KR101566568B1

KR101566568B1 - 백금 착체 화합물 및 그 이용

Info

Publication number: KR101566568B1
Application number: KR1020107016251A
Authority: KR
Inventors: 세이지 고메다; 마사히코 지쿠마
Original assignee: 덴신도 세이야쿠 가부시키가이샤; (주) 야쿠르트본사
Priority date: 2008-01-16
Filing date: 2009-01-07
Publication date: 2015-11-05
Also published as: EP2243773A4; CA2712408C; WO2009090903A1; EP2243773B1; CN101918379B; EP2243773A1; CN101918379A; EA017521B1; US8283473B2; JP5327751B2; EA201070846A1; JPWO2009090903A1; US20110046386A1; CA2712408A1; KR20100107015A

Abstract

시스플라틴계 제제와는 다른 태양으로 DNA에 결합할 수 있는 신규한 백금(Ⅱ) 이핵 착체 화합물, 이 화합물의 제조 방법 및 이 화합물을 유효 성분으로서 포함하는 항암제를 제공한다. 상기 화합물은 하기 식 (I)에 의해서 표시되는 테트라졸라토 가교 백금 착체 화합물이며, 여기에서 A는 치환되어 있어도 되는 테트라졸라토이고, B는 무기 또는 유기의 음이온이며, m 및 n은 백금 착체 이온의 전하 수 및 음이온의 전하 수에 대응해서 결정되는 정수이다.

Description

백금 착체 화합물 및 그 이용{PLATINUM COMPLEX COMPOUND AND UTILIZATION OF THE SAME}

본 발명은 테트라졸라토 (tetrazolato) 가교형의 백금 착체 화합물, 이 백금 착체 화합물의 제조 방법 및 그 이용에 관한 것이다.

또한, 본 출원은 2008년 1월 16일에 출원된 일본 특허 출원 제2008-007357호에 근거하여 우선권을 주장하고 있으며, 그 출원의 전체 내용은 본 명세서 중에 참조로서 포함시키고 있다.

시스플라틴 (cis-diamminedichloroplatinum(Ⅱ))은 염화물 이온 2기와 암민 (ammine) 2기가 시스형으로 배위한 백금(Ⅱ) 일핵 착체이며, 가장 효과적인 항암제의 하나로서 화학요법에 널리 이용되고 있다. 또, 시스플라틴 요법에서의 부작용 또는 암 세포의 내성에 대한 대처로서 카보플라틴, 네다플라틴 및 옥살리플라틴의 시스플라틴 유사체가 임상 이용되고 있다.

시스플라틴의 작용기서 (作用機序)나 체내 대사경로에는, 이 착체가 세포 내의 DNA 사슬과 1,2-사슬내 가교를 형성하여 DNA 사슬에 현저한 뒤틀림을 일으키게 하는 것이 관여하고 있다고 생각되고 있다 (비특허문헌 1). 시스플라틴과 유사한 구조를 가지는 상기 백금 제제도 동일한 태양으로 DNA에 결합한다고 생각된다.

한편, 이들 기존의 백금 제제와는 다른 약제 프로파일을 가지는 백금 제제의 개발이 요망되고 있다. 그것을 위한 하나의 유효한 수단으로서 기존의 시스플라틴계 제제와는 작용기서나 체내 대사경로에 있어서 다른 백금 착체 화합물을 설계하는 것이 고려된다. 예를 들면, 시스플라틴과는 분자 구조가 크게 다름으로써 시스플라틴과는 다른 태양으로 DNA에 결합할 수 있는 백금 착체 (예를 들면, 백금 다핵 착체)에 의하면, 시스플라틴계 백금 제제와는 다른 약제 프로파일이 실현되는 것이 기대된다. 이런 종류의 기술에 관한 종래 기술 문헌으로서 특허문헌 1 및 비특허문헌 2, 3을 들 수 있다.

특허문헌 1: 국제 공개 제96/16068호 팸플릿

비특허문헌 1: Jamieson, E. R. and Lipperd, S. J. "Structure, Recognition, and Processing of Cisplatin-DNA Adducts" Chem. Rev., 1999, 99, 2467-2498. 비특허문헌 2: Kasparkova, J.; Zehnulova, J.; Farrell, N.; and Brabec, V. "DNA interstrand cross-links of the novel antitumor trinuclear platinum complex BBR3464. Conformation, recognition by high mobility group domain proteins, and nucleotide excision repair." J Biol Chem 2002, 277, (50), 48076-48086. 비특허문헌 3: Komeda, S.; Lutz, M.; Spek, A. L.; Chikuma, M.; and Reedijk, J. "New antitumor-active azole-bridged dinuclear platinum(Ⅱ) complexes: synthesis, characterization, crystal structures, and cytotoxic studies." Inorg Chem 2000, 39, (19), 4230-4236.

본 발명은 시스플라틴계 제제와는 다른 태양으로 DNA에 결합할 수 있는 신규한 백금(Ⅱ) 2핵 착체 화합물 및 이 화합물을 유효 성분으로 포함하는 항암제를 제공하는 것을 목적으로 한다. 본 발명의 다른 목적은 이러한 착체 화합물의 제조 방법을 제공하는 것이다.

본 발명에 의하면, 다음 식 (I):

에 의해서 표시되는 백금 착체 화합물이 제공된다. 여기에서 A는 치환되어 있어도 되는 테트라졸라토이고, B는 유기 또는 무기의 음이온이며, m 및 n은 백금 착체부 (각괄호 내의 착이온)의 전하 수 및 음이온의 전하 수에 대응해서 결정되는 정수이다.

또한, 본 명세서에 있어서 「테트라졸라토」란, 1H-테트라졸계 화합물 (C5 위치에 치환기를 가지는 또는 가지지 않는 1H-테트라졸)의 탈 프로톤화 (N1 위치의 프로톤을 빼냄)에 의해서 얻어지는 음이온 일반을 가리키는 용어이다. 즉, 1H-테트라졸계 화합물의 N1 위치의 프로톤이 해리하여 이루어지는 음이온 일반을 의미한다.

