC, 2-아미노아데닌, 2-티오우라실, 2-티오티민, 5-브로모우라실, 5-하이드록시메틸우라실, 8-아자구아닌, 7-데아자구아닌, N6 (6-아미노헥실)아데닌, 2,6-디아미노퓨린 등이 있다. 또한, 본 발명의 안티센스 핵산은 상기 안티센스 핵산의 활성 및 세포 흡착성을 향상시키는 하나 이상의 모이어티(moiety) 또는 컨쥬게이트(conjugate)와 화학적으로 결합될 수 있다. 콜레스테롤 모이어티, 콜레스테릴 모이어티, 콜릭산, 티오에테르, 티오콜레스테롤, 지방성 사슬, 인지질, 폴리아민, 폴리에틸렌 글리콜 사슬, 아다맨탄 아세트산, 팔미틸 모이어티, 옥타데실아민, 헥실아미노-카르보닐-옥시콜에스테롤 모이어티 등의 지용성 모이어티 등이 있고 이에 제한되지는 않는다. 지용성 모이어티를 포함하는 올리고뉴클레오티드와 제조 방법은 본 발명의 기술 분야에서 이미 잘 알려져 있다(미국특허 제5,138,045호, 제5,218,105호 및 제5,459,255호). 상기 변형된 핵산은 뉴클레아제에 대한 안정성을 증가시키고 안티센스 핵산과 표적 mRNA와의 결합 친화력을 증가시킬 수 있다.

안티센스 올리고뉴클레오타이드는 통상의 방법으로 시험관에서 합성되어 생체 내로 투여하거나 생체 내에서 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 합성되도록 할 수 있다. 시험관에서 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 합성하는 일예는 RNA 중합효소 I를 이용하는 것이다. 생체 내에서 안티센스 RNA가 합성되도록 하는 한 가지 예는 인식부위(MCS)의 기원이 반대 방향에 있는 벡터를 사용하여 안티센스 RNA가 전사되도록 하는 것이다. 이런 안티센스 RNA는 서열 내에 번역 중지 코돈이 존재하도록 하여 펩타이드 서열로 번역되지 않도록 하는 것이 바람직하다.

본 발명에서 "RNAi"는 RNA Interference를 지칭하는 말로, 우리말로 풀이하면 RNA 간섭이라는 뜻을 지니고 있다. RNA 간섭은 대부분의 생물체 사이에서 잘 보존되어 있는 특이적 유전자억제 현상이다. 바이러스 감염에 대한 방어나 트랜스포손을 억제하기 위하여 혹은 비정상적 mRNA를 제거하기 위하여 세포가 사용하는 유전자 감시기작의 일종으로 생각되고 있다. 특히, small RNA에 의한 유전자 억제현상을 넓은 의미에서 RNA간섭이라 하고, 좁은 의미의 RNA 간섭은 siRNA에 의한 mRNA 분해 현상을 뜻한다. 또한 RNA간섭은 siRNA를 이용한 유전자 억제 실험 기술을 뜻하기도 한다.

본 발명에서 "siRNA라는 용어는 RNA 방해 또는 유전자 사일런싱을 매개할 수 있는 핵산 분자를 의미한다(국제공개 특허번호 00/44895, 01/36646, 99/32619, 01/29058, 99/07409 및 00/44914 참조). siRNA는 표적 유전자의 발현을 억제할 수 있기 때문에 효율적인 유전자 넉다운(knock-down) 방법으로서 또는 유전자치료 방법으로 제공된다.

본 발명의 siRNA 분자는, 센스 가닥(상기 마커 유전자의 mRNA 서열에 상응하는 서열)과 안티센스 가닥(상기 mRNA 서열에 상보적인 서열)이 서로 반대쪽에 위치하여 이중쇄를 이루는 구조를 가질 수 있으며, 또한, 본 발명의 siRNA 분자는 자기-상보성(self-complementary) 센스 및 안티센스 가닥을 가지는 단일쇄 구조를 가질 수 있다. 나아가 siRNA는 RNA끼리 짝을 이루는 이중사슬 RNA 부분이 완전히 쌍을 이루는 것에 한정되지 않고 미스매치(대응하는 염기가 상보적이지 않음), 벌지(일방의 사슬에 대응하는 염기가 없음) 등에 의하여 쌍을 이루지 않는 부분이 포함될 수 있다. 또한, siRNA 말단 구조는 상기 마커 유전자의 발현을 RNAi 효과에 의하여 억제할 수 있는 것이면 평활(blunt) 말단 혹은 점착(cohesive) 말단 모두 가능하고, 점착 말단 구조는 3'-말단 돌출 구조와 5'-말단 돌출 구조 모두 가능하다.

