KR101742162B1 - 디프테로카푸스 인트리카투스 추출물을 이용한 피부 미백용 식품 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 높은 티로시나아제 억제 활성을 보이고 멜라닌 형성 자극제인α-MSH로 자극된 멜라노마 세포인 B16F10에 처리될 때 농도 의존적으로 멜라닌 생성 억제 활성을 보이는 디프테로카푸스 인트리카투스 추출물을 이용한 피부 미백용 조성물을 개시한다. 상기 디프테로카푸스 인트리카투스 추출물은 티로시나아제의 억제 활성이 합성 미백 성분 중 하나인 알부틴에 유사하며, 멜라닌 생성 억제 활성에 있어서는 기능성화장품공전 상의 합성 미백제 중 하나인 알부틴보다 뚜렷하게 높다.
Description
본 발명은 디프테로카푸스 인트리카투스(Dipterocarpus intricatus) 추출물을 이용한 피부 미백용 식품 조성물에 관한 것이다.
의학기술의 발달과 생활수준의 향상으로 사람들의 아름다움에 대한 욕구가 강해지고 외모 자체가 하나의 사회적 경쟁력이라는 인식도 증가하고 있어 피부 미백에 대한 선호도가 높아지고 화장품 시장이 확대되고 있다(J. Korean Soc. Food Sci. Nutr., 42(3):355 (2013)).
사람의 피부색은 여러 가지 요인들 특히, 계절, 인종 및 성별에 따라 다르며, 주로 멜라닌, 카로틴, 및 헤모글로빈의 양에 의해서 결정되는데, 이중 멜라닌(melanin)이 가장 결정적인 요소로 작용한다.
멜라닌은 생물체에 널리 존재하는 페놀류 고분자 천연 색소로 인체에서는 표피 기저층에 있는 멜라노사이트(melanocyte) 내의 멜라노솜(melanosome)에서 합성되며 주변 각질 세포로 전이되어 사람의 피부색을 나타낸다. 멜라닌이 비정상적으로 적게 되면 백반증과 같은 피부 병변이 유발되며, 반대로 과잉으로 생산될 경우에는 흑피증(melasma), 염증후흑피증(postinflammatory melanoderma), 일광흑색점(solar lentigo) 등과 같은 후천성 과다색소침착을 포함하는 다양한 피부질환을 유발할 수 있다.
멜라닌은 기질인 티로신(tyrosine)의 연속적인 산화반응으로 합성되는데, 구체적으로 티로신이 티로시나아제(tyrosinase), TRP-1(tyrosinase related protein-1), TRP-2(tyrosinase related protein-2)의 작용에 의해 도파(DOPA, 3,4-dihydroxyphenylalanine)를 거쳐 도파 퀴논(DOPA quinone)으로 전환된 후 비효소적 반응, 자발적 산화 과정을 거쳐 아미노산 혹은 단백질과의 중합 반응에 의해 합성된다(Korean J. FOOD SCI. TECHNOL., 32(3):736, 2000; Journal of Life Science, 23(12):1445, 2013)).
멜라닌을 생성하는 첫 단계로 티로시나아제가 가장 중요한 역할을 하기 때문에 미백제 개발을 위해 다양한 티로시나아제 저해제에 대한 탐색이 지속적으로 진행되어 왔으며(Kor. J. Pharmacogn., 44(3):220, 2013), 최근에는 MITF(microphtalmia associated transcription factor) 등과 같은 신호 전달 물질을 타켓으로 한 멜라닌 합성 억제에 대한 연구도 활발하게 이루어지고 있다. 주요한 세포 내 신호전달 경로는 cAMP/PKA 경로(cyclic monophosphate/protein kinase A pathway)인데, cAMP는 PKA, CREB1(cAMP responsive element binding protein 1)을 경유하여 전사조절인자인 MITF의 발현을 촉진하며 MITF는 티로시나아제, TRP-1, TRP-2의 전사를 촉진한다(J. Soc. Cosmet. Sci. Korea, 39(4):289, 2013; Korean J. Oriental Physiology & Pathology, 24(2):296, 2010).