상기 식 (I)에 의해 표시되는 화합물은 배위 중심을 이루는 2개의 백금(Ⅱ) 이온에 대한 A의 가교 태양에 의해서 A를 구성하는 테트라졸환의 N1 및 N2가 2개의 백금 이온에 각각 배위한 N1,N2-가교 구조의 백금 착체 화합물과 이 테트라졸환의 N2 및 N3가 2개의 백금 이온에 각각 배위한 N2,N3-가교 구조의 백금 착체 화합물로 크게 구별된다. 여기에 개시되는 화합물의 바람직한 한 태양은 N2,N3-가교 구조의 백금 착체 화합물이다. 이러한 가교 구조의 백금 착체 화합물은 항암제 그 외의 약제의 유효 성분으로 보다 유용한 (예를 들면, 보다 높은 세포 독성을 발휘한다) 것일 수 있다. 그 중에서도, 식 (I)에서의 A가 치환기를 가지지 않는 테트라졸라토인 N2,N3-가교 백금 착체 화합물이 특히 바람직하다.

본 발명에 의하면, 또 상기 식 (I) 중의 A가 치환기 (즉, 테트라졸환의 5위치의 C에 결합한 치환기)를 가지는 테트라졸라토인 N2,N3-가교 백금 착체 화합물이 제공된다. 이 치환기는 직쇄상, 분기쇄상, 환상 중 어느 것이라도 되며, 이 치환기 중에 치환기를 추가로 구비하고 있어도 된다. 예를 들면, 탄소수 1∼6의 탄화수소기, -CH₂COO^- 및 -CH₂COORx (여기에서, Rx는 탄소수 1∼4의 알킬기이다.)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다. 이와 같은 치환기를 가지는 N2,N3-가교 백금 착체 화합물은 고순도의 것을 얻기 쉽기 때문에 바람직하다.

또, 여기에 개시되는 어느 하나의 백금 착체 화합물은 시스플라틴의 병리학상의 이용 태양에 준하여 이용할 수 있다. 예를 들면, 상기 백금 착체 화합물 중 적어도 1개를 항암제의 유효 성분 중 하나로서 이용할 수 있다. 이 경우, 상기 식 (I) 중의 B는 약리학상 허용되는 음이온인 것이 바람직하다.

본 발명에 의하면 상기 식 (I)에 의해 표시되는 백금 착체 화합물은 다음 식 (Ⅱ):

로 표시되는 화합물과 치환기를 가지는 또는 가지지 않는 1H-테트라졸계 화합물을 1:1∼1:1.2의 몰비로 반응시키는 것을 포함하는 제조 방법에 따라 바람직하게 제조할 수 있다. 이 공정에서 N1,N2-가교 백금 착체 화합물과 N2,N3-가교 백금 착체 화합물의 혼합물이 생겼을 경우, 본 발명에 의하면 이 혼합물에 포함되는 상기 2개의 화합물 중 어느 한쪽으로부터 다른 쪽을 분리함으로써 상기 화합물 중 적어도 어느 하나를 정제할 수 있다.

상기 제조 방법의 바람직한 하나의 태양에서는 상기 혼합물로부터 상기 화합물 중 적어도 한쪽을 분리하는 공정에 있어서, 이동상으로서 과염소산염 수용액을 이용한 역상 크로마토그라피를 이용한다. 또, 이 수용액 중의 과염소산염은 과염소산 리튬인 것이 바람직하다.

도 1은 예 1에서 얻어진 혼합물의 ¹H-NMR 스펙트럼이다.
도 2는 예 3에서 얻어진 5-H-N1,N2의 ¹H-NMR 스펙트럼이다.
도 3은 예 3에서 얻어진 5-H-N2,N3의 ¹H-NMR 스펙트럼이다.
도 4는 예 4에서 얻어진 혼합물의 ¹H-NMR 스펙트럼이다.
도 5는 예 3에서 얻어진 5-H-N1,N2의 질량 스펙트럼이다.
도 6은 예 3에서 얻어진 5-H-N2,N3의 질량 스펙트럼이다.
도 7은 예 5에서 얻어진 5-메틸-N2,N3의 질량 스펙트럼이다.
도 8은 예 6에서 얻어진 5-에틸 아세테이트-N2,N3의 질량 스펙트럼이다.
도 9는 예 7에서 얻어진 5-아세테이트-N2,N3의 질량 스펙트럼이다.
도 10은 예 8에서 얻어진 5-페닐-N2,N3의 질량 스펙트럼이다.
도 11은 X선 해석에 의해서 얻어진 상기 5-메틸의 결정 구조이다.
도 12는 X선 해석에 의해서 얻어진 상기 5-아세테이트의 결정 구조이다.

이하, 본 발명의 바람직한 실시 형태를 설명한다. 또한, 본 명세서에 있어서 특별히 언급하고 있는 사항 (예를 들면 화합물의 합성 방법이나 분리 정제 방법) 이외의 사항으로서, 본 발명의 실시에 필요한 사항 (예를 들면 백금 화합물을 유효 성분으로 하는 항암제 (약제 조성물)의 조제에 관련한 것과 같은 일반적 사항)은 유기화학, 무기화학, 약학, 의학, 병리학, 위생학 등의 분야에서의 종래 기술에 근거하는 당업자의 설계 사항으로 파악될 수 있다. 본 발명은 본 명세서에 개시되고 있는 내용과 해당 분야에서의 기술 상식에 근거하여 실시할 수 있다.

여기에 개시되는 백금 착체 화합물은 상기 식 중의 A가 1H-테트라졸계 화합물의 탈 프로톤화 (N1 위치의 프로톤 빼냄)에 의해서 얻어지는 테트라졸라토이다. A는 바람직하게는 C5 위치에 수소원자 또는 저급 탄화수소기를 가지는 테트라졸라토이다.