또한, 본 발명의 siRNA 분자는 자기-상보성(self-complementary) 센스 및 안티센스 가닥 사이에 짧은 뉴클레오티드 서열이 삽입된 형태를 가질 수 있으며, 이 경우 뉴클레오타이드 서열의 발현에 의해 형성된 siRNA 분자는 분자 내 혼성화에 의하여 헤어핀 구조를 형성하게 되며, 전체적으로는 스템-앤드-루프 구조를 형성하게 된다. 이 스템-앤드-루프 구조는 인 비트로 또는 인 비보에서 프로세싱되어 RNAi를 매개할 수 있는 활성의 siRNA 분자를 생성한다.

siRNA를 제조하는 방법은 시험관에서 siRNA를 직접 합성한 뒤, 형질전환 과정을 거쳐 세포 안으로 도입시키는 방법과 siRNA가 세포 안에서 발현되도록 제조된 siRNA 발현 벡터 또는 PCR-유래의 siRNA 발현 카세트 등을 세포안으로 형질전환 또는 감염(infection)시키는 방법이 있다.

또한, 유전자 특이적인 siRNA를 포함하는 본 발명의 조성물은 siRNA의 세포내 유입을 촉진시키는 제제를 포함할 수 있다. siRNA의 세포내 유입을 촉진시키는 제제에는 일반적으로 핵산 유입을 촉진하는 제제를 사용할 수 있으며, 이러한 예로는, 리포좀을 이용하거나 콜레스테롤, 콜레이트 및 데옥시콜산을 비롯한 다수의 스테롤류 중 1종의 친유성 담체와 함께 배합할 수 있다. 또한 폴리-L-라이신(poly-L-lysine), 스퍼민(spermine), 폴리실아잔(polysilazane), 폴리에틸레민(PEI: polyethylenimine), 폴리디하이드로이미다졸레늄(polydihydroimidazolenium), 폴리알리라민(polyallylamine), 키토산(chitosan) 등의 양이온성 고분자(cationic polymer)를 이용할 수도 있고, 숙실화된 PLL(succinylated PLL), 숙실화된 PEI(succinylated PEI), 폴리글루타믹산(polyglutamic acid), 폴리아스파틱산(polyaspartic acid), 폴리아크릴산(polyacrylic acid), 폴리메타아크릴산(polymethacylic acid), 덱스트란 설페이트(dextran sulfate), 헤파린(heparin), 히아루릭산(hyaluronic acid) 등의 음이온성 고분자(anionic polymer)를 이용할 수 있다.

본 명세서에서 "앱타머(aptamer)"라는 용어는 소정의 표적 분자에 대한 결합 활성을 갖는 올리고뉴클레오타이드 분자를 말한다. 앱타머는, 소정의 표적 분자에 대하여 결합함으로써, 소정의 표적 분자의 활성을 저해할 수 있다.

본 발명의 앱타머는 RNA, DNA, 수식(modified) 올리고뉴클레오타이드 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 본 발명의 앱타머는 또한, 직쇄상 또는 환상의 형태일 수 있다. 본 발명의 앱타머의 길이는 특별히 한정되지 않고, 통상 약 15∼약 200 뉴클레오타이드일 수 있지만, 예컨대 약 100 뉴클레오타이드 이하이고, 바람직하게는 약 80 뉴클레오타이드 이하이며, 보다 바람직하게는 약 60 뉴클레오타이드 이하이고, 가장 바람직하게는 약 45 뉴클레오타이드 이하일 수 있다. 본 발명의 앱타머의 길이는 또한, 예컨대 약 18, 20 또는 25 뉴클레오타이드 이상일 수 있다. 총 뉴클레오타이드 개수가 적으면 화학합성, 화학수식 및 대량 생산이 보다 용이하고, 경제적이며, 생체 내 안정성은 높으면서 독성은 낮아 유리하다.

