KR101484294B1 - 퀴놀론계 항균제 특이적 단일클론항체 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 퀴놀론계 항균제에 특이적으로 결합하는 단일클론항체, 상기 단일클론항체를 생산하는 하이브리도마 세포주, 상기 단일클론항체를 포함하는 퀴놀론계 항균제 검출용 키트 및 상기 단일클론항체를 이용하여 퀴놀론계 항균제를 검출하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 퀴놀론계 항균제에 특이적으로 결합하는 단일클론항체는 다른 계열의 항생제와 교차반응 없이, 엔로플록사신, 시플록사신, 사라플록사신, 디플록사신, 페플록사신, 노르플록사신을 포함하는 퀴놀론계 항균제에 폭넓게 결합할 수 있으므로 시료 내의 퀴놀론계 항균제를 매우 효과적으로 검출할 수 있다.

Description

퀴놀론계 항균제 특이적 단일클론항체{Quinolone-based antibiotics-specific monoclonal antibody}
본 발명은 퀴놀론계 항균제에 특이적으로 결합하는 단일클론항체에 관한 것이다.
최근 축산물이나 유가공 식품에 대한 수요가 점차 증가함에 따라 사육 규모가 계속 커지고 있다. 국내의 축산업계는 좁은 면적을 이용하여 밀집형 다두 사육의 형태로서 가축의 세균성 질병의 예방과 치료 및 성장촉진을 위해 항생물질 및 합성항균제의 사용량이 점차 많아지고 있는 실정이다. 이들 항생물질 및 합성 항균제의 오용 및 남용은 식육, 우유 및 계란에 축적 및 잔류 될 위험성을 내재하고 있으며 이를 섭취하는 사람에게 전이되어 과민반응을 일으키거나 항생제 내성균을 유발시키는 등 여러 가지 문제를 야기할 수 있다. 따라서, 국내에서는 식품공전에 사용 가능한 항생제의 종류 및 최대잔류허용한계 등을 법으로 정하여 국민 건강을 보호하는 정책을 수행하고 있다 (Kim CH, Baick SC, Moon JW 1997, J. Food Hyg. Safety 12:71-77).
퀴놀론(quinolone)계 항균제는 가축과 사람에 널리 사용되는 중요한 항균제 중 하나이다. 퀴놀론계 항균제는 그람 양성 세균과 그람 음성 세균 모두에 항균활성을 나타낼 수 있어 항균 범위가 넓은 장점이 있으므로, 닭과 소, 돼지 등의 식육용 가축에 널리 사용되고 있으나 이로 인하여 식육용 가축에 항생제가 잔류할 위험성이 있다. 식육용 가축에 잔류하는 항생 물질은 인간에게 사용되는 의약품에 대한 병원체의 내성을 유도할 수 있는 우려가 있으며, 실제로 퀴놀론계 항균제에 노출된 유아에서 중추신경에 영향을 미치는 부작용이 보고된 바 있다. 이와 같이 식육용 가축에 퀴놀론계 항균제가 잔류하는 것은 잠재적인 문제점으로 지적되고 있으며, 이를 모니터링하는 것은 식품안전성 검사에서 중요한 항목 중의 하나로 여겨지고 있다. 따라서 식육용 가축에서 퀴놀론계 항균제를 검출하기 위한 방법을 개발하기 위하여 많은 연구가 수행되고 있다.
체액을 포함한 동물 시료에서의 퀴놀론계 항균제를 크로마토그래피 방법으로 검출하기 위한 여러 가지 방법들이 보고되었으며, 대부분 형광이나 자외선 검출기, 부분적으로 질량분석기를 사용한 액체크로마토그래피를 이용하는 방법들을 사용한다. 상기 방법들은 유기용매와 수용성 용매를 사용하여 퀴놀론계 항균제를 추출한 다음 정제과정을 거친 후 크로마토그래피에 주입하여 분석하는 것이다. 용매를 이용하여 생체 시료에서 퀴놀론계 항균제를 추출할 경우에는 유화액(emulsion)이나 거품을 만들어 항생제의 분리와 정제를 어렵게 하기 때문에 세심한 주의가 필요하다. 또한 퀴놀론계 항균제의 종류에 따라 각기 다른 추출 방법과 정제방법을 사용해야 하기 때문에 번거로우며 다량의 유기용매를 소비하여 환경오염원 배출이 많다는 단점이 있다.
