KR101515211B1

KR101515211B1 - 간 섬유화 진단용 바이오마커 HtrA2

Info

Publication number: KR101515211B1
Application number: KR1020130084386A
Authority: KR
Inventors: 윤승규; 허원희; 홍성우; 임향숙; 남민경; 이준호
Original assignee: 가톨릭대학교 산학협력단
Priority date: 2013-07-17
Filing date: 2013-07-17
Publication date: 2015-04-27
Also published as: KR20150010049A

Abstract

본 발명은 HtrA2(high temperature requirement A2) 단백질의 발현수준을 측정하는 제제를 포함하는 간 섬유화 또는 간경변 진단용 조성물, 진단용 키트 및 검체 시료로부터 HtrA2 단백질을 검출하는 방법에 관한 것이다. 또한, HtrA2 단백질의 발현수준의 변화를 측정하는 단계를 포함하는 간섬유증 치료제의 스크리닝 방법에 관한 것이다.

Description

간 섬유화 진단용 바이오마커 HtrA2 {Biomarkers HtrA2 for diagnosing hepatic fibrosis}

본 발명은 HtrA2 (high temperature requirement A2) 단백질의 발현수준을 측정하는 제제를 포함하는 간 섬유화 또는 간경변 진단용 조성물, 진단용 키트 및 검체 시료로부터 HtrA2 단백질을 검출하는 방법에 관한 것이다. 또한, HtrA2 단백질의 발현수준의 변화를 측정하는 단계를 포함하는 간섬유증 치료제의 스크리닝 방법에 관한 것이다.

섬유화(fibrosis)란 인체 내에서 조직이 여러 가지 스트레스 (감염, 화학적 자극, 방사선 등)에 의한 손상을 받은 후 창상치유(wound healing) 과정 중에 정상적인 통제가 불가능한 상태로, 특히 만성 질환에 공통적으로 거치게 되는 경로로서 그 기전이 매우 복잡하여 현재까지도 완전히 규명되고 있지 않다.

특히 간 섬유화의 경우 자가 면역, B형 간염 바이러스, C형 간염바이러스, 기생충, 약물, 알코올, 고지방 식이 같은 비-알콜성 인자, 대사성 질환 등 다양한 원인에 의해서 간에 손상이나 스트레스를 받게 되어 발병이 된다고 알려져 있으며, 만성간염이 지속되면 간 섬유화로 진행될 수 있다.

간이 알코올, 바이러스 등의 여러 유해환경인자에 의해 자극을 받으면 쿠퍼세포(Kupffer cell)로부터 분비된 TGF-β(transforming growth factor β)를 포함한 여러 사이토카인에 의하여 간성상세포가 활성화된다. 분비된 TGF-β는 콜라겐 합성을 촉진시켜 세포외기질에 축적시키고, 지속적으로 축적된 콜라겐에 의하여 간 섬유화를 일으킬 뿐만 아니라, 간성상세포 자신 뿐만 아니라 주변의 간세포에도 영향을 주어 EMT(epithelial to mesenchymal transition)을 일으키는 것으로 알려져 있다. 계속되는 간 섬유화증(hepatic fibrosis)의 과정을 거쳐 결국은 간경변증이 유발되므로 간 섬유화증의 과정을 이해하고 연구하는 것은 간경변을 유발할 수 있는 모든 질환을 해결하는 데 가장 기본적인 단계라고 할 수 있다.

일반적으로 간 섬유화증은 간경변과는 달리 가역적이고, 얇은 원섬유(thin fibril)로 구성되며, 결절(nodule) 형성이 없는 것으로 알려져 있고, 간 손상의 원인이 소실되면 정상회복이 가능할 수 있으나, 이러한 간 섬유화증 과정이 반복적으로 지속되면 ECM(extra cellular matrix) 간의 크로스링킹(crosslinking)이 증가하여 결절(nodule)이 있는 비가역적인 간경변으로 진행된다.

