KR101560450B1

KR101560450B1 - Srebp1 유전자 내의 한우 육질 진단용 단일염기다형성 마커 및 이를 이용한 한우 육질의 진단방법

Info

Publication number: KR101560450B1
Application number: KR1020130094751A
Authority: KR
Inventors: 여정수; 이윤석; 오동엽
Original assignee: 영남대학교 산학협력단
Priority date: 2013-08-09
Filing date: 2013-08-09
Publication date: 2015-10-16
Also published as: KR20150018717A

Abstract

본 발명은 SREBP1 유전자 내의 한우 육질 진단용 단일염기다형성 마커 및 이를 이용한 한우 육질의 진단방법에 관한 것으로서, 서열번호 1의 270번째 뉴클레오티드 또는 서열번호 2의 344번째 뉴클레오티드를 포함하는 10-100개의 연속적인 DNA 서열로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드로 이루어진 한우 육질 진단용 단일염기다형성(SNP) 마커 조성물을 제공한다. 또한 본 발명은 상기 SNP 마커를 이용한 한우 육질의 진단방법 및 진단용 키트를 제공한다. 이를 토대로 육질이 우수한 한우품종을 조기에 선발하여 개량하는데 유용하게 사용할 수 있다.

Description

SREBP1 유전자 내의 한우 육질 진단용 단일염기다형성 마커 및 이를 이용한 한우 육질의 진단방법{Single nucleotide polymorphism marker in SREBP1 gene for diagnosis of meat quality in Hanwoo and method for diagnosis of meat quality in Hanwoo using same marker}

본 발명은 SREBP1 유전자 내의 한우 육질 진단용 단일염기다형성 마커 및 이를 이용한 한우 육질의 진단방법에 관한 것이다.

스테롤 조절 부위 결합 인자(Sterol Regulatory Element Binding proteins; SREBPs) 유전자는 효소 내인성 콜레스테롤, 지방산 (FA), 트리아실글리세롤(triacylglycerol)와 인지질(phospholipid) 합성에 필요한 범위의 표현을 통제하는 지질 항상성 조절 전사 인자이며, 소포체의 막에 결합된 1150개의 아미노산 비활성 선구자로 합성되는 basic-helix-loop-helix-leucine zipper 전사 인자들이다. 이러한 SREBPs는 3가지 형태를 지니고 있으며, 그 종류에는 SREBP-1a와 SREBP-1c 및 SREBP-2가 있고, 각각 지질 합성에 서로 다른 역할을 가지고 있다. SREBP-1c는 지방산 합성 및 인슐린의 포도당 신진 대사를 유도하는 것에 반해 SREBP-2는 상대적으로 콜레스테롤 합성에 특이적으로 관여한다는 것을 암시한다. 또한 SREBP-1a는 양쪽 경로 모두에 연관이 된다는 보고가 있다.

SREBPs 유전자는 3개의 도메인으로 구성되어 있다. 첫 번째 도메인의 경우 하나의 전사활성화(transactivation) 영역을 포함하는 480개의 아미노산의 NH₂-말단으로 이루어져 있고, 두 번째 도메인의 경우 480번째부터 510번째 아미노산으로 총 30개의 아미노산으로 구성된 짧은 루프에 의해 가로막힌 두 개의 소수성 막 관통 조각들로 구성되어 있다. 마지막으로 세 번째 도메인의 경우 511번째의 아미노산에서 1150번째의 아미노산까지 590개의 아미노산으로 구성된 COOH-말단 단편 조절 도메인(COOH-terminal segment regulatory domain)이며, 이 도메인의 경우 콜레스테롤 합성(cholesterogenesis) 와 지질합성(lipogenesis)에서 많은 복잡한 유전자들의 발현을 활성화시키며 지방산 합성에 큰 영향을 준다고 보고되어 있다.

쇠고기의 등급은 육질등급과 육량등급으로 구분하여 판정하는데 육질등급은 고기의 질을 근내지방도, 육색, 지방색, 조직감, 성숙도에 따라 1++, 1+, 1, 2, 3 등급으로 판정하는 것으로 소비자가 고기를 선택하는 기준이 되며, 육량등급은 도체에서 얻을 수 있는 고기량을 도체중량, 등지방두께, 등심단면적의 성적을 종합하여 A, B, C 및 D(등외) 등급으로 판정한다. 한우의 경우 타 수입육이나 국내산 젖소육 및 육우보다 월등히 가격이 높기 때문에 육질과 육량이 우수한 한우를 선발하여 생산함으로써 소비자들로 하여금 맛 좋은 고급육으로서의 품질 이미지를 확고하게 갖추는 것이 중요하다.

한편, 한국공개특허 제10-2012-0011728호는 한우의 육량 또는 육질의 조기 선발에 유용한 단일염기다형성 마커에 대한 것으로서, 한우의 도체중, 배장근단면적, 등지방두께, 또는 근내지방도의 육량 및 육질 판단에 유용한 SNP 마커를 개시하고 있지만, 본 발명의 SREBP1 유전자 내의 SNP에 대한 언급은 없다.

본 발명의 목적은 서열번호 1의 270번째 뉴클레오티드 또는 서열번호 2의 344번째 뉴클레오티드를 포함하는 10-100개의 연속적인 DNA 서열로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드로 이루어진 한우 육질 진단용 단일염기다형성(SNP) 마커 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적은 상기 SNP 마커를 이용한 한우 육질의 진단방법 및 진단용 키트를 제공하는데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 서열번호 1의 270번째 뉴클레오티드 또는 서열번호 2의 344번째 뉴클레오티드를 포함하는 10-100개의 연속적인 DNA 서열로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드로 이루어진 한우 육질 진단용 단일염기다형성(SNP) 마커 조성물을 제공한다.

상세하게는 상기 서열번호 1의 270번째 뉴클레오티드의 유전자형은 TT 및 상기 서열번호 2의 344번째 뉴클레오티드의 유전자형은 TT인 것을 특징으로 한다.

상세하게는 상기 한우 육질 진단은 근내지방도 및 불포화지방산의 함량을 진단하는 것을 특징으로 한다. 또한, 상기 불포화지방산은 올레인산 및 단일불포화지방산인 것을 특징으로 한다.

