JPWO2006098464A1

JPWO2006098464A1 - 前立腺がんの診断方法

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Publication number: JPWO2006098464A1
Application number: JP2007508241A
Authority: JP
Inventors: 和丈辻川; 弘山元; 登小西
Original assignee: PCA Intermed Inc
Current assignee: PCA Intermed Inc
Priority date: 2005-03-14
Filing date: 2006-03-14
Publication date: 2008-08-28
Also published as: EP1862804A4; WO2006098464A1; DE602006014106D1; US20090130662A1; EP1862804A1; EP1862804B1

Abstract

本発明は、被験者の体液試料中のＰＣＡ−１を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量する方法を提供する。本発明はまた、被験者の体液試料中の抗ＰＣＡ−１自己抗体を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量する方法を提供する。本発明は、前立腺がんの診断をより簡易、迅速、安価にする。

Description

本発明は、前立腺がんの診断方法に関し、特に、被験者の体液（例えば、血液、尿）試料中のＰＣＡ−１をマーカーとして前立腺がんを診断する方法およびそのためのキットに関する。

前立腺がんは、欧米では男性がん死亡者の約２０％を占める頻度の高いがんであり、日本でも食事の欧米化および高齢化社会に伴い、その頻度は増加傾向にある。泌尿器科領域におけるがんでは、日本においても最も多いがんであり、罹患者の早期発見は医学上重要な意義がある。
現在、前立腺がんの診断には、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）が一般的に使用されており、抗原抗体反応を用いた血液成分中のＰＳＡ検出キットが多数市販されている。血中ＰＳＡ測定は、鋭敏に前立腺がんの存在を検出できる検査であり、また、がんの進行とともにＰＳＡ値も上昇するため、病期までも予測できるなどの利点がある。
しかしながら、血中ＰＳＡ値は前立腺肥大症や前立腺炎でも上昇することがしばしばあり、また前立腺がんの初期段階ではＰＳＡ値は正常である場合もあるため、偽陰性の診断を生じるという問題がある。したがって、前立腺がんの確定診断のためには、さらに、穿刺吸引生検法や経直腸または経会陰的針生検にて前立腺の組織を採取し、顕微鏡で検査する組織診断をしなければならない。
一方、がんにおいて発現が亢進しているタンパク質のどれが抗原性でありまたは体液中で濃度増加することがあるかについて予測できる知見はほとんどない。前立腺がんの細胞または組織において発現が亢進している遺伝子およびタンパク質は極めて多数存在するが、これらの極多数の増幅遺伝子またはタンパク質の全てが前立腺がんの診断マーカーとして利用可能であるわけではない。例えば、現在、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社から前立腺がんで発現している多数のｃＤＮＡが販売されているが、これらの遺伝子の前立腺がん患者における動態は全く未知である。なお、ＰＣＡ−１（ｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒａｎｔｉｇｅｎ−１）が前立腺がん細胞または組織において発現が亢進している遺伝子として同定されたという報告がある（第１２３回日本薬学会年会要旨集４、ｐ１５、２００３年）。

現状では、前立腺がんの診断は、患者および医師にとって負担が大きく、労力と時間がかかるものである。そこで、前立腺がんの診断をより簡易、迅速、かつ患者および医師の負担を少なくするための新たな方法が求められている。特に、体液（例えば、血液、尿）試料を用いて迅速、確実な診断を可能にするための、あらたな前立腺がんマーカーの開発が望まれている。
上記のような従来の課題を解決するために、本発明は、以下のような、被験者の体液試料中のＰＣＡ−１、ＰＣＡ−１遺伝子、ＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、または抗ＰＣＡ−１自己抗体を前立腺がんマーカーとして検出する方法および検出用キット、ならびに診断剤を提供する。
（１）被験者由来の体液試料中のＰＣＡ−１を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量する方法。
（２）前記体液試料が、全血、血清、または血漿である、（１）に記載の方法。
（３）前記体液試料が、尿である、（１）に記載の方法。
（４）質量分析装置を用いて、ＰＣＡ−１を検出および／または定量する、（１）〜（３）のいずれかに記載の方法。
（５）抗ＰＣＡ−１抗体を用いて、ＰＣＡ−１を検出および／または定量する、（１）〜（３）のいずれかに記載の方法。
（６）前記体液試料と抗ＰＣＡ−１抗体とを接触させる工程、および
前記体液試料中のＰＣＡ−１と前記抗ＰＣＡ−１抗体との結合を検出および／または定量する工程
を包含する、（５）に記載の方法。
（７）前記検出および／または定量する工程が、標識された抗ＰＣＡ−１抗体を用いて、ＰＣＡ−１と抗ＰＣＡ−１抗体との結合を検出および／または定量することを包含する、（６）に記載の方法。
（８）ウエスタンブロット法、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、サンドイッチ免疫測定法、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、時間分解蛍光免疫測定法（ＴＲＦＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、発光免疫測定法（ＬＩＡ）、電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬＩＡ）、ラテックス凝集法、免疫沈降アッセイ、沈降素反応法、ゲル拡散沈降素反応法、免疫拡散検定法、凝集素検定法、補体結合検定法、免疫放射分析検定法、蛍光免疫検定法、およびプロテインＡ免疫検定法からなる群から選択される免疫測定法に従う、（５）〜（７）のいずれかに記載の方法。
（９）前立腺がんの診断に用いるための、（１）〜（８）のいずれかに記載の方法。
（１０）抗ＰＣＡ−１抗体を含有する、被験者由来の体液試料中のＰＣＡ−１を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量するための、前立腺がん診断剤。
（１１）ＰＣＡ−１遺伝子、ＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、またはその断片の塩基配列にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズ可能な塩基配列からなるポリヌクレオチドを含有する、被験者由来の体液試料中のＰＣＡ−１遺伝子、ＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、またはその断片を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量するための、前立腺がん診断剤。
（１２）前記体液試料が、全血、血清、または血漿である、（１０）または（１１）に記載の診断剤。
（１３）前記体液試料が、尿である、（１０）または（１１）に記載の診断剤。
（１４）抗ＰＣＡ−１抗体を含有する、被験者由来の体液試料中のＰＣＡ−１を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量するためのキット。
（１５）標識された抗ＰＣＡ−１抗体をさらに含有する、（１４）に記載のキット。
（１６）ウエスタンブロット法、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、サンドイッチ免疫測定法、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、時間分解蛍光免疫測定法（ＴＲＦＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、発光免疫測定法（ＬＩＡ）、電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬＩＡ）、ラテックス凝集法、免疫沈降アッセイ、沈降素反応法、ゲル拡散沈降素反応法、免疫拡散検定法、凝集素検定法、補体結合検定法、免疫放射分析検定法、蛍光免疫検定法、およびプロテインＡ免疫検定法からなる群から選択される免疫測定法に従って前記検出および／または定量を行うための、（１４）または（１５）に記載のキット。
（１７）ＰＣＡ−１遺伝子、ＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、またはその断片の塩基配列にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズ可能な塩基配列からなるポリヌクレオチドを含有する、被験者由来の体液試料中のＰＣＡ−１遺伝子、ＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、またはその断片を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量するためのキット。