본 발명의 앱타머는 SELEX법 및 그 개량법[예컨대 Ellington et al., Nature, 1990 346, 818-822; Tuerk et al., Science, 1990 249, 505-510]을 이용함으로써 제작할 수 있다. SELEX법이란, 10-14개 정도의 상이한 뉴클레오타이드 서열을 갖는 올리고뉴클레오타이드의 풀로부터, 표적 물질에 특이적으로 결합하는 올리고뉴클레오타이드를 선별해오는 방법이다. 사용되는 올리고뉴클레오타이드는 40잔기 정도의 랜덤 서열을 프라이머 서열로 끼운 구조를 하고 있다. 이 올리고뉴클레오타이드 풀을 표적 물질과 회합시켜, 필터 등을 이용하여 표적 물질에 결합한 올리고뉴클레오타이드만 회수한다. 회수한 올리고뉴클레오타이드를 RT-PCR로 증폭하고, 이것을 다음 라운드의 주형으로서 이용한다. 이 작업을 10회 정도 반복함으로써 표적 물질과 특이적으로 결합하는 앱타머를 취득할 수 있다. SELEX법으로는 라운드수를 늘리거나 경합 물질을 사용함으로써, 표적 물질에 대하여 보다 결합력이 강한 앱타머를 농축하고, 선별할 수 있다. 따라서, SELEX의 라운드수를 조절하고/하거나 경합 상태를 변화시킴으로써, 결합력이 상이한 앱타머, 결합 형태가 상이한 앱타머, 결합력이나 결합 형태는 동일하지만 염기 서열이 상이한 앱타머를 얻을 수 있다. 또한, SELEX법에는 PCR에 의한 증폭 과정이 포함되지만, 그 과정에서 망간 이온을 사용하는 등으로 변이를 부여함으로써, 보다 다양성이 풍부한 SELEX를 행하는 것이 가능해진다.

또한, 앱타머는 종래 SELEX 기법 이외에, 복합 타겟, 즉 살아있는 세포 및 조직에 대해 Cell-SELEX 기법을 이용하여 얻을 수 있는데(Guo et al., Int. J. Mol. Sci., 9(4): 668, 2008), Cell-SELEX 기법은 표면 마커 타겟이 알려져 있지 않을 때조차도, 질환 세포에 대한 앱타머를 개발할 수 있게 하는 장점이 있다. 게다가, 분리된 상태에서는 그 본래의 특성을 나타내지 않을 수도 있어, 생리적 상태에 있는 타겟 단백질은 선별과정에서 더 기능적인 접근을 가능하게 하기 때문에, Cell-SELEX 기법은 종래의 SELEX 과정에 비하여 장점을 가지고 있다.

한편, 앱타머는, 인산기의 음전하를 이용한 이온결합, 리보오스를 이용한 소수성 결합 및 수소결합, 올리고 뉴클레오타이드 염기를 이용한 수소결합이나 스태킹(stacking)결합 등 다양한 결합 양식에 의해 표적 물질과 결합한다. 특히, 구성 뉴클레오타이드의 수만큼 존재하는 인산기의 음전하를 이용한 이온결합은 강하게 단백질의 표면에 존재하는 라이신이나 아르기닌의 양전하와 결합한다. 이 때문에, 표적 물질과의 직접적인 결합에 관련되어 있지 않은 올리고 뉴클레오타이드 염기는 치환할 수 있다. 특히, 스템 구조의 부분은 이미 염기쌍이 만들어져 있고, 또한 이중 나선 구조의 내측을 향하고 있기 때문에, 올리고 뉴클레오타이드 염기는 표적 물질과 직접 결합하기 어렵다. 따라서 염기쌍을 다른 염기쌍으로 치환하여도 앱타머의 활성은 감소하지 않는 경우가 많다. 루프구조 등 염기쌍을 만들지 않은 구조에서도 올리고 뉴클레오타이드 염기가 표적 분자와의 직접적인 결합에 관여하지 않는 경우에, 염기의 치환이 가능하다. 예컨대, 리보오스의 2' 위치에 있어서, 히드록실기가 임의의 원자 또는 기로 치환되어 있는 뉴클레오타이드일 수 있다. 이러한 임의의 원자 또는 기로서는, 예컨대, 수소 원자, 불소 원자 또는 -O-알킬기 (예:-O-CH₃), -O-아실기 (예, -O-CHO), 아미노기(예, -NH₂)로 치환되어 있는 뉴클레오타이드를 들 수 있다. 이와 같이 앱타머는 표적 분자와의 직접적인 결합에 관련되어 있는 관능기를 치환 또는 제거하지 않는 한 그 활성을 유지한다.