상기 서열번호 1의 270번째 뉴클레오티드를 포함하는 폴리뉴클레오티드에서 다형성 SNP 변이는 g.3270+10274 C>T로 표시하여 기재할 수 있다.

상기 서열번호 2의 344번째 뉴클레오티드를 포함하는 폴리뉴클레오티드에서 다형성 SNP 변이는 g.13544 T>C로 표시하여 기재할 수 있다.

상기 SNP 마커는 그 개개로도 한우 육질 진단용 마커로서 유용하며, 상기 마커를 조합하여 마커수를 많이 포함할수록 육질 진단의 정확도가 높아질 수 있다.

한편 상기 SNP 마커는 g.3270+10274 C>T(서열번호 1의 270번째 염기) 및 g.13544 T>C(서열번호 2의 344번째 염기) 각각으로도 한우 육질 판단을 위한 마커로서 사용할 수 있을 뿐만 아니라, 상기 SNP의 haplotype 조합으로 더욱 우수한 마커로서 작용할 수 있는데, 이는 SNPs간에 연관불평형을 구성하고 있기 때문이다.

본 명세서에서 사용되는 용어 연관불평형 (Linkage Disequilibrium)이란 집단유전학에서 반드시 동일 염색체상에 존재하지는 않는 둘 이상의 유전자좌 (loci)에서의 대립유전자의 비-무작위적 연관 (non-random association)을 의미한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "n N>M" (이때, n은 정수이고, N 및 M은 각각 독립적으로 A, C, T 또는 G이다.)은 유전자 염기서열에서 n번째 N 염기가 M 염기로 치환된 것을 의미한다. 한편, 본 명세서의 서열번호 1 및 서열번호 2의 염기서열은 각각 다중염기기재 방식에 따라 작성하였다.

또한, 본 발명은 (1) 개체로부터 DNA 샘플을 수득하는 단계; (2) 상기 (1)단계로부터 수득한 DNA을 주형으로 하여, 상기 SNP 마커를 증폭시킬 수 있는 프라이머를 이용하여 PCR을 수행하는 단계; (3) 상기 PCR 산물로부터 서열번호 1의 270번째 뉴클레오티드 또는 서열번호 2의 344번째 뉴클레오티드의 유전자형을 확인하는 단계; 및 (4) 상기 유전자형으로 근내지방도 및 불포화지방산의 함량을 진단하는 단계를 포함하는 한우 육질의 진단방법을 제공한다.

상세하게는, 상기 (4) 단계의 근내지방도 및 불포화지방산의 함량 진단은 서열번호 1의 270번째 뉴클레오티드의 유전자형이 TT 및 서열번호 2의 344번째 뉴클레오티드의 유전자형이 TT일 경우, 고급육으로 진단하는 것을 특징으로 한다.

상기 DNA의 공급부위는 특별히 한정된 것은 아니며, 일례로, 근육, 표피, 혈액, 뼈, 장기로부터 얻을 수 있고, 바람직하게는 근육 또는 혈액으로부터 얻을 수 있다. 본 발명의 일례로, 출발물질이 gDNA인 경우, gDNA의 분리는 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라 실시될 수 있으며 (참조: Rogers & Bendich (1994), 출발물질이 mRNA인 경우에는, 역전사효소를 이용하여 cDNA로 합성될 수 있다.

또한, 본 발명은 서열번호 1의 270번째 뉴클레오티드 또는 서열번호 2의 344번째 뉴클레오티드를 포함하는 10-100개의 연속적인 DNA 서열로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드를 증폭시킬 수 있는 프라이머를 포함하는 한우 육질 진단용 키트를 제공한다.

상세하게는, 상기 프라이머는 서열번호 3 내지 서열번호 8로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 프라이머인 것을 특징으로 한다.

상기 진단용 키트에는 본 발명의 한우 육질 진단용 마커를 증폭시킬 수 있는 프라이머 뿐만 아니라, 중합 반응에 필요한 시약, 예를 들면 dNTP, 각종의 중합효소 및 발색제 등을 포함할 수 있다.

상기 "증폭시킬 수 있는 프라이머"란 적절한 버퍼 중의 적절한 조건 (예를 들면, 4개의 다른 뉴클레오시드 트리포스페이트 및 DNA, RNA 폴리머라제 또는 역전사 효소와 같은 중합제) 및 적당한 온도 하에서 주형-지시 DNA 합성의 시작점으로서 작용할 수 있는 단일가닥 올리고뉴클레오티드를 말한다. 상기 프라이머의 적절한 길이는 사용 목적에 따라 달라질 수 있으나, 통상 15 내지 30 뉴클레오티드이다. 짧은 프라이머 분자는 일반적으로 주형과 안정한 혼성체를 형성하기 위해서는 더 낮은 온도를 필요로 한다. 프라이머 서열은 주형과 완전하게 상보적일 필요는 없으나, 주형과 혼성화 할 정도로 충분히 상보적이어야 한다.

본 발명의 서열번호 1의 270번째 뉴클레오티드 또는 서열번호 2의 344번째 뉴클레오티드를 포함하는 10-100개의 연속적인 DNA 서열로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드는 쇠고기 맛과 연관된 정확하고 유용한 한우 육질 진단용 다형성 (SNP) 마커로써, 이를 한우의 고급육 계통선발 육성에 이용할 경우 연령과 성에 관계없이 조기선발이 가능하여 세대간격을 단축시키고, 선발의 정확도를 증가시키며, 선발강도를 높이고, 계획교배가 가능하므로 한우의 육질 능력에 대한 개량이 이루어짐으로, 농가 소득 향상에 크게 기여할 것이다.

도 1은 한우에서 나타난 SREBPs 유전자의 10개 다형성 SNPs를 나타낸다.
도 2는 SREBPs 유전자의 우수 SNPs의 1⁺등급 이상 출현율 및 올레인산 함량을 나타낸다.

이하, 하기 실시예를 통해 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 다만, 이러한 실시예에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1> SREBPs 유전자의 후보 SNPs 위치 및 유전 정보 확인

1. 실험동물(한우)

실험동물은 경북 지역의 14곳의 시·군 단위에서 사육된 거세우로, ㈜참품한우 사양관리 지침에 따라 26~33개월에서 출하하는 513두의 게노믹(genomic) DNA 시료와 능력자료 및 각 개체에 대한 지방산 조성을 사용하였다.

