KR101647899B1 - 헬리코박터 균 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 PTL(parthenolide), DPI(diphenyleneiodonium chloride) 또는 이들의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 세균성 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 의약외품 조성물, 상기 조성물을 포함하는 세균성 감염증 예방 또는 치료용 키트 및 상기 조성물을 이용하여 세균성 감염증을 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에서 제공하는 PTL 또는 DPI는 항생제 내성을 나타내는 H. pylori 균주에 대하여도 항균활성을 나타내므로, PTL 또는 DPI는 H. pylori 감염증의 치료제 개발에 널리 활용될 수 있을 것이다.

Description

헬리코박터 균 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물{Pharmaceutical composition for preventing or treating for Helicobacter pylori infectious diseases}
본 발명은 헬리코박터 균 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로, 본 발명은 PTL(parthenolide), DPI(diphenyleneiodonium chloride) 또는 이들의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 세균성 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 의약외품 조성물, 상기 조성물을 포함하는 세균성 감염증 예방 또는 치료용 키트 및 상기 조성물을 이용하여 세균성 감염증을 치료하는 방법에 관한 것이다.
헬리코박터 파이로리는 1983년에 호주의 마샬(Marshall)과 워렌(Warren)에 의해 발견되었으며, 위염 및 위궤양환자의 위점막 생검조식으로부터 그람음성의 만곡형 간균으로 관찰되어, B형 만성위염과 위십이지장 궤양을 유발시키며 위암을 유발시킬 수 있는 원인균으로 알려져 있다. 상기 헬리코박터 파이로리는 요소 분해효소인 우레아제(urease)를 분비하여 위액내의 요소를 가수분해하여 암모니아를 형성한다. 상기 암모니아는 위액 내 pH를 증가시키고, 위 점액층을 손상시키며, 암모니아 자체가 위점액층 세포의 산소 소비와 미토콘드리아의 ATP 생성을 억제하고, 궁극적으로 암모니아는 모노클로로아민을 형성하여 활성산소종을 생성하기 때문에 세포 손상을 유발하여 만성염증을 일으키고, 나아가 DNA 손상을 일으켜 암의 발생 과정을 촉진시킨다고 알려져 있다. 이에 따라, 상기 헬리코박터 파이로리를 제균하여 위장내 질환을 예방 또는 치료할 수 있는 방법을 개발하려는 연구가 활발히 진행되고 있다.
예를 들어, WO 1995/027704에는 헬리코박터 관련 질환을 치료하기 위한 화합물이 개시되어 있고, WO 1998/043478에는 헬리코박터 관련 질환을 예방할 수 있는 백신조성물이 개시되어 있으며, 한국등록특허 제855097호에는 헬리코박터 파이로리 우레아제(urease) 활성 억제능을 지닌 아세틸시스테인 (N-acetyl-N-cysteine) 및 이를 함유하는 건강기능식품, 그리고 암모니아 생성 억제제가 개시되어 있다. 그러나, 이들 항생제를 사용할 경우, 항생제에 대한 내성을 갖는 변이주가 생성되어, 항생제에 의한 헬리코박터 파이로리의 제균효율이 저하된다는 단점이 있었으므로, 내성을 갖는 헬리코박터 파이로리 변이주에 대하여도 항균활성을 나타낼 수 있는 제제의 개발이 요구되고 있다.