또한 본 발명의 FXR의 억제제로는 FXR 단백질 활성 억제제를 포함하며, 이러한 단백질 활성 억제제로서 바람직하게는 FXR에 특이적으로 결합하는 항체, 단일사슬 가변영역 단편, 펩타이드, 저분자량의 화합물 또는 천연추출물을 예시할 수 있다.

본 발명에서 이용될 수 있는 FXR 단백질에 특이적으로 결합하여 활성을 억제하는 항체는 폴리클로날 또는 모노클로날 항체이다. FXR 단백질에 대한 항체는 당업계에서 통상적으로 실시되는 방법들, 예를 들어, 융합 방법(Kohler et al., European Journal of Immunology, 6:511-519(1976)), 재조합 DNA 방법(미국 특허 제4,816,56호) 또는 파아지 항체 라이브러리 방법(Clackson et al, Nature, 352:624-628(1991) 및 Marks et al.,J. Mol. Biol., 222:58, 1-597(1991))에 의해 제조될 수 있다. 항체 제조에 대한 일반적인 과정은 문헌[Harlow, E. et al., Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, New York, 1999; Zola, H., Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, CRC Press, Inc., Boca Raton, Florida, 1984; 및 Coligan , CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY, Wiley/Greene, NY, 1991]에 상세하게 기재되어 있으며, 상기 문헌들은 본 명세서에 참조로서 포함된다. 예를 들어, 모노클로날 항체를 생산하는 하이브리도마 세포의 제조는 불사멸화 세포주를 항체-생산 림프구와 융합시켜 이루어지며, 이 과정에 필요한 기술은 당업자에게 잘 알려져 있으며 용이하게 실시할 수 있다. 폴리클로날 항체는 FXR 단백질 항원을 적합한 동물에게 주사하고, 이 동물로부터 항혈청을 수집한 다음, 공지의 친화성(affinity) 기술을 이용하여 항혈청으로부터 항체를 분리하여 얻을 수 있다.

본 발명에서 항체는 단일사슬 가변영역 단편(scFv)을 포함할 수 있다. 상기 단일사슬 가변영역 단편은 "경사슬의 가변성 부위(VL)-링커-중사슬의 가변성 부위(VH)"로 구성될 수 있다. 상기 링커는 중사슬 및 경사슬의 가변성 부위를 인위적으로 연결하는 작용을 하는 일정 길이의 아미노산 서열을 의미한다.

본 발명에서 상기 치료란, 달리 언급되지 않는 한, 상기 용어가 적용되는 질환 또는 질병, 또는 상기 질환 또는 질병의 하나 이상의 증상을 역전시키거나, 완화시키거나, 그 진행을 억제하거나, 또는 예방하는 것을 의미한다.

본 발명에 따른 리스테리아증(listeriosis)의 예방 또는 치료용 조성물은 약학적으로 유효한 양의 상기 유효성분을 단독으로 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기에서 약학적으로 유효한 양이란 리스테리아증의 증상을 예방, 개선 및 치료하기에 충분한 양을 말한다.

또한, 본 발명에 상기 약학적으로 유효한 양은 리스테리아증 증상의 정도, 환자의 연령, 체중, 건강상태, 성별, 투여 경로 및 치료기간 등에 따라 적절히 변화될 수 있다.

또한, 상기에서 “약학적으로 허용되는”이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다. 상기 담체, 부형제 및 희석제의 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 또한, 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제형화될 수 있다. 제형은 분말, 과립, 정제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 멸균 주사용액, 멸균 분말의 형태일 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 리스테리아증의 예방 또는 치료용 조성물은 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있으며, 활성 성분의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 환자의 중증도 등의 여러 인자에 따라 적절히 선택될 수 있고, 본 발명에 따른 리스테리아증의 예방 또는 치료용 조성물은 리스테리아증의 증상을 예방, 개선 또는 치료하는 효과를 가지는 공지의 화합물과 병행하여 투여할 수 있다.

