KR101519852B1 - 백하수오, 건지황, 원지 및 석창포의 혼합추출물을 포함하는 기억 또는 인지 장애 질환의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents
백하수오, 건지황, 원지 및 석창포의 혼합추출물을 포함하는 기억 또는 인지 장애 질환의 예방 또는 치료용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 백하수오, 건지황, 원지 및 석창포를 포함하는 기억 또는 인지 장애 질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 백하수오, 건지황, 원지 및 석창포를 포함하는 조성물은 높은 해마신경세포 손상 보호 및 뇌경색 완화 효과를 나타내며, 동물 실험에서 기억력 및 인지기능을 현저하게 개선하였는바, 기억 또는 인지 장애 질환의 예방 및 치료에 유용하게 이용될 수 있다.
Description
본 발명은 백하수오, 건지황, 원지 및 석창포의 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 기억 또는 인지 장애 질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
뇌가 가지는 기능은 여러 가지가 있지만, 가장 중요한 것은 기억 및 인지일 것이다. 인간에게 인지 능력 및 기억 능력이 없는 경우, 일상 생활을 수행하기 힘들고 생존에도 문제가 된다. 기억 및 인지는 뇌의 거의 모든 기능과 연관을 맺으며 기억 및 인지에 관련된 뇌 구조물은 다양하고 거의 모든뇌 부분들과 밀접하게 연결되어 있다.
기억의 단계는 몇가지로 분류되는데 정보를 등록하고 부호화하는 과정, 저장하는 과정, 기억의 장소로 접근하여 인출하는 과정으로 나뉜다.
부호화는 감각기관을 통해 뇌로 들어온 정보가 학습되면서 기억되는 처음 과정을 말하는 것이다. 부호화를 통하여 정보가 일단 저장되지만 저장된 정보가 계속적으로 유지되고 더욱 확고한 기억으로 저장이 되기 위해서는 부호화 후의 과정을 밟아야 하는데 이 과정을 응고화라고 한다. 기억의 응고화가 잘 되지 않으면 기억의 망각이 빠르게 일어나며 기억의 유지가 힘들게 된다. 인출은 장기기억으로 저장된 내용을 의식적으로 불러내는 과정을 말한다. 인출의 방법에는 회상과 재인이 있다. 회상은 기억의 내용을 의식적으로 불러내는 것이고, 재인은 힌트를 부여하면서 불러내는 것이다. 대부분의 경우 회상이 재인보다 어렵다. 그러나 전두엽 손상 환자나 피질하혈관성치매 같이 회상은 힘들어해도 재인은 잘하는 경우가 있는데 이 경우 기억의 부호화와 저장은 잘 되지만 인출의 장애가 있음을 의미한다. 기억 저장의 장애가 있는 경우에는 회상과 재인에서 동시에 장애를 보인다.
또한, 단기기억은 작업기억이라고도 하는데, 정보를 단기간 저장한 후 이를 이용하여 다음 일을 수행할 수 있는 과정을 말한다. 뇌로 들어온 정보가 장기 기억으로 굳어지기 전 일시적으로 머무는 것이다. 작업 기억의 특징은 특정 일을 수행하고 나면 보통 작업기억이 지워져 버린다는 것이다.
장기 기억은 새로운 것을 배우고 일정 시간이 지난 후 다시 기억할 수 있는 것을 말한다. 우리가 일상 생활에서 경험했던 일이나 학습하였던 내용들이 시간이 지난 후 다시 기억으로 되살아나는 것은 대부분 장기기억에 해당한다.