또, 상기 식 중의 B는 특별히 제한되지 않으며, 예를 들면 무기산 이온 및 유기산 이온으로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상일 수 있다. 무기산 이온으로는 예를 들면 클로라이드, 브로마이드, 니트레이트, 포스페이트, 설페이트, 퍼클로레이트 등을 들 수 있다. 유기산 이온으로는 예를 들면, 아세테이트, 시트레이트, 락테이트, 말레에이트, 타르트레이트, 베실레이트 등을 들 수 있다. 또한, 상기 식 (I)에 의해 표시되는 착체 화합물은 수화물로서 존재할 수 있다. 따라서 본 발명에 의해 제공되는 백금 착체 화합물에는 상기 식 (I)로 표시되는 화합물의 수화물이 포함될 수 있다.

상기 식 중의 m 및 n은 백금 착체부 (각괄호 내의 착이온)의 전하 수 및 B의 음이온의 전하 수에 대응해서 결정되는 정수이다. 여기에서, 각 백금(Ⅱ) 이온의 전하는 +2이며, 수산기의 전하는 -1이다. 따라서 예를 들면, A가 치환기를 가지지 않는 혹은 전하를 가지지 않는 치환기를 가지는 테트라졸라토인 경우, 테트라졸라토환상의 전하는 -1이기 때문에 백금 착체부의 전하수는 +2가 된다. 따라서 B의 전하가 -2이면, m 및 n은 모두 1이며, B의 전하가 -1이면, m은 1, n은 2이다.

여기에 개시되는 어느 하나의 백금 착체 화합물은 시스플라틴의 병리학상의 이용 태양에 근거하여 이용할 수 있다. 이 경우, 식 (I) 중의 B는 약리학상 허용되는 음이온인 것이 바람직하다. 이러한 백금 착체 화합물은 예를 들면 시스플라틴과 마찬가지로 항암제로 이용할 수 있다. 본 발명에 근거하는 항암제의 조제에 대해서는 본 발명에 의한 백금 착체 화합물의 적어도 1종을 유효 성분으로 함유하는 것 이외에 특별히 제한은 없다. 유효 성분으로, 상기 백금 착체 화합물 중 어느 1종만을 포함해도 되고, 2종 이상을 포함해도 된다. 또, 그 외의 유효 성분으로 다른 항암제, 부작용을 완화하는 것과 같은 약제, 및/또는 항암 작용을 향상시키는 것과 같은 약제 등을 포함해도 된다. 투여 방법에 대해서도 약리 효과가 얻어지는 범위 내에 있어서 특별히 제한은 없다. 예를 들면, 다른 백금 제제 같이, 이 백금 착체 화합물을 생리 식염수 등에 용해시킨 것을 정맥 주사에 의해 환자에게 투여할 수 있다.

본 발명에 의한 백금 착체 화합물은 적당한 용매 중에서 식 (Ⅱ)로 표시되는 화합물 (출발 물질)과 1H-테트라졸계 화합물을 1:1∼1:1.2의 몰비로 반응시키는 것을 포함하는 제조 방법에 따라 바람직하게 제조할 수 있다. 여기에서 1H-테트라졸계 화합물의 사용량이 상기 몰비보다 너무 많으면 부생성물 (식 (I)로 표시되는 백금 착체 화합물 이외의 생성물, 즉 불순물)이 많이 생기는 것 등에 의해 목적물의 분리 정제가 곤란해지는 일이 있다. 출발 물질과 1H-테트라졸계 화합물을 상술한 바람직한 몰비로 반응시킴으로써 불순물을 거의 포함하지 않고 취급이 용이한 생성물 (N1,N2-가교 백금 착체 화합물과 N2,N3-가교 백금 착체 화합물의 혼합물일 수 있다.)이, 전형적으로는 백색 분말상으로 얻어진다. 특히, 식 (I)에서의 A가 치환기를 가지지 않는 테트라졸라토인 백금 착체 화합물의 제조에 있어서는 상기 출발 물질과 1H-테트라졸계 화합물을 상기 범위의 몰비로 반응시킴으로써 목적물의 수율이나 분리 정제의 용이성 등의 점에서 현저한 효과가 얻어진다.

출발 물질과 1H-테트라졸계 화합물을 반응시킬 때에는 전형적으로는 출발 물질을 적당한 용매에 용해시킨 용액에 1H-테트라졸계 화합물을 첨가한다. 사용할 수 있는 용매로는 이 출발 물질을 용해할 수 있는 것으로 원하는 백금 착체 화합물의 생성을 저해하지 않는 것이면 특별히 제한은 없지만, 매우 적합하게는 물 (증류수)이다. 1H-테트라졸계 화합물은 한 번에 또는 몇 번에 분할하여 첨가할 수 있다. 이 화합물을 적당한 용매 (바람직하게는 출발 물질의 용해에 이용한 용매와 동일한 용매)에 용해시킨 용액을 한 번에 또는 몇 번인가에 분할하여 첨가해도 되고, 혹은 서서히 적하해도 된다. 예를 들면, 상기 1H-테트라졸계 화합물 용액을 한 번에 첨가하는 태양을 바람직하게 채용할 수 있다.

얻어진 반응액은 바람직하게는 차광하에서 교반한다. 이때의 온도는 이 반응을 손상하지 않는 한 특별히 제한되지 않지만, 바람직하게는 25∼55℃ 정도이고, 보다 바람직하게는 35∼45℃이며, 더욱 바람직하게는 약 40℃이다. 또, 반응 시간은 수율을 현저하게 감소시키지 않는 범위에서 특별히 제한되지 않지만, 바람직하게는 24 시간∼64 시간이고, 보다 바람직하게는 36 시간∼52 시간이며, 더욱 바람직하게는 40 시간∼48 시간이다. 또한, 상기 식 (Ⅱ)로 표시되는 출발 물질 (예를 들면, 식 [{cis-Pt(NH₃)₂}(μ-OH)]₂(NO₃)₂로 표시되는 화합물)에 대해서는 공지의 합성 방법에 따라서 합성할 수 있다. 예를 들면, R. Faggiani. R.; B. Lippert. B; Lock, C. J. L.; and Rosenberg, B. “Hydroxo-bridged platinum(Ⅱ) complexes. 1. Di-μ-hydroxo-bis[diammineplatinum(Ⅱ)]nitrate, [(NH₃)₂Pt(OH) ₂Pt(NH₃)₂](NO₃)₂. Crystalline structure and vibrational spectra.” J Am Chem Soc 1977, 99, (3), 777-781 (이하, 「비특허문헌 4」라고 한다.)에 기재된 합성 방법을 바람직하게 채용할 수 있다.

