KR101625979B1 - 항 ｈ5 아형 ａ형 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 모노클로날 항체 - Google Patents

항 ｈ5 아형 ａ형 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 모노클로날 항체 Download PDF

Info

Publication number
KR101625979B1
KR101625979B1 KR1020107018151A KR20107018151A KR101625979B1 KR 101625979 B1 KR101625979 B1 KR 101625979B1 KR 1020107018151 A KR1020107018151 A KR 1020107018151A KR 20107018151 A KR20107018151 A KR 20107018151A KR 101625979 B1 KR101625979 B1 KR 101625979B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
leu
asn
gly
ser
ile
Prior art date
Application number
KR1020107018151A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20100124720A (ko
Inventor
히로시 키다
요시히로 사코다
에이지 미야가와
노부유키 후지이
요시아키 우치다
타카시 시라카와
히로유키 코가키
Original Assignee
국립대학법인 홋가이도 다이가쿠
후지레비오 가부시키가이샤
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 국립대학법인 홋가이도 다이가쿠, 후지레비오 가부시키가이샤 filed Critical 국립대학법인 홋가이도 다이가쿠
Publication of KR20100124720A publication Critical patent/KR20100124720A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101625979B1 publication Critical patent/KR101625979B1/ko

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1018—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/11—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus

Abstract

본 발명에는 H5 아형의 A형 인플루엔자 바이러스가 어느 정도의 변이를 일으킨 경우에도 정확하게 측정할 수 있는 H5 아형의 A형 인플루엔자 바이러스의 면역 측정 방법 및 그것을 위한 키트 및 상기 면역 측정에 사용할 수 있는 신규 항 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스 모로클로날 항체가 개시되어 있다. 본 발명의 항체 또는 그 항원 결합성 단편은 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌과 항원 항체 반응하고, 그 대응 에피토프가 리셉터 서브도메인((단, 그 C말단 11 아미노산으로 이루어지는 영역을 제외함) 중에 존재하지 않으며, 상기 A형 인플루엔자 바이러스의 중화 활성을 갖지 않는 것이다.