（１８）前記体液試料が、全血、血清、または血漿である、（１４）〜（１７）のいずれかに記載のキット。
（１９）前記体液試料が、尿である、（１４）〜（１７）のいずれかに記載のキット。
（２０）前立腺がんの診断に用いるための、（１４）〜（１９）のいずれかに記載のキット。
（２１）被験者由来の体液試料中の抗ＰＣＡ−１自己抗体を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量する方法。
（２２）前記体液試料が、全血、血清、または血漿である、（２１）に記載の方法。
（２３）前記体液試料が、尿である、（２１）に記載の方法。
（２４）ＰＣＡ−１抗原を用いて、前記抗ＰＣＡ−１自己抗体を検出および／または定量する、（２１）〜（２３）のいずれかに記載の方法。
（２５）前記体液試料とＰＣＡ−１抗原とを接触させる工程、および
前記体液試料中の抗ＰＣＡ−１自己抗体とＰＣＡ−１抗原との結合を検出および／または定量する工程
を包含する、（２４）に記載の方法。
（２６）前記検出および／または定量する工程が、抗ＰＣＡ−１自己抗体に対する標識された抗体を用いて、ＰＣＡ−１と抗ＰＣＡ−１自己抗体との結合を検出および／または定量することを包含する、（２５）に記載の方法。
（２７）ウエスタンブロット法、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、サンドイッチ免疫測定法、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、時間分解蛍光免疫測定法（ＴＲＦＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、発光免疫測定法（ＬＩＡ）、電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬＩＡ）、ラテックス凝集法、免疫沈降アッセイ、沈降素反応法、ゲル拡散沈降素反応法、免疫拡散検定法、凝集素検定法、補体結合検定法、免疫放射分析検定法、蛍光免疫検定法、およびプロテインＡ免疫検定法からなる群から選択される免疫測定法に従う、（２１）〜（２６）のいずれかに記載の方法。
（２８）前立腺がんの診断に用いるための、（２１）〜（２７）のいずれかに記載の方法。
（２９）ＰＣＡ−１抗原を含有する、被験者由来の体液試料中の抗ＰＣＡ−１自己抗体を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量するためのキット。
（３０）抗ＰＣＡ−１自己抗体に対する標識された抗体をさらに含み、当該抗体を、前記ＰＣＡ−１抗原と前記抗ＰＣＡ−１自己抗体との結合を検出および／または定量するために利用する、（２９）に記載のキット。
（３１）ウエスタンブロット法、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、サンドイッチ免疫測定法、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、時間分解蛍光免疫測定法（ＴＲＦＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、発光免疫測定法（ＬＩＡ）、電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬＩＡ）、ラテックス凝集法、免疫沈降アッセイ、沈降素反応法、ゲル拡散沈降素反応法、免疫拡散検定法、凝集素検定法、補体結合検定法、免疫放射分析検定法、蛍光免疫検定法、およびプロテインＡ免疫検定法からなる群から選択される免疫測定法に従って前記検出および／または定量を行うための、（２９）または（３０）に記載のキット。
（３２）前立腺がんの診断に用いるための、（２９）〜（３１）のいずれかに記載のキット。
（３３）ＰＣＡ−１抗原を含有する、被験者由来の体液試料中の抗ＰＣＡ−１自己抗体を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量するための、前立腺がん診断剤。
本発明により、ＰＣＡ−１を被験者の体液（例えば、血液、尿）試料中の前立腺がんマーカーとして利用する方法が初めて提供される。本発明は、単独の検査によって前立腺がんの診断が可能な正確な前立腺がん診断方法を提供し得る。また、必要に応じて既存の前立腺がんの診断方法と組み合わせることにより、より確実な前立腺がんの診断を可能にする。本発明は、体液試料を用いて非浸襲的または浸襲性の程度の低い測定形態を採り得るため、患者および医者の両方にとって負担が少なく、迅速かつ簡易な前立腺がんの診断方法を提供し得る。本発明は、前立腺がんの診断のみならず、予後評価、がんの疾病素質を有する被験者の同定、およびがんの治療を受けている患者の観察のために有用である。

図１は、ＬＣ−ＭＳ質量分析装置によりモニタリングした前立腺がんを有する被験者由来の血液試料の溶出プロファイルを示す図である。
図２は、（Ａ），（Ｂ）ＰＣＡ−１のｉｎｓｉｌｉｃｏトリプシン分解ペプチド断片及び当該ペプチドから生じ得る開裂ペプチドの質量を有する分子をＬＣ−ＭＳ質量分析装置で選択的にモニタリングした場合、ならびに（Ｃ），（Ｄ）比較のために、ＰＳＡのｉｎｓｉｌｉｃｏトリプシン分解ペプチド断片及び当該ペプチドから生じ得る開裂ペプチドの質量を有する分子をＬＣ−ＭＳ質量分析装置で選択的にモニタリングした場合の、溶出プロファイルを示す図である。
図３は、図２（Ａ）で保持時間６８分付近に観察されたＰＣＡ−１ピークに対するＭＳＭＳ解析によって決定されたアミノ酸配列を示す図である。
図４は、図２（Ｂ）で保持時間６２分付近に観察されたＰＣＡ−１ピークに対するＭＳＭＳ解析によって決定されたアミノ酸配列を示す図である。
図５は、比較のために、図２（Ｃ）及び（Ｄ）で保持時間６４分付近に観察されたＰＳＡピークに対するＭＳＭＳ解析によって決定されたアミノ酸配列を示す図である。
図６は、図２に示す実験の比較例として、前処理およびトリプシン処理を施した健常者由来の血液試料について、図２に示す実験と同様の設定で特定の質量を有する分子のモニタリングを行った場合の溶出プロファイルを示す図である。
図７は、前立腺がん患者由来の尿試料中のＰＣＡ−１の存在を示すウェスタンブロット分析の結果を示す写真である。

本発明者らは、血液中の標的ポリペプチドの存在とその量を迅速に解析するための手法として、質量分析装置を用いた新たな解析手法を開発し、これを用いて血液試料中のＰＣＡ−１の検出を試みた。その結果、前立腺がん患者由来の血液試料中にＰＣＡ−１が存在すること、および健常者由来の血液試料中ではＰＣＡ−１が実質的に検出されないことを確認した。本発明は、このような新たな知見に基づくものであり、ＰＣＡ−１が血液のような体液試料中の前立腺がんマーカーとして使用し得ることを初めて実証するものである。
さらに本発明者らは、前立腺がん患者の尿試料中においてもＰＣＡ−１が検出され得ること、および健常者由来の尿試料中ではＰＣＡ−１がわずかに検出されるのみかまたは実質的に検出されないことを確認した。このように、本発明はまた、ＰＣＡ−１が尿のような体液試料中においても前立腺がんマーカーとして使用し得ることを初めて実証するものである。
したがって、本発明は、１つの態様において、被験者由来の体液試料中のＰＣＡ−１を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量する方法を提供する。本発明の方法は、前立腺がんの診断または予後評価等に適用し得る。
本発明はまた、別の態様において、被験者由来の体液試料中の抗ＰＣＡ−１自己抗体を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量する方法を提供する。すなわち、本発明は、前立腺がんの診断または予後評価等に適用するための抗ＰＣＡ−１自己抗体の体液中発現を検出および／または定量する方法を提供する。
（体液中のＰＣＡ−１または抗ＰＣＡ−１自己抗体の検出および／または定量）
被験者から採取された血液または尿のような体液試料中のＰＣＡ−１タンパク質の検出には、多くの方法があり、そのいずれかを用いて検出を行うことが可能である。上記のような質量分析装置を用いた検出法のほかに、例えば、ＰＣＡ−１タンパク質がＰＣＡ−１タンパク質に特異的に結合する抗体（抗ＰＣＡ−１抗体）によって検出される免疫測定法が使用され得る。本発明に有用な抗体は、ＰＣＡ−１タンパク質またはその断片の存在を定量的にまたは定性的に検出するために使用され得る。したがって、１つの態様において、本発明は、抗ＰＣＡ−１抗体を用いて、被験者由来の体液試料中の前立腺がんマーカーを検出する方法を提供する。
また、被験者から採取された血液または尿のような体液試料中のＰＣＡ−１ポリヌクレオチドの検出には、多くの方法があり、そのいずれかを用いて検出を行うことが可能である。検出可能なポリヌクレオチドには、例えば、ＰＣＡ−１遺伝子またはその断片、ＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、選択的スプライス変異型のＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、およびＰＣＡ−１ポリヌクレオチドを含む組換えＤＮＡまたはＲＮＡ分子が含まれる。