상기 반응에 있어서, 1H-테트라졸계 화합물로는 바람직하게는 C5 위치에 수소원자 또는 저급 탄화수소기를 가지는 1H-테트라졸을, 특히 바람직하게는 C5 위치에 수소원자를 가지는 1H-테트라졸을 이용할 수 있다. C5 위치가 수소원자인 1H-테트라졸을 이용했을 경우 상기 반응에 의해서 N1,N2-가교 백금 착체 화합물과 N2,N3-가교 백금 착체 화합물의 혼합물 (2개의 구조 이성체의 혼합물)이 생길 수 있다. 그러나 여기에 개시된 제조 방법에 따르면, 이 혼합물은 이들 구조 이성체 이외에 부생성물 (불순물)을 거의 포함하지 않는다. 그 때문에, 상기 불순물을 많이 포함하는 혼합물에 비해 흡습성이 지극히 낮은 등의 특성에 의해 취급이 용이하다.

또, 일반적으로 상기와 같이 구조상 매우 유사한 이성체의 혼합물은 고도로 분리 정제하는 것이 곤란하나, 본 발명에 의하면 이 혼합물로부터 적어도 어느 한쪽의 구조 이성체를 분리함으로써 상기 혼합물에 포함되는 이성체를 효율적으로 고순도로 정제할 수 있다. 이 분리 정제에는 예를 들면, 역상 크로마토그라피를 이용한다. 사용하는 크로마토그라피로는 시판되는 것을 이용하는 것이 가능하고, 예를 들면 고속 액체 크로마토그라피 또는 중압 분취 크로마토그라피 등을 바람직하게 이용할 수 있다. 특히 바람직하게는 중압 분취 크로마토그라피를 이용한다.

사용하는 컬럼으로는 목적물의 분리 정제를 가능하게 하는 것이면 특별히 제한은 하지 않지만, 매우 적합하게는 ODS (C₁₈) 컬럼을 이용한다. 이 ODS 컬럼으로는 예를 들면 야마젠 주식회사의 상품명 「울트라 팩」을 바람직하게 채용할 수 있다.

이동상으로는 혼합물로부터 적어도 한쪽의 구조 이성체를 분리할 수 있으면 특별히 제한은 없지만, 바람직하게는 과염소산염 용액 (전형적으로는 수용액)을 이용한다. 이 과염소산염은 얻어진 백금 착체 화합물을 손상하지 않으면 특별히 제한되지 않지만, 바람직하게는 리튬염, 나트륨염 등이며, 리튬염의 사용이 특히 바람직하다. 이들에 의해 정제 후의 백금 착체 화합물의 탈염을 간편하게 실시할 수 있다. 즉, 분취한 용액을 동결 건조해서 얻어진 백금 착체 화합물을 소량의 알코올류 (메탄올, 에탄올, 프로판올 등)에 의해 세정함으로써 과염소산염을 용이하게 제거할 수 있다. 과염소산염 용액의 농도는 이 용액의 pH가 대략 2.5∼3.5 (예를 들면 대략 3.0)가 되도록 설정하면 된다. 과염소산염 용액으로 예를 들면 과염소산 리튬 용액을 이용하는 경우, 이 용액 중의 과염소산 리튬 농도가 약 0.1 M이 되도록 조제하면 pH가 상기 범위 내가 되어 매우 적합하다. 그 외의 사항 (컬럼의 크기, 유속 등)에 대해서는 주입하는 샘플 양에 따라 적절하게 설정하면 된다.

또, 본 발명의 제조 방법에 의하면, C5 위치에 치환기를 가지는 테트라졸라토 가교 백금 착체 화합물을 제조할 수도 있다. 이 치환기에 특별한 제한은 없고, 직쇄상, 분기쇄상, 환식 중 어느 것이라도 된다. 특히 바람직하게는 저급 탄화수소기이다. 예를 들면, 탄소수 1∼6의 저급 알킬기 (예를 들면, 메틸기, 에틸기, 프로필기, 이소프로필기 등 ) 또는 아릴기 등 (예를 들면 페닐기)이다. 또 이 치환기는 추가로 치환되어 있어도 된다. 예를 들면, 아세테이트기나 에틸 아세테이트기 등에 의해서 치환된 저급 알킬기여도 된다. C5 위치의 치환기의 다른 예로는 아미노기 (N이 +1의 전하를 띠고 있는 또는 띠고 있지 않은 아미노기일 수 있다.), 메틸티오기, 카복사마이드기 등을 들 수 있다.

또한, 상기 제조 방법에 있어서 C5 위치에 치환기를 가지는 1H-테트라졸을 반응시키는 경우에는 N2,N3 가교에 의한 구조 이성체를 주로 생성할 수 있다. 이 경우에는 상술한 혼합물의 분리 정제 공정을 생략한 제조 방법에 따라서도 해당 이성체를 고순도로 얻을 수 있다. 따라서 본 명세서에 의해 개시되는 기술에는 상기 식 (I)에서의 A가 치환기를 가지는 테트라졸라토인 백금 착체 화합물을 제조하는 방법으로서, 상기 식 (Ⅱ)로 표시되는 화합물과 치환기를 가지는 1H-테트라졸계 화합물을 1:1∼1:1.2의 몰비로 반응시키는 것을 특징으로 하는 백금 착체 화합물의 제조 방법이 포함된다. 여기에서 사용하는 1H-테트라졸계 화합물이 가지는 치환기는 식 (I) 중의 A가 가지는 치환기와 동일한 기여도 되고, 식 (I)로 나타내는 화합물과 1H-테트라졸계 화합물을 반응시킨 후에 간단한 공정에 의해서 상기 A가 가지는 치환기로 변환 가능한 기여도 된다.

