KR101298651B1 - 효능이 강화된 혈관신생 억제용 약제학적 조성물 - Google Patents
효능이 강화된 혈관신생 억제용 약제학적 조성물 Download PDFInfo
- Publication number
- KR101298651B1 KR101298651B1 KR1020110023211A KR20110023211A KR101298651B1 KR 101298651 B1 KR101298651 B1 KR 101298651B1 KR 1020110023211 A KR1020110023211 A KR 1020110023211A KR 20110023211 A KR20110023211 A KR 20110023211A KR 101298651 B1 KR101298651 B1 KR 101298651B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- formula
- chemical formula
- hydroxy
- pharmaceutical composition
- chemical
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
- A61K31/18—Sulfonamides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
- C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D215/38—Nitrogen atoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C311/00—Amides of sulfonic acids, i.e. compounds having singly-bound oxygen atoms of sulfo groups replaced by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
- C07C311/15—Sulfonamides having sulfur atoms of sulfonamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings
- C07C311/20—Sulfonamides having sulfur atoms of sulfonamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings having the nitrogen atom of at least one of the sulfonamide groups bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C311/00—Amides of sulfonic acids, i.e. compounds having singly-bound oxygen atoms of sulfo groups replaced by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
- C07C311/15—Sulfonamides having sulfur atoms of sulfonamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings
- C07C311/21—Sulfonamides having sulfur atoms of sulfonamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings having the nitrogen atom of at least one of the sulfonamide groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
- C07C2601/12—Systems containing only non-condensed rings with a six-membered ring
- C07C2601/14—The ring being saturated
Abstract
본 발명은 혈관신생-관련 질병 또는 질환의 예방 또는 치료에 효과적으로 이용될 수 있는 혈관신생 억제용 약제학적 조성물 및 신규한 설포닐 아마이드 유도체 화합물에 관한 것이다.
본 발명의 약제학적 조성물에서 유효성분으로 이용되는 화합물은 UQCRB에 특이적으로 결합하여 이의 생물학적 기능을 억제하기 때문에, 세포사멸을 유도하지 않으면서 혈관신생 반응(angiogenic responses)을 억제하여 효과적이면서도 안전한 혈관생성 억제제로서 유용하게 이용될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물에서 유효성분으로 이용되는 화합물은 UQCRB에 특이적으로 결합하여 이의 생물학적 기능을 억제하기 때문에, 세포사멸을 유도하지 않으면서 혈관신생 반응(angiogenic responses)을 억제하여 효과적이면서도 안전한 혈관생성 억제제로서 유용하게 이용될 수 있다.
Description
본 발명은 UQCRB(ubiquinol-cytochrome c reductase binding protein)를 타겟으로 하는 신규한 합성 저분자화합물을 유효성분으로 하는 혈관신생 억제용 약제학적 조성물에 관한 것이다.
