KR101867350B1 - 산양삼 종자 효소 처리 추출물을 이용한 피부 미백용 조성물 - Google Patents
산양삼 종자 효소 처리 추출물을 이용한 피부 미백용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 산양삼 종자 효소 처리 추출물을 이용한 피부 미백용 조성물을 개시한다. 구체적으로 본 발명은 멜라닌 형성 자극제인α-MSH로 자극된 멜라노마 세포인 B16F10에서 농도 의존적으로 멜라닌 생성 억제 활성과 티로시나아제 억제 활성을 갖는, 산양삼 종자 효소 처리 추출물 특히 아미노펩티다아제 활성과 카르복시펩티다아제 활성을 갖는 Kojizyme™ 또는 엔도펩티다아제(endopeptidase) 활성을 갖는 Alcalase™ 처리 추출물을 피부 미백용 조성물을 개시한다.
Description
본 발명은 산양삼 종자 효소 처리 추출물을 이용한 피부 미백용 조성물에 관한 것이다.
사람의 피부색은 여러 가지 요인들 특히, 계절, 인종 및 성별에 따라 다르며, 주로 멜라닌, 카로틴, 및 헤모글로빈의 양에 의해서 결정되는데, 이중 멜라닌(melanin)이 가장 결정적인 요소로 작용한다.
멜라닌(melanin)은 일정량 이상의 자외선을 흡수하여 유해한 자외선이 인체 내로 침투하는 것을 차단하여 인체를 보호하는 역할을 한다. 빛에 의해 피부가 갈색으로 변하는 것은, 피부 아래층에 존재하는 멜라닌세포가 자외선에 의해 자극을 받아 신체를 보호하기 위해 멜라닌을 만들고, 만든 멜라닌을 피부 위쪽으로 올려 보내어 자외선이 피부 깊숙히 침투하는 것을 방지하기 때문이다. 멜라닌은 만들어진 후 일정 기간이 지나면 피부 표면에서 각질이 되어 떨어져 나가게 된다. 그러나 멜라닌이 국소적으로 과생성 될 경우 기미, 주근깨, 검은반점, 피부암 등의 피부 질환을 일으키게 된다. 또한 지속적으로 과생성 된 멜라닌이 진피에 머무르게 되면 피부색을 검게 변하게 하거나 안색을 칙칙하게 바꾸기에 미백에 대한 욕구를 유도하게 된다(Pigment Cell Res. 2007 Feb;20(1):2-13.; Curr Biol. 2011 Nov 22;21(22):1906-11.;Ann Dermatol Venereol. 2012 Nov;139 Suppl 3:S73-7).
멜라닌은 기질인 티로신(tyrosine)의 연속적인 산화반응으로 합성되는데, 구체적으로 티로신이 티로시나아제(tyrosinase), TRP-1(tyrosinase related protein-1), TRP-2(tyrosinase related protein-2)의 작용에 의해 도파(DOPA, 3,4-dihydroxyphenylalanine)를 거쳐 도파 퀴논(DOPA quinone)으로 전환된 후 비효소적 반응, 자발적 산화 과정을 거쳐 아미노산 혹은 단백질과의 중합 반응에 의해 합성된다(Korean J. FOOD SCI. TECHNOL., 32(3):736, 2000; Journal of Life Science, 23(12):1445, 2013)).
멜라닌을 생성하는 첫 단계로 티로시나아제가 가장 중요한 역할을 하기 때문에 미백제 개발을 위해 다양한 티로시나아제 저해제에 대한 탐색이 지속적으로 진행되어 왔다.
티로시나아제의 활성을 억제하는 대표적인 물질로는, 알부틴(arbutin), 코직산(kojic acid) 등이 있다. 알부틴과 코직산은 강력한 미백효과가 있는 것으로 알려져 있으나, 피부 자극 등의 일부 부작용으로 인하여 상대적으로 부작용이 적은 천연의 물질로부터 미백 활성을 가지는 물질을 찾기 위한 연구가 활발하게 이루어지고 있다.