간 섬유화가 더욱더 진행되어 간경변증(cirrhosis)가 일어나는데, 그 발병기전은 어떤 원인에 의해 간세포 괴사가 일어나면 간세포 재생과 섬유조직 증식이 있다. 이러한 과정이 오랫동안 반복하여 지속될 때 간경변증이 생긴다. 지속적 또는 반복적인 미만성 간실질 손상, 섬유조직 증식과 간세포 재생에 의해 재생된 간 결절이나 결절로 형성된 간경변은 병리학적으로 괴사(necrosis), 염증(inflammation) 및 섬유화(fibrosis)가 수반되는 만성질환이며 궁극적으로 간암으로의 진행 및 사망에 이르게 된다. 특히 초기에 자각증상이 없어 상당히 진행되어서야 발견되기 때문에 효과적인 진단 및 치료에 관한 연구가 필요하다.

HtrA (high temperature requirement protein A)family는 효소 활성에 결정적인 역할을 하는 catalytic triad 잔기를 지니고 있는 세린단백분해효소(serine protease)이다. 포유류의 HtrA 세린단백분해효소들은 세포생장, 세포사멸, 노화 등과 같은 생리작용에서 중요한 역할을 하고 있다고 보고되고 있으며, HtrA1, HtrA2, HtrA3, HtrA4가 알려져 있다.

HtrA2 단백질은 포유류에서 미토콘드리아의 항상성 유지를 통해 세포 생존에 중요한 역할을 하며, 또한 세포사멸 신호전달 경로에도 관여하는 것으로 알려져 있으며, 특히 파킨슨병과 같은 퇴행성 신경질환과의 상관관계가 보고되면서(Vande Walle, L. et.al., 2008. The mitochondrial serine protease HtrA2; Cell Death Differ. 15. 453-460) HtrA2의 연구가 더욱 활발해지고 있으나, 간 섬유화와의 상관관계에 대해서는 알려진바 없다.

이러한 배경 하에, 본 발명자들은 간 섬유화 환자조직에서 HtrA2 단백질의 발현이 감소되어 있음을 관찰하였으며, 이를 바탕으로 HtrA2 단백질을 간 섬유화의 진단마커로써 실용화하는 것에 기여하고자 한다.

본 발명의 목적은 HtrA2 단백질의 발현수준을 측정하는 제제를 포함하는, 간 섬유화 또는 간경변 진단용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 간 섬유화 또는 간경변 진단용 조성물을 포함하는 간 섬유화 또는 간경변 진단용 키트를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 간 섬유화 또는 간경변을 진단하는데 필요한 정보를 제공하기 위하여, 검체 시료로부터 HtrA2 단백질을 검출하는 방법을 젝공하는 것이다.

또한, 본 발명의 또 다른 목적은 간섬유증 치료제 후보물질을 처리하기 전과 처리한 후의 HtrA2 단백질의 발현수준의 변화를 측정하는 단계를 포함하는, 간섬유증 치료제의 스크리닝 방법을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 HtrA2 단백질의 발현수준을 측정하는 제제를 포함하는, 간 섬유화 또는 간경변 진단용 조성물에 관한 것이다.

본 발명에서 용어, "HtrA2(high temperature requirement A2)"는 세린단백분해효소로서 미토콘드리아에 존재하며, 세포사멸과정 중에 미토콘드리아로부터 세포질로 유리된다. HtrA2 단백질의 N-말단이 잘리는 과정을 통해 성숙한 HtrA2이 되며, 성숙한 HtrA2는 세포사멸을 조절하는 신호전달과정에 관여하는 것으로 알려져 있으며, 특히, 상기 단백질의 변이가 근육쇠약, 퇴행성 신경질환을 일으키는 원인이 된다는 사실이 보고되었다. 본 발명에서는 후술하는 실시예를 통하여 HtrA2의 단백질 발현수준을 측정함으로써 HtrA2가 간 섬유화와 관련된 병변의 진단용 바이오마커로 사용될 수 있음을 확인하였다. HtrA2 의 유전자 서열 및 아미노산 서열은 공지된 유전자 데이터베이스를 통해 쉽게 확인할 수 있다. 예를 들어, 인간 HtrA2 의 유전자 서열은 NCBI 등록번호 BC000096, 이의 아미노산 서열은 AAH00096로 각각 등록되어 있다.

보다 상세하게, 본 발명의 구체적인 실시예에서는 정상 간 조직, 간염환자의 조직, 간 섬유화(간경변) 환자의 조직을 이용하여 HtrA2 단백질의 발현수준을 측정하였으며, 특히 정상 간 조직 및 간염환자 조직에서의 HtrA2 단백질의 발현수준 보다 간 섬유화(간경변)환자 조직에서의 HtrA2 단백질의 발현수준이 감소되어 있음을 관찰하였다. 이로부터 본 발명자들은 HtrA2 단백질이 간 섬유화 또는 간경변을 진단할 수 있는 바이오마커가 될 수 있음을 확인하였다.