ＰＣＡ−１ポリヌクレオチドの増幅および／またはその存在の検出を行うための数多くの方法が当該分野で周知であり、本発明のこの局面の実施において使用し得る。例えば、１つの態様において、体液試料中のＰＣＡ−１ｍＲＮＡを検出するための方法は、少なくとも１つのプライマーを使用する逆転写によって試料からｃＤＮＡを作製する工程、そのようにして作製したｃＤＮＡをその中のＰＣＡ−１ｃＤＮＡを増幅するためにＰＣＡ−１ポリヌクレオチドをセンスおよびアンチセンスプライマーとして用いて増幅する工程、ならびに増幅されたＰＣＡ−１ｃＤＮＡの存在を検出する工程を包含する。さらに、別の態様において、体液試料中のＰＣＡ−１遺伝子を検出するための方法は、体液試料からゲノムＤＮＡをまず単離する工程、単離されたゲノムＤＮＡをその中のＰＣＡ−１遺伝子を増幅するためにＰＣＡ−１ポリヌクレオチドをセンスおよびアンチセンスプライマーとして使用して増幅する工程、ならびに増幅されたＰＣＡ−１遺伝子の存在を検出する工程を含む。
本明細書中、「ＰＣＡ−１」または「ＰＣＡ−１タンパク質」とは、その遺伝子がＧｅｎＢａｎｋＡｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ．ＡＢ０４２０２９で特定されるヒトＰＣＡ−１タンパク質のことをいい、ＰＣＡ−１タンパク質のアミノ酸配列は、公にアクセス可能なタンパク質データベースのＡｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ．ＮＰ＿６３１９１７（配列番号：２）で特定される。また、本明細書中、体液試料中のＰＣＡ−１を前立腺がんマーカーとして使用する態様で「ＰＣＡ−１」という場合には、ＰＣＡ−１の全長タンパク質に限らず、体液試料中のプロテアーゼによるＰＣＡ−１の分解産物もしくはＰＣＡ−１の断片、またはこれらの誘導体をも含むものとする。ここで、「誘導体」とは、ＰＣＡ−１タンパク質またはその断片のアミノ酸配列において１または数個（例えば、６個）のアミノ酸残基の変異、置換、欠失および／または付加を含み、実質的にＰＣＡ−１タンパク質と同じ抗原特異性を有するペプチドまたはポリペプチドを含むものとする。誘導体の典型的な例には、ＰＣＡ−１多型、スプライシングなどによる配列変化がある。
本明細書中、体液試料中のＰＣＡ−１を前立腺がんマーカーとして使用する態様で使用する「抗ＰＣＡ−１抗体」には、ＰＣＡ−１、ならびにプロテアーゼによるＰＣＡ−１の分解産物もしくはＰＣＡ−１の断片、またはこれらの誘導体に特異的に結合する抗体が含まれるものとする。これらのプロテアーゼ分解産物または断片の長さとしては、抗ＰＣＡ−１抗体に特異的な抗原として認識され得る長さであれば制限はないが、好ましくは６アミノ酸以上、より好ましくは８アミノ酸以上、さらに好ましくは１０アミノ酸以上である（例えば、アミノ酸配列：ＲＲＡＰＥＰＲＶＩＤＲＥＧ（配列番号３４）またはその部分配列を含む断片）。また、これらの分解産物または断片は、ＰＣＡ−１タンパク質の任意の部分であり得るが、ＰＣＡ−１タンパク質のエピトープに対応するか、エピトープに対応する部分を含んでいることがより好ましい。また、「誘導体」とは、ＰＣＡ−１タンパク質またはそのプロテアーゼ分解産物もしくは断片のアミノ酸配列において、１または数個（例えば、６個）のアミノ酸残基の変異、置換、欠失および／または付加を含み、実質的にＰＣＡ−１タンパク質と同じ抗原特異性を有するペプチドまたはポリペプチドを含むものとする。
本明細書中、体液試料中の抗ＰＣＡ−１自己抗体を前立腺がんマーカーとして使用する態様で使用する「ＰＣＡ−１」、「ＰＣＡ−１タンパク質」または「ＰＣＡ−１抗原」には、ＰＣＡ−１タンパク質のみならず、ＰＣＡ−１タンパク質のエピトープを含むかまたはエピトープとして抗ＰＣＡ−１抗体に認識され得る断片、およびこれらの誘導体をも含むものとする。ここで、断片の長さとしては、抗ＰＣＡ−１抗体に特異的な抗原として認識され得る長さであれば制限はないが、好ましくは６アミノ酸以上、より好ましくは８アミノ酸以上、さらに好ましくは１０アミノ酸以上である。また、これらの分解産物または断片は、ＰＣＡ−１タンパク質の任意の部分であり得るが、ＰＣＡ−１タンパク質のエピトープに対応するか、エピトープに対応する部分を含んでいることがより好ましい。また、「誘導体」とは、ＰＣＡ−１タンパク質またはその断片のアミノ酸配列において１または数個（例えば、６個）のアミノ酸残基の変異、置換、欠失および／または付加を含み、実質的にＰＣＡ−１タンパク質と同じ抗原特異性を有するペプチドまたはポリペプチドを含むものとする。
本明細書中、抗体があるタンパク質または分解産物または断片に「特異的に結合する」とは、その抗体が他のアミノ酸配列に対するその親和性よりも、これらのタンパク質または分解産物または断片の特定のアミノ酸配列に対して実質的に高い親和性で結合することを意味する。ここで、「実質的に高い親和性」とは、所望の測定装置によって、その特定のアミノ酸配列を他のアミノ酸配列から区別して検出することが可能なほどに高い親和性を意味する。
本明細書中、「前立腺がんマーカー」とは、被験者の体液（例えば、血液、尿、リンパ液、唾液、汗、精液等）または細胞もしくは組織中における、正常前立腺組織に由来していないか、あるいは前立腺がん細胞または組織において選択的に発現の亢進している分子のことをいい、被験者の体液または細胞もしくは組織中における当該分子の存在が前立腺がんの存在を示すかまたは示唆するものをいう。
本明細書中、「体液試料」には、被験者由来の血液、尿、リンパ液、唾液、汗、精液等の体液試料が含まれるものとする。本発明において使用される体液試料の好ましい例は、血液または尿であり、特に好ましくは血液試料である。
本明細書中、「血液試料」とは、被験者から得られた血液試料を指すが、全血に限定されず、血清、血漿等の血液成分分画、もしくはさらにアルブミン、イムノグロブリン等を除いた血液成分分画または血液製剤等をも含むものとする。
本明細書中、「前立腺がん」とは、前立腺において発生したがんを広く包含する概念であり、前立腺に発生した腺がんのみならず、扁平上皮がん、移行上皮がん、神経内分泌がん、未分化がん等をも包含する。好ましくは、前立腺がんは、前立腺に発生した腺がんである。
本明細書中、「被験者」とは、広く本発明の方法を用いた検査の対象となる体液試料を採取されるヒトをさすが、主として、男性ヒトであり、より具体的には、健康診断等の被験男性ヒト、あるいは前立腺がんの自覚症状（例えば、残尿感）、触診検査（前立腺のしこり等）、血清中等のＰＳＡ濃度検査（高値のＰＳＡ濃度等）等により、前立腺がんを発症していることが疑われる男性ヒトなどが含まれる。
（抗体）
本発明において使用する抗ＰＣＡ−１抗体は、ポリクローナル抗体であってもよいし、モノクローナル抗体であってもよい。さらに、「抗体」とは一般に、任意の抗体断片または誘導体、特に、実質的に同じ抗原特異性を示す前記モノクローナルまたはポリクローナル抗体の断片または誘導体を含む。後者は、抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’_２、ＣＤＲなど）、ヒト化抗体、多機能抗体、単鎖抗体（ＳｃＦｖ）などを含む。本発明に使用する抗体は、動物を免疫化し、血清（ポリクローナル）または脾臓細胞を回収すること（適切な細胞系との融合によるハイブリドーマの作製のため）を含む、従来の方法により作製することができる。
抗体のクラスは、特に限定されず、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥ等のいずれのアイソタイプを有する抗体をも包含する。好ましくは、ＩｇＧまたはＩｇＭであり、精製の容易性等を考慮すると、より好ましくはＩｇＧである。
マウス、げっ歯類、霊長類、ウマ、ブタ、ウサギ、家禽などを含む種々の種に由来するポリクローナル抗体の作製法は、例えばＶａｉｔｕｋａｉｔｉｓら（Ｖａｉｔｕｋａｉｔｉｓ、Ｒｏｂｂｉｎｓら、ＪＣｌｉｎＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌＭｅｔａｂ．３３（６）：９８８−９１，１９７１）に見いだすことができる。抗原をアジュバント（例えばフロイントのアジュバント）と合わせ、動物に、典型的には皮下注射により投与する。繰り返し注射してもよい。血液試料を回収し、免疫グロブリンまたは血清を単離する。
異なる種からモノクローナル抗体を作製する方法は、例えばＨａｒｌｏｗら（ＨａｒｌｏｗａｎｄＬａｎｅ（ｅｄ．），Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａｌａｂｏｒａｔｏｒｙｍａｎｕａｌ．ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙｐ．１３９−２８２．１９８８）またはＫｏｈｌｅｒら（ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎＮａｔｕｒｅ．２５６（５５１７）：４９５−７，１９７５）に見いだすことができる。この方法は、動物を抗原で免疫化し、その後、脾臓細胞を回収し、これをその後、骨髄腫細胞などの不死化細胞と融合することを含む。得られたハイブリドーマはモノクローナル抗体を生じ、限界希釈により選択して個々のクローンを単離することができる。抗体はまた、例えばＷａｒｄら（Ｗａｒｄ、ＧｕｓｓｏｗらＮａｔｕｒｅ．３４１（６２４２）：５４４−６，１９８９）に開示されているようなコンビナトリアル免疫グロブリンライブラリーの選択により作製することができる。
ＦａｂまたはＦａｂ’_２断片は、従来の方法によるプロテアーゼ（例えば、ペプシンまたはパパイン）を用いた消化により作製することができる。ヒト化抗体は、例えばＲｉｅｃｈｍａｎｎら（ＲｉｅｃｈｍａｎｎＪＭｏｌＢｉｏｌ．Ｏｃｔ５；２０３（３）：８２５−８，１９８８）、およびＪｏｎｅｓら（ＪｏｎｅｓらＮａｔｕｒｅ３２１：５２２−５２５，１９８６）に記載のような方法の１つにより調製することができる。