실시예

이하, 본 발명에 관한 몇 개의 실시예를 설명하지만, 본 발명을 이러한 실시예에 나타낸 것으로 한정하는 것을 의도한 것은 아니다.

또한, 이하에 나타내는 예 1, 예 4∼6, 예 8의 출발 물질인 [{cis-Pt(NH₃)₂}(μ-OH)]₂(NO₃)₂로는 상기 비특허문헌 4에 따라서 합성한 것을 이용했다.

<예 1>

본 예는 식 (Ⅱ)로 표시되는 화합물과 1H-테트라졸 (즉, 치환기를 가지지 않는 1H-테트라졸계 화합물)을 1:1.1의 몰비로 반응시킴으로써 식 (I)에서의 A가 치환기를 가지지 않는 테트라졸라토인 백금 착체 화합물을 합성한 예이다.

즉, [{cis-Pt(NH₃)₂}(μ-OH)]₂(NO₃)₂ 2.0 g을 증류수 75 mL에 용해시킨 용액에 1H-테트라졸 (동인화학) 0.252 g (1.1 당량)을 첨가하고 얻어진 반응액을 차광하 40℃에서 약 40시간 교반했다. 이 반응액을 회전 증발농축기를 이용하여 얻어진 백금 착체의 폴리머화 반응을 피하기 위해 30℃ 이하에서 감압 농축하고, 남은 조(粗) 생성물을 메탄올 및 디에틸에테르로 세정·여취 (濾取)한 후 진공 데시케이터에서 건조시켜 백색 분말 1.9 g을 얻었다. 이 백색 분말의 ¹H-NMR 스펙트럼 (VarianMercury300NMR)을 도 1에 나타낸다. 이 NMR 스펙트럼으로부터 알 수 있듯이 상기 백색 분말은 N1,N2 가교형의 백금 착체 화합물 [{cis-Pt(NH₃)₂}₂(μ-OH)(μ-테트라졸라토-N1,N2)](NO₃)₂와 N2,N3 가교형의 백금 착체 화합물 [{cis-Pt(NH₃)₂}₂(μ-OH)(μ-테트라졸라토-N2,N3)](NO₃)₂를 약 6.5:3.5의 몰비로 포함한 혼합물이며, 다른 불순물은 거의 포함되어 있지 않았다. 또, 상기 백색 분말은 취급이 용이했다.

<예 2>

예 1에 의해 얻어진 혼합물 (샘플 1)을 반복하여 물로부터 재결정함으로써 N1,N2 가교형과 N2,N3 가교형의 몰비가 4:6 정도가 될 때까지 N2,N3-가교 백금 착체 화합물을 정제했다 (샘플 2).

샘플 1, 샘플 2 및 비교예로서 시스플라틴 (샘플 3)의 세포 독성을 이하의 수법에 의해 평가했다.

약물을 첨가하는 날의 전날에 24 웰 평저 (平底) 마이크로 플레이트 상에 H460 비소폐암세포를 12,000∼20,000 개/웰이 되도록 플레이팅 했다. 각 샘플 (표 1 중의 샘플 번호 참조) 각각을 농도가 100 μM이 되도록 Q-H₂O 수에 용해하여 각 수용액을 준비했다. 이들 수용액을 희석하여 얻어진 여러 가지 농도의 용액 1 mL를 각 웰에 주입했다. 이 마이크로 플레이트를 37℃에서 24 시간 배양한 후, 200 μL의 브롬화 2,5-디페닐-3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)테트라졸륨 (MTT) 용액 (5 mg/mL)을 각 웰에 첨가하고 37℃에서 추가로 4 시간 배양했다. MTT의 환원에 의해 생성·석출한 포르마잔을 용해하기 위해 각 웰에 디메틸술폭시드 (DMSO) 200 μL를 첨가했다. 마이크로 플레이트 레이더를 이용해 각 웰의 550 nm에서의 흡광도를 측정했다.

각 웰의 흡광도를 3회 측정하고, 각 실험을 적어도 3회 반복했다. IC₅₀ 값은 약제를 첨가하지 않았던 대조군 (control)과 비교해서 포르마잔 생성량이 50 %가 되는 농도로 산출했다.

그 결과를 표 1에 나타낸다. N2,N3-가교 백금 착체 화합물을 조정제 (粗精製)해서 이루어진 샘플 2는 보다 높은 세포 독성을 나타내는 것을 알 수 있었다.

H460 비소폐암세포에 대한 백금 착제 화합물의 IC₅₀ 값

샘플 번호	IC₅₀ (μM)
1	48
2	25
3	23

<예 3>

본 예에서는 예 1에서 얻어진 혼합물을 N1,N2 가교형과 N2,N3 가교형으로 고도로 분리 정제했다.

즉, 상기 혼합물을 중압 분취 크로마토그라피에 의해 분리했다. 해당 분리는 야마젠 주식회사의 중압 분취 크로마토그라피 장치 「YFLC-prep」를 사용하고, 이하의 조건에 의해 실시했다.

이동상: 0.1 M 과염소산 리튬 (pH 3.0)

컬럼: ø26 mm × 300 mm 울트라 팩 ODS 컬럼 (야마젠 주식회사)

검출 파장: 254 nm

유속: 20 mL/min

샘플 주입량: 1회 5 mL

각각의 용리액을 동결 건조해서 얻어진 백색 분말을 디에틸에테르로 세정하고, N1,N2 가교형의 백금 착체 화합물 [{cis-Pt(NH₃)₂}₂(μ-OH)(μ-테트라졸라토-N1,N2)](ClO₄)₂ (이하, 5-H-N1,N2라고 한다.) 0.86 g 및 N2,N3 가교형의 백금 착체 화합물 [{cis-Pt(NH₃)₂}₂(μ-OH)(μ-테트라졸라토-N2,N3)](ClO₄)₂ (이하, 5-H-N2,N3이라고 한다.) 0.47 g를 얻었다. 이 5-H-N1,N2는 상기 식 (I)에서의 치환기 A가 하기 식 (Ⅲ)으로 표시되는 기인 백금 착체 화합물에 해당한다. 또, 5-H-N2,N3는 상기 식 (I)에서의 치환기 A가 하기 식 (Ⅳ)로 표시되는 기인 백금 착체 화합물에 해당한다.