기억과 인지의 장애는 일상 생활이 불가능하게 되는 매우 심각한 질환에 해당하며, 노화, 알쯔하이머병, 정신분열증, 파킨슨병, 헌팅톤병, 피크병, 크로이츠펠트-야콥병, 우울증, 노화, 두부 외상, 뇌졸중, CNS 저산소증, 뇌 허혈증, 뇌염, 건망증, 외상성 뇌손상, 저혈당증, 베르니케 코르사코프 신드롬, 약물중독, 뇌전증, 간질, 해마경화증, 두통, 뇌 노쇠증, 치매, 전측두엽 변성, 종양, 정상뇌압수두증, HIV, 뇌혈관성질환, 뇌신경질환, 심혈관계 질환, 기억상실, 방사능 노출, 대사성 질환, 갑상선 기능 저하증, 경도인지 장애, 인지 결핍 또는 주의력 결핍 등 매우 다양한 원인 및 메커니즘에 의하여 발병되는 질환이다. 이러한 기억 및 인지 장애를 해결하기 위하여 종래 기술은 다양한 노력을 해왔으나, 현재까지 다양한 뇌신경계 질환을 상대로 뛰어난 신경보호 효능과 뇌기능 향상 효과를 갖는 물질은 물론이고, 정확한 서열을 갖는 합성 펩타이드에 대한 효능 보고 및 적용에 대해서도 전무한 실정이다.
이에, 본 발명자는 기억 및 인지 장애의 치료 약물을 개발하기 위하여 예의 노력한 결과, 백하수오, 건지황, 원지 및 석창포의 혼합추출물을 포함하는 조성물이 기억력 감소를 억제하고 기억력을 증진시키는 것을 동물실험 및 임상실험을 통하여 확인함으로써 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=228350&cid=42313&categoryId=42313
http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1766755&cid=49367&categoryId=49367
http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1131355&cid=40942&categoryId=32699
http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1111666&cid=40942&categoryId=32736
http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1944461&cid=41989&categoryId=41989
ALZHEIMER'S DESEASE AND OXIDATIVE STRESS: IMPLICATIONS FOR NOVEL THERAPEUTIC APPROACHES, Neurobiology vol.57. pp 301-323, 1999.
본 발명의 목적은 백하수오, 건지황, 원지 및 석창포의 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 기억 또는 인지 장애 질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 목적은 상기 조성물의 제조방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 백하수오, 건지황, 원지 및 석창포의 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 기억 또는 인지 장애 질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 조성물의 제조방법을 제공한다.
본 발명에 따른 백하수오, 건지황, 원지 및 석창포의 혼합추출물을 포함하는 조성물은 높은 해마신경세포 손상 보호 및 뇌경색 완화 효과를 나타내며, 동물 실험에서 기억력 및 인지기능을 현저하게 개선하였는바, 기억 또는 인지 장애 질환의 예방 및 치료에 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 혼합 추출물의 제조과정을 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명의 혼합 추출물 투여에 따른 마우스의 몸무게 변화를 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명의 혼합 추출물을 투여에 따른 해마신경세포의 세포 생존율 및 젖산탈수소효소 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명의 혼합 추출물을 투여한 광유도혈전증 마우스 모델의 뇌경색 부위 및 부종 크기 변화를 나타낸 도이다.
도 5는 본 발명의 혼합 추출물을 투여한 허혈성 뇌손상 마우스 모델의 수중미로분석 결과를 나타낸 도이다.
도 6은 본 발명의 혼합 추출물을 투여한 허혈성 뇌손상 마우스 모델의 수동회피 반응검사 결과를 나타낸 도이다.
도 7은 본 발명의 혼합 추출물을 투여한 β-amyloid 치매 마우스 모델의 수중미로분석 결과를 나타낸 도이다.
도 8은 본 발명의 혼합 추출물을 투여한 β-amyloid 치매 마우스 모델의 A β발현을 측정한 결과를 나타낸 도이다.
도 9는 본 발명의 혼합 추출물을 투여한 β-amyloid 치매 마우스 모델의 Iba-1 발현을 측정한 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명의 혼합 추출물 투여에 따른 마우스의 몸무게 변화를 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명의 혼합 추출물을 투여에 따른 해마신경세포의 세포 생존율 및 젖산탈수소효소 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명의 혼합 추출물을 투여한 광유도혈전증 마우스 모델의 뇌경색 부위 및 부종 크기 변화를 나타낸 도이다.
도 5는 본 발명의 혼합 추출물을 투여한 허혈성 뇌손상 마우스 모델의 수중미로분석 결과를 나타낸 도이다.
도 6은 본 발명의 혼합 추출물을 투여한 허혈성 뇌손상 마우스 모델의 수동회피 반응검사 결과를 나타낸 도이다.