また、キメラ抗体は、例えば、「実験医学（臨時増刊号）、Ｖｏｌ．１．６，Ｎｏ．１０，１９８８」、特公平３−７３２８０号公報等を、ヒト化抗体は、例えば、「ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．１５，ｐ．１４６−１５６，１９９７」、「ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．７，ｐ．１３−２１，１９９４」、特表平４−５０４３６５号公報、国際出願公開ＷＯ９４・２５５８５号公報等、「日経サイエンス、６月号、第４０〜第５０頁、１９９５年」、「Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．３６８，ｐ．８５６−８５９，１９９４」、特表平６−５００２３３号公報等を参考にそれぞれ製造することができる。
（免疫アッセイ）
１．ＰＣＡ−１検出のためのアッセイ
本発明の実施に有用な免疫測定法の１つの態様では、被験者由来の体液試料と抗ＰＣＡ−１抗体とを接触させ、次いで、体液試料中のＰＣＡ−１と抗ＰＣＡ−１抗体との免疫複合体が検出される。
本発明の上記態様の免疫アッセイには、ウエスタンブロット法のような手法を用いた測定システムに限らず、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、サンドイッチ免疫測定法、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、時間分解蛍光免疫測定法（ＴＲＦＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、発光免疫測定法（ＬＩＡ）、電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬＩＡ）、ラテックス凝集法、免疫沈降アッセイ、沈降素反応法、ゲル拡散沈降素反応法、免疫拡散検定法、凝集素検定法、補体結合検定法、免疫放射分析検定法、蛍光免疫検定法、プロテインＡ免疫検定法等が使用され得る。このような手法では、通常、抗ＰＣＡ−１抗体は標識されており、標識の種類としては、例えば、蛍光基、発光基、フリーラジカル基、粒子、バクテリオファージ、細胞、金属、酵素、補酵素、ラジオアイソトープなどが挙げられる。
さらに、例えば、ＰＣＡ−１タンパク質に特異的に結合するポリペプチドのような抗体以外の薬剤がＰＣＡ−１タンパク質発現のレベルを測定するために使用され得る。
ＰＣＡ−１の発現を検出するための免疫測定は、代表的には、前立腺がんを有すると疑われるか、前立腺がんの危険性を有する被験体から採取した体液試料を、特異的抗原−抗体結合を生じさせる条件下で抗ＰＣＡ−１抗体と接触させ、次いで、抗体による免疫特異的結合量を測定することを包含する。特定の態様において、例えば、このような抗体の結合を使用して、ＰＣＡ−１タンパク質の存在および／または増大した発現が検出される。この場合、増大したＰＣＡ−１タンパク質発現の検出が疾病状態の指標となる。必要に応じて、体液試料中のＰＣＡ−１タンパク質のレベルを、前立腺がんを有しない健常者のレベルと比較してもよい。
上記免疫測定法の１つの態様では、血清試料などの体液試料を、試料中に存在する全部のタンパク質を固定する目的で、ニトロセルロースなどの固相支持体または担体と接触させる。次いで、この支持体を緩衝液で洗浄し、続いて検出可能に標識した抗ＰＣＡ−１抗体により処理する。次いで、この固相支持体を緩衝液で２回洗浄し、未結合抗体を除去する。固相支持体上の結合した抗体の量を、周知の方法に従って測定する。各測定に適する検出条件は、慣用的な試験方法を使用して当業者により適宜決定され得る。
抗ＰＣＡ−１抗体を検出可能に標識する方法の１つにおいて、当該抗体を、酵素、例えば、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）に使用されるもののような酵素に結合させる［Ｖｏｉｌｅｒ，Ａ．による「酵素標識した免疫吸着アッセイ」（“ＴｈｅＥｎｚｙｍｅＬｉｎｋｅｄＩｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔＡｓｓａｙ）（ＥＬＩＳＡ），１９７８，ＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＨｏｒｉｚｏｎｓ，２：１〜７，ＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌＡｓｓｏｃｉａｔｅｓＱｕａｒｔｅｒｌｙＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ．ＭＤ；Ｖｏｉｌｅｒ，Ａ．によるＪ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．，３１：５０７〜５２０，１９７８：Ｂｕｔｉｅｒ，Ｊ．Ｅ．によるＭｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，７３：４８２〜５２３，１９８１］。抗体に結合する酵素を、例えば分光光度測定により、可視手段による蛍光測定により検出することができる化学分子が生成されるような方法で、適当な基質、好ましくは色素原性基質と反応させる。抗体に検出可能な標識を付けるために使用することができる酵素は、ペルオキシダーゼおよびアルカリ性ホスファターゼを包含するが、これらに限定されない。この検出はまた、酵素に対する色素原性基質を用いる比色法により達成することができる。
抗ＰＣＡ−１抗体の検出はまた、その他の種々の方法を用いて行うことができる。一例として、抗体または抗体断片を放射性物質で標識することによって、放射線イムノアッセイ（ＲＩＡ）の使用によりＰＣＡ−１タンパク質発現を検出することができる［例えば、Ｗｅｉｎｔｒｓｕｂ，Ｂ．による放射線免疫検定の原理、ラジオリガンド検定技術に関する第７回トレーニングコース（ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＲａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ，ＳｅｖｅｎｔｈＴｒａｉｎｉｎｇＣｏｕｒｓｅｏｎＲａｄｉｏｌｉｇａｎｄＡｓｓａｙＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ），ＴｈｅＥｎｄｏｃｒｉｎｅＳｏｃｉｅｔｙ，１９８６年３月参照］。放射性同位元素は、ガンマカウンターまたはシンチレーションカウンターのような手段の使用により、もしくはオートラジオグラフイにより検出することができる。
抗体はまた、蛍光化合物により標識することができる。最も慣用の蛍光標識化合物の中には、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエワトリンおよびフルオレスカミンがある。同様に、生体発光性化合物を用いて、抗体ＰＣＡ−１抗体を標識することもできる。生体発光性タンパク質の存在は、蛍光の存在を検出することによって測定される。この標識目的に重要な生体発光性化合物は、ルシフェリン、ルシフェラーゼおよびイエクオリンである。
本発明の特定の態様において、体液試料中のＰＣＡ−１タンパク質の発現水準は、二次元電気泳動法により分析することができる。二次元ゲル電気泳動法は、当業者に公知である。血清試料などの体液試料を、第一段階で電荷に基づいてタンパク質を分離する等電点焦点化分離用電気泳動用ゲル上に装填する。不動化した勾配に基づく分離用のゲルストリップまたは担体両性電解質に基づく分離用の管状ゲルを包含する多数の第一段階ゲル標本を使用することができる。第一次分離後、タンパク質を第二段階ゲル上に移し、次いで平衡化し、次いでタンパク質をその分子量に基づいて分離するＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて分離する。異なる被験者から採取した血清試料を比較する場合、複数のゲルを各血清試料から調製する。
分離後、この第二段階ゲルからウエスタンブロティッング法に慣用の膜上にタンパク質を移す。ウエスタンブロティッング法および引き続くタンパク質の可視化はまた、当業者に周知である［Ｓａｍｂｒｏｏｋらによる「分子クローニング。実験指針」（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ．Ａｌａｂｏｒａｔｏｒｙｍａｎｕａｌ），第２版、第３巻、１９８９，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ］。標準的方法を用いることができ、またはこの方法を特定の種類のタンパク質、例えば高度に塩基性または酸性、もしくは脂質可溶性などの種類のタンパク質の同定にかかわり当該技術で知られているように修正することもできる［例えば、Ａｕｓｕｂｅｌらによる「分子生物学における現在の方法」（ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ），ＧｒｅｅｎＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＡｓｓｏｃｉａｔｅｓａｎｄＷｉｌｅｙＩｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．参照］。ＰＣＡ−１タンパク質に結合する抗体を、ウエスタンブロッティング分析法におけるようなインキュベーション工程に用いる。第一の抗体に対して特異性の第二の抗体をウエスタンブロッティング分析法で使用し、第一抗体と反応するタンパク質を可視化する。
