KR101568656B1 - 산유자 추출물을 이용한 피부 미백용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 Mushroom 티로시나아제 저해 활성을 가지고 또한 멜라닌 형성 자극제인α-MSH로 자극된 멜라노마 세포인 B16F10에 처리될 때 멜라닌 생성 억제 활성을 보이는 산유자 추출물을 이용한 피부 미백용 조성물을 개시한다.
Description
본 발명은 산유자(Xylosma congesta) 추출물을 이용한 피부 미백용 조성물에 관한 것이다.
피부 미백이 멜라닌 색소와 직접적으로 관련되어 있다는 것은 널리 알려진 사실이다.
멜라닌은 자외선을 차단하여 진피 이하의 피부 기관을 보호해주는 동시에, 피부 생체 내에 생겨난 자유라디칼 등에 의한 피부 내 단백질과 유전자들의 손상을 보호해 주는 유용한 역할을 하지만, 멜라닌이 필요 이상으로 많이 생기게 되면 피부 노화를 가져오며 기미나 주근깨 등과 같은 과색소침착증을 유발한다.
멜라닌 합성은 멜라노좀 내에 존재하는 티로시나제 및 티로시나제 관련 단백질(tyrosinase related protein)의 작용에 의하여 이루어진다. 구체적으로 티로시나제(tyrosinase)에 의하여 티로신(tyrosine)이 산화되어 도파(DOPA, 3,4-dihydroxyphenylalanine)로, 이어 도파옥시다제(dopaoxidase)의 작용으로 도파가 다시 산화되어 도파퀴논(dopaquinone)으로 바뀐 후, 티로시나제 관련 단백질인 TRP-1(5,6-dihydroxy indole-2-carboxylic acid oxidase)과 TRP-2(dopachrome tautomerase)의 작용에 의하여 멜라닌을 생성한다. 티로시나제, TRP-1 및 TRP-2는 전사인자 MITF(microphthalmia-associated transcription factor)에 의해 발현이 촉진되며, MITF는 ERK(extracellular signal-regulated kinase)가 활성화되면 그 발현이 억제되는 것으로 알려져 있다(DS Kim, et al., J Cell Sci. 2003;116:1699-706).
본 발명은 티로시나아제 저해 활성을 가지고 또한 멜라닌 형성 자극제인α-MSH로 자극된 멜라노마 세포인 B16F10에서 멜라닌 생성 억제 활성을 가지는 산유자 추출물을 개시한다.
본 발명의 목적은 산유자 추출물을 이용한 피부 미백용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 기타의 목적이나 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.
본 발명자들은 아래의 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 산유자 잎의 70% 에탄올 추출물이 mushroom 티로시나아제 저해 활성을 가지고 또한 멜라닌 형성 자극제인α-MSH로 자극된 멜라노마 세포인 B16F10에 처리될 때 농도 의존적으로 멜라닌 생성 억제 활성을 가짐을 확인할 수 있었다.
본 발명의 피부 미백용 조성물은 이러한 실험 결과에 기초하여 제공되는 것으로, 산유자 추출물을 유효성분으로 포함함을 특징으로 한다.
본 명세서에서 "산유자 추출물"은 추출 대상인 산유자 잎, 줄기, 뿌리, 또는 이들의 혼합물을 메탄올, 에탄올 등의 탄소수 1 내지 4의 알콜, 아세톤, 에틸아세테이트, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 물, 또는 이들의 혼합 용매로 추출하여 얻어진 추출물과 그 추출물을 상기 열거된 용매로 분획된 분획물을 포함하는 의미로서 이해된다. 여기서 추출 방법은 추출 대상을 추출 용매에 침지시키는 방법과 추출 대상을 추출 용매로 증류시키는 방법을 모두 포함한다. 또한 침지를 통한 추출 방법에는 냉침, 가온, 초음파, 환류 등 임의의 방식이 적용될 수 있다. 그럼에도 상기 "추출물"은 바람직하게는 그 추출 대상을 물, 에탄올 또는 이들의 혼합 용매로 추출(냉침, 열수 추출물 또는 증류)하여 얻어진 것을 의미하며, 더 바람직하게는 에탄올 함량이 70% 내지 90%의 에탄올 수용액을 의미한다. 상기에서 %는 부피 백분율에 의한 농도(v/v) 표현으로서, 당업계에 알려진 바와 같이 일정 부피의 용액 중에 녹아 있는 일정 부피의 용질을 의미한다. 예컨대 30%(v/v)는 용액 100㎖에 용질 30㎖가 용해되어 있다는 것이 된다. 또 본 명세서의 "추출물"의 의미에는 여과 등을 통하여 정제된 형태의 추출물, 추출 용매가 일부 제거된 액상의 농축된 추출물 그리고 추출 용매가 완전히 제거된 분말상의 추출물이 포함된다.