분리 정제 후의 5-H-N1,N2 및 5-H-N2,N3의 수량의 합을 이론 수량으로 나누어 산출한 최종 수율은 56.5 % 였다. 또, 분리 정제 후의 5-H-N1,N2 (샘플 4) 및 5-H-N2,N3 (샘플 5)의 수율은 각각 36.5 % 및 20.0 %였다.

5-H-N1,N2 및 5-H-N2,N3의 동정 (同定)에 이용한 구조 분석 데이터 (분리 정제 후)를 이하에 기재한다 (NMR spectroscopy: Varian INOVA 500, 질량 분석 장치: JOEL JMX-700). 또, 5-H-N1,N2 및 5-H-N2,N3의 NMR 스펙트럼을 각각 도 2 및 도 3에 이들의 질량 스펙트럼을 각각 도 5 및 도 6에 나타낸다.

[{cis-Pt(NH₃)₂}₂(μ-OH)(μ-테트라졸라토-N1,N2)](ClO₄)₂(5-H-N1,N2)

NMR 분석

¹H-NMR (D₂O, TSP-d₄): δ(ppm) 8.84 (s, 1H, NH)

¹³C-NMR (D₂O, TSP-d₄): δ(ppm) 152.6

¹⁹⁵Pt-NMR (D₂O, Na₂PtCl₆): δ(ppm) -2127, -2177

질량 분석 ( ESI )

[M-H]⁺: 542.2 (이론값 543.1)

[M+ClO₄]⁺: 642.8 (이론값 643.0)

(M=[{cis-Pt(NH₃)₂}₂(μ-OH)(μ-테트라졸라토-N1,N2)]²⁺)

[{cis-Pt(NH₃)₂}₂(μ-OH)(μ-테트라졸라토-N2,N3)](ClO₄)₂(5-H-N2,N3)

NMR 분석

¹H-NMR (D₂O, TSP-d₄): δ(ppm) 8.66 (s, 1H, NH)

¹³C-NMR (D₂O, TSP-d₄): δ(ppm) 152.6

¹⁹⁵Pt-NMR (D₂O, Na₂PtCl₆): δ(ppm) -2192

질량 분석( ESI )

[M-H]⁺: 542.2 (이론값 543.1)

[M+ClO₄]⁺: 642.8 (이론값 643.0)

(M=[{cis-Pt(NH₃)₂}₂(μ-OH)(μ-테트라졸라토-N2,N3)]²⁺)

<예 4>

본 예에서는 식 (Ⅱ)로 표시되는 화합물과 1H-테트라졸 (즉, 치환기를 가지지 않는 1H-테트라졸계 화합물)을 1:4의 몰비로 반응시켰다. 즉, [{cis-Pt(NH₃)₂}(μ-OH)]₂(NO₃)₂에 대한 1H-테트라졸의 사용량을 4 당량으로 했다. 그 외의 점은 예 1과 마찬가지로 하여 생성물을 얻었다. 이 생성물은 도 4의 NMR 스펙트럼으로부터 명백한 바와 같이 N1,N2 가교형의 백금 착체 화합물 [{cis-Pt(NH₃)₂}₂(μ-OH)(μ-테트라졸라토-N1,N2)](NO₃)₂ 및 N2,N3 가교형의 백금 착체 화합물 [{cis-Pt(NH₃)₂}₂(μ-OH)(μ-테트라졸라토-N2,N3)](NO₃)₂ 외에 적어도 1종의 부생성물 (불순물)을 포함하며, 흡습성이 매우 높아 취급이 곤란했다. 또, 불순물을 포함하는 이 혼합물 (조생성물)의 수율은 10 % 이하였다. 만일 실시예 1의 방법에 따라서 이 혼합물의 분리 정제를 실시하면 구조 이성체의 총 수율은 그 반 근처까지 더 떨어지게 된다. 이것은 본 발명에 의한 제조 방법에 따랐을 경우의 약 9분의 1 이하이다.

<예 5>

본 예에서는 식 (I)에서의 A가 C5 위치에 메틸기를 가지는 테트라졸라토인 백금 착체 화합물을 합성했다.

즉, [{cis-Pt(NH₃)₂}(μ-OH)]₂(NO₃)₂ 1.0 g를 증류수 30 mL에 용해시킨 용액에 1H-5-메틸테트라졸 (알드리치) 0.150 g (1.1 등량)을 첨가하고 얻어진 반응액을 차광하 40℃에서 약 40시간 교반했다. 이 반응액을 회전 증발농축기 (rotary evaporator)를 이용하여 30℃ 이하에서 감압 농축하고, 남은 조생성물을 재결정 (50 % (v/v) 2-메틸-2,4-펜탄디올 수용액)에 의해 정제하여 [{cis-Pt(NH₃)₂}₂(μ-OH)(μ-5-메틸테트라졸라토-N2,N3)](NO₃)₂ 0.15 g을 얻었다. 이 화합물은 식 (I)에서의 A가 하기 식 (V)로 표시되는 기인 백금 착체 화합물이다. 이하, 해당 화합물을 5-메틸-N2,N3 (샘플 6)라고 한다.

이 5-메틸-N2,N3의 동정에 이용한 구조 분석 데이터 (예 3과 동일한 분석기기에 의해 측정했다)를 이하에 기재한다. 또, 5-메틸-N2,N3의 질량 스펙트럼을 도 7에, X 선 해석에 의한 결정 구조를 도 11에 나타낸다.

NMR 분석

¹H-NMR (D₂O, TSP-d₄): δ(ppm) 2.64 (s, 3H, CH₃)

¹³C-NMR (D₂O, TSP-d₄): δ(ppm) 10.1, 162.2

¹⁹⁵Pt-NMR (D₂O, Na₂PtCl₆): δ(ppm) -2179

질량 분석 ( ESI )

[M-H]⁺: 556.3 (이론값 557.1)

(M=[{cis-Pt(NH₃)₂}₂(μ-OH)(μ-메틸테트라졸라토-N2,N3)]²⁺)

<예 6>

본 예에서는 식 (I)에서의 A가 C5 위치에 에틸 아세테이트기를 가지는 테트라졸라토인 백금 착체 화합물을 합성했다.