이처럼 시료 내에 잔류하고 있는 퀴놀론계 항균제를 보다 쉽게 검출하면서도 유기 용매에 의한 환경오염원 배출을 줄일 수 있는 새로운 검출 방법에 대한 필요성이 있으므로, 퀴놀론계 항균제에만 특이적으로 결합하여 더욱 신속하고 환경 오염없이 퀴놀론계 항균제를 검출할 수 있도록 하는 퀴놀론계 항균제에 특이적으로 결합하는 단일클론항체에 대한 연구가 필요하다.
본 발명자들은 퀴놀론계 항균제에 특이적으로 결합할 수 있는 항체에 관하여 연구하던 중, 조개혈색소 단백질과 엔로플록사신의 결합물질을 면역원으로 하여 제조된 단일클론항체가 다양한 퀴놀론계의 항균제에 특이적으로 결합할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명은 퀴놀론계 항균제에 특이적으로 결합하는 단일클론항체를 제공하고자 한다.
또한, 본 발명은 상기 퀴놀론계 항균제에 특이적으로 결합하는 단일클론항체를 생산하는 하이브리도마 세포주를 제공하고자 한다.
또한, 본 발명은 상기 단일클론항체를 포함하는 퀴놀론계 항균제 검출용 키트를 제공하고자 한다.
또한, 본 발명은 상기 단일클론항체를 이용하여 시료에서 퀴놀론계 항균제를 검출하는 방법을 제공하고자 한다.
본 발명은 퀴놀론계 항균제에 특이적으로 결합하는 단일클론항체를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 퀴놀론계 항균제에 특이적으로 결합하는 단일클론항체를 생산하는 하이브리도마 세포주를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 단일클론항체를 포함하는 퀴놀론계 항균제 검출용 키트를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 단일클론항체를 이용하여 시료에서 퀴놀론계 항균제를 검출하는 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 퀴놀론계 항균제에 특이적으로 결합하는 단일클론항체는 다른 계열의 항생제와 교차반응 없이, 엔로플록사신, 시플록사신, 사라플록사신, 디플록사신, 페플록사신, 노르플록사신을 포함하는 퀴놀론계 항균제에 폭넓게 결합할 수 있으므로 시료 내의 퀴놀론계 항균제를 매우 효과적으로 검출할 수 있다.
도 1은 본 발명의 엔로플록사신과 조개혈색소 단백질을 결합시켜 면역원을 제조하는 과정을 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명에 따른 엔로플록사신-조개혈색소 면역원을 마우스에 접종하여 항체를 생산하기 위한 면역 일정을 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명에 따른 엔로플록사신-조개혈색소 면역원으로 면역한 마우스의 엔로플록사신에 대한 반응 및 억제 여부 확인 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 선발된 클론에 의하여 생산되는 항체의 엔로플록사신에 의한 억제능을 나타낸 도이다.
본 발명은 antiENR1 하이브리도마 세포주(기탁번호: KCTC 12295BP)에 의해 생산되는, 조개혈색소 단백질(Keyhole limpet hemocyanin; KLH)과 엔로플록사신이 1:300 내지 1:400의 몰비로 결합된 결합물질을 면역원으로 하여 제조되는 퀴놀론계 항균제에 특이적으로 결합하는 단일클론항체를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 단일클론항체를 생산하는, antiENR1 하이브리도마 세포주(기탁번호: KCTC 12295BP)를 제공한다.
이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "단일클론항체"는 당해 분야에 공지된 용어로서, 단일 항원성 부위에 대해서 지시되는 고도의 특이적인 항체를 의미한다. 통상적으로, 상이한 결정기(epitope)들에 대해 지시되는 상이한 항체들을 포함하는 다클론항체와는 다르게, 단일클론항체는 항원상의 단일 결정기에 대해서 지시된다. 단일클론항체는 항원-항체 결합을 이용하는 진단 및 분석학적 분석법의 선택성과 특이성을 개선시키는 장점이 있으며, 융합 배양에 의해 합성되기 때문에 다른 면역글로불린에 의해 오염되지 않는 또 다른 장점을 갖는다. 상기 단일클론항체는 당업계에 널리 공지된 하이브리도마 방법(hybridoma method)(Kohler 및 Mislstein (1976) European Journal of Immunology 6:511-519 참조) 또는 파지 항체 라이브러리 (Clackson et al, Nature, 352:624-628, 1991 등 참조) 기술을 이용하여 제조될 수 있다. 일반적으로, 단일클론항체를 분비하는 하이브리도마 세포는 항원 단백질을 주사한 마우스와 같은 면역학적으로 적합한 숙주 동물로부터의 면역 세포와 암 세포를 융합함으로써 만들어진다. 이런 두 집단의 세포 융합은 폴리에틸렌글리콜과 같이 본 발명이 속하는 기술 분야에 공지되어 있는 방법을 이용하여 융합시키고 항체 생산 세포를 표준적인 배양 방법에 의해 증식시킨다. 한계 희석법(limited dilution)에 의한 서브 클로닝을 실시하여 균일한 세포 집단을 수득하고 난 뒤 항원에 특이적인 항체를 생산할 수 있는 하이브리도마 세포를 시험관 또는 생체 내에서 대량으로 배양한다.