Description

항 Ｈ5 아형 Ａ형 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 모노클로날 항체{ANTI-(INFLUENZA A VIRUS SUBTYPE H5 HEMAGGLUTININ) MONOCLONAL ANTIBODY}
본 발명은 항 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 모노클로날 항체 및 그것을 사용한 항 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스의 면역 측정 방법 및 면역 측정용 키트에 관한 것이다.
인플루엔자 바이러스는 H5 또는 H7 아형으로 존재하고, 아시아를 중심으로 양계 산업에 큰 손해를 초래하고 있지만, 최근 조류 인플루엔자 바이러스는 인간에도 감염되는 것이 확인되었다. 특히, H5 아형에 속하는 조류 인플루엔자 바이러스는 2003년경으로부터 아시아를 중심으로 인간에의 감염과 그 치사율의 높이에 관해서 많이 보고되어 있고, 이들 바이러스에 대하여 인간은 면역력을 갖지 않기 때문에 폭발적으로 유행이 되는 것이 세계적으로 우려되고 있어, 그 예방 및 유행시의 대책에 대해서 검토되고 있다.
조류 인플루엔자 바이러스의 인간에의 감염을 예방하거나, 또는 적어도 인간에서의 대유행을 저지하기 위해서는 인간에도 감염되는 조류 인플루엔자 바이러스를 특이적으로 또한 신속하게 검출하는 것이 중요하다. 종래부터, 검체 중의 바이러스의 신속한 검출에는 면역 측정법이 널리 사용되고 있고, 특히 액체가 유통되는 다공성 기체의 일부에 항 바이러스 항체를 고정화한 고상을 사용하는 샌드위치법에 의해 행하는 이뮤노크로마토그래피는 병원 등의 의료 현장에 있어서 매우 간편하고, 단시간에 바이러스를 검출할 수 있기 때문에 널리 사용되고 있다. 인간 인플루엔자 바이러스를 검출하는 이뮤노크로마토그래피용 키트도 시판되고 있다.
면역 측정법에 의해 인간에도 감염되는 조류 인플루엔자 바이러스를 검출하기 위해서는 당연히 조류 인플루엔자 바이러스에 대한 항체가 필요하다. 인플루엔자 바이러스의 표면 항원은 헤마글루티닌 및 뉴라미니다아제라고 하는 단백질로 이루어지는 것이 알려져 있다. 헤마글루티닌(HA)으로서는 항원성이 다른 H1~H16의 16종류가 알려져 있고, 뉴라미니다아제로서는 항원성이 다른 N1~N9의 9종류가 알려져 있다. 인플루엔자 바이러스의 아형(서브 타입)은 이러한 헤마글루티닌 및 뉴라미니다아제의 종류를 「H5N1」 등과 같이 기재함으로써 표기한다. 지금까지, 조류로부터 인간에 감염된 것이 확인되어 있는 조류 인플루엔자 바이러스는 거의 헤마글루티닌이 H5형인 것이다. 따라서, 조류로부터 인간에 감염되는 고병원성 인플루엔자 바이러스를 검출하기 위한 항체로서는 H5 아형의 인플루엔자 바이러스에 특이적인 것이 요망된다.
H5 아형의 A형 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌은 더욱 연구되고 있고, 아미노산 배열뿐만 아니라, 입체 구조도 알려져 있다(비특허문헌 1). 또한, H5 아형의 A형 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌에 대한 모노클로날 항체도 여러가지로 알려져 있다(비특허문헌 2~4). 또한, H5 아형의 A형 인플루엔자 바이러스를 2종류의 항 헤마글루타닌 모노클로날 항체를 사용하는 샌드위치법에 의해 측정되는 것도 알려져 있다(비특허문헌 5, 6).
Ya Ha et al; The EMBO Journal, 21(5), 865-875, 2002 Nikolai V.K. et al., J. Gen. Virol. 83, 2497, 2002 James Stevens et al., SCIENCE VOL 312, 21 APRIL 2006 Zhi-Yong Yang et al., SCIENCE VOL 317, 10 AUGUST 2007 Tsuda Y. et al., Microbiol. Immunol. 51(9), 903, 2007 Qigai He et al., Clin. Vacc. Immunol. 617, 2007
H5 아형의 A형 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌에 대한 모노클로날 항체로서는 지금까지 주로 상기 바이러스의 감염성을 억제, 저지하는 항체로서 중화 활성을 갖는 중화 항체가 연구되어 왔다. 상기 바이러스에 대한 백신을 개발하기 위해서는 중화 항체가 필요하고, 상기 비특허문헌 2~4에 기재되어 있는 모노클로날 항체도 중화 항체이다. 또한, 비특허문헌 5 및 6에 기재되어 있는 면역 측정에 사용되어 있는 모노클로날 항체는 그 항체의 에피토프 해석 결과나 중화 활성에 관한 기재는 없다.
이와 같은 공지의 중화 항체를 이용하여, H5 아형의 인플루엔자 바이러스의 면역 측정계를 구축하는 것은 물론 가능하다. 그러나, 본원 발명자들은 중화 항체를 이용하여 면역 측정계를 구축하는 경우에는 상기 바이러스의 변이에 추종할 수 없을 우려가 있는 문제가 있는 것을 깨달았다. 즉, 인플루엔자 바이러스는 숙주의 면역 감시를 피하기 위해서 중화 항체 인식 에피토프에 자주 변이를 일으키는 것이 알려져 있고, 공지의 중화 항체를 이용하여 면역 측정계를 구축하는 경우, 변이된 바이러스와의 반응성이 없어지거나 결합 친화성이 저하되어 바이러스를 검출할 수 없거나 또는 측정값이 옳은 값보다 대폭 저하될 우려가 있다는 것을 깨달았다. 바이러스가 빈번하게 변이를 일으키는 것을 고려하면, 조금 변이가 일어나도 정확하게 바이러스를 면역 측정할 수 있는 것이 바람직하다.
따라서, 본 발명의 목적은 H5 아형의 A형 인플루엔자 바이러스가 어느 정도의 변이를 일으킨 경우에도 정확하게 측정할 수 있는 H5 아형의 A형 인플루엔자 바이러스의 면역 측정 방법 및 그것을 위한 키트 및 상기 면역 측정에 사용할 수 있는 신규 항 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스 모로클로날 항체를 제공하는 것이다.
감염시에는 인플루엔자 바이러스는 우선 세포 표면에 있는 리셉터에 결합하고, 그 후 세포 내부에 받아들여진다는 것이 알려져 있다. 따라서, 인플루엔자 바이러스가 숙주 내에서 증식하기 위해서는 바이러스가 세포 표면에 있는 리셉터에 결합하는 것이 필수적이고, 이것이 방해되면 바이러스의 증식은 일어나지 않는다. 공지의 중화 항체는 인플루엔자 바이러스의 리셉터 결합 영역 중에 대응 에피토프를 갖고, 바이러스와 결합하여 바이러스가 리셉터에 결합하는 것을 방해하는 것이다. 한편, 바이러스는 숙주의 자연적인 면역력이나 백신 투여 등에 의해 생긴 중화 항체가 존재하는 환경 하에서는 그 중화 항체에 의한 증식 저해를 받지 않도록 변이하기 쉬운 것이 알려져 있다. 변이 자체는 랜덤하게 일어나고 있을지도 모르지만, 중화 항체에 의한 증식 저해를 받지 않도록 변이한 것만이 잘 증식할 수 있으므로, 증식하는 바이러스는 결과적으로 이와 같은 변이를 가지고 있는 것이 많아진다. 이와 같은 현상을 이스케이프 변이 또는 도피 변이라고 하고, 중화 항체에 의해 이와 같은 변이가 일어나기 쉬워지는 것은 항체 압력 또는 면역 압력 등이라고 칭한다. 본원 발명자들은 바이러스가 어느 정도의 변이를 일으킨 경우에도 정확하게 바이러스를 면역 측정할 수 있는 면역 측정법은 변이하기 어려운 영역, 즉 중화 항체의 대응 에피토프가 존재하는 영역 이외의 영역에 대응 에피토프를 갖는 모노클로날 항체를 사용함으로써 구축 가능한 것으로 생각하고, 또한 이와 같은 모노클로날 항체의 대응 에피토프가 존재하는 영역을 결정하고, 그리고 실제로 이와 같은 모노클로날 항체를 제공해서 본 발명을 완성하였다.
즉, 본 발명은 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌과 항원 항체 반응하고, 그 대응 에피토프가 리셉터 서브도메인(단, 그 C말단 11 아미노산으로 이루어지는 영역을 제외함) 중에 존재하지 않고 A형 인플루엔자 바이러스의 중화 활성을 갖지 않는 항 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 모노클로날 항체 또는 그 항원 결합성 단편을 제공한다. 또한, 본 발명은 상기 본 발명의 모노클로날 항체 또는 그 항원 결합성 단편과 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌의 항원 항체 반응을 이용한 면역 측정에 의해 검체 중의 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스를 측정하는 것을 포함하는 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스의 면역 측정 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌에 동시에 결합 가능한 2종류의 상기 본 발명의 모노클로날 항체 또는 그 항원 결합성 단편을 포함하는 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스의 면역 측정용 키트를 제공한다.
(발명의 효과)
본 발명에 의해, H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스가 이스케이프 변이를 일으킨 경우에도 결합 친화성이 변화되지 않는 항 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 모노클로날 항체가 처음으로 제공되었다. 따라서, 본 발명의 모노클로날 항체를 사용한 면역 측정에 의해 이스케이프 변이를 일으킨 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스도 측정 가능해지고, 인간에 대해서도 병원성을 갖는 조류 인플루엔자 바이러스를 신속하게 측정하는 것이 가능해졌다. 따라서, 본 발명은 인간에 대해서도 병원성을 갖는 조류 인플루엔자 바이러스의 유행 방지에 크게 공헌하는 것으로 생각된다.
도 1은 2종류의 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스주의 헤마글루티닌의 아미노산 배열을 정렬시켜 각 서브도메인의 분포 및 실시예에서 제작한 3종류의 모노클로날 항체의 대응 에피토프와 함께 나타낸 도면이다.
도 2는 2종류의 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스주의 헤마글루티닌의 아미노산 배열을 정렬시켜 나타낸 도면이다.
도 3은 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스주의 헤마글루티닌의 입체 구조 및 실시예에서 제작한 3종류의 모노클로날 항체의 대응 에피토프 영역을 나타낸 도면이다.
도 4는 실시예에 있어서 행한 3종류의 모노클로날 항체의 에피토프 해석의 도중 결과를 나타낸 도면이다.
도 5는 실시예에 있어서 행한 3종류의 모노클로날 항체의 에피토프 해석의 도중 결과를 나타낸 도면이다.
도 6은 실시예에서 제작한 면역 측정 기구(이뮤노크로마토 기구)의 주요부의 모식 단면도이다.
도 7은 실시예에서 제작한 면역 측정 기구(이뮤노크로마토 기구)의 모식 평면도이다.
도 8은 실시예에서 제작한 면역 측정 기구(이뮤노크로마토 기구)의 모식 단면도이다.
도 9는 실시예에서 제작한 다른 면역 측정 기구(이뮤노크로마토 기구)의 주요부의 모식 단면도이다.
도 10은 실시예에서 제작한 다른 면역 측정 기구(이뮤노크로마토 기구)의 모식 평면도이다.
상기한 바와 같이, 본 발명의 모노클로날 항체는 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌과 항원 항체 반응하여 그 대응 에피토프가 리셉터 서브도메인(단, 그 C말단 11 아미노산으로 이루어지는 영역을 제외함) 이외의 영역에 있는 것이다.
H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(이하, 「H5 HA」라고 약기하는 경우가 있음)의 유전자의 염기 배열 및 그것이 코딩하는 아미노산 배열의 일례를 배열 번호 1 및 2에 나타낸다. 또한, 배열 번호 1 및 2에 나타내는 배열은 공지이고, GenBank에 AB263192의 Accession No.로 등록되어 있다.
H5 HA의 유전자 염기 배열 및 아미노산 배열은 상기 이외에도 몇가지가 알려지고 있고, 예를 들면 상기 비특허문헌 1에 기재되어 있는 H5N3의 HA의 유전자 염기 배열 및 아미노산 배열은 GenBank에 AF303057의 Accession No.로 등록되어 있다 (아미노산 배열은 Q9DLP3의 Accession No.로도 등록되어 있음)(배열 번호 3 및 4). 공지 중 어느 하나의 H5 아형 HA와 항원 항체 반응하는 것은 본 발명의 모노클로날 항체의 범위에 포함되고, H5 아형 HA 사이의 상동성은 높으므로 통상 어느 쪽의 H5 아형 HA와도 항원 항체 반응한다.
배열 번호 2에 나타내는 아미노산 배열과 배열 번호 4에 나타내는 아미노산 배열을 정렬시킨 것을 도 1에 나타낸다. 도 1 중에는 아미노산 배열 중의 각 도메인도 기재되어 있다(비특허문헌 1). 아미노산 배열만을 정렬시킨 것을 도 2에 나타낸다. 도 2에 잘 나타내어진 바와 같이, 양자의 아미노산 배열의 상동성은 매우 높고(약 96.8%), 아미노산수도 같으므로, 배열 번호 4에 대해서 알고 있는 각종 도메인의 분포(비특허문헌 1)로부터 배열 번호 2의 아미노산 배열에 있어서의 각종 도메인의 분포도 용이하게 알 수 있다(도 1). 본 명세서 및 특허 청구 범위에서는 H5 HA의 아미노산 배열 중의 위치를 나타내는데 배열 번호 2의 아미노산 배열을 기준으로 하고 있지만, 상기한 바와 같이 H5 A형 인플루엔자 바이러스의 HA 사이의 아미노산 배열의 상동성은 매우 높으므로, 다른 H5 HA의 아미노산 배열도 배열 번호 2의 아미노산 배열과 용이하게 정렬시킬 수 있고, 배열 번호 2의 아미노산 배열을 기준으로 한 위치가 그 아미노산 배열에 있어서 어디에 해당하는 것일지는 용이하게 알 수 있다. 또한, 「배열 번호 2에 나타내어지는 아미노산 배열을 기준으로 해서」란 그 위치를 나타내는 기준으로 해서 배열 번호 2에 나타내어지는 아미노산 배열을 사용한다고 하는 것이고, 배열 번호 2에 나타내는 아미노산 배열을 갖는 HA를 면역원으로서 제작되는 모노클로날 항체만을 의미하는 것은 아니다.
도 1로부터 알 수 있는 바와 같이, 배열 번호 2에 나타내어지는 아미노산 배열을 기준으로 해서 리셉터 서브도메인은 N말단으로부터 126번째의 아미노산(이하, 「126aa와 같이 기재」)으로부터 278aa이다. 본 발명의 모노클로날 항체는 그 대응 에피토프가 리셉터 서브도메인(단, 그 C말단 11 아미노산으로 이루어지는 영역을 제외함) 중에 존재하지 않는 모노클로날 항체이다. 리셉터 서브도메인에 항체가 결합하면, 인플루엔자 바이러스가 세포 표면의 리셉터에 결합할 수 없게 되어 세포 내에 침입할 수 없게 되고, 그 결과 숙주 내에서 증식할 수 없다. 즉, 그 항체는 인플루엔자 바이러스의 중화 활성을 갖는다. 단, 하기 실시예에 있어서 구체적으로 제작한 모노클로날 항체의 하나(IFH5-115)는 그 대응 에피토프의 일부가 리셉터 서브도메인의 C말단 11 아미노산(268-278aa)의 영역에 존재하지만 중화 활성을 가지지 않기 때문에, 리셉터 서브도메인의 C말단 영역은 바이러스와 리셉터의 결합에 필수적인 영역은 아니다. 이 때문에, 본 발명에서 규정하는 대응 에피토프가 존재하지 않는 영역(기본적으로 리셉터 서브도메인)으로부터 리셉터 서브도메인의 C말단측 11 아미노산을 제외한다.
본 발명의 모노클로날 항체의 대응 에피토프는 상기한 리셉터 서브도메인(단, 그 C말단 16 아미노산으로 이루어지는 영역을 제외함) 이외의 영역이면 특별하게 한정되지 않지만, 대응 에피토프가
(1) 41~60aa 및 312~322aa의 영역,
(2) 61~80aa 및 290~300aa의 영역, 또는
(3) 101~113aa 및 268~278aa의 영역
에 존재하는 것이 바람직하다.
여기에서, 대응 에피토프가 「영역에 존재하는」이란 그 영역을 결실시킨 결실 변이체에 대한 결합 활성이 없어지거나 또는 적어도 유의하게 저하되는 것을 의미하고, 그 영역 내에 대응 에피토프가 존재하는 경우뿐만 아니라, 그 영역과 중복하는 영역에 대응 에피토프가 존재할 경우에 있어서, 그 영역을 결실시키면 결합 활성이 없어지거나 또는 적어도 유의하게 저하되는 경우도 포함된다. 또한, 상기 (1)~(3)에 규정된 대응 에피토프 영역은 각각 아미노산 배열 상의 위치가 크게 떨어진 2개의 영역으로 이루어지지만, 이들 2개의 영역은 HA의 입체 구조 중에서는 인접해서 위치한다(도 3 참조). 따라서, 예를 들면 상기 (1)의 41~60aa 및 290~300aa의 영역에 대응 에피토프가 존재한다는 것은 입체 구조 중에서 인접하는 이들 영역의 전체 중에 대응 영역이 존재하는 것을 의미하고, 36~65aa 및 307~327aa의 어느 한 쪽을 결실시켰을 경우에는 그 모노클로날 항체는 그 부분 결실 HA에 결합할 수 없다.
대응 에피토프가 어느 영역에 존재하는지는 하기 실시예에 구체적으로 기재하는 바와 같이 원리적으로 상법인 결실 변이체와의 결합성을 조사함으로써 조사할 수 있다. 즉, 각종 영역을 결실한 각종 변이체를 유전자공학적 방법에 의해 제작하고, 그들 각 결실 변이체와 모노클로날 항체의 결합성이 그 결실에 의해 상실 또는 유의하게 저하될 것인지 여부를 측정함으로써 조사할 수 있다.
또한, 본 발명의 모노클로날 항체는 그것이 항원 항체 반응에 의해 결합하는 A형 인플루엔자 바이러스의 중화 활성을 갖지 않는다. 상기한 바와 같이, 본 발명의 모노클로날 항체는 그 대응 에피토프가 리셉터 서브도메인(C말단측 11 아미노산의 영역을 제외함) 이외의 영역에 있고, 이 구성 요건에 의해 대강 중화 활성은 없어지지만, 리셉터 서브도메인(C말단측 11 아미노산의 영역을 제외함) 이외의 영역에 대응 에피토프가 존재하는 경우에 있어서, 예를 들면 입체 장해적으로 리셉터 서브도메인과 리셉터의 결합을 방해함으로써 중화 활성을 발휘하는 것도 포함된다. 모노클로날 항체가 중화 활성을 갖는지의 여부는 하기 실시예에 구체적으로 기재하는 바와 같이, H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스와 그 모노클로날 항체의 혼합물을 세포에 작용시켜 세포를 배양하고, 세포에 대한 세포 장해가 일어나는지의 여부를 조사함으로써 조사할 수 있다.
또한, 바람직하게는 본 발명의 모노클로날 항체는 A형 인플루엔자 바이러스의 다른 HA 아형(즉, H1~H4 및 H6~H15)과는 실질적으로 교차 반응하지 않는다. 다른 HA 아형과 실질적으로 교차 반응하지 않음으로써, 조류로부터 인간에 감염되는 것이 확인되어 있는 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스만을 다른 인플루엔자 바이러스와 구별해서 측정할 수 있다. 여기에서 「실질적으로 교차 반응하지 않는」이란 검출 가능한 정도로 교차 반응하지 않거나 또는 교차 반응은 검출 가능하지만 그 정도가 미약해서 H5 HA와의 항원 항체 반응과는 명료하게 구별할 수 있는 것을 의미한다. 예를 들면, 하기 실시예에서는 2종류의 본 발명의 항 H5 HA 모노클로날 항체를 고상화 항체 및 표식 항체로서 사용하는 이뮤노크로마토그래피에 의해 각종 아형의 HA와의 교차 반응을 조사하고 있지만, 이러한 방법으로 검출존에서 표식이 검출되지 않으면 실질적으로 교차 반응하지 않는 것으로 판정 가능하다. 또한, 하기 실시예에서 사용한 H1~H4 및 H6~H15의 유전자 염기 배열 및 아미노산 배열을 각각 배열 번호 5~12, 15~34에 나타낸다. 다른 HA 아형과의 교차 반응의 유무는 이들을 이용하여 조사할 수 있다.
본 발명은 상기한 본 발명의 모노클로날 항체의 항원 결합성 단편도 제공한다. 여기에서, 「항원 결합성 단편」이란 예를 들면 면역글로불린의 Fab 단편이나 F(ab')2 단편과 같은 해당 항체의 대응 항원에 대한 결합성(항원 항체 반응성)을 유지하고 있는 항체 단편을 의미한다. 이와 같은 항원 결합성 단편도 면역 측정에 이용 가능한 것은 주지이다. Fab 단편이나 F(ab')2 단편은 주지와 같이 모노클로날 항체를 파파인이나 펩신과 같은 단백 분해 효소로 처리함으로써 얻을 수 있다. 또한, 항원 결합성 단편은 Fab 단편이나 F(ab')2 단편에 한정되는 것은 아니고, 대응 항원과의 결합성을 유지하고 있는 어떠한 단편이어도 좋고, 유전자공학적 방법에 의해 조제된 것이어도 좋다. 또한, 예를 들면 유전자공학적 방법에 의해 단일쇄 가변 영역(scFv: single chain fragment of variable region)을 대장균 내에서 발현시킨 항체를 사용할 수도 있다. scFv의 제작 방법도 주지이고, 상기와 같이 제작한 하이브리도마의 mRNA를 추출하고, 단일쇄 cDNA를 조제하고, 면역 글로불린 H쇄 및 L쇄에 특이적인 프라이머를 이용하여 PCR을 행해서 면역 글로불린 H쇄 유전자 및 L쇄 유전자를 증폭시켜 이들을 링커에 연결하고, 적절한 제한 효소 부위를 부여해서 플라스미드 벡터에 도입하고, 그것으로 대장균을 형질 전환하고, 대장균으로부터 scFv를 회수함으로써 scFv를 제작할 수 있다. 이와 같은 scFv도 본 발명에서 말하는 「항원 결합성 단편」에 포함된다.
본 발명의 모노클로날 항체는 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스를 면역원으로 하는 상법에 의해 항 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스 모노클로날 항체를 조제하고, HA에 대한 결합성을 갖는 것을 스크리닝하고, H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스에 대한 중화 활성이 없는 것을 스크리닝하고, 스크리닝된 모노클로날 항체의 대응 에피토프를 해석하여 본 발명에서 규정되는 에피토프에 관한 상기의 요건을 만족하는 것을 선택함으로써 얻을 수 있다. 모노클로날 항체 자체는 주지의 하이브리도마법에 의해 제작할 수 있고, 하기 실시예에도 구체적으로 기재되어 있다. 또한, A형 인플루엔자 바이러스의 중화 활성은 상기 바이러스와 모노클로날 항체의 혼합물을 세포에 작용시켜, 세포가 장해되는지의 여부를 조사하는 상기한 방법에 의해 조사할 수 있고, 이 방법은 하기 실시예에도 구체적으로 기재되어 있다. 또한, 대응 에피토프 해석은 H5 HA의 각종 결실 변이체를 제작하고, 그들과 모노클로날 항체의 결합성을 조사하는 상기한 방법에 의해 행할 수 있고, 이 방법도 하기 실시예에 구체적으로 기재되어 있다.
또한, 본 발명은 상기 본 발명의 모노클로날 항체 또는 그 항원 결합성 단편과 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌의 항원 항체 반응을 이용한 면역 측정에 의해 검체 중의 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스를 측정하는 것을 포함하는 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스의 면역 측정 방법도 제공한다. 또한, 본 발명에 있어서 「측정」이라고 하는 단어에는 검출, 정량, 반정량이 포함되는 것으로 한다.
면역 측정 방법 자체는 이 분야에 있어서 주지이고, 본 발명의 모노클로날 항체 또는 그 항원 결합성 단편은 주지의 어떠한 면역 측정 방법에도 이용할 수 있다. 즉, 반응 형식에 근거하여 분류하면 샌드위치법, 경합법, 응집법 등이 있고, 표식에 근거하여 분류하면 효소 면역 분석, 방사 면역 분석, 형광 면역 분석, 화학 발광 면역 분석 등이 있지만, 이들 모두가 본 발명에서 말하는 「면역 측정」에 포함되며 본 발명의 면역 측정 방법에 채용할 수 있다. 또한, 각 면역 측정에 필요한 시약류도 주지이고, 사용하는 모노클로날 항체 또는 그 항원 결합성 단편에 특징이 있는 것 이외에는 통상의 면역 측정용 키트를 이용하여 면역 측정을 행할 수 있다. 즉, 본 발명은 상기한 본 발명의 모노클로날 항체 또는 그 항원 결합성 단편을 포함하는 본 발명의 측정 방법을 실시하기 위한 측정 키트도 제공하는 것이다.
면역 측정 방법 중에서도 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌에 동시에 결합 가능한 2종류의 본 발명의 모노클로날 항체 또는 그 항원 결합성 단편을 사용하는 샌드위치법에 의한 것이 고감도로 신속한 바이러스 측정을 위해 유리하다. 샌드위치법은 통상 사용하는 2종류의 모노클로날 항체 중 한 쪽을 비드 또는 마이크로플레이트의 웰, 또는 이뮤노크로마토그래피의 다공성 매트릭스와 같은 고상으로 고정화하고, 다른 쪽을 효소 표식, 형광 표식, 화학 발광 표식 등으로 표식하고, 고상화 항체와 표식 항체 사이에 측정 대상인 바이러스 항원을 샌드위치하여 고상으로 결합된 표식을 측정한다. H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스를 검출하고자 하는 경우에는 고상으로 결합된 표식을 검출함으로써 상기 바이러스를 검출할 수 있다. 상기 바이러스를 정량하고자 하는 경우에는 다른 각종 기지량의 표준 검체를 이용하여 그 면역 측정계로 표식을 측정하고, 표식량과 바이러스량의 상관 관계를 플로팅하여 검량선(표준 곡선)을 작성해 두고, 미지의 검체에 대해서 동일한 조작을 행하여 표식량을 측정하고, 측정값을 검량선에 적용시킴으로써 바이러스를 정량 측정할 수 있다. 또한, 이들의 샌드위치법 자체는 주지이다.
본 발명의 샌드위치법에서는 단일의 H5 HA 분자에 동시에 결합 가능한 2종류의 본 발명의 항 H5 HA 모노클로날 항체가 사용된다. 이 경우, 상기한 대응 에피토프가 배열 번호 2에 나타내어지는 아미노산 배열을 기준으로 해서,
(1) 41~60aa 및 312~322aa의 영역,
(2) 61~80aa 및 290~300aa의 영역, 또는
(3) 101~113aa 및 268~278aa의 영역
에 존재하는 3종류의 모노클로날 항체 중 2종류를 이용하여 행하면, 감도 및 특이성이 특히 우수한 면역 측정이 가능하게 되어 바람직하다.
검체 중의 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스를 정량하는 경우에는 ELISA 등의 마이크로플레이트의 웰이나 비드를 고상으로 하는 샌드위치법을 바람직하게 사용할 수 있다. 한편, 검체 중의 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스를 의료 현장에 있어서 신속, 간편하게 검출하고 싶을 경우에는 이뮤노크로마토그래피(「이뮤노크로마토」로 생략되는 경우가 많음)가 바람직하게 사용된다. 이뮤노크로마토그래피 자체 및 그것에 사용되는 기구(이하, 「이뮤노크로마토 기구」라고 칭하는 경우가 있음)는 주지이고, 하기 실시예에도 구체적으로 기재되어 있다.
래터럴플로우 방식의 이뮤노크로마토그래피를 간단하게 설명하면, 니트로셀룰로오스막과 같은 다공성 소재로 이루어지고, 통상 띠 형상의 매트릭스 상에 제 1 항 H5 HA 모노클로날 항체를 고상화한 검출존과 그 상류(후술의 전개액이 흐르는 방향에 있어서의 상류측)에 위치하고 표식된 제 2 항 H5 HA 모노클로날 항체를 점착한 표식 시약존을 포함한다. 표식 시약존에서는 검체가 첨가되고, 또한 표식 항체는 표식 시약존으로부터 유출되어 매트릭스 내를 흐를 필요가 있으므로, 통상 표식 시약존은 표식 항체를 점착한 다공성의 패드에 의해 구성된다. 매트릭스의 상류단에는 전개액을 저장한 전개액조가 설치되어져 있다. 또한, 통상 상기 검출존의 하류에 표식 항체의 전개가 일어난 것인지를 확인하기 위한 항 표식 항체를 고상화한 전개 확인부와, 또한 그 하류에 흘러 온 전개액을 흡수하기 위한 다공성의 흡수 패드가 설치된 전개액 흡수존으로 구성되어 있다. 또한, 표식이 효소 표식일 경우에는 표식 시약존보다 상류에 표식 효소의 기질을 점착시킨 기질존이 설치되어져 있다.
사용시에는 검체를 표식 시약존에 첨가하고, 전개액조를 깨뜨려서 전개액을 매트릭스의 상단부에 실시한다. 전개액은 매트릭스의 모관 현상에 의해 하류를 향해서 흐른다. 전개액이 기질존을 통과할 때에 기질이 전개액 중에 용출되어 기질을 포함하는 전개액이 흘러 간다. 전개액이 표식 시약존을 통과할 때에 표식 항체와 검체가 전개액 중에 용출되어 기질, 표식 항체 및 검체를 포함하는 전개액이 흘러 간다. 검체 중에 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스가 포함되는 경우에는 상기 바이러스의 HA와 표식 항체가 항원 항체 반응에 의해 결합한다. 이들의 혼합물이 검출존까지 흘러 오면, 검출존에 있어서 고상화 항체와 상기 바이러스의 HA가 항원 항체 반응에 의해 결합한다. 그 결과, 상기 바이러스의 HA를 통해 표식 항체가 검출존에 고정된다. 따라서, 검출존에 고정된 표식을 측정함으로써, 상기 바이러스를 검출할 수 있다. 검체 중에 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스가 포함되어 있지 않을 경우에는 고상화 항체에는 아무것도 결합되지 않으므로, 표식 항체는 검출존에 고정되지 않고 보다 하류로 흘러 간다. 따라서, 검출존에서는 표식은 검출되지 않는다. 검출존의 하류의 전개액 확인부에는 항 표식 항체가 고상화되어 있으므로 표식 항체는 전개액 확인부에 고정된다. 전개액 확인부에서 표식이 검출되는 경우에는 전개액은 거기까지 정확하게 흘러 왔다고 하는 것이 확인된다. 또한, 전개액은 그 하류의 흡수 패드에 흡수된다.
본 발명의 면역 측정 방법에 적용되는 검체로서는 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스가 포함되어 있는지의 여부를 검출하고자 하는 검체이면 어느 것이어도 좋고, 혈액(전혈, 혈장, 혈청을 포함), 타액, 담 등의 체액이나 점막의 와이핑액, 기구나 설비의 와이핑액 등을 열거할 수 있지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
이하, 본 발명을 실시예에 근거하여 보다 구체적으로 설명한다. 무엇보다, 본 발명은 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예
참고예 1 면역용 및 ELISAㆍ웨스턴 블로트(WB)용 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스(H5N1) 항원의 조제
약독 인플루엔자 바이러스주 A/duck/Hokkaido/Vac-1/04(H5N1)(Genbank accession No.: AB259712, 배열 번호 49, 50) 감염 발육 계란 장뇨액을 27000rpm, 4℃, 1.5시간 초원심을 행하여 바이러스를 펠렛으로서 회수했다. 펠렛은 PBS에 용해시킨 후, 슈크로오스 구배 원심 분리법으로 바이러스 함유 프랙션을 회수했다. 재차 초원심을 행하고 슈크로오스를 제거하여 정제 바이러스 용액으로 했다. 정제 바이러스는 포르말린 또는 Triton X-100(상품명)에 의해 불활화를 행하여 면역 및 ELISA, WB용 항원으로 했다. 포르말린 처리는 정제 바이러스 용액에 최종 농도 0.2%가 되도록 포르말린을 첨가하고, 4℃에서 1주간 정치함으로써, Triton X-100(상품명) 처리는 세포 추출용 완충액(0.05M Tris-HCl, pH 8.0, 0.6M KCl, 0.5% Triton X-100(상품명)을 정제 바이러스 용액에 3배량 첨가하는 것에 의해 행했다. 바이러스의 불활화의 확인은 불활화 처리한 바이러스를 10일령 발육 계란에 접종하여 2일간 배양한 후, 바이러스 감염 발육 계란 장뇨액의 적혈구 응집(HA) 시험에서 HA가가 없는 것에 의해 확인했다.
참고예 2 특이성 확인(IF, WB)용 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스(H5N1) 항원의 조제
수립한 항체의 특이성 확인에 사용하는 바이러스 감염 마딘 다비 개 신장(Madin-Darby canine kidney, MDCK) 세포(입수처: 홋카이도 대학) 및 그 세포 추출액의 제작은 이하와 같이 행했다. 형광 항체법(IF)용 항원은 챔버 슬라이드에 MDCK 세포를 풀 시트가 될 때까지 배양한 후 각 인플루엔자 바이러스를 트립신 첨가 MEM(혈청 무첨가)에 의해 최적으로 희석하여 세포에 접종했다. CO2 인큐베이터에서 35℃, 16시간 배양하고, 그 후에 냉 아세톤으로 세포를 고정해서 특이성 확인용 IF용 슬라이드로 했다.
WB용 항원은 샤알레에 풀 시트 형상이 될 때까지 배양한 MCDK 세포에 IF용 항원 제작과 동일하게 최적화한 바이러스 용액에 트립신 함유 무혈청 MEM을 첨가해서 35℃, 16시간 배양했다. 배양 종료 후, 세포 용해 완충액을 샤알레에 첨가해서 세포를 용해하고, 14000rpm, 5분 원심하여 상청을 특이성 확인용 WB용 항원으로 했다.
실시예 1 A형 인플루엔자 바이러스(H5) 헤마글루티닌에 특이적인 모노클로날 항체의 확립
참고예 1에서 제작한 정제 부활화 인플루엔자 바이러스 A/duck/Hokkaido/Vac-1/04(H5N1)를 마우스에 면역하고, 같은 마우스의 뒷다리 림파구와 미엘로마 세포를 융합함으로써 제작했다. 즉, BALB/C 마우스에 프로인트 완전 애쥬번트에 의해 에멀젼화한 정제 부활화 인플루엔자 바이러스 A/duck/Hokkaido/Vac-1/04(H5N1)를 50~100㎍/마우스로 풋 퍼트에 첫회 면역을 행하고, 2~3주간 후 애쥬번트를 포함하지 않는 정제 불활화 인플루엔자 바이러스 A/duck/Hokkaido/Vac-1/04(H5N1)를 50~100㎍/마우스로 추가 면역을 행했다. 항체값의 확인은 Triton X-100 처리 정제 인플루엔자 바이러스 A/duck/Hokkaido/Vac-1/04(H5N1) 항원을 코팅한 96웰 ELISA 플레이트를 사용한 고상 ELISA 및 동일한 항원에 의한 WB에 의해 행했다. 항체값의 상승이 확인된 마우스에 정제 부활화 인플루엔자 바이러스 A/duck/Hokkaido/Vac-1/04(H5N1) 25~50㎍을 풋 퍼트에 면역하고, 그 3~4일 후 마우스 하지 림프절로부터 림파구를 조제했다. 미리 RPMI-1640 배지에서 배양하고 있었던 마우스 미엘로마 세포(P3U1)와 비세포를 1:2~1:5의 비율로 혼합하여 폴리에틸렌글리콜(PEG; Nippon Boehringer Ingelheim Co., Ltd. 제품)을 이용하여 세포 융합을 행했다. 융합된 세포는 HAT 배지에 부유시킨 후 96웰 배양 플레이트에 분주하고, 37℃ CO2 인큐베이터에서 배양했다.
생산 항체의 스크리닝은 상기에 나타낸 고상 ELISA로 행했다. 즉, Triton X-100(상품명) 처리 정제 인플루엔자 바이러스 A/duck/Hokkaido/Vac-1/04(H5N1) 항원을 96웰 ELISA 플레이트(NUNC사 제품)에 1㎍/ml의 농도로 50㎕/웰씩 분주하고, 4℃에서 하룻밤 방치함으로써 흡착시켰다. 웰을 1% 스킴 밀크로 블로킹한 후 세정 완충액(0.05% Tween20을 포함하는 PBS)으로 3회 세정하고, 세포 융합을 행한 플레이트의 배양 상청 50㎕를 첨가하여 37℃에서 1시간 반응시켰다. 마찬가지로, 세정 완충액으로 3회 세정 후 POD 표식 항 마우스 이뮤노글로불린 항체(DACO사 제품)를 첨가하여 37℃에서 1시간 더 반응시켰다. 세정 완충액으로 4회 세정 후 기질 ABTS를 첨가하여 발색이 나타나는 웰을 선택했다. 이어서, 선택된 웰의 세포를 48웰 또는 24웰 배양 플레이트에 옮겨 37℃의 CO2 인큐베이터 중에서 배양한 후, WB에서 헤마글루티닌에 반응하는 것을 확인했다. WB는 Triton X-100(상품명) 처리 정제 인플루엔자 바이러스 A/duck/Hokkaido/Vac-1/04(H5N1) 항원을 SDS-PAGE 후 니트로셀룰로오스막에 전사해서 제작한 막을 이용하여 상법에 따라 실시했다. WB에 의해 헤마글루티닌에 반응이 확인된 웰의 세포를 한외 희석법에서 단일 클론이라고 하고, 이하에 나타내는 항 인플루엔자(H5N1) 헤마글루티닌에 반응하는 모노클로날 항체를 생산하는 각종 하이브리도마를 확립했다.
에피토프가 교차하는 클론을 제외하기 위해서, 인히비션 시험에서 경합하는 모노클로날 항체를 우선 제외하고, 서로 경합하지 않는 모노클로날 항체만을 선택했다. 구체적으로는 이 인히비션 시험은 다음과 같이 해서 행했다. Mab의 스크리닝과 동일하게 정제 인플루엔자 바이러스를 흡착한 96웰 ELISA 플레이트를 제작하고, 각 웰에 수배 고농도의 저해용 Mab와 등량의 알칼리 포스파타아제 표식 Mab를 동시에 첨가하여 37℃, 1시간 반응시킨다. 세정 후, 기질 pNPP를 첨가하여 표식 Mab의 고상에의 반응을 각 Mab가 저해하는지의 여부를 확인했다. 선택된 14종류의 모노클로날 항체를 여러가지로 조합시키고, 후술하는 이뮤노크로마토 기구의 고상 항체 및 표식 항체로서 사용한 이뮤노크로마토 기구를 후술하는 방법에 의해 실제로 제작하고, 제작한 이뮤노크로마토 기구를 이용하여 검체 중의 A형 인플루엔자 바이러스를 실제로 검출하고, 우수한 감도 및 특이성(후술한 바와 같이, 다른 HA 아형과 교차 반응하지 않음)을 부여하는 3종류의 모노클로날 항체 IFH5-115, IFH5-136, IFH5-26 및 이들을 각각 생산하는 3종류의 하이브리도마 IFH5-115, IFH5-136, IFH5-26을 확립했다(이하, 모노클로날 항체 IFH5-115, IFH5-136, IFH5-26은 각각 모노클로날 항체 115(또는 Mab115), 모노클로날 항체 136(또는 Mab136) 및 모노클로날 항체 26(또는 Mab26)이라고 칭하는 경우가 있음). 또한, 이들의 모노클로날 항체는 후술하는 바와 같이 A형 인플루엔자 바이러스에 대한 중화 활성을 갖지 않았다.
실시예 2 IF 및 WB에 의한 모노클로날 항체의 반응 특이성의 확인
IF법은 이하와 같이 행했다. 즉, 참고예 2에서 제작한 특이성 확인용 IF용 슬라이드에 모노클로날 항체의 배양 상청 또는 복수(1% BSA의 PBST로 희석)를 첨가하여 실온, 1시간 반응시킨 후 PBS로 세정하여 형광 색소 표식 항 마우스 IgG(1% BSA의 PBST로 1000배 희석)과 실온, 30분간 반응시켰다. PBS로 세정한 후 글리세롤로 봉입하고, 형광 현미경으로 관찰했다. WB는 참고예 2에서 제작한 항원을 이용하여 상법에 따라 행했다.
모노클로날 항체 IFH5-115, IFH5-136, IFH5-26은 어떠한 방법에 있어서도 약독형 H5N1 인플루엔자 HA에 반응하는 것이 확인되었지만 다른 아주의 HA나 강독형 H5N1에 대한 반응은 방법에 따라 차이가 나타났다. 따라서, 이들에 관해서는 실제의 측정계(EL)로 확인하기로 했다.
실시예 3 항 인플루엔자 H5N1형 바이러스 모노클로날 항체의 대응 에피토프 해석
3-1 N말단 결손 플라스미드의 제작
Mab 26, 115 및 136의 N말단측의 인식 부위를 결정하기 위해서, 564 아미노산으로 이루어지는 인플루엔자 H5N1주 A/duck/Hokkaido/Vac-1/04(H5N1)의 HA(배열 번호 2)를 PCR법으로 1~564aa(A단편), 1~514aa(B단편), 21~514aa(C단편), 101~500aa(D단편), 151~500aa(E단편) 및 201~500aa(F단편)의 6단편을 증폭했다. 각 프라이머에는 미리 BamHI, XbaI 부위가 부가되어 있었다. 증폭 단편을 QIAGEN사의 PCR Purification Kit로 정제하여, 발현용 플라스미드 pW6A의 NdeI-EcoRI 부위에 GST를 조립한 발현용 플라스미드 pWG6A의 BamHI, XbaI 부위에 삽입해서, 플라스미드 pWGInf.H5N1-N-A, pWGInf.H5N1-N-B, pWGInf.H5N1-N-C, pWGInf.H5N1-N-D, pWGInf.H5N1-N-E 및 pWGInf.H5N1-N-F를 제작했다. 이들을 사용하여 대장균 BL21(DE3)(Brookhaven National Laboratory로부터 입수)을 형질 전환시켜, 암피실린 내성의 형질 전환체 대장균 BL21(DE3) pWGInf.H5N1-N-A, BL21(DE3)pWGInf.H5N1-N-B, BL21(DE3)pWGInf.H5N1-N-C, BL21(DE3)pWGInf.H5N1-N-D, BL21(DE3)pWGInf.H5N1-N-E 및 BL21(DE3)pWGInf.H5N1-N-F를 얻었다.
3-2 재조합 단백질(GST+Inf.H5N1-N-A, GST+Inf.H5N1-N-B, GST+Inf.H5N1-N-C, GST+Inf.H5N1-N-D, GST+Inf.H5N1-N-E 및 GST+Inf.H5N1-N-F)의 발현과 웨스턴 블로트
3-1에서 제작한 형질 전환체를 50㎍/ml의 암피실린을 포함하는 LB 배지 2ml 중 37℃에서 배양했다. 예비 배양에서 600nm에서 OD를 0.6~0.8로 한 후 1mM IPTG를 첨가하여 발현 유도를 행하고, 3시간 더 배양했다. 1.5ml량의 균체 배양액을 5,000rpm으로 2분간 원심 분리해서 균체를 모으고, 100㎕의 완충액(10mM 트리스-염산, pH 8.0, 0.1M 염화나트륨, 1mM EDTA)에 현탁시켜, 15분간의 초음파 파쇄에 의해 완전하게 균체를 파쇄했다. 이것을 균체 시료로 했다.
균체 시료 8㎕에 3배 농도의 SDS 폴리아크릴아미드 완충액(0.15M 트리스-염산, pH 6.8, 6% SDS, 24% 글리세롤, 6mM EDTA, 2% 2-메르캅토에탄올, 0.03% 브로모페놀 블루) 4㎕를 첨가하여 충분히 교반한 후 100℃에서 가열 처리를 하고, 전기 영동에 제공했다. 도데실황산나트륨-폴리아크릴아미드 겔 전기 영동(SDS-PAGE)은 e-PAGEL 12.5% 겔 농도(상품명, ATTO Corporation 제품)를 사용하여 상법에 따랐다. 영동 후 PVDF막(ATTO Corporation 제품)에 전사하고, 1% BSA에서 4℃ 하룻밤 블로킹을 행했다. 블로킹액을 제거하고, PBS-Tween(상품명)으로 세정 후 2㎍/ml의 농도로 조정한 모노클로날 항체 26, 115 및 136을 첨가하여 실온 60분 반응시켰다. PBS-Tween(상품명)으로 충분하게 세정한 후 반응 용액으로 5000배로 희석한 퍼옥시다아제 효소 표식된 항 마우스 이뮤노글로불린 토끼 폴리클로날 항체(Dako사 제품)를 반응시키고, 세정 후 ECL 웨스턴 블로팅 검출 시스템(General Electric Company 제품)을 이용하여 인스턴트 필름(FUJIFILM CORPORATION 제품)에 1~15분간 노광시켜 시그널을 검출했다. 그 결과를 도 4에 나타낸다. 모노클로날 항체 26 및 115는 A, B 및 C 단편과 반응하고, D 단편과는 반응하지 않았다. 모노클로날 항체 136은 A, B, C 및 D 단편과 반응하고, E 단편과는 반응하지 않았다. 따라서, 모노클로날 항체 26 및 115는 21~100aa 영역을, 또한 모노클로날 항체 136은 101~150aa 영역을 인식하고 있는 것으로 판명되었다.
3-3 N말단 결손 플라스미드의 제작
이어서, 인플루엔자 H5N1의 21~400 아미노산 단편을 보다 세분화한 단편 N1(21~400aa), N2(41~400aa), N3(61~400aa), N4(81~400aa), N5(101~400aa), N6(114~400aa), N7(127~400aa) 및 N8(139~400aa)을 PCR법으로 증폭했다. 증폭 단편을 QIAGEN사의 PCR Purification Kit로 정제하고, 곤충 세포 발현용 플라스미드 pBac-EGTs-6A(Invitrogen사 제품 pFastBac1 벡터를 개변)의 BamHI-XbaI 부위에 삽입하고, 플라스미드 pBacInf.H5N1-N1, pBacInf.H5N1-N2, pBacInf.H5N1-N3, pBacInf.H5N1-N4, pBacInf.H5N1-N5, pBacInf.H5N1-N6, pBacInf.H5N1-N7 및 pBacInf.H5N1-N8을 제작했다. 이들을 Bacmid 제작용 대장균 DH10Bac로 형질 전환을 행하여 Bacmid-Inf.H5N1-N1, Bacmid-Inf.H5N1-N2, Bacmid-Inf.H5N1-N3, Bacmid-Inf.H5N1-N4, Bacmid-Inf.H5N1-N5, Bacmid-Inf.H5N1-N6, Bacmid-Inf.H5N1-N7 및 Bacmid-Inf.H5N1-N8을 제작했다.
3-4 재조합 단백질(Inf.H5N1-N1, Inf.H5N1-N2, Inf.H5N1-N3, Inf.H5N1-N4, Inf.H5N1-N5, Inf.H5N1-N6, Inf.H5N1-N7 및 Inf.H5N1-N8)의 발현
3-3에서 제작한 8종류의 Bacmid DNA를 곤충 세포 Sf-21(Invitrogen사 제품)에 트랜스펙션을 행하여 재조합 바이러스 P1-N1, P1-N2, P1-N3, P1-N4, P1-N5, P1-N6, P1-N7 및 P1-N8을 제작했다. 이들의 P1의 일부를 Sf21 세포에 감염시켜 27℃, 4일간 배양 후 3000rpm 20분간 원심 분리하여 배양 상청을 회수했다. 이것을 ELISA의 시료로 했다.
139~400 아미노산 영역과 반응하는 모노클로날 항체 254를 고상화한 ELISA법을 사용했다. 즉, 모노클로날 항체 254는 2㎍/ml의 농도로 희석하고, 마이크로플레이트 모듈(Nunc사 제품)의 각 웰에 50㎕씩 첨가하여 4℃ 하룻밤 인큐베이트하여 고상화했다. 이어서, 0.1%의 Tween 20(상품명)을 포함하는 PBS(PBS-Tween(상품명))으로 각 웰을 세정 후 PBS로 희석한 1%의 소 혈청 알부민(BSA) 100㎕를 첨가하여 37℃, 1시간 블로킹을 행했다. 블로킹액을 제거한 후 비오틴화 모노클로날 항체 26, 115 및 126을 50㎕ 첨가하여 37℃, 1시간 반응시켰다. PBS-Tween(상품명)으로 충분하게 세정한 후 반응 용액으로 2,000배 희석한 알칼리 포스파타아제 표식 스트렙토아비딘(DAKO사 제품)을 각 웰에 50㎕씩 첨가하여 37℃, 1시간 반응시켰다. 반응 후 PBS-Tween(상품명)으로 충분하게 세정하고, 파라니트로페닐인산을 각 웰에 50㎕씩 첨가하여 실온에서 30분간 반응 후 반응 정지액을 각 웰에 50㎕씩 첨가하여 파장 405nm에서 발색 레벨(흡광도)을 측정했다. 표 1에 나타낸 바와 같이, 모노클로날 항체 26은 61~80 아미노산, 모노클로날 항체 115는 41~60 아미노산 및 모노클로날 항체 136은 101~113 아미노산 영역에 에피토프가 존재하는 것이라고 추정할 수 있다.
Figure 112010052506463-pct00001
3-5 C말단 결손 플라스미드의 제작
모노클로날 항체 26, 115 및 136의 C말단측의 인식 부위를 결정하기 위해서, 564 아미노산으로 이루어지는 인플루엔자 H5N1주 A/duck/Hokkaido/Vac-1/04(H5N1)의 HA(배열 번호 2)를 PCR법으로 21~400aa(A 단편), 21~333aa(B 단편), 21~266aa(C 단편), 21~200aa(D 단편) 및 21~133aa(E 단편) 5단편을 증폭했다. 각 프라이머에는 미리 BamHI, XbaI 부위가 부가되어 있었다. 증폭 단편을 QIAGEN사의 PCR Purification Kit로 정제하고, 발현용 플라스미드 pW6A의 NdeI-EcoRI 부위에 GST를 조립한 발현용 플라스미드 pWG6A의 BamHI, XbaI 부위에 삽입하고, 플라스미드 pWGInf.H5N1-C-A, pWGInf.H5N1-C-B, pWGInf.H5N1-C-C, pWGInf.H5N1-C-D 및 pWGInf.H5N1-C-E를 제작했다. 이들을 사용하여 대장균 BL21(DE3)(Brookhaven National Laboratory로부터 입수)을 형질 전환시켜, 암피실린 내성의 형질 전환체 대장균 BL21(DE3)pWGInf.H5N1-C-A, BL21(DE3)pWGInf.H5N1-C-B, BL21(DE3)pWGInf.H5N1-C-C, BL21(DE3)pWGInf.H5N1-C-D, BL21(DE3)pWGInf.H5N1-C-E를 얻었다.
3-6 재조합 단백질(GST+Inf.H5N1-C-A, GST+Inf.H5N1-C-B, GST+Inf.H5N1-C-C, GST+Inf.H5N1-C-D 및 GST+Inf.H5N1-C-E)의 발현과 웨스턴 블로트
3-5에서 제작한 형질 전환체를 50㎍/ml의 암피실린을 포함하는 LB 배지 2ml 중 37℃에서 배양했다. 예비 배양에서 600nm에서 OD를 0.6~0.8로 한 후 1mM IPTG를 첨가하여 발현 유도를 행하고, 3시간 더 배양했다. 1.5ml량의 균체 배양액을 5,000rpm에서 2분간 원심 분리하여 균체를 모으고, 100㎕의 완충액(10mM 트리스-염산, pH 8.0, 0.1M 염화나트륨, 1mM EDTA)에 현탁하고, 15분간의 초음파 파쇄에 의해 완전하게 균체를 파쇄했다. 이것을 균체 시료로 했다.
균체 시료 8㎕에 3배 농도의 SDS 폴리아크릴아미드 완충액(0.15M 트리스-염산, pH 6.8, 6% SDS, 24% 글리세롤, 6mM EDTA, 2% 2-메르캅토에탄올, 0.03% 브로모페놀 블루) 4㎕를 첨가하여 충분히 교반한 후 100℃에서 가열 처리를 하고, 전기 영동에 제공했다. 도데실황산나트륨-폴리아크릴아미드 겔 전기 영동(SDS-PAGE)은 e-PAGEL 12.5% 겔 농도(상품명, ATTO Corporation 제품)를 사용하여 상법에 따랐다. 영동 후 PVDF막(ATTO Corporation 제품)에 전사하고, 1% BSA에서 4℃, 하룻밤 블로킹을 행했다. 블로킹액을 제거하고, PBS-Tween(상품명)으로 세정 후 2㎍/ml의 농도로 조정한 모노클로날 항체 26, 115 및 136을 첨가하여 실온, 60분 반응시켰다. PBS-Tween(상품명)으로 충분하게 세정한 후 반응 용액으로 5000배로 희석한 퍼옥시다아제 효소 표식된 항 마우스 이뮤노글로불린 토끼 폴리클로날 항체(DAKO사 제품)를 반응시키고, 세정 후 ECL 웨스턴 블로팅 검출 시스템(General Electric Company 제품)을 이용하여 인스턴트 필름(FUJIFILM CORPORATION 제품)에 1~15분간 노광하여 시그널을 검출했다. 그 결과를 도 5에 나타낸다. 모노클로날 항체 26, 115 및 136은 A 및 B 단편과 반응하고, C 단편과는 반응하지 않았다. 따라서, 모노클로날 항체 26, 115 및 136은 267~333 아미노산 영역을 인식하고 있는 것이 판명되었다.
3-7 C말단 결손 플라스미드의 제작
이어서, 인플루엔자 H5N1의 267~333aa 단편을 보다 세분화한 단편 C1(41~333aa), C2(41~322aa), C3(41~311aa), C4(41~300aa), C5(41~289aa), C6(41~278aa) 및 C7(41~267aa)을 PCR법으로 증폭했다. 증폭 단편을 QIAGEN사의 PCR Purification Kit로 정제하고, 곤충 세포 발현용 플라스미드 pBac-EGTs-6A(Invitrogen사 제품 pFastBac1 벡터를 개변)의 BamHI-XbaI 부위에 삽입하여, 플라스미드 pBacInf.H5N1-C1, pBacInf.H5N1-C2, pBacInf.H5N1-C3, pBacInf.H5N1-C4, pBacInf.H5N1-C5, pBacInf.H5N1-C6 및 pBacInf.H5N1-C7을 제작했다. 이들을 Bacmid 제작용 대장균 DH10Bac에 형질 전환을 행하여 Bacmid-Inf.H5N1-C1, Bacmid-Inf.H5N1-C2, Bacmid-Inf.H5N1-C3, Bacmid-Inf.H5N1-C4, Bacmid-Inf.H5N1-C5, Bacmid-Inf.H5N1-C6 및 Bacmid-Inf.H5N1-C7을 제작했다.
3-8 재조합 단백질(Inf.H5N1-C1, Inf.H5N1-C2, Inf.H5N1-C3, Inf.H5N1-C4, Inf.H5N1-C5, Inf.H5N1-C6 및 Inf.H5N1-C7의 발현
3-7에서 제작한 7종류의 Bacmid DNA를 곤충 세포 Sf-21(Invitrogen사 제품)에 트랜스펙션을 행하여 재조합 바이러스 P1-C1, P1-C2, P1-C3, P1-C4, P1-C5, P1-C6 및 P1-C7을 제작했다. 이들의 P1의 일부를 Sf21 세포에 감염시켜 27℃, 4일간 배양 후 3000rpm 20분간 원심 분리하여 배양 상청을 회수했다. 이것을 Enzyme Linked Immunosorbent Assay(ELISA법)의 시료로 했다.
41~333aa 영역과 반응하는 모노클로날 항체 270을 고상화한 ELISA법을 사용했다. 즉, 모노클로날 항체 270은 2㎍/ml의 농도로 희석하고, 마이크로플레이트 모듈(Nunc사 제품)의 각 웰에 50㎕씩 첨가하여 4℃, 하룻밤 인큐베이트하여 고상화했다. 이어서, 0.1%의 Tween 20(상품명)을 포함하는 PBS(PBS-Tween)(상품명)로 각 웰을 세정 후 PBS로 희석한 1%의 소 혈청 알부민(BSA) 100㎕를 첨가하여 37℃, 1시간 블로킹을 행했다. 블로킹액을 제거한 후 비오틴화 모노클로날 항체 26, 115 및 126을 50㎕ 첨가하여 37℃, 1시간 반응시켰다. PBS-Tween(상품명)으로 충분하게 세정한 후 반응 용액으로 2000배 희석한 알칼리 포스파타아제 표식 스트렙토아비딘(DAKO사 제품)을 각 웰에 50㎕씩 첨가하여 37℃, 1시간 반응시켰다. 반응 후 PBS-Tween(상품명)으로 충분하게 세정하고, 파라니트로페닐인산을 각 웰에 50㎕씩 첨가하여 실온에서 30분간 반응 후 반응 정지액을 각 웰에 50㎕씩 첨가하여 파장 405nm에서 발색 레벨을 측정했다. 표 2에 나타낸 바와 같이, 모노클로날 항체 26은 290~300 아미노산, 모노클로날 항체 115는 312~322 아미노산, 모노클로날 항체 136은 268~278 아미노산 영역에 에피토프가 존재하는 것이라고 추정할 수 있다.
Figure 112010052506463-pct00002
3-1~3-8을 정리하면, 모노클로날 항체 26은 61~80aa 및 290~300aa, 모노클로날 항체 115는 41~60aa 및 312~322aa, 모노클로날 항체 136은 101~113aa 및 268~278aa 영역, 즉 이들의 모노클로날 항체는 고차 구조를 인식하고 있는 것이라고 추정된다(도 3 참조).
실시예 4 중화 항체 활성 측정
모노클로날 항체 IFH5-115, IFH5-136, IFH5-26의 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스에 대한 중화 항체 활성의 유무에 대해서 시험했다. 인플루엔자 바이러스는 A/dk/Hokkaido/84/02(H5N3) 및 A/PR/8/34(H1N1)를 사용했다. 각 모노클로날 항체를 이글 MEM 배지로 2배 희석하고, 각 항체 희석액 50㎕를 96웰 플레이트에 첨가했다. A/dk/Hokkaido/84/02(H5N3) 및 A/PR/8/34(H1N1)를 200 TCID50/25㎕가 되도록 희석하고, 이 바이러스 희석액을 각 항체 희석 웰에 25㎕ 첨가했다(단백질 농도: 0~160㎍/25㎕). 실온에서 1시간 인큐베이트했다(바이러스-항체 혼합액). 한편, MDCK 세포를 미리 10% 소 태아 혈청을 포함하는 이글 MEM 배지로 컨플루엔트에 배양하고, 배양 상청을 제거하고, 이글 MEM 배지로 1회 세정한 MDCK 배양-48웰 플레이트에 상기 바이러스-항체 혼합액을 75㎕ 첨가하고, 35℃에서 1시간 인큐베이트했다. 이어서, 각 웰에 0.0005% 트립신을 포함하는 이글 MEM 배지를 150㎕ 첨가하고, 35℃, 5% 탄산 가스 존재 하에서 배양을 개시했다. 배양 3일째에서 바이러스의 세포 장해의 중화 항체 활성에 의한 저해를 현미경으로 확인하여 중화 활성의 유무를 확인했다. 세포 장해가 일어난 경우에는 바이러스 감염에 의한 세포 융합에 기인하는 세포의 원형화가 관찰된다. 세포 장해가 일어나지 않은 경우에는 모노클로날 항체가 상기 바이러스의 중화 활성을 가지고 있는 것으로 판단할 수 있다.
본 측정계 컨트롤로서 항체를 첨가하지 않는 웰을 바이러스 활성 컨트롤이라고 하고, 중화 항체 컨트롤로서 중화 활성을 갖는 A/duck/Hokkaido/Vac-1/04(배열 번호 2)의 닭 항 혈청을 사용했다. 시험 결과를 표 3~표 6에 나타낸다.
중화 항체 컨트롤로서 사용한 닭 항 혈청(A/duck/Hokkaido/Vac-1/04(배열 번호 2)을 면역해서 얻은 것))은 A/dk/Hokkaido/84/02(H5N3) 및 A/PR/8/34(H1N1)에 대하여 x64 희석까지 중화 항체 활성이 확인되었지만, 모노클로날 항체 IFH5-115, IFH5-136, IFH5-26은 중화 활성을 나타내지 않았다.
Figure 112010052506463-pct00003
Figure 112010052506463-pct00004
Figure 112010052506463-pct00005
Figure 112010052506463-pct00006
실시예 5 인플루엔자 A형 H5 면역 측정(이뮤노크로마토) 기구 1의 제작
도 6에 나타낸 바와 같이, 폭 5mm, 길이 50mm의 니트로셀룰로오스막(Millipore사 제품)의 매트릭스(2)의 전개액 흡수존(5)측의 말단으로부터 15mm의 위치에 항 인플루엔자 A형 H5 특이 항체(IFH5-26)를 포함하는 수용액 0.7㎕를 니트로셀룰로오스막에 점착하여 건조시켜 검출존(6)을 작성했다. 또한, 매트릭스(2)의 전개액 흡수존(5)측의 말단으로부터 12mm의 위치에 항 알칼리 포스파타아제 항체(토끼)를 점착하여 건조시켜 전개 확인부(10)를 작성했다. 이어서, 매트릭스에 IFH5-115 항체를 알칼리 포스파타아제로 표식한 알칼리 포스파타아제 표식 항 인플루엔자 A형 H5 특이 항체(ALP-IFH5-115, 10㎍/ml) 5㎕를 점착하여 건조시켜 효소 표식 시약 패드(4)로 이루어지는 표식 시약존을 작성했다.
전개액 패드(3)는 폭 6mm, 길이 20mm의 여과지(Millipore사 제품) 상에 기질로서 5-브로모-4-클로로-3-인돌릴인산(BCIP) 100㎍을 폭 6.0mm의 라인 형상으로 점착하여 건조시켜서 기질존(7)을 작성했다. 상기 매트릭스(2), 전개액 패드(3), 효소 표식 시약 패드(4) 및 흡수 패드(5)(폭 10mm, 길이 15mm, 두께 1mm의 여과지(WATT MANN CO., LTD. 제품))를 전개액조(11)를 갖는 플라스틱 케이스에 고정하고, 도 7 및 도 8에 나타내는 인플루엔자 A형 H5 면역 측정 기구 1을 제조했다.
실시예 6 인플루엔자 A형 H5 면역 측정 기구 2의 제작
실시예 5의 도 6과 동일하게, 폭 5mm, 길이 50mm의 니트로셀룰로오스막(Millipore사 제품)의 매트릭스(2)의 전개액 흡수존(5)측의 말단으로부터 15mm의 위치에 항 인플루엔자 A형 H5 특이 항체(IFH5-136)를 포함하는 수용액 0.7㎕를 니트로셀룰로오스막에 점착하여 건조시켜 검출존(6)을 작성했다. 또한, 매트릭스(2)의 전개액 흡수존(5)측의 말단으로부터 12mm의 위치에 항 알칼리 포스파타아제 항체(토끼)를 점착하여 건조시켜 전개액 확인부(10)를 작성했다. 이어서, 매트릭스에 IFH5-115 항체를 알칼리 포스파타아제로 표식한 알칼리 포스파타아제 표식 항 인플루엔자 A형 H5 특이 항체(ALP-IFH5-115, 10㎍/ml) 5㎕를 점착하여 건조시켜 효소 표식 시약 패드(4)로 이루어지는 표식 시약존을 작성했다.
또한, 실시예 5와 동일하게 기질을 점착하여 건조시킨 전개액 패드(3)를 작성하고, 상기 매트릭스(2), 효소 표식 시약 패드(4) 및 흡수 패드(5)와 함께 전개액조(11)를 갖는 플라스틱 케이스에 고정하고, 상기 도 6 및 도 7과 동일한 인플루엔자 A형 H5 면역 측정 기구 2를 제조했다.
실시예 7 인플루엔자 A형 H5 면역 측정 기구 3의 제작
실시예 5의 도 6과 동일하게, 폭 5mm, 길이 50mm의 니트로셀룰로오스막(Millipore사 제품)의 매트릭스(2)의 전개액 흡수존(5)측의 말단으로부터 15mm의 위치에 항 인플루엔자 A형 H5 특이 항체(IFH5-136)를 포함하는 수용액 0.7㎕를 니트로셀룰로오스막에 점착하여 건조시켜 검출존(6)을 작성했다. 또한, 매트릭스(2)의 전개액 흡수존(5)측의 말단으로부터 12mm의 위치에 항 알칼리 포스파타아제 항체(토끼)를 점착하여 건조시켜 전개액 확인부(10)를 작성했다. 이어서, 매트릭스에 IFH5-26 항체를 알칼리 포스파타아제로 표식한 알칼리 포스파타아제 표식 항 인플루엔자 A형 H5 특이 항체(ALP-IFH5-26, 10㎍/ml) 5㎕를 점착하여 건조시켜 효소 표식 시약 패드(4)로 이루어지는 표식 시약존을 작성했다.
또한, 실시예 5와 동일하게 기질을 점착하여 건조시킨 전개액 패드(3)를 작성하고, 상기 매트릭스(2), 효소 표식 시약 패드(4) 및 흡수 패드(5)와 함께 전개액조(11)를 갖는 플라스틱 케이스에 고정하고, 상기 도 6 및 도 7과 동일한 인플루엔자 A형 H5 면역 측정 기구 3을 제조했다.
실시예 8 면역 측정 기구 1, 2 및 3에 의한 인플루엔자 A형의 각 아형의 측정
상기 실시예 5, 실시예 6 및 실시예 7에서 제조한 인플루엔자 A형 H5 면역 측정(이뮤노크로마토) 기구 1, 2 및 3(본 발명 측정 기구)을 사용하여 각종 인플루엔자 A형 바이러스 아형 검체를 사용해서 면역 측정 기구의 인플루엔자 A 바이러스 아형(H1-15)에 대한 반응 특이성을 시험했다. 사용된 인플루엔자 A형 바이러스 아형 검체는 각 바이러스를 부화 계란에서 배양하여 회수한 적혈구 응집가(HA가) 기지의 장뇨액을 사용했다(표 4 참조). 각 장뇨액은 시료 희석액(계면활성제를 포함하는 트리스 완충액(pH 8.0))으로 10배 희석하고, 그 30㎕를 검체 점착존(8)에 표 3에 적하한 후 변형 부재에 설치한 압입부(12)를 하방으로 가압하여 변형시켜서, 변형 부재에 부설된 돌기부(13)에 의해 전개액 패드(3)를 전개액조(11)에 삽입하여 전개액을 전개액 패드(3)에 공급해서 측정을 개시했다. 측정 개시 15분 후, 대상 시약존(10)의 발색에 의해 전개액의 전개를 확인한 후 검출존(6)의 발색을 육안으로 측정했다. 그 결과를 표 7에 나타낸다. 본 면역 측정 기구는 어느 것이어도 인플루엔자 A형 바이러스 H5 아형을 특이적으로 검출하여 다른 인플루엔자 A형 바이러스 아형(H1-4 및 H6-15)과는 반응하지 않는 것이 확인되었다.
Figure 112010052506463-pct00007
또한, 인플루엔자 A형 바이러스 H5 아주에 대한 특이성 및 검출 감도를 시험했다. 인플루엔자 A형 바이러스 H5 아주로서 각 바이러스를 부화 계란에서 배양하여 회수한 적혈구 응집가(HA가) 기지의 장뇨액을 사용했다(표 7 참조). 각 장뇨액은 시료 희석액(계면활성제를 포함하는 트리스 완충액(pH 8.0))으로 연속 희석하고, 그 30㎕를 검체 첨가존(8)에 적하한 후 변형 부재에 설치한 압입부(12)를 하방으로 가압하여 변형시켜서, 변형 부재에 부설된 돌기부(13)에 의해 전개액 패드(3)를 전개액조(11)에 삽입하여 전개액을 전개액 패드(3)에 공급해서 측정을 개시했다. 측정 개시 15분 후, 전개 확인부(10)의 발색에 의해 전개액의 전개를 확인한 후 검출존(6)의 발색을 육안으로 측정했다. 그 결과를 표 8에 나타낸다. 검출 감도는 각 장뇨액을 연속 희석한 희석액의 검출 가능한 최고 희석 배수로 표기했다. 본 면역 측정 기구는 어느 것이어도 시험된 인플루엔자 A형 바이러스 H5 아주를 검출했다.
Figure 112010052506463-pct00008
실시예 9 인플루엔자 A형 및 인플루엔자 A H5 동시 측정용 면역 측정 기구 4의 제작
도 9에 나타낸 바와 같이, 폭 5mm, 길이 50mm의 니트로셀룰로오스막(Millipore사 제품)의 매트릭스(2)의 전개액 흡수존(5)측의 말단으로부터 16mm와 13.5mm의 위치에 각각 참고예 2에서 제조한 항 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 H5 특이 항체(IFH5-26) 및 항 인플루엔자 A형 바이러스 항체(FVA2-11)(문헌: Gui-Rong BAI et.al.: Improvement of a Rapid Diagnosis Kit to Detect Either Influenza A or B Virus Infection. J.Vet.Med.Sci.68(1); 1-6, 2006)를 포함하는 수용액 0.7㎕를 니트로셀룰로오스막에 각각 점착하여 건조시켜 검출존(6a 및 6b)을 작성했다. 또한, 매트릭스(2)의 전개액 흡수존(5)측의 말단으로부터 11mm의 위치에 항 알칼리 포스파타아제 항체(토끼)를 점착하여 건조시켜 전개 확인부(10)를 작성했다. 이어서, 매트릭스에 참고예 1에서 제조한 알칼리 포스파타아제 표식 항 인플루엔자 A형 바이러스 항체(5㎍/ml)와 알칼리 포스파타아제 표식 항 인플루엔자 A형 H5 특이 항체(ALP-IFH5-115(10㎍/ml)의 혼합 수용액 5㎕를 점착하여 건조시켜 효소 표식 시약 패드(4)로 이루어지는 표식 시약존을 작성했다.
전개액 패드(3)는 폭 6mm, 길이 20mm의 여과지(Millipore사 제품) 상에 기질로서 5-브로모-4-클로로-3-인돌릴인산(BCIP) 100㎍을 폭 6.0mm의 라인 형상으로 점착하여 건조시켜서 작성했다. 상기 매트릭스(2), 전개액 패드(3), 효소 표식 시약 패드(4) 및 흡수 패드(5)(폭 10mm, 길이 15mm, 두께 1mm의 여과지(WATT MANN CO., LTD. 제품))를 전개액조(11)를 갖는 플라스틱 케이스에 고정하고, 도 10 및 도 8에 나타낸 인플루엔자 A형 바이러스 및 A형 H5 바이러스 동시 면역 측정 기구 4를 제조했다.
실시예 10 동시 면역 측정 기구 4에 의한 인플루엔자 A형의 각 아형의 측정
실시예 9에서 제조 작성한 인플루엔자 A형 바이러스 및 A형 H5 바이러스 동시 면역 측정 기구 4(본 발명 측정 기구)의 검체 첨가존(8)에 표 7 또는 표 8에 기재된 인플루엔자 A형 바이러스의 아형 시료(시료 희석액으로서, 계면활성제를 포함하는 트리스 완충액(pH 8.0)을 사용) 각 30㎕를 첨가한 후 변형 부재에 설치한 압입부(12)를 하방으로 가압하여 변형시켜서, 변형 부재에 부설된 돌기부(13)에 의해 전개액 패드(3)를 전개액조(11)에 삽입하여 전개액을 전개액 패드(3)에 공급해서 측정을 개시했다. 측정 개시 15분 후, 전개 확인부(10)의 발색에 의해 전개액의 전개를 확인한 후 검출존(6a 및 6b)의 발색을 육안으로 측정했다.
인플루엔자 A 아형 H1~H15에 대해서 부화 계란 배양해서 얻은 장뇨액을 이용하여 시험한 결과, H5주에 관해서는 검출존(6a 및 6b)의 양쪽 라인의 발색이 나타나고, H5 이외의 H1~H4, H6~H15에 관해서는 검출존(6b)(A형 공통 검출 라인)의 발색만이 나타났다. 비감염의 장뇨액에서는 검출존(6a 및 6b) 라인은 검출되지 않았다.
SEQUENCE LISTING <110> Fujirebio Inc., et al. <120> Anti-H5 subtype influenza hemagglutinin monoclonal antibody <130> PF387-PCT <160> 50 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 1732 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (15)..(1709) <223> <400> 1 tctaatctgt taaa atg gag aaa ata gta ctt ctt ttt gca ata gtc agt 50 Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Phe Ala Ile Val Ser 1 5 10 ctt gtc aaa agt gac caa att tgc att ggt tac cat gca aac aac tca 98 Leu Val Lys Ser Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser 15 20 25 aca gag cag gtt gac aca ata atg gaa aag aat gtt act gtc acg cat 146 Thr Glu Gln Val Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His 30 35 40 gcc caa gac ata ctg gaa aag aca cac aat ggg aag ctc tgc agt cta 194 Ala Gln Asp Ile Leu Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Ser Leu 45 50 55 60 aat gga gtt aag cct ctc att ttg agg gat tgt agt gta gct gga tgg 242 Asn Gly Val Lys Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp 65 70 75 ctc ctc gga aac ccc atg tgt gat gaa ttc ctc aat gtg ccg gaa tgg 290 Leu Leu Gly Asn Pro Met Cys Asp Glu Phe Leu Asn Val Pro Glu Trp 80 85 90 tct tac ata gtg gag aag gac agc cca atc aat ggc ctc tgc tac cca 338 Ser Tyr Ile Val Glu Lys Asp Ser Pro Ile Asn Gly Leu Cys Tyr Pro 95 100 105 ggg gat ttc aac gac tat gaa gag ctg aaa cac ctg ttg agc agt aca 386 Gly Asp Phe Asn Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Ser Thr 110 115 120 aac cat ttt gag aaa att caa atc atc ccc agg agt tct tgg tcc gat 434 Asn His Phe Glu Lys Ile Gln Ile Ile Pro Arg Ser Ser Trp Ser Asp 125 130 135 140 cat gat gcc tca tca gga gtg agc tcc gca tgt cca tat aat ggg agg 482 His Asp Ala Ser Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Asn Gly Arg 145 150 155 tcc tcc ttt ttc aga aat gta gtg tgg ctc atc aaa aag aac aat gca 530 Ser Ser Phe Phe Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Asn Ala 160 165 170 tac cca aca ata aaa agg aat tac aat aat act aac caa gaa gat ctt 578 Tyr Pro Thr Ile Lys Arg Asn Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu 175 180 185 ttg gta ctg tgg ggg att cac cat cct aat gat gca aca gag cag aca 626 Leu Val Leu Trp Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Thr Glu Gln Thr 190 195 200 aag ctc tat caa aac cca acc acc tat gtt tct gtt gga aca tca aca 674 Lys Leu Tyr Gln Asn Pro Thr Thr Tyr Val Ser Val Gly Thr Ser Thr 205 210 215 220 ctg aac cag aga tcg gtc cca gaa ata gct acc agg ccc aaa gta aat 722 Leu Asn Gln Arg Ser Val Pro Glu Ile Ala Thr Arg Pro Lys Val Asn 225 230 235 ggg caa agt gga aga ata gag ttt ttc tgg aca atc tta aag cca aat 770 Gly Gln Ser Gly Arg Ile Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn 240 245 250 gat gcc atc aat ttc gag agt aat gga aat ttt att gct cca gaa tat 818 Asp Ala Ile Asn Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr 255 260 265 gca tac aaa att gcc aag aaa gga gac tca gca atc atg aaa agt gga 866 Ala Tyr Lys Ile Ala Lys Lys Gly Asp Ser Ala Ile Met Lys Ser Gly 270 275 280 ttg gag tat ggt aac tgc aac acc aag tgt caa act cca atg ggt gca 914 Leu Glu Tyr Gly Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala 285 290 295 300 ata aac tcc agc atg cca ttt cac aac ata cac cct ctc acc att ggg 962 Ile Asn Ser Ser Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly 305 310 315 gaa tgc ccc aga tac gtg aag tca gat aga tta gtc ctt gca aca ggg 1010 Glu Cys Pro Arg Tyr Val Lys Ser Asp Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly 320 325 330 ctc agg aat gtc cct caa aga gaa aca aga gga cta ttt ggg gcc ata 1058 Leu Arg Asn Val Pro Gln Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile 335 340 345 gca ggc ttc ata gaa gga ggg tgg caa gga atg gta gac ggt tgg tat 1106 Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr 350 355 360 gga tac cac cat agc aac gag caa ggg agt gga tac gct gca gac aaa 1154 Gly Tyr His His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys 365 370 375 380 gag tcc act caa aag gca ata gat gga atc act aat aag gtc aac tca 1202 Glu Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser 385 390 395 atc att gac aaa atg aac act cag ttt gag gcc gtt gga aag gaa ttt 1250 Ile Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Lys Glu Phe 400 405 410 aat aac tta gaa agg agg ata gag aat ttg aac aag aaa atg gaa gac 1298 Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp 415 420 425 gga ttc cta gat gtc tgg act tat aat gct gaa ctt ctg gtt ctc atg 1346 Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met 430 435 440 gaa aat gag aga acc cta gac ttt cat gac tca aat gtc aag aac ctt 1394 Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu 445 450 455 460 tac gac aag gtt cga cta cag ctt agg gat aat gca aag gag ctg ggt 1442 Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly 465 470 475 aat ggt tgt ttc gag ttc tat cac aaa tgt gat gat gaa tgt atg gaa 1490 Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asp Glu Cys Met Glu 480 485 490 agt gta aga aac gga acg tat gac tac ccg cag tat tca gaa gag gca 1538 Ser Val Arg Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala 495 500 505 aga cta aac aga gag gaa ata agt gga gta aaa ttg gaa tca ata gga 1586 Arg Leu Asn Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Ile Gly 510 515 520 act tac caa ata ttg tca att tat tca aca gtg gcg agt tcc tta gca 1634 Thr Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala 525 530 535 540 ctg gca atc atg gta gct ggt cta tct ttc tgg atg tgc tcc aat gga 1682 Leu Ala Ile Met Val Ala Gly Leu Ser Phe Trp Met Cys Ser Asn Gly 545 550 555 tca ttg caa tgc aga att tgc att taa acttgtgagt tcagattgta gtt 1732 Ser Leu Gln Cys Arg Ile Cys Ile 560 <210> 2 <211> 564 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 2 Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Phe Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser 1 5 10 15 Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val 20 25 30 Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile 35 40 45 Leu Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Ser Leu Asn Gly Val Lys 50 55 60 Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn 65 70 75 80 Pro Met Cys Asp Glu Phe Leu Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val 85 90 95 Glu Lys Asp Ser Pro Ile Asn Gly Leu Cys Tyr Pro Gly Asp Phe Asn 100 105 110 Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Ser Thr Asn His Phe Glu 115 120 125 Lys Ile Gln Ile Ile Pro Arg Ser Ser Trp Ser Asp His Asp Ala Ser 130 135 140 Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Asn Gly Arg Ser Ser Phe Phe 145 150 155 160 Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Asn Ala Tyr Pro Thr Ile 165 170 175 Lys Arg Asn Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Val Leu Trp 180 185 190 Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Thr Glu Gln Thr Lys Leu Tyr Gln 195 200 205 Asn Pro Thr Thr Tyr Val Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg 210 215 220 Ser Val Pro Glu Ile Ala Thr Arg Pro Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly 225 230 235 240 Arg Ile Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Asn 245 250 255 Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr Lys Ile 260 265 270 Ala Lys Lys Gly Asp Ser Ala Ile Met Lys Ser Gly Leu Glu Tyr Gly 275 280 285 Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser 290 295 300 Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Arg 305 310 315 320 Tyr Val Lys Ser Asp Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val 325 330 335 Pro Gln Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile 340 345 350 Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His 355 360 365 Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln 370 375 380 Lys Ala Ile Asp Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile Ile Asp Lys 385 390 395 400 Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn Asn Leu Glu 405 410 415 Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp 420 425 430 Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg 435 440 445 Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val 450 455 460 Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe 465 470 475 480 Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asp Glu Cys Met Glu Ser Val Arg Asn 485 490 495 Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala Arg Leu Asn Arg 500 505 510 Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Ile Gly Thr Tyr Gln Ile 515 520 525 Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala Leu Ala Ile Met 530 535 540 Val Ala Gly Leu Ser Phe Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser Leu Gln Cys 545 550 555 560 Arg Ile Cys Ile <210> 3 <211> 1761 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (24)..