나아가 본 발명은 파르네소이드 엑스 수용체(farnesoid X receptor; FXR) 저해제를 유효성분으로 포함하는 리스테리아증(listeriosis)을 개선 또는 예방할 수 있는 식품용 조성물을 제공할 수 있으며, 본 발명에 따른 상기 식품용 조성물은 리스테리아증 증상의 개선 또는 예방에 효과가 있는 식품, 예컨대, 식품의 주원료, 부원료, 식품 첨가제, 기능성 식품 또는 음료로 용이하게 활용할 수 있다.

본원에서 상기 식품이란, 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 식품, 식품 첨가제, 기능성 식품 및 음료를 모두 포함하는 것을 말한다.

본원발명에 따른 상기 식품용 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 기능성 식품 등이 있다. 추가로, 본원발명에서 식품에는 특수영양식품(예, 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 빵류, 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스넥류), 캔디류, 쵸코렛류, 껌류, 아이스크림류, 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실 음료, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면 스프 등)을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.

또한, 상기 기능성 식품이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미하며, 구체적으로는 건강 기능성 식품일 수 있다. 상기 기능성 식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.

또한, 본원발명에서 상기음료란 갈증을 해소하거나 맛을 즐기기 위하여 마시는 것의 총칭을 의미하며 기능성 음료를 포함한다. 상기 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 리스테리아증 증상의 개선 또는 예방용 조성물을 포함하는 것 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

나아가 상기 기술한 것 이외에 본원발명의 리스테리아증 증상의 개선 또는 예방을 위한 식품용 조성물을 함유하는 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있으며, 상기 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.

본원발명의 식품용 조성물을 함유하는 식품에 있어서, 상기 본 발명에 따른 조성물의 양은 전체 식품 중량의 0.001중량% 내지 90중량%로 포함할 수 있으며, 바람직하게는 0.1중량% 내지 40중량%로 포함할 수 있고, 음료의 경우, 100ml를 기준으로 0.001g 내지 2g, 바람직하게는 0.01g 내지 0.1g의 비율로 포함할 수 있으나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 건강 조절을 목적으로 하는 장기간 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있으므로 상기 범위에 한정되는 것은 아니다.

이하에서는 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다 할 것이다.

< 실시예 1>

FXR 의 리스테리아 균 촉진 효과( in vitro 실험)

본 발명자들은 FXR과 리스테리아와의 연관성을 확인하기 위하여 BMM(Bone marrow-derived macrophages) 세포를 FXR agonist인 펙사라민(fexaramine)으로 전처리 후 리스테리아 균으로 감염시키거나, 대조군으로 펙사라민(fexaramine)으로 전처리하지 않고 리스테리아 균으로 감염시킨 후 리스테리아 균의 CFU를 측정하였다.

이를 위하여 in vitro 실험에서는 마우스 골수세포를 M-CSF로 처리하여 얻은 BMM (Bone marrow-derived macrophages) 세포를 사용하였으며, BMM 세포를 배양한 지 6일째 되는 날 BMM 세포를 수확하여 세포 배양 플레이트에 시딩(seeding)하였다. 10 U/ml의 IFN-γ를 밤새 활성화시켰으며, 그런 다음 항생물질이 없는 배지에서 1시간 동안 10의 감염다중도(multiplicity of infection; MOI)로 리스테리아(L. monocytogenes)를 접종하였다.

그런 다음 50 μg/ml의 겐타마이신이 포함된 배지로 변경하였으며 한 시간 후에 0.2% Triton X-100이 함유된 세포용해물에 세포를 용해시켰다. 세포용해물의 연속희석물은 BHI 아가 플레이트에 도말하였고, 37 ℃의 온도에서 밤새 배양한 후 박테리아의 숫자를 측정하였다.

그 결과, BMM 세포를 FXR agonist인 펙사라민(fexaramine)으로 전처리한 후 리스테리아(LM)균으로 감염시켰을 경우 검출된 LM의 colony forming unit(CFU)는 대조군 전처리에 비해 유의하게 증가하였음을 확인할 수 있었다(도 1A 참조).