도 7은 본 발명의 혼합 추출물을 투여한 β-amyloid 치매 마우스 모델의 수중미로분석 결과를 나타낸 도이다.
도 8은 본 발명의 혼합 추출물을 투여한 β-amyloid 치매 마우스 모델의 A β발현을 측정한 결과를 나타낸 도이다.
도 9는 본 발명의 혼합 추출물을 투여한 β-amyloid 치매 마우스 모델의 Iba-1 발현을 측정한 결과를 나타낸 도이다.
본 발명은 백하수오, 건지황, 원지 및 석창포의 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 기억 또는 인지 장애 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명의 백하수오(Cynanchum wilfordii)는 백색의 하수오로서, 박주가리과(Asclepiadaceae)의 여러해살이 덩굴풀이다.
본 발명의 건지황(Rehmannia glutinosa)은 현삼과에 속하는 다년생 초본인 지황의 뿌리를 날로 말린 것이다.
본 발명의 원지(Polygala tenuifolia)는 원지과에 속하는 다년생 초본식물로서, 동의보감에는 아기풀불휘로 기록되어 있다.
본 발명의 석창포(Acorus gramineus)는 천남성과의 다년생 초본 식물로서, 백창, 창포, 석상초 또는 경포라고도 한다.
본 발명에 따른 백하수오, 건지황, 원지 및 석창포의 혼합추출물은 높은 기억력 및 인지기능의 개선 효과가 있으며, 학습 수행시 유의한 증진 효과를 나타내는 바, 기억 또는 인지 장애 질환의 예방 및 치료에 유용하게 이용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 백하수오, 건지황, 원지 및 석창포를 혼합 추출물 총 중량에 대하여 각각 45~55 중량%, 15~25 중량%, 10~20 중량% 및 10~20 중량%로 포함할 수 있으며, 바람직하게는 백하수오 51 중량%, 건지황 19 중량%, 원지 15 중량% 및 석창포 15 중량%로 포함된다.
본 발명의 상기 백하수오, 건지황, 원지 및 석창포의 혼합 추출물은 백하수오, 건지황, 원지 및 석창포를 배합한 후 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이의 혼합용액으로부터 선택된 용매로 추출될 수 있으며, 바람직하게는 열수 추출일 수 있다.
본 발명에 사용되기 위하여, 상기 추출물을 농축 및 건조하여 사용할 수 있으며, 상기 농축은 진공 농축일 수 있으며, 바람직하게는 60~80℃에서 brix 20%이상으로 수행될 수 있다.
상기 건조는 바람직하게는 투입온도 170~190℃, 배출온도 95~115℃ 조건의 분무 건조기에서 수행될 수 있다.
상기 기억장애는 새롭게 알게 된 사실을 기억하지 못하거나, 사물이나 사람의 이름을 기억할 수 없거나, 과거의 경험을 생각해내는 일이 어렵거나 불가능한 상태를 말한다. 또한, 상기 인지 장애는 지식을 획득하고 사용하는 방식에 관한 인지능력에 이상이 발생한 것으로, 인지능력에는 지식, 이해력, 사고력, 문제해결력, 비판력 및 창의력과 같은 정신능력이 포함된다. 또한, 상기 학습장애는 듣기, 말하기, 주의 집중, 지각(知覺), 기억, 문제 해결 등의 학습 기능이나 읽기, 쓰기, 수학 등 학업 성취 영역에서 현저하게 어려움을 나타내는 장애를 말한다. 이러한, 기억장애 또는 인지 장애는 다양한 원인 및 환경에 의할 수 있으며, 그 원인을 제한하지 않는다. 예를 들면, 노화, 알쯔하이머병, 정신분열증, 파킨슨병, 헌팅톤병, 피크병, 크로이츠펠트-야콥병, 우울증, 두부 외상, 뇌졸증, CNS 저산소증, 뇌 허혈증, 뇌염, 건망증, 외상성 뇌손상, 베르니케 코르사코프 신드롬, 약물중독, 뇌전증, 간질, 해마경화증, 두통, 뇌 노쇠증, 치매, 전측두엽 변성, 종양, 정상뇌압수두증, 뇌혈관성질환, 뇌신경질환, 심혈관계 질환, 기억상실, 갑상선 기능 저하증, 경도인지 장애, 인지 결핍 및 주의력 결핍에 의한 기억 장애 또는 인지 장애일 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 백하수오, 건지황, 원지 및 석창포의 혼합추출물과 함께 기억 또는 인지 장애 질환의 예방 또는 치료 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 더 함유할 수 있다
상기 조성물은 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 조성물에 포함되는 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 및 희석제는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로오스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로오스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물을 경구 투여용 고상 제제로 제형화할 경우, 경구 투여를 위한 고상 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되는데, 이러한 고상 제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카르보네이트, 수크로오스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 혼합하여 제형화된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물을 경구 투여용 액상 제제로 제형화할 수도 있다. 