즉, [{cis-Pt(NH₃)₂}(μ-OH)]₂(NO₃)₂ 1.0 g을 증류수 38 mL에 용해시킨 용액에 에틸-1H-테트라졸-5-아세테이트 (알드리치) 0.279 g (1.1 등량)을 첨가하고 얻어진 반응액을 차광하 40℃에서 약 48 시간 교반했다. 이 반응액을 회전 증발농축기를 이용하여 40℃에서 감압 농축하고 얻어진 백색 분말을 2-프로판올 및 디에틸에테르로 세정·여취한 후, 진공 데시케이터에서 건조시켜 [{cis-Pt(NH₃)₂}₂(μ-OH)(μ-테트라졸라토-5-에틸아세테이트-N2,N3)](NO₃)₂ 0.8 g을 얻었다. 이 화합물은 식 (I)에서의 A가 하기 식 (VI)으로 표시되는 기인 백금 착체 화합물이다. 이하, 해당 화합물을 5-에틸 아세테이트-N2,N3 (샘플 7)이라고 한다.

이 5-에틸 아세테이트-N2,N3의 동정에 이용한 구조 분석 데이터 (예 3과 동일한 분석기기에 의해 측정했다)를 이하에 기재한다. 또, 5-에틸아세테이트-N2,N3의 질량 스펙트럼을 도 8에 나타낸다.

NMR 분석

¹H-NMR (D₂O, TSP-d₄): δ(ppm) 1.28 (t, 3H, CH₃), 4.11 (s, 2H, CH₂),

4.24 (q, 2H, CH₂)

¹³C-NMR (D₂O, TSP-d₄):δ(ppm) 16.1, 34.2, 65.7, 174.0

¹⁹⁵Pt-NMR (D₂O, Na₂PtCl₆):δ(ppm) -2182

질량 분석( ESI )

[M-H]⁺: 628.7 (이론값 629.4)

(M=[{cis-Pt(NH₃)₂}₂(μ-OH)(μ-테트라졸라토-5-에틸아세테이트-N2,N3)]²⁺)

<예 7>

본 예에서는 예 6에서 얻어진 화합물의 치환기를 간단한 공정에 의해 변환함으로써, 식 (I)에서의 A가 C5 위치에 아세테이트기를 가지는 테트라졸라토인 백금 착체 화합물을 합성했다.

즉, 예 6에서 얻어진 [{cis-Pt(NH₃)₂}₂(μ-OH)(μ-테트라졸라토-5-에틸아세테이트-N2,N3)](NO₃)₂ 0.2 g을 증류수 5 mL에 용해시킨 용액에 1 M의 수산화 리튬 용액 300 μL를 첨가하고 얻어진 반응액을 실온에서 약 10 분간 교반했다. 이 반응액을 0.1 M 질산 수용액으로 pH 7로 조절하고 회전 증발농축기를 이용하여 감압 농축했다. 얻어진 백색 분말을 2-프로판올 및 디에틸에테르로 세정·여취한 후 진공 데시케이터에서 건조시켜 [{cis-Pt(NH₃)₂}₂(μ-OH)(μ-테트라졸라토-5-아세테이트-N2,N3)](NO₃)₂ 0.15 g을 얻었다. 이 화합물은 식 (I)에서의 A가 하기 식 (Ⅶ)로 표시되는 기인 백금 착체 화합물이다. 이하, 해당 화합물을 5-아세테이트-N2,N3이라고 한다.

이 5-아세테이트-N2,N3의 동정에 이용한 구조 분석 데이터 (예 3과 동일한 분석기기에 의해 측정했다)를 이하에 기재한다. 또, 5-아세테이트-N2,N3의 질량 스펙트럼을 도 9에, X선 해석에 의한 결정 구조를 도 12에 나타낸다.

NMR 분석

¹H-NMR (D₂O, TSP-d₄): δ(ppm) 3.84 (s, 2H, CH₂)

¹³C-NMR (D₂O, TSP-d₄):δ(ppm) 37.0, 164.1, 179.2

¹⁹⁵Pt-NMR (D₂O, Na₂PtCl₆):δ(ppm) -2181

질량 분석( ESI )

[M-H]⁺: 600.5 (이론값 600.4)

(M=[{cis-Pt(NH₃)₂}₂(μ-OH)(μ-테트라졸라토-5-아세테이트-N2,N3)]⁺)

<예 8>

본 예에서는 식 (I)에서의 A가 C5 위치에 페닐기를 가지는 테트라졸라토인 백금 착체 화합물을 합성했다.

즉, [{cis-Pt(NH₃)₂}(μ-OH)]₂(NO₃)₂ 1.0 g을 증류수 40 mL에 용해시킨 용액과 1H-5-페닐테트라졸 (알드리치) 0.273 g (1.1 등량)을 메탄올 10 mL에 용해한 용액을 혼합하고 얻어진 반응액을 차광하 40℃에서 약 48 시간 교반했다. 얻어진 백색의 현탁액을 회전 증발농축기를 이용해서 30℃ 이하에서 감압 농축하고, 남은 조생성물에 메탄올 200 mL를 첨가하고 메탄올 불용분을 여과에 의해 제거했다. 여액을 감압 농축하고 남은 백색 분말을 디에틸에테르로 세정·여취하고 진공 데시케이터 중에서 건조시킨 후, 재결정 (60 % (v/v) 메탄올 수용액)에 의해 정제하여 {cis-Pt(NH₃)₂}₂(μ-OH)(μ-5-페닐테트라졸라토-N2,N3)](NO₃)₂ 0.55 g을 얻었다. 이 화합물은 식 (I)에서의 A가 하기 식 (Ⅷ)로 표시되는 기인 백금 착체 화합물이다. 이하, 해당 화합물을 5-페닐-N2,N3 이라고 한다.