본 발명은 멜라닌 생성 억제 활성과 티로시나아제 억제 활성을 가지는 산양삼 종자 효소 추출물을 개시한다.
본 발명의 목적은 산양삼 종자 효소 처리 추출물을 이용한 피부 미백용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적이나 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.
본 발명은 아래의 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 산양삼 종자 효소 처리 추출물 특히 아미노펩티다아제 활성과 카르복시펩티다아제 활성을 갖는 Kojizyme™ 또는 엔도펩티다아제(endopeptidase) 활성을 갖는 Alcalase™ 처리 추출물이 멜라닌 형성 자극제인α-MSH로 자극된 멜라노마 세포인 B16F10에 처리될 때 농도 의존적으로 멜라닌 생성 억제 활성과 티로시나아제 억제 활성을 보임을 확인함으로써 완성된 된 것이다.
본 발명은 이러한 실험 결과에 기초하여 제공되는 것으로, 본 발명의 피부 미백용 조성물은 산양삼 종자의 Kojizyme™ 또는 Alcalase™ 효소 처리물 또는 그 추출물을 유효성분으로 포함함을 특징으로 한다.
본 명세서에서, "산양삼"은 산간의 삼림에서 인위적으로 종자나 묘삼을 파종 이식하여 재배한 인삼(Panax ginseng)을 말한다.
또 본 명세서에서, "Kojizyme™ 효소 처리물"는 아미노펩티다아제 활성과 카르복시펩티다아제 활성을 갖는 효소 처리물을 말한다. 따라서 산양삼 종자의 Kojizyme™ 처리물은 ~ 활성을 갖는 효소 처리물로 바꿔 이해될 수 있다. 이때 효소 처리의 pH, 온도, 효소 처리 시간은 해당 효소 특성에 따라서 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 적절히 선택·조정할 수 있다.
또 본 명세서에서, "Alcalase™ 효소 처리물"은 엔도펩티다아제(endopeptidase) 활성을 갖는 효소 처리물을 말한다. 여기서도 산양삼 종자의 Alcalase™ 효소 처리물은 엔도프로테아제 활성을 갖는 효소 처리물로 바꿔 이해될 수 있다. 이때 효소 처리의 pH, 온도, 효소 처리 시간은 해당 효소 특성에 따라서 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 적절히 선택·조정할 수 있다.
본 명세서에서, "산양삼 종자의 효소 처리 추출물"이란 추출 대상인 산양삼 종자 효소 처리물을 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올 등의 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜, 메틸렌클로라이드, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, N,N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 침출하여 얻어진 추출물, 이산화탄소, 펜탄 등 초임계 추출 용매를 사용하여 얻어진 추출물 또는 그 추출물을 분획하여 얻어진 분획물을 의미하며, 추출 방법은 활성물질의 극성, 추출 정도, 보존 정도를 고려하여 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사, 초임계 추출 등 임의의 방식을 적용할 수 있다. 분획된 추출물의 경우 상기 추출물을 특정 용매에 현탁시킨 후 극성이 다른 용매와 혼합·정치시켜 얻은 분획물, 상기 추출물을 실리카겔 등이 충진된 칼럼에 흡착시킨 후 소수성 용매, 친수성 용매 또는 이들의 혼합 용매를 이동상으로 하여 얻은 분획물을 포함하는 의미이다. 또한 상기 추출물의 의미에는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조 등의 방식으로 추출 용매가 제거된 농축된 액상의 추출물 또는 고형상의 추출물이 포함된다. 바람직하게는 추출용매로서 물, 에탄올 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물, 더 바람직하게는 추출용매로서 물과 에탄올의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물을 의미한다. 가장 바람직하게는 열수 추출물이다.
또 본 명세서에서, "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.