본 발명에서 사용된 한우의 등심조직은 흉추 제 13, 요추 제 1마디 38번 최장근 부분에서 절개하여 채취하였으며, 각 조직은 근외지방을 제거한 뒤 -80℃에서 보관하였다.

2. 실험 대상 형질

본 발명에서는 한우의 경제형질 및 지방산 조성과 후보 SNPs들 간의 상관관계 분석을 위해서 각 개체들의 도체형질인 근내지방도(marbling score)와 등지방 두께(backfat thickness), 도체중량(carcass weight)의 형질을 대상으로 분석하였다.

실험형질에 대한 측정기준

형 질	측 정 기 준
도 체 중	도축장에서 측정하여 제출한 중량
등지방두께	등급판정부위에서 배최장근단면의 오른쪽면을 따라 복부쪽으로 2/3 들어간 지점의 등지방을 mm단위로 측정 (등지방두께가 1mm이하인 경우에는 1mm로 판정)
근내지방도	배최장근단면에 나타난 지방분포정도

[출처 : 농림부고시 제2009-344호]

표 1에서 볼 수 있듯이, 근내지방도는 등급판정부위에서 배최장근단면에 나타난 지방 분포정도를 근내지방도 기준과 비교하여 판정하였고, 등지방두께는 배최장근단면의 오른쪽면을 따라 복부쪽으로 2/3 들어간 지점의 등지방을 mm단위로 측정하였다.

한편, 지방산 조성은 이중결합이 형성되지 않으며 포화지방산의 종류인 미리스트산 (C14:0), 팔미트산 (C16:0) 및 스테아르산 (C18:0)을 대상으로 측정하였으며, 이중결합이 한 개 형성되는 단일불포화지방산 (mono-unsaturated fatty acid)의 종류인 미리스틀레인산 (C14:1), 팔미토레익산 (C16:1) 및 올레인산 (C18:1) 과 오메가-3 및 오메가-6 지방산을 대상으로 측정하였다.

3. 지방산 분석

한우 513두로부터 등심 조직 약 450g을 채취하여 각각 잘게 분쇄한 뒤 2~3g씩 사용하여 Folch법 (Folch 등, 1957)으로 클로로포름(chloroform) : 메탄올(methanol) (2:1)을 5ml 넣고, 균질기(homogenizer; Polytron PT-MR-2100, Switzerland)를 이용하여 11,000rpm에서 2~3분 동안 분쇄하여 추출한 후 수조(water bath) (40℃)에서 필터(filter paper)를 이용하여 여과하였다.

여과액을 증류수와 혼합한 후, 메탄올과 물층을 제거하고 클로로포름과 지질 층을 질소가스를 이용하여 제거한 후 BF3-메탄올(14%)을 처리하여 65℃에서 트랜스메틸화(transmethylation)시켜 분석하였다. 총 지방산조성 분석은 기체 크로마토그래피(gas-chromatography; Perkin-Elmer CO, USA)를 이용하였다.

4. 융점 분석

분쇄한 한우, 비거세우, 암소, 육우, 호주산 및 미국산 등심 조직의 10~20g 을 취하여 자른(chopping) 후, 삼각플라스크, 필터(filter paper) 및 깔대기를 이용하여, 105℃ 드라이-오븐(dry-oven; 존샘(주), korea)에 4시간 넣어 지방을 추출하였다.

추출된 지방을 융점 측정용 모세관(capillary tube; Tubes, capillary, 100mm, open)에 1cm 씩 담고, 냉동실(-20℃)에 24시간 넣어두었다. 교반기(Hot stirrer)에서 2분에 1℃씩 온도가 상승하게 하면서 지방의 융점을 측정하였다.

5. 게노믹(genomic) DNA 추출

게노믹(Genomic) DNA 추출은 한우 조직 약 12mg을 1.5ml 튜브에 넣고 세포 용해 용액(Cell Lysis Solution; AL buffer) 300㎕를 첨가한 뒤, 단백질을 제거하기 위해 단백질 분해효소인 Proteinase K (10㎎/㎖, Promega Co, USA)를 총 부피의 1/100배인 150㎕를 넣어 37℃에서 12시간 동안 배양시켰다.

배양 후 단백질 침전을 위해 동일한 양의 TE (Tri-EDTA) : 페놀(phenol) (1:1)을 넣고 2시간 동안 20분 간격으로 천천히 흔들어 3,000rpm에서 10분간 원심 분리하여 DNA 수용액 층을 채취하고 다시 동일 량의 페놀(Phenol) : 클로로포름(Chloroform) : 이소-아밀알콜(Iso-amylalchol) (25:24:1)을 넣고 3,000rpm에서 10분간 원심분리한 후, 재차 DNA 수용액 층을 채취하였다.

2배 부피의 에틸 에테르(Ethyl ether)를 넣어 백색의 DNA 수용액 층이 투명해질 때까지 흔든 후 3,000rpm에서 5분간 원심분리하고 에틸 에테르(ethyl ether)를 휘발시켜 제거하였다. 3M 소듐 아세테이트(sodium acetate) (pH5.2)를 총 부피의 1/10배를 첨가하고, 100% 에탄올(ethanol)을 넣어 DNA를 응축시키고 70% 에탄올(ethanol)을 20㎖정도 넣고 DNA를 세정하였다.

완전히 에탄올(ethanol)을 제거한 후, TE(10mM Tris-HCl pH8.0, 1mM EDTA)를 약 1 ~ 2㎖정도 넣어 DNA를 용해시켜 4℃에 보관하였다.

6. DNA 정량분석

DNA를 완전히 용해시키고 정량분석을 위해 3차 증류수 950㎕ 에 50㎕의 DNA를 첨가하여 20배 희석한 후 분광광도계(spectrophotometer; SHIMADZU, Japan)를 이용하여 260nm와 280nm 흡광도에서 측정하여 OD₂₆₀ / OD₂₈₀의 비가 1.8 ~ 2.0정도인 DNA를 사용하였다.

7. SNP 유전자형 분석(genotyping)

본 발명에서 SNP 유전자형 분석(genotyping)은 SBE (single-based extension, Vreeland 등, 2002) 방식을 이용하는 ABI PRISM^® SNaPshot^TM Multiplex Kit(Applied Biosystems, Foster City, CA)를 사용하였다.