혈관신생은 많은 고형암의 진행에 있어서 핵심적인 과정이기 때문에, 혈관신생의 억제는 종양의 성장과 전이를 차단하는 강력한 방법으로 간주된다. 결과적으로, VEGFR(vascular endothelial growth factor receptor), MMP(matrix metalloproteinases), 아미노펩티다아제, 히스톤 디아세틸라아제 및 칼모둘린을 포함하는 혈관신생의 몇몇 특정 타겟 단백질이 동정되었으며, 이들의 특정 타겟에 대한 억제활성에 기반하여 다양한 스캐폴드의 항-혈관신생 의약이 개발되었다. 본 발명자들은 최근 곰팡이 대사산물로부터 비사이클로 세스테르테르펜(sesterterpene) 구조를 가지는 신규한 혈관신생 억제제인 테르페스타신(terpestacin)을 분리하였다. 테르페스타신의 항-혈관신생 활성과 관련된 분자적 기작을 조사하기 위하여, 본 발명자들은 역화학 프로테오믹스(reverse chemical proteomics) 방법을 통하여 테르페스타신의 세포결합 단백질을 동정하였다. 테르페스타신은 MRC(mitochondrial respiratory chain)에서 복합체 Ⅲ의 13.4-kDa 서브유닛(UQCRB)에 특이적으로 결합한다. 최근의 보고는 미토콘드리아 복합체에서의 ROS(reactive oxygen species)의 생성이 저산소 상태 기간동안 HIF-1a (hypoxia-inducible factor-1a)의 안정화를 촉발한다. 실제로, UQCRB에 결합하는 테르페스타신은 저산소-유도 ROS 생성을 억제하여 결과적으로 미토콘드리아 호흡 및 복합체 Ⅲ의 기능적 구조를 붕괴시키지 않으면서 HIF-1a 및 종양 혈관신생을 억제한다(14). 또한, UQCRB 발현의 조절은 단백질이 미토콘드리아 ROS-매개 시그널링을 경유하는 저산소-유도 종양 혈관신생에서의 중요한 매개자임을 보여준다. 이러한 발견은 미토콘드리아 복합체 Ⅲ에서 UQCRB를 타겟팅하는 저분자화합물이 호흡 독소로 작용하지 않으면서 종양 혈관신생을 억제한다는 사실을 시사한다. 이에, 본 발명자들은 UQCRB의 기능을 특이적으로 조절하는 새로운 저분자화합물을 개발하고자 하였다.
본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
본 발명자들은 세포독성이 없으면서 효과적으로 혈관신생을 억제하는 항-혈관신생제를 개발하고자 예의 연구노력하였다. 그 결과, 혈관신생에 대한 새로운 분자 타겟인 미토콘드리아 복합체 Ⅲ의 유비퀴논-결합 단백질인 UQCRB(ubiquinol-cytochrome c reductase binding protein)를 타겟으로 하는 신규한 합성 저분자화합물을 발굴하였으며, 이 화합물은 UQCRB에 결합하여, 혈관신생을 효과적으로 차단함을 확인함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서 본 발명의 목적은 혈관신생 억제용 약제학적 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 신규한 설포닐 아마이드 유도체 화합물을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 하기의 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 혈관신생 억제용 약제학적 조성물을 제공한다:
화학식 1
상기 화학식에서, R1은 (A1은 직쇄 또는 분쇄의 C1-C6 알킬, 비치환되거나 직쇄 또는 분쇄의 C1-C6 알킬 또는 할로겐으로 치환된 페닐 또는 비치환되거나 직쇄 또는 분쇄의 C1-C6 알킬 또는 할로겐으로 치환된 나프탈릴이다)이고, R2는 (B1-B5은 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 히드록시, 니트로 또는 C1-C6 알킬), 하이드록시 나프탈릴, 4-하이드록시벤질 C1-C3 알킬, 4-(2-하이드록시에틸)사이클로헥실 또는 비치환되거나 직쇄 또는 분쇄의 C1-C6 알킬, 할로겐 또는 하이드록시기로 치환된 퀴놀린이다.
본 발명자들은 세포독성이 없으면서 효과적으로 혈관신생을 억제하는 항-혈관신생제를 개발하고자 예의 연구노력하였다. 그 결과, 혈관신생에 대한 새로운 분자 타겟인 미토콘드리아 복합체 Ⅲ의 유비퀴논-결합 단백질인 UQCRB(ubiquinol-cytochrome c reductase binding protein)를 타겟으로 하는 신규한 합성 저분자를 발굴하였으며, 이 화합물은 UQCRB에 결합하여, 혈관신생을 효과적으로 차단함을 확인하였다.
본 발명의 조성물은 “혈관신생 억제용 약제학적 조성물”로 표현되며, 이는 “혈관신생-관련 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물” 또는 “비조절 혈관신생-관련 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물”로 표현될 수도 있다.