이러힌 배경하에서, 본 발명자들은 종래의 항생제에 대한 내성을 나타내는 헬리코박터 파이로리 변이주에 대하여도 항균활성을 나타낼 수 있는 제제를 개발하고자 예의 연구노력한 결과, PTL(parthenolide) 또는 DPI(diphenyleneiodonium chloride)가 항생제에 대한 내성을 갖는 헬리코박터 파이로리 변이주에 대하여도 항균활성을 나타낼 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 하나의 목적은 PTL(parthenolide), DPI(diphenyleneiodonium chloride) 또는 이들의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 세균성 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 PTL, DPI 또는 이들의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 세균성 감염증 예방 또는 치료용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 조성물을 포함하는 세균성 감염증 예방 또는 치료용 키트를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 조성물을 이용하여 세균성 감염증을 치료하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명자들은 현재 헬리코박터 파이로리(Helicobater pylori, H. pylori) 균주의 감염증의 치료에 사용되는 항생제에 대하여 내성을 나타내는 H. pylori 변이주에 의한 감염증을 치료할 수 있는 제제를 개발하기 위하여, 1200종의 화합물로 구성된 화합물 라이브러리로부터 유효성분을 스크리닝하고자 하였다. 그 결과, H. pylori 균주에 대하여 항균활성을 나타내는 82종의 화합물을 1차 선별하였다. 상기 선별된 화합물 중에서 항균활성 또는 항진균활성을 갖는다고 알려진 공지의 화합물, 생체의 신경계 또는 심혈관계에 영향을 줄 수 있는 화합물 등을 제외하여, H. pylori 균주에 대하여 항균활성을 나타내면서도 부작용이 없을 것으로 예상되는 화합물을 선발한 결과, PTL(parthenolide) 및 DPI(diphenyleneiodonium chloride)를 최종 선택할 수 있었는데, 상기 PTL 및 DPI는 세균에 대한 항균활성이 전혀 알려지지 않은 화합물이다. 현재 H. pylori 감염증의 치료에 사용되고 있는 다양한 항생제에 대하여 내성 또는 감수성을 나타내는 다양한 종류의 H. pylori 변이주에 상기 PTL 또는 DPI를 처리하고, 이의 항균활성을 측정한 결과, DPI는 모든 종류의 H. pylori에 대하여 강한 항균활성을 나타내고, PTL 역시 DPI에 미치지는 못하지만, 모든 종류의 H. pylori에 대하여 항균활성을 나타냄을 확인하였다. 또한, 일반 호기성 세균에 대한 PTL 또는 DPI의 항균활성을 측정한 결과, PTL은 일반 호기성 세균에 대하여 특별한 항균활성을 나타내지 않았으나, DPI는 일반 호기성 세균에 대하여도 강한 항균활성을 나타냄을 확인하였다.
따라서, PTL 또는 DPI은 세균 감염증을 예방 또는 치료할 수 있는 약학적 조성물의 유효성분으로 사용할 수 있고, 특히 H. pylori 감염증을 특이적으로 예방 또는 치료할 수 있는 약학적 조성물의 유효성분으로 사용할 수 있음을 확인하였다. 이러한 PTL 또는 DPI의 항균활성은 지금까지 알려지지 않았고, 본 발명자에 의하여 최초로 규명되었다.
상술한 목적을 달성하기 위한 일 실시양태로서, 본 발명은 PTL(parthenolide), DPI(diphenyleneiodonium chloride) 또는 이들의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 세균성 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 용어 "DPI(diphenyleneiodonium chloride)"란, 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 의미한다. 상기 화합물은 천연 공급원으로부터 분리할 수 있으나 이에 한정되지 않고, 당 업계에 공지된 방법으로 화학적으로 합성하거나, 시판되는 물질을 사용할 수 있다.
Figure 112014128628488-pat00001
본 발명의 용어 "PTL(parthenolide)"란, 하기 화학식 2로 표시되는 화합물을 의미한다. 상기 화합물은 천연 공급원으로부터 분리할 수 있으나 이에 한정되지 않고, 당 업계에 공지된 방법으로 화학적으로 합성하거나, 시판되는 물질을 사용할 수 있다.
Figure 112014128628488-pat00002
본 발명의 용어 "약학적으로 허용되는 염"이란, 양이온과 음이온이 정전기적 인력에 의해 결합하고 있는 물질인 염 중에서도 약제학적으로 사용될 수 있는 형태의 염을 의미하는데, 통상적으로 금속염, 유기 염기와의 염, 무기산과의 염, 유기산과의 염, 염기성 또는 산성 아미노산과의 염 등이 될 수 있다. 예를 들어, 금속염으로는 알칼리 금속염(나트륨염, 칼륨염 등), 알칼리 토금속염(칼슘염, 마그네슘염, 바륨염 등), 알루미늄염 등이 될 수 있고; 유기 염기와의 염으로는 트리에틸아민, 피리딘, 피콜린, 2,6-루티딘, 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 시클로헥실아민, 디시클로헥실아민, N,N-디벤질에틸렌디아민 등과의 염이 될 수 있으며; 무기산과의 염으로는 염산, 브롬화수소산, 질산, 황산, 인산 등과의 염이 될 수 있고; 유기산과의 염으로는 포름산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 프탈산, 푸마르산, 옥살산, 타르타르산, 말레인산, 시트르산, 숙신산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산 등과의 염이 될 수 있으며; 염기성 아미노산과의 염으로는 아르기닌, 라이신, 오르니틴 등과의 염이 될 수 있고; 산성 아미노산과의 염으로는 아스파르트산, 글루탐산 등과의 염이 될 수 있다.