또한 FXR가 들어있는 BMM 세포의 경우 FXR가 없는 BMM 세포에 비해 리스테리아 박테리아 수(CFU)가 유의적으로 증가하였음을 알 수 있었다(도 1B 참조).

상기의 결과로 FXR이 리스테리아 감염에 있어서 촉진적 기능을 가짐을 확인할 수 있었고, 따라서 FXR 저해제를 사용 시 리스테리아 감염을 효과적으로 억제할 수 있음을 알 수 있었다.

< 실시예 2>

FXR 의 리스테리아 균 촉진 효과( in vivo 실험)

본 발명자들은 상기 실시예 1의 결과로 FXR이 리스테리아 감염에 있어서 촉진적 기능을 함을 확인하였으며 in vitro 상의 결과가 in vivo에서 재현되는지 여부를 알아보기 위하여 정상마우스와 FXR 결손 마우스 (FXR-/-)를 사용하여 확인하였다.

정상마우스 군과 FXR 결손 마우스 군에 1*10⁶(cfu) 의 양으로 리스테리아(L. monocytogenes) 균을 복강 주입시켰으며, 리스테리아 균 주입 후 72시간이 흐른 후 혈액을 제거하고 실험동물을 치사시킨 후 간과 비장을 적출하였다. 간과 비장을 BHI 플레이트에서 37℃의 온도로 밤새 배양한 후 리스테리아 박테리아 수를 측정하였다.

각각의 마우스군에서 감염 3일후 비장과 간장을 적출한 결과, FXR이 결손된 마우스군에서 리스테리아(LM) 균이 유의적으로 낮게 검출되었음을 알 수 있었다.이는 in vitro 결과와 일치하는 것이다.

결론적으로 담즙산 수용체인 FXR은 LM 감염을 촉진하며, 따라서 FXR의 기능을 차단하는 FXR antagonist나 FXR siRNA는 LM 감염의 치료제로 사용될 수 있음을 규명하였다는 점에 기술적 특징이 있다.

< 실시예 3>

FXR 저해제의 리스테리아 모노사이토제네스 균 억제 효과

본 발명자들은 FXR 저해제가 리스테리아증을 치료하는 효과가 있는지를 알아보기 위하여 BMM(Bone marrow-derived macrophages) 세포를 FXR에 대한 siRNA로 전처리 후 리스테리아 균으로 감염시킨 후 리스테리아 균의 CFU를 측정하였다.

그 결과, FXR에 대한 siRNA로 전처리하지 않은 군에 비해 FXR에 대한 siRNA로 전처리한 군에서 리스테리아 모노사이토제네스(L. monocytogenes) 균이 효과적으로 억제되었음을 알 수 있었다.

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항 들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