(1718) <223> <400> 3 tagcaggggt ataatctgtc aag atg gag aaa ata gtg ctt ctt ctt gca ata 53 Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Ile 1 5 10 gtc agt ctt gtt aaa agt gac cag att tgc att ggt tac cat gca aat 101 Val Ser Leu Val Lys Ser Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn 15 20 25 aac tcg aca gag cag gtt gac aca ata atg gaa aag aat gtt act gtt 149 Asn Ser Thr Glu Gln Val Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val 30 35 40 aca cat gct caa gac ata ttg gaa aag aca cac aac ggg aag ctc tgc 197 Thr His Ala Gln Asp Ile Leu Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys 45 50 55 agt cta aat gga gtg aaa cct ctc att ttg agg gat tgt agt gta gct 245 Ser Leu Asn Gly Val Lys Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala 60 65 70 gga tgg ctc ctc gga aac cct atg tgt gac gaa ttc ctc aat gtg ccg 293 Gly Trp Leu Leu Gly Asn Pro Met Cys Asp Glu Phe Leu Asn Val Pro 75 80 85 90 gaa tgg tct tac ata gtg gag aag gac aat cca gtc aat ggc ctc tgc 341 Glu Trp Ser Tyr Ile Val Glu Lys Asp Asn Pro Val Asn Gly Leu Cys 95 100 105 tac cca gga gat ttc aac gac tat gaa gaa ctg aaa cac cta ttg agc 389 Tyr Pro Gly Asp Phe Asn Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser 110 115 120 agc aca aac cat ttt gag aaa atc cga atc atc ccc aga agc tct tgg 437 Ser Thr Asn His Phe Glu Lys Ile Arg Ile Ile Pro Arg Ser Ser Trp 125 130 135 tcc aat cat gat gcc tca tca gga gtg agc tct gca tgt cca tat aat 485 Ser Asn His Asp Ala Ser Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Asn 140 145 150 ggg agg tcc tcc ttt ttc aga aat gtg gta tgg ctt atc aaa aag aac 533 Gly Arg Ser Ser Phe Phe Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn 155 160 165 170 aat gca tac cca aca ata aag agg agt tac aat aac acc aac caa gaa 581 Asn Ala Tyr Pro Thr Ile Lys Arg Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu 175 180 185 gat ctt ttg ata ctg tgg ggg att cac cat cct aat gat gcg gca gag 629 Asp Leu Leu Ile Leu Trp Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu 190 195 200 cag aca aag ctc tat caa aac cca act acc tac gtt tcc gtt gga aca 677 Gln Thr Lys Leu Tyr Gln Asn Pro Thr Thr Tyr Val Ser Val Gly Thr 205 210 215 tca aca ctg aac cag aga tcg gtc cca gaa ata gct acc agg ccc aaa 725 Ser Thr Leu Asn Gln Arg Ser Val Pro Glu Ile Ala Thr Arg Pro Lys 220 225 230 gtg aac ggg caa agt gga aga atg gag ttc ttc tgg aca att tta aag 773 Val Asn Gly Gln Ser Gly Arg Met Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys 235 240 245 250 ccg aat gat gcc atc aat ttt gag agt aat gga aat ttc att gct cca 821 Pro Asn Asp Ala Ile Asn Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro 255 260 265 gaa tat gca tac aaa att gtt aaa aaa gga ggc tca gca atc atg aaa 869 Glu Tyr Ala Tyr Lys Ile Val Lys Lys Gly Gly Ser Ala Ile Met Lys 270 275 280 agt gga ttg gaa tat ggt aac tgc aac acc aag tgt caa act cca atg 917 Ser Gly Leu Glu Tyr Gly Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met 285 290 295 ggt gcg ata aac tct agt atg cca ttc cat aac ata cac cct ctc acc 965 Gly Ala Ile Asn Ser Ser Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr 300 305 310 att gga gaa tgc ccc aaa tat gtg aaa tca ggt aga tta gtc ctt gca 1013 Ile Gly Glu Cys Pro Lys Tyr Val Lys Ser Gly Arg Leu Val Leu Ala 315 320 325 330 act gga ctc aga aat gtc cct caa aga gaa aca aga gga cta ttt ggg 1061 Thr Gly Leu Arg Asn Val Pro Gln Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly 335 340 345 gct ata gca ggc ttt ata gaa gga gga tgg caa gga atg gta gac ggt 1109 Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly 350 355 360 tgg tat ggg tac cac cat agc aac gag cag ggg agt gga tac gct gca 1157 Trp Tyr Gly Tyr His His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala 365 370 375 gac aaa gaa tcc act caa aag gca ata gat gga atc act aat aag gtc 1205 Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Ile Thr Asn Lys Val 380 385 390 aac tca atc att gac aaa atg aac act cag ttt gag gcc gtt gga aag 1253 Asn Ser Ile Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Lys 395 400 405 410 gaa ttt aat aac ttg gaa agg agg ata gag aat ttg aat aag aaa atg 1301 Glu Phe Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met 415 420 425 gaa gac gga ttt cta gat gtc tgg act tat aat gct gaa ctt ttg gtt 1349 Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val 430 435 440 cta atg gaa aat gag aga acc cta gac ttt cat gac tca aat gtc aag 1397 Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys 445 450 455 aac ctt tat gac aag gtt cga cta cag ctt agg gat aat gca aag gag 1445 Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu 460 465 470 ctg ggt aat ggt tgt ttc gag ttc tac cat aaa tgt gat aat gaa tgt 1493 Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys 475 480 485 490 atg gaa agt gta aaa aac ggg acg tat gac tac ccg cag tat tca gaa 1541 Met Glu Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu 495 500 505 gag gca aga cta aac aga gag gaa ata agt ggg gtg aaa ttg gaa tca 1589 Glu Ala Arg Leu Asn Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser 510 515 520 atg gga att tac caa ata ctg tca att tat tca aca gtg gcg agt tcc 1637 Met Gly Ile Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser 525 530 535 cta gca ctg gca atc atg ata gct ggt cta tct ttc tgg atg tgc tcc 1685 Leu Ala Leu Ala Ile Met Ile Ala Gly Leu Ser Phe Trp Met Cys Ser 540 545 550 aat gga tca ttg cag tgc aga att tgc att taa atctgtgagt tcagattgta 1738 Asn Gly Ser Leu Gln Cys Arg Ile Cys Ile 555 560 gttaaaaaca cccttgtttc tac 1761 <210> 4 <211> 564 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 4 Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser 1 5 10 15 Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val 20 25 30 Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile 35 40 45 Leu Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Ser Leu Asn Gly Val Lys 50 55 60 Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn 65 70 75 80 Pro Met Cys Asp Glu Phe Leu Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val 85 90 95 Glu Lys Asp Asn Pro Val Asn Gly Leu Cys Tyr Pro Gly Asp Phe Asn 100 105 110 Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Ser Thr Asn His Phe Glu 115 120 125 Lys Ile Arg Ile Ile Pro Arg Ser Ser Trp Ser Asn His Asp Ala Ser 130 135 140 Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Asn Gly Arg Ser Ser Phe Phe 145 150 155 160 Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Asn Ala Tyr Pro Thr Ile 165 170 175 Lys Arg Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Ile Leu Trp 180 185 190 Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Lys Leu Tyr Gln 195 200 205 Asn Pro Thr Thr Tyr Val Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg 210 215 220 Ser Val Pro Glu Ile Ala Thr Arg Pro Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly 225 230 235 240 Arg Met Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Asn 245 250 255 Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr Lys Ile 260 265 270 Val Lys Lys Gly Gly Ser Ala Ile Met Lys Ser Gly Leu Glu Tyr Gly 275 280 285 Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser 290 295 300 Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys 305 310 315 320 Tyr Val Lys Ser Gly Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val 325 330 335 Pro Gln Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile 340 345 350 Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His 355 360 365 Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln 370 375 380 Lys Ala Ile Asp Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile Ile Asp Lys 385 390 395 400 Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn Asn Leu Glu 405 410 415 Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp 420 425 430 Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg 435 440 445 Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val 450 455 460 Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe 465 470 475 480 Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu Ser Val Lys Asn 485 490 495 Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala Arg Leu Asn Arg 500 505 510 Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Met Gly Ile Tyr Gln Ile 515 520 525 Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala Leu Ala Ile Met 530 535 540 Ile Ala Gly Leu Ser Phe Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser Leu Gln Cys 545 550 555 560 Arg Ile Cys Ile <210> 5 <211> 1015 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (2)..(1015) <223> <400> 5 c cta ctg gtc ctg tta tgt gca ctt gca gct gca gat gca gac aca ata 49 Leu Leu Val Leu Leu Cys Ala Leu Ala Ala Ala Asp Ala Asp Thr Ile 1 5 10 15 tgt ata ggc tac cat gcg aac aat tca acc gac act gtt gac aca gta 97 Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr Val Asp Thr Val 20 25 30 ctc gag aag aat gtg aca gtg aca cac tct gtt aac ctg ctc gaa gac 145 Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn Leu Leu Glu Asp 35 40 45 agc cac aac gga aaa cta tgt aga tta aaa gga ata gcc cca cta caa 193 Ser His Asn Gly Lys Leu Cys Arg Leu Lys Gly Ile Ala Pro Leu Gln 50 55 60 ttg ggg aaa tgt aac atc gcc gga tgg ctc ttg gga aac cca gaa tgc 241 Leu Gly Lys Cys Asn Ile Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn Pro Glu Cys 65 70 75 80 gac cca ctg ctt cca gtg aga tca tgg tcc tac att gta gaa aca cca 289 Asp Pro Leu Leu Pro Val Arg Ser Trp Ser Tyr Ile Val Glu Thr Pro 85 90 95 aac tct gag aat gga ata tgt tat cca gga gat ttc atc gac tat gag 337 Asn Ser Glu Asn Gly Ile Cys Tyr Pro Gly Asp Phe Ile Asp Tyr Glu 100 105 110 gag ctg agg gag caa ttg agc tca gtg tca tca ttc gaa aga ttc gaa 385 Glu Leu Arg Glu Gln Leu Ser Ser Val Ser Ser Phe Glu Arg Phe Glu 115 120 125 ata ttt ccc aaa gaa agc tca tgg ccc aac cac aac aca aac gga gta 433 Ile Phe Pro Lys Glu Ser Ser Trp Pro Asn His Asn Thr Asn Gly Val 130 135 140 acg gca gca tgc tcc cat gag ggg aaa agc agt ttt tac aga aat ttg 481 Thr Ala Ala Cys Ser His Glu Gly Lys Ser Ser Phe Tyr Arg Asn Leu 145 150 155 160 cta tgg ctg acg gag aag gag ggc tca tac cca aag ctg aaa aat tct 529 Leu Trp Leu Thr Glu Lys Glu Gly Ser Tyr Pro Lys Leu Lys Asn Ser 165 170 175 tat gtg aac aaa aaa ggg aaa gaa gtc ctt gta ctg tgg ggt att cat 577 Tyr Val Asn Lys Lys Gly Lys Glu Val Leu Val Leu Trp Gly Ile His 180 185 190 cac ccg cct aac agt aag gaa caa cag aat ctc tat cag aat gaa aat 625 His Pro Pro Asn Ser Lys Glu Gln Gln Asn Leu Tyr Gln Asn Glu Asn 195 200 205 gct tat gtc tct gta gtg act tca aat tat aac agg aga ttt acc ccg 673 Ala Tyr Val Ser Val Val Thr Ser Asn Tyr Asn Arg Arg Phe Thr Pro 210 215 220 gaa ata gca gaa aga ccc aaa gta aga gat caa gct ggg agg atg aac 721 Glu Ile Ala Glu Arg Pro Lys Val Arg Asp Gln Ala Gly Arg Met Asn 225 230 235 240 tat tac tgg acc ttg cta aaa ccc gga gac aca ata ata ttt gag gca 769 Tyr Tyr Trp Thr Leu Leu Lys Pro Gly Asp Thr Ile Ile Phe Glu Ala 245 250 255 aat gga aat cta ata gca cca atg tat gct ttc gca ctg agt aga ggc 817 Asn Gly Asn Leu Ile Ala Pro Met Tyr Ala Phe Ala Leu Ser Arg Gly 260 265 270 ttt ggg tcc ggc atc atc acc tca aac gca tca atg cat gag tgt aac 865 Phe Gly Ser Gly Ile Ile Thr Ser Asn Ala Ser Met His Glu Cys Asn 275 280 285 acg aag tgt caa aca ccc ctg gga gct ata aac agc agt ctc cct tac 913 Thr Lys Cys Gln Thr Pro Leu Gly Ala Ile Asn Ser Ser Leu Pro Tyr 290 295 300 cag aat ata cac cca gtc aca ata gga gag tgc cca aaa tac gtc agg 961 Gln Asn Ile His Pro Val Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys Tyr Val Arg 305 310 315 320 agt gcc aaa ttg agg atg gtt aca gga cta agg aac att ccg tcc att 1009 Ser Ala Lys Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser Ile 325 330 335 caa tcc 1015 Gln Ser <210> 6 <211> 338 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 6 Leu Leu Val Leu Leu Cys Ala Leu Ala Ala Ala Asp Ala Asp Thr Ile 1 5 10 15 Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr Val Asp Thr Val 20 25 30 Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn Leu Leu Glu Asp 35 40 45 Ser His Asn Gly Lys Leu Cys Arg Leu Lys Gly Ile Ala Pro Leu Gln 50 55 60 Leu Gly Lys Cys Asn Ile Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn Pro Glu Cys 65 70 75 80 Asp Pro Leu Leu Pro Val Arg Ser Trp Ser Tyr Ile Val Glu Thr Pro 85 90 95 Asn Ser Glu Asn Gly Ile Cys Tyr Pro Gly Asp Phe Ile Asp Tyr Glu 100 105 110 Glu Leu Arg Glu Gln Leu Ser Ser Val Ser Ser Phe Glu Arg Phe Glu 115 120 125 Ile Phe Pro Lys Glu Ser Ser Trp Pro Asn His Asn Thr Asn Gly Val 130 135 140 Thr Ala Ala Cys Ser His Glu Gly Lys Ser Ser Phe Tyr Arg Asn Leu 145 150 155 160 Leu Trp Leu Thr Glu Lys Glu Gly Ser Tyr Pro Lys Leu Lys Asn Ser 165 170 175 Tyr Val Asn Lys Lys Gly Lys Glu Val Leu Val Leu Trp Gly Ile His 180 185 190 His Pro Pro Asn Ser Lys Glu Gln Gln Asn Leu Tyr Gln Asn Glu Asn 195 200 205 Ala Tyr Val Ser Val Val Thr Ser Asn Tyr Asn Arg Arg Phe Thr Pro 210 215 220 Glu Ile Ala Glu Arg Pro Lys Val Arg Asp Gln Ala Gly Arg Met Asn 225 230 235 240 Tyr Tyr Trp Thr Leu Leu Lys Pro Gly Asp Thr Ile Ile Phe Glu Ala 245 250 255 Asn Gly Asn Leu Ile Ala Pro Met Tyr Ala Phe Ala Leu Ser Arg Gly 260 265 270 Phe Gly Ser Gly Ile Ile Thr Ser Asn Ala Ser Met His Glu Cys Asn 275 280 285 Thr Lys Cys Gln Thr Pro Leu Gly Ala Ile Asn Ser Ser Leu Pro Tyr 290 295 300 Gln Asn Ile His Pro Val Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys Tyr Val Arg 305 310 315 320 Ser Ala Lys Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser Ile 325 330 335 Gln Ser <210> 7 <211> 1773 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (44)..(1732) <223> <400> 7 agcaaaagca ggggttatac catagacaac caaaagcaaa aca atg gcc atc att 55 Met Ala Ile Ile 1 tat ctc att ctc ctg ttc aca gca gtg aga ggg gac cag ata tgc att 103 Tyr Leu Ile Leu Leu Phe Thr Ala Val Arg Gly Asp Gln Ile Cys Ile 5 10 15 20 gga tac cat gcc aat aat tcc aca gag aag gtc gac aca att cta gag 151 Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Lys Val Asp Thr Ile Leu Glu 25 30 35 cgg aac gtc act gtg act cat gcc aag gac att ctt gag aag acc cat 199 Arg Asn Val Thr Val Thr His Ala Lys Asp Ile Leu Glu Lys Thr His 40 45 50 aac gga aag tta tgc aaa cta aac gga atc cct cca ctt gaa cta ggg 247 Asn Gly Lys Leu Cys Lys Leu Asn Gly Ile Pro Pro Leu Glu Leu Gly 55 60 65 gac tgt agc att gcc gga tgg ctc ctt gga aat cca gaa tgt gat agg 295 Asp Cys Ser Ile Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn Pro Glu Cys Asp Arg 70 75 80 ctt cta agt gtg cca gaa tgg tcc tat ata atg gag aaa gaa aac ccg 343 Leu Leu Ser Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Met Glu Lys Glu Asn Pro 85 90 95 100 aga gac ggt ttg tgt tat cca ggc agc ttc aat gat tat gaa gaa ttg 391 Arg Asp Gly Leu Cys Tyr Pro Gly Ser Phe Asn Asp Tyr Glu Glu Leu 105 110 115 aaa cat ctc ctc agc agc gtg aaa cat ttc gag aaa gta aag att ctg 439 Lys His Leu Leu Ser Ser Val Lys His Phe Glu Lys Val Lys Ile Leu 120 125 130 ccc aaa gat aga tgg aca cag cat aca aca act gga ggt tca cgg gcc 487 Pro Lys Asp Arg Trp Thr Gln His Thr Thr Thr Gly Gly Ser Arg Ala 135 140 145 tgc gcg gtg tct ggt aat cca tca ttc ttc agg aac atg gtc tgg ctg 535 Cys Ala Val Ser Gly Asn Pro Ser Phe Phe Arg Asn Met Val Trp Leu 150 155 160 aca gag aaa gga tca aat tat ccg gtt gcc aaa gga tcg tac aac aat 583 Thr Glu Lys Gly Ser Asn Tyr Pro Val Ala Lys Gly Ser Tyr Asn Asn 165 170 175 180 aca agc gga gaa caa atg cta ata att tgg ggg gtg cac cat ccc aat 631 Thr Ser Gly Glu Gln Met Leu Ile Ile Trp Gly Val His His Pro Asn 185 190 195 gat gag aaa gaa caa aga aca ttg tac cag aat gtg gga acc tat gtt 679 Asp Glu Lys Glu Gln Arg Thr Leu Tyr Gln Asn Val Gly Thr Tyr Val 200 205 210 tcc gta ggc aca tca aca ttg aac aaa agg tca acc cca gac ata gca 727 Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Lys Arg Ser Thr Pro Asp Ile Ala 215 220 225 aca agg cct aaa gtg aat gga cta gga agt aga atg gaa ttc tct tgg 775 Thr Arg Pro Lys Val Asn Gly Leu Gly Ser Arg Met Glu Phe Ser Trp 230 235 240 acc cta ttg gat atg tgg gac acc ata aat ttt gag agt act ggt aat 823 Thr Leu Leu Asp Met Trp Asp Thr Ile Asn Phe Glu Ser Thr Gly Asn 245 250 255 260 cta att gca cca gag tat gga ttc aaa ata tcg aaa aga ggt agt tca 871 Leu Ile Ala Pro Glu Tyr Gly Phe Lys Ile Ser Lys Arg Gly Ser Ser 265 270 275 ggg atc atg aaa aca gaa gga aca ctt gag aac tgt gag acc aaa tgc 919 Gly Ile Met Lys Thr Glu Gly Thr Leu Glu Asn Cys Glu Thr Lys Cys 280 285 290 caa act cct ttg gga gca ata aat aca aca ttg cct ttt cac aat gtc 967 Gln Thr Pro Leu Gly Ala Ile Asn Thr Thr Leu Pro Phe His Asn Val 295 300 305 cac cca ctg aca ata ggt gag tgc ccc aaa tat gta aaa tcg gag aag 1015 His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys Tyr Val Lys Ser Glu Lys 310 315 320 ttg gtc tta gca aca gga cta agg aat gtt ccc cag att gaa tca aga 1063 Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val Pro Gln Ile Glu Ser Arg 325 330 335 340 gga ttg ttt ggg gca ata gct ggt ttt ata gaa gga gga tgg caa gga 1111 Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly 345 350 355 atg att gat ggt tgg tat gga tac cat cac agc aat gac cag gga tca 1159 Met Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Ser Asn Asp Gln Gly Ser 360 365 370 ggg tat gca gca gac aaa gaa tcc act caa aag gca ttt gat gga atc 1207 Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala Phe Asp Gly Ile 375 380 385 acc aac aag gta aat tct gtg att gaa aag atg aac acc caa ttt gaa 1255 Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu 390 395 400 gct gtt ggg aaa gaa ttc agt aac tta gag aga aga ctg gag aac ttg 1303 Ala Val Gly Lys Glu Phe Ser Asn Leu Glu Arg Arg Leu Glu Asn Leu 405 410 415 420 aac aaa aag atg gaa gac ggg ttt cta gat gtg tgg aca tac aat gct 1351 Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala 425 430 435 gag ctt cta gtt ctg atg gaa aat gag agg aca ctt gac ttt cat gat 1399 Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp 440 445 450 tct aat gtc aag aat ctg tat gat aaa gtc aga atg cag ctg aga gac 1447 Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Met Gln Leu Arg Asp 455 460 465 aac gtc aaa gaa cta gga aat gga tgt ttt gaa ttt tat cac aaa tgt 1495 Asn Val Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys 470 475 480 gat gat gaa tgc atg aat agt gtg aaa aac ggg acg tat gat tat ccc 1543 Asp Asp Glu Cys Met Asn Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro 485 490 495 500 aag tat gaa gaa gag tct aaa cta aat aga aat gaa atc aaa ggg gta 1591 Lys Tyr Glu Glu Glu Ser Lys Leu Asn Arg Asn Glu Ile Lys Gly Val 505 510 515 aaa ttg agc agc atg ggg gtt tat caa atc ctt gcc att tat gct aca 1639 Lys Leu Ser Ser Met Gly Val Tyr Gln Ile Leu Ala Ile Tyr Ala Thr 520 525 530 gta gca ggt tct ctg tca ctg gca atc atg atg gct ggg atc tct ttc 1687 Val Ala Gly Ser Leu Ser Leu Ala Ile Met Met Ala Gly Ile Ser Phe 535 540 545 tgg atg tgc tcc aac ggg tct ctg cag tgc agg atc tgc ata tga 1732 Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser Leu Gln Cys Arg Ile Cys Ile 550 555 560 ttataagtca ttttataatt aaaaacactc ttgtttctac t 1773 <210> 8 <211> 562 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 8 Met Ala Ile Ile Tyr Leu Ile Leu Leu Phe Thr Ala Val Arg Gly Asp 1 5 10 15 Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Lys Val Asp 20 25 30 Thr Ile Leu Glu Arg Asn Val Thr Val Thr His Ala Lys Asp Ile Leu 35 40 45 Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Lys Leu Asn Gly Ile Pro Pro 50 55 60 Leu Glu Leu Gly Asp Cys Ser Ile Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn Pro 65 70 75 80 Glu Cys Asp Arg Leu Leu Ser Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Met Glu 85 90 95 Lys Glu Asn Pro Arg Asp Gly Leu Cys Tyr Pro Gly Ser Phe Asn Asp 100 105 110 Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Ser Val Lys His Phe Glu Lys 115 120 125 Val Lys Ile Leu Pro Lys Asp Arg Trp Thr Gln His Thr Thr Thr Gly 130 135 140 Gly Ser Arg Ala Cys Ala Val Ser Gly Asn Pro Ser Phe Phe Arg Asn 145 150 155 160 Met Val Trp Leu Thr Glu Lys Gly Ser Asn Tyr Pro Val Ala Lys Gly 165 170 175 Ser Tyr Asn Asn Thr Ser Gly Glu Gln Met Leu Ile Ile Trp Gly Val 180 185 190 His His Pro Asn Asp Glu Lys Glu Gln Arg Thr Leu Tyr Gln Asn Val 195 200 205 Gly Thr Tyr Val Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Lys Arg Ser Thr 210 215 220 Pro Asp Ile Ala Thr Arg Pro Lys Val Asn Gly Leu Gly Ser Arg Met 225 230 235 240 Glu Phe Ser Trp Thr Leu Leu Asp Met Trp Asp Thr Ile Asn Phe Glu 245 250 255 Ser Thr Gly Asn Leu Ile Ala Pro Glu Tyr Gly Phe Lys Ile Ser Lys 260 265 270 Arg Gly Ser Ser Gly Ile Met Lys Thr Glu Gly Thr Leu Glu Asn Cys 275 280 285 Glu Thr Lys Cys Gln Thr Pro Leu Gly Ala Ile Asn Thr Thr Leu Pro 290 295 300 Phe His Asn Val His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys Tyr Val 305 310 315 320 Lys Ser Glu Lys Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val Pro Gln 325 330 335 Ile Glu Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly 340 345 350 Gly Trp Gln Gly Met Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Ser Asn 355 360 365 Asp Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala 370 375 380 Phe Asp Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn 385 390 395 400 Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Lys Glu Phe Ser Asn Leu Glu Arg Arg 405 410 415 Leu Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp 420 425 430 Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr Leu 435 440 445 Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Met 450 455 460 Gln Leu Arg Asp Asn Val Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe 465 470 475 480 Tyr His Lys Cys Asp Asp Glu Cys Met Asn Ser Val Lys Asn Gly Thr 485 490 495 Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Glu Glu Glu Ser Lys Leu Asn Arg Asn Glu 500 505 510 Ile Lys Gly Val Lys Leu Ser Ser Met Gly Val Tyr Gln Ile Leu Ala 515 520 525 Ile Tyr Ala Thr Val Ala Gly Ser Leu Ser Leu Ala Ile Met Met Ala 530 535 540 Gly Ile Ser Phe Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser Leu Gln Cys Arg Ile 545 550 555 560 Cys Ile <210> 9 <211> 1765 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (30)..(1730) <223> <400> 9 agcaaaagca ggggatactt tcattaatc atg aag acc gtt att gct tta agc 53 Met Lys Thr Val Ile Ala Leu Ser 1 5 tac att ctc tgt ctg act ttc gga cag gac ctc cca ggg aat gac aac 101 Tyr Ile Leu Cys Leu Thr Phe Gly Gln Asp Leu Pro Gly Asn Asp Asn 10 15 20 agt aca gca aca ctg tgc ctg ggg cac cat gca gtg ccg aat ggg aca 149 Ser Thr Ala Thr Leu Cys Leu Gly His His Ala Val Pro Asn Gly Thr 25 30 35 40 ata gtg aag aca atc aca gat gat cag att gag gtg act aat gct act 197 Ile Val Lys Thr Ile Thr Asp Asp Gln Ile Glu Val Thr Asn Ala Thr 45 50 55 gag cta gtt caa agc tcc tca aca ggg aaa ata tgc aac aat cct cac 245 Glu Leu Val Gln Ser Ser Ser Thr Gly Lys Ile Cys Asn Asn Pro His 60 65 70 agg atc ctt gat gga agg gcc tgc aca tta ata gat gct cta ctg ggg 293 Arg Ile Leu Asp Gly Arg Ala Cys Thr Leu Ile Asp Ala Leu Leu Gly 75 80 85 gat cct cat tgc gat gtc ttt caa aat gag acg tgg gac ctt ttt gtg 341 Asp Pro His Cys Asp Val Phe Gln Asn Glu Thr Trp Asp Leu Phe Val 90 95 100 gag cga agc aat gct ttc agc aac tgt tac cct tat gat ata cca gat 389 Glu Arg Ser Asn Ala Phe Ser Asn Cys Tyr Pro Tyr Asp Ile Pro Asp 105 110 115 120 tat gca tcc ctt agg tcc cta gtt gcc tca tca ggc aca ttg gag ttc 437 Tyr Ala Ser Leu Arg Ser Leu Val Ala Ser Ser Gly Thr Leu Glu Phe 125 130 135 atc act gag ggt ttc acc tgg aca gga gta act cag aat gga ggg agc 485 Ile Thr Glu Gly Phe Thr Trp Thr Gly Val Thr Gln Asn Gly Gly Ser 140 145 150 agt gct tgc aaa aga gga cct gct aac ggt ttc ttc agt aga ctg aac 533 Ser Ala Cys Lys Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Phe Ser Arg Leu Asn 155 160 165 tgg ttg act aaa tca gaa agc gca tac cca gtg ctg aac gtg act atg 581 Trp Leu Thr Lys Ser Glu Ser Ala Tyr Pro Val Leu Asn Val Thr Met 170 175 180 cca aat aat gac aat ttt gac aaa cta tac atc tgg gga gta cac cac 629 Pro Asn Asn Asp Asn Phe Asp Lys Leu Tyr Ile Trp Gly Val His His 185 190 195 200 ccg agc aca aat caa gaa caa acc aac ctg tat gtt caa gca tca ggg 677 Pro Ser Thr Asn Gln Glu Gln Thr Asn Leu Tyr Val Gln Ala Ser Gly 205 210 215 aga gtc aca gtc tct acc agg aga agt cag cag act ata atc ccg aat 725 Arg Val Thr Val Ser Thr Arg Arg Ser Gln Gln Thr Ile Ile Pro Asn 220 225 230 att gga tct aga ccc tgg gta agg ggc cag cct ggc aga ata agc atc 773 Ile Gly Ser Arg Pro Trp Val Arg Gly Gln Pro Gly Arg Ile Ser Ile 235 240 245 tat tgg aca ata gtt aaa cct ggg gac gtg ctg gta atc aac agt aat 821 Tyr Trp Thr Ile Val Lys Pro Gly Asp Val Leu Val Ile Asn Ser Asn 250 255 260 gga aac cta atc gct cct cgg ggt tac ttc aag atg cgc act ggg aaa 869 Gly Asn Leu Ile Ala Pro Arg Gly Tyr Phe Lys Met Arg Thr Gly Lys 265 270 275 280 agc tca ata atg agg tca gat gca cct att gac acc tgt atc tct gag 917 Ser Ser Ile Met Arg Ser Asp Ala Pro Ile Asp Thr Cys Ile Ser Glu 285 290 295 tgc atc act cca aat gga agc att ccc aat gac aag ccc ttc caa aat 965 Cys Ile Thr Pro Asn Gly Ser Ile Pro Asn Asp Lys Pro Phe Gln Asn 300 305 310 gta aac aag atc aca tac gga gca tgt ccc aag tat gtt aag cag aac 1013 Val Asn Lys Ile Thr Tyr Gly Ala Cys Pro Lys Tyr Val Lys Gln Asn 315 320 325 acc ctg aag ttg gca aca ggg atg cgg aat gta cca gag aaa caa acc 1061 Thr Leu Lys Leu Ala Thr Gly Met Arg Asn Val Pro Glu Lys Gln Thr 330 335 340 aga ggc cta ttc ggt gca ata gca ggt ttt ata gaa aat gga tgg gag 1109 Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Asn Gly Trp Glu 345 350 355 360 gga atg ata gat ggc tgg tat ggc ttc agg cat caa aat tct gag ggt 1157 Gly Met Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Phe Arg His Gln Asn Ser Glu Gly 365 370 375 aca gga caa gca gca gac ctt aaa agc act cag gca gcc att gac caa 1205 Thr Gly Gln Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Ala Ala Ile Asp Gln 380 385 390 atc aat agg aaa ttg aac aga gtg att gaa aag acg aat gag aag ttc 1253 Ile Asn Arg Lys Leu Asn Arg Val Ile Glu Lys Thr Asn Glu Lys Phe 395 400 405 cat caa atc gaa aag gaa ttc tcc gaa gta gaa ggg agg att cag gac 1301 His Gln Ile Glu Lys Glu Phe Ser Glu Val Glu Gly Arg Ile Gln Asp 410 415 420 ctt gag aaa tac gtt gaa gac acg aaa ata gat ctc tgg tct tac aat 1349 Leu Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr Lys Ile Asp Leu Trp Ser Tyr Asn 425 430 435 440 gcg gaa ctt ctt gtt gcc cta gag aat cag cat aca atc gat ctg gct 1397 Ala Glu Leu Leu Val Ala Leu Glu Asn Gln His Thr Ile Asp Leu Ala 445 450 455 gat tca gaa atg aac aaa tta ttt gaa aaa acc agg agg caa ctg agg 1445 Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Phe Glu Lys Thr Arg Arg Gln Leu Arg 460 465 470 gaa aat gct gaa gac atg ggc aat ggt tgt ttc aag ata tac cac aaa 1493 Glu Asn Ala Glu Asp Met Gly Asn Gly Cys Phe Lys Ile Tyr His Lys 475 480 485 tgt gac aat gct tgc ata gag tca att aga aac ggg act tat gat cat 1541 Cys Asp Asn Ala Cys Ile Glu Ser Ile Arg Asn Gly Thr Tyr Asp His 490 495 500 gat ata tac aga gac gag gca ttg aac aac cgg ttc cag atc aaa ggt 1589 Asp Ile Tyr Arg Asp Glu Ala Leu Asn Asn Arg Phe Gln Ile Lys Gly 505 510 515 520 gtc gaa cta aaa tct gga tac aaa gac tgg atc ctg tgg att tcc ttt 1637 Val Glu Leu Lys Ser Gly Tyr Lys Asp Trp Ile Leu Trp Ile Ser Phe 525 530 535 gcc ata tca tgc ctt ttg ctt tgt gtt gtt ttg ctg ggt ttc att atg 1685 Ala Ile Ser Cys Leu Leu Leu Cys Val Val Leu Leu Gly Phe Ile Met 540 545 550 tgg gcc tgc cag aga ggc aac att agg tgc aac att tgc att tga 1730 Trp Ala Cys Gln Arg Gly Asn Ile Arg Cys Asn Ile Cys Ile 555 560 565 gtatactaat gattaaaaac acccttgttt ctact 1765 <210> 10 <211> 566 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 10 Met Lys Thr Val Ile Ala Leu Ser Tyr Ile Leu Cys Leu Thr Phe Gly 1 5 10 15 Gln Asp Leu Pro Gly Asn Asp Asn Ser Thr Ala Thr Leu Cys Leu Gly 20 25 30 His His Ala Val Pro Asn Gly Thr Ile Val Lys Thr Ile Thr Asp Asp 35 40 45 Gln Ile Glu Val Thr Asn Ala Thr Glu Leu Val Gln Ser Ser Ser Thr 50 55 60 Gly Lys Ile Cys Asn Asn Pro His Arg Ile Leu Asp Gly Arg Ala Cys 65 70 75 80 Thr Leu Ile Asp Ala Leu Leu Gly Asp Pro His Cys Asp Val Phe Gln 85 90 95 Asn Glu Thr Trp Asp Leu Phe Val Glu Arg Ser Asn Ala Phe Ser Asn 100 105 110 Cys Tyr Pro Tyr Asp Ile Pro Asp Tyr Ala Ser Leu Arg Ser Leu Val 115 120 125 Ala Ser Ser Gly Thr Leu Glu Phe Ile Thr Glu Gly Phe Thr Trp Thr 130 135 140 Gly Val Thr Gln Asn Gly Gly Ser Ser Ala Cys Lys Arg Gly Pro Ala 145 150 155 160 Asn Gly Phe Phe Ser Arg Leu Asn Trp Leu Thr Lys Ser Glu Ser Ala 165 170 175 Tyr Pro Val Leu Asn Val Thr Met Pro Asn Asn Asp Asn Phe Asp Lys 180 185 190 Leu Tyr Ile Trp Gly Val His His Pro Ser Thr Asn Gln Glu Gln Thr 195 200 205 Asn Leu Tyr Val Gln Ala Ser Gly Arg Val Thr Val Ser Thr Arg Arg 210 215 220 Ser Gln Gln Thr Ile Ile Pro Asn Ile Gly Ser Arg Pro Trp Val Arg 225 230 235 240 Gly Gln Pro Gly Arg Ile Ser Ile Tyr Trp Thr Ile Val Lys Pro Gly 245 250 255 Asp Val Leu Val Ile Asn Ser Asn Gly Asn Leu Ile Ala Pro Arg Gly 260 265 270 Tyr Phe Lys Met Arg Thr Gly Lys Ser Ser Ile Met Arg Ser Asp Ala 275 280 285 Pro Ile Asp Thr Cys Ile Ser Glu Cys Ile Thr Pro Asn Gly Ser Ile 290 295 300 Pro Asn Asp Lys Pro Phe Gln Asn Val Asn Lys Ile Thr Tyr Gly Ala 305 310 315 320 Cys Pro Lys Tyr Val Lys Gln Asn Thr Leu Lys Leu Ala Thr Gly Met 325 330 335 Arg Asn Val Pro Glu Lys Gln Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala 340 345 350 Gly Phe Ile Glu Asn Gly Trp Glu Gly Met Ile Asp Gly Trp Tyr Gly 355 360 365 Phe Arg His Gln Asn Ser Glu Gly Thr Gly Gln Ala Ala Asp Leu Lys 370 375 380 Ser Thr Gln Ala Ala Ile Asp Gln Ile Asn Arg Lys Leu Asn Arg Val 385 390 395 400 Ile Glu Lys Thr Asn Glu Lys Phe His Gln Ile Glu Lys Glu Phe Ser 405 410 415 Glu Val Glu Gly Arg Ile Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr 420 425 430 Lys Ile Asp Leu Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Leu Glu 435 440 445 Asn Gln His Thr Ile Asp Leu Ala Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Phe 450 455 460 Glu Lys Thr Arg Arg Gln Leu Arg Glu Asn Ala Glu Asp Met Gly Asn 465 470 475 480 Gly Cys Phe Lys Ile Tyr His Lys Cys Asp Asn Ala Cys Ile Glu Ser 485 490 495 Ile Arg Asn Gly Thr Tyr Asp His Asp Ile Tyr Arg Asp Glu Ala Leu 500 505 510 Asn Asn Arg Phe Gln Ile Lys Gly Val Glu Leu Lys Ser Gly Tyr Lys 515 520 525 Asp Trp Ile Leu Trp Ile Ser Phe Ala Ile Ser Cys Leu Leu Leu Cys 530 535 540 Val Val Leu Leu Gly Phe Ile Met Trp Ala Cys Gln Arg Gly Asn Ile 545 550 555 560 Arg Cys Asn Ile Cys Ile 565 <210> 11 <211> 1704 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (6)..(1700) <223> <400> 11 aaaca atg cta tca att gtg att ttg ttt ctg ctc ata gca gag aac tct 50 Met Leu Ser Ile Val Ile Leu Phe Leu Leu Ile Ala Glu Asn Ser 1 5 10 15 tcc caa aac tac aca gga aac cct gtg ata tgc atg gga cat cat gct 98 Ser Gln Asn Tyr Thr Gly Asn Pro Val Ile Cys Met Gly His His Ala 20 25 30 gtg gcc aat ggg acc atg gta aag acc cta gcc gat gat caa gtg gaa 146 Val Ala Asn Gly Thr Met Val Lys Thr Leu Ala Asp Asp Gln Val Glu 35 40 45 gtg gtc acc gca cag gaa ctg gta gaa tca caa aat ctc ccg gaa cta 194 Val Val Thr Ala Gln Glu Leu Val Glu Ser Gln Asn Leu Pro Glu Leu 50 55 60 tgt ccg agc cct ctg aga cta gtt gac ggc cag acc tgt gat atc atc 242 Cys Pro Ser Pro Leu Arg Leu Val Asp Gly Gln Thr Cys Asp Ile Ile 65 70 75 aat gga gca ttg ggg agc cca ggg tgt gac cat ttg aat ggt gca gaa 290 Asn Gly Ala Leu Gly Ser Pro Gly Cys Asp His Leu Asn Gly Ala Glu 80 85 90 95 tgg gac gtt ttc ata gag agg ccc aat gca gta gac act tgc tat cca 338 Trp Asp Val Phe Ile Glu Arg Pro Asn Ala Val Asp Thr Cys Tyr Pro 100 105 110 ttt gat gtg cca gag tac cag agt ctg aga agc ata ctc gcc aac aat 386 Phe Asp Val Pro Glu Tyr Gln Ser Leu Arg Ser Ile Leu Ala Asn Asn 115 120 125 ggg aaa ttc gaa ttc att gcc gaa gaa ttc caa tgg aac acg gtg aag 434 Gly Lys Phe Glu Phe Ile Ala Glu Glu Phe Gln Trp Asn Thr Val Lys 130 135 140 caa aat gga aaa tcc gga gcc tgc aag agg gca aat gtg aat gat ttc 482 Gln Asn Gly Lys Ser Gly Ala Cys Lys Arg Ala Asn Val Asn Asp Phe 145 150 155 ttt aac agg cta aac tgg ctg gtg aag tca gat ggg aat gcg tac ccc 530 Phe Asn Arg Leu Asn Trp Leu Val Lys Ser Asp Gly Asn Ala Tyr Pro 160 165 170 175 ctt cag aat ttg aca aag ata aac aat ggg gat tat gca agg ctt tac 578 Leu Gln Asn Leu Thr Lys Ile Asn Asn Gly Asp Tyr Ala Arg Leu Tyr 180 185 190 atc tgg gga gtt cat cac cct tcg aca gac aca gag caa acc aac ctg 626 Ile Trp Gly Val His His Pro Ser Thr Asp Thr Glu Gln Thr Asn Leu 195 200 205 tac aag aat aac cct gga gga gtc act gtg tct acc aaa act agt caa 674 Tyr Lys Asn Asn Pro Gly Gly Val Thr Val Ser Thr Lys Thr Ser Gln 210 215 220 aca agt gta gtg cct aac att ggc agc aga ccc ttg gtg aga gga caa 722 Thr Ser Val Val Pro Asn Ile Gly Ser Arg Pro Leu Val Arg Gly Gln 225 230 235 agt ggc aga gta agt ttc tac tgg act att gta gag cct gga gac ttg 770 Ser Gly Arg Val Ser Phe Tyr Trp Thr Ile Val Glu Pro Gly Asp Leu 240 245 250 255 ata gtc ttc aac aca ata ggg aat cta att gcc ccg aga ggg cat tac 818 Ile Val Phe Asn Thr Ile Gly Asn Leu Ile Ala Pro Arg Gly His Tyr 260 265 270 aag tta aac aat cag aag aag agc aca att cta aat act gca att ccc 866 Lys Leu Asn Asn Gln Lys Lys Ser Thr Ile Leu Asn Thr Ala Ile Pro 275 280 285 ata ggc tca tgt gtc agc aaa tgt cac aca gac aaa ggt tct ctc tct 914 Ile Gly Ser Cys Val Ser Lys Cys His Thr Asp Lys Gly Ser Leu Ser 290 295 300 aca act aag ccc ttc caa aat atc tcg agg ata gca gtt gga gac tgc 962 Thr Thr Lys Pro Phe Gln Asn Ile Ser Arg Ile Ala Val Gly Asp Cys 305 310 315 ccc aga tat gtc aaa cag ggc tct cta aaa ctt gca aca ggg atg agg 1010 Pro Arg Tyr Val Lys Gln Gly Ser Leu Lys Leu Ala Thr Gly Met Arg 320 325 330 335 aac att cct gaa aag gca tca aga ggg ctt ttt gga gca ata gct ggg 1058 Asn Ile Pro Glu Lys Ala Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly 340 345 350 ttc ata gag aat ggc tgg caa ggt cta atc gat ggt tgg tat gga ttc 1106 Phe Ile Glu Asn Gly Trp Gln Gly Leu Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Phe 355 360 365 aga cac cag aat gca gaa gga aca gga aca gcg gca gat ctc aaa tcc 1154 Arg His Gln Asn Ala Glu Gly Thr Gly Thr Ala Ala Asp Leu Lys Ser 370 375 380 act cag gca gcc att gat caa atc aat ggg aaa ctt aac cgt ctt att 1202 Thr Gln Ala Ala Ile Asp Gln Ile Asn Gly Lys Leu Asn Arg Leu Ile 385 390 395 gag aag aca aac gat aaa tac cat caa atc gaa aaa gag ttc gag caa 1250 Glu Lys Thr Asn Asp Lys Tyr His Gln Ile Glu Lys Glu Phe Glu Gln 400 405 410 415 gtt gaa gga aga att caa gat ctg gaa aag tat gtt gag gac aca aag 1298 Val Glu Gly Arg Ile Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr Lys 420 425 430 att gat tta tgg tca tat aat gca gag cta tta gtc gct cta gaa aac 1346 Ile Asp Leu Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Leu Glu Asn 435 440 445 caa cac act ata gac gtg act gat tca gaa atg aac aaa ctc ttt gaa 1394 Gln His Thr Ile Asp Val Thr Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Phe Glu 450 455 460 aga gta agg cgt caa ctc aga gag aat gct gaa gac aaa gga aat ggg 1442 Arg Val Arg Arg Gln Leu Arg Glu Asn Ala Glu Asp Lys Gly Asn Gly 465 470 475 tgt ttc gaa ata ttc cac aag tgt gat aac aac tgc att gaa agt att 1490 Cys Phe Glu Ile Phe His Lys Cys Asp Asn Asn Cys Ile Glu Ser Ile 480 485 490 495 cgg aat ggg act tat gat cat gat att tat aga gat gaa gca atc aac 1538 Arg Asn Gly Thr Tyr Asp His Asp Ile Tyr Arg Asp Glu Ala Ile Asn 500 505 510 aat cga ttc caa atc cag gga gtc aaa ttg acc cag gga tat atg gac 1586 Asn Arg Phe Gln Ile Gln Gly Val Lys Leu Thr Gln Gly Tyr Met Asp 515 520 525 atc att ctt tgg att tca ttc tcc ata tca tgc ttt ttg ctc gta gca 1634 Ile Ile Leu Trp Ile Ser Phe Ser Ile Ser Cys Phe Leu Leu Val Ala 530 535 540 cta ctt tta gcc ttc att ttg tgg gct tgt cag aac gga aac atc cgg 1682 Leu Leu Leu Ala Phe Ile Leu Trp Ala Cys Gln Asn Gly Asn Ile Arg 545 550 555 tgc cag att tgt att tag agaa 1704 Cys Gln Ile Cys Ile 560 <210> 12 <211> 564 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 12 Met Leu Ser Ile Val Ile Leu Phe Leu Leu Ile Ala Glu Asn Ser Ser 1 5 10 15 Gln Asn Tyr Thr Gly Asn Pro Val Ile Cys Met Gly His His Ala Val 20 25 30 Ala Asn Gly Thr Met Val Lys Thr Leu Ala Asp Asp Gln Val Glu Val 35 40 45 Val Thr Ala Gln Glu Leu Val Glu Ser Gln Asn Leu Pro Glu Leu Cys 50 55 60 Pro Ser Pro Leu Arg Leu Val Asp Gly Gln Thr Cys Asp Ile Ile Asn 65 70 75 80 Gly Ala Leu Gly Ser Pro Gly Cys Asp His Leu Asn Gly Ala Glu Trp 85 90 95 Asp Val Phe Ile Glu Arg Pro Asn Ala Val Asp Thr Cys Tyr Pro Phe 100 105 110 Asp Val Pro Glu Tyr Gln Ser Leu Arg Ser Ile Leu Ala Asn Asn Gly 115 120 125 Lys Phe Glu Phe Ile Ala Glu Glu Phe Gln Trp Asn Thr Val Lys Gln 130 135 140 Asn Gly Lys Ser Gly Ala Cys Lys Arg Ala Asn Val Asn Asp Phe Phe 145 150 155 160 Asn Arg Leu Asn Trp Leu Val Lys Ser Asp Gly Asn Ala Tyr Pro Leu 165 170 175 Gln Asn Leu Thr Lys Ile Asn Asn Gly Asp Tyr Ala Arg Leu Tyr Ile 180 185 190 Trp Gly Val His His Pro Ser Thr Asp Thr Glu Gln Thr Asn Leu Tyr 195 200 205 Lys Asn Asn Pro Gly Gly Val Thr Val Ser Thr Lys Thr Ser Gln Thr 210 215 220 Ser Val Val Pro Asn Ile Gly Ser Arg Pro Leu Val Arg Gly Gln Ser 225 230 235 240 Gly Arg Val Ser Phe Tyr Trp Thr Ile Val Glu Pro Gly Asp Leu Ile 245 250 255 Val Phe Asn Thr Ile Gly Asn Leu Ile Ala Pro Arg Gly His Tyr Lys 260 265 270 Leu Asn Asn Gln Lys Lys Ser Thr Ile Leu Asn Thr Ala Ile Pro Ile 275 280 285 Gly Ser Cys Val Ser Lys Cys His Thr Asp Lys Gly Ser Leu Ser Thr 290 295 300 Thr Lys Pro Phe Gln Asn Ile Ser Arg Ile Ala Val Gly Asp Cys Pro 305 310 315 320 Arg Tyr Val Lys Gln Gly Ser Leu Lys Leu Ala Thr Gly Met Arg Asn 325 330 335 Ile Pro Glu Lys Ala Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe 340 345 350 Ile Glu Asn Gly Trp Gln Gly Leu Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Phe Arg 355 360 365 His Gln Asn Ala Glu Gly Thr Gly Thr Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr 370 375 380 Gln Ala Ala Ile Asp Gln Ile Asn Gly Lys Leu Asn Arg Leu Ile Glu 385 390 395 400 Lys Thr Asn Asp Lys Tyr His Gln Ile Glu Lys Glu Phe Glu Gln Val 405 410 415 Glu Gly Arg Ile Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr Lys Ile 420 425 430 Asp Leu Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Leu Glu Asn Gln 435 440 445 His Thr Ile Asp Val Thr Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Phe Glu Arg 450 455 460 Val Arg Arg Gln Leu Arg Glu Asn Ala Glu Asp Lys Gly Asn Gly Cys 465 470 475 480 Phe Glu Ile Phe His Lys Cys Asp Asn Asn Cys Ile Glu Ser Ile Arg 485 490 495 Asn Gly Thr Tyr Asp His Asp Ile Tyr Arg Asp Glu Ala Ile Asn Asn 500 505 510 Arg Phe Gln Ile Gln Gly Val Lys Leu Thr Gln Gly Tyr Met Asp Ile 515 520 525 Ile Leu Trp Ile Ser Phe Ser Ile Ser Cys Phe Leu Leu Val Ala Leu 530 535 540 Leu Leu Ala Phe Ile Leu Trp Ala Cys Gln Asn Gly Asn Ile Arg Cys 545 550 555 560 Gln Ile Cys Ile <210> 13 <211> 1634 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (3)..(1634) <223> <220> <221> misc_feature <222> (1634)..(1634) <223> n is unknown base <400> 13 ag aaa ata gtg ctt ctt ctt gca aca gtc agt ctt gtt aaa agt gac 47 Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Thr Val Ser Leu Val Lys Ser Asp 1 5 10 15 cag att tgc att ggt tac cat gca aac aac tcg aca gaa cag gtt gac 95 Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val Asp 20 25 30 aca ata atg gaa aag aat gtc act gtt aca cat gcc caa gac ata ttg 143 Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile Leu 35 40 45 gaa aag aca cac aac ggg aag ctc tgc agt cta aat gga gtg aag cct 191 Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Ser Leu Asn Gly Val Lys Pro 50 55 60 ctc att ttg agg gat tgt agt gta gct gga tgg ctc ctc gga aac cct 239 Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn Pro 65 70 75 atg tgt gac gaa ttc ctc aat gtg ccg gaa tgg tct tac ata gtg gag 287 Met Cys Asp Glu Phe Leu Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val Glu 80 85 90 95 aag gac agt cca gtc aat ggc ctc tgc tac cca gga gat ttc aac gac 335 Lys Asp Ser Pro Val Asn Gly Leu Cys Tyr Pro Gly Asp Phe Asn Asp 100 105 110 tat gaa gaa ctg aaa cac cta ttg agc agc aca aac cat ttt gag aaa 383 Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Ser Thr Asn His Phe Glu Lys 115 120 125 atc caa atc atc ccc aga agc tct tgg tcc aat cat gat gcc tca tca 431 Ile Gln Ile Ile Pro Arg Ser Ser Trp Ser Asn His Asp Ala Ser Ser 130 135 140 gga gtg agc tct gca tgt cca tat ggt ggg agg tcc tcc ttt ttc aga 479 Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Gly Gly Arg Ser Ser Phe Phe Arg 145 150 155 aat gtg gta tgg ctt atc aaa aag aac aat gca tac cca aca ata aag 527 Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Asn Ala Tyr Pro Thr Ile Lys 160 165 170 175 agg agt tac aat aat acc aac caa gaa gat ctt ttg ata ctg tgg ggg 575 Arg Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Ile Leu Trp Gly 180 185 190 att cac cat cct aat gat gcg gca gag cag aca aaa ctc tat caa aac 623 Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Lys Leu Tyr Gln Asn 195 200 205 cca act acc tat gtt tcc gtt gga aca tca aca ctg aac cag aga tcg 671 Pro Thr Thr Tyr Val Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg Ser 210 215 220 gtt cca gaa ata gct act agg ccc aaa gtg aac ggg caa agt gga aga 719 Val Pro Glu Ile Ala Thr Arg Pro Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly Arg 225 230 235 atg gag ttc ttc tgg aca att tta aag ccg aat gat gcc atc aat ttc 767 Met Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Asn Phe 240 245 250 255 gag agt aat gga aat ttc att gct cca gaa tat gca tac aaa att gtc 815 Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr Lys Ile Val 260 265 270 aaa aaa gga gac tca gca atc atg aaa agt gga ttg gaa tat ggt aac 863 Lys Lys Gly Asp Ser Ala Ile Met Lys Ser Gly Leu Glu Tyr Gly Asn 275 280 285 tgc aac acc aag tgt caa act cca atg ggt gcg ata aac tct agt atg 911 Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser Met 290 295 300 cca ttc cat aac ata cac cct ctc acc att gga gaa tgc ccc aaa tac 959 Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys Tyr 305 310 315 gtg aaa tca gat aga tta gtc ctt gcg act gga ctc aga aat gtc cct 1007 Val Lys Ser Asp Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val Pro 320 325 330 335 caa aga gaa aca aga gga cta ttt ggg gct ata gct ggc ttt ata gag 1055 Gln Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu 340 345 350 gga gga tgg caa gga atg gta gac ggt tgg tat ggg tac cac cat agc 1103 Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Ser 355 360 365 aac gag cag ggg agt gga tac gct gca gac aaa gaa tcc act caa aag 1151 Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys 370 375 380 gca ata gat gga atc act aat aag gtc aac tca atc att gac aaa atg 1199 Ala Ile Asp Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile Ile Asp Lys Met 385 390 395 aac act cag ttt gag gct gtt gga aag gaa ttt aat aac ttg gaa agg 1247 Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn Asn Leu Glu Arg 400 405 410 415 agg ata gag aat ttg aac aag aaa atg gaa gac ggg ttt cta gat gtc 1295 Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val 420 425 430 tgg act tat aat gct gaa ctt ctg gtt ctc atg gaa aat gag aga acc 1343 Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr 435 440 445 cta gac ttt cat gac tca aat gtc aag aac ctt tat gac aag gtt cga 1391 Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg 450 455 460 cta cag ctt agg gat aat gca aag gag ctg ggt aat ggt tgt ttc gag 1439 Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu 465 470 475 ttc tac cac aaa tgt gat aat gaa tgt atg gaa agt gta aaa aac ggg 1487 Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu Ser Val Lys Asn Gly 480 485 490 495 acg tat gac tac ccg cag tat tca gaa gag gca aga cta aac aga gag 1535 Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala Arg Leu Asn Arg Glu 500 505 510 gaa ata agt gga gtg aaa ttg gaa tca atg gga act tac caa ata ctg 1583 Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Met Gly Thr Tyr Gln Ile Leu 515 520 525 tca att tat tca aca gtg gcg agt tcc cta gca ctg gca atc atg gta 1631 Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala Leu Ala Ile Met Val 530 535 540 gcn 1634 Ala <210> 14 <211> 544 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 14 Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Thr Val Ser Leu Val Lys Ser Asp Gln 1 5 10 15 Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val Asp Thr 20 25 30 Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile Leu Glu 35 40 45 Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Ser Leu Asn Gly Val Lys Pro Leu 50 55 60 Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn Pro Met 65 70 75 80 Cys Asp Glu Phe Leu Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val Glu Lys 85 90 95 Asp Ser Pro Val Asn Gly Leu Cys Tyr Pro Gly Asp Phe Asn Asp Tyr 100 105 110 Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Ser Thr Asn His Phe Glu Lys Ile 115 120 125 Gln Ile Ile Pro Arg Ser Ser Trp Ser Asn His Asp Ala Ser Ser Gly 130 135 140 Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Gly Gly Arg Ser Ser Phe Phe Arg Asn 145 150 155 160 Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Asn Ala Tyr Pro Thr Ile Lys Arg 165 170 175 Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Ile Leu Trp Gly Ile 180 185 190 His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Lys Leu Tyr Gln Asn Pro 195 200 205 Thr Thr Tyr Val Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg Ser Val 210 215 220 Pro Glu Ile Ala Thr Arg Pro Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly Arg Met 225 230 235 240 Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Asn Phe Glu 245 250 255 Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr Lys Ile Val Lys 260 265 270 Lys Gly Asp Ser Ala Ile Met Lys Ser Gly Leu Glu Tyr Gly Asn Cys 275 280 285 Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser Met Pro 290 295 300 Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys Tyr Val 305 310 315 320 Lys Ser Asp Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val Pro Gln 325 330 335 Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly 340 345 350 Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Ser Asn 355 360 365 Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala 370 375 380 Ile Asp Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile Ile Asp Lys Met Asn 385 390 395 400 Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn Asn Leu Glu Arg Arg 405 410 415 Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp 420 425 430 Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr Leu 435 440 445 Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Leu 450 455 460 Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe 465 470 475 480 Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu Ser Val Lys Asn Gly Thr 485 490 495 Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala Arg Leu Asn Arg Glu Glu 500 505 510 Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Met Gly Thr Tyr Gln Ile Leu Ser 515 520 525 Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala Leu Ala Ile Met Val Ala 530 535 540 <210> 15 <211> 1714 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (4)..