본 발명에서 제공하는 PTL 또는 DPI는 안전하면서도, 우수한 항균활성을 나타내므로, 다양한 세균성 감염증의 예방 또는 치료용 약학 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있다. 이때, 상기 세균성 감염증을 유발하는 세균은 특별히 이에 제한되지 않으나, 그랑양성 호기성 세균 또는 그람음성 호기성 세균 등의 호기성 세균이 될 수 있고, 바람직하게는 스타필로코커스 속 세균(Staphylococcus sp.), 엔테로코커스 속 세균(Enterococcus sp.) 등의 그람양성 호기성 세균; 또는 헬리코박터 속 세균(Helicobater sp.), 에세리키아 속 세균(Escherichia sp.), 슈도모나스 속 세균(Pseudomonas sp.), 아시네토박터 속 세균(Acinetobacter sp.), 살모넬라 속 세균(Salmonella sp.), 엔테로박터 속 세균(Enterobacter sp.) 등의 그람음성 호기성 세균이 될 수 있으며, 보다 바람직하게는 헬리코박터 파이로리(Helicobater pylori), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis), 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis), 대장균(Escherichia coli), 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 아시네토박터 바우마니(Acinetobacter baumannii), 살모넬라 엔테리티디스(Salmonella enteritidis), 살모넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium), 엔테로박터 클로아카에(Enterobacter cloacae) 등이 될 수 있고, 가장 바람직하게는 헬리코박터 파이로리가 될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 1200종의 화합물로 구성된 화합물 라이브러리를 사용하여 H. pylori에 대한 항균활성을 나타내는 화합물을 고속스크리닝한 결과, 총 82종의 화합물을 선별하였고(실시예 1-1), 감수성 시험을 통하여 상기 82종의 화합물 중에서 항균활성과 안전성이 확보된 PTL(parthenolide) 또는 DPI(diphenyleneiodonium chloride)를 최종선발하였다(표 1). 상기 선발된 PTL 또는 DPI의 항균활성을 분석한 결과, 상기 PTL 또는 DPI는 다양한 항생제에 대하여 내성 또는 감수성을 나타내는 모든 종류의 H. pylori 변이주에 대하여 우수한 항균활성을 나타내고(표 2), 특히 DPI는 H. pylori 이외의 다양한 호기성 세균에 대하여도 우수한 항균활성을 나타냄을 확인하였다(표 3).
상기 본 발명의 조성물은, 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 형태로 제조될 수 있다. 구체적으로, 상기 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명에서, 상기 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화 할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물과 이의 분획물들에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물에 포함된 상기 PTL 또는 DPI의 함량은 특별히 이에 제한되지 않으나, 최종 조성물 총 중량을 기준으로 0.0001 내지 50 중량%, 보다 바람직하게는 0.01 내지 20 중량%의 함량으로 포함될 수 있다.
상기 본 발명의 약학 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있는데, 본 발명의 용어 "약제학적으로 유효한 양"이란 의학적 치료 또는 예방에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료 또는 예방하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 질환의 중증도, 약물의 활성, 환자의 연령, 체중, 건강, 성별, 환자의 약물에 대한 민감도, 사용된 본 발명 조성물의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율 치료기간, 사용된 본 발명의 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 단독으로로 투여하거나 공지된 면역치료제와 병용하여 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하다.