본 발명의 약제학적 조성물에서 유효성분으로 이용되는 화합물은 화학식 1로 표시된다. 본 발명의 화합물은 기본적으로 설포닐 아마이드(sulfonyl amide) 백본(backbone)을 가진다.
본 명세서에서 용어“알킬”은 비치환 또는 치환된 포화 탄화수소기를 의미하며, 예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 이소부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 노닐, 데실, 운데실, 트리데실, 펜타데실 및 헵타데실 등을 포함한다. 직쇄 또는 분쇄 C1-C6 알킬은 탄소수 1 내지 4의 알킬 유니트를 가지는 직쇄(strait chain) 또는 분쇄(branched chain)의 알킬기를 의미하며, C1-C6 알킬이 치환된 경우 치환체의 탄소수는 포함되지 않은 것이다.
본 명세서에서 용어“하이드록시벤질알킬”은 하이드록시벤질(페놀)로 치환된 알킬기를 의미한다. 화학식 1에서, R2 위치의“4-하이드록시벤질 C1-C3 알킬”은 하이드록시기가 파라(para) 위치에 치환된 페닐기로 치환된 탄소수 1 내지 3의 알킬 유니트를 의미한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 화학식 1의 R1의 A1은 메틸, 에틸, 페닐, 또는 tert-부틸이다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 화학식 1의 R2의 B1은 수소, 염소, 플루오르, 하이드록시, 니트로 또는 메틸이다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 화학식 1의 R2의 하이드록시 나프탈릴은 7-하이드록시 나프탈릴이다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 화학식 1의 R2의 퀴놀린은 8-하이드록시 퀴놀린이다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 화합물은 하기의 화학식 2 내지 29로 표시되는 화합물로 구성된 군으로부터 선택된다:
화학식 2 화학식 3
화학식 4 화학식 5
화학식 6 화학식 7
화학식 8 화학식 9
화학식 10 화학식 11
화학식 12 화학식 13
화학식 14 화학식 15
화학식 16 화학식 17
화학식 18 화학식 19
화학식 20 화학식 21
화학식 22 화학식 23
화학식 24 화학식 25
화학식 26 화학식 27
화학식 28 화학식 29
보다 바람직하게는, 본 발명의 화합물은 상기의 화학식 5, 6, 12, 17, 21, 23 및 24로 표시되는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명에 따르면, 상기 나열한 7가지 화합물은 HIF-1α 단백질 수준에 있어서 낮은 IC50 값을 가진다. 따라서 이들은 혈관신생과 관련된 다양한 질환의 효과적인 치료 조성물로 이용될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물에 의해 예방 또는 치료될 수 있는 질병, 질환 또는 상태는 혈관신생과 관련된 다양한 질환을 포함한다. 바람직하게는, 본 발명의 약제학적 조성물은 암, 당뇨병성 망막증, 미숙아 망막증, 각막 이식 거부, 신생혈관 녹내장, 홍색증, 증식성 망막증, 건선, 혈우병성 관절, 아테롬성 동맥경화 플라크 내에서의 모세혈관 증식, 켈로이드, 상처 과립화, 혈관 접착, 류마티스 관절염, 골관절염, 자가면역 질환, 크론씨병, 재발협착증, 아테롬성 동맥경화, 장관 접착, 캣 스크래치 질환, 궤양, 간경병증, 사구체신염, 당뇨병성 신장병증, 악성 신경화증, 혈전성 미소혈관증, 기관 이식 거부, 신사구체병증, 당뇨병, 염증 또는 신경퇴행성 질환의 비조절성 혈관신생-관련 질병 또는 질환의 예방 또는 치료에 이용된다.