경구 투여를 위한 액상 제제는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 이러한 액상 제제에는 통상적으로 사용되는 불활성 희석제 (예를 들면, 정제수, GaIN/LPS, 리퀴드 파라핀) 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 비경구, 바람직하게는 복강내 투여를 위한 제제로 제형화될 수도 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 멸균된 수용액으로는 한스 용액 (Hank's solution), 링거 용액 (Ringer's solution) 또는 물리적으로 완충된 염수와 같은 적절한 완충용액을 이용할 수 있으며, 비수성용제로, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 이용될 수 있다. 필요에 따라 방부제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제를 이용할 수도 있다. 한편, 좌제의 경우에는 이의 통상적인 기제인 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다. 상기와 같은 방법으로 제형화된 조성물은 유효량으로 비경구 또는 경구 (경피, 피하, 정맥, 근육, 복강등)를 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있다. 상기에서 "유효량"이란 환자에게 투여하였을 때, 예방 또는 치료 효과를 나타내는 양을 말한다. 본 발명에 따른 조성물의 투여량은 투여 경로, 투여 대상, 연령, 성별, 체중, 개인차 및 질병 상태에 따라 적절히 선택될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 조성물은 질환의 정도에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있으나, 바람직하게는 0.1~10000 mg/체중kg/day, 보다 바람직하게는 10~1000mg/체중kg/day의 유효량으로 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 기억 또는 인지 장애 질환의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 백하수오, 건지황, 원지 및 석창포의 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는, 기억 또는 인지 기능의 증진을 위한 식품 조성물을 제공한다.
상기 기억 또는 인지 기능은 학습능력, 기억 능력 또는 집중력일 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 백하수오, 건지황, 원지 및 석창포의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 5 g, 바람직하게는 0.3 내지 1g의 비율로 가할 수 있으나, 이는 당업자에 의해 제품에 맞게 용이하게 결정될 수 있다.
상기 식품 조성물은 상기 백하수오, 건지황, 원지 및 석창포의 혼합추출물 이외에도 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 더 포함할 수 있으며, 정제, 캡슐제, 환제, 액제등의 형태로 제조될 수 있다.
본 발명의 식품조성물은 필수 성분으로서 상기 백하수오, 건지황, 원지 및 석창포의 혼합추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제 (타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.
본 발명의 식품 조성물은 상기 성분 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 본 발명의 화합물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예 및 제조예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예 및 제조예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예 및 제조예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 혼합 추출물의 제조
백하수오, 건지황, 원지 및 석창포의 혼합 추출물의 제조과정을 도 1에 나타내었다.
도 1에 나타낸 바와 같이, 입고검사에서 합격된 원료들을 백하수오 51 중량%, 건지황 19 중량%, 원지 15 중량% 및 석창포 15 중량%의 비율로 정량 후 고압살수 세척하였다. 원료 중량의 9배의 정제수를 첨가하여 배합한 후 115~125℃에서 4시간이상 열수 추출하고 65~75℃에서 brix 20% 이상으로 저온 진공 농축하였다. 농축이 끝난 농축액은 투입온도 175~185℃, 배출온도 100~105℃의 분무건조기에서 건조한 후 건조물을 분쇄하여 분말을 제조하였다.