또 본 명세서에서, "피부 미백"은 멜라닌의 과다 생성으로 인하여 감소된 피부 밝기의 증가로 이해될 수 있으며, 구체적으로는 멜라닌의 과다 생성에 의한 기미, 주근깨, 검버섯 등의 개선(증상 경감), 치료, 예방, 발현 억제 또는 지연을 의미한다.
본 발명의 피부 미백용 조성물은 유효성분 이외에, 피부 관련 활성을 보강·추가하기 위하여 당업계에 공지된 피부 미백 성분, 피부 주름 개선 성분, 자외선 보호 성분, 피부 보습 성분 등을 포함하여 제조될 수 있다. 구체적으로 피부 미백 성분으로서는 알부틴, 나이아신아마이드, 아스코빌글루코사이드, 알파-비사보롤, 유용성 감초 추출물(Oil Soluble Licorice(Glycyrrhiza) Extract) 등을 들 수 있으며, 또 피부 주름 개선 성분으로서는 레티놀, 레티닐팔미테이트, 아데노신, 폴리에톡실레이티드아마이드 등을 들 수 있고, 자외선 보호 성분으로서는 드로메트리졸, 드로메트리졸트리실록산, 디갈로일트리올리에이트, 디메치코디에칠벤잘말로네이트, 디에칠헥실부타미도트리아존, 소나무 껍질 추출물 등의 복합물, 포스파티딜세린, 핑거루트 추출 분말, 홍삼과 산수유 등의 복합 추출물 등을 들 수 있다. 또 보습 성분으로서는 AP 콜라겐 효소 분해 펩타이드, Collactive 콜라겐 펩타이드, N-아세틸글루코사민, 곤약 감자 추출물, 민들레 등의 복합 추출물, 쌀겨 추출물, 옥수수 배아 추출물, 저분자 콜라겐 펩타이드, 지초 추출 분말, 포스파티딜세린, 히알루론산 등을 들 수 있다. 여타의 피부 미백 성분, 주름 개선 성분, 자외선 보호 성분, 피부 보습 성분들에 대해서는 화장품법에 따른 기능성화장품공전(식약처고시 "기능성화장품 기준 및 시험방법"), 건강기능식품에관한법률의 건강기능식품공전(식약처고시 "건강기능식품 기준 및 규격)을 참조할 수 있다. 이러한 성분들은 본 발명의 피부 미백용 조성물에 그 유효성분과 함께 하나 이상 포함될 수 있다.
본 발명의 피부 미백용 조성물에 있어서, 그 유효성분은 그것이 미백 활성을 나타낼 수 있는 한 제품 유형, 구체적 용도, 제형, 투여 경로 등에 따라 임의의 양으로 포함될 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 15 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 그 적용 대상인 포유동물 바람직하게는 사람에게 의료 전문가 등의 제언에 의한 투여 기간 동안, 사용자가 의도한 사용 기간 동안 본 발명의 조성물이 투여 또는 사용될 때, 피부 미백 효과 등 의도한 의료적·약리학적·피부학적 효과를 나타낼 수 있는, 본 발명의 조성물에 포함되는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.
본 발명의 피부 미백용 조성물은 구체적인 양태에 있어서, 화장료 조성물로 파악할 수 있다.
본 발명의 조성물이 화장료 조성물로 파악될 경우에도 그 화장료 조성물은 그 용도상, 법률상 임의의 제품 구분을 띨 수 있으며, 구체적으로 피부 미백 등의 용도를 가진 기능성 화장품, 비기능성 일반 화장품 등일 수 있다. 제품 형태에 있어서도 임의의 제품 형태를 띨 수 있는데, 구체적으로 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이 등으로 제형화될 수 있다. 구체적인 제품 형태에 있어서는 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형 등일 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 그 유효성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들, 예컨대, 안정화제, 용해화제, 계면활성제, 비타민, 색소 및 항료와 같은 통상적인 보조제, 및 담체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 피부 미백 활성을 나타내는 그 유효성분을 포함하는 것을 제외하고는 당업계에 통상적으로 행하여지는 화장료 조성물의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.