본 발명에서 용어, "단백질의 발현수준"이란 세포내에서 유전자로부터 단백질로 발현되는 수준을 말하며, 단백질의 발현수준을 관찰함으로써 세포내의 mRNA 수준과 세포 내에서 발현되는 단백질 수준의 직접적인 상관관계를 나타내지 못하는 mRNA를 표적으로 하는 연구의 한계를 보완할 수 있다. 본 발명에서는 HtrA2 단백질의 발현수준을 관찰함으로써 간 섬유화 및 간경변의 진단이 용이하게 이루어질 수 있도록 하였다.

본 발명에서 용어, "간 섬유화"는 손상된 간 조직이 정상적인 간세포로 복구되지 않고 콜라겐과 같은 섬유 조직으로 변형된 상태를 말한다. 주로, 간손상으로 인한 간세포 괴사 이후에 나타나며, 영역 1(zone 1)의 문맥-문맥 섬유상 가교(portal-portal fibrous bridges)를 일으키는 경계면 간염이 생긴 이후에 나타나는 것으로 알려져 있다.

본 발명에서 용어, "간경변"은 간염 등으로 인한 간세포의 지속적인 파괴와 반복적인 미만성 간손상과 이에 따른 섬유화 현상(liver fibrogenesis) 및 재생결절(nodule)이 나타나는 간 질환을 말한다. 주로 간이 굳어지고 간의 모양이 일그러지며, 간소엽의 구조가 대부분 파괴되어 문맥역과 중심정맥의 입체적 위치관계가 파괴되는 병증으로, 약 20 내지 40%가 간암으로 진행되는 것으로 알려져 있다. 간경변의 경우 일단 섬유화가 진행되면 정상간으로 복원될 수 없는 특징이 있으며, 간경변에 의한 사망률이 계속적으로 증가하고 있어, 초기에 간경변을 진단하는 것의 중요성이 더욱 커지고 있다. 본 발명에서는 후술하는 실시예에서 뒷받침되는 바와 같이, HtrA2가 간 섬유화와 관련된 병변의 진단용 바이오마커로 사용될 수 있음을 확인함으로써 초기 자각증상이 없는 간 섬유화 및 간경변을 보다 빨리 진단하여 치료할 수 있도록 하였다.

본 발명은 간 섬유화 또는 간경변의 진단을 위해 HtrA2를 바이오마커로 제공함을 특징으로 한다. 아울러, 만성 간염에서 간경변으로 진행되는지 여부를 확인하기 위한 바이오마커로 HtrA2를 제공함을 특징으로 한다.

바람직한 양태로서, 본 발명에서 바이오마커 HtrA2를 검출하기 위하여, HtrA2 단백질의 발현수준을 측정하는 제제를 사용할 수 있다. 상기 단백질의 발현수준을 측정하는 제제는 HtrA2에 특이적인 항체일 수 있다.

본 발명에서, "항체"란 항원성 부위에 특이적인 단백질 분자를 의미한다. 본 발명의 목적상, 항체는 상기 마커 단백질인 HtrA2에 특이적으로 결합하는 항체를 의미하며, 단일클론항체, 다클론항체 및 재조합 항체를 모두 포함한다.

단일클론항체는 당해 분야에 널리 공지된 하이브리도마 방법(Kohler 및 Milstein (1976)European journal og Immunology 6:511-519), 또는 파지 항체 라이브러리(Clarkson et al, Nature, 352:624-628, 1991; Marks et al, J. Mol. Biol.,222:58, 1-597, 1991)기술을 이용하여 제조될 수 있다.

다클론항체는 상기한 단백질 항원을 동물에 주사하고 동물로부터 채혈하여 항체를 포함하는 혈청을 수득하는 당해 분야에 널리 공지된 방법에 의해 생산할 수 있다. 이러한 다클론항체는 염소, 토끼, 양, 원숭이, 말, 돼지, 소, 개 등의 임의의 동물 종 숙주로부터 제조 가능하다.