실험예 1. 혼합 추출물이 실험동물의 몸무게에 미치는 효과 확인
실험동물로 6주령의 C57BL/6 마우스를 사용하였다. 상기 마우스에 100 mg/kg 및 상기 실시예 1에서 제조한 혼합 추출물(CWCWSD2) 500 mg/kg을 4주간 경구투여 하였으며, 투여 기간동안 몸무게를 측정하여 그 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2에 나타낸 바와 같이, 실험군의 몸무게는 대조군과 비교하여 유의적 차이를 보이지 않았다. 이는 높은 농도의 추출물을 사용하였음에도 마우스에 유해성을 나타내지 않음을 알 수 있다.
실험예 2. 혼합 추출물이 해마신경세포의 생존과 증식에 미치는 효과 확인
상기 실시예 1에서 제조한 혼합 추출물이 해마신경세포에 미치는 영향을 확인하기 위하여 해마세포 HT22세포에 상기 실시예 1에서 제조한 혼합 추출물을 0.01, 0.1, 1, 10ug/ml의 농도별로 처리한 후 글루타메이트(glutamate)에 의해 유도된 세포독성에 대한 보호효과를 세포생존율(MTT) 및 젖산탈수소효소(lactate dehydrogenase, LDH)분석으로 확인하였으며, 그 결과를 도 3에 나타내었다.
도 3에 나타낸 바와 같이, 글루타메이트를 처리함으로써 세포생존율이 대조군에 비해 40% 정도 감소하였으나 글루타메이트를 처리하기 24시간 전 상기 혼합 추출물을 농도별로 처리한 결과, 농도 0.1 ug/ml 이상의 농도에서 글루타메이트로 인해 감소하였던 세포생존율이 증가함을 확인하였다. 또한 세포독성을 측정하기 위해 실시한 LDH의 결과도 동일하게 나타났다. 이는 혼합 추출물이 글루타메이트에 의한 해마신경세포의 손상에 대한 보호효과가 있음을 나타낸다.
실험예 3. 혼합 추출물의 광유도혈전증(photothrombosis)에 의한 뇌경색 완화 효과 확인
뇌경색과 같은 혈관성 중추신경계 질환은 기억력과 인지능력과 매우 밀접한 연관성을 가지고 있으며 이는 보다 심각한 치매 등으로 발전할 가능성이 매우 높으므로 혼합 추출물이 광유도혈전증에 의한 뇌경색에 미치는 영향을 확인하였다. 이를 위해, 광유도혈전증 마우스모델에 상기 실시예 1에서 제조한 혼합 추출물 500 mg/kg을 매일 1번씩 3일간 경구 투여하였으며, 그 결과를 도 4에 나타내었다.
도 4에 나타낸 바와 같이, 혼합 추출물 투여군에서 대조군에 비해 뇌경색 부위 및 부종크기가 현저히 감소함을 확인하였다. 이는 혼합 추출물이 뇌경색에 의한 뇌 손상에 대한 보호효과가 있음을 나타낸다.
실험예 4. 허헐성 뇌손상 모델에서 혼합 추출물의 기억력 및 인지기능 개선 효과 확인
4-1. 허혈성 뇌손상 마우스모델(MCAO)
상기 실시예 1에서 제조한 혼합 추출물이 허혈성 뇌손상에 의한 기억력 및 인지능력에 미치는 영향을 확인하기 위해, C57BL/6J 마우스를 이용한 허혈성 뇌손상 마우스모델(MCAO)을 제조하였다. 수술 전 상기 실시예 1에서 제조한 혼합 추출물을 100 또는 500mg/kg씩 매일 1번, 2주간 경구 투여하였고, 수술 이후에는 매일 1번, 3주간 동일한 방법으로 경구 투여하였다. 대조군의 경우 동일한 방법으로 생리식염수(vehicle)를 투여하였다.
4-2. 허헐성 뇌손상 모델의 공간 기억력 및 학습능력 측정
수중미로분석법(Morris water maze analysis)은 공간 기억력(spatial memory)과 학습능력을 확인할 수 있는 행동양식 검사로서, 생쥐의 해마가 정상적인 경우 학습에 따라 개체는 숨겨진 프랫폼(platform)을 쉽게 찾아가는 반면, 인지가 손상된 개체의 경우 목표를 찾지 못하고 방황하게 된다.