본 발명의 약학 조성물의 투여량은 사용목적, 질환의 중독도, 환자의 연령, 체중, 성별, 기왕력, 또는 유효성분으로서 사용되는 물질의 종류 등을 고려하여 당업자가 결정할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 약학 조성물은 성인 1인당 약 0.1 ng 내지 약 100 mg/kg, 바람직하게는 1 ng 내지 약 10 mg/kg로 투여할 수 있고, 본 발명의 조성물의 투여빈도는 특별히 이에 제한되지 않으나, 1일 1회 투여하거나 또는 용량을 분할하여 수회 투여할 수 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
상술한 목적을 달성하기 위한 다른 실시양태로서, 본 발명은 PTL, DPI 또는 이들의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 세균성 감염증 예방 또는 치료용 의약외품 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 개선, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 물품들 중 의약품보다 작용이 경미한 물품들을 의미하는 것으로, 예를 들어 약사법에 따르면 의약외품이란 의약품의 용도로 사용되는 물품을 제외한 것으로, 사람ㆍ동물의 질병 치료나 예방에 쓰이는 섬유ㆍ고무 제품, 인체에 대한 작용이 경미하거나 직접 작용하지 않으며, 기구 또는 기계가 아닌 것과 이와 유사한 것, 감염병을 막기 위한 살균ㆍ살충제 등이 이에 포함된다. 본 발명의 의약외품 조성물의 종류나 제형은 특별히 제한되지 아니하나, 바람직하게는 소독 청결제, 샤워폼, 가그린, 물티슈, 세제 비누, 핸드 워시, 가습기 충진제, 마스크, 연고제 또는 필터 충진제 등일 수 있다.
상술한 목적을 달성하기 위한 또 다른 실시양태로서, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 세균성 감염증 예방 또는 치료용 키트를 제공한다.
본 발명의 키트는 상기 조성물을 이용하여 본 발명에서 제공하는 PTL 또는 DPI를 이용하여 세균성 감염증을 예방 또는 치료하는데 사용될 수 있다. 구체적인 일례로서, 본 발명에서 제공하는 상기 키트는 상기 조성물을 투여하기 위하여 필요한 필수 요소를 포함하는 키트일 수 있는데, 상기 필수 요소는 본 발명에서 제공하는 상기 조성물을 투여하는데 사용되는 주사기, 소독용구, 소독용 제제, 상기 조성물이 담겨진 앰플 등의 다양한 보조용구가 될 수 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 실시양태로서, 본 발명은 상기 약학 조성물을 약제학적으로 유효한 양으로 세균성 감염증이 발병된 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 세균성 감염증의 치료방법을 제공한다.
본 발명의 용어 "개체"란 세균성 감염증이 발병될 가능성이 있거나 또는 발병된 쥐, 가축 등을 포함하는 포유동물, 양식어류 등을 제한 없이 포함할 수 있으나, 상기 질환이 발명된 개체 중에서 인간을 제외한다.
본 발명의 세균성 감염증을 치료하는 방법에 있어서, 치료대상이 되는 세균은 상술한 바와 동일하다.
본 발명의 세균성 감염증의 예방 또는 치료용 약학 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여도 투여될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 특별히 이에 제한되지 않으나, 목적하는 바에 따라 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여 등의 경로를 통해 투여 될 수 있다. 다만, 경구 투여 시에는 위산에 의하여 상기 PTL 또는 DPI가 변성될 수 있기 때문에 경구용 조성물은 활성 약제를 코팅하거나 위에서의 분해로부터 보호되도록 제형화 되어야 한다. 또한, 상기 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.
본 발명에서 제공하는 PTL 또는 DPI는 항생제 내성을 나타내는 H. pylori 균주에 대하여도 항균활성을 나타내므로, PTL 또는 DPI는 H. pylori 감염증의 치료제 개발에 널리 활용될 수 있을 것이다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: H. pylori 에 대한 항균활성 성분의 발굴
실시예 1-1: 고속스크리닝 분석법을 통한 H. pylori 에 대한 항균 후보물질 선별
먼저, 브루셀라 아가 및 7% 탈섬유소 양혈액을 포함하는 선택배지에 H. pylori 26659 균주를 접종하고, 10% CO2 및 37℃에서 72시간 동안 배양하였다.
다음으로, DMSO에 용해된 2mM의 1200종의 화합물로 구성된 화합물 라이브러리를 희석하여, 0.1mM의 화합물 용액을 수득하였다.