또한, 본 발명의 항체에는 키메라 항체, 인간화 항체, 인간항체 등의 특수항체도 포함된다.

나아가, 본 발명에 사용되는 항체는 2개의 전체 길이의 경쇄 및 2개의 전체 길이의 중쇄를 가지는 완전한 형태 뿐만 아니라 항체 분자의 기능적인 단편을 포함한다. 항체 분자의 기능적인 단편이란 적어도 항원 결합기능을 보유하고 있는 단편을 뜻하며 Fab, F(ab'), F(ab') 2 및 Fv 등을 예시할 수 있다.

이러한 항체를 이용하여 시료 내 HtrA2의 발현수준을 측정하기 위한 방법으로는, 시료에 상기 항체를 처리하여 항원-항체 복합체의 생성 정도를 확인할 수 있는 방법이라면 제한없이 사용할 수 있다. 상기 "항원-항체 복합체"란 HtrA2단백질과 이에 특이적인 항체의 결합물을 의미하고, 항원-항체 복합체의 형성량은 검출 라벨(detection label)의 시그널의 크기를 통해서 정량적으로 측정 가능하다.

예를 들어, 웨스턴 블랏(Western blot), ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 면역침전분석법(Immunoprecipitation Assay), 보체 고정 분석법(Complement Fixation Assay), 유세포분석(Fluorecence Activated Cell Sorter, FACS), 또는 단백질 칩(protein chip) 등을 예시할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 간 섬유화 또는 간경변의 진단용 조성물을 포함하는 간 섬유화 또는 간경변의 진단용 키트에 관한 것이다.

본 발명의 키트는 환자 시료 내 HtrA2단백질의 발현수준을 측정할 수 있는 제제 뿐만 아니라, 발현수준 분석에 적합한 한 종류 이상의 조성물, 용액 또는 장치를 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 키트는 항체의 면역학적 검출을 위하여 기질, 적당한 완충용액, 검출 라벨로 표지된 2차 항체, 및 발색 기질 등을 포함할 수 있다.

구체적인 일례로, 간 섬유화 또는 간경변의 진단용 키트는 ELISA 키트, 샌드위치 ELISA 등 다양한 ELISA 방법을 구현하기 위하여, ELISA를 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트일 수 있다. ELISA 키트는 상기 단백질들에 대한 특이적인 항체를 포함한다. 항체는 HtrA2 단백질에 대한 특이성 및 친화성이 높고 다른 단백질에 교차 반응성이 거의 없는 항체로, 단일클론항체, 다클론항체 또는 재조합 항체일 수 있다. 또한 ELISA 키트는 대조군 단백질에 특이적인 항체를 포함할 수 있다. 그 외 ELISA 키트는 결합된 항체를 검출할 수 있는 시약, 예를 들면, 표지된 2차 항체, 발색단(chromopores), 효소 및 그의 기질 또는 항체와 결합할 수 잇는 다른 물질 등을 포함할 수 있다.

이 외에도, 상기 키트는 웨스턴 블랏(Western blot), ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 면역침전분석법(Immunoprecipitation Assay), 보체 고정 분석법(Complement Fixation Assay), 유세포분석(Fluorecence Activated Cell Sorter, FACS), 또는 단백질 칩(protein chip) 등을 구현하기 위한 키트일 수 있으며, 각 분석 방법에 적합한 부가적인 구성을 추가로 포함할 수 있다. 이 분석 방법들을 통하여, 항원-항체 복합체 형성량을 비교함으로써 간 섬유화 또는 간경변을 진단 할 수 있으며, 이에 맞추어 환자를 적절히 치료할 수 있다.

또 다른 양태로서, 본 발명은 간 섬유화 또는 간경변을 진단하는데 필요한 정보를 제공하기 위하여, 검체 시료로부터 HtrA2 단백질을 검출하는 방법에 관한 것이다.

보다 상세하게, 간 섬유화 또는 간경변 의심 환자의 시료에서 HtrA2 의 발현정도를 측정하고, 이를 정상 대조군에서의 HtrA2 의 발현 정도와 비교함으로써 해당 환자의 실제 간 섬유화 또는 간경변 여부를 진단할 수 있다. 이 때, 간 섬유화 또는 간경변으로 의심되는 환자의 HtrA2 발현 정도가 정상 대조군의 HtrA2 발현 정도보다 감소한 것으로 측정되는 경우, 해당 환자가 간 섬유화 또는 간경변인 것으로 진단할 수 있다.