현재 미백제로 가장 많이 사용되는 알부틴(arbutin)은 L-티로신(L-tyrosine)과 경쟁적으로 작용하는 저해제이며, 코지산(kojic acid)은 티로시나아제 활성 부위를 킬레이트화하여 티로신에서 도파, 도파퀴논으로 진행되는 과정을 저해한다(Korean J. Plant Res., 26(5):526, 2013; J. Korean Soc. Food Sci. Nutr., 41(2):156, 2012). 알부틴과 코직산은 강력한 미백효과가 있는 것으로 알려져 있으나, 피부 자극 등의 일부 부작용으로 인하여 상대적으로 부작용이 적은 천연의 물질로부터 미백 활성을 가지는 물질을 찾기 위한 연구가 활발하게 이루어지고 있다.
본 발명은 티로시나아제 억제 활성과 멜라닌 생성 억제 활성을 가지는 디프테로카푸스 인트리카투스 추출물을 개시한다.
본 발명의 목적은 디프테로카푸스 인트리카투스 추출물을 이용한 피부 미백용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적이나 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.
본 발명은 아래의 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 디프테로카푸스 인트리카투스 추출물이 높은 티로시나아제 억제 활성을 보이고 멜라닌 형성 자극제인α-MSH로 자극된 멜라노마 세포인 B16F10에 처리될 때 농도 의존적으로 멜라닌 생성 억제 활성을 보이며, 나아가 이러한 티로시나아제 억제 활성이나 멜라닌 생성 억제 활성이 합성 미백제인 알부틴에 버금가거나 우수함을 확인함으로써 완성된 된 것이다. 여기서 디프테로카푸스 인트리카투스은 태국, 캄보디아, 라오스, 베트남 등에서 자생하는 Dipterocarpaceae 과에 속하는 식물이다.
본 발명은 이러한 실험 결과에 기초하여 제공되는 것으로, 본 발명의 피부 미백용 조성물은 디프테로카푸스 인트리카투스 추출물을 유효성분으로 포함함을 특징으로 한다.
본 명세서에서, "디프테로카푸스 인트리카투스 추출물"이란 추출 대상인 디프테로카푸스 인트리카투스 줄기, 잎, 열매, 꽃, 뿌리 등을 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올 등의 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜, 메틸렌클로라이드, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, N,N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 침출하여 얻어진 추출물, 이산화탄소, 펜탄 등 초임계 추출 용매를 사용하여 얻어진 추출물 또는 그 추출물을 분획하여 얻어진 분획물을 의미하며, 추출 방법은 활성물질의 극성, 추출 정도, 보존 정도를 고려하여 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사, 초임계 추출 등 임의의 방식을 적용할 수 있다. 분획된 추출물의 경우 상기 추출물을 특정 용매에 현탁시킨 후 극성이 다른 용매와 혼합·정치시켜 얻은 분획물, 상기 추출물을 실리카겔 등이 충진된 칼럼에 흡착시킨 후 소수성 용매, 친수성 용매 또는 이들의 혼합 용매를 이동상으로 하여 얻은 분획물을 포함하는 의미이다. 또한 상기 추출물의 의미에는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조 등의 방식으로 추출 용매가 제거된 농축된 액상의 추출물 또는 고형상의 추출물이 포함된다. 바람직하게는 추출용매로서 물, 에탄올 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물, 더 바람직하게는 추출용매로서 물과 에탄올의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물을 의미한다.
또 본 명세서에서, "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.
또 본 명세서에서, "피부 미백"은 멜라닌의 과다 생성으로 인하여 감소된 피부 밝기의 증가로 이해될 수 있으며, 구체적으로는 멜라닌의 과다 생성에 의한 기미, 주근깨, 검버섯 등의 개선(증상 경감), 치료, 예방, 발현 억제 또는 지연을 의미한다.
본 발명의 피부 미백용 조성물은 유효성분 이외에, 피부 미백 효과의 상승·보강을 위하여 이미 안전성이 검증되고 피부 미백 활성을 갖는 것으로 공지된 임의의 화합물이나 식물 추출물을 추가로 포함할 수 있다. 구체적으로 그러한 화합물 또는 추출물로서는 알부틴, 나이아신아마이드, 아스코빌글루코사이드, 알파-비사보롤, 유용성 감초 추출물(Oil Soluble Licorice(Glycyrrhiza) Extract) 등을 들 수 있으며, 기타 공지의 미백 성분들에 대해서는 화장품법에 따른 기능성화장품공전(식약처고시 "기능성화장품 기준 및 시험방법")을 참조할 수 있다. 이러한 화합물 또는 식물 추출물은 본 발명의 피부 미백용 조성물에 그 유효성분과 함께 하나 이상 포함될 수 있다.