상기 화합물 용액 20 ㎕와 선택배지 180 ㎕를 96웰 플레이트의 각 웰에 분주하고, 상기 배양된 H. pylori 26659 균주 배양액 10 ㎕를 접종한 다음, 10% CO2 및 37℃에서 72시간 동안 배양하였다. 배양이 종료된 후, 침전된 콜로니가 생성되지 않는 84종의 화합물을 선별한 다음, 이를 H. pylori에 대하여 항균활성을 나타내는 후보물질로 간주하였다.
실시예 1-2: 감수성 시험을 통한 H. pylori 에 대한 항균 후보물질 선별
상기 실시예 1-1에서 선별된 84종의 화합물을 대상으로, 단계적으로 희석하여 순차적인 농도의 시료를 수득하고, 상기 수득한 시료에서 H. pylori를 배양하여, H. pylori의 성장을 억제할 수 있는 각 화합물의 농도를 측정하였다. 이때, 희석은 180 ㎕의 배지와 20 ㎕ 화합물을 포함하는 혼합물 100 ㎕와 배지 100 ㎕를 혼합하여 2배 희석하고, 상기 희석액 100 ㎕와 배지 100 ㎕를 혼합하여 다시 2배 희석하는 과정을 총 8회 반복함으로써, 수행하였다. 또한, 상기 희석된 각 시료에 상기 H. pylori 26659 균주를 접종하고, 10% CO2 및 37℃에서 72시간 동안 배양한 다음, 배양물에서 콜로니의 생성여부를 확인하여, H. pylori의 성장에 대한 상기 각 화합물의 최소저해농도(minimal inhibitory concentrations, MICs)를 측정하였다. 상기 측정된 MICs 값이 우수한 화합물을 대상으로 web database를 비교분석하여, 종래에 항생제로 사용하였거나, 현재 사용하고 있는 화합물, 항암제 등의 독성이 강한 화합물을 제외한 19종의 화합물을 2차 선별하였다(표 1).
H. pylori에 대한 성장억제 효과를 나타내는 화합물의 특징 및 MICs 값
화합물 명칭 분자량 치료효능 MIC(㎍/㎖)
Niclosamide
Miconazole
Fendiline hydrochloride
Perhexiline maleate
Econazole nitrate
Pimozide
Diphenyleneiodonium chloride
Bepridil hydrochloride
GBR 12909 dihydrochloride
Ketoconazole
Idebenone
Artemisinin
Parthenolide
Itraconazole
Sulconazole nitrate
Auranofin
Rabeprazole Sodium
Fluspirilen
Tyloxapol 		327.13
416.14
351.92
393.57
444.7
461.56
314.55
403.01
523.5
531.44
338.45
282.34
248.32
705.65
460.77
678.49
382.44
475.59
997.42		 구충제
항진균제
협심증 치료제
혈관확장제
항진균제
정신질환 치료제
항산화제
협심증 치료제
항우울제
항진균제
항산화제
말라리아치료제
염증 치료제
항진균제
항진균제
류마티스 치료제
궤양치료제
정신질환 치료제
점액질분해제		 0.8
2.1
3.5
3.9
2.2
2.3
<0.03
1.0
2.6
2.7
1.7
0.7
4.0
3.5
1.0
0.2
1.9
2.4
5.0
한편, 상기 19종의 화합물 중에서, 항진균제(Miconazole, Econazole nitrate, Ketoconazole, Itraconazole 및 Sulconazole nitrate), 중추신경계에 영향을 줄 수 있는 정신질환 치료제(Perhexiline maleate 및 Fluspirilen), 류마티스 치료제(Auranofin) 또는 항우울제(GBR 12909 dihydrochloride), 심혈관계에 영향을 줄 수 있는 협심증 치료제(Fendiline hydrochloride 및 Bepridil hydrochloride), 말라리아 치료제(Artemisinin) 또는 혈관확장제(Pimozide)를 제외한, 6종의 화합물(Niclosamide, Diphenyleneiodonium chloride, Idebenone, Parthenolide, Rabeprazole Sodium 및 Tyloxapol) 중에서 가장 낮은 MICs 값을 나타내는 DPI(diphenyleneiodonium chloride) 및 다양한 질환에 대한 치료제로서 오랫동안 사용되어온 PTL(parthenolide)을 최종 선별하였다.