또는, 만성 간염 환자가 간경변으로 발전했는지를 확인하기 위하여, 만성 간염 환자의 시료로부터 HtrA2 발현 정도의 변화를 측정하여, HtrA2 발현의 유의적인 증가가 측정되는 경우 해당 만성 간염 환자가 간경변으로 발전한 것으로 진단할 수 있다.

또는, 간 섬유화 또는 간경변으로 진행된 것으로 의심되는 만성 간염환자의 HtrA2 발현 정도가 정상 대조군의 HtrA2 발현 및 다른 간염환자의 HtrA2 발현 정도보다 감소된 것으로 측정되는 경우, 해당 만성 간염환자의 병변이 간 섬유화 또는 간경변으로 진행된 것으로 진단할 수 있다.

본 발명에서 용어, "검체시료"란 마커 단백질인 HtrA2의 발현 수준이 차이나는 조직, 세포, 전혈, 혈장, 혈청, 혈액, 타액, 객담, 세포간액 또는 소변과 같은 시료 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

검체 시료에서 단백질을 분리하는 과정은 공지의 공정을 이용하여 수행할 수 있으며, 단백질 수준은 앞서 언급한 다양한 항원-항체 복합체 측정 방법으로 측정할 수 있다.

보다 바람직한 양태로, 본 발명은 상기 단백질 발현수준의 측정은 HtrA2 에 특이적인 항체를 이용하여 수행될 수 있다.

더욱 바람직한 양태로, 상기 항체는 HtrA2에 특이적인 단일클론항체 또는 다클론항체일 수 있으나, 나아가 항원결합활성을 보유하는 항체의 기능적 단편일 수 있다.

보다 바람직한 양태로, 검체 시료로부터 HtrA2 단백질을 검출하는 방법으로서 웨스턴 블랏(Western blot), ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 면역침전분석법(Immunoprecipitation Assay), 보체 고정 분석법(Complement Fixation Assay), 유세포분석(Fluorecence Activated Cell Sorter, FACS), 또는 단백질 칩(protein chip) 등을 예시할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또 다른 양태로서, 본 발명은 검체 시료에 간 섬유증 치료제 후보물질을 처리하는 단계, 및 상기 시료에서 상기 후보물질을 처리하기 전과 처리한 후의 HtrA2 단백질의 발현수준의 변화를 측정하는 단계를 포함하는, 간 섬유증 치료제의 스크리닝 방법에 관한 것이다.

본 발명에서는 간 섬유증 치료제 후보물질을 처리한 시료에 대하여 HtrA2 단백질의 발현 수준의 변화를 측정함으로써, 해당 간섬유증 치료제 후보물질의 치료 효과를 측정하여 간 섬유증 치료제를 스크리닝 할 수 있다. 예를 들어, 간 섬유증 치료제 후보물질의 처리에 따라 HtrA2 단백질의 발현이 증가되는 경우, 해당 후보물질을 간 섬유증 치료제로 선별할 수 있다.

본 발명은 HtrA2 단백질의 발현 수준을 측정함으로써 간 섬유화 환자인지 여부를 진단할 수 있을 뿐만 아니라, 만성간염환자가 간 섬유화로 병변이 진행되었는지 여부를 진단할 수 있게 되어 초기에 자각증상이 없어 상당히 진행되어서야 발견되는 간경변증과 같은 간 섬유화 관련 질환을 보다 효과적으로 진단할 수 있으며, 이를 통해 보다 효과적인 치료가 가능하도록 한다.

도 1은 간 섬유화 및 만성간염 환자 조직에서의 HtrA2 단백질의 발현패턴의 변화를 나타낸 것이다.
도 2는 만성간염 및 간 섬유화 환자 조직으로부터 간 질환에 따른 HtrA2 단백질의 발현 변화의 상관관계를 나타낸 것이다.
도 3은 정상 간조직 및 만성 간염환자 조직에 비해 간 섬유화 환자 조직에서 HtrA2 단백질의 감소를 나타낸 것이다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 대상 환자 조직

가톨릭대학교 의과대학 서울성모병원에 내원한 만성 간염(CH) 환자 13명 및 간 섬유화 (간경변)(LC)로 진단 받고 수술을 받은 환자 24명을 대상으로 조직과 혈액 등을 채취하여 분석에 사용되기 전까지 동결 보관하였다. 또한 정상 간 조직은 시판하는 normal human liver lysate 샘플(G-Biosciences NLH-01)을 구입하여 사용하였다.