본 발명의 조성물에 의해 예방 또는 치료될 수 있는 자가면역질환은 알로페시아 그레아타(alopecia greata), 강직성 척추염, 항인지질 증후군, 자가면역 아디슨 질환, 부신의 자가면역 질환, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 자가면역 난소염 및 고환염, 자가면역 혈소판감소증, 베체트병, 수포성 유천포창, 심근병증,복강 스프루우-피부염(celiac sprue-dermatitis), 만성 피로 면역이상 증후군, 만성염증성 탈수초 다발성 신경병증, Churg-Strauss 증후군, 반흔성유천포창, CREST 증후군, 한냉 응집소 질환, 크론씨병, 원판성 낭창, 복태성복합한냉글로불린혈증, 섬유근통-섬유근염, 사구체신염, 그레이브스 질환, 귈레인 바레 증후군, 하시모토 갑상선염, 특발성 폐섬유화증, 특발성 혈소판 감소성 자반증, IgA 신경염, 연소자성 관절염, 편평태선, 홍반성 루푸스, 메니에르병, 혼합성 연결 조직 질환, 다발성 경화증, 타입 I 또는 면역-매개 당뇨병, 중증근무력증, 심상성 천포창, 악성 빈혈, 결정성 다발동맥염, 다발연골염, 자가면역성 다선 증후군, 류마티스 다발성근통, 다발성 근염과 피부근염, 일차성 무감마글로불린혈증, 일차성 담증성 간경변, 건선, 건선성 관절염, 레이노 현상, 라이터 증후군, 류마티스 관절염, 사르코이드증, 공피증, 강직인간 증후군, 전신성 홍반성 루푸스, 홍반성 루푸스, 다가야스 동맥염, 일시적 동맥염, 거대세포 동맥염, 궤양성 대장염, 포도막염, 백반증 및 베게너 육아종증을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 조성물에 의해 예방 또는 치료될 수 있는 염증성 질환의 예는, 천식, 엔세필리티스(encephilitis), 염증성 장염, 만성 폐쇄성 폐질환, 알러지, 폐혈병성 쇼크증, 폐섬유증, 미분화 척추관절증, 미분화 관절병증, 관절염, 염증성 골용해 및 만성 바이러스 또는 박테리아 감염에 의한 만성 염증을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
보다 바람직하게는, 본 발명의 약제학적 조성물에 의해 예방 또는 치료될 수 있는 질환은 암, 당뇨병성 망막증 또는 증식성 망막증이다. 가장 바람직하게는, 상기 증식성 망막증은 연령관련황반변성이다.
바람직하게는, 본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 1일 투여량은 예컨대 0.001-100 ㎎/㎏이다.
본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 하기의 화학식 2 내지 4, 8, 9, 11 내지 13, 15, 16 내지 20, 22 내지 24, 26, 28 및 29로 표시되는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 설포닐 아마이드(sulfonyl amide) 유도체를 제공한다:
화학식 2 화학식 3
화학식 4 화학식 8
화학식 9 화학식 11
화학식 12 화학식 13
화학식 15 화학식 16
화학식 17 화학식 18
화학식 19 화학식 20
화학식 22 화학식 23
화학식 24 화학식 26
화학식 28 화학식 29
본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:
(a) 본 발명은 혈관신생-관련 질병 또는 질환의 예방 또는 치료에 효과적으로 이용될 수 있는 혈관신생 억제용 약제학적 조성물 및 신규한 설포닐 아마이드 유도체 화합물을 제공한다.
(b) 본 발명의 약제학적 조성물에서 유효성분으로 이용되는 화합물은 UQCRB에 특이적으로 결합하여 이의 생물학적 기능을 억제하기 때문에, 세포사멸을 유도하지 않으면서 혈관신생 반응(angiogenic responses)을 억제하므로, 약물의 안전성을 크게 개선한다.
도 1은 DPCN 유사체의 합성 전략을 나타낸 그림이다. DPCN은 UQCRB을 타겟팅하는 신규 저분자화합물로서, UQCRB의 산소감지 기능을 조절함으로써 항-혈관신생 활성을 보인다. DPCN과 UQCRB의 결합형태를 분석함으로써, 보다 강력한 혈관신생 억제 효능을 가지는 DPCN 유도체들을 합성하였다.