(1707) <223> <400> 15 aaa atg att gca atc ata ata atc gcg gta gtg gcc tct acc agc aaa 48 Met Ile Ala Ile Ile Ile Ile Ala Val Val Ala Ser Thr Ser Lys 1 5 10 15 tca gac aag atc tgc att ggg tat cat gcc aac aac tcg aca aca caa 96 Ser Asp Lys Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Thr Gln 20 25 30 gtg gac aca ata tta gag aag aat gtg aca gtg acg cac tct gta gag 144 Val Asp Thr Ile Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Glu 35 40 45 ctc cta gaa agt cag aag gag gag aga ttc tgc aga gtg ttg aat aaa 192 Leu Leu Glu Ser Gln Lys Glu Glu Arg Phe Cys Arg Val Leu Asn Lys 50 55 60 aca cct ctg gat cta aag ggt tgc acc att gaa gga tgg att ctt gga 240 Thr Pro Leu Asp Leu Lys Gly Cys Thr Ile Glu Gly Trp Ile Leu Gly 65 70 75 aac ccc caa tgt gac atc tta ctt ggt gac caa agt tgg tca tac ata 288 Asn Pro Gln Cys Asp Ile Leu Leu Gly Asp Gln Ser Trp Ser Tyr Ile 80 85 90 95 gta gag agg cct gga gcc caa aat ggg ata tgt tac cca ggg gtg ctg 336 Val Glu Arg Pro Gly Ala Gln Asn Gly Ile Cys Tyr Pro Gly Val Leu 100 105 110 aac gaa gtg gaa gaa ctg aaa gca ttc att ggg tcc gga gag aaa gta 384 Asn Glu Val Glu Glu Leu Lys Ala Phe Ile Gly Ser Gly Glu Lys Val 115 120 125 cag aga ttt gaa atg ttt ccc aag agc acg tgg acc gga gtg gac act 432 Gln Arg Phe Glu Met Phe Pro Lys Ser Thr Trp Thr Gly Val Asp Thr 130 135 140 aac agt gga gtt acg aga gct tgc ccc tat act acc agt gga tca tcc 480 Asn Ser Gly Val Thr Arg Ala Cys Pro Tyr Thr Thr Ser Gly Ser Ser 145 150 155 ttt tac agg aat ctt ttg tgg ata ata aaa aca agg tct gct gca tac 528 Phe Tyr Arg Asn Leu Leu Trp Ile Ile Lys Thr Arg Ser Ala Ala Tyr 160 165 170 175 cca gta att aag gga aca tac aat aat act ggc tcc cag cca atc cta 576 Pro Val Ile Lys Gly Thr Tyr Asn Asn Thr Gly Ser Gln Pro Ile Leu 180 185 190 tat ttc tgg ggt gtg cat cat cct cca aat acc gat gag caa aat acc 624 Tyr Phe Trp Gly Val His His Pro Pro Asn Thr Asp Glu Gln Asn Thr 195 200 205 tta tat ggc tct ggt gac agg tat gtt aga atg gga act gaa agc atg 672 Leu Tyr Gly Ser Gly Asp Arg Tyr Val Arg Met Gly Thr Glu Ser Met 210 215 220 aat ttt gcc aag agt cct gaa ata gca gcc agg cca gct gtg aat ggg 720 Asn Phe Ala Lys Ser Pro Glu Ile Ala Ala Arg Pro Ala Val Asn Gly 225 230 235 caa aga gga aga att gat tat tat tgg tct gta ctg aaa cca gga gaa 768 Gln Arg Gly Arg Ile Asp Tyr Tyr Trp Ser Val Leu Lys Pro Gly Glu 240 245 250 255 acc tta aat gta gaa tcc aat gga aat tta ata gct cct tgg tat gct 816 Thr Leu Asn Val Glu Ser Asn Gly Asn Leu Ile Ala Pro Trp Tyr Ala 260 265 270 tac aag ttc aca agt tcc aac aac aaa gga gct atc ttc aaa tca aac 864 Tyr Lys Phe Thr Ser Ser Asn Asn Lys Gly Ala Ile Phe Lys Ser Asn 275 280 285 ctc cca att gag aat tgt gat gct gta tgt caa act gtt gct gga gca 912 Leu Pro Ile Glu Asn Cys Asp Ala Val Cys Gln Thr Val Ala Gly Ala 290 295 300 cta aag aca aac aaa act ttc caa aat gtt agt cca ctc tgg att gga 960 Leu Lys Thr Asn Lys Thr Phe Gln Asn Val Ser Pro Leu Trp Ile Gly 305 310 315 gaa tgt ccc aaa tat gtt aag agt gag agc cta aga ctg gca act ggt 1008 Glu Cys Pro Lys Tyr Val Lys Ser Glu Ser Leu Arg Leu Ala Thr Gly 320 325 330 335 ctg agg aat gtc cca cag gca gaa aca aga gga ttg ttt gga gcc ata 1056 Leu Arg Asn Val Pro Gln Ala Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile 340 345 350 gct ggg ttt ata gaa gga ggg tgg aca ggt atg ata gac gga tgg tac 1104 Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met Ile Asp Gly Trp Tyr 355 360 365 ggg tac cat cat gag aac tca cag ggg tcg ggt tat gca gca gat aaa 1152 Gly Tyr His His Glu Asn Ser Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys 370 375 380 gaa agt acc cag aaa gca att gac ggg atc acc aat aaa gta aat tcc 1200 Glu Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser 385 390 395 atc att gac aag atg aac aca cag ttt gaa gca gta gag cat gag ttc 1248 Ile Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Glu His Glu Phe 400 405 410 415 tca aat ctc gaa agg aga ata gac aat tta aac aaa aga atg gaa gat 1296 Ser Asn Leu Glu Arg Arg Ile Asp Asn Leu Asn Lys Arg Met Glu Asp 420 425 430 gga ttt ttg gat gtg tgg acg tac aat gct gaa ctt tta gtt cta ctg 1344 Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu 435 440 445 gaa aat gaa agg acc ctg gat ctg cac gat gcc aat gtg aag aac cta 1392 Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Leu His Asp Ala Asn Val Lys Asn Leu 450 455 460 tac gag aag gtg aaa tca caa ttg aga gat aat gca aag gat ttg ggt 1440 Tyr Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Asp Leu Gly 465 470 475 aat ggg tgt ttt gaa ttt tgg cac aaa tgc gac gat gaa tgc atc aac 1488 Asn Gly Cys Phe Glu Phe Trp His Lys Cys Asp Asp Glu Cys Ile Asn 480 485 490 495 tca gtt aag aat ggc aca tac gat tac cca aag tac caa gac gag agc 1536 Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Gln Asp Glu Ser 500 505 510 aaa ctt aac aga cag gag ata gac tca gtg aag ctg gaa aat ctg ggc 1584 Lys Leu Asn Arg Gln Glu Ile Asp Ser Val Lys Leu Glu Asn Leu Gly 515 520 525 gta tat caa att ctt gct att tat agt acg gta tcg agc agt cta gtt 1632 Val Tyr Gln Ile Leu Ala Ile Tyr Ser Thr Val Ser Ser Ser Leu Val 530 535 540 ttg gtg ggg ctg atc att gcc atg ggt ctt tgg atg tgc tca aat ggc 1680 Leu Val Gly Leu Ile Ile Ala Met Gly Leu Trp Met Cys Ser Asn Gly 545 550 555 tca atg caa tgc agg ata tgt ata taa ttaggaa 1714 Ser Met Gln Cys Arg Ile Cys Ile 560 565 <210> 16 <211> 567 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 16 Met Ile Ala Ile Ile Ile Ile Ala Val Val Ala Ser Thr Ser Lys Ser 1 5 10 15 Asp Lys Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Thr Gln Val 20 25 30 Asp Thr Ile Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Glu Leu 35 40 45 Leu Glu Ser Gln Lys Glu Glu Arg Phe Cys Arg Val Leu Asn Lys Thr 50 55 60 Pro Leu Asp Leu Lys Gly Cys Thr Ile Glu Gly Trp Ile Leu Gly Asn 65 70 75 80 Pro Gln Cys Asp Ile Leu Leu Gly Asp Gln Ser Trp Ser Tyr Ile Val 85 90 95 Glu Arg Pro Gly Ala Gln Asn Gly Ile Cys Tyr Pro Gly Val Leu Asn 100 105 110 Glu Val Glu Glu Leu Lys Ala Phe Ile Gly Ser Gly Glu Lys Val Gln 115 120 125 Arg Phe Glu Met Phe Pro Lys Ser Thr Trp Thr Gly Val Asp Thr Asn 130 135 140 Ser Gly Val Thr Arg Ala Cys Pro Tyr Thr Thr Ser Gly Ser Ser Phe 145 150 155 160 Tyr Arg Asn Leu Leu Trp Ile Ile Lys Thr Arg Ser Ala Ala Tyr Pro 165 170 175 Val Ile Lys Gly Thr Tyr Asn Asn Thr Gly Ser Gln Pro Ile Leu Tyr 180 185 190 Phe Trp Gly Val His His Pro Pro Asn Thr Asp Glu Gln Asn Thr Leu 195 200 205 Tyr Gly Ser Gly Asp Arg Tyr Val Arg Met Gly Thr Glu Ser Met Asn 210 215 220 Phe Ala Lys Ser Pro Glu Ile Ala Ala Arg Pro Ala Val Asn Gly Gln 225 230 235 240 Arg Gly Arg Ile Asp Tyr Tyr Trp Ser Val Leu Lys Pro Gly Glu Thr 245 250 255 Leu Asn Val Glu Ser Asn Gly Asn Leu Ile Ala Pro Trp Tyr Ala Tyr 260 265 270 Lys Phe Thr Ser Ser Asn Asn Lys Gly Ala Ile Phe Lys Ser Asn Leu 275 280 285 Pro Ile Glu Asn Cys Asp Ala Val Cys Gln Thr Val Ala Gly Ala Leu 290 295 300 Lys Thr Asn Lys Thr Phe Gln Asn Val Ser Pro Leu Trp Ile Gly Glu 305 310 315 320 Cys Pro Lys Tyr Val Lys Ser Glu Ser Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu 325 330 335 Arg Asn Val Pro Gln Ala Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala 340 345 350 Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met Ile Asp Gly Trp Tyr Gly 355 360 365 Tyr His His Glu Asn Ser Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu 370 375 380 Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile 385 390 395 400 Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Glu His Glu Phe Ser 405 410 415 Asn Leu Glu Arg Arg Ile Asp Asn Leu Asn Lys Arg Met Glu Asp Gly 420 425 430 Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu 435 440 445 Asn Glu Arg Thr Leu Asp Leu His Asp Ala Asn Val Lys Asn Leu Tyr 450 455 460 Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Asp Leu Gly Asn 465 470 475 480 Gly Cys Phe Glu Phe Trp His Lys Cys Asp Asp Glu Cys Ile Asn Ser 485 490 495 Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Gln Asp Glu Ser Lys 500 505 510 Leu Asn Arg Gln Glu Ile Asp Ser Val Lys Leu Glu Asn Leu Gly Val 515 520 525 Tyr Gln Ile Leu Ala Ile Tyr Ser Thr Val Ser Ser Ser Leu Val Leu 530 535 540 Val Gly Leu Ile Ile Ala Met Gly Leu Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser 545 550 555 560 Met Gln Cys Arg Ile Cys Ile 565 <210> 17 <211> 1697 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (8)..(1690) <223> <400> 17 atacaaa atg aac act caa att ctg gta ttc att gcc tgt gtg ctg att 49 Met Asn Thr Gln Ile Leu Val Phe Ile Ala Cys Val Leu Ile 1 5 10 gaa gct aaa gga gac aaa ata tgt ctt gga cac cat gct gtg gca aat 97 Glu Ala Lys Gly Asp Lys Ile Cys Leu Gly His His Ala Val Ala Asn 15 20 25 30 gga aca aag gtg aac acg cta aca gag agg ggg att gaa gta gtg aat 145 Gly Thr Lys Val Asn Thr Leu Thr Glu Arg Gly Ile Glu Val Val Asn 35 40 45 gcc acg gaa aca gtg gaa acc gcg aat atc ggg aaa atc tgc acc caa 193 Ala Thr Glu Thr Val Glu Thr Ala Asn Ile Gly Lys Ile Cys Thr Gln 50 55 60 ggg aaa agg cca aca gac ctg gga caa tgt ggg ctc cta gga acc cta 241 Gly Lys Arg Pro Thr Asp Leu Gly Gln Cys Gly Leu Leu Gly Thr Leu 65 70 75 ata gga cct ccc caa tgt gat caa ttc ctg gag ttt gaa tca aat ttg 289 Ile Gly Pro Pro Gln Cys Asp Gln Phe Leu Glu Phe Glu Ser Asn Leu 80 85 90 ata atc gaa cga agg gaa ggg aac gat gtg tgc tat cct ggg aag ttc 337 Ile Ile Glu Arg Arg Glu Gly Asn Asp Val Cys Tyr Pro Gly Lys Phe 95 100 105 110 aca aat gaa gaa tca ctg agg cag atc ctt cgg ggg tca gga gga gtc 385 Thr Asn Glu Glu Ser Leu Arg Gln Ile Leu Arg Gly Ser Gly Gly Val 115 120 125 gat aaa gag tca atg ggt ttc acc tat agt gga ata aga acc aat gga 433 Asp Lys Glu Ser Met Gly Phe Thr Tyr Ser Gly Ile Arg Thr Asn Gly 130 135 140 gca aca agt gcc tgc aga aga tca ggt tct tcc ttc tat gcg gaa atg 481 Ala Thr Ser Ala Cys Arg Arg Ser Gly Ser Ser Phe Tyr Ala Glu Met 145 150 155 aag tgg ttg ctg tcg aat tca gac aat gcg gca ttc cct caa atg acc 529 Lys Trp Leu Leu Ser Asn Ser Asp Asn Ala Ala Phe Pro Gln Met Thr 160 165 170 aaa tca tat aga aat ccc aga aac aaa cca gct ctg ata gtt tgg gga 577 Lys Ser Tyr Arg Asn Pro Arg Asn Lys Pro Ala Leu Ile Val Trp Gly 175 180 185 190 att cac cat tct gga tcg act acc gaa cag acc aga ctc tat gga agt 625 Ile His His Ser Gly Ser Thr Thr Glu Gln Thr Arg Leu Tyr Gly Ser 195 200 205 gga aac aag ttg ata aca gta gga agc tcg aaa tat caa caa tcg ttc 673 Gly Asn Lys Leu Ile Thr Val Gly Ser Ser Lys Tyr Gln Gln Ser Phe 210 215 220 acc cca agt ccg gaa gca cgg cca caa gtg aat gga caa tca ggg aga 721 Thr Pro Ser Pro Glu Ala Arg Pro Gln Val Asn Gly Gln Ser Gly Arg 225 230 235 atc gat ttc cat tgg cta ctc ctt gat ccc aat gac aca gtg act ttc 769 Ile Asp Phe His Trp Leu Leu Leu Asp Pro Asn Asp Thr Val Thr Phe 240 245 250 acc ttc aat gga gca ttc ata gcc cct aat agg gca agt ttc ttt aga 817 Thr Phe Asn Gly Ala Phe Ile Ala Pro Asn Arg Ala Ser Phe Phe Arg 255 260 265 270 gga gaa tca cta gga gtc cag agt gat gtg cct tta gac tct aat tgt 865 Gly Glu Ser Leu Gly Val Gln Ser Asp Val Pro Leu Asp Ser Asn Cys 275 280 285 gga ggg gat tgc ttt cat agt ggg ggc acg ata gtc agt tct ctg cca 913 Gly Gly Asp Cys Phe His Ser Gly Gly Thr Ile Val Ser Ser Leu Pro 290 295 300 ttc caa aac atc aat tct aga acg gtg ggg aaa tgc ccc cga tat gtc 961 Phe Gln Asn Ile Asn Ser Arg Thr Val Gly Lys Cys Pro Arg Tyr Val 305 310 315 aaa cag cca agc ctc ctt tcg gct aca gga atg aga aat gtc cca gag 1009 Lys Gln Pro Ser Leu Leu Ser Ala Thr Gly Met Arg Asn Val Pro Glu 320 325 330 aat cca aag acc aga gga ctt ttt gga gca att gct gga ttc ata gag 1057 Asn Pro Lys Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu 335 340 345 350 aat gga tgg gag ggt ctc atc gat ggg tgg tat ggt ttc agg cat caa 1105 Asn Gly Trp Glu Gly Leu Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Phe Arg His Gln 355 360 365 aat gca caa gga gaa gga act gca gct gac tac aaa agc acc caa tct 1153 Asn Ala Gln Gly Glu Gly Thr Ala Ala Asp Tyr Lys Ser Thr Gln Ser 370 375 380 gca ata gat cag atc act ggc aca ttg aat cgt ctg att gac aaa aca 1201 Ala Ile Asp Gln Ile Thr Gly Thr Leu Asn Arg Leu Ile Asp Lys Thr 385 390 395 aat cag cag ttt gag ctg ata gac aat gaa ttc aat gag ata gaa caa 1249 Asn Gln Gln Phe Glu Leu Ile Asp Asn Glu Phe Asn Glu Ile Glu Gln 400 405 410 cag att gga aat gtc att aat tgg aca cga gac tca atg act gaa gta 1297 Gln Ile Gly Asn Val Ile Asn Trp Thr Arg Asp Ser Met Thr Glu Val 415 420 425 430 tgg tcg tat aat gct gag ctg ttg gtg gcc atg gaa aat cag cac aca 1345 Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Met Glu Asn Gln His Thr 435 440 445 ata gat ctt gcg gat tca gaa atg aac aaa ctt tat gag cgt gtc aga 1393 Ile Asp Leu Ala Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Tyr Glu Arg Val Arg 450 455 460 aaa caa cta agg gag aat gct gaa gaa gat ggg act gga tgt ttt gaa 1441 Lys Gln Leu Arg Glu Asn Ala Glu Glu Asp Gly Thr Gly Cys Phe Glu 465 470 475 ata ttc cat aag tgt gac gac caa tgt atg gag agc ata agg aac aac 1489 Ile Phe His Lys Cys Asp Asp Gln Cys Met Glu Ser Ile Arg Asn Asn 480 485 490 act tat gac cat acc caa tac aga gca gag tca tta cag aat aga ata 1537 Thr Tyr Asp His Thr Gln Tyr Arg Ala Glu Ser Leu Gln Asn Arg Ile 495 500 505 510 cag ata gac cca gtg aaa ttg agt agt gga tac aaa gac ata atc tta 1585 Gln Ile Asp Pro Val Lys Leu Ser Ser Gly Tyr Lys Asp Ile Ile Leu 515 520 525 tgg ttt agc ttc ggg gca tca tgt ttc ctc ctt cta gcc att gca atg 1633 Trp Phe Ser Phe Gly Ala Ser Cys Phe Leu Leu Leu Ala Ile Ala Met 530 535 540 gga ttg gtc ttc att tgc ata aag aat gga aac atg cgg tgc act att 1681 Gly Leu Val Phe Ile Cys Ile Lys Asn Gly Asn Met Arg Cys Thr Ile 545 550 555 tgt ata tag tttgaga 1697 Cys Ile 560 <210> 18 <211> 560 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 18 Met Asn Thr Gln Ile Leu Val Phe Ile Ala Cys Val Leu Ile Glu Ala 1 5 10 15 Lys Gly Asp Lys Ile Cys Leu Gly His His Ala Val Ala Asn Gly Thr 20 25 30 Lys Val Asn Thr Leu Thr Glu Arg Gly Ile Glu Val Val Asn Ala Thr 35 40 45 Glu Thr Val Glu Thr Ala Asn Ile Gly Lys Ile Cys Thr Gln Gly Lys 50 55 60 Arg Pro Thr Asp Leu Gly Gln Cys Gly Leu Leu Gly Thr Leu Ile Gly 65 70 75 80 Pro Pro Gln Cys Asp Gln Phe Leu Glu Phe Glu Ser Asn Leu Ile Ile 85 90 95 Glu Arg Arg Glu Gly Asn Asp Val Cys Tyr Pro Gly Lys Phe Thr Asn 100 105 110 Glu Glu Ser Leu Arg Gln Ile Leu Arg Gly Ser Gly Gly Val Asp Lys 115 120 125 Glu Ser Met Gly Phe Thr Tyr Ser Gly Ile Arg Thr Asn Gly Ala Thr 130 135 140 Ser Ala Cys Arg Arg Ser Gly Ser Ser Phe Tyr Ala Glu Met Lys Trp 145 150 155 160 Leu Leu Ser Asn Ser Asp Asn Ala Ala Phe Pro Gln Met Thr Lys Ser 165 170 175 Tyr Arg Asn Pro Arg Asn Lys Pro Ala Leu Ile Val Trp Gly Ile His 180 185 190 His Ser Gly Ser Thr Thr Glu Gln Thr Arg Leu Tyr Gly Ser Gly Asn 195 200 205 Lys Leu Ile Thr Val Gly Ser Ser Lys Tyr Gln Gln Ser Phe Thr Pro 210 215 220 Ser Pro Glu Ala Arg Pro Gln Val Asn Gly Gln Ser Gly Arg Ile Asp 225 230 235 240 Phe His Trp Leu Leu Leu Asp Pro Asn Asp Thr Val Thr Phe Thr Phe 245 250 255 Asn Gly Ala Phe Ile Ala Pro Asn Arg Ala Ser Phe Phe Arg Gly Glu 260 265 270 Ser Leu Gly Val Gln Ser Asp Val Pro Leu Asp Ser Asn Cys Gly Gly 275 280 285 Asp Cys Phe His Ser Gly Gly Thr Ile Val Ser Ser Leu Pro Phe Gln 290 295 300 Asn Ile Asn Ser Arg Thr Val Gly Lys Cys Pro Arg Tyr Val Lys Gln 305 310 315 320 Pro Ser Leu Leu Ser Ala Thr Gly Met Arg Asn Val Pro Glu Asn Pro 325 330 335 Lys Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Asn Gly 340 345 350 Trp Glu Gly Leu Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Phe Arg His Gln Asn Ala 355 360 365 Gln Gly Glu Gly Thr Ala Ala Asp Tyr Lys Ser Thr Gln Ser Ala Ile 370 375 380 Asp Gln Ile Thr Gly Thr Leu Asn Arg Leu Ile Asp Lys Thr Asn Gln 385 390 395 400 Gln Phe Glu Leu Ile Asp Asn Glu Phe Asn Glu Ile Glu Gln Gln Ile 405 410 415 Gly Asn Val Ile Asn Trp Thr Arg Asp Ser Met Thr Glu Val Trp Ser 420 425 430 Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Met Glu Asn Gln His Thr Ile Asp 435 440 445 Leu Ala Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Tyr Glu Arg Val Arg Lys Gln 450 455 460 Leu Arg Glu Asn Ala Glu Glu Asp Gly Thr Gly Cys Phe Glu Ile Phe 465 470 475 480 His Lys Cys Asp Asp Gln Cys Met Glu Ser Ile Arg Asn Asn Thr Tyr 485 490 495 Asp His Thr Gln Tyr Arg Ala Glu Ser Leu Gln Asn Arg Ile Gln Ile 500 505 510 Asp Pro Val Lys Leu Ser Ser Gly Tyr Lys Asp Ile Ile Leu Trp Phe 515 520 525 Ser Phe Gly Ala Ser Cys Phe Leu Leu Leu Ala Ile Ala Met Gly Leu 530 535 540 Val Phe Ile Cys Ile Lys Asn Gly Asn Met Arg Cys Thr Ile Cys Ile 545 550 555 560 <210> 19 <211> 1710 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (6)..(1706) <223> <400> 19 tcaca atg gag aaa ttc atc gcc ata gca atg ctc ttg gcg agc aca aat 50 Met Glu Lys Phe Ile Ala Ile Ala Met Leu Leu Ala Ser Thr Asn 1 5 10 15 gca tac gat agg ata tgc att ggg tac caa tca aac aac tcc aca gac 98 Ala Tyr Asp Arg Ile Cys Ile Gly Tyr Gln Ser Asn Asn Ser Thr Asp 20 25 30 aca gtg aac act ctc ata gaa cag aat gtg cca gtc acc caa aca atg 146 Thr Val Asn Thr Leu Ile Glu Gln Asn Val Pro Val Thr Gln Thr Met 35 40 45 gag ctc gtg gaa aca gag aaa cat ccc gct tat tgt aac act gat tta 194 Glu Leu Val Glu Thr Glu Lys His Pro Ala Tyr Cys Asn Thr Asp Leu 50 55 60 ggt gcc cca ttg gaa ctg cga gac tgc aag gtt gag gca gta atc tat 242 Gly Ala Pro Leu Glu Leu Arg Asp Cys Lys Val Glu Ala Val Ile Tyr 65 70 75 ggg aac ccc aag tgt gac atc cat ctg aag gat caa ggt tgg tca tac 290 Gly Asn Pro Lys Cys Asp Ile His Leu Lys Asp Gln Gly Trp Ser Tyr 80 85 90 95 ata gtg gag agg ccc agc gca cca gaa ggg atg tgt tac cct gga tct 338 Ile Val Glu Arg Pro Ser Ala Pro Glu Gly Met Cys Tyr Pro Gly Ser 100 105 110 gtg gaa aat cta gaa gaa ctg agg ttt gtc ttc tcc agt gct gca tct 386 Val Glu Asn Leu Glu Glu Leu Arg Phe Val Phe Ser Ser Ala Ala Ser 115 120 125 tac aag aga ata aga cta ttt gac tat tcc agg tgg aat gtg act aga 434 Tyr Lys Arg Ile Arg Leu Phe Asp Tyr Ser Arg Trp Asn Val Thr Arg 130 135 140 tct gga acg agt aaa gca tgc aat gca tca aca ggt ggc caa tcc ttc 482 Ser Gly Thr Ser Lys Ala Cys Asn Ala Ser Thr Gly Gly Gln Ser Phe 145 150 155 tat agg agc atc aat tgg ttg acc aaa aag aaa cca gac act tat gac 530 Tyr Arg Ser Ile Asn Trp Leu Thr Lys Lys Lys Pro Asp Thr Tyr Asp 160 165 170 175 ttc aat gaa gga gct tat gtt aat aat gaa gat gga gac atc att ttc 578 Phe Asn Glu Gly Ala Tyr Val Asn Asn Glu Asp Gly Asp Ile Ile Phe 180 185 190 tta tgg ggg atc cat cat ccg ccg gac aca aaa gag cag aca aca cta 626 Leu Trp Gly Ile His His Pro Pro Asp Thr Lys Glu Gln Thr Thr Leu 195 200 205 tat aaa aat gca aac act ttg agt agt gtt act act aac act ata aac 674 Tyr Lys Asn Ala Asn Thr Leu Ser Ser Val Thr Thr Asn Thr Ile Asn 210 215 220 aga agc ttt caa cca aat att ggt ccc aga cca tta gta aga gga cag 722 Arg Ser Phe Gln Pro Asn Ile Gly Pro Arg Pro Leu Val Arg Gly Gln 225 230 235 caa ggg agg atg gat tac tat tgg ggc att ctg aaa aga ggg gag act 770 Gln Gly Arg Met Asp Tyr Tyr Trp Gly Ile Leu Lys Arg Gly Glu Thr 240 245 250 255 ctg aag atc agg acc aac gga aat tta atc gca cct gaa ttt ggc tat 818 Leu Lys Ile Arg Thr Asn Gly Asn Leu Ile Ala Pro Glu Phe Gly Tyr 260 265 270 ctg ctc aaa ggt gaa agc tac ggc aga ata att caa aat gag gat ata 866 Leu Leu Lys Gly Glu Ser Tyr Gly Arg Ile Ile Gln Asn Glu Asp Ile 275 280 285 ccc atc ggg aac tgt aac aca aaa tgt caa aca tat gcg gga gca atc 914 Pro Ile Gly Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Tyr Ala Gly Ala Ile 290 295 300 aat agc agc aaa ccc ttt cag aat gca agt agg cat tac atg gga gaa 962 Asn Ser Ser Lys Pro Phe Gln Asn Ala Ser Arg His Tyr Met Gly Glu 305 310 315 tgt ccc aaa tat gtg aag aag gca agc ttg cga ctt gca gtt ggg ctt 1010 Cys Pro Lys Tyr Val Lys Lys Ala Ser Leu Arg Leu Ala Val Gly Leu 320 325 330 335 agg aat acg cct tct gtt gaa ccc aga gga ctg ttt gga gcc att gct 1058 Arg Asn Thr Pro Ser Val Glu Pro Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala 340 345 350 ggt ttc att gaa gga gga tgg tct gga atg att gat ggg tgg tat gga 1106 Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Ser Gly Met Ile Asp Gly Trp Tyr Gly 355 360 365 ttt cat cac agc aat tca gag gga aca gga atg gca gct gac cag aaa 1154 Phe His His Ser Asn Ser Glu Gly Thr Gly Met Ala Ala Asp Gln Lys 370 375 380 tca aca caa gaa gcc atc gat aag atc acc aat aaa gtc aac aat ata 1202 Ser Thr Gln Glu Ala Ile Asp Lys Ile Thr Asn Lys Val Asn Asn Ile 385 390 395 gtt gac aag atg aac agg gag ttt gaa gtt gtg aat cat gag ttc tct 1250 Val Asp Lys Met Asn Arg Glu Phe Glu Val Val Asn His Glu Phe Ser 400 405 410 415 gaa gtt gaa aaa aga ata aac atg ata aac gat aaa ata gat gac caa 1298 Glu Val Glu Lys Arg Ile Asn Met Ile Asn Asp Lys Ile Asp Asp Gln 420 425 430 att gaa gat ctt tgg gct tac aat gca gag ctc ctt gtg ctc tta gag 1346 Ile Glu Asp Leu Trp Ala Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu 435 440 445 aac cag aaa acg cta gac gaa cat gat tcc aat gtc aaa aac ctt ttt 1394 Asn Gln Lys Thr Leu Asp Glu His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Phe 450 455 460 gat gaa gtg aaa agg aga ctg tca gcc aat gca ata gat gct ggg aac 1442 Asp Glu Val Lys Arg Arg Leu Ser Ala Asn Ala Ile Asp Ala Gly Asn 465 470 475 ggt tgc ttt gac ata ctt cac aaa tgc gac aat gag tgt atg gaa act 1490 Gly Cys Phe Asp Ile Leu His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu Thr 480 485 490 495 ata aag aac gga act tac gat cat aag gaa tat gaa gag gag gct aaa 1538 Ile Lys Asn Gly Thr Tyr Asp His Lys Glu Tyr Glu Glu Glu Ala Lys 500 505 510 cta gaa agg agc aag ata aat gga gta aaa cta gaa gag aac acc act 1586 Leu Glu Arg Ser Lys Ile Asn Gly Val Lys Leu Glu Glu Asn Thr Thr 515 520 525 tac aaa att ctt agc att tac agt aca gtg gcg gcc agt ctt tgc ttg 1634 Tyr Lys Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ala Ser Leu Cys Leu 530 535 540 gca atc ctg att gct gga ggt tta atc ctg ggc atg caa aat gga tct 1682 Ala Ile Leu Ile Ala Gly Gly Leu Ile Leu Gly Met Gln Asn Gly Ser 545 550 555 tgt aga tgc atg ttc tgt att tga agaa 1710 Cys Arg Cys Met Phe Cys Ile 560 565 <210> 20 <211> 566 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 20 Met Glu Lys Phe Ile Ala Ile Ala Met Leu Leu Ala Ser Thr Asn Ala 1 5 10 15 Tyr Asp Arg Ile Cys Ile Gly Tyr Gln Ser Asn Asn Ser Thr Asp Thr 20 25 30 Val Asn Thr Leu Ile Glu Gln Asn Val Pro Val Thr Gln Thr Met Glu 35 40 45 Leu Val Glu Thr Glu Lys His Pro Ala Tyr Cys Asn Thr Asp Leu Gly 50 55 60 Ala Pro Leu Glu Leu Arg Asp Cys Lys Val Glu Ala Val Ile Tyr Gly 65 70 75 80 Asn Pro Lys Cys Asp Ile His Leu Lys Asp Gln Gly Trp Ser Tyr Ile 85 90 95 Val Glu Arg Pro Ser Ala Pro Glu Gly Met Cys Tyr Pro Gly Ser Val 100 105 110 Glu Asn Leu Glu Glu Leu Arg Phe Val Phe Ser Ser Ala Ala Ser Tyr 115 120 125 Lys Arg Ile Arg Leu Phe Asp Tyr Ser Arg Trp Asn Val Thr Arg Ser 130 135 140 Gly Thr Ser Lys Ala Cys Asn Ala Ser Thr Gly Gly Gln Ser Phe Tyr 145 150 155 160 Arg Ser Ile Asn Trp Leu Thr Lys Lys Lys Pro Asp Thr Tyr Asp Phe 165 170 175 Asn Glu Gly Ala Tyr Val Asn Asn Glu Asp Gly Asp Ile Ile Phe Leu 180 185 190 Trp Gly Ile His His Pro Pro Asp Thr Lys Glu Gln Thr Thr Leu Tyr 195 200 205 Lys Asn Ala Asn Thr Leu Ser Ser Val Thr Thr Asn Thr Ile Asn Arg 210 215 220 Ser Phe Gln Pro Asn Ile Gly Pro Arg Pro Leu Val Arg Gly Gln Gln 225 230 235 240 Gly Arg Met Asp Tyr Tyr Trp Gly Ile Leu Lys Arg Gly Glu Thr Leu 245 250 255 Lys Ile Arg Thr Asn Gly Asn Leu Ile Ala Pro Glu Phe Gly Tyr Leu 260 265 270 Leu Lys Gly Glu Ser Tyr Gly Arg Ile Ile Gln Asn Glu Asp Ile Pro 275 280 285 Ile Gly Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Tyr Ala Gly Ala Ile Asn 290 295 300 Ser Ser Lys Pro Phe Gln Asn Ala Ser Arg His Tyr Met Gly Glu Cys 305 310 315 320 Pro Lys Tyr Val Lys Lys Ala Ser Leu Arg Leu Ala Val Gly Leu Arg 325 330 335 Asn Thr Pro Ser Val Glu Pro Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly 340 345 350 Phe Ile Glu Gly Gly Trp Ser Gly Met Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Phe 355 360 365 His His Ser Asn Ser Glu Gly Thr Gly Met Ala Ala Asp Gln Lys Ser 370 375 380 Thr Gln Glu Ala Ile Asp Lys Ile Thr Asn Lys Val Asn Asn Ile Val 385 390 395 400 Asp Lys Met Asn Arg Glu Phe Glu Val Val Asn His Glu Phe Ser Glu 405 410 415 Val Glu Lys Arg Ile Asn Met Ile Asn Asp Lys Ile Asp Asp Gln Ile 420 425 430 Glu Asp Leu Trp Ala Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn 435 440 445 Gln Lys Thr Leu Asp Glu His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Phe Asp 450 455 460 Glu Val Lys Arg Arg Leu Ser Ala Asn Ala Ile Asp Ala Gly Asn Gly 465 470 475 480 Cys Phe Asp Ile Leu His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu Thr Ile 485 490 495 Lys Asn Gly Thr Tyr Asp His Lys Glu Tyr Glu Glu Glu Ala Lys Leu 500 505 510 Glu Arg Ser Lys Ile Asn Gly Val Lys Leu Glu Glu Asn Thr Thr Tyr 515 520 525 Lys Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ala Ser Leu Cys Leu Ala 530 535 540 Ile Leu Ile Ala Gly Gly Leu Ile Leu Gly Met Gln Asn Gly Ser Cys 545 550 555 560 Arg Cys Met Phe Cys Ile 565 <210> 21 <211> 1708 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (20)..(1702) <223> <400> 21 aacaacatag ccaatcaag atg gaa aca aaa gca ata att gct gca ctg cta 52 Met Glu Thr Lys Ala Ile Ile Ala Ala Leu Leu 1 5 10 atg gta aca gca gcc aat gct gat aaa atc tgc att ggc tat caa tca 100 Met Val Thr Ala Ala Asn Ala Asp Lys Ile Cys Ile Gly Tyr Gln Ser 15 20 25 aca aac tcc acc gaa act gtc gac aca cta aca gag agc aat gtt cct 148 Thr Asn Ser Thr Glu Thr Val Asp Thr Leu Thr Glu Ser Asn Val Pro 30 35 40 gta aca cac act aaa gaa ttg ctc cac aca gaa cac aat ggg atg ttg 196 Val Thr His Thr Lys Glu Leu Leu His Thr Glu His Asn Gly Met Leu 45 50 55 tgt gca act gat cta gga cat ccc ctc att cta gac acc tgc act att 244 Cys Ala Thr Asp Leu Gly His Pro Leu Ile Leu Asp Thr Cys Thr Ile 60 65 70 75 gaa gga cta atc tat gga aat cct tcc tgt gac ata cta cta gga gga 292 Glu Gly Leu Ile Tyr Gly Asn Pro Ser Cys Asp Ile Leu Leu Gly Gly 80 85 90 aaa gaa tgg tcc tac atc gtt gaa agg tcg tca gcc gtc aat gga atg 340 Lys Glu Trp Ser Tyr Ile Val Glu Arg Ser Ser Ala Val Asn Gly Met 95 100 105 tgt tac cca ggg aat gta gag aac cta gaa gag ctt agg tca ctt ttc 388 Cys Tyr Pro Gly Asn Val Glu Asn Leu Glu Glu Leu Arg Ser Leu Phe 110 115 120 agt tct gca aaa tct tac aaa aga atc caa atc ttt cca gat aaa act 436 Ser Ser Ala Lys Ser Tyr Lys Arg Ile Gln Ile Phe Pro Asp Lys Thr 125 130 135 tgg aat gta aca tac agc gga aca agc aga gca tgc tca aat tca ttc 484 Trp Asn Val Thr Tyr Ser Gly Thr Ser Arg Ala Cys Ser Asn Ser Phe 140 145 150 155 tat agg agc atg aga tgg ctg acc cac aag agt aat tcc tac cct ttt 532 Tyr Arg Ser Met Arg Trp Leu Thr His Lys Ser Asn Ser Tyr Pro Phe 160 165 170 cag aac gct cat tac acc aac aat gag agg gag aac att ctt ttc atg 580 Gln Asn Ala His Tyr Thr Asn Asn Glu Arg Glu Asn Ile Leu Phe Met 175 180 185 tgg ggc ata cac cat cca cct acc gac aca gaa cag aca gac tta tac 628 Trp Gly Ile His His Pro Pro Thr Asp Thr Glu Gln Thr Asp Leu Tyr 190 195 200 aag aat gcc gat aca aca aca agt gtg aca aca gaa gat ata aat cgc 676 Lys Asn Ala Asp Thr Thr Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Ile Asn Arg 205 210 215 act ttc aaa cca gta ata ggg cca agg ccc ctt gtc aac ggc cag cag 724 Thr Phe Lys Pro Val Ile Gly Pro Arg Pro Leu Val Asn Gly Gln Gln 220 225 230 235 gga aga atc gat tac tat tgg tct gta cta aaa cct ggg cag act ttg 772 Gly Arg Ile Asp Tyr Tyr Trp Ser Val Leu Lys Pro Gly Gln Thr Leu 240 245 250 aga ata agg tcc aat gga aat cta att gcc cct tgg tat gga cat gtt 820 Arg Ile Arg Ser Asn Gly Asn Leu Ile Ala Pro Trp Tyr Gly His Val 255 260 265 ctt acg gga gag agc cat gga aga atc cta aag act gat ttg aac aat 868 Leu Thr Gly Glu Ser His Gly Arg Ile Leu Lys Thr Asp Leu Asn Asn 270 275 280 ggt aat tgt gtg gta caa tgt cag act gaa aaa gga gga ctc aat aca 916 Gly Asn Cys Val Val Gln Cys Gln Thr Glu Lys Gly Gly Leu Asn Thr 285 290 295 acc ttg cca ttt cac aat att agc aaa tat gca ttt ggg aat tgt cct 964 Thr Leu Pro Phe His Asn Ile Ser Lys Tyr Ala Phe Gly Asn Cys Pro 300 305 310 315 aag tat gtt gga gtg aaa agt ctc aaa ttg gca gtt ggt tta agg aat 1012 Lys Tyr Val Gly Val Lys Ser Leu Lys Leu Ala Val Gly Leu Arg Asn 320 325 330 gtg cct gct gta tct agt aga gga ctg ttc gga gca ata gct ggg ttc 1060 Val Pro Ala Val Ser Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe 335 340 345 ata gag gga ggt tgg cca ggg cta gtg gcc gga tgg tat ggt ttt caa 1108 Ile Glu Gly Gly Trp Pro Gly Leu Val Ala Gly Trp Tyr Gly Phe Gln 350 355 360 cat tca aac gat cag gga gtt ggg atg gcc gca gac aag gga tct acc 1156 His Ser Asn Asp Gln Gly Val Gly Met Ala Ala Asp Lys Gly Ser Thr 365 370 375 caa aaa gca atc gat aaa ata aca tca aaa gtg aac aac ata atc gat 1204 Gln Lys Ala Ile Asp Lys Ile Thr Ser Lys Val Asn Asn Ile Ile Asp 380 385 390 395 aaa atg aac aag caa tat gag gtc att gat cat gaa ttc aat gag ctt 1252 Lys Met Asn Lys Gln Tyr Glu Val Ile Asp His Glu Phe Asn Glu Leu 400 405 410 gag gcc agg ctg aac atg atc aac aac aaa att gat gat cag att caa 1300 Glu Ala Arg Leu Asn Met Ile Asn Asn Lys Ile Asp Asp Gln Ile Gln 415 420 425 gac att tgg gct tat aat gca gag ttg ctg gtc ttg ctt gaa aac cag 1348 Asp Ile Trp Ala Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Gln 430 435 440 aaa act cta gat gag cat gat gca aat gtg aac aac cta tac aac aaa 1396 Lys Thr Leu Asp Glu His Asp Ala Asn Val Asn Asn Leu Tyr Asn Lys 445 450 455 gtg aaa aga gcc ttg ggt tcc aat gct gta gag gat gga aac gga tgc 1444 Val Lys Arg Ala Leu Gly Ser Asn Ala Val Glu Asp Gly Asn Gly Cys 460 465 470 475 ttt gaa ctg tac cac aaa tgt gat gat caa tgc atg gaa aca atc aga 1492 Phe Glu Leu Tyr His Lys Cys Asp Asp Gln Cys Met Glu Thr Ile Arg 480 485 490 aat gga acc tac gac agg cag aaa tac caa gaa gaa tca aga tta gaa 1540 Asn Gly Thr Tyr Asp Arg Gln Lys Tyr Gln Glu Glu Ser Arg Leu Glu 495 500 505 agg cag aaa ata gaa ggg gta aag ctg gaa tct gag ggc act tac aag 1588 Arg Gln Lys Ile Glu Gly Val Lys Leu Glu Ser Glu Gly Thr Tyr Lys 510 515 520 atc ctc acc att tat tcg act gtc gcc tca tct ctt gtg ctt gca atg 1636 Ile Leu Thr Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Val Leu Ala Met 525 530 535 ggg ttt gct gcc ttc cta ttc tgg gcc atg tcc aat ggc tct tgc aga 1684 Gly Phe Ala Ala Phe Leu Phe Trp Ala Met Ser Asn Gly Ser Cys Arg 540 545 550 555 tgc aac att tgt ata taa ttagca 1708 Cys Asn Ile Cys Ile 560 <210> 22 <211> 560 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 22 Met Glu Thr Lys Ala Ile Ile Ala Ala Leu Leu Met Val Thr Ala Ala 1 5 10 15 Asn Ala Asp Lys Ile Cys Ile Gly Tyr Gln Ser Thr Asn Ser Thr Glu 20 25 30 Thr Val Asp Thr Leu Thr Glu Ser Asn Val Pro Val Thr His Thr Lys 35 40 45 Glu Leu Leu His Thr Glu His Asn Gly Met Leu Cys Ala Thr Asp Leu 50 55 60 Gly His Pro Leu Ile Leu Asp Thr Cys Thr Ile Glu Gly Leu Ile Tyr 65 70 75 80 Gly Asn Pro Ser Cys Asp Ile Leu Leu Gly Gly Lys Glu Trp Ser Tyr 85 90 95 Ile Val Glu Arg Ser Ser Ala Val Asn Gly Met Cys Tyr Pro Gly Asn 100 105 110 Val Glu Asn Leu Glu Glu Leu Arg Ser Leu Phe Ser Ser Ala Lys Ser 115 120 125 Tyr Lys Arg Ile Gln Ile Phe Pro Asp Lys Thr Trp Asn Val Thr Tyr 130 135 140 Ser Gly Thr Ser Arg Ala Cys Ser Asn Ser Phe Tyr Arg Ser Met Arg 145 150 155 160 Trp Leu Thr His Lys Ser Asn Ser Tyr Pro Phe Gln Asn Ala His Tyr 165 170 175 Thr Asn Asn Glu Arg Glu Asn Ile Leu Phe Met Trp Gly Ile His His 180 185 190 Pro Pro Thr Asp Thr Glu Gln Thr Asp Leu Tyr Lys Asn Ala Asp Thr 195 200 205 Thr Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Ile Asn Arg Thr Phe Lys Pro Val 210 215 220 Ile Gly Pro Arg Pro Leu Val Asn Gly Gln Gln Gly Arg Ile Asp Tyr 225 230 235 240 Tyr Trp Ser Val Leu Lys Pro Gly Gln Thr Leu Arg Ile Arg Ser Asn 245 250 255 Gly Asn Leu Ile Ala Pro Trp Tyr Gly His Val Leu Thr Gly Glu Ser 260 265 270 His Gly Arg Ile Leu Lys Thr Asp Leu Asn Asn Gly Asn Cys Val Val 275 280 285 Gln Cys Gln Thr Glu Lys Gly Gly Leu Asn Thr Thr Leu Pro Phe His 290 295 300 Asn Ile Ser Lys Tyr Ala Phe Gly Asn Cys Pro Lys Tyr Val Gly Val 305 310 315 320 Lys Ser Leu Lys Leu Ala Val Gly Leu Arg Asn Val Pro Ala Val Ser 325 330 335 Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp 340 345 350 Pro Gly Leu Val Ala Gly Trp Tyr Gly Phe Gln His Ser Asn Asp Gln 355 360 365 Gly Val Gly Met Ala Ala Asp Lys Gly Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp 370 375 380 Lys Ile Thr Ser Lys Val Asn Asn Ile Ile Asp Lys Met Asn Lys Gln 385 390 395 400 Tyr Glu Val Ile Asp His Glu Phe Asn Glu Leu Glu Ala Arg Leu Asn 405 410 415 Met Ile Asn Asn Lys Ile Asp Asp Gln Ile Gln Asp Ile Trp Ala Tyr 420 425 430 Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Gln Lys Thr Leu Asp Glu 435 440 445 His Asp Ala Asn Val Asn Asn Leu Tyr Asn Lys Val Lys Arg Ala Leu 450 455 460 Gly Ser Asn Ala Val Glu Asp Gly Asn Gly Cys Phe Glu Leu Tyr His 465 470 475 480 Lys Cys Asp Asp Gln Cys Met Glu Thr Ile Arg Asn Gly Thr Tyr Asp 485 490 495 Arg Gln Lys Tyr Gln Glu Glu Ser Arg Leu Glu Arg Gln Lys Ile Glu 500 505 510 Gly Val Lys Leu Glu Ser Glu Gly Thr Tyr Lys Ile Leu Thr Ile Tyr 515 520 525 Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Val Leu Ala Met Gly Phe Ala Ala Phe 530 535 540 Leu Phe Trp Ala Met Ser Asn Gly Ser Cys Arg Cys Asn Ile Cys Ile 545 550 555 560 <210> 23 <211> 1694 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (6)..(1691) <223> <400> 23 tcaca atg tac aaa gta gta gta ata att gcg ctc ctt gga gca gtg aaa 50 Met Tyr Lys Val Val Val Ile Ile Ala Leu Leu Gly Ala Val Lys 1 5 10 15 ggt ctt gac aga atc tgc cta gga cac cat gcg gtt gcc aat gga acc 98 Gly Leu Asp Arg Ile Cys Leu Gly His His Ala Val Ala Asn Gly Thr 20 25 30 att gtg aag acc ctt aca aat gaa caa gag gaa gtg acc aat gct act 146 Ile Val Lys Thr Leu Thr Asn Glu Gln Glu Glu Val Thr Asn Ala Thr 35 40 45 gag acg gta gag agc aca aat ttg aat aaa ttg tgt atg aaa gga aga 194 Glu Thr Val Glu Ser Thr Asn Leu Asn Lys Leu Cys Met Lys Gly Arg 50 55 60 agc tac aag gac ttg ggc aat tgt cac ccg gta gga atg ttg ata gga 242 Ser Tyr Lys Asp Leu Gly Asn Cys His Pro Val Gly Met Leu Ile Gly 65 70 75 aca cct gtt tgt gat ccg cac ttg acc ggg acc tgg gac act ctc att 290 Thr Pro Val Cys Asp Pro His Leu Thr Gly Thr Trp Asp Thr Leu Ile 80 85 90 95 gag cga gag aat gcc att gcc cac tgt tat cca ggg gca acc ata aat 338 Glu Arg Glu Asn Ala Ile Ala His Cys Tyr Pro Gly Ala Thr Ile Asn 100 105 110 gaa gaa gca ttg agg cag aaa ata atg gaa agt gga gga atc agc aag 386 Glu Glu Ala Leu Arg Gln Lys Ile Met Glu Ser Gly Gly Ile Ser Lys 115 120 125 atg agc act ggc ttc act tat ggg tct tcc atc aac tca gct ggg acc 434 Met Ser Thr Gly Phe Thr Tyr Gly Ser Ser Ile Asn Ser Ala Gly Thr 130 135 140 act aag gca tgc atg aga aat gga gga gat agt ttc tat gca gag ctc 482 Thr Lys Ala Cys Met Arg Asn Gly Gly Asp Ser Phe Tyr Ala Glu Leu 145 150 155 aaa tgg cta gtg tca aag aca aag gga caa aat ttc cct cag aca aca 530 Lys Trp Leu Val Ser Lys Thr Lys Gly Gln Asn Phe Pro Gln Thr Thr 160 165 170 175 aac acc tat cgg aat acg gac aca gca gaa cat ctc ata ata tgg gga 578 Asn Thr Tyr Arg Asn Thr Asp Thr Ala Glu His Leu Ile Ile Trp Gly 180 185 190 att cat cac cct tcc agc aca cag gaa aag aat gac tta tac gga act 626 Ile His His Pro Ser Ser Thr Gln Glu Lys Asn Asp Leu Tyr Gly Thr 195 200 205 cag tca cta tct ata tca gtt gag agt tct aca tat cag aac aac ttt 674 Gln Ser Leu Ser Ile Ser Val Glu Ser Ser Thr Tyr Gln Asn Asn Phe 210 215 220 gtt cca gtt gtt ggg gca aga cct cag gtc aat gga caa agt ggg cga 722 Val Pro Val Val Gly Ala Arg Pro Gln Val Asn Gly Gln Ser Gly Arg 225 230 235 att gac ttt cac tgg aca cta gta cag ccg ggt gac aac ata acc ttc 770 Ile Asp Phe His Trp Thr Leu Val Gln Pro Gly Asp Asn Ile Thr Phe 240 245 250 255 tca cac aat gga ggt cta ata gca cca agt cga gtt agc aaa tta act 818 Ser His Asn Gly Gly Leu Ile Ala Pro Ser Arg Val Ser Lys Leu Thr 260 265 270 gga agg gga ttg gga atc caa tca gaa gcg ttg ata gac aac agt tgt 866 Gly Arg Gly Leu Gly Ile Gln Ser Glu Ala Leu Ile Asp Asn Ser Cys 275 280 285 gaa tcc aaa tgc ttt tgg aga ggg ggt tct ata aat aca aag ctc cct 914 Glu Ser Lys Cys Phe Trp Arg Gly Gly Ser Ile Asn Thr Lys Leu Pro 290 295 300 ttt caa aat ctg tca ccc aga aca gta ggt caa tgc ccc aaa tac gta 962 Phe Gln Asn Leu Ser Pro Arg Thr Val Gly Gln Cys Pro Lys Tyr Val 305 310 315 aat cag agg agt tta ctg ctt gca aca ggg atg agg aat gtg cca gaa 1010 Asn Gln Arg Ser Leu Leu Leu Ala Thr Gly Met Arg Asn Val Pro Glu 320 325 330 335 gtg gtg cag gga agg ggt ctg ttt ggt gca ata gca ggg ttc ata gaa 1058 Val Val Gln Gly Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu 340 345 350 aac gga tgg gaa gga atg gta gac ggc tgg tat ggt ttc aga cac caa 1106 Asn Gly Trp Glu Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Phe Arg His Gln 355 360 365 aat gcc cag ggc aca ggc caa gct gct gat tac aag agt act caa gca 1154 Asn Ala Gln Gly Thr Gly Gln Ala Ala Asp Tyr Lys Ser Thr Gln Ala 370 375 380 gct att gac caa atc aca ggg aaa ctg aac agg ttg att gag aag acc 1202 Ala Ile Asp Gln Ile Thr Gly Lys Leu Asn Arg Leu Ile Glu Lys Thr 385 390 395 aac act gag ttt gag tca ata gaa tct gaa ttc agt gag act gag cat 1250 Asn Thr Glu Phe Glu Ser Ile Glu Ser Glu Phe Ser Glu Thr Glu His 400 405 410 415 caa att ggt aac gtc att aat tgg acc aaa gat tca ata acc gac att 1298 Gln Ile Gly Asn Val Ile Asn Trp Thr Lys Asp Ser Ile Thr Asp Ile 420 425 430 tgg act tat caa gca gag cta tta gtg gca atg gag aat cag cac aca 1346 Trp Thr Tyr Gln Ala Glu Leu Leu Val Ala Met Glu Asn Gln His Thr 435 440 445 att gac atg gct gat tca gag atg cta aat ctg tat gaa agg gta aga 1394 Ile Asp Met Ala Asp Ser Glu Met Leu Asn Leu Tyr Glu Arg Val Arg 450 455 460 aag caa ctc aga cag aat gca gaa gaa gac gga aag gga tgt ttt gag 1442 Lys Gln Leu Arg Gln Asn Ala Glu Glu Asp Gly Lys Gly Cys Phe Glu 465 470 475 ata tat cat act tgt gat gat tcg tgc atg gag agt ata agg aac aat 1490 Ile Tyr His Thr Cys Asp Asp Ser Cys Met Glu Ser Ile Arg Asn Asn 480 485 490 495 act tat gac cat tca caa tac aga gag gag gct ctt ctg aat aga ctg 1538 Thr Tyr Asp His Ser Gln Tyr Arg Glu Glu Ala Leu Leu Asn Arg Leu 500 505 510 aac atc aac tca gtg aaa ctt tct tcg ggg tac aaa gac atc ata ctt 1586 Asn Ile Asn Ser Val Lys Leu Ser Ser Gly Tyr Lys Asp Ile Ile Leu 515 520 525 tgg ttt agc ttc ggg gca tca tgc ttt gtt ctt cta gcc gtt gtt atg 1634 Trp Phe Ser Phe Gly Ala Ser Cys Phe Val Leu Leu Ala Val Val Met 530 535 540 ggt ctt gtt ttc ttc tgc ctg aaa aat gga aac atg cga tgc aca atc 1682 Gly Leu Val Phe Phe Cys Leu Lys Asn Gly Asn Met Arg Cys Thr Ile 545 550 555 tgt att tag tta 1694 Cys Ile 560 <210> 24 <211> 561 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 24 Met Tyr Lys Val Val Val Ile Ile Ala Leu Leu Gly Ala Val Lys Gly 1 5 10 15 Leu Asp Arg Ile Cys Leu Gly His His Ala Val Ala Asn Gly Thr Ile 20 25 30 Val Lys Thr Leu Thr Asn Glu Gln Glu Glu Val Thr Asn Ala Thr Glu 35 40 45 Thr Val Glu Ser Thr Asn Leu Asn Lys Leu Cys Met Lys Gly Arg Ser 50 55 60 Tyr Lys Asp Leu Gly Asn Cys His Pro Val Gly Met Leu Ile Gly Thr 65 70 75 80 Pro Val Cys Asp Pro His Leu Thr Gly Thr Trp Asp Thr Leu Ile Glu 85 90 95 Arg Glu Asn Ala Ile Ala His Cys Tyr Pro Gly Ala Thr Ile Asn Glu 100 105 110 Glu Ala Leu Arg Gln Lys Ile Met Glu Ser Gly Gly Ile Ser Lys Met 115 120 125 Ser Thr Gly Phe Thr Tyr Gly Ser Ser Ile Asn Ser Ala Gly Thr Thr 130 135 140 Lys Ala Cys Met Arg Asn Gly Gly Asp Ser Phe Tyr Ala Glu Leu Lys 145 150 155 160 Trp Leu Val Ser Lys Thr Lys Gly Gln Asn Phe Pro Gln Thr Thr Asn 165 170 175 Thr Tyr Arg Asn Thr Asp Thr Ala Glu His Leu Ile Ile Trp Gly Ile 180 185 190 His His Pro Ser Ser Thr Gln Glu Lys Asn Asp Leu Tyr Gly Thr Gln 195 200 205 Ser Leu Ser Ile Ser Val Glu Ser Ser Thr Tyr Gln Asn Asn Phe Val 210 215 220 Pro Val Val Gly Ala Arg Pro Gln Val Asn Gly Gln Ser Gly Arg Ile 225 230 235 240 Asp Phe His Trp Thr Leu Val Gln Pro Gly Asp Asn Ile Thr Phe Ser 245 250 255 His Asn Gly Gly Leu Ile Ala Pro Ser Arg Val Ser Lys Leu Thr Gly 260 265 270 Arg Gly Leu Gly Ile Gln Ser Glu Ala Leu Ile Asp Asn Ser Cys Glu 275 280 285 Ser Lys Cys Phe Trp Arg Gly Gly Ser Ile Asn Thr Lys Leu Pro Phe 290 295 300 Gln Asn Leu Ser Pro Arg Thr Val Gly Gln Cys Pro Lys Tyr Val Asn 305 310 315 320 Gln Arg Ser Leu Leu Leu Ala Thr Gly Met Arg Asn Val Pro Glu Val 325 330 335 Val Gln Gly Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Asn 340 345 350 Gly Trp Glu Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Phe Arg His Gln Asn 355 360 365 Ala Gln Gly Thr Gly Gln Ala Ala Asp Tyr Lys Ser Thr Gln Ala Ala 370 375 380 Ile Asp Gln Ile Thr Gly Lys Leu Asn Arg Leu Ile Glu Lys Thr Asn 385 390 395 400 Thr Glu Phe Glu Ser Ile Glu Ser Glu Phe Ser Glu Thr Glu His Gln 405 410 415 Ile Gly Asn Val Ile Asn Trp Thr Lys Asp Ser Ile Thr Asp Ile Trp 420 425 430 Thr Tyr Gln Ala Glu Leu Leu Val Ala Met Glu Asn Gln His Thr Ile 435 440 445 Asp Met Ala Asp Ser Glu Met Leu Asn Leu Tyr Glu Arg Val Arg Lys 450 455 460 Gln Leu Arg Gln Asn Ala Glu Glu Asp Gly Lys Gly Cys Phe Glu Ile 465 470 475 480 Tyr His Thr Cys Asp Asp Ser Cys Met Glu Ser Ile Arg Asn Asn Thr 485 490 495 Tyr Asp His Ser Gln Tyr Arg Glu Glu Ala Leu Leu Asn Arg Leu Asn 500 505 510 Ile Asn Ser Val Lys Leu Ser Ser Gly Tyr Lys Asp Ile Ile Leu Trp 515 520 525 Phe Ser Phe Gly Ala Ser Cys Phe Val Leu Leu Ala Val Val Met Gly 530 535 540 Leu Val Phe Phe Cys Leu Lys Asn Gly Asn Met Arg Cys Thr Ile Cys 545 550 555 560 Ile <210> 25 <211> 281 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (33)..(281) <223> <400> 25 agcaaaagca ggggatctat caagaagtcg aa atg gag aaa atc ctg cta ttt 53 Met Glu Lys Ile Leu Leu Phe 1 5 gca gct att ttc ctt tgt gtg aaa gca gat gag atc tgt atc ggg tat 101 Ala Ala Ile Phe Leu Cys Val Lys Ala Asp Glu Ile Cys Ile Gly Tyr 10 15 20 tta agc aac aac tcg aca gac aaa gtt gac aca ata att gag aac aat 149 Leu Ser Asn Asn Ser Thr Asp Lys Val Asp Thr Ile Ile Glu Asn Asn 25 30 35 gtc acg gtc act agc tca gtg gaa ctg gtt gag aca gaa cac act gga 197 Val Thr Val Thr Ser Ser Val Glu Leu Val Glu Thr Glu His Thr Gly 40 45 50 55 tca ttc tgt tca atc aat gga aaa caa cca atc agc ctt gga gat tgt 245 Ser Phe Cys Ser Ile Asn Gly Lys Gln Pro Ile Ser Leu Gly Asp Cys 60 65 70 tca ttt gct gga tgg ata tta ggc aac cct atg tgt 281 Ser Phe Ala Gly Trp Ile Leu Gly Asn Pro Met Cys 75 80 <210> 26 <211> 83 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 26 Met Glu Lys Ile Leu Leu Phe Ala Ala Ile Phe Leu Cys Val Lys Ala 1 5 10 15 Asp Glu Ile Cys Ile Gly Tyr Leu Ser Asn Asn Ser Thr Asp Lys Val 20 25 30 Asp Thr Ile Ile Glu Asn Asn Val Thr Val Thr Ser Ser Val Glu Leu 35 40 45 Val Glu Thr Glu His Thr Gly Ser Phe Cys Ser Ile Asn Gly Lys Gln 50 55 60 Pro Ile Ser Leu Gly Asp Cys Ser Phe Ala Gly Trp Ile Leu Gly Asn 65 70 75 80 Pro Met Cys <210> 27 <211> 322 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (20)..(322) <223> <400> 27 agcaaaagca ggggtcaca atg gaa aaa ttc atc att ttg agt act gtc ttg 52 Met Glu Lys Phe Ile Ile Leu Ser Thr Val Leu 1 5 10 gca gca agc ttt gca tat gac aaa att tgc att gga tac cag aca aac 100 Ala Ala Ser Phe Ala Tyr Asp Lys Ile Cys Ile Gly Tyr Gln Thr Asn 15 20 25 aac tcg act gaa acg gta aac aca cta agt gaa tta aac gtt ccg gtg 148 Asn Ser Thr Glu Thr Val Asn Thr Leu Ser Glu Leu Asn Val Pro Val 30 35 40 acg cag gtg gaa gaa ctt gta cat ggt ggg att gat ccg atc ctg tgt 196 Thr Gln Val Glu Glu Leu Val His Gly Gly Ile Asp Pro Ile Leu Cys 45 50 55 gga acg gaa cta gga tca cca cta gtg ctt gat gac tgt tca tta gag 244 Gly Thr Glu Leu Gly Ser Pro Leu Val Leu Asp Asp Cys Ser Leu Glu 60 65 70 75 ggc cta atc cta ggc aat ccc aaa tgt gat ctt tat ttg aat ggc agg 292 Gly Leu Ile Leu Gly Asn Pro Lys Cys Asp Leu Tyr Leu Asn Gly Arg 80 85 90 gaa tgg tca tac ata gta gag agg ccc aaa 322 Glu Trp Ser Tyr Ile Val Glu Arg Pro Lys 95 100 <210> 28 <211> 101 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 28 Met Glu Lys Phe Ile Ile Leu Ser Thr Val Leu Ala Ala Ser Phe Ala 1 5 10 15 Tyr Asp Lys Ile Cys Ile Gly Tyr Gln Thr Asn Asn Ser Thr Glu Thr 20 25 30 Val Asn Thr Leu Ser Glu Leu Asn Val Pro Val Thr Gln Val Glu Glu 35 40 45 Leu Val His Gly Gly Ile Asp Pro Ile Leu Cys Gly Thr Glu Leu Gly 50 55 60 Ser Pro Leu Val Leu Asp Asp Cys Ser Leu Glu Gly Leu Ile Leu Gly 65 70 75 80 Asn Pro Lys Cys Asp Leu Tyr Leu Asn Gly Arg Glu Trp Ser Tyr Ile 85 90 95 Val Glu Arg Pro Lys 100 <210> 29 <211> 1734 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (28)..