<110> Sookmyung Women's University <120> Composition for preventing or treating listeriosis comprising FXR inhibitor <130> PN1502-053 <160> 2 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 1798 <212> DNA <213> FXR dna sequence <400> 1 ggaagctaag gatggtgatg cagtttcagg gcttagaaaa tccaattcag attagtcttc 60 accacagcca ccggctgtca ggatttgtgc cggacgggat gagtgtgaag ccagctaaag 120 gtatgctaac agaacacgcg gcaggccctc tggggcagaa tctggatttg gaatcgtact 180 ccccatacaa caatgtcccg tttcctcaag ttcagccaca gatttcctcc tcgtcttact 240 attccaacct gggcttctac ccccaacaac cggaagactg gtattctcct ggcatctatg 300 aactcaggcg aatgcccgct gagactgggt accagggaga gactgaggta tcagagatgc 360 ctgtgacaaa gaagccgcga atggccgcgg catcggcagg cagaataaaa ggggatgagc 420 tgtgtgttgt ctgtggagac agggcctctg ggtaccacta caacgcgctc acctgtgagg 480 gctgcaaagg tttcttccga agaagcatta ccaagaacgc cgtgtacaag tgtaagaacg 540 ggggcaactg cgtgatggac atgtacatgc gcaggaagtg ccaggagtgc cggctaagga 600 agtgcagaga gatggggatg ttggctgaat gtttgttaac tgaaatccag tgtaaatcta 660 aacggctaag gaaaaatgtg aagcagcacg ctgatcagac agtgaatgag gacgacagcg 720 aagggcgtga cttgcgacaa gtgacctcca caaccaagtt ttgcagggag aaaacggaac 780 tcacggcaga ccagcagacc ctcctggatt atattatgga ttcgtacaac aaacagagaa 840 tgcctcagga aatcacaaat aaaatcttaa aagaagaatt tagtgcagaa gaaaattttc 900 tcatattaac agaaatggca accagccatg tacagattct cgtagaattc acaaaaaagc 960 ttccagggtt tcagacactg gaccacgaag atcagattgc tttgctcaaa gggtccgcag 1020 tggaggccat gtttcttcgt tcggcggaga ttttcaataa gaaacttcct gccggacatg 1080 cagacctgtt ggaagaaaga attcgaaaga gtggtatctc tgatgagtat ataaccccga 1140 tgttcagttt ctataaaagt gttggagaac tcaaaatgac tcaggaggag tacgctctgc 1200 tcacagcgat cgtcatcctc tctccagaca gacaatacat caaggacaga gaggcggtgg 1260 agaagctgca ggagcccctg cttgatgtgc tacaaaagct gtgcaagatg taccagcctg 1320 agaacccaca gcatttcgcc tgcctcctgg gtcgcctgac ggaactccgg acattcaacc 1380 atcaccacgc tgagatgctg atgtcttgga gagtgaatga tcacaagttc accccgctcc 1440 tctgtgagat ctgggatgtg cagtgatgga caccagtggg gctggctcct tgtcctcctc 1500 ggaacagaaa ccttgtttcg tttgtacctg gtttcactca agaatctcaa tgaatattta 1560 tgtggcaatt atacacctcc cacggttgta aatacagact agatagaact gctttcccca 1620 cactgtattt tacaaggctt caggaaaccc cactggcatg cccttttggc ctaattaaat 1680 caattgttac ttcaattcta tctactgagc taggggcata ttattcttca ttcgacaata 1740 ttatatatat tttataaagt tgagctgttt tcaactgaga caataaactg aatgtaat 1798 <210> 2 <211> 484 <212> PRT <213> FXR Protein sequence <400> 2 Met Val Met Gln Phe Gln Gly Leu Glu Asn Pro Ile Gln Ile Ser Leu 1 5 10 15 His His Ser His Arg Leu Ser Gly Phe Val Pro Asp Gly Met Ser Val 20 25 30 Lys Pro Ala Lys Gly Met Leu Thr Glu His Ala Ala Gly Pro Leu Gly 35 40 45 Gln Asn Leu Asp Leu Glu Ser Tyr Ser Pro Tyr Asn Asn Val Pro Phe 50 55 60 Pro Gln Val Gln Pro Gln Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Ser Asn Leu 65 70 75 80 Gly Phe Tyr Pro Gln Gln Pro Glu Asp Trp Tyr Ser Pro Gly Ile Tyr 85 90 95 Glu Leu Arg Arg Met Pro Ala Glu Thr Gly Tyr Gln Gly Glu Thr Glu 100 105 110 Val Ser Glu Met Pro Val Thr Lys Lys Pro Arg Met Ala Ala Ala Ser 115 120 125 Ala Gly Arg Ile Lys Gly Asp Glu Leu Cys Val Val Cys Gly Asp Arg 130 135 140 Ala Ser Gly Tyr His Tyr Asn Ala Leu Thr Cys Glu Gly Cys Lys Gly 145 150 155 160 Phe Phe Arg Arg Ser Ile Thr Lys Asn Ala Val Tyr Lys Cys Lys Asn 165 170 175 Gly Gly Asn Cys Val Met Asp Met Tyr Met Arg Arg Lys Cys Gln Glu 180 185 190 Cys Arg Leu Arg Lys Cys Arg Glu Met Gly Met Leu Ala Glu Cys Leu 195 200 205 Leu Thr Glu Ile Gln Cys Lys Ser Lys Arg Leu Arg Lys Asn Val Lys 210 215 220 Gln His Ala Asp Gln Thr Val Asn Glu Asp Asp Ser Glu Gly Arg Asp 225 230 235 240 Leu Arg Gln Val Thr Ser Thr Thr Lys Phe Cys Arg Glu Lys Thr Glu 245 250 255 Leu Thr Ala Asp Gln Gln Thr Leu Leu Asp Tyr Ile Met Asp Ser Tyr 260 265 270 Asn Lys Gln Arg Met Pro Gln Glu Ile Thr Asn Lys Ile Leu Lys Glu 275 280 285 Glu Phe Ser Ala Glu Glu Asn Phe Leu Ile Leu Thr Glu Met Ala Thr 290 295 300 Ser His Val Gln Ile Leu Val Glu Phe Thr Lys Lys Leu Pro Gly Phe 305 310 315 320 Gln Thr Leu Asp His Glu Asp Gln Ile Ala Leu Leu Lys Gly Ser Ala 325 330 335 Val Glu Ala Met Phe Leu Arg Ser Ala Glu Ile Phe Asn Lys Lys Leu 340 345 350 Pro Ala Gly His Ala Asp Leu Leu Glu Glu Arg Ile Arg Lys Ser Gly 355 360 365 Ile Ser Asp Glu Tyr Ile Thr Pro Met Phe Ser Phe Tyr Lys Ser Val 370 375 380 Gly Glu Leu Lys Met Thr Gln Glu Glu Tyr Ala Leu Leu Thr Ala Ile 385 390 395 400 Val Ile Leu Ser Pro Asp Arg Gln Tyr Ile Lys Asp Arg Glu Ala Val 405 410 415 Glu Lys Leu Gln Glu Pro Leu Leu Asp Val Leu Gln Lys Leu Cys Lys 420 425 430 Met Tyr Gln Pro Glu Asn Pro Gln His Phe Ala Cys Leu Leu Gly Arg 435 440 445 Leu Thr Glu Leu Arg Thr Phe Asn His His His Ala Glu Met Leu Met 450 455 460 Ser Trp Arg Val Asn Asp His Lys Phe Thr Pro Leu Leu Cys Glu Ile 465 470 475 480 Trp Asp Val Gln <210> 3 <211> 21 <212> RNA <213> FXR siRNA sequence <400> 1 UAGAUGCCAGGAGAAUACCAG 21