도 2는 HIF-1α 단백질 축적에 대해 합성 유도체들이 미치는 효과를 나타낸 그림이다. HepG2 세포에 합성 유도체들을 지시된 농도로 30분간 전처리하고 1% O2에 4시간 동안 노출시켰다. HIF-1α 및 튜불린 단백질 수준은 웨스턴 블롯팅 분석으로 측정하였다. HepG2 세포에 A1893 및 A1938를 처리하자 저산소-유도 HIF-1 α 단백질 축적이 크게 감소하였다.
도 3은 선정된 화합물과 UQCRB 간의 상호작용을 분석한 결과를 나타낸 그림이다. 화합물의 UQCRB에 대한 결합을 분석하기 위하여 SPR 분석을 수행하였다. 대조군 바이오틴 및 바이오틴화된 테르페스타신(BT)을 순차적으로 스트렙타비딘-코팅 센서 칩의 표면에 고정시키고 명확한 결합 친화도를 바이오틴화된 테르페스타신에 결합하는 UQCRB의 공명 값에서 대조군 바이오틴에 결합하는 UQCRB의 공명 값을 뺌으로써 계산하였다. 경쟁결합 분석을 위하여, 화합물들을 각각 UQCRB 단백질과 함께 배양하고, 복합체들을 센서 칩의 유세포(flow cell)에 주입하였다. UQCRB의 BT에 대한 결합 친화도는 화합물들과 UQCRB 단백질을 함께 배양함으로써 크게 감소하였으며, 이에 의하여 A1893 및 A1938가 UQCRB에 직접적으로 결합한다는 사실을 확인하였다.
도 4는 A1893 및 A1938이 인 비트로 혈관신생에 미치는 효과를 나타낸 그림이다. 영양부족(serum-starved) HUVEC에 A1893 또는 A1938을 첨가하거나 첨가하지 않은 채 VEGF(30 ng/mL)를 처리하고 인 비트로 혈관신생 분석을 수행하였다. 도 4a는 A1893 및 A1938의 상피세포 침투에 대한 억제활성을 나타낸 그림이다. 도 4b는 A1893 및 A1938가 HUVEC의 관-형성 능력에 미치는 영향을 나타낸 그림이다. A1893 및 A1938는 상피세포의 생존성에 영향을 미치지 않으면서 VEGF-유도 침투 및 HUVEC의 관 형성을 억제한다.
도 5는 A1893 및 A1938가 미토콘드리아 ROS 형성에 미치는 영향을 나타낸 그림이다. 세포내 ROS 수준은 DCF 형광으로 측정하였다. HepG2 세포는 화합물로 30분간 전처리하고 1% O2에 10분간 동안 노출시켰다. A1893 및 A1938은 저산소-유도 미토콘드리아 ROS 생성을 억제하였으며, 이에 의하여 A1893 및 A1938가 UQCRB의 산소감지 기능을 조절한다는 사실을 확인하였다.
도 2는 HIF-1α 단백질 축적에 대해 합성 유도체들이 미치는 효과를 나타낸 그림이다. HepG2 세포에 합성 유도체들을 지시된 농도로 30분간 전처리하고 1% O2에 4시간 동안 노출시켰다. HIF-1α 및 튜불린 단백질 수준은 웨스턴 블롯팅 분석으로 측정하였다. HepG2 세포에 A1893 및 A1938를 처리하자 저산소-유도 HIF-1 α 단백질 축적이 크게 감소하였다.