본 발명의 단일클론항체는 정제하지 않고 사용할 수 있으나, 최선의 결과를 얻기 위해서는 본 발명이 속하는 기술분야에 잘 알려져 있는 방법에 따라 고순도(예컨대, 95% 이상)로 정제하여 사용하는 것이 바람직하다. 이러한 정제 기술로는, 예를 들어 겔 전기영동, 투석, 염 침전, 크로마토그래피 등이 포함될 수 있다.
본 발명의 단일클론항체는 엔로플록사신(Enrofloxacin), 시플록사신 (Ciprofloxacin), 사라플록사신(Sarafloxacin), 디플록사신(Difloxacin), 페플록사신(Pefloxacin), 노르플록사신(Norfloxacin), 다노플록사신(Danorfloxacin), 오플록사신(Ofloxacin), 마보플록사신(Marbofloxacin), 및 오비플록사신(Orbifloxacin)으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 퀴놀론계 항균제에 특이적으로 결합할 수 있으며, 이를 통해 시료 내의 퀴놀론계 항균제를 신속하게 검출하는데 이용할 수 있다.
본 발명의 항체는 조개혈색소 단백질(Keyhole limpet hemocyanin; KLH)과 엔로플록사신의 결합물질을 면역원으로 하여 마우스에 면역 접종함으로써 제조될 수 있다.
상기 조개혈색소 단백질과 엔로플록사신은 1:300 내지 1:400의 몰비, 바람직하게는 1:350의 몰비로 결합되는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명은 상기 단일클론항체를 포함하는 퀴놀론계 항균제 검출용 키트를 제공한다.
본 발명의 키트에는 본 발명의 단일클론항체뿐만 아니라, 퀴놀론계 항균제를 선별적으로 인지할 수 있는 한, 다른 항체, 예를 들어 다클론항체, 키메릭-항체, 인간화-항체, 또는 단일클론항체의 단편 등도 함께 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 키트에는 면역학적 분석에 사용되는 도구 및 시약이 포함될 수 있다. 상기 도구 및 시약으로는 담체, 검출 가능한 신호를 생성할 수 있는 표지 물질, 용해제, 세정제 등이 포함된다. 상기 표지 물질이 효소인 경우에는 효소 활성을 측정할 수 있는 기질 및 반응 정지제를 함께 포함할 수 있다. 상기 담체로는, 이에 한정되지는 않으나, 가용성 담체, 예를 들어 당 분야에 공지된 생리학적으로 허용되는 완충액, 예를 들어 인산염 완충액; 불용성 담체, 예를 들어 폴리스티렌, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리에스테르, 폴리아크릴로니트릴, 불소 수지, 가교 덱스트란, 폴리사카라이드, 라텍스에 금속을 도금한 자성 미립자와 같은 고분자, 기타 종이, 유리, 금속, 아가로오스 및 이들의 조합일 수 있다.
본 발명의 키트에 사용하기 위한 검정 시스템은, 이에 한정되는 것은 아니나, ELISA 플레이트, 딥-스틱 디바이스, 면역크로마토그래피 시험 스트립, 방사분할 면역검정 디바이스, 플로우-쓰로우(flowthrough) 디바이스 등을 포함한다.
또한, 본 발명은
(a) 상기 단일클론항체를 시료와 접촉시키는 단계; 및
(b) 퀴놀론계 항균제와 상기 단일클론항체가 결합하여 생성된 항원-항체 복합체의 형성을 확인하는 단계;를 포함하는, 퀴놀론계 항균제를 검출하는 방법을 제공한다.