본 발명의 피부 미백용 조성물에 있어서, 그 유효성분은 용도, 제형 등에 따라 그것의 인체에 독성을 미치지 않는 범위 내에서 임의의 양으로 포함될 수 있는데, 구체적으로 조성물 전체 중량에 비하여 0.01 중량 % 내지 99.99 중량%로 포함될 수 있다.
본 발명의 피부 미백용 조성물은 구체적인 양태에 있어서, 화장료 조성물로 파악할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 그 유효성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들, 예컨대, 안정화제, 용해화제, 계면활성제, 비타민, 색소 및 항료와 같은 통상적인 보조제, 및 담체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이 등으로 제형화될 수 있다. 구체적인 제품 형태에 있어서는 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 피부 관련 활성을 보강·추가하기 위하여 당업계에 공지된 피부 주름 개선 성분, 자외선 보호 성분 등을 포함하여 제조될 수 있다. 그러한 성분들의 구체적인 예는 화장품법에 따른 기능성화장품공전을 참조할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 피부 미백 활성을 나타내는 그 유효성분을 포함하는 것을 제외하고는 당업계에 통상적으로 행하여지는 화장료 조성물의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.
본 발명의 피부 미백용 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서, 식품 조성물로 파악할 수 있다.
본 발명의 식품 조성은 기능성 음료 등의 건강 기능 식품, 건강 보조 식품, 특수 영양 보충용 식품으로 제조될 수 있으며, 식품의 형태는 차, 쥬스, 탄산음료, 이온음료 등의 음료류, 우유, 요구루트 등의 가공 유류, 껌류, 떡, 한과, 빵, 과자, 면 등의 식품류, 정제, 캡슐, 환, 과립, 액상, 분말, 편상, 페이스트상, 시럽, 겔, 젤리, 바 등의 건강 기능 식품 제제류 등일 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 감미제, 풍미제, 생리활성 성분, 미네랄 등이 포함될 수 있다.
감미제는 식품이 적당한 단맛을 나게 하는 양으로 사용될 수 있으며, 천연의 것이거나 합성된 것일 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.
풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수도 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.
생리 활성 물질로서는 카테킨, 에피카테킨, 갈로가테킨, 에피갈로카테킨 등의 카테킨류나, 레티놀, 아스코르브산, 토코페롤, 칼시페롤, 티아민, 리보플라빈 등의 비타민류 등이 사용될 수 있다.
미네랄로서는 칼슘, 마그네슘, 크롬, 코발트, 구리, 불소화물, 게르마늄, 요오드, 철, 리튬, 마그네슘, 망간, 몰리브덴, 인, 칼륨, 셀레늄, 규소, 나트륨, 황, 바나듐, 아연 등이 사용될 수 있다.
또한 본 발명의 식품 조성물은 상기 감미제 등 이외에도 필요에 따라 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등을 포함할 수 있다.
이러한 보존제, 유화제 등은 그것이 첨가되는 용도를 달성할 수 있는 한 미량으로 첨가되어 사용되는 것이 바람직하다. 미량이란 수치적으로 표현할 때 식품 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.005중량％ 내지 약 0.5 중량％ 범위를 의미한다.
사용될 수 있는 보존제로서는 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등을 들 수 있다.
사용될 수 있는 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있다.
사용될 수 있는 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등을 들 수 있다. 이러한 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다.
사용될 수 있는 점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등을 들 수 있다.
기타 식품의 유형이나 식품의 유형에 따라 사용의 필요성이 있는 첨가제 등과 관련하여서는 식품위생법에 따른 식품공전과 식품첨가물공전을 참조할 수 있다.
본 발명의 피부 미백용 조성물은 구체적인 양태에 있어서, 약제학적 조성물로 파악할 수 있다.
본 발명의 피부 미백용 조성물이 약제학적 조성물로 파악될 경우 대상 질환은 피부 과색소침착증으로 이해될 수 있으며, 그러한 과색소침작증의 구체적인 예로서는 주근깨, 노인성 반점, 간반, 기미, 갈색 또는 흑점, 일광 색소반, 푸른 흑피증(cyanic melasma), 칼슘 길항제와 같은 약물 사용 후의 과다색소침착, 조직경화치료법(sclerotherapy)에 따른 후유증, 임신성 갈색반(gravidic chloasma), 경구 피임약을 복용한 여성에서의 흑피증, 찰상 및 화상을 비롯한 상처 또는 피부염으로 인한 염증 후 과다 색소 침착, 광독성 반응 또는 다른 유사한 소형의 고정 색소성 병변 등이 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 약제학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하여 당업계에 공지된 통상의 방법으로 투여 경로에 따라 경구용 제형 또는 비경구용 제형으로 제조될 수 있다. 여기서 "약제학적으로 허용되는" 의미는 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응 가능한 이상의 독성을 지니지 않는다는 의미이다.