본 발명의 피부 미백용 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서, 식품 조성물로 파악할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 어떠한 형태로도 제조될 수 있으며, 예컨대 차, 쥬스, 탄산음료, 이온음료 등의 음료류, 우유, 요구루트 등의 가공 유류, 껌류, 떡, 한과, 빵, 과자, 면 등의 식품류, 정제, 캡슐, 환, 과립, 액상, 분말, 편상, 페이스트상, 시럽, 겔, 젤리, 바 등의 건강기능식품 제제류 등으로 제조될 수 있다. 또 본 발명의 식품 조성물은 법률상·기능상의 구분에 있어서 제조·유통 시점의 시행 법규에 부합하는 한 임의의 제품 구분을 띨 수 있다. 예컨대 건강기능식품에관한법률에 따른 건강기능식품이거나, 식품위생법의 식품공전(식약처 고시, 식품의 기준 및 규격)상 각 식품유형에 따른 두유류, 발효음료류, 특수용도식품 등일 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 식품첨가물이 포함될 수 있다. 식품첨가물은 일반적으로 식품을 제조, 가공 또는 보존함에 있어 식품에 첨가되어 혼합되거나 침윤되는 물질로서 이해되는데, 식품과 함께 매일 그리고 장기간 복용되므로 그 안전성이 보장되어야 한다. 식품위생법에 따른 식품첨가물공전(식약처 고시, 식품첨가물 기준 및 규격)에는 안전성이 보장된 식품첨가물이 화학적 합성품, 천연 첨가물, 혼합 제제류로 구분하여 한정적으로 규정되어 있다.
이들 식품첨가물은 기능적 측면에 있어서는 감미제, 풍미제, 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등으로 구분될 수 있다.
감미제는 식품이 적당한 단맛을 나게 하는 양으로 사용될 수 있으며, 천연의 것이거나 합성된 것일 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.
풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수도 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.
보존제로서는 소듐 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등이 사용될 수 있고, 또 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있으며, 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등이 사용될 수 있다. 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다.
점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 전술한 바의 식품첨가물 이외에, 기능성과 영양성을 보충, 보강할 목적으로 당업계에 공지되고 식품첨가물로서 안정성이 보장된 생리활성 물질이나 미네랄류를 포함할 수 있다.
그러한 생리활성 물질로서는 녹차 등에 포함된 카테킨류, 비타민 B1, 비타민 C, 비타민 E, 비타민 B12 등의 비타민류, 토코페롤, 디벤조일티아민 등을 들 수 있으며, 미네랄류로서는 구연산 칼슘 등의 칼슘 제제, 스테아린산마그네슘 등의 마그네슘 제제, 구연산철 등의 철 제제, 염화 크롬, 요오드칼륨, 셀레늄, 게르마늄, 바나듐, 아연 등을 들 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 전술한 바의 식품첨가물이 제품 유형에 따라 그 첨가 목적을 달성할 수 있는 적량으로 포함될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에 포함될 수 있는 기타의 식품첨가물과 관련하여서는 식품공전이나 식품첨가물 공전을 참조할 수 있다.
본 발명의 피부 미백용 조성물은 구체적인 양태에 있어서, 약제학적 조성물로 파악할 수 있다.
본 발명의 피부 미백용 조성물이 약제학적 조성물로 파악될 경우 대상 질환은 피부 과색소침착증으로 이해될 수 있으며, 그러한 과색소침작증의 구체적인 예로서는 주근깨, 노인성 반점, 간반, 기미, 갈색 또는 흑점, 일광 색소반, 푸른 흑피증(cyanic melasma), 칼슘 길항제와 같은 약물 사용 후의 과다색소침착, 조직경화치료법(sclerotherapy)에 따른 후유증, 임신성 갈색반(gravidic chloasma), 경구 피임약을 복용한 여성에서의 흑피증, 찰상 및 화상을 비롯한 상처 또는 피부염으로 인한 염증 후 과다 색소 침착, 광독성 반응 또는 다른 유사한 소형의 고정 색소성 병변 등이 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 약제학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하여 당업계에 공지된 통상의 방법으로 투여 경로에 따라 경구용 제형 또는 비경구용 제형으로 제조될 수 있다. 여기서 "약제학적으로 허용되는" 의미는 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응 가능한 이상의 독성을 지니지 않는다는 의미이다.