상기 실험예 4-1에서 제조된 허혈성 뇌손상 모델을 이용하여 4일 동안 수중미로분석을 수행하였으며, 그 결과를 도 5에 나타내었다.
도 5에 나타낸 바와 같이, 혼합 추출물을 투여한 경우 대조군(Vehicle)이 목표지점을 찾는 시간에 비해 더욱 빠른 속도로 목표지점을 찾는 것을 확인하였다. 또한 혼합 추출물의 경구 투여 후 1일째보다 3-4일째(24~25일 후)에 목표지점을 찾는 수준이 정상군(Control)과 비슷해지는 것을 확인하였다. 이는 혼합 추출물이 공간 기억력과 학습능력 개선에 효과가 있음을 나타낸다.
4-2. 허헐성 뇌손상 모델의 단기 학습 및 기억 손상의 회복 측정
수동회피반응검사법(Passive avoidance test)은 해마에 의존적인 단기학습과 기억(short term learning & memory)을 확인 해 볼 수 있는 검사로서, 밝은 방에서 어두운 방으로 넘어가는 시간을 측정하여 기억 유지 시간을 확인할 수 있으며, 인지기능이 손상된 경우 잠재시간이 현저하게 감소하게 된다.
상기 실험예 4-1에서 제조된 허혈성 뇌손상 모델을 이용하여 4일 동안 수동회피반응검사를 수행하였으며, 그 결과를 도 6에 나타내었다.
도 6에 나타낸 바와 같이, 허혈성 뇌손상 모델의 경우 어두운 방으로 가는데 걸리는 시간이 정상군(Control)에 비하여 통계적으로 유의하게 감소되었으며, 반면 혼합 추출물을 투여한 그룹(100, 500 mg/kg CWCWSD2)의 경우에는 현저히 증가됨을 확인하였다. 이는 혼합 추출물이 단기학습과 기억 손상의 회복에 효과가 있음을 나타낸다.
실험예 5. β-amyloid 치매모델에서 혼합 추출물의 기억력 및 인지기능 개선 효과 확인
5-1. β-amyloid 치매모델
인지기능이 저하된 β-amyloid 치매모델을 제조하기 위하여, C57BL/6J 마우스에 Aβ25-35 단편을 뇌실내로 주입(intracerebroventricular injection, icv)하였다. 상기 마우스는 4주후 뇌에 Aβ 펩타이드가 축적되면서 인지기능 저하 증상을 나타내었다. 각 마우스에 상기 실시예 1에서 제조한 조성물을 100 또는 500mg/kg씩 매일 1번, 오전 10시경에 4주간 경구 투여하였다. 대조군의 경우 동일한 방법으로 생리식염수(vehicle)를 투여하였다.
5-2. β-amyloid 치매모델의 공간 기억력 및 학습능력 측정
상기 실험예 5-1에서 제조된 β-amyloid 치매모델을 이용하여 수중미로분석을 수행하였으며, 그 결과를 도 7에 나타내었다.
도 7에 나타낸 바와 같이, 혼합 추출물을 투여한 경우 대조군(Vehicle)이 목표지점을 찾는 시간에 비해 더욱 빠른 속도로 목표지점을 찾는 것을 확인하였다. 또한 혼합 추출물의 경구 투여 후 1일째보다 3-4일째 목표지점을 찾는 수준이 정상군(Control)과 비슷해지는 것을 확인하였다. 이는 혼합 추출물이 공간 기억력과 학습능력 개선에 효과가 있음을 나타낸다.
5-2. β-amyloid 치매모델의 알츠하이머 병리적 표지에 미치는 효과 확인
상기 실험예 5-1에서 제조된 β-amyloid 치매모델의 뇌를 적출하여 알츠하이머 병리적 표지(pathological marker)를 염색하여 Aβ 발현을 측정하였으며, 그 결과를 도 8에 나타내었다.
도 8에 나타낸 바와 같이, β-amyloid 치매모델의 경우 Aβ 발현이 유의하게 증가하였고, 혼합 추출물의 투여에 의해 감소함을 확인하였다.