또 본 명세서에서, 상기 "유효성분"의 의미는 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.
또 본 명세서에서, "피부 미백"은 멜라닌의 생성이 저해됨에 따른 결과로서 이해되는데, 구체적으로는 멜라닌의 과다 생성에 의한 증상, 예컨대 기미, 주근깨, 검버섯 등의 예방, 발현 지연 또는 치료를 의미한다.
본 발명의 피부 미백용 조성물은 유효성분 이외에, 피부 미백 효과를 상승 또는 보강시킬 수 있도록 피부 미백 효과가 있다고 이미 알려진 여타의 공지된 화합물이나 식물 추출물을 추가로 포함할 수도 있다.
여기서 상기 여타의 화합물이나 식물 추출물로서는 예컨대 멀캅토숙신산, 멀캅토덱스트란, 테프레논, 디하이드록시-이소퀴놀린, 3-하이드록시마뉼, 비타민 K, 티아졸리돈, 키누레닌, 레몬 추출물, 오이 추출물, 오디 추출물, 감초 추출물, 로즈마리 추출물, 아세로라 체리 추출물, 은행 추출물, 카롭(carob) 추출물, 제라늄(geranium) 추출물, 허브 추출물 등을 들 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 이러한 화합물 또는 식물 추출물은 본 발명의 피부 미백용 조성물에 그 유효성분과 함께 하나 이상 포함될 수 있다.
본 발명의 피부 미백용 조성물에 있어서, 그 유효성분은 용도, 제형(화장품, 비누, 연고 등) 등에 따라 그것의 인체에 독성을 미치지 않는 범위 내에서 임의의 양으로 포함될 수 있는데, 구체적으로 조성물 전체 중량에 비하여 0.01 중량 % 내지 99.99 중량 %로 포함될 수 있다.
본 발명의 피부 미백용 조성물은 구체적인 양태에 있어서, 화장품 조성물로서 파악될 수 있다.
본 발명의 피부 미백용 조성물이 화장품 조성물로서 파악될 경우, 그 화장품 조성물은 다양한 제형으로 제조될 수 있는데, 예컨대 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데
이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수(스킨), 영양 화장수(밀크로션), 영양 크림, 맛사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 제형에 따라 적절한 담체 성분을 포함하여 제조되며, 유효성분 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제를 포함하여 제조될 수 있다.
상기 안정화제, 용해화제, 비타민, 향료 등의 보조제, 제형에 따른 담체 성분 등은 당업계에 공지되어 있으며, 적절한 해당 물질을 선택하여 사용할 수 있다.
화장품 조성물의 제형이 크림이나 페이스트인 경우 돈지, 양지, 어유 등의 동물성 유지, 야자유, 팜유, 대두유, 파마자유, 올리브유 등의 식물성 유지, 왁스, 파라핀, 전분 등이 담체 성분으로서 사용될 수 있고, 화장품 조성물의 제형이 비누인 경우에도 상기 예시한 식물성 유지나 동물성 유지를 담체 성분으로서 사용할 수 있다. 또 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드 등이 사용될 수 있고, 스프레이인 경우 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있다.
본 발명의 피부 미백 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서 약제학적 조성물로 파악될 수 있다.
본 발명의 피부 미백용 조성물이 약제학적 조성물로 파악될 경우, 그 약리 효과는 멜라닌의 증가에서 비롯되는 질병에 대한 치료 또는 예방 효과로서 파악될 수 있으며, 상기 피부 미백의 의미는 상기 질병의 치료 또는 예방의 의미로서 이해될 수 있다. 멜라닌의 증가에서 비롯되는 질병으로서는 기미, 주근깨, 검버섯 등의 피부 과색소 침착증이나 피부 노화 등이 예시될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 그 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 등을 포함하여, 경구용 제형(정제, 현탁액, 과립, 에멀젼, 캡슐, 시럽 등), 비경구형 제형(멸균 주사용 수성 또는 유성 현탁액), 국소형 제형(용액, 크림, 연고, 겔, 로션, 패치) 등으로 제조될 수 있다.
상기에서 "약제학적으로 허용되는" 의미는 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응가능한 이상의 독성을 지니지 않는다는 의미이다.
약제학적으로 허용되는 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 전분(예컨대 옥수수 전분, 감자 전분 등), 셀룰로오스, 그것의 유도체(예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸셀룰로오스 등), 맥아, 젤라틴, 탈크, 고체 윤활제(예컨대 스테아르산, 스테아르산 마그네슘 등), 황산 칼슘, 식물성 기름(예컨대 땅콩 기름, 면실유, 참기름, 올리브유 등), 폴리올(예컨대 프로필렌 글리콜, 글리세린 등), 알긴산 등을 들 수 있고, 기타 필요에 따라 유화제(예컨대 TWEENS), 습윤제(예컨대 라우릴 황산 나트륨), 착색제, 풍미제, 정제화제, 안정화제, 항산화제, 보존제, 물, 식염수, 인산염 완충 용액 등을 포함할 수 있다. 이러한 성분들은 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적당한 것을 하나 이상 선택하여 사용할 수 있다.