본 발명의 약제학적 조성물이 경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 현탁액, 웨이퍼 등의 제형으로 제조될 수 있다. 이때 약제학적으로 허용되는 적합한 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 덱스트로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨 등의 당류, 옥수수 전분, 감자 전분, 밀 전분 등의 전분류, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등의 셀룰로오스류, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 맥아, 젤라틴, 탈크, 폴리올, 식물성유 등을 들 수 있다. 제제화활 경우 필요에 따라 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 및/또는 부형제를 포함하여 제제화할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물이 비경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 주사제, 경피 투여제, 비강 흡입제 및 좌제의 형태로 제제화될 수 있다. 주사제로 제제화활 경우 적합한 담체로서는 멸균수, 에탄올, 글리세롤이나 프로필렌 글리콜 등의 폴리올 또는 이들의 혼합물을 들수 있으며, 바람직하게는 링거 용액, 트리에탄올 아민이 함유된 PBS(phosphate buffered saline)나 주사용 멸균수, 5% 덱스트로스 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 경피 투여제로 제제화할 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태로 제제화될 수 있다. 비강 흡입제의 경우 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 등의 적합한 추진제를 사용하여 에어로졸 스프레이 형태로 제제화될 수 있으며, 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 폴리에틸렌글리콜류, 카카오지, 라우린지, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르류, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트류, 소르비탄 지방산 에스테르류 등이 사용될 수 있다.
약제학적 조성물의 제제화와 관련하여서는 당업계에 공지되어 있으며, 구체적으로 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)] 등을 참조할 수 있다. 상기 문헌은 본 명세서의 일부로서 간주 된다.
본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 성별, 연령, 환자의 중증도, 투여 경로에 따라 1일 0.001mg/kg ~ 10g/kg 범위, 바람직하게는 0.001mg/kg ~ 1g/kg 범위일 수 있다. 투여는 1일 1회 또는 수회로 나누어 이루어질 수 있다. 이러한 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 아니 된다.
전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 산양삼 효소 처리 추출물을 이용한 피부 미백용 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명의 피부 미백용 조성물은 식품, 화장품, 약품 등으로 제품화될 수 있으며, 천연물 유래의 피부 미백 물질을 이용함으로써 합성 피부 미백제와 비교할 때 상대적으로 부작용이 적을 수 있다.
도 1은 산양삼 종자 효소 처리 추출물의 멜라노마 세포인 B16F10에 대한 세포독성 결과이다.
도 2 및 3은 멜라닌 형성 자극제인α-MSH로 자극된 멜라노마 세포인 B16F10에서 산양삼 종자 효소 처리 추출물의 멜라닌 생성 억제 활성을 보여주는 결과이다.
도 4는 멜라닌 형성 자극제인α-MSH로 자극된 멜라노마 세포인 B16F10에서 산양삼 종자 효소 처리 추출물의 티로시나아제 억제 활성을 보여주는 결과이다.
도 2 및 3은 멜라닌 형성 자극제인α-MSH로 자극된 멜라노마 세포인 B16F10에서 산양삼 종자 효소 처리 추출물의 멜라닌 생성 억제 활성을 보여주는 결과이다.
도 4는 멜라닌 형성 자극제인α-MSH로 자극된 멜라노마 세포인 B16F10에서 산양삼 종자 효소 처리 추출물의 티로시나아제 억제 활성을 보여주는 결과이다.