상기 "시료"란 조직, 세포, 전혈, 혈청, 혈장, 조직 부검 시료(뇌, 피부, 림프절, 척수 등), 세포 배양 상등액, 파열된 진핵세포 및 세균 발현계 등을 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 시료는 인간, 토끼, 돼지, 쥐 등의 각종 동물로부터 채취할 수 있으며, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에서 사용된 용어 "항원-항체 복합체"는 시료 중의 퀴놀론계 항균제의 존재 또는 부재를 확인하기 위한, 퀴놀론계 항균제와 이를 인지하는 항체의 결합물을 의미한다. 바람직하게는, 상기 항원-항체 복합체는 퀴놀론계 항균제 및 본 발명에 따른 단일클론항체의 복합체이다.
상기 항원-항체 복합체의 형성을 확인하기 위하여, 효소면역분석법(ELISA), 웨스턴 블로팅(Western Blotting), 면역형광(Immunofluorescence), 면역조직화학염색(Immunohistochemistry staining), 유세포 분석법(Flow cytometry), 면역세포화학법, 방사능면역분석법(RIA), 면역침전분석법(Immunoprecipitation Assay), 면역확산분석법(Immunodiffusion assay), 보체 고정 분석법(Complement Fixation Assay), 단백질 칩(Protein Chip) 또는 키트 등에 의해 이루어질 수 있으며, 이로 제한되지는 않는다. 상기 효소면역흡착법(ELISA)에는 고체 지지체에 부착된 항원을 인지하는 표지된 항체를 이용하는 직접적 ELISA, 고체 지지체에 부착된 항원을 인지하는 항체의 복합체에서 포획 항체를 인지하는 표지된 이차 항체를 이용하는 간접적 ELISA, 고체 지지체에 부착된 항체와 항원의 복합체에서 항원을 인지하는 표지된 또 다른 항체를 이용하는 직접적 샌드위치 ELISA, 고체 지지체에 부착된 항체와 항원의 복합체에서 항원을 인지하는 또 다른 항체와 반응시킨 후 이 항체를 인지하는 표지된 2차 항체를 이용하는 간접적 샌드위치 ELISA 등 다양한 ELISA 방법을 포함한다.
항원-항체 복합체의 형성을 정성 또는 정량적으로 측정가능하게 하는 라벨에는 효소, 형광물, 리간드, 발광물, 미소입자(microparticle), 레독스 분자 및 방사선 동위원소 등이 있으며, 반드시 이로 제한되는 것은 아니다. 상기 효소에는 β-글루쿠로니다제, β-D-글루코시다제, β-D-갈락토시다제, 우레아제, 퍼옥시다아제, 알칼라인 포스파타아제, 아세틸콜린에스터라제, 글루코오스 옥시다제, 헥소키나제와 GDPase, RNase, 글루코오스 옥시다제와 루시퍼라제, 포스포프럭토키나제, 포스포에놀피루베이트 카복실라제, 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제, 포스페놀피루베이트 데카복실라제, β-라타마제 등이 있으며, 이로 제한되지 않는다. 형광물에는 플루오레신, 이소티오시아네이트, 로다민, 피코에리테린, 피코시아닌, 알로피코시아닌, o-프탈데히드, 플루오레스카민 등이 있으며, 이로 제한되지 않는다. 리간드에는 바이오틴 유도체 등이 있으며, 이로 제한되지 않는다. 상기 발광물에는 아크리디늄 에스테르, 루시페린, 루시퍼라아제 등이 있으며, 이로 제한되지 않는다. 상기 미소입자에는 콜로이드 금, 착색된 라텍스 등이 있으며, 이로 제한되지 않는다. 상기 레독스 분자에는 페로센, 루테늄 착화합물, 바이올로젠, 퀴논, Ti 이온, Cs 이온, 디이미드, 1,4-벤조퀴논, 하이드로퀴논, K4W(CN)8, [Os(bpy)3]2+, [RU(bpy)3]2+, [MO(CN)8]4- 등이 있으며, 이로 제한되지 않는다. 상기 방사성 동위원소에는 3H, 14C, 32P, 35S, 36Cl, 51Cr, 57Co, 58Co, 59Fe, 90Y, 125I, 131I, 186Re 등이 있으며, 이로 제한되지 않는다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1 . 면역원의 제조
1.1 조개혈색소 단백질 및 엔로플록사신 결합물질의 제조
퀴놀론계 항균물질 중 엔로플록사신(enrofloxacin; ENR)을 담체 단백질인 조개혈색소 단백질(Keyhole limpet hemocyani; KLH)과 결합하여 면역원을 제조하였다. NHS(N-hydroxysuccinimide)를 촉매제로 사용하여 도 1의 과정을 통해 엔로플록사신-조개혈색소 단백질 면역원을 제조하였다. 제작된 면역원을 컬럼에 통과시켜 분자 크기별로 1차 분리하였다. 컬럼을 통과시켜 크기가 큰 담체 단백질이 먼저 컬럼을 통과하고, 크기가 작은 엔로플록사신이 나중에 빠져나오도록 한 후, 흡광도 측정을 통해 컬럼을 통과한 물질을 확인하였다. 엔로플록사신은 322nm, 담체 단백질인 조개혈색소 단백질은 595nm에서 흡광도를 확인하였다.