２．抗ＰＣＡ−１自己抗体検出のためのアッセイ
本発明は、別の態様において、被験者の体液試料中の抗ＰＣＡ−１自己抗体を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量する方法を提供する。この本発明の方法は、前立腺がんの診断に使用することができる。さらに抗ＰＣＡ−１自己抗体レベルのモニタリングにより、前立腺がんの進行を予知することができる。
被験者からの体液試料中の抗ＰＣＡ−１自己抗体の検出は、任意の多くの方法で行うことができるが、代表的な方法には、免疫アッセイがあり、例えば、ウエスタンブロット法、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ、サンドイッチ免疫測定法、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、時間分解蛍光免疫測定法（ＴＲＦＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、発光免疫測定法（ＬＩＡ）、電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬＩＡ）、ラテックス凝集法、免疫沈降アッセイ、沈降素反応法、ゲル拡散沈降素反応法、免疫拡散検定法、凝集素検定法、補体結合検定法、免疫放射分析検定法、プロテインＡ免疫検定法等が挙げられる。
このようなイムノアッセイは、様々な方法で実施することができる。例えば、このようなアッセイを実施するための１つの方法は、ＰＣＡ−１タンパク質の固相支持体上への繋留、およびそれに対して特異的な抗ＰＣＡ−１抗体の検出を包含する。本発明のアッセイに用いられるＰＣＡ−１タンパク質は、当該分野において周知の組換えＤＮＡ技術によって調製し得る。例えば、ＰＣＡ−１タンパク質をコードするＤＮＡを適当な発現ベクター中に遺伝子組換え技術により導入して、ＰＣＡ−１タンパク質を大規模に発現することができる。好ましくは、ＰＣＡ−１の標識、固定化または検出を容易にすることができる融合タンパク質が遺伝子操作される（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．に記載された技術を参照）。別法として、ＰＣＡ−１タンパク質は天然の供給源から精製することができる。たとえば、当該分野において周知のタンパク質分離技術を用いて前立腺がん細胞から精製する。このような精製技術には、分子シーブクロマトグラフィーおよび／またはイオン交換クロマトグラフィーが包含されるが、これらに限定されない。実際にはＰＣＡ−１タンパク質の固体支持体としては、マイクロタイタープレートが好都合に使用される。
上記本発明のＰＣＡ−１検出のためのアッセイまたは抗ＰＣＡ−１自己抗体検出のためのアッセイは、単独で、前立腺がんの診断および／または予後評価等に使用し得る新たな方法であり得るが、本発明はそのような形態に限定されず、例えば、他の前立腺がんの診断方法と組み合わせて用いることで、診断の精度をさらに向上させることもできる。そのような他の前立腺がんの診断方法としては、触診検査、ＰＳＡ検査、前立腺がん生検試料を用いた病理検査（病理学的Ｔステージ）、グレーソン癌スコア、超音波検査、ＭＲＩ、ＣＴ、骨シンチ等が挙げられる。
（診断剤）
本発明はまた、１つの態様において、抗ＰＣＡ−１抗体を含有する、被験者の体液試料中のＰＣＡ−１タンパク質またはその断片を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量するための、前立腺がん診断剤を提供する。
さらに本発明は、ＰＣＡ−１遺伝子、ＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、またはその断片の塩基配列にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズ可能な塩基配列からなるポリヌクレオチドを含有する、被験者の体液試料中のＰＣＡ−１遺伝子、ＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、またはその断片を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量するための、前立腺がん診断剤を提供する。
本発明はさらに別の態様において、ＰＣＡ−１またはその断片を含有する、被験者の体液試料中の抗ＰＣＡ−１自己抗体を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量するための、前立腺がん診断剤を提供する。
本発明の診断剤は、被験者の体液試料（例えば、血液、尿）中の例えば、ＰＣＡ−１タンパク質、ＰＣＡ−１遺伝子、または抗ＰＣＡ−１自己抗体を検出するための成分を含有する。
（１）抗ＰＣＡ−１抗体を用いる診断剤
例えば、被験者の体液試料中のＰＣＡ−１タンパク質またはその断片がＥＬＩＳＡで検出および／または定量される場合、このような成分は、例えば、血液や尿のような体液試料中のＰＣＡ−１のレベルを検出および／または定量するために使用され得るＰＣＡ−１タンパク質のエピトープに向けられた抗体から構成される。抗体はそれ自体で検出可能なように放射能、蛍光、比色、または酵素標識で標識されていてもよい。
（２）核酸（またはヌクレオチド）プローブまたはプライマーを用いる診断剤
例えば、被検者の体液試料中のＰＣＡ−１遺伝子、ＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、またはその断片がプローブとのハイブリダイゼーションによって検出および／または定量される場合、このような成分は、例えば、ＰＣＡ−１遺伝子の塩基配列に基づいて設計されるプローブ又はプライマーから構成される。このようなプローブまたはプライマーは、配列番号１に示されるＰＣＡ−１遺伝子のヌクレオチド配列から、任意の数の適した（センスまたはアンチセンスの）プローブまたはプライマーを設計して得ることができる。このような診断剤を用いる診断は、具体的には、例えば、（ａ）被験者由来の体液試料と、ＰＣＡ−１遺伝子、ＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、またはその断片の塩基配列にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズ可能な塩基配列からなるポリヌクレオチド（プローブ）とを接触させる工程、および（ｂ）前記試料中での前記ポリヌクレオチドと、ＰＣＡ−１遺伝子、ＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、またはその断片とのハイブリダイゼーションを検出および／または定量する工程を包含する方法を実施することによって行われる。
本発明の診断剤を用いる診断方法では、被験者由来の生体試料中のＰＣＡ−１遺伝子のＤＮＡ（もしくはその断片）またはｍＲＮＡ（もしくはその断片）等を、上記プローブを使用して検出および／または定量する。プローブとして用いる塩基配列の長さは、例えば、１２塩基以上、１５塩基以上、１８塩基以上、２１塩基以上、２４塩基以上、２７塩基以上、３０塩基以上、またはさらに長い長さのポリヌクレオチド断片であり得る。
ハイブリダイゼーションは、公知の方法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキュラー・クローニング（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇＴｈｉｒｄＥｄｉｔｉｏｎ，Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂ．Ｐｒｅｓｓ．２００１）に記載の方法などに従って行うことができる。また、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行うことができる。ここで、「ストリンジェントな条件」は、低ストリンジェントな条件、中ストリンジェントな条件及び高ストリンジェントな条件のいずれでもよい。「低ストリンジェントな条件」は、例えば、５×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、３２℃の条件である。また、「中ストリンジェントな条件」は、例えば、５×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、４２℃の条件である。「高ストリンジェントな条件」は、例えば、５×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、５０℃の条件である。これらの条件において、温度を上げるほど高い相同性を有するＤＮＡが効率的に得られることが期待できる。ただし、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーに影響する要素としては温度、プローブ濃度、プローブの長さ、イオン強度、時間、塩濃度など複数の要素が考えられ、当業者であればこれら要素を適宜選択することで同様のストリンジェンシーを実現することが可能である。