(1728) <223> <400> 29 aaatcttaac aatcagaaac aaacaag atg gct cta aat gtc att gca act ttg 54 Met Ala Leu Asn Val Ile Ala Thr Leu 1 5 aca ctt ata agt gta tgt gta cat gca gac aga ata tgc gtg ggg tat 102 Thr Leu Ile Ser Val Cys Val His Ala Asp Arg Ile Cys Val Gly Tyr 10 15 20 25 ctg agc acc aat tca tca gaa agg gtc gac acg ctc ctt gaa aat ggg 150 Leu Ser Thr Asn Ser Ser Glu Arg Val Asp Thr Leu Leu Glu Asn Gly 30 35 40 gtc cca gtc acc agc tcc att gat ctg att gag aca aac cac aca gga 198 Val Pro Val Thr Ser Ser Ile Asp Leu Ile Glu Thr Asn His Thr Gly 45 50 55 aca tac tgt tct cta aat gga gtc agt cca gtg cat ttg gga gat tgc 246 Thr Tyr Cys Ser Leu Asn Gly Val Ser Pro Val His Leu Gly Asp Cys 60 65 70 agc ttt gaa gga tgg att gta gga aac cca gcc tgc acc agc aac ttt 294 Ser Phe Glu Gly Trp Ile Val Gly Asn Pro Ala Cys Thr Ser Asn Phe 75 80 85 ggg acc aga gag tgg tca tac ctg att gag gac ccc gcg gcc cct cat 342 Gly Thr Arg Glu Trp Ser Tyr Leu Ile Glu Asp Pro Ala Ala Pro His 90 95 100 105 ggg ctt tgc tac cct gga gaa tta aac aac aat ggt gaa ctc aga cac 390 Gly Leu Cys Tyr Pro Gly Glu Leu Asn Asn Asn Gly Glu Leu Arg His 110 115 120 ttg ttc agt gga atc agg tca ttc agt aga acg gaa ttg atc cca cct 438 Leu Phe Ser Gly Ile Arg Ser Phe Ser Arg Thr Glu Leu Ile Pro Pro 125 130 135 acc tcc tgg ggg gaa gta ctt gac ggt aca aca tct gct tgc aga gat 486 Thr Ser Trp Gly Glu Val Leu Asp Gly Thr Thr Ser Ala Cys Arg Asp 140 145 150 aac acg gga acc aac agc ttc tat cga aat tta gtt tgg ttt ata aag 534 Asn Thr Gly Thr Asn Ser Phe Tyr Arg Asn Leu Val Trp Phe Ile Lys 155 160 165 aag aat aat aga tat cca gtt atc agt aag acc tac aac aat aca acg 582 Lys Asn Asn Arg Tyr Pro Val Ile Ser Lys Thr Tyr Asn Asn Thr Thr 170 175 180 185 gga agg gat gtt tta gtt tta tgg gga ata cat cac cca gtg tct gtg 630 Gly Arg Asp Val Leu Val Leu Trp Gly Ile His His Pro Val Ser Val 190 195 200 gat gag aca aag act ctg tat gtc aat agt gat cca tac aca ctg gtt 678 Asp Glu Thr Lys Thr Leu Tyr Val Asn Ser Asp Pro Tyr Thr Leu Val 205 210 215 tcc acc aag tct tgg agc gag aaa tat aaa cta gaa acg gga gtc cga 726 Ser Thr Lys Ser Trp Ser Glu Lys Tyr Lys Leu Glu Thr Gly Val Arg 220 225 230 cct ggc tat aat gga cag agg agc tgg atg aaa att tat tgg tct ttg 774 Pro Gly Tyr Asn Gly Gln Arg Ser Trp Met Lys Ile Tyr Trp Ser Leu 235 240 245 ata cat cca ggg gag atg att act ttc gag agt aat ggt gga ttt tta 822 Ile His Pro Gly Glu Met Ile Thr Phe Glu Ser Asn Gly Gly Phe Leu 250 255 260 265 gcc cca aga tat ggg tac ata att gaa gaa tat gga aaa gga agg att 870 Ala Pro Arg Tyr Gly Tyr Ile Ile Glu Glu Tyr Gly Lys Gly Arg Ile 270 275 280 ttc cag agt cgc atc aga atg tct agg tgc aac acc aag tgc cag act 918 Phe Gln Ser Arg Ile Arg Met Ser Arg Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr 285 290 295 tcg gtt gga ggg ata aac aca aac aga acg ttc caa aac atc gat aag 966 Ser Val Gly Gly Ile Asn Thr Asn Arg Thr Phe Gln Asn Ile Asp Lys 300 305 310 aat gct ctt ggt gac tgt ccc aaa tac ata aag tct ggc caa ctc aag 1014 Asn Ala Leu Gly Asp Cys Pro Lys Tyr Ile Lys Ser Gly Gln Leu Lys 315 320 325 cta gcc act gga ctc aga aat gtg cca gct ata tcg aat aga gga ttg 1062 Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val Pro Ala Ile Ser Asn Arg Gly Leu 330 335 340 345 ttc gga gca att gca ggg ttc ata gaa gga ggc tgg cca ggt tta atc 1110 Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Pro Gly Leu Ile 350 355 360 aat ggt tgg tac ggt ttt cag cat caa aat gaa cag gga aca gga ata 1158 Asn Gly Trp Tyr Gly Phe Gln His Gln Asn Glu Gln Gly Thr Gly Ile 365 370 375 gct gca gac aaa gaa tca aca cag aaa gct ata gac cag ata aca acc 1206 Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gln Ile Thr Thr 380 385 390 aaa ata aat aac att att gat aaa atg aat ggg aac tat gat tca att 1254 Lys Ile Asn Asn Ile Ile Asp Lys Met Asn Gly Asn Tyr Asp Ser Ile 395 400 405 agg ggt gaa ttc aat caa gtt gag aag cgt ata aac atg ctt gca gac 1302 Arg Gly Glu Phe Asn Gln Val Glu Lys Arg Ile Asn Met Leu Ala Asp 410 415 420 425 aga ata gat gat gcc gtg acg gac att tgg tca tac aat gcc aaa ctt 1350 Arg Ile Asp Asp Ala Val Thr Asp Ile Trp Ser Tyr Asn Ala Lys Leu 430 435 440 ctt gta ttg ctg gaa aat gat aaa act tta gat atg cat gat gct aat 1398 Leu Val Leu Leu Glu Asn Asp Lys Thr Leu Asp Met His Asp Ala Asn 445 450 455 gta aag aat tta cat gag caa gta cga aga gaa ttg aag gac aat gca 1446 Val Lys Asn Leu His Glu Gln Val Arg Arg Glu Leu Lys Asp Asn Ala 460 465 470 att gac gaa gga aat ggc tgt ttt gaa ctc ctt cat aaa tgc aat gac 1494 Ile Asp Glu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Leu Leu His Lys Cys Asn Asp 475 480 485 tcc tgc atg gaa act ata aga aat gga acg tat gac cac act gag tat 1542 Ser Cys Met Glu Thr Ile Arg Asn Gly Thr Tyr Asp His Thr Glu Tyr 490 495 500 505 gca gag gag tca aag tta aag agg caa gaa atc gat ggg atc aaa ctc 1590 Ala Glu Glu Ser Lys Leu Lys Arg Gln Glu Ile Asp Gly Ile Lys Leu 510 515 520 aaa tca gaa gac aac gtt tac aaa gca tta tca ata tac agt tgc att 1638 Lys Ser Glu Asp Asn Val Tyr Lys Ala Leu Ser Ile Tyr Ser Cys Ile 525 530 535 gca agt agt gtt gta cta gta gga ctc ata ctc tct ttc atc atg tgg 1686 Ala Ser Ser Val Val Leu Val Gly Leu Ile Leu Ser Phe Ile Met Trp 540 545 550 gcc tgt agt agt ggg aat tgc cga ttc aat gtt tgt ata taa gtagaa 1734 Ala Cys Ser Ser Gly Asn Cys Arg Phe Asn Val Cys Ile 555 560 565 <210> 30 <211> 566 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 30 Met Ala Leu Asn Val Ile Ala Thr Leu Thr Leu Ile Ser Val Cys Val 1 5 10 15 His Ala Asp Arg Ile Cys Val Gly Tyr Leu Ser Thr Asn Ser Ser Glu 20 25 30 Arg Val Asp Thr Leu Leu Glu Asn Gly Val Pro Val Thr Ser Ser Ile 35 40 45 Asp Leu Ile Glu Thr Asn His Thr Gly Thr Tyr Cys Ser Leu Asn Gly 50 55 60 Val Ser Pro Val His Leu Gly Asp Cys Ser Phe Glu Gly Trp Ile Val 65 70 75 80 Gly Asn Pro Ala Cys Thr Ser Asn Phe Gly Thr Arg Glu Trp Ser Tyr 85 90 95 Leu Ile Glu Asp Pro Ala Ala Pro His Gly Leu Cys Tyr Pro Gly Glu 100 105 110 Leu Asn Asn Asn Gly Glu Leu Arg His Leu Phe Ser Gly Ile Arg Ser 115 120 125 Phe Ser Arg Thr Glu Leu Ile Pro Pro Thr Ser Trp Gly Glu Val Leu 130 135 140 Asp Gly Thr Thr Ser Ala Cys Arg Asp Asn Thr Gly Thr Asn Ser Phe 145 150 155 160 Tyr Arg Asn Leu Val Trp Phe Ile Lys Lys Asn Asn Arg Tyr Pro Val 165 170 175 Ile Ser Lys Thr Tyr Asn Asn Thr Thr Gly Arg Asp Val Leu Val Leu 180 185 190 Trp Gly Ile His His Pro Val Ser Val Asp Glu Thr Lys Thr Leu Tyr 195 200 205 Val Asn Ser Asp Pro Tyr Thr Leu Val Ser Thr Lys Ser Trp Ser Glu 210 215 220 Lys Tyr Lys Leu Glu Thr Gly Val Arg Pro Gly Tyr Asn Gly Gln Arg 225 230 235 240 Ser Trp Met Lys Ile Tyr Trp Ser Leu Ile His Pro Gly Glu Met Ile 245 250 255 Thr Phe Glu Ser Asn Gly Gly Phe Leu Ala Pro Arg Tyr Gly Tyr Ile 260 265 270 Ile Glu Glu Tyr Gly Lys Gly Arg Ile Phe Gln Ser Arg Ile Arg Met 275 280 285 Ser Arg Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Ser Val Gly Gly Ile Asn Thr 290 295 300 Asn Arg Thr Phe Gln Asn Ile Asp Lys Asn Ala Leu Gly Asp Cys Pro 305 310 315 320 Lys Tyr Ile Lys Ser Gly Gln Leu Lys Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn 325 330 335 Val Pro Ala Ile Ser Asn Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe 340 345 350 Ile Glu Gly Gly Trp Pro Gly Leu Ile Asn Gly Trp Tyr Gly Phe Gln 355 360 365 His Gln Asn Glu Gln Gly Thr Gly Ile Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr 370 375 380 Gln Lys Ala Ile Asp Gln Ile Thr Thr Lys Ile Asn Asn Ile Ile Asp 385 390 395 400 Lys Met Asn Gly Asn Tyr Asp Ser Ile Arg Gly Glu Phe Asn Gln Val 405 410 415 Glu Lys Arg Ile Asn Met Leu Ala Asp Arg Ile Asp Asp Ala Val Thr 420 425 430 Asp Ile Trp Ser Tyr Asn Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Asp 435 440 445 Lys Thr Leu Asp Met His Asp Ala Asn Val Lys Asn Leu His Glu Gln 450 455 460 Val Arg Arg Glu Leu Lys Asp Asn Ala Ile Asp Glu Gly Asn Gly Cys 465 470 475 480 Phe Glu Leu Leu His Lys Cys Asn Asp Ser Cys Met Glu Thr Ile Arg 485 490 495 Asn Gly Thr Tyr Asp His Thr Glu Tyr Ala Glu Glu Ser Lys Leu Lys 500 505 510 Arg Gln Glu Ile Asp Gly Ile Lys Leu Lys Ser Glu Asp Asn Val Tyr 515 520 525 Lys Ala Leu Ser Ile Tyr Ser Cys Ile Ala Ser Ser Val Val Leu Val 530 535 540 Gly Leu Ile Leu Ser Phe Ile Met Trp Ala Cys Ser Ser Gly Asn Cys 545 550 555 560 Arg Phe Asn Val Cys Ile 565 <210> 31 <211> 1714 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (4)..(1710) <223> <400> 31 aaa atg att gca ctc ata ttg gtt gca ctg gct ctg agc cac act gct 48 Met Ile Ala Leu Ile Leu Val Ala Leu Ala Leu Ser His Thr Ala 1 5 10 15 tat tct cag atc aca aat ggg aca aca gga aac ccc att ata tgc ttg 96 Tyr Ser Gln Ile Thr Asn Gly Thr Thr Gly Asn Pro Ile Ile Cys Leu 20 25 30 ggg cat cat gca gtg gaa aac ggc aca tct gtt aaa aca cta aca gac 144 Gly His His Ala Val Glu Asn Gly Thr Ser Val Lys Thr Leu Thr Asp 35 40 45 aat cac gta gaa gtt gtg tca gct aaa gaa tta gtt gag acg aac cac 192 Asn His Val Glu Val Val Ser Ala Lys Glu Leu Val Glu Thr Asn His 50 55 60 act gat gaa ctg tgc cca agc ccc ttg aag ctt gtc gac ggg caa gac 240 Thr Asp Glu Leu Cys Pro Ser Pro Leu Lys Leu Val Asp Gly Gln Asp 65 70 75 tgc gac ctc atc aat ggt gca ttg ggg agt cca ggc tgt gac cgt ttg 288 Cys Asp Leu Ile Asn Gly Ala Leu Gly Ser Pro Gly Cys Asp Arg Leu 80 85 90 95 cag gac acc act tgg gat gtc ttc att gaa agg ccc act gca gta gac 336 Gln Asp Thr Thr Trp Asp Val Phe Ile Glu Arg Pro Thr Ala Val Asp 100 105 110 aca tgt tat cca ttc gac gtc cca gat tac cag agt ctc aga agc atc 384 Thr Cys Tyr Pro Phe Asp Val Pro Asp Tyr Gln Ser Leu Arg Ser Ile 115 120 125 cta gca agc agt ggg agt ttg gag ttc atc gcc gaa caa ttc acc tgg 432 Leu Ala Ser Ser Gly Ser Leu Glu Phe Ile Ala Glu Gln Phe Thr Trp 130 135 140 aat ggt gtc aaa gtt gac gga tca agc agt gct tgt ttg agg ggc ggt 480 Asn Gly Val Lys Val Asp Gly Ser Ser Ser Ala Cys Leu Arg Gly Gly 145 150 155 cgc aac agc ttc ttc tcc cga cta aac tgg cta acc aaa gaa aca aat 528 Arg Asn Ser Phe Phe Ser Arg Leu Asn Trp Leu Thr Lys Glu Thr Asn 160 165 170 175 gga aac tat gga cct att aac gtc act aaa gaa aat acg ggc tct tat 576 Gly Asn Tyr Gly Pro Ile Asn Val Thr Lys Glu Asn Thr Gly Ser Tyr 180 185 190 gtc agg ctc tat ctc tgg gga gtg cat cac cca tca agc gat aat gag 624 Val Arg Leu Tyr Leu Trp Gly Val His His Pro Ser Ser Asp Asn Glu 195 200 205 caa acg gat ctc tac aag gtg gca aca ggg aga gta aca gta tct acc 672 Gln Thr Asp Leu Tyr Lys Val Ala Thr Gly Arg Val Thr Val Ser Thr 210 215 220 cgc tcg gac caa atc agt att gtt ccc aat ata gga agt aga ccg agg 720 Arg Ser Asp Gln Ile Ser Ile Val Pro Asn Ile Gly Ser Arg Pro Arg 225 230 235 gta agg aat cag agc ggc agg ata agc atc tac tgg acc cta gta aac 768 Val Arg Asn Gln Ser Gly Arg Ile Ser Ile Tyr Trp Thr Leu Val Asn 240 245 250 255 cca ggg gac tcc atc att ttc aac agt att ggg aat ttg att gca cca 816 Pro Gly Asp Ser Ile Ile Phe Asn Ser Ile Gly Asn Leu Ile Ala Pro 260 265 270 aga ggc cac tac aaa ata agc aaa tct act aag agc aca gtg ctt aaa 864 Arg Gly His Tyr Lys Ile Ser Lys Ser Thr Lys Ser Thr Val Leu Lys 275 280 285 agt gac aaa agg att ggg tca tgc aca agc cct tgc tta act gat aaa 912 Ser Asp Lys Arg Ile Gly Ser Cys Thr Ser Pro Cys Leu Thr Asp Lys 290 295 300 ggt tcg atc caa agt gac aaa cct ttt cag aat gta tca agg att gct 960 Gly Ser Ile Gln Ser Asp Lys Pro Phe Gln Asn Val Ser Arg Ile Ala 305 310 315 ata gga aac tgc ccg aaa tat gta aag caa ggg tcc ctg atg tta gca 1008 Ile Gly Asn Cys Pro Lys Tyr Val Lys Gln Gly Ser Leu Met Leu Ala 320 325 330 335 act gga atg cgc aac atc cct ggc aaa cag gca aag ggc tta ttt ggg 1056 Thr Gly Met Arg Asn Ile Pro Gly Lys Gln Ala Lys Gly Leu Phe Gly 340 345 350 gca att gct gga ttc att gaa aat ggt tgg caa ggc ctg att gat ggg 1104 Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Asn Gly Trp Gln Gly Leu Ile Asp Gly 355 360 365 tgg tat gga ttc agg cac caa aat gct gaa gga aca gga act gct gca 1152 Trp Tyr Gly Phe Arg His Gln Asn Ala Glu Gly Thr Gly Thr Ala Ala 370 375 380 gac ctg aag tca act cag gca gcc att gat cag ata aat ggc aag ctg 1200 Asp Leu Lys Ser Thr Gln Ala Ala Ile Asp Gln Ile Asn Gly Lys Leu 385 390 395 aac aga ttg ata gag aag aca aat gaa aaa tat cac caa ata gaa aag 1248 Asn Arg Leu Ile Glu Lys Thr Asn Glu Lys Tyr His Gln Ile Glu Lys 400 405 410 415 gaa ttc gaa cag gtg gaa gga aga ata caa gac ctt gag aag tac gtt 1296 Glu Phe Glu Gln Val Glu Gly Arg Ile Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val 420 425 430 gag gac act aag att gat ttg tgg tca tac aat gct gaa ttg cta gta 1344 Glu Asp Thr Lys Ile Asp Leu Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val 435 440 445 gca cta gag aat cag cac aca ata gat gtc aca gac tcc gaa atg aac 1392 Ala Leu Glu Asn Gln His Thr Ile Asp Val Thr Asp Ser Glu Met Asn 450 455 460 aag ctt ttt gaa aga gta aga agg caa tta aga gag aat gca gaa gat 1440 Lys Leu Phe Glu Arg Val Arg Arg Gln Leu Arg Glu Asn Ala Glu Asp 465 470 475 caa ggc aac ggt tgt ttc gag ata ttc cat cag tgt gac aac aat tgt 1488 Gln Gly Asn Gly Cys Phe Glu Ile Phe His Gln Cys Asp Asn Asn Cys 480 485 490 495 ata gaa agc att aga aac gga act tat gac cac aac atc tac agg gat 1536 Ile Glu Ser Ile Arg Asn Gly Thr Tyr Asp His Asn Ile Tyr Arg Asp 500 505 510 gaa gcc atc aac aat cga atc aaa ata aat cct gtc act ttg acg atg 1584 Glu Ala Ile Asn Asn Arg Ile Lys Ile Asn Pro Val Thr Leu Thr Met 515 520 525 ggg tac aag gac ata atc ctg tgg att tct ttc tcc atg tca tgc ttt 1632 Gly Tyr Lys Asp Ile Ile Leu Trp Ile Ser Phe Ser Met Ser Cys Phe 530 535 540 gtc ttc gtg gca ctg att ctg gga ttt gtt cta tgg gct tgt caa aac 1680 Val Phe Val Ala Leu Ile Leu Gly Phe Val Leu Trp Ala Cys Gln Asn 545 550 555 ggg aat atc cga tgc caa atc tgt ata taa agaa 1714 Gly Asn Ile Arg Cys Gln Ile Cys Ile 560 565 <210> 32 <211> 568 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 32 Met Ile Ala Leu Ile Leu Val Ala Leu Ala Leu Ser His Thr Ala Tyr 1 5 10 15 Ser Gln Ile Thr Asn Gly Thr Thr Gly Asn Pro Ile Ile Cys Leu Gly 20 25 30 His His Ala Val Glu Asn Gly Thr Ser Val Lys Thr Leu Thr Asp Asn 35 40 45 His Val Glu Val Val Ser Ala Lys Glu Leu Val Glu Thr Asn His Thr 50 55 60 Asp Glu Leu Cys Pro Ser Pro Leu Lys Leu Val Asp Gly Gln Asp Cys 65 70 75 80 Asp Leu Ile Asn Gly Ala Leu Gly Ser Pro Gly Cys Asp Arg Leu Gln 85 90 95 Asp Thr Thr Trp Asp Val Phe Ile Glu Arg Pro Thr Ala Val Asp Thr 100 105 110 Cys Tyr Pro Phe Asp Val Pro Asp Tyr Gln Ser Leu Arg Ser Ile Leu 115 120 125 Ala Ser Ser Gly Ser Leu Glu Phe Ile Ala Glu Gln Phe Thr Trp Asn 130 135 140 Gly Val Lys Val Asp Gly Ser Ser Ser Ala Cys Leu Arg Gly Gly Arg 145 150 155 160 Asn Ser Phe Phe Ser Arg Leu Asn Trp Leu Thr Lys Glu Thr Asn Gly 165 170 175 Asn Tyr Gly Pro Ile Asn Val Thr Lys Glu Asn Thr Gly Ser Tyr Val 180 185 190 Arg Leu Tyr Leu Trp Gly Val His His Pro Ser Ser Asp Asn Glu Gln 195 200 205 Thr Asp Leu Tyr Lys Val Ala Thr Gly Arg Val Thr Val Ser Thr Arg 210 215 220 Ser Asp Gln Ile Ser Ile Val Pro Asn Ile Gly Ser Arg Pro Arg Val 225 230 235 240 Arg Asn Gln Ser Gly Arg Ile Ser Ile Tyr Trp Thr Leu Val Asn Pro 245 250 255 Gly Asp Ser Ile Ile Phe Asn Ser Ile Gly Asn Leu Ile Ala Pro Arg 260 265 270 Gly His Tyr Lys Ile Ser Lys Ser Thr Lys Ser Thr Val Leu Lys Ser 275 280 285 Asp Lys Arg Ile Gly Ser Cys Thr Ser Pro Cys Leu Thr Asp Lys Gly 290 295 300 Ser Ile Gln Ser Asp Lys Pro Phe Gln Asn Val Ser Arg Ile Ala Ile 305 310 315 320 Gly Asn Cys Pro Lys Tyr Val Lys Gln Gly Ser Leu Met Leu Ala Thr 325 330 335 Gly Met Arg Asn Ile Pro Gly Lys Gln Ala Lys Gly Leu Phe Gly Ala 340 345 350 Ile Ala Gly Phe Ile Glu Asn Gly Trp Gln Gly Leu Ile Asp Gly Trp 355 360 365 Tyr Gly Phe Arg His Gln Asn Ala Glu Gly Thr Gly Thr Ala Ala Asp 370 375 380 Leu Lys Ser Thr Gln Ala Ala Ile Asp Gln Ile Asn Gly Lys Leu Asn 385 390 395 400 Arg Leu Ile Glu Lys Thr Asn Glu Lys Tyr His Gln Ile Glu Lys Glu 405 410 415 Phe Glu Gln Val Glu Gly Arg Ile Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val Glu 420 425 430 Asp Thr Lys Ile Asp Leu Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala 435 440 445 Leu Glu Asn Gln His Thr Ile Asp Val Thr Asp Ser Glu Met Asn Lys 450 455 460 Leu Phe Glu Arg Val Arg Arg Gln Leu Arg Glu Asn Ala Glu Asp Gln 465 470 475 480 Gly Asn Gly Cys Phe Glu Ile Phe His Gln Cys Asp Asn Asn Cys Ile 485 490 495 Glu Ser Ile Arg Asn Gly Thr Tyr Asp His Asn Ile Tyr Arg Asp Glu 500 505 510 Ala Ile Asn Asn Arg Ile Lys Ile Asn Pro Val Thr Leu Thr Met Gly 515 520 525 Tyr Lys Asp Ile Ile Leu Trp Ile Ser Phe Ser Met Ser Cys Phe Val 530 535 540 Phe Val Ala Leu Ile Leu Gly Phe Val Leu Trp Ala Cys Gln Asn Gly 545 550 555 560 Asn Ile Arg Cys Gln Ile Cys Ile 565 <210> 33 <211> 1728 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (8)..(1720) <223> <400> 33 aaacaaa atg aac act caa atc atc gtc att cta gtc ctc gga ctg tcg 49 Met Asn Thr Gln Ile Ile Val Ile Leu Val Leu Gly Leu Ser 1 5 10 atg gtg aga tct gac aag att tgt ctc ggg cac cat gcc gta gca aat 97 Met Val Arg Ser Asp Lys Ile Cys Leu Gly His His Ala Val Ala Asn 15 20 25 30 ggg aca aaa gtc aac aca cta act gag aaa gga gtg gaa gtg gtc aat 145 Gly Thr Lys Val Asn Thr Leu Thr Glu Lys Gly Val Glu Val Val Asn 35 40 45 gcc acg gag aca gtg gag att aca gga ata aat aaa gtg tgc aca aaa 193 Ala Thr Glu Thr Val Glu Ile Thr Gly Ile Asn Lys Val Cys Thr Lys 50 55 60 ggg aag aaa gcg gtg gac ttg gga tct tgt gga ata ctg gga act atc 241 Gly Lys Lys Ala Val Asp Leu Gly Ser Cys Gly Ile Leu Gly Thr Ile 65 70 75 att ggg cct cca caa tgt gac tct cat ctt aaa ttc aaa gct gat ctg 289 Ile Gly Pro Pro Gln Cys Asp Ser His Leu Lys Phe Lys Ala Asp Leu 80 85 90 ata ata gaa aga aga aat tca agt gac atc tgt tac cca ggg aaa ttc 337 Ile Ile Glu Arg Arg Asn Ser Ser Asp Ile Cys Tyr Pro Gly Lys Phe 95 100 105 110 act aat gag gaa gca ctg aga caa ata atc aga gaa tct ggt gga att 385 Thr Asn Glu Glu Ala Leu Arg Gln Ile Ile Arg Glu Ser Gly Gly Ile 115 120 125 gac aaa gag cca atg gga ttt aga tat tca gga ata aaa aca gac ggg 433 Asp Lys Glu Pro Met Gly Phe Arg Tyr Ser Gly Ile Lys Thr Asp Gly 130 135 140 gca acc agt gcg tgt aag aga aca gtg tcc tct ttc tac tca gaa atg 481 Ala Thr Ser Ala Cys Lys Arg Thr Val Ser Ser Phe Tyr Ser Glu Met 145 150 155 aaa tgg ctt tta tcc agc aag gat aac cag gtg ttc cca caa ctg aat 529 Lys Trp Leu Leu Ser Ser Lys Asp Asn Gln Val Phe Pro Gln Leu Asn 160 165 170 cag aca tac agg aac aac aga aaa gaa cca gcc cta att gtt tgg gga 577 Gln Thr Tyr Arg Asn Asn Arg Lys Glu Pro Ala Leu Ile Val Trp Gly 175 180 185 190 gta cat cat tca agc tcc ttg gat gag caa aat aag cta tat gga gct 625 Val His His Ser Ser Ser Leu Asp Glu Gln Asn Lys Leu Tyr Gly Ala 195 200 205 ggg aac aag ctg ata aca gta gga agc tca aaa tac caa caa tcg ttt 673 Gly Asn Lys Leu Ile Thr Val Gly Ser Ser Lys Tyr Gln Gln Ser Phe 210 215 220 tca cca agt cca ggg gac agg ccc aaa gtg aat ggt cag gcc ggg agg 721 Ser Pro Ser Pro Gly Asp Arg Pro Lys Val Asn Gly Gln Ala Gly Arg 225 230 235 atc gac ttt cat tgg atg cta ttg gac cca ggg gat aca gtc act ttt 769 Ile Asp Phe His Trp Met Leu Leu Asp Pro Gly Asp Thr Val Thr Phe 240 245 250 acc ttc aat ggt gca ttc ata gcc cca gat aga gcc acc ttt ctc cgc 817 Thr Phe Asn Gly Ala Phe Ile Ala Pro Asp Arg Ala Thr Phe Leu Arg 255 260 265 270 tct aat gcc cca tcg gga gtt gag tac aat ggg aag tca ctg gga ata 865 Ser Asn Ala Pro Ser Gly Val Glu Tyr Asn Gly Lys Ser Leu Gly Ile 275 280 285 cag agt gat gca caa att gat gaa tca tgt gaa ggg gaa tgc ttc tac 913 Gln Ser Asp Ala Gln Ile Asp Glu Ser Cys Glu Gly Glu Cys Phe Tyr 290 295 300 agt gga ggg aca ata aac agc cct ttg cca ttt caa aac atc gat agt 961 Ser Gly Gly Thr Ile Asn Ser Pro Leu Pro Phe Gln Asn Ile Asp Ser 305 310 315 tgg gct gtc gga agg tgc ccc aga tat gta aag caa tca agc ctg ccg 1009 Trp Ala Val Gly Arg Cys Pro Arg Tyr Val Lys Gln Ser Ser Leu Pro 320 325 330 ctg gcc tta gga atg aaa aat gta cca gag aaa ata cat act agg gga 1057 Leu Ala Leu Gly Met Lys Asn Val Pro Glu Lys Ile His Thr Arg Gly 335 340 345 350 ctg ttc ggt gca att gca gga ttc atc gag aat gga tgg gaa gga ctc 1105 Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Asn Gly Trp Glu Gly Leu 355 360 365 att gat gga tgg tat gga ttt agg cat cag aat gca cag ggg cag gga 1153 Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Phe Arg His Gln Asn Ala Gln Gly Gln Gly 370 375 380 aca gct gct gac tac aag agt act cag gct gca att gac cag ata aca 1201 Thr Ala Ala Asp Tyr Lys Ser Thr Gln Ala Ala Ile Asp Gln Ile Thr 385 390 395 ggg aaa ctt aat aga tta att gaa aaa acc aac aca cag ttt gaa ctc 1249 Gly Lys Leu Asn Arg Leu Ile Glu Lys Thr Asn Thr Gln Phe Glu Leu 400 405 410 ata gac aat gag ttc act gaa gtg gag cag cag ata ggc aat gta ata 1297 Ile Asp Asn Glu Phe Thr Glu Val Glu Gln Gln Ile Gly Asn Val Ile 415 420 425 430 aac tgg aca agg gac tcc ttg act gag atc tgg tca tac aat gct gaa 1345 Asn Trp Thr Arg Asp Ser Leu Thr Glu Ile Trp Ser Tyr Asn Ala Glu 435 440 445 ctt cta gta gca atg gaa aat cag cat aca att gac ctt gca gat tct 1393 Leu Leu Val Ala Met Glu Asn Gln His Thr Ile Asp Leu Ala Asp Ser 450 455 460 gaa atg aac aaa ctc tat gag aga gtg aga aga cag cta agg gag aat 1441 Glu Met Asn Lys Leu Tyr Glu Arg Val Arg Arg Gln Leu Arg Glu Asn 465 470 475 gcc gag gag gat gga act gga tgt ttt gag att ttc cac cga tgt gac 1489 Ala Glu Glu Asp Gly Thr Gly Cys Phe Glu Ile Phe His Arg Cys Asp 480 485 490 gat caa tgt atg gag agc ata cga aat aat act tac aat cac act gaa 1537 Asp Gln Cys Met Glu Ser Ile Arg Asn Asn Thr Tyr Asn His Thr Glu 495 500 505 510 tat cga cag gaa gcc tta cag aat agg ata atg atc aat ccg gta aag 1585 Tyr Arg Gln Glu Ala Leu Gln Asn Arg Ile Met Ile Asn Pro Val Lys 515 520 525 ctt agt ggt ggg tac aaa gat gtg ata cta tgg ttt agc ttc ggg gca 1633 Leu Ser Gly Gly Tyr Lys Asp Val Ile Leu Trp Phe Ser Phe Gly Ala 530 535 540 tca tgt gta atg ctt cta gcc att gct atg ggt ctt att ttc atg tgt 1681 Ser Cys Val Met Leu Leu Ala Ile Ala Met Gly Leu Ile Phe Met Cys 545 550 555 gtg aaa aac ggg aat ctg cgg tgc act atc tgt ata taa ttatttga 1728 Val Lys Asn Gly Asn Leu Arg Cys Thr Ile Cys Ile 560 565 570 <210> 34 <211> 570 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 34 Met Asn Thr Gln Ile Ile Val Ile Leu Val Leu Gly Leu Ser Met Val 1 5 10 15 Arg Ser Asp Lys Ile Cys Leu Gly His His Ala Val Ala Asn Gly Thr 20 25 30 Lys Val Asn Thr Leu Thr Glu Lys Gly Val Glu Val Val Asn Ala Thr 35 40 45 Glu Thr Val Glu Ile Thr Gly Ile Asn Lys Val Cys Thr Lys Gly Lys 50 55 60 Lys Ala Val Asp Leu Gly Ser Cys Gly Ile Leu Gly Thr Ile Ile Gly 65 70 75 80 Pro Pro Gln Cys Asp Ser His Leu Lys Phe Lys Ala Asp Leu Ile Ile 85 90 95 Glu Arg Arg Asn Ser Ser Asp Ile Cys Tyr Pro Gly Lys Phe Thr Asn 100 105 110 Glu Glu Ala Leu Arg Gln Ile Ile Arg Glu Ser Gly Gly Ile Asp Lys 115 120 125 Glu Pro Met Gly Phe Arg Tyr Ser Gly Ile Lys Thr Asp Gly Ala Thr 130 135 140 Ser Ala Cys Lys Arg Thr Val Ser Ser Phe Tyr Ser Glu Met Lys Trp 145 150 155 160 Leu Leu Ser Ser Lys Asp Asn Gln Val Phe Pro Gln Leu Asn Gln Thr 165 170 175 Tyr Arg Asn Asn Arg Lys Glu Pro Ala Leu Ile Val Trp Gly Val His 180 185 190 His Ser Ser Ser Leu Asp Glu Gln Asn Lys Leu Tyr Gly Ala Gly Asn 195 200 205 Lys Leu Ile Thr Val Gly Ser Ser Lys Tyr Gln Gln Ser Phe Ser Pro 210 215 220 Ser Pro Gly Asp Arg Pro Lys Val Asn Gly Gln Ala Gly Arg Ile Asp 225 230 235 240 Phe His Trp Met Leu Leu Asp Pro Gly Asp Thr Val Thr Phe Thr Phe 245 250 255 Asn Gly Ala Phe Ile Ala Pro Asp Arg Ala Thr Phe Leu Arg Ser Asn 260 265 270 Ala Pro Ser Gly Val Glu Tyr Asn Gly Lys Ser Leu Gly Ile Gln Ser 275 280 285 Asp Ala Gln Ile Asp Glu Ser Cys Glu Gly Glu Cys Phe Tyr Ser Gly 290 295 300 Gly Thr Ile Asn Ser Pro Leu Pro Phe Gln Asn Ile Asp Ser Trp Ala 305 310 315 320 Val Gly Arg Cys Pro Arg Tyr Val Lys Gln Ser Ser Leu Pro Leu Ala 325 330 335 Leu Gly Met Lys Asn Val Pro Glu Lys Ile His Thr Arg Gly Leu Phe 340 345 350 Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Asn Gly Trp Glu Gly Leu Ile Asp 355 360 365 Gly Trp Tyr Gly Phe Arg His Gln Asn Ala Gln Gly Gln Gly Thr Ala 370 375 380 Ala Asp Tyr Lys Ser Thr Gln Ala Ala Ile Asp Gln Ile Thr Gly Lys 385 390 395 400 Leu Asn Arg Leu Ile Glu Lys Thr Asn Thr Gln Phe Glu Leu Ile Asp 405 410 415 Asn Glu Phe Thr Glu Val Glu Gln Gln Ile Gly Asn Val Ile Asn Trp 420 425 430 Thr Arg Asp Ser Leu Thr Glu Ile Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu 435 440 445 Val Ala Met Glu Asn Gln His Thr Ile Asp Leu Ala Asp Ser Glu Met 450 455 460 Asn Lys Leu Tyr Glu Arg Val Arg Arg Gln Leu Arg Glu Asn Ala Glu 465 470 475 480 Glu Asp Gly Thr Gly Cys Phe Glu Ile Phe His Arg Cys Asp Asp Gln 485 490 495 Cys Met Glu Ser Ile Arg Asn Asn Thr Tyr Asn His Thr Glu Tyr Arg 500 505 510 Gln Glu Ala Leu Gln Asn Arg Ile Met Ile Asn Pro Val Lys Leu Ser 515 520 525 Gly Gly Tyr Lys Asp Val Ile Leu Trp Phe Ser Phe Gly Ala Ser Cys 530 535 540 Val Met Leu Leu Ala Ile Ala Met Gly Leu Ile Phe Met Cys Val Lys 545 550 555 560 Asn Gly Asn Leu Arg Cys Thr Ile Cys Ile 565 570 <210> 35 <211> 1779 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (29)..(1735) <223> <400> 35 agcaaaagca ggggtctaat ctattaaa atg gag aga ata gtg ctt ttt ctt 52 Met Glu Arg Ile Val Leu Phe Leu 1 5 gca ata gtc agt ctt gtc aaa agt gac cag att tgc att ggt tat cat 100 Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His 10 15 20 gca aat aac tcg aca gaa cag gtt gac aca ata atg gag aag aat gtg 148 Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val 25 30 35 40 act gtc aca cat gcc caa gac ata ctc gaa aag aca cac aac ggg aag 196 Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile Leu Glu Lys Thr His Asn Gly Lys 45 50 55 ctc tgc agt cta aat gga gtg aag cct ctc atc ttg agg gat tgt agt 244 Leu Cys Ser Leu Asn Gly Val Lys Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser 60 65 70 gta gct gga tgg ctc ctt gga aat ccc atg tgt gac gag ttc ctt aat 292 Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn Pro Met Cys Asp Glu Phe Leu Asn 75 80 85 gtg cca gaa tgg tct tac ata gtg gag aag gac aat cca atc aac agc 340 Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val Glu Lys Asp Asn Pro Ile Asn Ser 90 95 100 ctt tgc tac cca ggg gac ttt aat gac tac gaa gaa ttg aaa cac cta 388 Leu Cys Tyr Pro Gly Asp Phe Asn Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu 105 110 115 120 ttg agc agt aca aac cac ttt gag aaa att caa atc atc ccc agg agt 436 Leu Ser Ser Thr Asn His Phe Glu Lys Ile Gln Ile Ile Pro Arg Ser 125 130 135 tct tgg tcc aat cat gat gcc tca tca gga gta agc tct gca tgt cca 484 Ser Trp Ser Asn His Asp Ala Ser Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro 140 145 150 tac aat ggg agg tcc tcc ttt ttt aga aat gtg gta tgg ctt atc gaa 532 Tyr Asn Gly Arg Ser Ser Phe Phe Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Glu 155 160 165 aag aac aat gca tac cca aca ata aag agg agt tac aac aat acc aac 580 Lys Asn Asn Ala Tyr Pro Thr Ile Lys Arg Ser Tyr Asn Asn Thr Asn 170 175 180 caa gag gat ctt cta ata ttg tgg ggg att cac cat cct aat gac gca 628 Gln Glu Asp Leu Leu Ile Leu Trp Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala 185 190 195 200 gca gaa cag aca aag ctc tat caa aat cca acc act tat gtc tct gtc 676 Ala Glu Gln Thr Lys Leu Tyr Gln Asn Pro Thr Thr Tyr Val Ser Val 205 210 215 ggg aca tca aca ctg aat cag aga tca att cca gaa ata gcc acc agg 724 Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg Ser Ile Pro Glu Ile Ala Thr Arg 220 225 230 ccc aaa gta aat gga cag agc gga aga gtg gaa ttc ttt tgg aca att 772 Pro Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly Arg Val Glu Phe Phe Trp Thr Ile 235 240 245 tta aag ccc aat gat gca att aat ttt gag agt aat ggg aac ttc ata 820 Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Asn Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile 250 255 260 gct cca gaa tat gca tac aaa att gtc aag aag ggg gac tct gca atc 868 Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr Lys Ile Val Lys Lys Gly Asp Ser Ala Ile 265 270 275 280 atg aaa agc gat ttg gaa tat ggt aac tgt aat gct aag tgt caa act 916 Met Lys Ser Asp Leu Glu Tyr Gly Asn Cys Asn Ala Lys Cys Gln Thr 285 290 295 cca gtg ggt gcg ata aac tcc agc atg ccc ttc cac aat ata cac cct 964 Pro Val Gly Ala Ile Asn Ser Ser Met Pro Phe His Asn Ile His Pro 300 305 310 ctc acc atc ggg gaa tgc ccc aaa tac gta aaa tca gat agg ttg gtc 1012 Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys Tyr Val Lys Ser Asp Arg Leu Val 315 320 325 ctt gca act ggg ctc agg aac gtc cct cag agg gag acg cgc agg cag 1060 Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val Pro Gln Arg Glu Thr Arg Arg Gln 330 335 340 aaa aga ggt cta ttt ggg gct ata gca ggt ttt ata gaa ggg gga tgg 1108 Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp 345 350 355 360 cag gga atg gta gac ggt tgg tat gga tac cat cat agc aac gag cag 1156 Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Ser Asn Glu Gln 365 370 375 ggg agc ggg tat gct gcg gac aaa gag tcc act caa aag gca att gat 1204 Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp 380 385 390 ggg atc acc aat aag gtc aac tca atc att gac aaa atg aac act caa 1252 Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln 395 400 405 ttt gag acc gtt gga aag gaa ttt aat aat ttg gag agg agg ata gag 1300 Phe Glu Thr Val Gly Lys Glu Phe Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu 410 415 420 aat ttg aac aag aaa atg gaa gac ggg ttt cta gat gtc tgg act tac 1348 Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr 425 430 435 440 aat gcc gaa ctt cta gtt ctc atg gaa aat gaa agg act ctg gat ttt 1396 Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe 445 450 455 cat gac tca aac gtc aaa aac ctt tat gat aaa gtc cga cta cag ctt 1444 His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu 460 465 470 aag gat aat gct aag gaa ctg ggt aat ggt tgt ttc gag ttc tac cat 1492 Lys Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His 475 480 485 aaa tgt gac aat gaa tgt atg gaa agc gtg aga aac ggg aca tat gac 1540 Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu Ser Val Arg Asn Gly Thr Tyr Asp 490 495 500 tac cca cag tat tca gaa gaa gca aga ctg aac aga gag gaa ata agt 1588 Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala Arg Leu Asn Arg Glu Glu Ile Ser 505 510 515 520 ggg gtt aaa ttg gaa tta atg gga gtt tac caa ata ctg tca att tat 1636 Gly Val Lys Leu Glu Leu Met Gly Val Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr 525 530 535 tca aca gtg gca agt tcc cta gca ctg gca atc atg ata gct ggt cta 1684 Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala Leu Ala Ile Met Ile Ala Gly Leu 540 545 550 tct ttt tgg atg tgt tcc aat gga tca ttg cag tgc aga att tgc att 1732 Ser Phe Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser Leu Gln Cys Arg Ile Cys Ile 555 560 565 taa atttatgagt tcagattgta gttaaaaaca cccttgtttc tact 1779 <210> 36 <211> 568 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 36 Met Glu Arg Ile Val Leu Phe Leu Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser 1 5 10 15 Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val 20 25 30 Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile 35 40 45 Leu Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Ser Leu Asn Gly Val Lys 50 55 60 Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn 65 70 75 80 Pro Met Cys Asp Glu Phe Leu Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val 85 90 95 Glu Lys Asp Asn Pro Ile Asn Ser Leu Cys Tyr Pro Gly Asp Phe Asn 100 105 110 Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Ser Thr Asn His Phe Glu 115 120 125 Lys Ile Gln Ile Ile Pro Arg Ser Ser Trp Ser Asn His Asp Ala Ser 130 135 140 Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Asn Gly Arg Ser Ser Phe Phe 145 150 155 160 Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Glu Lys Asn Asn Ala Tyr Pro Thr Ile 165 170 175 Lys Arg Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Ile Leu Trp 180 185 190 Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Lys Leu Tyr Gln 195 200 205 Asn Pro Thr Thr Tyr Val Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg 210 215 220 Ser Ile Pro Glu Ile Ala Thr Arg Pro Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly 225 230 235 240 Arg Val Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Asn 245 250 255 Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr Lys Ile 260 265 270 Val Lys Lys Gly Asp Ser Ala Ile Met Lys Ser Asp Leu Glu Tyr Gly 275 280 285 Asn Cys Asn Ala Lys Cys Gln Thr Pro Val Gly Ala Ile Asn Ser Ser 290 295 300 Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys 305 310 315 320 Tyr Val Lys Ser Asp Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val 325 330 335 Pro Gln Arg Glu Thr Arg Arg Gln Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile 340 345 350 Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr 355 360 365 Gly Tyr His His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys 370 375 380 Glu Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser 385 390 395 400 Ile Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Thr Val Gly Lys Glu Phe 405 410 415 Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp 420 425 430 Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met 435 440 445 Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu 450 455 460 Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Lys Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly 465 470 475 480 Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu 485 490 495 Ser Val Arg Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala 500 505 510 Arg Leu Asn Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Leu Met Gly 515 520 525 Val Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala 530 535 540 Leu Ala Ile Met Ile Ala Gly Leu Ser Phe Trp Met Cys Ser Asn Gly 545 550 555 560 Ser Leu Gln Cys Arg Ile Cys Ile 565 <210> 37 <211> 1665 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (1)..(1665) <223> <400> 37 atg gag aaa ata gtg ctt ctt ctt gca aca gtc agt ctt gtt aaa agt 48 Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Thr Val Ser Leu Val Lys Ser 1 5 10 15 gac cag att tgc att ggt tac cat gca aac aac tcg aca gag cag gtt 96 Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val 20 25 30 gac aca ata atg gaa aag aat gtt act gtt aca cat gcc caa gac ata 144 Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile 35 40 45 ctg gaa agg aca cac aac ggg aag ctc tgc gat cta aat gga gtg aag 192 Leu Glu Arg Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu Asn Gly Val Lys 50 55 60 cct ctg att ttg agg gat tgt agt gta gct gga tgg ctc ctc gga aac 240 Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn 65 70 75 80 cct atg tgt gac gaa ttc atc aat gtg ccg gaa tgg tct tac ata gtg 288 Pro Met Cys Asp Glu Phe Ile Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val 85 90 95 gag aag gcc agt cca gcc aat gac ctc tgt tat cca ggg aat ttc aac 336 Glu Lys Ala Ser Pro Ala Asn Asp Leu Cys Tyr Pro Gly Asn Phe Asn 100 105 110 gac tat gaa gaa ctg aaa cac cta ttg agc aga ata aac cat ttt gag 384 Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Arg Ile Asn His Phe Glu 115 120 125 aaa att cag atc atc ccc aaa agt tct tgg tcc aat cat gat gcc tca 432 Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Ser Ser Trp Ser Asn His Asp Ala Ser 130 135 140 tca ggg gta agc tca gca tgt cca tac ctt ggg aag tcc tcc ttt ttc 480 Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Leu Gly Lys Ser Ser Phe Phe 145 150 155 160 aga aat gtg gta tgg ctt atc aaa aag aac agt aca tac cca aca ata 528 Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Ser Thr Tyr Pro Thr Ile 165 170 175 aag agg agc tac aat aat acc aac caa gaa gat ctt ttg gta ctg tgg 576 Lys Arg Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Val Leu Trp 180 185 190 ggg att cac cat cct aat gat gcg gca gag cag aca aag ctc tat caa 624 Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Lys Leu Tyr Gln 195 200 205 aac cca acc acc tac att tcc gtt gga aca tca aca ctg aac cag aga 672 Asn Pro Thr Thr Tyr Ile Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg 210 215 220 ttg gtt cca gaa ata gct act aga ccc aaa gta aac ggg caa agt gga 720 Leu Val Pro Glu Ile Ala Thr Arg Pro Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly 225 230 235 240 aga ata gag ttc ttc tgg aca att tta aag ccg aat gat gcc atc aat 768 Arg Ile Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Asn 245 250 255 ttc gag agt aat gga aat ttc att gct cca gaa tat gca tac aaa att 816 Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr Lys Ile 260 265 270 gtc aag aaa ggg gac tca aca att atg aaa agt gaa ttg gaa tat ggt 864 Val Lys Lys Gly Asp Ser Thr Ile Met Lys Ser Glu Leu Glu Tyr Gly 275 280 285 aac tgc aac acc aag tgt caa act cca atg ggg gcg ata aac tct agt 912 Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser 290 295 300 atg cca ttc cac aac ata cac ccc ctc acc atc ggg gaa tgc ccc aaa 960 Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys 305 310 315 320 tat gtg aaa tca aac aga tta gtc ctt gcg act gga ctc aga aat gcc 1008 Tyr Val Lys Ser Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ala 325 330 335 cct caa aga gag aga aga aga aaa aag aga gga cta ttt gga gct ata 1056 Pro Gln Arg Glu Arg Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile 340 345 350 gca ggt ttt ata gag gga gga tgg cag gga atg gta gat ggt tgg tat 1104 Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr 355 360 365 ggg tac cac cat agc aat gag cag ggg agt gga tac gct gca gac caa 1152 Gly Tyr His His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln 370 375 380 gaa tcc act caa aag gca ata gat gga gtc acc aat aag gtc aac tcg 1200 Glu Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser 385 390 395 400 atc att aac aaa atg aac act cag ttt gag gcc gtt gga agg gaa ttt 1248 Ile Ile Asn Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe 405 410 415 aat aac ttg gaa agg agg ata gag aat tta aac aag aag atg gaa gac 1296 Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp 420 425 430 gga ttc cta gat gtc tgg act tac aat gcc gaa ctt ctg gtt ctc atg 1344 Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met 435 440 445 gaa aat gag aga act cta gac ttt cat gac tca aat gtc aag aac ctt 1392 Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu 450 455 460 tac gac aag gtc cga cta cag ctt agg gat aat gca aag gag ctg ggt 1440 Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly 465 470 475 480 aat ggt tgt ttc gaa ttc tat cac aaa tgt gat aac gaa tgt atg gaa 1488 Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu 485 490 495 agt gta aaa aac gga acg tat gac tac ccg cag tat tca gaa gaa gca 1536 Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala 500 505 510 aga cta aac aga gag gaa ata agt gga gta aaa ttg gaa tca atg gga 1584 Arg Leu Asn Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Met Gly 515 520 525 act tac caa ata ctg tca ctt tat tca aca gtg gcg agt tcc cta gca 1632 Thr Tyr Gln Ile Leu Ser Leu Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala 530 535 540 ctg gca atc atg gta gct ggt cta tct tta tgg 1665 Leu Ala Ile Met Val Ala Gly Leu Ser Leu Trp 545 550 555 <210> 38 <211> 555 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 38 Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Thr Val Ser Leu Val Lys Ser 1 5 10 15 Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val 20 25 30 Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile 35 40 45 Leu Glu Arg Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu Asn Gly Val Lys 50 55 60 Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn 65 70 75 80 Pro Met Cys Asp Glu Phe Ile Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val 85 90 95 Glu Lys Ala Ser Pro Ala Asn Asp Leu Cys Tyr Pro Gly Asn Phe Asn 100 105 110 Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Arg Ile Asn His Phe Glu 115 120 125 Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Ser Ser Trp Ser Asn His Asp Ala Ser 130 135 140 Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Leu Gly Lys Ser Ser Phe Phe 145 150 155 160 Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Ser Thr Tyr Pro Thr Ile 165 170 175 Lys Arg Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Val Leu Trp 180 185 190 Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Lys Leu Tyr Gln 195 200 205 Asn Pro Thr Thr Tyr Ile Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg 210 215 220 Leu Val Pro Glu Ile Ala Thr Arg Pro Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly 225 230 235 240 Arg Ile Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Asn 245 250 255 Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr Lys Ile 260 265 270 Val Lys Lys Gly Asp Ser Thr Ile Met Lys Ser Glu Leu Glu Tyr Gly 275 280 285 Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser 290 295 300 Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys 305 310 315 320 Tyr Val Lys Ser Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ala 325 330 335 Pro Gln Arg Glu Arg Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile 340 345 350 Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr 355 360 365 Gly Tyr His His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln 370 375 380 Glu Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser 385 390 395 400 Ile Ile Asn Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe 405 410 415 Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp 420 425 430 Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met 435 440 445 Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu 450 455 460 Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly 465 470 475 480 Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu 485 490 495 Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala 500 505 510 Arg Leu Asn Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Met Gly 515 520 525 Thr Tyr Gln Ile Leu Ser Leu Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala 530 535 540 Leu Ala Ile Met Val Ala Gly Leu Ser Leu Trp 545 550 555 <210> 39 <211> 1707 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (1)..(1707) <223> <400> 39 atg gag aaa ata gtg ctt ctt ctt gca ata gtc agt ctt gtt aaa agt 48 Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser 1 5 10 15 gat cag att tgc atc ggt tac cat gca aac aac tcg aca gag cag gtt 96 Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val 20 25 30 gac aca ata atg gaa aag aac gtt act gtt aca cat acc caa gac ata 144 Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Thr Gln Asp Ile 35 40 45 ctg gaa aag aaa cac aac ggg aag ctc tgc gat cta gat gga gtg aag 192 Leu Glu Lys Lys His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu Asp Gly Val Lys 50 55 60 cct cta att ttg aga gat tgt agt gta gct gga tgg ctc ctc gga aac 240 Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn 65 70 75 80 cca atg tgt gac gaa ttc atc aat gta ccc gaa tgg tct tac ata gtg 288 Pro Met Cys Asp Glu Phe Ile Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val 85 90 95 gag aag gcc agt cca gca aat ggt ctc tgt tac cca gga gat ttc aac 336 Glu Lys Ala Ser Pro Ala Asn Gly Leu Cys Tyr Pro Gly Asp Phe Asn 100 105 110 gac tat gaa gaa ctg aaa cac cta ttg agc aga ata aac cat ttt gag 384 Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Arg Ile Asn His Phe Glu 115 120 125 aaa att cag atc atc ccc aaa agt tct tgg tcc aat cat gaa gcc tcg 432 Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Ser Ser Trp Ser Asn His Glu Ala Ser 130 135 140 tca ggg gtg agc tca gca tgt cca tac cag ggg agg tcc tcc ttt ttc 480 Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Gln Gly Arg Ser Ser Phe Phe 145 150 155 160 aga aat gtg gta tgg ctc atc aaa aag aac ggt gca tac cca aca ata 528 Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Gly Ala Tyr Pro Thr Ile 165 170 175 aag agg agc tac aat aat acc aat caa gaa gat ctt ttg gta ctg tgg 576 Lys Arg Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Val Leu Trp 180 185 190 ggg att cac cat cct aat gat gcg gca gag cag aca aag ctc tat caa 624 Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Lys Leu Tyr Gln 195 200 205 aac cca acc acc tat att tcc gtt gga aca tca aca cta aat cag aga 672 Asn Pro Thr Thr Tyr Ile Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg 210 215 220 ttg gta cca aaa ata gct act aga tcc aaa gta aac ggg caa agt gga 720 Leu Val Pro Lys Ile Ala Thr Arg Ser Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly 225 230 235 240 aga atg gag ttc ttc tgg aca att tta aag ccg aat gat gct atc aac 768 Arg Met Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Asn 245 250 255 ttc gag agt aat gga aat ttc att gct cca gaa tat gca tac aaa att 816 Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr Lys Ile 260 265 270 gtc aag aaa ggg gac tca gca att atg aaa agt gaa ttg gaa tat ggt 864 Val Lys Lys Gly Asp Ser Ala Ile Met Lys Ser Glu Leu Glu Tyr Gly 275 280 285 aac tgc aac acc aag tgt caa act cca atg ggg gcg ata aac tct agt 912 Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser 290 295 300 atg cca ttc cac aac ata cac cct ctc acc atc ggg gaa tgc ccc aaa 960 Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys 305 310 315 320 tat gtg aaa tca aac aga tta gtc ctt gcg aca ggg ctc aga aat agc 1008 Tyr Val Lys Ser Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser 325 330 335 cct caa aga gag aga agg aga aaa aag aga gga ctg ttt gga gct ata 1056 Pro Gln Arg Glu Arg Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile 340 345 350 gca ggt ttt ata gag gga gga tgg cag gga atg gta gat ggt tgg tat 1104 Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr 355 360 365 ggg tac cac cat agc aat gag cag ggg agt gga tac gct gca gac aaa 1152 Gly Tyr His His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys 370 375 380 gaa tcc act caa aag gca ata gat gga gtc acc aat aag gtc aac tcg 1200 Glu Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser 385 390 395 400 atc att gac aaa atg aac act cag ttt gag gca gtt gga agg gaa ttt 1248 Ile Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe 405 410 415 aat aac tta gaa agg aga ata gag aat tta aac aag aag atg gaa gac 1296 Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp 420 425 430 gga ttc cta gat gtc tgg act tat aat gct gaa ctt ctg gtt ctc atg 1344 Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met 435 440 445 gaa aat gag aga act cta gac ttt cat gac tca aat gtc aag aac ctt 1392 Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu 450 455 460 tac gac aag gtc cga cta caa ctt agg gat aat gca aag gag ctg ggt 1440 Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly 465 470 475 480 aac ggt tgt ttc gag ttc tat cac aaa tgt gat aat gaa tgt atg gaa 1488 Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu 485 490 495 agt gta aga aac gga acg tat gac tac ccg cag tat tca gaa gaa gca 1536 Ser Val Arg Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala 500 505 510 aga cta aac aga gag gaa ata agt gga gta aaa ttg gaa tca ata gga 1584 Arg Leu Asn Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Ile Gly 515 520 525 act tac caa ata ctg tca att tat tca aca gtg gcg agt tcc cta gca 1632 Thr Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala 530 535 540 ctg gca atc atg gta gct ggt cta tct tta tgg atg tgc tcc aat gga 1680 Leu Ala Ile Met Val Ala Gly Leu Ser Leu Trp Met Cys Ser Asn Gly 545 550 555 560 tcg tta caa tgc aga att tgc att taa 1707 Ser Leu Gln Cys Arg Ile Cys Ile 565 <210> 40 <211> 568 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 40 Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser 1 5 10 15 Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val 20 25 30 Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Thr Gln Asp Ile 35 40 45 Leu Glu Lys Lys His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu Asp Gly Val Lys 50 55 60 Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn 65 70 75 80 Pro Met Cys Asp Glu Phe Ile Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val 85 90 95 Glu Lys Ala Ser Pro Ala Asn Gly Leu Cys Tyr Pro Gly Asp Phe Asn 100 105 110 Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Arg Ile Asn His Phe Glu 115 120 125 Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Ser Ser Trp Ser Asn His Glu Ala Ser 130 135 140 Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Gln Gly Arg Ser Ser Phe Phe 145 150 155 160 Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Gly Ala Tyr Pro Thr Ile 165 170 175 Lys Arg Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Val Leu Trp 180 185 190 Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Lys Leu Tyr Gln 195 200 205 Asn Pro Thr Thr Tyr Ile Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg 210 215 220 Leu Val Pro Lys Ile Ala Thr Arg Ser Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly 225 230 235 240 Arg Met Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Asn 245 250 255 Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr Lys Ile 260 265 270 Val Lys Lys Gly Asp Ser Ala Ile Met Lys Ser Glu Leu Glu Tyr Gly 275 280 285 Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser 290 295 300 Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys 305 310 315 320 Tyr Val Lys Ser Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser 325 330 335 Pro Gln Arg Glu Arg Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile 340 345 350 Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr 355 360 365 Gly Tyr His His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys 370 375 380 Glu Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser 385 390 395 400 Ile Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe 405 410 415 Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp 420 425 430 Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met 435 440 445 Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu 450 455 460 Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly 465 470 475 480 Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu 485 490 495 Ser Val Arg Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala 500 505 510 Arg Leu Asn Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Ile Gly 515 520 525 Thr Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala 530 535 540 Leu Ala Ile Met Val Ala Gly Leu Ser Leu Trp Met Cys Ser Asn Gly 545 550 555 560 Ser Leu Gln Cys Arg Ile Cys Ile 565 <210> 41 <211> 1741 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (9)..