부형제도 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적합한 것을 선택하여 사용할 수 있는데, 예컨대 본 발명의 약제학적 조성물이 수성 현탁제로 제조될 경우에 적합한 부형제로서는 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 히드로프로필메틸셀룰로오스, 알긴산 나트륨, 폴리비닐피롤리돈 등을 들 수 있다. 주사액으로 제조되는 경우 적합한 부형제로서는 링거액, 등장 염화나트륨 등을 들 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있으나, 통상적으로는 외용제 제형으로 피부에 국소적으로 직접 투여될 것이다.
본 발명의 약제학적 조성물은 그 1일 투여량이 통상 0.001 ~ 150 mg/kg 체중 범위이고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중, 환자의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되는 것이므로 상기 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 아니 된다.
본 발명의 조성물은 구체적인 양태에 있어서, 식품 조성물로서 파악할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 건강 보조식품, 특수 영양 보충용 식품, 기능성 음료 등으로 제조될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 감미제, 풍미제, 생리활성 성분, 미네랄 등이 포함될 수 있다.
감미제는 식품이 적당한 단맛을 나게 하는 양으로 사용될 수 있으며, 천연의 것이거나 합성된 것일 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.
풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.
생리 활성 물질로서는 카테킨, 에피카테킨, 갈로가테킨, 에피갈로카테킨 등의 카테킨류나, 레티놀, 아스코르브산, 토코페롤, 칼시페롤, 티아민, 리보플라빈 등의 비타민류 등이 사용될 수 있다.
미네랄로서는 칼슘, 마그네슘, 크롬, 코발트, 구리, 불소화물, 게르마늄, 요오드, 철, 리튬, 마그네슘, 망간, 몰리브덴, 인, 칼륨, 셀레늄, 규소, 나트륨, 황, 바나듐, 아연 등이 사용될 수 있다.
또한 본 발명의 식품 조성물은 상기 감미제 등 이외에도 필요에 따라 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등을 포함할 수 있다.
이러한 보존제, 유화제 등은 그것이 첨가되는 용도를 달성할 수 있는 한 극미량으로 첨가되어 사용되는 것이 바람직하다. 극미량이란 수치적으로 표현할 때 식품 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.0005중량％ 내지 약 0.5중량％ 범위를 의미한다.
사용될 수 있는 보존제로서는 소듐 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등을 들 수 있다.
사용될 수 있는 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있다.
사용될 수 있는 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등을 들 수 있다. 이러한 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다.
사용될 수 있는 점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등을 들 수 있다.
또한 본 발명의 식품 조성물은 향미나 기호성을 향상시키고 주름 개선 등 피부 관련 기능성을 보강·향상시키기 위하여 천연물 유래의 분말 또는 추출물을 포함할 수 있는데, 선지 분말 또는 추출물, 콩나물 분말 또는 추출물, 조개 분말 또는 추출물, 굴 분말 또는 추출물, 산미나리 분말 또는 추출물, 무 즙 또는 추출물, 오이 즙 또는 추출물, 부추 즙 또는 추출물, 시금치 즙 또는 추출물, 연근 즙 또는 추출물, 칡 즙 또는 추출물, 솔잎 즙 또는 추출물, 인삼 즙 또는 추출물, 백화사설초 분말 또는 추출물, 감초 분말 또는 추출물, 갈화 분말 또는 추출물, 갈근 분말 또는 추출물, 사인 분말 또는 추출물, 박 분말 또는 추출물, 생강 분말 또는 추출물, 대추 분말 또는 추출물, 인진 분말 또는 추출물, 지구자 분말 또는 추출물, 수비계 분말 또는 추출물, 백출 분말 또는 추출물, 저령 분말 또는 추출물, 진귤 종자(진귤의 껍질) 분말 또는 추출물, 구기자 분말 또는 추출물, 녹차 분말 또는 추출물, 오미자 분말 또는 추출물, 헛개나무 분말 또는 추출물, 지치 분말 또는 추출물, 노근 분말 또는 추출물, 계피 분말 또는 추출물, 데커시놀 등이 예시될 수 있다. 이러한 추출물은 추출 대상을 혼합하여 얻어질 수도 있다.
전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 산유자 추출물을 이용한 피부 미백용 조성물을 제공할 수 있다. 본 발명의 피부 미백용 조성물은 화장품, 약품, 식품 등으로 제품화될 수 있다.