なお、本明細書中、「ＰＣＡ−１遺伝子、ＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、またはその断片の塩基配列にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズ可能な塩基配列」には、ＰＣＡ−１遺伝子、ＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、またはその断片の塩基配列に相補的な塩基配列（アンチセンスＤＮＡ）も含まれるものとする。プローブおよび核酸のハイブリダイゼーションの方法は当業者に知られており、例えば国際公開公報第８９／０６６９８号、ＥＰ−Ａ０２００３６２、米国特許第２，９１５，０８２号、ＥＰ−Ａ００６３８７９、ＥＰ−Ａ０１７３２５１、ＥＰ−Ａ０１２８０１８に記載されている。
上記本発明の診断剤および診断方法を用いるに際しては、ＰＣＡ−１遺伝子、ＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、またはその断片に対する特異的プローブまたはプライマーを用いて、公知の手法を用いて標的配列を検出または定量することができる。そのような公知の手法として、例えば、サザンハイブリダイゼーション、ノーザンハイブリダイゼーション、ＲＴ−ＰＣＲ法、ＰＣＲ−ＳＳＣＰ法（Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，第５巻，８７４〜８７９頁（１９８９年））、ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓｏｆＡｍｅｒｉｃａ，第８６巻，２７６６〜２７７０頁（１９８９年））、ＦＩＳＨ法、ＤＮＡチップあるいはアレイＣＧＨ法などを用いることができる。定量的な検出は、定量ＲＴ−ＰＣＲによって実施可能である。
（３）ＰＣＡ−１抗原を用いる診断剤
例えば、自己抗体がＥＬＩＳＡによって検出および／または定量される場合、このような成分は、固相支持体に結合された少なくとも１種、好ましい複数種の異なるＰＣＡ−１抗原またはそれらのエピトープの形態における標的抗原、および標的抗原に結合する抗ＰＣＡ−１自己抗体を検出するための手段から構成される。このような検出手段は、例えば、抗ＰＣＡ−１自己抗体の定常部領域に向けられた抗体（例えば、ウサギ抗ヒトＩｇＧ抗体）であり、それ自体で検出可能なように標識されている（例えば、放射能、蛍光、比色、または酵素標識）か、または標識された二次抗体（例えば、ヤギ抗−ウサギ抗体）によって検出される。この診断剤は、上述の免疫学的手法により、前立腺がんマーカーを検出するために用いられる。
（キット）
本発明はまた、１つの態様において、抗ＰＣＡ−１抗体を含有する、被験者の体液試料中のＰＣＡ−１タンパク質またはその断片を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量するためのキットを提供する。このキットは、上述の免疫学的手法により、前立腺がんマーカーを検出するために用いられる。
さらに、本発明は別の態様において、ＰＣＡ−１遺伝子、ＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、またはその断片の塩基配列にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズ可能な塩基配列を含有する、被験者由来の体液試料中のＰＣＡ−１遺伝子、ＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、またはその断片を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量するためのキットをも提供する。このキットは、上述のハイブリダイゼーション法により、前立腺がんマーカーを検出するために用いられる。
さらに、本発明はさらに別の態様において、ＰＣＡ−１またはその断片を含有する、被験者の体液試料中の抗ＰＣＡ−１自己抗体を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量するためのキットを提供する。このキットは、上述の免疫学的手法により、前立腺がんマーカーを検出するために用いられる。
上記第一の態様のキットは、被験者からの体液試料中のＰＣＡ−１抗原を検出および／または定量する成分を含有する。例えば、ＰＣＡ−１タンパク質がＥＬＩＳＡで検出および／または定量される場合、このような成分は、例えば、血液や尿のような体液試料中のＰＣＡ−１のレベルを検出および／または定量するために使用され得るＰＣＡ−１タンパク質のエピトープに向けられた抗体から構成される。抗体はそれ自体で検出可能なように放射能、蛍光、比色、または酵素標識で標識されていてもよい。別法として、キットは、標識された二次抗体を含有していてもよい。
上記第二の態様のキットは、被験者からの体液試料中のＰＣＡ−１遺伝子もしくはその断片、または該遺伝子の転写産物（ｍＲＮＡ）もしくはその断片等を検出および／または定量する成分を含有する。このような成分は、例えば、ＰＣＡ−１遺伝子、ＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、またはその断片の塩基配列にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズ可能な塩基配列からなるポリヌクレオチドから構成される。例えば、本発明のキットは、ＤＮＡチップ上に固定された上記ポリヌクレオチドを含有し得る。
上記第三の態様のキットは、被験者からの体液試料中の抗ＰＣＡ−１自己抗体を検出および／または定量するために必要な成分を含有する。例えば、自己抗体がＥＬＩＳＡによって検出および／または定量される場合、このような成分は、固相支持体に結合された少なくとも１種、好ましい複数種の異なるＰＣＡ−１抗原またはそれらのエピトープの形態における標的抗原、および標的抗原に結合する抗ＰＣＡ−１自己抗体を検出するための手段から構成される。このような検出手段は、例えば、抗ＰＣＡ−１自己抗体の定常部領域に向けられた抗体（例えば、ウサギ抗ヒトＩｇＧ抗体）であり、それ自体で検出可能なように標識されている（例えば、放射能、蛍光、比色、または酵素標識）か、または標識された二次抗体（例えば、ヤギ抗−ウサギ抗体）によって検出される。
本発明のキットは、抗ＰＣＡ−１抗体、ＰＣＡ−１遺伝子、ＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、またはその断片の塩基配列にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズ可能な塩基配列からなるポリヌクレオチド、ＰＣＡ−１抗原または抗ＰＣＡ−１自己抗体に対する抗体等の他に、容器およびラベル等を含んでいてもよい。容器上のまたは容器に伴うラベルには、薬剤が前立腺がんマーカーの検出に使用されることが示されていてもよい。また、他のアイテム、例えば、使用説明書、標識二次抗体等がさらに含まれていてもよい。
以下、実施例を用いて本発明をより具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例によって限定されない。

（実施例１）
（質量分析装置を用いた血中ＰＣＡ−１の検出）
１．試料の前処理
（血球成分、アルブミン、ＩｇＧ等の除去）
前立腺がんの罹患者由来の血清は、採血直後の血液を室温で４０分間静置させた後、遠心分離によって血球成分を除去し調製した。検体サンプル（血清）１２．５μｌを、予め１００ｍＭ炭酸水素アンモニウムで平衡化したＢｌｕｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ６ＦａｓｔＦｌｏｗ樹脂（ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）５０μｌに加えて、穏やかに混合して静置した。５分後、１．５ｍｌのマイクロチューブにセットしたミニカラム（ＷｉｚａｒｄＭｉｎｉｃｏｌｕｍｎｓ，Ｐｒｏｍｅｇａ社）にＢｌｕｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ６ＦａｓｔＦｌｏｗ樹脂と一緒に移し、遠心分離によってアルブミンを分離除去した。
次に、１．５ｍｌマイクロチューブに回収された分画を、予め１００ｍＭ炭酸水素アンモニウムで平衡化したＰｒｏｔｅｉｎＧＳｅｐｈａｒｏｓｅ４ＦａｓｔＦｌｏｗ樹脂（ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）５０μｌに加えて、穏やかに混合して静置し、上記と同様の遠心分離を行って、ＩｇＧを分離除去した。
最終的に、これらの操作から得られた分画の液量は６５μｌ程度になった。
（トリプシン処理）
上記の処理から得られた分画から２５μｌを取り、２５μｌの１００ｍＭ炭酸水素アンモニウムと混合し、０．５μｇのトリプシンを加えて、３７℃で一晩保温をした。直ちに測定を行わない場合は、これを−８０℃で保存した。
２．血中ＰＣＡ−１の検出
本実施例においては、ＨＰＬＣで分離した試料中の成分をイオン化してその質量を計測するＨＰＬＣと結合した質量分析装置を用いた。具体的には、イオン源としてｎａｎｏＥＳＩイオン源およびガラスキャピラリーとしてＰｉｃｏＴｉｐｎｅｅｄｌｅ（本体内径２０μｍ、先端内径１０μｍ）（ＬＣＰａｃｋｉｎｇｓ社）を装備したイオントラップ型の液体クロマトグラフ質量分析装置（ＬＣ／ＭＳ）であるＨＣＴｐｌｕｓ（ブルーカー・ダルトニクス社）を、キャピラリー電圧１．２ｋＶ〜１．５ｋＶで使用した。プレカラムとして、０．１％蟻酸を含有する２％アセトニトリルで平衡化させた０．３×１０ｍｍカラムを、流速３０μＬ／分で使用した。本カラムとして、０．０７５×１５０ｍｍのカラムを２００ｎＬ／分の流速で使用した。試料の溶出液として、溶出液Ａ（０．１％蟻酸を含有する２％アセトニトリル）および溶出液Ｂ（０．１％蟻酸を含有する８０％アセトニトリル）を、以下のような勾配に従って使用した：０／０−５／０−９０／５０−９５／１００−１００／１００−１００．１／０−１２０／０（分／Ｂ％）。