먼저 후보 SNP 발굴을 위해 NCBI database (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)를 활용하였으며 SNP에 사용된 프라이머는 primer3 software (http://frodo.wi.mit.edu/cgi- bin/primer3/primer3_www.cgi)를 이용하여 합성하였다. 추출한 DNA를 이용하여 PCR을 실시하였으며, 그 조건은 다음과 같다.

20ng 게노믹(genomic) DNA, 0.25U Taq polymerase (Solgent Co., Ltd, South Korea), 1x buffer, 0.2mM dNTP, 5pmol 프라이머(forward/reverse)를 첨가하여 전체 15㎕가 되도록 하고 혼합한 후 94℃, 5분에서 1 cycle, 94℃에서 30초, 합성 온도에서 30초, 72℃에서 1분의 조건으로 35 cycle, 72℃, 3분에서 1 cycle을 반응시켰다. 생성된 PCR 산물에서 1㎕를 전기영동하여 생성물을 확인하였다.

PCR 산물에 5U SAP (shrimp alkaline phosphatase)와 2U Exo I (exonuclease I, E. coli)를 첨가하여 잘 혼합한 다음, 37℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응이 끝난 다음 75℃에서 15분간 불활성 시켰다.

SBE 반응을 위해 ABI PRISM^® SNaPshot^TM Multiplex Kit (Applied Biosystems, Foster City, CA)을 사용하였고, 그 조건은 다음과 같다. 정제된 PCR 산물 1㎕, SNaPShot multiplex ready reaction mix 1㎕, 5pmol SNaPShot 프라이머 1㎕를 넣어 전체 10㎕가 되게 하고 잘 혼합하여 96℃에서 10초, 50℃에서 5초, 60℃에서 30초의 조건으로 25 cycle을 반응시켰다. 반응된 PCR 산물에 1U SAP를 첨가해준 다음 37℃에서 1시간 동안 배양하였고 75℃에서 15분 동안 불활성화 시켰다.

최종적으로 준비된 PCR 산물 1㎕를 GeneScan-120 LIZ size standard (Applied Biosystems, Foster City, CA) 0.25㎕와 Hi-Di 포름아미드(formamide) 9.5㎕ (Applied Biosystems, Foster City, CA)를 첨가하여 잘 섞어준 다음 95℃에서 5분간 변성시킨 후, ABI PRISM 3130XL Genetic Analyzer에 전기영동을 하였다. 전기영동이 끝난 PCR 산물은 GeneMapper v4.0 software (Applied Biosystems, Foster City, CA)에 데이터를 입력하여 자동분석을 실시하였다.

8. 통계분석 방법

이형접합체율(Heterozygosity)은 특정 마커에 대하여 무작위로 개체를 선발하였을 때 그 마커에 대한 이형접합 개체의 비율을 나타내며 그 값은 0~1사이의 값을 나타낸다.

이형접합체율값이 클수록 마커의 다형성이 크며 마커의 유용성이 높다. 이형접합체율값은 다음 같이 정의된다.

H = 1-∑P_i ²

H = 이형접합체율

P_i = i번째 대립 유전자로부터의 측정된 빈도값

단, 유전자 내에서 대립 유전자의 하디-와인버그 평형(Hardy-Weinberg equilibrium)을 유지해야 하며 이형접합체율은 모집단에서 대립유전자가 동일한 도수비율을 유지할 때 최대값을 가진다.

9. Minor 대립유전자 빈도

이형접합체율과 Minor 대립유전자 빈도는 집단에서 SNP에 대한 효율성이 있는지를 알아보기 위해 Haploview v4.2 (Barrett 등, 2005) 프로그램을 사용하였다. Minor 대립유전자 빈도란 집단에서 SNP 대립유전자 중 낮은 빈도를 나타내는 대립유전자를 말한다. 또한 이형접합체율은 SNP의 예측 이형접합체율값으로서 모델은 다음과 같다.

PredHET = 2 × MAF × (1-MAF)

여기에서 MAF는 minor 대립유전자의 빈도이다.

10. 하디-와인버그 평형 (Hardy-Weinberg equilibrium) 분석

본 발명에서 Haploviewer v4.2 (Barrett 등, 2005)를 이용하여 하디-와인버그 법칙과 연관불평형을 분석하였다. 하디-와인버그 평형(Hardy-Weinberg equilibrium)이란 외적인 요인이 작용하지 않는다면, 유전자와 유전자형 빈도가 모두 변하지 않고 평형을 이루게 된다는 것으로 이것을 만족하는 집단은 대립 유전형질의 독립성이 성립하게 된다.

따라서 유전자좌 내에서의 독립성 검정은 χ² 통계량을 이용한 적합도 검정으로 각 유전자형 범주에 대한 실제 관측빈도와 기대빈도를 이용하였다.

여기서, n은 관측수, O는 관측빈도, E는 기대빈도이다.

11. 단일 유전자의 연관분석 (Association analysis)

각 SNPs의 연관분석은 ㈜참품한우에 소속되어 있는 일반농가 집단 513두의 도체중, 등지방두께, 근내지방도 및 지방산 조성의 측정기록으로 SPSS v19.0 (SPSS Inc., Chicago, IL)을 사용하여 다음과 같은 통계모형으로 공 분산 분석과 유의성 검정을 실시하였다.

Y _ijkl = μ+ P _i + GS _j + SNP _k +β age _l + e _ijkl

Y_ijl = 도체형질 및 지방산 함량의 표현형,

μ = 각각의 형질에 대한 전체적인 평균,

P_i = 분만 장소의 고정 효과,

GS _j = 씨 숫소에 대한 임위 효과,

SNP_k = 마커 유전자형의 고정 효과,

βage_l = 도축일령에 대한 공변량,

e_ijkl = 임위 오차.

12. SREBPs 유전자의 후보 SNPs의 유전정보

한우의 SREBPs에 관한 SNP선정은 Genbank Number NC_007317.4인 genomic DNA 상에서 모든 부위에서 염기의 변이가 있는 10개 SNPs를 대상으로 선정하였으며 유전자 내 각각의 SNPs들의 위치 및 염기서열 정보를 도 1에 자세히 명시하였다.