도 3은 선정된 화합물과 UQCRB 간의 상호작용을 분석한 결과를 나타낸 그림이다. 화합물의 UQCRB에 대한 결합을 분석하기 위하여 SPR 분석을 수행하였다. 대조군 바이오틴 및 바이오틴화된 테르페스타신(BT)을 순차적으로 스트렙타비딘-코팅 센서 칩의 표면에 고정시키고 명확한 결합 친화도를 바이오틴화된 테르페스타신에 결합하는 UQCRB의 공명 값에서 대조군 바이오틴에 결합하는 UQCRB의 공명 값을 뺌으로써 계산하였다. 경쟁결합 분석을 위하여, 화합물들을 각각 UQCRB 단백질과 함께 배양하고, 복합체들을 센서 칩의 유세포(flow cell)에 주입하였다. UQCRB의 BT에 대한 결합 친화도는 화합물들과 UQCRB 단백질을 함께 배양함으로써 크게 감소하였으며, 이에 의하여 A1893 및 A1938가 UQCRB에 직접적으로 결합한다는 사실을 확인하였다.
도 4는 A1893 및 A1938이 인 비트로 혈관신생에 미치는 효과를 나타낸 그림이다. 영양부족(serum-starved) HUVEC에 A1893 또는 A1938을 첨가하거나 첨가하지 않은 채 VEGF(30 ng/mL)를 처리하고 인 비트로 혈관신생 분석을 수행하였다. 도 4a는 A1893 및 A1938의 상피세포 침투에 대한 억제활성을 나타낸 그림이다. 도 4b는 A1893 및 A1938가 HUVEC의 관-형성 능력에 미치는 영향을 나타낸 그림이다. A1893 및 A1938는 상피세포의 생존성에 영향을 미치지 않으면서 VEGF-유도 침투 및 HUVEC의 관 형성을 억제한다.
도 5는 A1893 및 A1938가 미토콘드리아 ROS 형성에 미치는 영향을 나타낸 그림이다. 세포내 ROS 수준은 DCF 형광으로 측정하였다. HepG2 세포는 화합물로 30분간 전처리하고 1% O2에 10분간 동안 노출시켰다. A1893 및 A1938은 저산소-유도 미토콘드리아 ROS 생성을 억제하였으며, 이에 의하여 A1893 및 A1938가 UQCRB의 산소감지 기능을 조절한다는 사실을 확인하였다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예
화합물의 제조
하기의 합성 모식도의 2번 반응물(아민 유도체)을 테트라하이드로퓨란 0.1M 용액에서 1번 반응물(설폰클로라이드 유도체)를에 넣어 상온에서 교반하고 트라이에틸아민을 첨가해 실온에서 12시간 교반하였다. 이후 에틸아세테이트로 여과한 뒤 감압 농축하였다. 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼 크로마토 그래피 방법 또는 재결정 방법을 통하여 3번 생성물을 얻었다.
합성 모식도
상기 합성 모식도에 기초한 본 발명의 화합물들의 예시적인 제조예를 A2060(바이페닐-4-설포닉 액시드 [2-(4-하이드록시-페닐)-에틸]-아미드의 제조)의 예를 들어 기술하면 아래와 같다:
바이페닐-4-설포닐 클로라이드(1, 300mg, 1.19mmol)의 테트라하이드로퓨란 0.1M에 4-(2-아미노에틸)페놀(2, 217mg, 1.25mmol)와 트라이에틸아민(497ml, 3.57mmol)을 교반 상태에서 주입한후 12시간 상온에서 교반하였다. 생성 혼합물을 에틸아세테이트를 이용해서 여과시킨 후, 감압농축하였다. 얻어진 혼합물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 방법 (용출제 - 헥세인:에틸아세테이트 = 1:5)으로 정제하거나 또는 에틸알콜을 이용하여 재결정하였다. 목적화합물을 25%의 수득율(104mg, 0.29mmol)로 얻었다.