실시예 2. 단백질 추출 및 웨스턴블랏( western blot analysis )

동결 보관되어 있던 대상 환자 조직 0.1 g을 막자사발에서 파쇄 시킨 다음 cell lysis buffer를 넣고 4℃에서 30분 반응 시켰다. 반응시킨 혼합액을 원심분리기를 이용하여 30분 동안 13,000 rpm으로 분리한 다음 상층액만 추출하고, 조직으로부터 추출된 단백질을 10% SDS polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)를 이용하여 단백질들을 분리하였다. 분리된 단백질들을 nitrocellulose membrane (Schleicher & Schuell, Dassel, Germany)에 옮기고, 이를 blocking buffer [5% skim milk가 포함된 TBS-T (10mM Tris-HCl, 0.15 M NaCl; pH 7.4)]로 상온에서 30분 동안 blocking시켰다. Blocking이 끝난 후 TBS-T buffer로 10분 동안 3번 membrane 을 세척한 다음 1차 항체와 반응 시켰다. 1차 항체로는 polyclonal rabbit anti-HtrA2 (R&D Systems AF-1458)(1:5000)를 1% BSA 가 함유된 TBS-T buffer에 혼합하여 4℃에서 2~3시간 반응시킨 후, 2차 항체는 horseradish peroxidase (HRP)가 연결된 anti-rabbit IgG (1:2000, Amersham Bioscience, Buckinghamshire, UK) 를 상온에서 2시간 동안 반응 하였다. 각 반응은 모두 TBS-T를 이용하여 15분간 3회 세척하여 비 특이반응을 제거하였으며, ECL (Amersham)을 이용하여 확인하였다.

상기 방법을 통해 단백질의 발현 변화를 관찰한 결과, 정상 간조직 보다 만성간염환자(CH) 및 간 섬유화 환자(LC)의 조직에서 HtrA2의 발현이 더 감소되어 있는 것을 확인하였으며, 특히 만성 간염환자의 조직에 비해 간 섬유화 환자의 조직에서 HtrA2의 발현이 더욱 감소되어 있는 것을 확인하였다(도 1 내지 도 3).

이를 통해 본 발명은 환자의 상태가 정상인지 간 섬유화 내지 간경변이 진행되고 있는지 여부를 진단할 수 있을 뿐만 아니라, 만성 간염환자가 간 섬유화 내지 간경변으로 더욱 진행되었는지 여부를 진단하여 치료할 수 있도록 하였다.

Claims

HtrA2(high temperature requirement A2) 단백질의 발현수준을 측정하는 제제를 포함하는, 간 섬유화 또는 간경변 진단용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 단백질의 발현수준을 측정하는 제제는 HtrA2에 특이적인 항체인 조성물.
제2항에 있어서, 상기 항체는 단일클론항체 또는 다클론항체인 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는, 간 섬유화 또는 간경변 진단용 키트.
간 섬유화 또는 간경변을 진단하는데 필요한 정보를 제공하기 위하여, 간 조직 시료로부터 HtrA2 단백질을 검출하는 방법.
삭제
제5항에 있어서, 상기 HtrA2 단백질의 검출은 HtrA2 단백질에 특이적인 항체를 이용하여 수행되는 것인 방법.
제7항에 있어서, 상기 항체는 단일클론항체 또는 다클론항체인 방법.
제5항에 있어서, 상기 단백질의 검출은 웨스턴 블랏(Western blot), ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 면역침전분석법(Immunoprecipitation Assay), 보체 고정 분석법(Complement Fixation Assay), 유세포분석(Fluorecence Activated Cell Sorter, FACS), 또는 단백질 칩(protein chip)을 이용하여 수행되는 것인 방법.
검체 시료에 간섬유증 치료제 후보물질을 처리하는 단계, 및
상기 시료에서 상기 후보물질을 처리하기 전과 처리한 후의 HtrA2 단백질의 발현수준의 변화를 측정하는 단계를 포함하는, 간섬유증 치료제의 스크리닝 방법.