SREBPs 유전자는 19개의 엑손(exon)으로 구성되어 있으며, 엑손13(exon13) 부분에 위치한 g.13544 T>C SNP와 3’UTR에 위치한 g.15744 C>T SNP를 제외한 나머지 8개의 SNPs가 인트론(intron)에 존재하는 것을 볼 수 있다. 특히 엑손13(exon13) 부위 g.13544 T>C의 SNP경우 CTT 에서 CCT 부분으로 염기가 바뀌게 됨으로 인하여 아미노산 배열이 루신에서 프롤린으로 치환이 되는 비동의적 다형성(non-synonymous SNP)이다.

10개의 후보 SNPs에 대해서 다형성 확인을 위해 불포화지방산 조성이 상대적으로 차이가 나는 한우 44두에 1차 실험을 수행하였다. 그 결과 8개의 SNPs에서 다형성이 확인되었으며, SNP 마커로서의 정보력과 다양성을 알아보기 위해서 H 와 MAF 및 HWE값을 구하였다.

한우에서 나타난 SREBPs 유전자의 8개 다형성 SNPs의 유전자형 및 빈도

SNP	위치	유전자형 (두수) 빈도				H¹	MAF²	HWE³
g.3270+10274 C>T	Intron	CC (12)	CT (16)	TT (16)	N (44)	0.499	0.455	0.120
		0.273	0.364	0.364	1
g.3337+10207 T>C		CC (1)	CT (11)	TT (32)	N (44)	0.252	0.148	0.999
		0.023	0.250	0.727	1
g.4045+9499 G>A		AA (1)	AG (13)	GG (30)	N (44)	0.283	0.170	0.993
		0.023	0.295	0.682	1
g.4483+9061 A>C		AA (0)	AC (31)	CC (13)	N (44)	0.456	0.352	0.004
		0.000	0.705	0.295	1
g.8166+5378 T>C		CC (6)	CT (22)	TT (16)	N (44)	0.474	0.386	0.988
		0.136	0.500	0.364	1
g.13850-306 T>C		CC (9)	CT (24)	TT (11)	N (44)	0.499	0.477	0.810
		0.205	0.545	0.250	1
g.13544 T>C	Exon13	CC (32)	CT (10)	TT (2)	N (44)	0.268	0.159	0.555
		0.727	0.227	0.045	1
g.15744 C>T	3'UTR	CC (30)	CT (10)	TT (4)	N (44)	0.325	0.205	0.113
		0.682	0.227	0.091	1

¹이형접합성, ²최소 대립유전자 빈도, ³하디-웨인버그값, ⁴전체두수

HWE값이 0보다 높고 MAF 값 또한 0.1보다 높은 점을 토대로 SREBPs 유전자 내에 존재하는 8개의 다형성 SNPs 모두를 선택하였다. 이후 지방산과 연관되는 SNP를 규명하기 위해서 일차적으로 올레인산 (C18:1)의 함량이 높은 그룹과 낮은 그룹의 한우 44두를 대상으로 8개의 후보 SNPs에서 특이하게 차이를 나타나는 것을 선택한 것을 표 3에 명시하였다.

한우에서 나타난 SREBPs 유전자의 8개 다형성 SNPs의 지방산의 높은 그룹과 낮은 그룹간의 빈도

SNP	위치	유전자형의 빈도 (두수)						유의 확률¹	전체
		지방산의 높은 그룹			지방산의 낮은 그룹
		빈도			빈도
g.3270+10274 C>T	Intron	CC (8)	CT (10)	TT (4)	CC (4)	CT (6)	TT (12)	0.042	N ² (44)
g.3270+10274 C>T		0.667	0.625	0.250	0.333	0.375	0.750	0.042	1
g.3337+10207 T>C		CC (1)	CT (5)	TT (16)	CC (0)	CT (6)	TT (16)	0.580	N (44)
g.3337+10207 T>C		1.000	0.455	0.500	0.000	0.545	0.500	0.580	1
g.4045+9499 G>A		AA (1)	AG (7)	GG (14)	AA (0)	AG (6)	GG (16)	0.546	N (44)
g.4045+9499 G>A		1.000	0.538	0.467	0.000	0.462	0.533	0.546	1
g.4483+9061 A>C		AA (0)	AC (16)	CC (6)	AA (0)	AC (15)	CC (7)	0.987	N (44)
g.4483+9061 A>C		0.000	0.516	0.462	0.000	0.484	0.538	0.987	1
g.8166+5378 T>C		CC (4)	CT (11)	TT (7)	CC (2)	CT (11)	TT (9)	0.632	N (44)
g.8166+5378 T>C		0.667	0.500	0.438	0.333	0.500	0.563	0.632	1
g.13850-306 T>C		CC (4)	CT (11)	TT (7)	CC (5)	CT (13)	TT (4)	0.578	N (44)
g.13850-306 T>C		0.444	0.458	0.636	0.556	0.542	0.364	0.578	1
g.13544 T>C	Exon13	CC (12)	CT (8)	TT (2)	CC (20)	CT (2)	TT (0)	0.022	N (44)
g.13544 T>C	Exon13	0.375	0.800	1.000	0.625	0.200	0.000	0.022	1
g.15744 C>T	3'UTR	CC (14)	CT (5)	TT (3)	CC (16)	CT (5)	TT (1)	0.567	N (44)
g.15744 C>T	3'UTR	0.467	0.500	0.750	0.533	0.500	0.250	0.567	1

¹ χ²검정, ²전체두수.

표 3의 결과에서 보면, 8개의 후보 SNPs 중에서 인트론(intron) 영역에 위치한 g.3270+10274 C>T와 엑손13(exon13) 영역에 있는 g.13544 T>C의 총 2개의 후보SNPs에서 지방산이 높은 그룹과 지방산이 낮은 그룹에서 빈도가 최소 25%이상 차이가 나는 것을 알 수 있었다. 하지만 나머지 6개의 후보 SNPs에서는 유의적인 차이를 나타내지 못하였다.