이 5-페닐-N2,N3의 동정에 이용한 구조 분석 데이터 (예 3과 동일한 분석기기에 의해 측정했다)를 이하에 기재한다. 또, 5-페닐-N2,N3의 질량 스펙트럼을 도 10에 나타낸다.

NMR 분석

¹H-NMR (D₂O, TSP-d₄): δ(ppm) 7.60 (1H, p-CH), 7.62 (2H, CH),

8.06 (2H, CH)

¹³C-NMR (D₂O, TSP-d₄): δ(ppm) 129.4, 132.1, 133.7, 166.3

¹⁹⁵Pt-NMR (D₂O, Na₂PtCl₆): δ(ppm) -2185

질량 분석( ESI )

[M-H]⁺: 618.6 (이론값 619.4)

(M=[{cis-Pt(NH₃)₂}₂(μ-OH)(μ-5-페닐테트라졸라토-N2,N3)]²⁺)

샘플 4∼7의 세포 독성을 비교 대상인 백금 착체 화합물 (샘플 3, 8, 9)과 함께 상술한 수법에 의해 평가했다. 그 결과를 표 2에 나타낸다.

여기에서, 표 2 중의 AMPZ (샘플 8)은 식 [{cis-Pt(NH₃)₂}₂(μ-OH)(μ-피라졸라토)](NO₃)₂로 표시되는 피라졸라토 가교 백금(Ⅱ) 2핵 착체이며, AMTA (샘플 9)는 식 [{cis-Pt(NH₃)₂}₂(μ-OH)(μ-1,2,3-트리아졸라토-N1,N2)](NO₃)₂로 표시되는 1,2,3-트리아졸라토 가교 백금(Ⅱ) 2핵 착체이다. 이들 AMPZ 및 AMTA는 시스플라틴과는 다른 항암 활성 스펙트럼을 나타내는 것이 알려져 있고 (비특허문헌 3), 또 DNA 사슬과 결합하여 1,2-사슬내 가교를 형성하지만 결합 부분의 DNA 사슬에 상기와 같은 현저한 뒤틀림을 끼치지 않는 것이 관찰되고 있다. 즉, 이들 아졸라토 가교 백금(Ⅱ) 2핵 착체는 상기 시스플라틴계 제제의 어느 것과도 다른 태양으로 DNA에 결합한다고 생각된다.

H460 비소폐암세포에 대한 백금 착체 화합물의 IC₅₀ 값

샘플 번호	화합물명	IC₅₀ (μM)
3	시스플라틴	23
4	5-H-N1,N2	21
5	5-H-N2,N3	8.3
6	5-메틸-N2.N3	20
7	5-에틸아세테이트-N2,N3	22
8	AMPZ	＞ 100
9	AMTA	62

표 2에 나타난 결과로부터 명백한 바와 같이, 샘플 4∼7 중 어느 것이든 H460 비소폐암세포에 대하여 시스플라틴과 동일한 정도 이상의 세포 독성을 나타냈다. 또, 상기의 암 세포에 대한 세포 독성은 AMPZ 및 AMTA와 비교해 현저하게 우수했다. 본 발명에 의한 백금 화합물은 구조상 시스플라틴계 제제와는 다른 태양으로 DNA에 결합할 수 있다 (즉, 다른 작용기서 및 체내 대사경로를 찾을 수 있다). 나아가 상기의 측정 결과는 본 발명에 의한 백금 착체 화합물이 AMPZ 및 AMTA와는 다른 약제 프로파일을 가질 수 있다는 것을 시사하는 것이다.

Claims

다음 식(I):

(식 중, A는 탄소수 1∼6의 탄화수소기, -CH₂COO^- 및 -CH₂COORx (여기서, Rx는 탄소수 1∼4의 알킬기이다.)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 치환기를 가지는 또는 가지지 않는 테트라졸라토 (tetrazolato)이고, B는 유기 또는 무기의 음이온이며, m 및 n은 백금 착체부의 전하 수 및 상기 B의 전하 수에 대응해서 결정되는 정수이다.);
에 의해서 표시되는 백금 착체 화합물.
청구항 1에 있어서,
상기 백금 착체부는 상기 A를 구성하는 테트라졸환의 2위치 및 3위치의 N이 두 개의 백금 이온에 각각 배위한 N2,N3-가교 구조를 가지는 백금 착체 화합물.
청구항 2에 있어서,
상기 A는 치환기를 가지지 않는 테트라졸라토인 백금 착체 화합물.
삭제
청구항 1 내지 청구항 3 중 어느 한 항에 기재된 백금 착체 화합물을 유효 성분으로서 포함하는 항암제.
청구항 1 내지 청구항 3 중 어느 한 항에 기재된 백금 착체 화합물을 제조하는 방법으로서,
다음 식(Ⅱ):

(식 중, B는 유기 또는 무기의 음이온이며, n은 상기 B의 전하 수에 대응해서 결정되는 정수이다.);
으로 표시되는 화합물과 탄소수 1∼6의 탄화수소기, -CH₂COO^- 및 -CH₂COORx (여기서, Rx는 탄소수 1∼4의 알킬기이다.)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 치환기를 가지는 또는 가지지 않는 1H-테트라졸을 1:1∼1:1.2의 몰비로 반응시켜, N1,N2-가교 백금 착체 화합물과 N2,N3-가교 백금 착체 화합물의 혼합물을 얻는 공정과,
이 혼합물에 포함되는 N1,N2-가교 백금 착체 화합물 및 N2,N3-가교 백금 착체 화합물 중 어느 한 쪽으로부터 다른 쪽을 분리함으로써 상기 백금 착체 화합물 중 적어도 어느 하나를 정제하는 공정을 포함하는 백금 착체 화합물 제조 방법.
청구항 6에 있어서,
상기 백금 착체 화합물을 정제하는 공정은 이동상으로서 과염소산염 용액을 이용한 역상 크로마토그라피에 의해 실시하는 방법.
청구항 7에 있어서,
상기 과염소산이 과염소산 리튬인 방법.