이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
<
실시예
> 산양삼 종자 효소 추출물의 미백 활성 평가
<1> 시료 및 방법
산양삼
종자 효소추출물 제조
산양삼 종자 분쇄하여 얻은 산양삼 종자 분말 1 g을 100 ml의 물에 균질화시킨 뒤 효소를 기질 대비 1%(w/v)로 처리하고 아래 표 1의 반응 조건으로 효소적 가수분해를 수행하였다(구체적인 효소 반응 조건 아래 표 1 참조, 각 사용 효소의 적정 버퍼 및 활성은 아래 표 2 참조). 그 후 효소 반응액을 100℃에서 15분간 가열하여 추출한 후 3000 rpm에서 20분간 원심분리하고 상층액을 와트만 종이여과지(Whatman No.1)로 여과하였다. 이렇게 얻어진 각 추출물은 pH 7.0으로 조정하고 -20℃에서 보관하면서 실험에 사용하였다.
| 시료 번호 |
처리 효소 |
산양삼 종자 분말(g)/물(ml) | 온도, pH, 시간 |
| 1 | D.W. | - | - |
| 2 | Kojizyme™ | 1/100 | 40, pH6.0, 24hr |
| 3 | Termamyl™ | 1/100 | 60, pH6.0, 24hr |
| 4 | Flavourzyme™ | 1/100 | 50, pH7.0, 24hr |
| 5 | Ultraflo™ | 1/100 | 60, pH7.0, 24hr |
| 6 | Alcalase™ | 1/100 | 50, pH8.0, 24hr |
| 7 | Neutrase™ | 1/100 | 50, pH6.0, 24hr |
| 8 | AMG™ | 1/100 | 60, pH4.5, 24hr |
| 9 | Viscozyme™ | 1/100 | 50, pH4.5, 24hr |
| 10 | Celluclast™ | 1/100 | 50, pH4.5, 24hr |
| * 효소: Novozyme, Nordisk, Bagsvaerd, Denmark로부터 구입 | |||
| 시료 번호 |
처리 효소 |
처리효소 활성 |
| 1 | D.W. | - |
| 2 | Kojizyme™ | amino-peptidase and carboxy-peptidase |
| 3 | Termamyl™ | α-amylase |
| 4 | Flavourzyme™ | endoprotease and exopeptidase |
| 5 | Ultraflo™ | β-glucanase |
| 6 | Alcalase™ | endopeptidase |
| 7 | Neutrase™ | Metallo-endoprotease |
| 8 | AMG™ | exo-1,4-α-glucosidase |
| 9 | Viscozyme™ | Arabanase, cellulase, β-glucanase, hemi-cellulase and xylanase |
| 10 | Celluclast™ | cellulase |
세포 배양
마우스 멜라노마 세포인 B16F10 세포는 penicillin-streptomycin 100 units/mL과 10% fetal bovine serum(FBS)이 함유된 DMEM (Dulbecco’s modified Eagle’s medium) 배지 (GIBCO, Grand Island, NY, USA)를 사용하여 37℃, 5% CO2 항온기에서 배양하였으며, 4일에 한 번씩 계대배양을 시행하였다.
세포독성 평가
산양삼 종자 효소 추출물이 B16F10 세포의 생존률에 미치는 영향을 알아보기 위하여 MTT assay를 이용하여 세포독성을 평가하였다. B16F10 세포 (1.0×105 cells/ml)를 96 well plate에 접종하고 18시간 전 배양 후, 상기 산양삼 종자 효소 추출물(200 ㎍/ml)을 처리하여 72시간 동안 37℃, 5% CO2 세포배양기에서 배양하였다. 여기에 PBS 2 ㎎/㎖의 농도로 제조한 MTT 용액 50 ㎕를 첨가하고 4시간을 더 배양하였다. 배양액을 제거하고 각 well당 DMSO 200㎕를 가하여 MTT 환원에 의하여 생성된 포르마잔을 540 ㎚에서 흡광도를 측정하였다.