(1715) <223> <400> 41 ctgtcaaa atg gag aaa ata gtg ctt ctt ttt gca ata gtc agt ctt gtt 50 Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Phe Ala Ile Val Ser Leu Val 1 5 10 aaa agt gat cag att tgc att ggt tac cat gca aac aac tcg aca gag 98 Lys Ser Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu 15 20 25 30 cag gtt gac aca ata atg gaa aag aac gtt act gtt aca cat gcc caa 146 Gln Val Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln 35 40 45 gac ata ctg gaa aag aca cac aat ggg aag ctc tgc gat cta gat gga 194 Asp Ile Leu Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu Asp Gly 50 55 60 gtg aag cct cta att ttg aga gat tgt agt gta gct gga tgg ctc ctc 242 Val Lys Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu 65 70 75 gga aac cca atg tgt gac gaa ttc atc aat gtg ccg gaa tgg tct tac 290 Gly Asn Pro Met Cys Asp Glu Phe Ile Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr 80 85 90 ata gtg gag aag gcc aat cca gtc aat gac ctc tgt tac cca ggg gat 338 Ile Val Glu Lys Ala Asn Pro Val Asn Asp Leu Cys Tyr Pro Gly Asp 95 100 105 110 ttc aat gac tat gaa gaa ttg aaa cac cta ttg agc aga ata aac cat 386 Phe Asn Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Arg Ile Asn His 115 120 125 ttt gag aaa att cag atc atc ccc aaa agt tct tgg tcc agt cat gaa 434 Phe Glu Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Ser Ser Trp Ser Ser His Glu 130 135 140 gcc tca ttg ggg gtg agc tca gca tgt cca tac cag gga aag tcc tcc 482 Ala Ser Leu Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Gln Gly Lys Ser Ser 145 150 155 ttt ttc aga aat gtg gta tgg ctt atc aaa aag aac agt aca tac cca 530 Phe Phe Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Ser Thr Tyr Pro 160 165 170 aca ata aag agg agc tac aat aat acc aac caa gaa gat ctt ttg gta 578 Thr Ile Lys Arg Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Val 175 180 185 190 ctg tgg ggg att cac cat cct aat gat gcg gca gag cag aca aag ctc 626 Leu Trp Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Lys Leu 195 200 205 tat caa aac cca acc acc tat att tcc gtt ggg aca tct aca cta aac 674 Tyr Gln Asn Pro Thr Thr Tyr Ile Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn 210 215 220 cag aga ttg gta cca aga ata gct act aga tcc aaa gta aac ggg caa 722 Gln Arg Leu Val Pro Arg Ile Ala Thr Arg Ser Lys Val Asn Gly Gln 225 230 235 agt gga agg atg gag ttc ttc tgg aca att tta aaa ccg aat gat gca 770 Ser Gly Arg Met Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala 240 245 250 atc aac ttc gag agt aat gga aat ttc att gct cca gaa tat gca tac 818 Ile Asn Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr 255 260 265 270 aaa att gtc aag aaa ggg gac tca aca att atg aaa agt gaa ttg gaa 866 Lys Ile Val Lys Lys Gly Asp Ser Thr Ile Met Lys Ser Glu Leu Glu 275 280 285 tat ggt aac tgc aac acc aag tgt caa act cca atg ggg gcg ata aac 914 Tyr Gly Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn 290 295 300 tct agc atg cca ttc cac aat ata cac cct ctc acc atc ggg gaa tgc 962 Ser Ser Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys 305 310 315 ccc aaa tat gtg aaa tca aac aga tta gtc ctt gcg act ggg ctc aga 1010 Pro Lys Tyr Val Lys Ser Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg 320 325 330 aat agc cct caa aga gag aga aga aga aaa aag aga gga tta ttt gga 1058 Asn Ser Pro Gln Arg Glu Arg Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly 335 340 345 350 gct ata gca ggt ttt ata gag gga gga tgg cag gga atg gta gat ggt 1106 Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly 355 360 365 tgg tat ggg tac cac cat agc aac gag cag ggg agt ggg tac gct gca 1154 Trp Tyr Gly Tyr His His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala 370 375 380 gac aaa gaa tcc act caa aag gca ata gat gga gtc acc aat aag gtc 1202 Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val 385 390 395 aac tcg att att gac aaa atg aac act cag ttt gag gcc gtt gga agg 1250 Asn Ser Ile Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg 400 405 410 gaa ttt aac aac tta gaa agg aga ata gag aat tta aac aag aag atg 1298 Glu Phe Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met 415 420 425 430 gaa gac ggg ttc cta gat gtc tgg act tat aat gct gaa ctt cta gtt 1346 Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val 435 440 445 ctc atg gaa aac gag aga act cta gac ttt cat gac tca aat gtc aag 1394 Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys 450 455 460 aac ctt tac gac aag gtc cga cta cag ctt agg gat aat gca aag gag 1442 Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu 465 470 475 ctg ggt aac ggt tgt ttc gag ttc tat cat aaa tgt gat aat gaa tgt 1490 Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys 480 485 490 atg gaa agt gta aga aac gga acg tat gac tac ccg cag tat tca gaa 1538 Met Glu Ser Val Arg Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu 495 500 505 510 gaa gca aga cta aaa aga gag gaa ata agt gga gta aaa ttg gaa tca 1586 Glu Ala Arg Leu Lys Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser 515 520 525 ata gga att tac caa ata ttg tca att tat tct aca gtg gcg agc tcc 1634 Ile Gly Ile Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser 530 535 540 cta gca ctg gca atc atg gta gct ggt cta tcc tta tgg atg tgc tcc 1682 Leu Ala Leu Ala Ile Met Val Ala Gly Leu Ser Leu Trp Met Cys Ser 545 550 555 aat ggg tcg tta caa tgc aga att tgc att taa atttgtgagt tcagattgta 1735 Asn Gly Ser Leu Gln Cys Arg Ile Cys Ile 560 565 gttaaa 1741 <210> 42 <211> 568 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 42 Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Phe Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser 1 5 10 15 Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val 20 25 30 Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile 35 40 45 Leu Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu Asp Gly Val Lys 50 55 60 Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn 65 70 75 80 Pro Met Cys Asp Glu Phe Ile Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val 85 90 95 Glu Lys Ala Asn Pro Val Asn Asp Leu Cys Tyr Pro Gly Asp Phe Asn 100 105 110 Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Arg Ile Asn His Phe Glu 115 120 125 Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Ser Ser Trp Ser Ser His Glu Ala Ser 130 135 140 Leu Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Gln Gly Lys Ser Ser Phe Phe 145 150 155 160 Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Ser Thr Tyr Pro Thr Ile 165 170 175 Lys Arg Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Val Leu Trp 180 185 190 Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Lys Leu Tyr Gln 195 200 205 Asn Pro Thr Thr Tyr Ile Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg 210 215 220 Leu Val Pro Arg Ile Ala Thr Arg Ser Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly 225 230 235 240 Arg Met Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Asn 245 250 255 Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr Lys Ile 260 265 270 Val Lys Lys Gly Asp Ser Thr Ile Met Lys Ser Glu Leu Glu Tyr Gly 275 280 285 Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser 290 295 300 Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys 305 310 315 320 Tyr Val Lys Ser Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser 325 330 335 Pro Gln Arg Glu Arg Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile 340 345 350 Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr 355 360 365 Gly Tyr His His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys 370 375 380 Glu Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser 385 390 395 400 Ile Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe 405 410 415 Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp 420 425 430 Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met 435 440 445 Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu 450 455 460 Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly 465 470 475 480 Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu 485 490 495 Ser Val Arg Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala 500 505 510 Arg Leu Lys Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Ile Gly 515 520 525 Ile Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala 530 535 540 Leu Ala Ile Met Val Ala Gly Leu Ser Leu Trp Met Cys Ser Asn Gly 545 550 555 560 Ser Leu Gln Cys Arg Ile Cys Ile 565 <210> 43 <211> 1704 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (1)..(1704) <223> <400> 43 atg gag aaa ata gtg ctt ctt ctt gca ata gtc agt ctt gtt aaa agt 48 Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser 1 5 10 15 gat cag att tgc att ggt tac cat gca aac aac tcg aca gag cag gtt 96 Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val 20 25 30 gac aca ata atg gaa aag aac gtc act gtt aca cat gcc caa gac ata 144 Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile 35 40 45 ctg gaa aag aca cac aac ggg aag ctc tgc gat cta gat gga gtg aag 192 Leu Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu Asp Gly Val Lys 50 55 60 cct cta att tta aga gat tgt agt gta gct gga tgg ctc ctc ggg aac 240 Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn 65 70 75 80 cca atg tgt gac gaa ttc atc aat gtg ccg gaa tgg tct tac ata gtg 288 Pro Met Cys Asp Glu Phe Ile Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val 85 90 95 gag aag gcc aat cca tcc aat gac ctc tgt tac cca ggg aat ttc aac 336 Glu Lys Ala Asn Pro Ser Asn Asp Leu Cys Tyr Pro Gly Asn Phe Asn 100 105 110 gac tat gaa gaa ctg aaa cac cta ttg agc aga ata aac cat ttt gaa 384 Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Arg Ile Asn His Phe Glu 115 120 125 aaa att cag atc atc ccc aaa agt tct tgg tcc gat cat gaa gcc tca 432 Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Ser Ser Trp Ser Asp His Glu Ala Ser 130 135 140 tca ggg gtg agc tca gca tgt cca tac cag gga agg tcc tcc ttt ttc 480 Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Gln Gly Arg Ser Ser Phe Phe 145 150 155 160 aga aat gtg gta tgg ctt atc aaa aag aac agt gca tac cca aca ata 528 Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Ser Ala Tyr Pro Thr Ile 165 170 175 aag aga agc tac aat aat acc aac caa gaa gat ctt ttg gta ctg tgg 576 Lys Arg Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Val Leu Trp 180 185 190 ggg att cac cat cca aat gat gcg gca gag cag aca aga ctc tat caa 624 Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Arg Leu Tyr Gln 195 200 205 aac cca acc aca tat att tcc gtt ggg aca tca aca cta aac cag aga 672 Asn Pro Thr Thr Tyr Ile Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg 210 215 220 ttg gta cca aaa ata gct act aga tcc aaa ata aac ggg caa agt gga 720 Leu Val Pro Lys Ile Ala Thr Arg Ser Lys Ile Asn Gly Gln Ser Gly 225 230 235 240 agg atg gag ttc ttc tgg aca att tta aaa ccg aat gat gca atc agc 768 Arg Met Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Ser 245 250 255 ttt gag agt aat gga aat ttc att gct cca gaa tat gca tac aaa att 816 Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr Lys Ile 260 265 270 gtc aag aaa ggg gac tca gca att atg aaa agt gaa ttg gaa tat ggt 864 Val Lys Lys Gly Asp Ser Ala Ile Met Lys Ser Glu Leu Glu Tyr Gly 275 280 285 aac tgc aac acc aag tgt caa act cca atg ggg gcg ata aac tct agt 912 Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser 290 295 300 atg cca ttc cac aac ata cac cct ctc acc atc gga gaa tgc ccc aaa 960 Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys 305 310 315 320 tat gtg aaa tca agc aga tta gtc ctt gcg act ggg ctc aga aat agc 1008 Tyr Val Lys Ser Ser Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser 325 330 335 cct caa aga gag aga aga aaa aag aga gga cta ttt gga gct ata gca 1056 Pro Gln Arg Glu Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala 340 345 350 ggt ttt ata gag gga gga tgg cag ggg atg gta gat ggt tgg tat ggg 1104 Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly 355 360 365 tac cac cat agc aat gag cag ggg agt ggg tac gct gca gac aaa gaa 1152 Tyr His His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu 370 375 380 tcc act caa aag gca ata gat gga gtc acc aat aag gtc aac tcg atc 1200 Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile 385 390 395 400 att gac aaa atg aac act cag ttt gag gcc gtt gga agg gaa ttt aat 1248 Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe Asn 405 410 415 aac tta gaa agg aga ata gaa aat tta aac aag aag atg gaa gac gga 1296 Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly 420 425 430 ttc cta gat gtc tgg act tat aat gct gaa ctt ctg gtt ctc atg gaa 1344 Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu 435 440 445 aat gag aga act cta gac ttt cat gac tca aat gtc aag aac ctt tac 1392 Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr 450 455 460 gac aag gtc cga cta cag ctt agg gat aat gca aag gag ctg ggt aac 1440 Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly Asn 465 470 475 480 ggt tgt ttc gag ttc tat cac aga tgt gat aat gaa tgt ata gaa agt 1488 Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Arg Cys Asp Asn Glu Cys Ile Glu Ser 485 490 495 gta aga aac gga acg tat gac tac ccg cag tat tca gaa gaa gca aga 1536 Val Arg Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala Arg 500 505 510 tta aaa aga gag gaa ata agt gga gta aaa ttg gaa tca ata gga act 1584 Leu Lys Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Ile Gly Thr 515 520 525 tac caa ata ctg tca att tat tca aca gtg gca agt tcc cta gca ctg 1632 Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala Leu 530 535 540 gca atc atg gtg gct ggt cta tct tta tgg atg tgc tcc aat gga tcg 1680 Ala Ile Met Val Ala Gly Leu Ser Leu Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser 545 550 555 560 tta caa tgc aga att tgc att taa 1704 Leu Gln Cys Arg Ile Cys Ile 565 <210> 44 <211> 567 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 44 Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser 1 5 10 15 Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val 20 25 30 Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile 35 40 45 Leu Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu Asp Gly Val Lys 50 55 60 Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn 65 70 75 80 Pro Met Cys Asp Glu Phe Ile Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val 85 90 95 Glu Lys Ala Asn Pro Ser Asn Asp Leu Cys Tyr Pro Gly Asn Phe Asn 100 105 110 Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Arg Ile Asn His Phe Glu 115 120 125 Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Ser Ser Trp Ser Asp His Glu Ala Ser 130 135 140 Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Gln Gly Arg Ser Ser Phe Phe 145 150 155 160 Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Ser Ala Tyr Pro Thr Ile 165 170 175 Lys Arg Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Val Leu Trp 180 185 190 Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Arg Leu Tyr Gln 195 200 205 Asn Pro Thr Thr Tyr Ile Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg 210 215 220 Leu Val Pro Lys Ile Ala Thr Arg Ser Lys Ile Asn Gly Gln Ser Gly 225 230 235 240 Arg Met Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Ser 245 250 255 Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr Lys Ile 260 265 270 Val Lys Lys Gly Asp Ser Ala Ile Met Lys Ser Glu Leu Glu Tyr Gly 275 280 285 Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser 290 295 300 Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys 305 310 315 320 Tyr Val Lys Ser Ser Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser 325 330 335 Pro Gln Arg Glu Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala 340 345 350 Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly 355 360 365 Tyr His His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu 370 375 380 Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile 385 390 395 400 Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe Asn 405 410 415 Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly 420 425 430 Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu 435 440 445 Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr 450 455 460 Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly Asn 465 470 475 480 Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Arg Cys Asp Asn Glu Cys Ile Glu Ser 485 490 495 Val Arg Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala Arg 500 505 510 Leu Lys Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Ile Gly Thr 515 520 525 Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala Leu 530 535 540 Ala Ile Met Val Ala Gly Leu Ser Leu Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser 545 550 555 560 Leu Gln Cys Arg Ile Cys Ile 565 <210> 45 <211> 1737 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (15)..(1721) <223> <400> 45 ttcaatctgt caaa atg gag aaa ata gtg ctt ctt ctt gca ata gtc agt 50 Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Ile Val Ser 1 5 10 ctt gtt aaa agt gat cag att tgc att ggt tac cat gca aac aac tca 98 Leu Val Lys Ser Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser 15 20 25 aca gag cag gtt gac aca ata atg gaa aag aac gtc act gtt aca cac 146 Thr Glu Gln Val Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His 30 35 40 gcc caa gac ata ctg gag aag aca cac aac ggg aaa ctc tgc gat cta 194 Ala Gln Asp Ile Leu Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu 45 50 55 60 gat gga gtg aag cct cta att tta aga gat tgt agt gta gct gga tgg 242 Asp Gly Val Lys Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp 65 70 75 ctc ctc ggg aac cca atg tgt gac gaa ttc ctc aat gtg ccg gaa tgg 290 Leu Leu Gly Asn Pro Met Cys Asp Glu Phe Leu Asn Val Pro Glu Trp 80 85 90 tct tac ata gtg gag aag atc aat cca gcc aat gac ctc tgt tac cca 338 Ser Tyr Ile Val Glu Lys Ile Asn Pro Ala Asn Asp Leu Cys Tyr Pro 95 100 105 ggg aat ttc aac gac tat gaa gaa ctg aaa cac cta ttg agc aga ata 386 Gly Asn Phe Asn Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Arg Ile 110 115 120 aac cat ttt gag aaa ata cag atc atc ccc aaa agt tct tgg tca gat 434 Asn His Phe Glu Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Ser Ser Trp Ser Asp 125 130 135 140 cat gaa gcc tca tca ggg gtg agc tca gca tgt cca tac cag gga agg 482 His Glu Ala Ser Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Gln Gly Arg 145 150 155 tcc tcc ttt ttt aga aat gtg gta tgg ctt atc aaa aag gac aat gca 530 Ser Ser Phe Phe Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asp Asn Ala 160 165 170 tac cca aca ata aag aga agt tac aat aat acc aac caa gaa gat ctt 578 Tyr Pro Thr Ile Lys Arg Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu 175 180 185 ttg gta ctg tgg ggg att cac cat cca aat gat gcg gca gag cag aca 626 Leu Val Leu Trp Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr 190 195 200 agg ctc tat caa aac cca acc acc tat att tcc gtt ggt aca tca aca 674 Arg Leu Tyr Gln Asn Pro Thr Thr Tyr Ile Ser Val Gly Thr Ser Thr 205 210 215 220 cta aac cag aga ctg gta cca aaa ata gct act aga tcc aag gta aac 722 Leu Asn Gln Arg Leu Val Pro Lys Ile Ala Thr Arg Ser Lys Val Asn 225 230 235 ggg caa agt gga agg atg gag ttc ttt tgg aca att tta aaa ccg aat 770 Gly Gln Ser Gly Arg Met Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn 240 245 250 gat gca ata aac ttt gag agt aat gga aat ttc att gct cca gaa aat 818 Asp Ala Ile Asn Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Asn 255 260 265 gca tac aaa att gtc aag aaa ggg gac tca aca att atg aaa agt gaa 866 Ala Tyr Lys Ile Val Lys Lys Gly Asp Ser Thr Ile Met Lys Ser Glu 270 275 280 ttg gaa tat ggt aac tgc aac acc aag tgt caa act cca ata ggg gcg 914 Leu Glu Tyr Gly Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Ile Gly Ala 285 290 295 300 ata aac tct agt atg cca ttc cac aac atc cac cct ctc acc atc ggg 962 Ile Asn Ser Ser Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly 305 310 315 gaa tgc ccc aaa tat gtg aaa tca aac aga tta gtc ctt gcg act ggg 1010 Glu Cys Pro Lys Tyr Val Lys Ser Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly 320 325 330 ctc aga aat agc cct caa gga gag aga aga aga aga aag aga gga cta 1058 Leu Arg Asn Ser Pro Gln Gly Glu Arg Arg Arg Arg Lys Arg Gly Leu 335 340 345 ttt gga gct ata gca ggt ttt ata gag gga gga tgg cag gga atg gta 1106 Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val 350 355 360 gat ggt tgg tat ggg tac cac cat agc aac gag cag ggg agt ggg tac 1154 Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr 365 370 375 380 gct gca gac aaa gaa tcc act caa aag gca ata gat gga gtc acc aat 1202 Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn 385 390 395 aag gtc aac tcg atc att gac aaa atg aac act cag ttt gag gct gtt 1250 Lys Val Asn Ser Ile Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val 400 405 410 gga agg gaa ttt aat aac tta gaa agg aga ata gaa aat tta aac aag 1298 Gly Arg Glu Phe Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys 415 420 425 aag atg gaa gac gga ttc cta gat gtc tgg act tat aat gct gaa ctt 1346 Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu 430 435 440 ctg gtt ctc atg gaa aat gag aga act cta gac ttt cat gac tca aat 1394 Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn 445 450 455 460 gtc aag aac ctt tac gac aag gtc cga cta cag ctt agg gat aat gca 1442 Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala 465 470 475 aag gag ctt ggt aac ggt tgt ttc gag ttc tat cat aga tgt gat aat 1490 Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Arg Cys Asp Asn 480 485 490 gaa tgt atg gaa agt gta aga aac gga acg tat gac tac ccg cag tat 1538 Glu Cys Met Glu Ser Val Arg Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr 495 500 505 tca gaa gaa gca aga tta aaa aga gag gaa ata agt gga gta aaa ttg 1586 Ser Glu Glu Ala Arg Leu Lys Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu 510 515 520 gaa tca ata gga act tac caa ata ctg tca att tat tca aca gtg gcg 1634 Glu Ser Ile Gly Thr Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala 525 530 535 540 agc tcc cta gca ctg gca atc atg gtg gct ggt cta tct tta tgg atg 1682 Ser Ser Leu Ala Leu Ala Ile Met Val Ala Gly Leu Ser Leu Trp Met 545 550 555 tgc tcc aat gga tcg tta caa tgc aga att tgc att taa atttgtgagt 1731 Cys Ser Asn Gly Ser Leu Gln Cys Arg Ile Cys Ile 560 565 tcagat 1737 <210> 46 <211> 568 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 46 Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser 1 5 10 15 Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val 20 25 30 Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile 35 40 45 Leu Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu Asp Gly Val Lys 50 55 60 Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn 65 70 75 80 Pro Met Cys Asp Glu Phe Leu Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val 85 90 95 Glu Lys Ile Asn Pro Ala Asn Asp Leu Cys Tyr Pro Gly Asn Phe Asn 100 105 110 Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Arg Ile Asn His Phe Glu 115 120 125 Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Ser Ser Trp Ser Asp His Glu Ala Ser 130 135 140 Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Gln Gly Arg Ser Ser Phe Phe 145 150 155 160 Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asp Asn Ala Tyr Pro Thr Ile 165 170 175 Lys Arg Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Val Leu Trp 180 185 190 Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Arg Leu Tyr Gln 195 200 205 Asn Pro Thr Thr Tyr Ile Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg 210 215 220 Leu Val Pro Lys Ile Ala Thr Arg Ser Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly 225 230 235 240 Arg Met Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Asn 245 250 255 Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Asn Ala Tyr Lys Ile 260 265 270 Val Lys Lys Gly Asp Ser Thr Ile Met Lys Ser Glu Leu Glu Tyr Gly 275 280 285 Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Ile Gly Ala Ile Asn Ser Ser 290 295 300 Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys 305 310 315 320 Tyr Val Lys Ser Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser 325 330 335 Pro Gln Gly Glu Arg Arg Arg Arg Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile 340 345 350 Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr 355 360 365 Gly Tyr His His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys 370 375 380 Glu Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser 385 390 395 400 Ile Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe 405 410 415 Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp 420 425 430 Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met 435 440 445 Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu 450 455 460 Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly 465 470 475 480 Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Arg Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu 485 490 495 Ser Val Arg Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala 500 505 510 Arg Leu Lys Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Ile Gly 515 520 525 Thr Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala 530 535 540 Leu Ala Ile Met Val Ala Gly Leu Ser Leu Trp Met Cys Ser Asn Gly 545 550 555 560 Ser Leu Gln Cys Arg Ile Cys Ile 565 <210> 47 <211> 1745 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (15)..(1721) <223> <400> 47 ttcaatctgt caaa atg gag aaa ata gtg ctt ctt ctt gca ata atc agt 50 Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Ile Ile Ser 1 5 10 ctt gtt aaa agt gat cag att tgc att ggt tac cat gca aac aac tcg 98 Leu Val Lys Ser Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser 15 20 25 aca gag cag gtt gac aca ata atg gaa aag aac gtc act gtt aca cac 146 Thr Glu Gln Val Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His 30 35 40 gcc caa gac ata ctg gaa aag aca cac aac ggg aag ctc tgc gat cta 194 Ala Gln Asp Ile Leu Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu 45 50 55 60 gac gga gtg aag cct cta att tta aga gat tgt agt gta gct gga tgg 242 Asp Gly Val Lys Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp 65 70 75 ctc ctc ggg aat cca atg tgt gac gaa ttc ctc aat gtg ccg gaa tgg 290 Leu Leu Gly Asn Pro Met Cys Asp Glu Phe Leu Asn Val Pro Glu Trp 80 85 90 tct tac ata gtg gag aag atc aat cca gcc aat gac ctc tgt tac cca 338 Ser Tyr Ile Val Glu Lys Ile Asn Pro Ala Asn Asp Leu Cys Tyr Pro 95 100 105 ggg aat ttc aac gac tat gaa gaa ctg aaa cac cta ttg agc aga ata 386 Gly Asn Phe Asn Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Arg Ile 110 115 120 aac cat ttt gag aaa att cag atc atc ccc aaa agt tct tgg tca gat 434 Asn His Phe Glu Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Ser Ser Trp Ser Asp 125 130 135 140 cat gaa gcc tca tca ggg gtg agc tca gca tgt cca tac cag gga agg 482 His Glu Ala Ser Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Gln Gly Arg 145 150 155 tcc tcc ttt ttt aga aat gtg gta tgg ctt atc aaa aag aac gat gca 530 Ser Ser Phe Phe Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Asp Ala 160 165 170 tac cca aca ata aag aga agt tac aat aat acc aac caa gaa gat ctt 578 Tyr Pro Thr Ile Lys Arg Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu 175 180 185 ttg gta ctg tgg ggg att cac cat cca aat gat gcg gca gag cag aca 626 Leu Val Leu Trp Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr 190 195 200 agg ctc tat caa aac cca acc acc tat att tcc gtt ggg aca tca aca 674 Arg Leu Tyr Gln Asn Pro Thr Thr Tyr Ile Ser Val Gly Thr Ser Thr 205 210 215 220 cta aac cag aga ttg gta cca aaa ata gct act aga tcc aag gta aac 722 Leu Asn Gln Arg Leu Val Pro Lys Ile Ala Thr Arg Ser Lys Val Asn 225 230 235 ggg caa agt gga agg atg gag ttc ttt tgg aca att tta aaa ccg aat 770 Gly Gln Ser Gly Arg Met Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn 240 245 250 gat gca ata aat ttt gag agt aat gga aat ttc att gct cca gaa aat 818 Asp Ala Ile Asn Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Asn 255 260 265 gca tac aaa att gtc aag aaa ggg gac tca aca atc atg aaa agt gaa 866 Ala Tyr Lys Ile Val Lys Lys Gly Asp Ser Thr Ile Met Lys Ser Glu 270 275 280 ttg gaa tat ggt aac tgc aac acc aag tgt caa act cca ata ggg gcg 914 Leu Glu Tyr Gly Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Ile Gly Ala 285 290 295 300 ata aac tct agt atg cca ttc cac aac atc cac cct ctc acc atc ggg 962 Ile Asn Ser Ser Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly 305 310 315 gaa tgc ccc aaa tat gtg aaa tca aac aga tta gtc ctt gcg act ggg 1010 Glu Cys Pro Lys Tyr Val Lys Ser Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly 320 325 330 ctc aga aat agc cct caa gga gag aga aga aga aaa aag aga gga cta 1058 Leu Arg Asn Ser Pro Gln Gly Glu Arg Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu 335 340 345 ttt gga gct ata gca ggt ttt ata gag gga gga tgg cag gga atg gta 1106 Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val 350 355 360 gat ggt tgg tat ggg tac cac cat agc aac gag cag ggg agt ggg tac 1154 Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr 365 370 375 380 gct gca gac aaa gaa tcc act caa aag gca ata gat gga gtc acc aat 1202 Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn 385 390 395 aag gtc aac tcg atc att gac aaa atg aac act cag ttt gag gcc gtt 1250 Lys Val Asn Ser Ile Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val 400 405 410 gga agg gaa ttt aat aac tta gaa agg aga ata gag aat tta aac aag 1298 Gly Arg Glu Phe Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys 415 420 425 aag atg gaa gac gga ttt cta gat gtc tgg act tat aat gct gaa ctt 1346 Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu 430 435 440 ctg gtt ctc atg gaa aat gag aga act cta gac ttt cat gac tca aat 1394 Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn 445 450 455 460 gtc aag aac ctt tac gac aag gtc cga cta cag ctt agg gat aat gca 1442 Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala 465 470 475 aag gag ctt ggt aac ggt tgt ttc gag ttc tat cac aga tgt gat aat 1490 Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Arg Cys Asp Asn 480 485 490 gaa tgt atg gaa agt gta aga aac gga acg tat gac tac ccg cag tat 1538 Glu Cys Met Glu Ser Val Arg Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr 495 500 505 tca gaa gaa tca aga tta aaa aga gag gaa ata agt gga gta aaa ttg 1586 Ser Glu Glu Ser Arg Leu Lys Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu 510 515 520 gaa tca ata gga act tat caa ata ctg tca att tat tca aca gtg gcg 1634 Glu Ser Ile Gly Thr Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala 525 530 535 540 agc tcc cta gca ctg gca atc atg gtg gct ggt cta tct tta tgg atg 1682 Ser Ser Leu Ala Leu Ala Ile Met Val Ala Gly Leu Ser Leu Trp Met 545 550 555 tgc tcc aat gga tcg tta caa tgc aga att tgc att taa atttgtgagt 1731 Cys Ser Asn Gly Ser Leu Gln Cys Arg Ile Cys Ile 560 565 tcagattgta gtta 1745 <210> 48 <211> 568 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 48 Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Ile Ile Ser Leu Val Lys Ser 1 5 10 15 Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val 20 25 30 Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile 35 40 45 Leu Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu Asp Gly Val Lys 50 55 60 Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn 65 70 75 80 Pro Met Cys Asp Glu Phe Leu Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val 85 90 95 Glu Lys Ile Asn Pro Ala Asn Asp Leu Cys Tyr Pro Gly Asn Phe Asn 100 105 110 Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Arg Ile Asn His Phe Glu 115 120 125 Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Ser Ser Trp Ser Asp His Glu Ala Ser 130 135 140 Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Gln Gly Arg Ser Ser Phe Phe 145 150 155 160 Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Asp Ala Tyr Pro Thr Ile 165 170 175 Lys Arg Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Val Leu Trp 180 185 190 Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Arg Leu Tyr Gln 195 200 205 Asn Pro Thr Thr Tyr Ile Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg 210 215 220 Leu Val Pro Lys Ile Ala Thr Arg Ser Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly 225 230 235 240 Arg Met Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Asn 245 250 255 Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Asn Ala Tyr Lys Ile 260 265 270 Val Lys Lys Gly Asp Ser Thr Ile Met Lys Ser Glu Leu Glu Tyr Gly 275 280 285 Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Ile Gly Ala Ile Asn Ser Ser 290 295 300 Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys 305 310 315 320 Tyr Val Lys Ser Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser 325 330 335 Pro Gln Gly Glu Arg Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile 340 345 350 Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr 355 360 365 Gly Tyr His His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys 370 375 380 Glu Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser 385 390 395 400 Ile Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe 405 410 415 Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp 420 425 430 Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met 435 440 445 Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu 450 455 460 Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly 465 470 475 480 Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Arg Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu 485 490 495 Ser Val Arg Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ser 500 505 510 Arg Leu Lys Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Ile Gly 515 520 525 Thr Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala 530 535 540 Leu Ala Ile Met Val Ala Gly Leu Ser Leu Trp Met Cys Ser Asn Gly 545 550 555 560 Ser Leu Gln Cys Arg Ile Cys Ile 565 <210> 49 <211> 1732 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (15)..(1709) <223> <400> 1 tctaatctgt taaa atg gag aaa ata gta ctt ctt ttt gca ata gtc agt 50 Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Phe Ala Ile Val Ser 1 5 10 ctt gtc aaa agt gac caa att tgc att ggt tac cat gca aac aac tca 98 Leu Val Lys Ser Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser 15 20 25 aca gag cag gtt gac aca ata atg gaa aag aat gtt act gtc acg cat 146 Thr Glu Gln Val Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His 30 35 40 gcc caa gac ata ctg gaa aag aca cac aat ggg aag ctc tgc agt cta 194 Ala Gln Asp Ile Leu Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Ser Leu 45 50 55 60 aat gga gtt aag cct ctc att ttg agg gat tgt agt gta gct gga tgg 242 Asn Gly Val Lys Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp 65 70 75 ctc ctc gga aac ccc atg tgt gat gaa ttc ctc aat gtg ccg gaa tgg 290 Leu Leu Gly Asn Pro Met Cys Asp Glu Phe Leu Asn Val Pro Glu Trp 80 85 90 tct tac ata gtg gag aag gac agc cca atc aat ggc ctc tgc tac cca 338 Ser Tyr Ile Val Glu Lys Asp Ser Pro Ile Asn Gly Leu Cys Tyr Pro 95 100 105 ggg gat ttc aac gac tat gaa gag ctg aaa cac ctg ttg agc agt aca 386 Gly Asp Phe Asn Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Ser Thr 110 115 120 aac cat ttt gag aaa att caa atc atc ccc agg agt tct tgg tcc gat 434 Asn His Phe Glu Lys Ile Gln Ile Ile Pro Arg Ser Ser Trp Ser Asp 125 130 135 140 cat gat gcc tca tca gga gtg agc tcc gca tgt cca tat aat ggg agg 482 His Asp Ala Ser Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Asn Gly Arg 145 150 155 tcc tcc ttt ttc aga aat gta gtg tgg ctc atc aaa aag aac aat gca 530 Ser Ser Phe Phe Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Asn Ala 160 165 170 tac cca aca ata aaa agg aat tac aat aat act aac caa gaa gat ctt 578 Tyr Pro Thr Ile Lys Arg Asn Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu 175 180 185 ttg gta ctg tgg ggg att cac cat cct aat gat gca aca gag cag aca 626 Leu Val Leu Trp Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Thr Glu Gln Thr 190 195 200 aag ctc tat caa aac cca acc acc tat gtt tct gtt gga aca tca aca 674 Lys Leu Tyr Gln Asn Pro Thr Thr Tyr Val Ser Val Gly Thr Ser Thr 205 210 215 220 ctg aac cag aga tcg gtc cca gaa ata gct acc agg ccc aaa gta aat 722 Leu Asn Gln Arg Ser Val Pro Glu Ile Ala Thr Arg Pro Lys Val Asn 225 230 235 ggg caa agt gga aga ata gag ttt ttc tgg aca atc tta aag cca aat 770 Gly Gln Ser Gly Arg Ile Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn 240 245 250 gat gcc atc aat ttc gag agt aat gga aat ttt att gct cca gaa tat 818 Asp Ala Ile Asn Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr 255 260 265 gca tac aaa att gcc aag aaa gga gac tca gca atc atg gaa agt gga 866 Ala Tyr Lys Ile Ala Lys Lys Gly Asp Ser Ala Ile Met Glu Ser Gly 270 275 280 ttg gag tat ggt aac tgc aac acc aag tgt caa act cca atg ggt gca 914 Leu Glu Tyr Gly Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala 285 290 295 300 ata aac tcc agc atg cca ttt cac aac ata cac cct ctc acc att ggg 962 Ile Asn Ser Ser Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly 305 310 315 gaa tgc ccc aga tac gtg aag tca gat aga tta gtc ctt gca aca ggg 1010 Glu Cys Pro Arg Tyr Val Lys Ser Asp Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly 320 325 330 ctc agg aat gtc cct caa aga gaa aca aga gga cta ttt ggg gcc ata 1058 Leu Arg Asn Val Pro Gln Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile 335 340 345 gca ggc ttc ata gaa gga ggg tgg caa gga atg gta gac ggt tgg tat 1106 Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr 350 355 360 gga tac cac cat agc aac aag caa ggg agt gga tac gct gca gac aaa 1154 Gly Tyr His His Ser Asn Lys Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys 365 370 375 380 gag tcc act caa aag gca ata gat gga atc act aat aag gtc aac tca 1202 Glu Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser 385 390 395 atc att gac aaa atg aac act cag ttt gag gcc gtt gga aag gaa ttt 1250 Ile Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Lys Glu Phe 400 405 410 aat aac tta gaa agg agg ata gag aat ttg aac aag aaa atg gaa gac 1298 Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp 415 420 425 gga ttc cta gat gtc tgg act tat aat gct gaa ctt ctg gtt ctc atg 1346 Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met 430 435 440 gaa aat gag aga acc cta gac ttt cat gac tca aat gtc aag aac ctt 1394 Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu 445 450 455 460 tac gac aag gtt cga cta cag ctt agg gat aat gca aag gag ctg ggt 1442 Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly 465 470 475 aat ggt tgt ttc gag ttc tat cac aaa tgt gat gat gaa tgt atg gca 1490 Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asp Glu Cys Met Ala 480 485 490 agt gta aga aac gga acg tat gac tac ccg cag tat tca gaa gag gca 1538 Ser Val Arg Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala 495 500 505 aga cta aac aga gag gaa ata agt gga gta aaa ttg gaa tca ata gga 1586 Arg Leu Asn Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Ile Gly 510 515 520 act tac caa ata ttg tca att tat tca aca gtg gcg agt tcc tta gca 1634 Thr Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala 525 530 535 540 ctg gca atc atg gta gct ggt cta tct ttc tgg atg tgc tcc aat gga 1682 Leu Ala Ile Met Val Ala Gly Leu Ser Phe Trp Met Cys Ser Asn Gly 545 550 555 tca ttg caa tgc aga att tgc att taa acttgtgagt tcagattgta gtt 1732 Ser Leu Gln Cys Arg Ile Cys Ile 560 <210> 50 <211> 564 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 2 Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Phe Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser 1 5 10 15 Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val 20 25 30 Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile 35 40 45 Leu Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Ser Leu Asn Gly Val Lys 50 55 60 Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn 65 70 75 80 Pro Met Cys Asp Glu Phe Leu Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val 85 90 95 Glu Lys Asp Ser Pro Ile Asn Gly Leu Cys Tyr Pro Gly Asp Phe Asn 100 105 110 Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Ser Thr Asn His Phe Glu 115 120 125 Lys Ile Gln Ile Ile Pro Arg Ser Ser Trp Ser Asp His Asp Ala Ser 130 135 140 Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Asn Gly Arg Ser Ser Phe Phe 145 150 155 160 Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Asn Ala Tyr Pro Thr Ile 165 170 175 Lys Arg Asn Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Val Leu Trp 180 185 190 Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Thr Glu Gln Thr Lys Leu Tyr Gln 195 200 205 Asn Pro Thr Thr Tyr Val Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg 210 215 220 Ser Val Pro Glu Ile Ala Thr Arg Pro Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly 225 230 235 240 Arg Ile Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Asn 245 250 255 Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr Lys Ile 260 265 270 Ala Lys Lys Gly Asp Ser Ala Ile Met Glu Ser Gly Leu Glu Tyr Gly 275 280 285 Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser 290 295 300 Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Arg 305 310 315 320 Tyr Val Lys Ser Asp Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val 325 330 335 Pro Gln Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile 340 345 350 Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His 355 360 365 Ser Asn Lys Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln 370 375 380 Lys Ala Ile Asp Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile Ile Asp Lys 385 390 395 400 Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn Asn Leu Glu 405 410 415 Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp 420 425 430 Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg 435 440 445 Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val 450 455 460 Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe 465 470 475 480 Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asp Glu Cys Met Ala Ser Val Arg Asn 485 490 495 Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala Arg Leu Asn Arg 500 505 510 Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Ile Gly Thr Tyr Gln Ile 515 520 525 Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala Leu Ala Ile Met 530 535 540 Val Ala Gly Leu Ser Phe Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser Leu Gln Cys 545 550 555 560 Arg Ile Cys Ile