上記質量分析装置のＬＣカラムの試料ホルダに、上記のようにトリプシン処理した試料をセットして、測定を開始した。
（結果）
図１は、上記ＬＣ−ＭＳ質量分析装置によりモニタリングした前立腺がんを有する被験者由来の血液サンプルの溶出プロファイルを示す。グラフの縦軸はイオン強度、そして横軸は保持時間に対応する。図示されるように、血液サンプル中にはトリプシン分解ペプチド断片のピークが多数存在している。当該前立腺がん患者の血液試料中にＰＣＡ−１が存在しているとすれば、これらのピークのいずれかはＰＣＡ−１由来のトリプシン分解ペプチド断片であるはずである。
本発明者らは、これらのピークの中にＰＣＡ−１に由来するペプチド断片のピークが存在しているか否かを確認するために、ＰＣＡ−１に特有のトリプシン分解ペプチド断片の質量をそのアミノ酸配列に基づいて算出し、その特定の質量を有するペプチド断片を選択的にモニタリングすることを試みた。
表１は、ｉｎｓｉｌｉｃｏでの算出により得られたＰＣＡ−１のトリプシン分解ペプチド断片（ペプチド質量６００以上）、ならびに予想される質量、予想される２価のイオン質量電荷比（ｍ／ｚ）、および各ペプチド断片のＰＣＡ−１アミノ酸配列中での位置を示す。
上記質量分析装置では、ＨＰＬＣから溶出されるペプチドの質量のみならず、そのペプチドをイオン化する際に当該ペプチドに過剰なエネルギーを与えることによってそのペプチドが開裂して生じる様々な長さの断片化ペプチド（開裂ペプチド）の質量も測定することができる。そして、これらの開裂ペプチドの質量の差を解析することによって、ペプチドを構成するアミノ酸配列を決定することができる。
一方、この原理を利用すれば、多数の異なる質量を有するペプチドの混合物の中から、アミノ酸配列の分かっている特定のペプチドを、そのアミノ酸配列の質量および当該ペプチドから生じ得る開裂ペプチドの質量とを用いて検出することができるはずである。すなわち、ＰＣＡ−１のトリプシン分解ペプチド断片のアミノ酸配列から予測される質量と、当該ペプチドから予測される開裂ペプチドの質量とを用いて、前立腺がん患者からの血液サンプル中にＰＣＡ−１に特有の配列を有する分子が存在するか否かを確認することができる。
そこで、表１に示されるＰＣＡ−１ペプチド断片の中から、ＰＣＡ−１のアミノ酸位置７５−８９位のペプチド断片：ＥＧＶＹＥＩＳＬＳＰＴＧＶＳＲ（配列番号：１０）およびアミノ酸位置１０−１９位のペプチド断片：ＶＱＧＡＷＡＡＰＶＫ（配列番号：１６）を任意に選び、これらの分子のアミノ酸配列から導かれる質量（それぞれ、１５９２．８０５および１０２５．５６６）からさらに予想される開裂ペプチドの質量を有する分子を選択的にモニタリングした。図２ＡおよびＢはその溶出プロファイルを示す。
図２Ａに示されるように、配列番号１０の質量から予測される２価時の質量電荷比７９７．４ｍ／ｚおよび当該ペプチドから生じ得る開裂ペプチドの１価時の質量電荷比７０３ｍ／ｚを選択的に捕捉するように測定条件を設定すると、保持時間６８分付近に単一の強いピーク（図中、矢印を付した）を観察した。これは、ＰＣＡ−１に特有の配列を有するペプチドが被検サンプル中に存在することを強く示唆する。また、図２Ｂに示されるように、配列番号１６の質量から予測される２価時の質量電荷比５１３．８ｍ／ｚおよび当該ペプチドから生じ得る開裂ペプチドの１価時の質量電荷比７９９ｍ／ｚを選択的に捕捉するように設定すると、保持時間６２分付近に単一の強いピーク（図中、矢印を付した）を観察した。これもまた、ＰＣＡ−１に特有の配列を有するペプチドが被検サンプル中に存在することを強く示唆する。
なお、比較のために、同じ被験者からのサンプルに対して、ＰＳＡに特有のペプチド：ＨＳＱＰＷＱＶＬＶＡＳＲ（表１の配列番号２９）の質量から予測される２価時の質量電荷比７０４．３ｍ／ｚおよび、当該ペプチドから生じ得る二つの開裂ペプチドの１価時の質量電荷比６９５ｍ／ｚおよび１０５５ｍ／ｚについて選択的にモニタリングした。その結果、６９５ｍ／ｚについては、保持時間５２分、５９分、および６４分付近にそれぞれピークが観察された（図２Ｃ）。また、１０５５ｍ／ｚについては、保持時間６４分付近に単一のピークを観察した（図２Ｄ）。これらから６４分付近のピーク（図中、矢印を付した）が２価時の質量電荷比７０４．３ｍ／ｚを持つＰＳＡ特有のペプチド（ＨＳＱＰＷＱＶＬＶＡＳＲ）であることを示し、それが被験者からの血液サンプル中に存在することを強く示唆する。
３．ＭＳＭＳによるデータ解析
上記の結果は、特定のアミノ酸残基の組み合わせから算出される質量を有する分子が存在することは示すが、特定の配列を有するペプチドが被検試料中に存在することを示すには、上記の結果だけでは不十分である。
そこで、さらに図２Ａで観察された単一のピーク（図中、矢印を付した）に対するＭＳＭＳのデータ解析を行った。結果を図３に示す。示されるように、ｙ５、ｙ６、ｙ７、ｙ８、ｙ９、ｙ１０等に強いシグナルが観察され、また、これらのシグナル間の幅の大きさから質量が推定され、それにより、その質量に相当するアミノ酸残基が決定された。その結果、少なくともＣ末端側からＰＳＬＳＩという部分配列を決定することができた。この配列は、配列番号１０のペプチド断片の一部と一致しており、これによって、配列番号１０のペプチド断片が被検サンプル中に存在したことが確認できた。
なお、上記ｙ５、ｙ６などの開裂イオンの名称は、次の化学式に示す方式に基づいている。
図４は、図２Ｂで観察された単一のピーク（図中、矢印を付した）に対するＭＳＭＳのデータ解析を示す。図４に示されるように、この場合には、適切な配列決定はできなかった。
図５は、比較のために、図２Ｃ及びＤで観察された保持時間６４分付近のピークに対するＭＳＭＳデータを示す。図５に示されるように、ｙ３、ｙ４、ｙ５、ｙ６、ｙ７、ｙ８、ｙ９、ｙ１０、ｙ１１等に強いシグナルが観察され、これらのシグナル間の幅の大きさから、質量が推定されるため、その質量に相当するアミノ酸残基が推定された。その結果、少なくともＣ末端側からＶＬＶＱＷＰＱＳという部分配列を決定することができた。これは、配列番号２９のペプチド断片の一部と一致しており、これにより、配列番号２９のペプチド断片が被検サンプル中に存在したことが確認できた。
図６は、図２に示す実験の比較例として、前処理およびトリプシン処理を施した健常者由来の血液試料について、図２に示す実験と同様の測定条件で特定の質量を有する分子のモニタリングを行った場合の溶出プロファイルを示す。図示されるように、特定の高強度のピークは観察されなかった。これは、健常者の血液試料中に予測されるＰＣＡ−１トリプシン分解ペプチド断片およびＰＳＡトリプシン分解ペプチド断片の質量に相当する質量を有する分子が、本発明者らの開発したＬＣ−ＭＳ質量分析装置による検出法では検出できないほど微量に存在するかもしくは存在しないことを示す。
このように、本発明者らの開発した、ＬＣ−ＭＳ質量分析装置による血液試料中の特定配列の検出方法により、ＰＣＡ−１が前立腺がん患者由来の血液中に存在すること、そして健常者の血液試料中には検出可能には存在しないことが示された。
このことは、ＰＣＡ−１が血中の前立腺がんマーカーとして、ＰＳＡと同様に使用され得ることを示す。さらに、この結果は、ＰＣＡ−１タンパク質自体が前立腺がん患者中で自己抗原になり得ること強く示唆するものである。それゆえＰＣＡ−１に対する自己抗体もまた、血中の前立腺がんマーカーとして使用し得ることも示すことを当業者は理解し得る。
（実施例２）
（ウエスタンブロッティングによる尿中ＰＣＡ−１の検出）
（手順）
尿検体１６μｌ（健常人２検体、前立腺がん患者２検体）を１２％ＮｕＰＡＧＥＮｏｖｅｘＢｉｓ−ＴｒｉｓＧｅｌならびにＮｕＰＡＧＥＮｏｖｅｘＢｉｓ−Ｔｒｉｓ電気泳動システム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を用いて電気泳動した。泳動後、セミドライブロティング装置（ＢｉｏＲａｄ）を用いてＰＶＤＦ（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｉｄｅｎｅｆｌｕｏｒｉｄｅ）膜（ＢｉｏＲａｄ）に蛋白質を転写した。ＰＶＤＦ膜は、３％ウシ血清アルブミン−リン酸緩衝生理食塩水を用いて４℃一昼夜ブロッキングした。ＴＢＳ−Ｔ（２０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、１３７ｍＭＮａＣｌ、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０）により３回洗浄後、抗ＰＣＡ−１ポリクローナル抗体（１μｇ／ｍｌ）とともに室温で１時間インキュベートし、ＴＢＳ−Ｔで３回洗浄した。抗原抗体結合を検出するために当該膜をＴＢＳ−Ｔで希釈した０．１μｇ／ｍｌＨＲＰ（Ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）架橋抗ウサギＩｇＧ（ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈ社製）中で室温１時間インキュベートした。ＴＢＳ−Ｔにて３回洗浄後、ＥＣＬＰｌｕｓＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇＤｅｔｅｃｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍ（ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）を用いて化学発光を惹起し、Ｌｉｇｈｔ−Ｃａｐｔｕｒｅ（ＡＴＴＯ社製）を用いてその化学発光を検出した。