인트론(Intron) 영역의 g.3270+10274 C>T의 경우 지방산의 높은 그룹과 낮은 그룹에서 TT유전자형 빈도가 50.0%이상의 차이를 나타내었으며, χ² 검정결과 불포화지방산 함량과 유전자형간에 따라 통계적으로 유의한 차이가 보였다. 엑손13(exon13) 영역에 있는 g.13544 T>C의 경우 CC, CT 및 TT 유전자형에서 25.0%, 60.0% 및 100%이상의 높은 차이를 보여주면서 χ² 검정결과 유의적인 차이를 볼 수 있었다. 앞서 분석한 다른 유전자와 마찬가지로 지방산의 함량 차이가 많이 나는 SNPs의 경우 쇠고기 맛과 깊은 연관이 있는 SNP일 것이라는 가정하에 한우 513두를 추가로 적용하였으며 이전과 동일한 방법으로 실험하였다.

< 실시예 2> SREBPs 유전자 내에 존재하는 SNPs 에 대한 지방산 조성 및 경제형질 능력 검정

표 4 내지 표 5에서는 2개의 후보 SNPs들 중 intron 영역의 g.3270+10274 C>T와 exon13 영역에 있는 g.13544 T>C에 대하여 지방산 조성과 근내지방도와 등지방 두께, 도체중에 대한 각 유전자형별 평균을 구하였고, 각 형질별로 공분산 분석을 실시하였다.

먼저 도체형질을 살펴 볼 때 등지방 두께에선 두 후보 SNPs모두 연관성이 없다. 도체중의 경우 intron 영역의 g.3270+10274 C>T SNP의 TT 유전자형이 431.08kg 으로 가장 높게 유의적인 차이를 볼 수 있었지만, exon13영역에 있는 g.13544 T>C SNP의 TT 유전자형의 경우 도체중이 427.76kg으로 높았으나 유의적인 차이로 인정 되지는 않았다.

등급을 살펴본 결과 두 개의 SNPs 모두 TT 유전자형에서 5.66 및 6.76으로 가장 높은 유의적인 차이를 보여 주었으며, 융점 또한 TT유전자형을 가질 때 25.86℃ 및 20.27℃로 가장 낮은 유의적인 차이를 보여주고 있다 (P<0.001). 이러한 결과는 융점이 낮을수록 등급이 높을수록 쇠고기 맛에 영향을 미친다는 앞선 보고와 일치하는 점을 알 수 있었다.

지방산의 경우 두 개의 SNPs 모두 포화지방산의 종류 중 가장 많은 비중을 차지하고 있는 팔미트산 (C16:0)에서 g.3270+10274 C>T와 g.13544 T>C의 CC 와 CC 유전자형이 26.10%, 25.93%로 가장 높게 나타났고 등급에서 나타난 결과와 정반대의 경향치를 보여주고 있었다.

미리스트산 (C14:0) 및 스테아르산 (C18:0)의 경우 또한 앞서 본 팔미트산 (C16:0) 과 마찬가지로 CC 와 CC 유전자형에서 3.78%, 10.75% 및 3.71%, 10.49%로서 가장 높게 나타난 점을 볼 수 있었으며 포화지방산의 전체 함량과 비교해볼 때 CC 와 CC 유전자형에서 41.51% 및 40.97%로써 앞서 본 미리스트산 (C14:0) 및 스테아르산 (C18:0)과 동일한 경향치를 보여주고 있었다.

반면 불포화 지방산 조성 중 가장 많은 비중을 차지하고 있는 올레인산 (C18:1)함량과 단일불포화지방산 총 함량은 g.3270+10274 C>T의 TT 유전자형과 g.13544 T>C의 TT 유전자형에서 45.12%, 54.35% 및 47.47%, 56.74%로써 가장 높은 함량을 나타내고 유의적으로도 차이가 나타난 점 (P<0.001)을 볼 수 있었다.

또한 오메가3/오메가6의 비율에서 두 개의 SNPs 의 경우도 두 SNPs의 TT 와 TT 유전자형을 가질 때 그 비율이 1:7.89 및 1:5.37로 가장 적정한 비율을 가지는 점을 볼 수 있었다. 따라서 두 개의 후보 SNPs 모두 맛에 영향을 미치는 불포화지방산 및 등급과 밀접한 연관이 있다는 점에서 쇠고기 맛에 관련된 척도로서 활용가능성이 있을 것으로 판단된다.

형질		g.3270+10274 C>T
		CC	CT	TT
		(N=149)	(N=163)	(N=201)
		LSmean±SE	LSmean±SE	LSmean±SE
도체중 (kg)		420.46±3.46^a	428.72±3.38^ab	431.08±3.07^b	*
등지방 두께 (mm)		12.83±0.42	13.15±0.41	13.57±0.34	ns
등급 (1-9)		5.07±0.15^a	5.47±0.15^ab	5.66±0.13^b	*
융점 (℃)		37.77±0.57^C	30.65±0.74^b	25.86±0.76^a	***
지방산 조성 (%)
포화지방산	미리스트산 (C14:0)	3.78±0.05^b	3.69±0.04^b	3.48±0.04^a	***
	팔미트산 (C16:0)	26.10±0.15^b	25.81±0.16^b	25.19±0.13^a	***
	스테아린산 (C18:0)	10.75±0.12^b	10.45±0.11^ab	10.31±0.08^a	**
불포화지방산	미리스틀레인산 (C14:1)	1.20±0.03	1.25±0.02	1.26±0.02	ns
	팔미토레익산 (C16:1)	6.54±0.08	6.62±0.07	6.65±0.06	ns
	올레인산 (C18:1)	43.26±0.18^a	44.24±0.19^b	45.12±0.19^c	***
다가불포화지방산	오메가6 (C18:2n6)	3.19±0.05^b	2.99±0.06^a	2.92±0.05^a	**
	오메가3 (C18:3n3)	0.32±0.01	0.35±0.02	0.37±0.01	ns
	오메가3/오메가6	1 : 9.96	1 : 8.54	1 : 7.89
포화지방산 총 함량		41.51±0.21^c	40.72±0.22^b	39.84±0.19^a	***
단일불포화지방산 총 함량		52.36±0.20^a	53.50±0.22^b	54.35±0.21^c	***

^{a, b, c} 사후분석-다중비교를 통한 유의확률 검정(P<0.05), * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001, ns = 효과없음.