Claims (10)

  1. H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌과 항원 항체 반응하고, 그 대응 에피토프가 배열 번호 2에 나타내어지는 아미노산 배열을 기준으로 해서,
    (1) 41~60aa 및 312~322aa의 영역,
    (2) 61~80aa 및 290~300aa의 영역, 또는
    (3) 101~113aa 및 268~278aa의 영역에 존재하며,
    상기 A형 인플루엔자 바이러스의 중화 활성을 갖지 않는 것을 특징으로 하는 항 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 모노클로날 항체 또는 그 항원 결합성 단편.
  2. 제 1 항에 있어서,
    H1 아형~H4 아형 및 H6 아형~H15 아형의 헤마글루티닌과는 실질적으로 교차 반응하지 않는 것을 특징으로 하는 항 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 모노클로날 항체 또는 그 항원 결합성 단편.
  3. 삭제
  4. 제 1 항 또는 제 2 항에 기재된 항 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 모노클로날 항체 또는 그 항원 결합성 단편과 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌의 항원 항체 반응을 이용한 면역 측정에 의해 검체 중의 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스를 측정하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스의 면역 측정 방법.
  5. 단일의 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌 분자에 동시에 결합 가능한 2종류의 제 1 항 또는 제 2 항에 기재된 항 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 모노클로날 항체 또는 그 항원 결합성 단편을 사용하는 샌드위치법에 의한 것을 특징으로 하는 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스의 면역 측정 방법.
  6. 삭제
  7. 제 5 항에 있어서,
    이뮤노크로마토그래피에 의한 것을 특징으로 하는 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스의 면역 측정 방법.
  8. H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌에 동시에 결합 가능한 2종류의 제 1 항 또는 제 2 항에 기재된 항 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 모노클로날 항체 또는 그 항원 결합성 단편을 포함하는 것을 특징으로 하는 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스의 면역 측정용 키트.
  9. 제 8 항에 있어서,
    상기 2종류의 모노클로날 항체 또는 그 항원 결합성 단편 중 한 쪽이 고상으로 고정화되고, 다른 쪽이 표식되어 있는 것을 특징으로 하는 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스의 면역 측정용 키트.
  10. 제 9 항에 있어서,
    상기 고상은 이뮤노크로마토그래피용의 고상인 것을 특징으로 하는 H5 아형 A형 인플루엔자 바이러스의 면역 측정용 키트.
KR1020107018151A 2008-03-28 2009-03-26 항 ｈ5 아형 ａ형 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 모노클로날 항체 KR101625979B1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JPJP-P-2008-088499 2008-03-28
JP2008088499 2008-03-28