결과를 표 1에 나타내었다.
Figure 112012099544198-pat00001
표 1에 나타낸 바와 같이, 3번째 용액에서 엔로플록사신과 조개혈색소 단백질의 두 가지 흡광을 모두 확인할 수 있었다. 따라서 3번째 용액에 엔로플록사신-조개혈색소 단백질 결합물질이 존재하는 것을 확인하였으며, 해당 용액을 엔로플록사신은 통과시키고 엔로플록사신-조개혈색소 단백질 결합물질은 필터에 결합시킬 수 있는 정제 필터를 이용하여 다시 한번 정제하였다.
1.2. 엔로플록사신 - 조개혈색소 단백질 결합 비율 확인
상기 실시예 1.1에서 얻어진 엔로플록사신-조개혈색소 단백질 결합물질의 결합 비율을 측정하였다. 엔로플록사신은 특이파장인 322nm에서 흡광도를 측정하여 몰수를 구했으며, 조개혈색소 단백질의 경우 단백질에 결합하는 형광물질을 검출하여 정량하는 방법(Qubit system, invitrogen)을 이용하여 결합물질 내 단백질만의 농도를 측정하여 분자량(66,430 Da)으로 나누어 계산하는 방법을 이용하여 측정하였다.
결과를 표 2에 나타내었다.
처음농도(M) 최종농도(M) 결합비율(Coupling density)
(Mole of ENR/Mole of KLH)
ENR KLH ENR KLH 이론적 실제반응
5.6x10-6
(2mg)		 6.3x10-10
(5mg)		 1.2x10-7 3.3x10-10 8,916 353
표 2에 나타낸 바와 같이, 엔로플록사신-조개혈색소 단백질은 약 350 대 1의 몰 비율로 결합하였다.
실시예 2 . 퀴놀론계 항균제 특이적 항체의 제조
실시예 1에서 얻어진 엔로플록사신-조개혈색소 단백질 결합물질을 면역원으로 하여, 도 2에 나타낸 면역 일정에 따라 5마리의 6주령 Balb/c 마우스에 면역원을 개체 당 100㎍씩 복강 투여하였다.
엔로플록사신에 대해 특이적으로 반응한 마우스의 비장세포와 SP2/0를 혼합시킨 후 클론화된 상층액에서 엔로플록사신 면역된 마우스를 실험실에서 합성한 엔도플록사신-BSA(bovine serum albumin)를 이용하여 확인하였다.
결과를 도 3에 나타내었다.
도 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 엔로플록사신-조개혈색소 면역원으로 면역한 마우스는 엔로플록사신에 대해 반응을 나타내고, 억제되는 것을 확인하였으며, 제조된 항체는 이형판별(Isotyping) 결과 IgG1 형 항체임을 확인하였다.
실시예 3 . 퀴놀론계 항균제 특이적 결합 여부 확인
제조된 클론에서 얻어지는 항체의 친화성과 엔로플록사신에 대한 억제능을 확인하고, 퀴놀론계 항균제인 엔로플록사신(Enrofloxacin), 시플록사신 (Ciprofloxacin), 사라플록사신(Sarafloxacin), 디플록사신(Difloxacin), 페플록사신(Pefloxacin) 및 노르플록사신(Norfloxacin)에도 특이적으로 결합할 수 있는지 여부를 확인하기 위하여, 흡광도를 측정하였다.
결과를 도 4 및 표 3에 나타내었다.
항생제 억제능 (%)
퀴놀론계 엔로플록사신 96.5
시플록사신 95.7
사라플록사신 89.3
디플록사신 94.9
페플록사신 76.0
노르플록사신 72.4
술폰아미드 0.0
테트라사이클린 0.0
페니실린 0.0
클로람페니콜 0.0
도 4에 나타낸 바와 같이, 선발 클론이 생산하는 항체는 엔로플록사신의 농도별로 억제능을 나타내며, 기존의 항체에 비하여 친화성이 높은 항체임을 확인하였다.