형질		g.13544 T>C
		CC	CT	TT	Total
		(N=331)	(N=157)	(N=25)	(N=513)
		LSmean±SE	LSmean±SE	LSmean±SE	LSmean±SE
도체중 (kg)		424.76±2.37	432.41±3.45	427.76±8.47	427.25±1.91	ns
등지방 두께 (mm)		13.37±0.29	13.09±0.37	12.00±0.99	13.22±0.22	ns
등급 (1-9)		5.33±0.10^a	5.42±0.14^a	6.76±0.32^b	5.43±0.08	**
융점 (℃)		31.02±0.49^b	29.36±0.89^b	20.27±0.93^a	29.81±0.47	***
지방산 조성 (%)
포화지방산	미리스트산 (C14:0)	3.71±0.03^b	3.56±0.05^b	3.15±0.14^a	3.63±0.02	***
	팔미트산 (C16:0)	25.93±0.10^b	25.29±0.15^b	24.23±0.32^a	25.65±0.08	***
	스테아린산 (C18:0)	10.49±0.07	10.42±0.11	10.65±0.29	10.48±0.06	ns
불포화지방산	미리스틀레인산 (C14:1)	1.24±0.02	1.23±0.02	1.37±0.09	1.24±0.01	ns
	팔미토레익산 (C16:1)	6.64±0.05	6.58±0.07	6.35±0.20	6.61±0.04	ns
	올레인산 (C18:1)	43.74±0.13^a	44.96±0.21^b	47.47±0.38^c	44.30±0.11	***
다가불포화지방산	오메가6 (C18:2n6)	3.11±0.04^b	2.90±0.05^ab	2.63±0.16^a	3.02±0.03	***
	오메가3 (C18:3n3)	0.33±0.01^a	0.38±0.01^a	0.49±0.04^b	0.35±0.01	***
	오메가3/ 오메가6	1 : 9.42	1 : 7.63	1 : 5.37	1 : 8.62
포화지방산 총 함량		40.97±0.15^b	40.13±0.22^b	38.63±0.56^a	40.60±0.12	***
단일불포화지방산 총 함량		52.97±0.15^a	54.12±0.23^b	56.74±0.50^c	53.50±0.13	***

< 실시예 3> SREBPs 유전자 SNPs 와 올레인산 및 육질등급 분포

등급에서 유의적인 차이가 나타난 후보 SNPs 중 intron 영역에 있는 g.3270+10274 C>T와 exon13 영역에 있는 g.13544 T>C SNPs를 대상으로 등급분포를 표 6 및 도 2에 제시하였다.

다형성 SNPs의 올레인산 및 등급분포표

SNP	위치	유전자형	올레인산	등급					전체
SNP	위치	유전자형	올레인산	1⁺⁺	1⁺	1	2	1⁺ 이상	전체
g.3270+10274 C>T	intron	CC	43.26±0.18^a	15	59	39	36	74	149
		CC	43.26±0.18^a	10.10%	39.60%	26.20%	24.20%	49.70%	100%
		CT	44.24±0.19^b	27	63	41	32	90	163
		CT	44.24±0.19^b	16.60%	38.70%	25.20%	19.60%	55.30%	100%
		TT	45.12±0.19^c	37	85	52	27	122	201
		TT	45.12±0.19^c	18.40%	42.30%	25.90%	13.40%	60.70%	100%
g.13544 T>C	Exon13	CC	43.74±0.13^a	48	127	86	70	175	331
		CC	43.74±0.13^a	14.50%	38.40%	26.00%	21.10%	52.90%	100%
		CT	44.96±0.21^b	22	68	43	24	90	157
		CT	44.96±0.21^b	14.00%	43.30%	27.40%	15.30%	57.30%	100%
		TT	47.47±0.38^c	9	12	3	1	21	25
		TT	47.47±0.38^c	36.00%	48.00%	12.00%	4.00%	84.00%	100%
전체			44.30±0.11	79	207	132	95	286	513
전체			44.30±0.11	15.40%	40.40%	25.70%	18.50%	55.80%	100%

먼저 등급 분포표에 있어 두 개의 SNPs 모두 TT 유전자형을 가지는 개체가 CC, CT 유전자형을 가지는 개체 보다 1++등급에서 18.40% 및 36.00%로써 상대적으로 많이 출현하였으며, 1+이상 등급에서도 60.70% 및 84.00%로써 다른 유전자형을 가지는 개체보다 상당히 높게 나타난 점을 볼 수 있었다.

특히 표 6의 결과에서 두 SNPs의 TT 유전자형을 가지는 개체가 등급에서 5.62 및 6.76으로 가장 높은 수치를 보여줄 뿐만 아니라 올레인산 (C18:1)과 단일불포화지방산의 총 함량에서 45.12%, 54.35% 및 47.47%, 56.74%로써 가장 높게 형성된 점과 일치하는 결과를 볼 수 있었다.

이러한 결론들을 미루어 볼 때 두 개의 SNPs 모두 맛에 영향을 미치는 불포화지방산뿐만 아니라 한우의 경제형질인 근내지방도와도 깊은 연관성을 볼 수 있었다.

< 실시예 4> SREBPs 유전자 중 선발된 우수 SNP 의 개월별 분석

현재까지 밝혀진 두 개의 후보 SNPs 중 한우 생산비를 절감하기 위한 조기출하를 위하여 앞서 방식과 동일한 분석방법으로 가장 성적이 뛰어난 SNP를 최종적으로 선발한 출하월령과 지방산의 관계를 표 7에 제시하였다.

SREBPs 유전자형 선발된 우수 SNPs의 고급육 (1⁺등급 이상) 출하월령별 올레인산 변화 비교

유전자형	SREBPs g.13544 T>C SNP
	1⁺등급 이상
	27~28 개월	29~30 개월	31~32 개월	33개월 이상	합계
CC	43.88(17)	44.12(54)	44.33(51)	44.48(52)	44.20 (174)
CT	44.67(10)	44.79(29)	46.09(29)	46.94(22)	45.62 (90)
TT	47.60(2)	47.00(5)	46.58(7)	47.91(8)	47.27 (22)
전체	44.41(29)	44.51(88)	45.10(87)	45.48(82)	44.88 (286)

특히 27~28개월에 47.60%를 나타내는 TT 유전자형을 선발한다면 29~32개월의 모든 유전자형뿐만 아니라 33개월 이상의 CC, CT를 선발하는 것보다 우수한 육질과 고기 맛을 가진 개체를 조기에 선발할 수 있다.