도 1은 멜라닌 형성 자극제인α-MSH로 자극된 멜라노마 세포인 B16F10에서 산유자 잎 추출물의 멜라닌 생성 억제 활성을 보여주는 결과이다.
이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
<
실시예
>
산유자 잎 추출물의 제조
산유자 잎 분말에 3배 중량의 70% 에탄올을 넣고 상온에서 48시간 교반하면서 추출한 후 여과하고 그 여액을 감압농축하고 동결건조하여 분말상의 산유자 추출물을 얻었다.
<
실험예
>
미백 활성 실험
<실험예 1> 티로시나아제 억제 활성 실험
0.1M potassium phosphate buffer (pH 6.5) 220 ㎕에 농도별로 희석한 시료 20 ㎕를 첨가 후 1250 unit/ml mushroom tyrosinase 20 ul를 첨가한다. 기질 1.5 mM L-tyrosine 40 ㎕씩 첨가하여 잘 섞은 후 37℃에서 10분 반응 후 490nm에서 ELISA reader를 이용하여 흡광도를 측정하고 아래의 식에 따라 시료의 처리 농도에 따른 저해율을 구한 다음 IC50 값을 구해 아래의 [표 1]에 나타내었다. 양성대조군으로 Arbutin을 사용하였다.
Inhibition % = 100-(A-B)/(C-D)x100
A: 시료액의 반응 후의 흡광도
B: tyrosinase 대신 완충액으로 대체하여 측정한 시료액의 흡광도
C: 공시료액의 반응 후의 흡광도
D: tyrosinase 대신 완충액으로 대체하여 측정한 공시료액의 흡광도
| Sample | IC50(㎍/㎖) |
| 산유자 | 594 |
| Arbutin | 236.93 |
상기 [표 1]에서 확인되는 바와 같이, 기질인 L-tyrosine과 효소인 mushroom tyrosinase에 의해 산화되어 생성되는 멜라닌의 흡광도를 측정하여 멜라닌 생성에 중요한 역할을 하는 효소인 tyrosinase의 억제 활성 측정 결과, 실시예의 산유자 시료는 Arbutin보다는 활성이 낮지만 tyrosinase 저해 활성을 가짐을 보여준다.
<실험예 2> 멜라닌 생성 저해 활성 실험
<실험예 2-1> 세포 배양
B16/F10 세포는 쥐의 melanoma 세포주로 Korean Cell Line Bank(KCLB)로부터 분양 받아 100 units/㎖의 penicillin-streptomycin(GIBCO, Grand Island, NY, USA)과 10%의 fetal bovine serum (FBS; GIBCO, Grand Island, NY, USA)이 함유된 RPMI 1640 또는 DMEM 배지(GIBCO, Grand Island, NY, USA)를 사용하여 37℃, 5% CO2 항온기에서 배양하였으며, 계대 배양은 3~4일에 한 번씩 시행하였다.
<실험예 2-2> 멜라닌 생성 저해 활성 평가
B16F10 melanoma 세포주를 6 well plate에 1×105/well의 세포수로 분주하고 24시간 후 배지 제거 후 100 nM의 α-melanocyte stimulating hormone (α-MSH)와 양성대조군인 알부틴과 시료를 농도별로 처리 후 72시간 배양한다. PBS 2번 세척 후 lysis buffer (100 mM sodium phosphate (pH6.8), 0.1 mM PMSF, 1% Triton X-100)를 넣고 -80℃에서 30분 용해시킨다. 세포 수거 후 10% DMSO가 포함된 1N NaOH로 65℃ 1시간 반응하여 pellet을 용해시킨 후 405 nm에서 흡광도 측정한다.
결과를 [도 1]에 나타내었다.
[도 1]을 참조하여 보면, 실시예의 산유자 시료는 처리 농도에 비례하여 멜라닌 생성 억제 활성을 보임을 알 수 있으며, 양성대조군인 Arbutin에 비해 멜라닌 생성 억제 활성이 월등히 우수함을 알 수 있다.
Claims (6)
- 산유자 잎의 70%(v/v) 에탄올 수용액 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물.
- 삭제
- 제1항에 있어서,
상기 조성물은 화장품 조성물인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 조성물은 식품 조성물인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
- 산유자 잎의 70%(v/v) 에탄올 수용액 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 과색소 침착증 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
- 삭제
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- 2013-07-10 KR KR1020130081127A patent/KR101568656B1/ko active IP Right Grant
- 2013-12-04 KR KR1020130149594A patent/KR20140072815A/ko not_active Application Discontinuation
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| KR20180091561A (ko) | 2017-02-07 | 2018-08-16 | 한재수 | 미백조성물의 제조방법 |
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