멜라닌 생성 저해율 측정
B16F10 세포(1.0×105 cells/mL)를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 로 18시간 동안 전배양한 후, 산양삼 종자 효소 추출물(50, 100 및 200 또는 200 ㎍/ml)를 멜라닌 형성 자극제인α-MSH(50 nM)와 함께 처리하여 72시간 37℃, 5% CO2 세포배양기에서 배양하였다. 72시간 후 Plate의 배지를 제거 후 PBS를 이용하여 2번 세척하였다. 세척된 세포를 수확하여 1 N NaOH를 첨가하여 세포를 완전히 녹인 후 405nm에서 ELISA로 흡광도를 측정하였다.
티로시나제
활성 저해율 측정
B16F10 세포를 6 well plate에 1×10 cells/㎖로 접종하고, 18시간 전 배양 후 산양삼 종자 효소추출물 (50, 100 및 200 ㎍/ml)를 멜라닌 형성 자극제인 α-MSH(50 nM)와 함께 처리하여 3일간 배양하였다. 3일 후 Plate의 배지를 제거 후 PBS를 이용하여 2번 세척하였고, 1% Triton X-100을 500uL 넣고 cell scraper로 세포를 수거하였다. 수거된 세포는 -70℃에서 급속 냉동시킨 후 해동시켰으며 이와 같은 방법을 3번 반복하여 세포막을 파괴하였다. 15000 rpm에서 15분간 원심분리 한 후 상층액을 취하여 10 nM L-DOPA와 0.1 M phosphate buffer (pH 6.8)를 첨가하여 37℃에서 1 시간 동안 반응시켰으며 475 nm에서 흡광도를 측정하였다.
<2> 실험 결과
세포독성 결과
실시예의 10가지 산양삼 종자 효소 추출물의 세포독성 결과를 도 1에 나타내었다. 상기 표 1의 10번 효소 추출물만 약간의 세포독성을 보이고, 나머지는 특별히 세포독성을 보이지 않았다.
멜라닌 생성 억제 활성 결과
실시예의 10가지 산양삼 종자 효소 추출물을 200 ㎍/ml로 처리한 결과를 도 2에 나타내었다. 도 2의 결과를 참조하여 보면, 상기 표 1의 2번 효소 추출물과 6번 효소 추출물이 가장 활성이 우수한 것으로 나타났다.
이러한 결과를 바탕으로 상기 표 1의 2번 및 6번 효소 추출물을 농도별(50, 100 및 200 ㎍/ml)로 처리하여 그 결과를 도 3에 나타내었다. 두 효소 추출물 모두 농도 의존적으로 멜라닌 생성을 억제하였다.
티로시나아제 억제 활성 결과
상기 표 1의 2번 및 6번 효소 추출물의 처리 농도(50, 100 및 200 ㎍/ml)에 따른 티로시나아제 억제 활성 결과를 도 4에 나타내었다. 도 4를 참조하여 보면 두 효소 추출물 모두 농도 의존적으로 티로시나아제 저해 활성을 가짐을 알 수 있다.
Claims (5)
- (i) 산양삼 종자에의 아미노펩티다아제 활성과 카르복시펩티다아제 활성을 갖는 코지자임(Kojizyme) 처리물의 추출물 또는 (ii) 산양삼 종자에의 엔도펩티다아제(endopeptidase) 활성을 갖는 알칼레이즈(Alcalase) 처리물의 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 추출물은 효소 처리물의 열수 추출물인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 조성물은 식품 조성물인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 조성물은 화장품 조성물인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 조성물은 약제학적 조성물인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
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|---|---|---|---|
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| KR101493158B1 (ko) * | 2013-06-13 | 2015-02-13 | 계명대학교 산학협력단 | 가공인삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백 또는 주름 개선용 화장료 조성물 |
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