본 발명의 약제학적 조성물이 경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 현탁액, 웨이퍼 등의 제형으로 제조될 수 있다. 이때 약제학적으로 허용되는 적합한 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 덱스트로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨 등의 당류, 옥수수 전분, 감자 전분, 밀 전분 등의 전분류, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등의 셀룰로오스류, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 맥아, 젤라틴, 탈크, 폴리올, 식물성유 등을 들 수 있다. 제제화활 경우 필요에 따라 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 및/또는 부형제를 포함하여 제제화할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물이 비경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 주사제, 경피 투여제, 비강 흡입제 및 좌제의 형태로 제제화될 수 있다. 주사제로 제제화활 경우 적합한 담체로서는 멸균수, 에탄올, 글리세롤이나 프로필렌 글리콜 등의 폴리올 또는 이들의 혼합물을 들수 있으며, 바람직하게는 링거 용액, 트리에탄올 아민이 함유된 PBS(phosphate buffered saline)나 주사용 멸균수, 5% 덱스트로스 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 경피 투여제로 제제화할 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태로 제제화될 수 있다. 비강 흡입제의 경우 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 등의 적합한 추진제를 사용하여 에어로졸 스프레이 형태로 제제화될 수 있으며, 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 폴리에틸렌글리콜류, 카카오지, 라우린지, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르류, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트류, 소르비탄 지방산 에스테르류 등이 사용될 수 있다.
약제학적 조성물의 제제화와 관련하여서는 당업계에 공지되어 있으며, 구체적으로 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)] 등을 참조할 수 있다. 상기 문헌은 본 명세서의 일부로서 간주 된다.
본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 성별, 연령, 환자의 중증도, 투여 경로에 따라 1일 0.001mg/kg ~ 10g/kg 범위, 바람직하게는 0.001mg/kg ~ 1g/kg 범위일 수 있다. 투여는 1일 1회 또는 수회로 나누어 이루어질 수 있다. 이러한 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 아니 된다.
전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 디프테로카푸스 인트리카투스 추출물을 이용한 피부 미백용 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명의 유효성분인 디프테로카푸스 인트리카투스 추출물은 티로시나아제의 억제 활성이 합성 미백 성분 중 하나인 알부틴에 유사하며, 멜라닌 생성 억제 활성에 있어서는 알부틴보다 뚜렷하게 높다.
본 발명의 피부 미백용 조성물은 식품, 화장품, 약품 등으로 제품화될 수 있으며, 천연물 유래의 피부 미백 물질을 이용함으로써 합성 피부 미백제와 비교할 때 상대적으로 부작용이 적을 수 있다.
도 1은 멜라닌 형성 자극제인α-MSH로 자극된 멜라노마 세포인 B16F10에서 디프테로카푸스 인트리카투스 추출물의 멜라닌 생성 억제 활성을 보여주는 결과이다.
이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
<
실시예
>
디프테로카푸스
인트리카투스
추출물의 제조
건조된 디프테로카푸스 인트리카투스(Dipterocarpus intricatus) 잎 100 g에 70% 에탄올 1 L를 가하여 상온에서 24 시간 1회 반복추출 후 여과지로 여과하였다. 얻어진 70% 에탄올 여액을 감압 농축 후 동결 건조하여 디프테로카푸스 인트리카투스 추출물을 얻었다.
<
실험예
>
미백 활성 실험
<실험예 1> 티로시나아제 억제 활성 실험
0.1M potassium phosphate buffer (pH 6.5) 220㎕에 농도별로 희석한 실시예의 시료(NIBR No. 115) 20㎕를 첨가한 후 1250 unit/ml mushroom tyrosinase 20㎕를 첨가하였다. 기질 1.5mM L-tyrosine 40㎕씩 첨가하여 잘 섞은 후 37℃에서 10분 반응시킨 후 490nm에서 ELISA reader를 이용하여 흡광도를 측정하고 아래의 식에 따라 시료의 처리 농도에 따른 저해율을 구한 다음 IC50 값을 구해 아래의 [표 1]에 나타내었다. 양성대조군으로 알부틴을 사용하였다.