실시예 2: H. pylori 균주에 대한 PTL 또는 DPI 의 항균활성 분석
실시예 1-2에서 선별된 PTL 또는 DPI를 이용하여, 약물에 대한 감수성 또는 내성을 나타내는 H. pylori 균주 또는 일반 호기성 세균에 대한 항균활성을 분석하였다.
실시예 2-1: 약물에 대한 감수성 또는 내성을 나타내는 H. pylori 균주에 대한 PTL 또는 DPI 의 항균활성 분석
현재, H. pylori 감염증 치료에 사용되는 항생제인 클라리트로마이신(clarithromycin, CAM), 메트로니다졸(metronidazole, MTZ), 레보플록사신(levofloxacin, LFX) 및 아목시실린(amoxicillin, AMX) 중의 하나 또는 그 이상에 대하여 내성을 나타내거나 또는 상기 약물에 대하여 감수성을 나타내는 것으로 확인된 4종의 H. pylori 균주(H. pylori ATCC43504, H. pylori 26659, H. pylori J99 및 H. pylori SS1) 및 19종의 임상분리주를 대상으로 하는 것을 제외하고는, 상기 실시예 1-2의 방법을 이용하여 PTL 또는 DPI의 MIC 값을 측정하고 비교하였다(표 2).
다양한 H. pylori 균주에 대한 PTL 또는 DPI의 항균활성
H. pylori 균주 내성약물 MIC (㎍/㎖)
PTL DPI
Reference strain ATCC43504
26659
J99
SS1		 MTZ 2
4
8
8 		<0.03
<0.03
<0.03
<0.03
Clinical isolate 09-103
09-77
09-92
09-06
09-34
09-36
09-26
09-35
09-100
07-7
07-18
09-60
09-104
03-3
07-27
07-61
07-105
09-23
09-120		 CAM
CAM
CAM
MTZ
MTZ
MTZ
LFX
LFX
LFX
AMX
AMX
CAM+MTZ
CAM+MTZ
CAM+MTZ
CAM+AMX
CAM+AMX
CAM+AMX
CAM+MTZ+LFX
CAM+MTZ+AMX		 2
4
8
8
8
8
8
4
8
4
8
8
4
4
4
8
8
8
8 		<0.03
<0.03
<0.03
<0.03
<0.03
<0.03
<0.03
<0.03
<0.03
<0.03
<0.03
<0.03
<0.03
<0.03
<0.03
<0.03
<0.03
<0.03
<0.03
상기 표 2에서 보듯이, H. pylori 감염증 치료에 사용되는 다양한 항생제에 대하여 내성 또는 감수성을 나타내는 모든 H. pylori 균주에 대하여 PTL은 2 내지 8㎍/㎖의 MIC 값을 나타내었고, DPI는 0.03㎍/㎖ 미만의 MIC 값을 나타냄을 확인하였다. 따라서, PTL 또는 DPI는 종래의 항생제에 대하여 내성을 나타내는 H. pylori 균주의 감염증에 대하여도 치료효과를 나타냄을 알 수 있었다.
실시예 2-2: 일반 호기성 세균에 대한 PTL 또는 DPI 의 항균활성 분석
상기 실시예 2-1의 결과로부터, PTL 또는 DPI가 종래의 항생제에 대하여 내성을 나타내는 H. pylori 균주의 감염증에 대하여도 치료효과를 나타냄을 확인하였으므로, 상기 PTL 또는 DPI가 일반 호기성 세균에 대하여도 동일한 감염증 치료효과를 나타낼 수 있는지를 확인하고자 하였다. 이에, 그람양성 호기성 세균인 스타필로코커스 아우레우스 29213(Staphylococcus aureus 29213), 스타필로코커스 아우레우스 33591(Staphylococcus aureus 33591), 엔테로코커스 패칼리스 29212(Enterococcus faecalis 29212) 및 스타필로코커스 에피더미디스 12228(Staphylococcus epidermidis 12228)와, 그람음성 호기성 세균인 대장균 25922(Escherichia coli 25922), 슈도모나스 아에루기노사 27853(Pseudomonas aeruginosa 27853), 아시네토박터 바우마니 19606(Acinetobacter baumannii 19606), 살모넬라 엔테리티디스 13076(Salmonella enteritidis 13076), 살모넬라 티피무리움 13311(Salmonella typhimurium 13311) 및 엔테로박터 클로아카에 13049(Enterobacter cloacae 13049)를 사용하는 것을 제외하고는, 상기 실시예 1-2의 방법을 이용하여 PTL 또는 DPI의 MIC 값을 측정하고 비교하였다(표 3).