Claims (7)

1. FXR(farnesoid X receptor) 유전자의 발현 억제제로 서열목록 3의 염기서열을 갖는 siRNA를 유효성분으로 포함하는, 리스테리아증(listeriosis) 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
2. 삭제
3. 제1항에 있어서,
   상기 FXR(farnesoid X receptor) 유전자는 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 것이고, 상기 FXR(farnesoid X receptor) 유전자가 암호화하는 단백질은 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 리스테리아증(listeriosis) 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
4. (a) 리스테리아증이 의심되는 환자의 생물학적 시료로부터 FXR 유전자의 발현 수준 또는 상기 유전자가 코딩하는 단백질의 수준을 측정하는 단계; 및
   (b) 상기 유전자의 발현 수준 또는 상기 유전자가 코딩하는 단백질의 수준을 정상 대조구 시료의 해당 유전자의 발현 수준 또는 단백질 수준과 비교하는 단계를 포함하는 리스테리아증의 발병을 예측 또는 진단하기 위한 정보를 제공하는 방법.
5. 제4항에 있어서,
   상기 측정은 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcriptase-polymerase chain reaction), 실시간 중합효소 연쇄반응(real time-polymerase chain reaction), 웨스턴 블럿, 노던 블럿, ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석(RIA: radioimmunoassay), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion) 및 면역침전분석법(immunoprecipitation assay)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 리스테리아증의 발병을 예측 또는 진단하기 위한 정보를 제공하는 방법.
6. 시험관 내에서 FXR 유전자 또는 단백질이 발현되는 세포 내에서 시험물질을 처리하고 FXR 유전자의 발현 또는 단백질의 활성을 측정하는 단계를 포함하는, 리스테리아증의 치료제를 스크리닝 하는 방법.
7. 제6항에 있어서,
   상기 시험물질이 FXR 유전자의 발현 또는 단백질의 활성을 저해하는 경우, 상기 시험물질을 스테리아증의 치료제로 판정하는 단계를 더 추가하는 것을 특징으로 하는 리스테리아증의 치료제를 스크리닝 하는 방법.

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