Inhibition % = 100-(A-B)/(C-D)x100
A: 시료액의 반응 후의 흡광도
B: tyrosinase 대신 완충액으로 대체하여 측정한 시료액의 흡광도
C: 공시료액의 반응 후의 흡광도
D: tyrosinase 대신 완충액으로 대체하여 측정한 공시료액의 흡광도
| Sample | IC50(㎍/㎖) |
| NIBR No. 115 | 141.46 |
| Arbutin | 136.77 |
상기 [표 1]에서 확인되는 바와 같이, 기질인 L-티로신과 효소인 버섯 티로시나아제에 의해 산화되어 생성되는 멜라닌의 흡광도를 측정하여 멜라닌 생성에 중요한 역할을 하는 효소인 티로시나아제의 억제 활성 측정 결과, 실시예의 시료는 기능성화장품공전 상의 미백제인 알부틴에 유사한 티로시나아제 저해 활성을 가짐을 보여준다.
<실험에 2> 멜라닌 생성 저해 활성 실험
<실험예 2-1> 세포 배양
B16/F10 세포는 쥐의 melanoma 세포주로 Korean Cell Line Bank(KCLB)로부터 분양받아 100units/㎖의 penicillin-streptomycin(GIBCO, Grand Island, NY, USA)과 10%의 fetal bovine serum (FBS; GIBCO, Grand Island, NY, USA)이 함유된 RPMI 1640 또는 DMEM 배지(GIBCO, Grand Island, NY, USA)를 사용하여 37℃, 5% CO2 항온기에서 배양하였으며, 계대 배양은 3~4일에 한 번씩 시행하였다.
<실험예 2-2> 멜라닌 생성 저해 활성 평가
B16F10 melanoma 세포주를 6 well plate에 1×105/well의 세포수로 분주하고 24시간 후 배지 제거 후 100nM의 α-melanocyte stimulating hormone(α-MSH)와 양성대조군인 알부틴과 실시예의 시료를 농도별로 처리한 후 72시간 배양하였다. PBS 2번 세척하고 lysis buffer (100 mM sodium phosphate (pH6.8), 0.1 mM PMSF, 1% Triton X-100)를 넣고 -80℃에서 30분 용해시켰다. 세포 수거 후 10% DMSO가 포함된 1N NaOH로 65℃ 1시간 반응하여 pellet을 용해시킨 후 405nm에서 흡광도 측정하였다.
결과를 [도 1]에 나타내었다.
[도 1]을 참조하여 보면, 실시예의 시료는 대체로 처리 농도에 비례하여 멜라닌 생성 억제 활성을 보임을 알 수 있으며, 양성대조군인 알부틴에 비해 멜라닌 생성 억제 활성이 뚜렷하게 우수함을 알 수 있다.
<실험예 2-3> 세포독성 평가 - MTT Assay
B16F10 세포를 1×104 cells/well로 96 well plate에 분주하고 시료를 농도별 (62.5, 125, 250, 500 ㎍/ml)로 처리한 후 24 시간 배양하였다. 5 mg/ml MTT solution이 포함된 배지를 넣고 2시간 동안 배양 후 MTT 시약을 제거하고 DMSO를 첨가한 후 formazan을 용해시켰다. 이 후 ELISA reader를 이용하여 흡광도 540 nm에서 측정하였다.
처리 농도별 결과를 [도 2]에 나타내었고, IC50을 아래의 [표 2]에 나타내었다.
| Sample | IC50(㎍/㎖) |
| NIBR No. 115 | > 500 |
상기 [표 2]는 결과는, 실시예의 시료의 IC50이 500㎍/㎖ 이상으로 나타나 상기 멜라닌 생성 억제 활성 결과가 세포독성에 의한 결과가 아님을 보여주며, 최고의 멜라닌 생성 억제 활성을 보이는 최저 농도인 100㎍/㎖에서는 세포독성이 없음을 보여준다.
Claims (2)
- 디프테로카푸스 인트리카투스 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 식품 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 디프테로카푸스 인트리카투스 잎 추출물은 디프테로카푸스 인트리카투스 잎을 물, 에탄올 또는 이들의 혼합 용매로 추출하여 얻어진 것을 특징으로 하는 피부 미백용 식품 조성물.
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2017
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Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Biosci. Biotechnol. Biochem., 67(7), p.1587-p.1589 (2003) |
| Muhtadi et al., Proceeding of The International Seminar on Chemistry, pp. 585 (2008) |
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