또한 표 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 항체는 다른 계의 항생제인 술폰아미드(Sulfonamides), 테트라사이클린(Tetracyclines), 페니실린(Penicillins), 클로람페니콜 (Chloramphenicol)에는 억제능을 나타내지 않고, 퀴놀론계 항균제인 엔로플록사신(Enrofloxacin), 시플록사신(Ciprofloxacin), 사라플록사신 (Sarafloxacin), 디플록사신(Difloxacin), 페플록사신(Pefloxacin) 및 노르플록사신(Norfloxacin)에서는 매우 우수한 억제능을 나타냄을 확인하였다. 특히, 본 발명의 항체는 새로운 퀴놀론계 항균제인 엔로플록사신, 시플록사신, 노르플록사신의 공통적인 구조 외에도 사라플록사신, 디플록사신, 페플록사신 등 총 여섯개의 퀴놀론계 항균제에서 모두 특이적 억제 반응을 나타내었다.
따라서, 본 발명의 항체는 다른 계열의 항생제와 교차반응 없이 퀴놀론계 항균제에만 특이적으로 결합함으로써, 시료 내 퀴놀론계 항균제의 검출에 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.
한국생명공학연구원 KCTC12295BP 20121023

Claims (8)

  1. antiENR1 하이브리도마 세포주(기탁번호: KCTC 12295BP)에 의해 생산되는,
    조개혈색소 단백질(Keyhole limpet hemocyanin; KLH)과 엔로플록사신이 1:300 내지 1:400의 몰비로 결합된 결합물질을 면역원으로 하여 제조되는 퀴놀론계 항균제에 특이적으로 결합하는 단일클론항체.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 퀴놀론계 항균제는 엔로플록사신(Enrofloxacin), 시플록사신(Ciprofloxacin), 사라플록사신(Sarafloxacin), 디플록사신(Difloxacin), 페플록사신(Pefloxacin), 노르플록사신(Norfloxacin), 다노플록사신 (Danorfloxacin), 오플록사신(Ofloxacin), 마보플록사신(Marbofloxacin), 및 오비플록사신(Orbifloxacin)으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 항균제인 것을 특징으로 하는 단일클론항체.
  3. 조개혈색소 단백질(Keyhole limpet hemocyanin; KLH)과 엔로플록사신이 1:300 내지 1:400의 몰비로 결합된 결합물질을 면역원으로 하여 제조되는 퀴놀론계 항균제에 특이적으로 결합하는 단일클론항체를 생산하는, antiENR1 하이브리도마 세포주(기탁번호: KCTC 12295BP).
  4. 제 1항의 단일클론항체를 포함하는 퀴놀론계 항균제 검출용 키트.
  5. (a) 제 1항의 단일클론항체를 인체에서 분리된 시료와 접촉시키는 단계; 및
    (b) 퀴놀론계 항균제와 상기 단일클론항체가 결합하여 생성된 항원-항체 복합체의 형성을 확인하는 단계;를 포함하는, 퀴놀론계 항균제를 검출하는 방법.
  6. 제 5항에 있어서, 상기 (a) 단계에서 시료는 조직, 세포, 전혈, 혈청, 혈장, 뇌척수액, 세포 배양 상등액, 축산물 및 유가공품으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 퀴놀론계 항균제를 검출하는 방법.
  7. 제 5항에 있어서, 상기 (b) 단계에서 퀴놀론계 항균제는 엔로플록사신 (Enrofloxacin), 시플록사신(Ciprofloxacin), 사라플록사신(Sarafloxacin), 디플록사신(Difloxacin), 페플록사신(Pefloxacin), 노르플록사신(Norfloxacin), 다노플록사신(Danorfloxacin), 오플록사신(Ofloxacin), 마보플록사신(Marbofloxacin), 및 오비플록사신(Orbifloxacin)으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 퀴놀론계 항균제를 검출하는 방법.
  8. 제 5항에 있어서, 상기 (b) 단계에서 항원-항체 복합체의 형성 확인은 효소면역분석법(ELISA), 웨스턴 블로팅(Western Blotting), 면역형광 (Immunofluorescence), 면역조직화학염색(Immunohistochemistry staining), 유세포 분석법(Flow cytometry), 면역세포화학법, 방사능면역분석법(RIA), 면역침전분석법 (Immunoprecipitation Assay), 면역확산분석법(Immunodiffusion assay), 보체 고정 분석법(Complement Fixation Assay), 단백질 칩(Protein Chip)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 방법으로 확인하는 것을 특징으로 하는, 퀴놀론계 항균제를 검출하는 방법.
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