500 MHz, DMSO-d6, δ 9.18 (s, 1H), 7.86 (q, 4H, J= 9.0 Hz), 7.74 (d, 3H, J= 8.5 Hz), 7.51 (t, 2H, J= 7.5 Hz), 7.44 (t, 1H, J= 7.5 Hz), 6.94 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 6.64 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 2.92 (t, 2H, J= 9.3 Hz), 2.58 (t, 2H, J= 7.5 Hz) ESI (m/z) 354.10 (M+), 376.10 (MNa+)
그 밖의 본 발명의 화합물은 모두 상술한 합성 모식도 및 대표 제조예와 동일한 방법으로 제조하였으며, 이들의 분광학적 데이터는 표 1에 기재하였다.
KBH-A-Nr | IUPAC 명칭 | LC/MS | 1H NMR |
A1882 | N-(7-하이드록시-나프탈렌-1-일)-4-메틸-벤젠설폰아미드 | ESI (m/z) 314.00 (M+), 355.00 (MAc+) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 7.86 (d, 1H, J= 2.5 Hz), 7.75 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 7.69 (d, 2H, J= 9.0 Hz), 7.46 (d, 2H, J= 8.0 Hz), 7.22 (t, 1H, J= 7.7 Hz), 7.06 (d, 1H, J= 8.0 Hz), 6.93 (dd, 1H, J= 2.5, 9.0 Hz), 6.69 (d, 1H, J= 7.5 Hz), 5.76 (s, 2H), 2.41 (s, 3H) |
A1883 | 나프탈렌-2-설포닉 액시드 (7-하이드록시-나프탈렌-1-일)-아미드 | ESI (m/z) 350.00 (M+), 391.00 (MAc+) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 8.59 (s, 1H), 8.21 (t, 2H, J= 9.0 Hz), 8.11 (d, 1H, J= 8.0 Hz), 7.92-7.89 (m, 2H), 7.78 (t, 1H, J= 7.2 Hz), 7.70 (t, 1H, J= 7.2 Hz), 7.65 (t, 1H, J= 8.5 Hz), 7.20 (t, 1H, J= 7.7 Hz), 7.03 (d, 1H, J= 8.0 Hz), 6.92 (dd, 1H, J= 2.3, 8.8 Hz), 6.67 (d, 1H, J= 7.5 Hz), 5.74 (s, 2H) |
A1891 | 4-에틸-N-(7-하이드록시-나프탈렌-1-일)-벤젠설폰아미드 | ESI (m/z) 328.00 (M+), 369.00 (MAc+) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 7.87 (d, 1H, J= 2.5 Hz), 7.80-7.78 (m, 2H), 7.70 (d, 1H, J= 9.0 Hz), 7.49 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 7.22 (t, 1H, J= 7.8 Hz), 7.07 (d, 1H, J= 8.0 Hz), 6.95 (dd, 1H, J= 2.0, 9.0 Hz), 6.70 (d, 1H, J= 7.5 Hz), 2.76 (s, 2H), 2.70 (q, 2H, J= 7.5 Hz), 1.19 (t, 3H, J= 7.7 Hz) |
A1893 | 4-터트-부틸-N-(4-하이드록시-페닐)-벤젠설폰아미드 | ESI (m/z) 347.00 (MAc+) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 9.73 (s, 1H), 9.28 (s, 1H), 7.59 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 7.54 (d, 2H, J= 9.0 Hz), 6.86 (d, 2H, J= 9.0 Hz), 6.59 (d, 2H, J= 9.0 Hz), 1.26(s, 9H) |
A1938 | 바이페닐-4-설포닉 액시드 (4-하이드록시-페닐)-아미드 | APCI (m/z) 326.00 (M+) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 9.80 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 7.83 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.72 (t, J = 7.9 Hz, 4H), 7.49 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.42 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.61 (d, J = 8.8 Hz, 2H). |