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20100124720A KR20100124720A (ko) 2010-11-29
KR101625979B1 true KR101625979B1 (ko) 2016-05-31

Family

ID=41113910

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020107018151A KR101625979B1 (ko) 2008-03-28 2009-03-26 항 ｈ5 아형 ａ형 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 모노클로날 항체

Country Status (6)

Country Link
US (1) US8658354B2 (ko)
EP (1) EP2284260A4 (ko)
JP (1) JP5586064B2 (ko)
KR (1) KR101625979B1 (ko)
CN (1) CN101990575B (ko)
WO (1) WO2009119722A1 (ko)

Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2011207626B2 (en) 2010-01-19 2015-06-18 President And Fellows Of Harvard College Engineered opsonin for pathogen detection and treatment
WO2011111108A1 (ja) * 2010-03-11 2011-09-15 Ｄｉｃプラスチック株式会社 酵素免疫測定器具及び酵素免疫測定方法
JP5630153B2 (ja) * 2010-09-01 2014-11-26 富士レビオ株式会社 Ａ型インフルエンザウイルス核タンパク質の第１００番アミノ酸がアルギニンであるか否かを判定する方法
EP2646050B1 (en) * 2010-12-02 2016-09-07 mAB-Factory GmbH Vaccine against influenza h5n1 viruses, medicament and treatment of h5n1 viral infections
EP2734843A2 (en) 2011-07-18 2014-05-28 President and Fellows of Harvard College Engineered microbe-targeting molecules and uses thereof
JP5884100B2 (ja) * 2011-08-31 2016-03-15 公益財団法人東京都医学総合研究所 新型インフルエンザウイルス由来ヘマグルチニンタンパク質遺伝子を有するＤＩｓ株由来組換えワクシニアウイルス
PL220281B1 (pl) 2011-09-23 2015-09-30 Inst Biochemii I Biofizyki Polskiej Akademii Nauk Szczepionka DNA, sposób indukowania odpowiedzi immunologicznej, przeciwciała specyficznie rozpoznające białko hemaglutyniny H5 wirusa grypy i zastosowanie szczepionki DNA
WO2013044840A1 (zh) * 2011-09-30 2013-04-04 中国科学院上海巴斯德研究所 高致病性禽流感的中和分子及其制备方法
JP2013087069A (ja) * 2011-10-17 2013-05-13 Toyobo Co Ltd Ｈ５亜型インフルエンザウイルスを特異的に認識するモノクローナル抗体
RU2502745C2 (ru) * 2011-12-30 2013-12-27 Общество с ограниченной ответственностью "Технофарма" Наноантитело "anti-flu", рекомбинантные вирусные векторы и фармацевтические композиции для профилактики и терапии гриппа типа а
US9969794B2 (en) 2012-05-10 2018-05-15 Visterra, Inc. HA binding agents
CN102928605B (zh) * 2012-11-06 2014-06-25 江苏省农业科学院 一种检测类猪圆环病毒p1抗体的间接elisa试剂盒
WO2014144325A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions for improving detection and/or capture of a target entity
CA2913155A1 (en) 2013-05-21 2014-11-27 President And Fellows Of Harvard College Engineered heme-binding compositions and uses thereof
US10494419B2 (en) * 2013-10-02 2019-12-03 Medimmune, Llc Neutralizing anti-influenza A antibodies and uses thereof
EP3546474B1 (en) 2013-12-18 2021-07-07 President and Fellows of Harvard College Crp capture/detection of gram positive bacteria
CN103869067B (zh) * 2014-04-01 2015-12-02 开封市疾病预防控制中心 一种甲型流感病毒胶体金诊断检测试纸及其制备方法
EP3981437A1 (en) 2014-04-23 2022-04-13 ModernaTX, Inc. Nucleic acid vaccines
WO2015186721A1 (ja) * 2014-06-03 2015-12-10 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 抗体またはその可変領域を含む抗体断片、抗原ポリペプチド、およびその利用
TWI701258B (zh) 2014-12-19 2020-08-11 美商再生元醫藥公司 流行性感冒病毒血球凝集素之人類抗體
RU2618947C2 (ru) * 2015-06-30 2017-05-11 Закрытое акционерное общество "Лаборатория Касперского" Способ предотвращения работы программ, содержащих нежелательный для пользователя функционал
US10435457B2 (en) 2015-08-06 2019-10-08 President And Fellows Of Harvard College Microbe-binding molecules and uses thereof
US11564893B2 (en) 2015-08-17 2023-01-31 Modernatx, Inc. Methods for preparing particles and related compositions
EP3374390A1 (en) 2015-11-13 2018-09-19 Visterra, Inc. Compositions and methods for treating and preventing influenza
US11576961B2 (en) 2017-03-15 2023-02-14 Modernatx, Inc. Broad spectrum influenza virus vaccine
EP3946613A1 (en) 2019-03-25 2022-02-09 Visterra, Inc. Compositions and methods for treating and preventing influenza
CN114075278B (zh) * 2020-08-18 2022-11-08 东莞市朋志生物科技有限公司 抗Flu-A的抗体及其制备方法和检测试剂盒

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100473665C (zh) 2005-02-06 2009-04-01 厦门大学 一种h5亚型禽流感病毒血凝素蛋白的单克隆抗体，其制备方法及其用途
JP5525688B2 (ja) * 2005-08-19 2014-06-18 株式会社ビーエル インフルエンザウイルスｈ５亜型の免疫検出法
WO2007074812A1 (ja) * 2005-12-26 2007-07-05 Bl Co., Ltd. Ａ型インフルエンザウイルスｈ５亜型の検出法
JP4936428B2 (ja) * 2006-03-28 2012-05-23 大阪府 Ｈ５亜型インフルエンザウイルスの特異的検出
JP5300200B2 (ja) 2006-08-31 2013-09-25 大阪府 トリインフルエンザウイルスに特異的な迅速診断法
JP5435844B2 (ja) 2007-02-13 2014-03-05 株式会社ビーエル インフルエンザウイルスｈ５亜型の免疫検出法
AU2008349862B2 (en) * 2008-02-05 2014-02-06 Temasek Life Sciences Laboratory Limited Binding protein and epitope-blocking ELISA for the universal detection of H5-subtype influenza viruses

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Biochem. Biophys. Res. Commun. 378(2): 197-202(2008. 11. 14. 인터넷 공지)
J. Virol. 63(8): 3453-3458(1989. 8.)*
Microbiol. Immunol. 51(9): 903-907(2007)*
PLoS One. 4(2): e4566(2009. 2. 24. 인터넷 공지)

Also Published As

Publication number Publication date
JP5586064B2 (ja) 2014-09-10
KR20100124720A (ko) 2010-11-29
JPWO2009119722A1 (ja) 2011-07-28
EP2284260A1 (en) 2011-02-16
CN101990575B (zh) 2015-06-17
US20110065095A1 (en) 2011-03-17
US8658354B2 (en) 2014-02-25
EP2284260A4 (en) 2011-08-10
WO2009119722A1 (ja) 2009-10-01
CN101990575A (zh) 2011-03-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101625979B1 (ko) 항 ｈ5 아형 ａ형 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 모노클로날 항체
EP2250197B1 (en) Binding protein and epitope-blocking elisa for the universal detection of h5-subtype influenza viruses
AU2008297594B2 (en) Monoclonal antibodies specific to hemagglutinin and neuraminidase from influenza virus H5-subtype or N1-subtype and uses thereof
KR101421460B1 (ko) Ｈ５ 조류 인플루엔자 진단 및 감시를 위해 유용한 ｈ５ 서브타입-특이적 결합 단백질
KR101821956B1 (ko) 인플루엔자 a 바이러스의 뉴클레오단백질에 특이적인 단클론항체 및 이를 이용한 신속 형광면역 진단키트
Bai et al. Characterization of monoclonal antibodies against duck Tembusu virus E protein: an antigen-capture ELISA for the detection of Tembusu virus infection
KR101511619B1 (ko) 개 인플루엔자 바이러스 h3n2의 ha1 단백질을 항원으로 포함하는 개 인플루엔자 바이러스 h3n2에 특이적인 혈청 진단용 키트
KR20120028603A (ko) 돼지인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 검출용 항체 및 이의 용도
JP2012052916A (ja) Ａ型インフルエンザウイルス核タンパク質の第１００番アミノ酸がアルギニンであるか否かを判定する方法
KR101329342B1 (ko) 돼지인플루엔자 바이러스 뉴라미니다아제 검출용 항체 및 이의 용도
WO2010110737A1 (en) Monoclonal antibody against a conserved domain of m2e polypeptide in influenza viruses
AU2013224734A1 (en) Monoclonal antibodies specific to hemagglutinin and neuraminidase from influenza virus h5-subtype or n1-subtype and uses thereof

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
LAPS Lapse due to unpaid annual fee