5-3. β-amyloid 치매모델의 신경교세포에 미치는 효과 확인
상기 실험예 5-1에서 제조된 β-amyloid 치매모델의 뇌를 적출한 후, 혼합 추출물이 뇌의 면역 및 염증세포인 미세신경교세포(microglia)에 미치는 효과를 확인하기 위하여, Iba-1 발현(microglia activation)을 측정하였으며, 그 결과를 도 9에 나타내었다.
도 9에 나타낸 바와 같이, β-amyloid 치매모델의 경우 Iba-1 발현이 유의하게 증가하였고, 혼합 추출물의 투여에 의해 이의 발현이 감소함을 확인하였다.
이하 본 발명의 조성물의 제제예를 설명하나, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예 1. 약학적 제제
1-1. 산제의 제조
본 발명의 혼합추출물 20mg
유당 100 mg
탈크 10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
1-2. 정제의 제조
본 발명의 혼합추출물 10 mg
옥수수전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
1-3. 캡슐제의 제조
본 발명의 혼합추출물 10 mg
결정성 셀룰로오스 3 mg
락토오스 14.8 mg
마그네슘 스테아레이트 0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
1-4. 주사제의 제조
본 발명의 혼합추출물 10 mg
만니톨 180 mg
주사용 멸균 증류수 2974 mg
Na2HPO4·2H2O 26 mg
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당 (2 ml) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
1-5. 액제의 제조
본 발명의 혼합추출물 20 mg
이성화당 10 g
만니톨 5 g
정제수 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ml로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.
제제예 2. 식품 제제
2-1. 건강식품의 제조
본 발명의 혼합추출물 100 mg
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 μg
비타민 E 1.0 mg
비타민 B1 0.13 mg
비타민 B2 0.15 mg
비타민 B6 0.5 mg
비타민 B12 0.2 μg
비타민 C 10 mg
비오틴 10 μg
니코틴산아미드 1.7 mg
엽산 50 μg
판토텐산 칼슘 0.5 mg
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 mg
산화아연 0.82 mg
탄산마그네슘 25.3 mg
제1인산칼륨 15 mg
제2인산칼슘 55 mg
구연산칼륨 90 mg
탄산칼슘 100 mg
염화마그네슘 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
2-2. 건강음료의 제조
본 발명의 혼합추출물 100 mg
비타민 C 15 g
비타민 E(분말) 100 g
젖산철 19.75 g
산화아연 3.5 g
니코틴산아미드 3.5 g
비타민 A 0.2 g
비타민 B1 0.25 g
비타민 B2 0.3 g
물 정량
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 l 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
Claims (7)
- 백하수오, 건지황, 원지 및 석창포를 각각 45~55 중량%, 15~25 중량%, 10~20 중량% 및 10~20 중량%로 혼합한 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는, 기억 또는 인지 능력 증진용 약학적 조성물.
- 삭제
- 제1항에 있어서, 상기 백하수오, 건지황, 원지 및 석창포의 혼합 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이의 혼합용액으로부터 선택된 용매로 추출되는 것을 특징으로 하는, 기억 또는 인지 능력 증진용 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 백하수오, 건지황, 원지 및 석창포의 혼합 추출물은 열수 추출되는 것을 특징으로 하는, 기억 또는 인지 능력 증진용 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 노화, 알쯔하이머병, 정신분열증, 파킨슨병, 헌팅톤병, 피크병, 크로이츠펠트-야콥병, 우울증, 두부 외상, 뇌졸증, CNS 저산소증, 뇌 허혈증, 뇌염, 건망증, 외상성 뇌손상, 베르니케 코르사코프 신드롬, 해마경화증, 두통, 뇌 노쇠증, 치매, 전측두엽 변성, 정상뇌압수두증, 뇌혈관성질환, 뇌신경질환, 기억상실, 경도인지 장애, 인지 결핍 및 주의력 결핍으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 질환에 의한 기억 또는 인지 능력 장애를 증진시키는 것을 특징으로 하는, 기억 또는 인지 능력 증진용 약학적 조성물.
- 백하수오, 건지황, 원지 및 석창포를 각각 45~55 중량%, 15~25 중량%, 10~20 중량% 및 10~20 중량%로 혼합한 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는, 기억 또는 인지 기능의 증진을 위한 식품 조성물.
- 삭제
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