（結果）
図７にその結果を示す。示されるように、前立腺がん患者の尿検体において、抗ＰＣＡ−１抗体により検出される顕著な単一バンドが認められた。マーカーを用いた解析により、その位置はＰＣＡ−１タンパク質の推定分子量に一致した。一方、健常人の尿においては１例で弱いながら前立腺がん患者の尿検体で検出されたバンドと同じ位置にバンドが認められたが、もう１例は検出限界以下であった。
このように、ＰＣＡ−１は、健常人の尿検体中ではわずかに検出されるのみかまたは実質的に検出されなかったが、前立腺がん患者由来の尿検体では顕著に検出された。この結果は、ＰＣＡ−１が尿中の前立腺がんマーカーとして使用し得ることを示す。

本発明は、前立腺がんの診断を、正確かつ迅速、簡易に行い得、また患者および医師の両方の負担を軽減し得る前立腺がんマーカーとして有用である。
［配列表］

Claims

被験者由来の体液試料中のＰＣＡ−１を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量する方法。
前記体液試料が、全血、血清、または血漿である、請求項１に記載の方法。
前記体液試料が、尿である、請求項１に記載の方法。
質量分析装置を用いて、ＰＣＡ−１を検出および／または定量する、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
抗ＰＣＡ−１抗体を用いて、ＰＣＡ−１を検出および／または定量する、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
前記体液試料と抗ＰＣＡ−１抗体とを接触させる工程、および
前記体液試料中のＰＣＡ−１と前記抗ＰＣＡ−１抗体との結合を検出および／または定量する工程
を包含する、請求項５に記載の方法。
前記検出および／または定量する工程が、標識された抗ＰＣＡ−１抗体を用いて、ＰＣＡ−１と抗ＰＣＡ−１抗体との結合を検出および／または定量することを包含する、請求項６に記載の方法。
ウエスタンブロット法、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、サンドイッチ免疫測定法、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、時間分解蛍光免疫測定法（ＴＲＦＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、発光免疫測定法（ＬＩＡ）、電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬＩＡ）、ラテックス凝集法、免疫沈降アッセイ、沈降素反応法、ゲル拡散沈降素反応法、免疫拡散検定法、凝集素検定法、補体結合検定法、免疫放射分析検定法、蛍光免疫検定法、およびプロテインＡ免疫検定法からなる群から選択される免疫測定法に従う、請求項５〜７のいずれかに記載の方法。
前立腺がんの診断に用いるための、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
抗ＰＣＡ−１抗体を含有する、被験者由来の体液試料中のＰＣＡ−１を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量するための、前立腺がん診断剤。
ＰＣＡ−１遺伝子、ＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、またはその断片の塩基配列にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズ可能な塩基配列からなるポリヌクレオチドを含有する、被験者由来の体液試料中のＰＣＡ−１遺伝子、ＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、またはその断片を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量するための前立腺がん診断剤。
前記体液試料が、全血、血清、または血漿である、請求項１０または１１に記載の診断剤。
前記体液試料が、尿である、請求項１０または１１に記載の診断剤。
抗ＰＣＡ−１抗体を含有する、被験者由来の体液試料中のＰＣＡ−１を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量するためのキット。
標識された抗ＰＣＡ−１抗体をさらに含有する、請求項１４に記載のキット
ウエスタンブロット法、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、サンドイッチ免疫測定法、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、時間分解蛍光免疫測定法（ＴＲＦＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、発光免疫測定法（ＬＩＡ）、電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬＩＡ）、ラテックス凝集法、免疫沈降アッセイ、沈降素反応法、ゲル拡散沈降素反応法、免疫拡散検定法、凝集素検定法、補体結合検定法、免疫放射分析検定法、蛍光免疫検定法、およびプロテインＡ免疫検定法からなる群から選択される免疫測定法に従って前記検出および／または定量を行うための、請求項１４または１５に記載のキット。
ＰＣＡ−１遺伝子、ＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、またはその断片の塩基配列にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズ可能な塩基配列からなるポリヌクレオチドを含有する、被験者由来の体液試料中のＰＣＡ−１遺伝子、ＰＣＡ−１ｍＲＮＡ、またはその断片を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量するためのキット。
前記体液試料が、全血、血清、または血漿である、請求項１４〜１７のいずれかに記載のキット。
前記体液試料が、尿である、請求項１４〜１７のいずれかに記載のキット
前立腺がんの診断に用いるための、請求項１４〜１９のいずれかに記載のキット
被験者由来の体液試料中の抗ＰＣＡ−１自己抗体を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量する方法。
前記体液試料が、全血、血清、または血漿である、請求項２１に記載の方法。
前記体液試料が、尿である、請求項２１に記載の方法。
ＰＣＡ−１抗原を用いて、前記抗ＰＣＡ−１自己抗体を検出および／または定量する、請求項２１〜２３のいずれかに記載の方法。
前記体液試料とＰＣＡ−１抗原とを接触させる工程、および
前記体液試料中の抗ＰＣＡ−１自己抗体とＰＣＡ−１抗原との結合を検出および／または定量する工程
を包含する、請求項２４に記載の方法。
前記検出および／または定量する工程が、抗ＰＣＡ−１自己抗体に対する標識された抗体を用いて、ＰＣＡ−１と抗ＰＣＡ−１自己抗体との結合を検出および／または定量することを包含する、請求項２５に記載の方法。
ウエスタンブロット法、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、サンドイッチ免疫測定法、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、時間分解蛍光免疫測定法（ＴＲＦＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、発光免疫測定法（ＬＩＡ）、電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬＩＡ）、ラテックス凝集法、免疫沈降アッセイ、沈降素反応法、ゲル拡散沈降素反応法、免疫拡散検定法、凝集素検定法、補体結合検定法、免疫放射分析検定法、蛍光免疫検定法、およびプロテインＡ免疫検定法からなる群から選択される免疫測定法に従う、請求項２１〜２６のいずれかに記載の方法。
前立腺がんの診断に用いるための、請求項２１〜２７のいずれかに記載の方法。
ＰＣＡ−１抗原を含有する、被験者由来の体液試料中の抗ＰＣＡ−１自己抗体を前立腺がんマーカーとして検出および／または定量するためのキット
抗ＰＣＡ−１自己抗体に対する標識された抗体をさらに含み、当該抗体を、前記ＰＣＡ−１抗原と前記抗ＰＣＡ−１自己抗体との結合を検出および／または定量するために利用する、請求項２９に記載のキット。
ウエスタンブロット法、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、サンドイッチ免疫測定法、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、時間分解蛍光免疫測定法（ＴＲＦＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、発光免疫測定法（ＬＩＡ）、電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬＩＡ）、ラテックス凝集法、免疫沈降アッセイ、沈降素反応法、ゲル拡散沈降素反応法、免疫拡散検定法、凝集素検定法、補体結合検定法、免疫放射分析検定法、蛍光免疫検定法、およびプロテインＡ免疫検定法からなる群から選択される免疫測定法に従って前記検出および／または定量を行うための、請求項２９または請求項３０に記載のキット。
前立腺がんの診断に用いるための、請求項２９〜３１のいずれかに記載のキット。