또한 27~28개월일 때 TT 유전자형은 29개월 이상 모든 유전자형의 평균보다도 높은 수치를 나타나는 점을 미루어 볼 때 g.13544 T>C SNP를 사용하여 개체를 조기에 선발한다면 3~4개월 정도의 비육단축을 이룰 뿐만 아니라 맛이나 등급에 있어 차별성을 유지할 수 있을 것이다.

한편, 본 발명의 intron 영역에 있는 g.3270+10274 C>T와 exon13 영역에 있는 g.13544 T>C SNPs 2개의 후보 SNPs를 분석하는데 사용한 프라이머는 표 8에 나타냈다.

SNP	유전자	염색체	염기서열		합성 온도	프라이머 크기
g.3270+10274 C>T	NC_007317.4	19	F	GCACTGGGTTTTGTCGTTTT(서열번호 3)	60	150
			R	GGGTTTCTGGCCATAGTTGA(서열번호 4)
			E	CTCAGAGATGCAAATTAAAG(서열번호 5)
g.13544 T>C	NC_007317.4	19	F	TAGGTGCATTTCGGTTCCTC(서열번호 6)	60	342
			R	CAGAAACTCAGCCACACTGC(서열번호 7)
			E	TTCGGACGTGGCCGGAGCTC(서열번호 8)

F: 포워드(forward) 서열, R: 리버스(reverse) 서열, E: 신장(extension) 서열

<110> Industry-Academic Cooperation Foundation, Yeungnam University <120> Single nucleotide polymorphism marker in SREBP1 gene for diagnosis of meat quality in Hanwoo and method for diagnosis of meat quality in Hanwoo using same marker <130> ADP-2013-0329 <160> 8 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 480 <212> DNA <213> Hanwoo <400> 1 cctcagaaat gccacggtta tctcctcact ggtatacaga ttgggggcgg acatgcccac 60 tacccccacc tgcccagctg aggtgtgggg agcagcagga aggccaggcc cagtggggat 120 tgcctcccag gccaagaaca tgttgcagta aatccatctc tagctggcag aggagggccc 180 aagcccagca tgtgtttctg ggtttctggc catagttgat tgtttgctgc acaaccgcct 240 cggggcagcc tcagagatgc aaattaaagy accttcaagg ttccagtcac acagttgtga 300 ggactaagga aagcacccca aagtaggtaa aaacgataaa acccagtgct ggtgatgctc 360 tgattaaaca ggacacattg caagggagag tgtaaggagg tttattgttc cagagagcag 420 cctggcagct cggaagcagt gtgctgcctt tgaaccaaca cacacacttc agagggggca 480 480 <210> 2 <211> 600 <212> DNA <213> Hanwoo <400> 2 ccagcccagc cccagtcctg gatcagccga gggggacaag tgagtgtctc tgtgcacctc 60 agcaggccag agccccctgt tcagtggagc ctgtgggtgg ccagagctgg gccactgtgg 120 ccttaggtgc atttcggttc ctctctgggc ctcagtttcc caccggccca gcacgagggg 180 atggaggctc ttggaggagc caggaggcca ggctgtgctg tgtgcagagg tgaggacccc 240 tgccagccat cctgaccgcc cgtcctctcc tgccacaggg agttctcaga tgccctgggg 300 tacctgcagc tgctgaacag ctgttcggac gtggccggag ctcytacctg cagcttctcc 360 atcagctcca gcatggctgc cacccccggt gagcccccca cctgtgacgc cctcagcccc 420 agcgccaagc agctcagctt cgggtgcagt gtggctgagt ttctgcctcc tgtgccccct 480 ttgcaggcac agacccggtg gccaagtggt gggcctctct gacagctgtg gtgacccact 540 ggcttcggcg ggatgaggag gcagccgaga ggctgtaccc attggtggag cacctgcccc 600 600 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 3 gcactgggtt ttgtcgtttt 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 4 gggtttctgg ccatagttga 20 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 5 ctcagagatg caaattaaag 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 6 taggtgcatt tcggttcctc 20 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 7 cagaaactca gccacactgc 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 8 ttcggacgtg gccggagctc 20

Claims

서열번호 1의 270번째 뉴클레오티드 및 서열번호 2의 344번째 뉴클레오티드를 포함하는 10-100개의 연속적인 DNA 서열로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드로 이루어진 한우 육질 진단용 단일염기다형성(SNP) 마커 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 서열번호 1의 270번째 뉴클레오티드의 유전자형은 TT 및 상기 서열번호 2의 344번째 뉴클레오티드의 유전자형은 TT인 것을 특징으로 하는 한우 육질 진단용 단일염기다형성(SNP) 마커 조성물.
삭제
제 1 항에 있어서, 상기 한우 육질 진단은 올레인산 및 단일불포화지방산의 함량을 진단하는 것을 특징으로 하는 한우 육질 진단용 단일염기다형성(SNP) 마커 조성물.
(1) 개체로부터 DNA 샘플을 수득하는 단계;
(2) 상기 (1)단계로부터 수득한 DNA을 주형으로 하여, 청구항 1의 SNP 마커를 증폭시킬 수 있는 프라이머를 이용하여 PCR을 수행하는 단계;
(3) 상기 PCR 산물로부터 서열번호 1의 270번째 뉴클레오티드 및 서열번호 2의 344번째 뉴클레오티드의 유전자형을 확인하는 단계; 및
(4) 상기 유전자형으로 올레인산 및 단일불포화지방산의 함량을 진단하는 단계를 포함하는 한우 육질의 진단방법.
제 5 항에 있어서, 상기 한우 육질의 진단은 서열번호 1의 270번째 뉴클레오티드의 유전자형이 TT 및 서열번호 2의 270번째 뉴클레오티드의 유전자형이 TT일 경우, 고급육으로 진단하는 것을 특징으로 하는 한우 육질의 진단방법.
삭제
서열번호 1의 270번째 뉴클레오티드 및 서열번호 2의 344번째 뉴클레오티드를 포함하는 10-100개의 연속적인 DNA 서열로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드를 증폭시킬 수 있는 서열번호 3 내지 서열번호 5로 이루어진 프라이머 세트 및 서열번호 6 내지 서열번호 8로 이루어진 프라이머 세트를 포함하는 한우 육질 진단용 키트.
삭제