일반적인 호기성 세균에 대한 PTL 또는 DPI의 항균활성
그람 염색 균주 MIC (㎍/㎖)
PTL DPI
그람양성균 Staphylococcus aureus 29213
Staphylococcus aureus 33591
Enterococcus faecalis 29212
Staphylococcus epidermidis 12228		 >32
>32
>32
>32		 1
1
1
1
그람음성균 Escherichia coli 25922
Pseudomonas aeruginosa 27853
Acinetobacter baumannii 19606
Salmonella enteritidis 13076
Salmonella typhimurium 13311
Enterobacter cloacae 13049		 >32
>32
>32
>32
>32
>32		 0.5
2
1
1
1
1
상기 표 3에서 보듯이, PTL은 모든 시험균주에서 32 ㎍/㎖ 이상의 MIC 값을 나타내어, 일반 호기성 세균에 대하여는 특별한 항균활성을 나타내지는 않음을 확인하였으나, 이에 반하여, DPI는 모든 그람음성 또는 그람양성 호기성 세균에 대하여 0.5 내지 2㎍/㎖의 MIC 값을 나타내어, 일반 호기성 세균에 대하여 강한 항균활성을 나타냄을 확인하였다.
상술한 결과를 종합하면, PTL 또는 DPI는 항생제 내성을 나타내는 H. pylori 균주에 대하여도 항균활성을 나타내므로, PTL 또는 DPI는 H. pylori 감염증의 치료에 사용될 수 있을 것으로 분석되었다. 뿐만 아니라, DPI는 H. pylori 뿐만 아니라, 일반 호기성 세균에 대하여도 항균활성을 나타내므로, 범용적인 세균 감염증의 치료에 사용될 수 있을 것으로 분석되었다.

Claims (11)

  1. PTL(parthenolide), DPI(diphenyleneiodonium chloride) 또는 이들의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 헬리코박터 세균 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 헬리코박터 세균 감염증은 헬리코박터 파이로리(Helicobater pylori) 감염증인 것인 조성물.
  3. DPI(diphenyleneiodonium chloride) 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 호기성 세균 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 호기성 세균은 스타필로코커스 속 세균(Staphylococcus sp.), 엔테로코커스 속 세균(Enterococcus sp.), 헬리코박터 속 세균(Helicobater sp.), 에세리키아 속 세균(Escherichia sp.), 슈도모나스 속 세균(Pseudomonas sp.), 아시네토박터 속 세균(Acinetobacter sp.), 살모넬라 속 세균(Salmonella sp.) 또는 엔테로박터 속 세균(Enterobacter sp.)인 것인 조성물.
  5. DPI(diphenyleneiodonium chloride) 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 호기성 세균 감염증 예방 또는 치료용 의약외품 조성물.
  6. 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 호기성 세균 감염증 예방 또는 치료용 키트.
  7. PTL(parthenolide), DPI(diphenyleneiodonium chloride) 또는 이들의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 헬리코박터 세균 감염증 예방 또는 치료용 의약외품 조성물.
  8. 제1항, 제2항 및 제7항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 헬리코박터 세균 감염증 예방 또는 치료용 키트.
  9. 제1항, 제2항 및 제7항 중 어느 한 항의 조성물을 약제학적으로 유효한 양으로 헬리코박터 세균 감염증이 발병된 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 헬리코박터 세균 감염증의 치료방법.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 헬리코박터 세균 감염증은 헬리코박터 파이로리 감염증인 것인 방법.
  11. PTL(parthenolide), DPI(diphenyleneiodonium chloride) 또는 이들의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 헬리코박터 파이로리 감염증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
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