A1958 | 4-터트-부틸-N-(8-하이드록시-퀴놀린-5-일)-벤젠설폰아미드 | ESI (m/z) 357.00 (M+) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 10.28 (s, 1H), 8.99 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 8.71 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.80 (dd, J = 8.4, 4.9 Hz, 1H), 7.50 (s, 4H), 7.31 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 1.25 (s, 9H). |
A1959 | 나프탈렌-2-설포닉 액시드 (8-하이드록시-퀴놀린-5-일)-아미드 | ESI (m/z) 351.00 (M+) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 10.37 (s, 1H), 8.96 (d, 1H, J= 5.0 Hz), 8.85 (d, 1H, J= 7.0 Hz), 8.20 (s, 1H), 8.11 (d, 2H, J= 9.0 Hz), 8.04 (t, 2H, J= 7.8 Hz), 7.76 (dd, 1H, J= 1.7, 8.8 Hz), 7.70 (t, 2H , J= 8.0 Hz), 7.62 (t, 1H, J= 7.5 Hz), 7.15 (d, 1H, J= 8.5 Hz), 7.02 (d, 1H, J= 8.0 Hz) |
A1961 | 바이페닐-4-설포닉 액시드 (8-하이드록시-퀴놀린-5-일)-아미드 | ESI (m/z) 376.95 (M+) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 10.23 (s, 1H), 8.94 (d, 1H , J= 4.0 Hz), 7.82 (d, 2H, J= 9.0 Hz), 7.77 - 7.67 (m, 4H), 7.50 (t, 3H, J= 8.0 Hz), 7.47 - 7.42 (m, 3H), 7.16 (d, 1H, J= 8.0 Hz), 7.11 (d, 1H, J= 8.0 Hz) |
A1999 | 4-터트-뷰틸-N-(3-하이드록시-페닐)-벤젠설폰아미드 | ESI (m/z) 306.05 (M+) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 10.16 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 7.70 (d, 1H, J= 8.3 Hz), 7.57 (d, 2H, J= 8.0 Hz), 6.97 (t, 1H, J= 8.0 Hz), 6.60 (s, 1H), 6.53 (d, 1H, J= 8.0 Hz), 6.38 (d, 1H, J= 8.0 Hz), 1.26 (s, 9H) |
A2000 | 4-터트-부틸-N-(2-클로로-4-하이드록시-페닐)-벤젠설폰아미드 | ESI (m/z) 340.05 (M+_1), 342.05 (M++1), 381.05 (MAc+_1), 383.05 (MAc++1) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 7.71 (q, 4H, J= 9.0 Hz), 6.77 (t, 1H, J= 1.2 Hz), 6.68 (d, 2H, J= 1.5 Hz), 5.51 (s, 2H), 1.30 (s, 9H) |
A2001 | 바이페닐-4-설포닉 액시드 (2-클로로-4-하이드록시-페닐)-아미드 | ESI (m/z) 360.00 (M+), 401.00 (MAc+) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 7.97 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 7.89 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 7.78 (d, 2H, J= 7.5 Hz), 7.53 (t, 2H, J= 7.5 Hz), 7.47 (q, 1H, J= 7.0 Hz), 6.56 (d, 1H, J= 2.0 Hz), 6.72 - 6.68 (m, 2H), |
A2002 | 나프탈렌-2-설포닉 액시드 (2-클로로-4-하이드록시-페닐)-아미드 | ESI (m/z) 334.05 (M+_1), 336.05 (M++1), 374.95 (MAc+_1), 376.95 (MAc++1) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 8.54 (s, 1H), 8.23-8.21 (m, 2H), 8.12 (d, 1H, J= 8.0 Hz), 7.83 (dd, 1H, J= 2.0, 8.5 Hz), 7.79 (t, 1H, J= 7.5 Hz), 7.71 (tm, 1H, J- 7.5 Hz), 6.91 (s, 1H), 6.62 (s, 2H), 5.49 (s, 2H) |
A2003 | 4-터트-뷰틸-N-(3-클로로-4-하이드록시-페닐)-벤젠설폰아미드 | ESI (m/z) 340.05 (M+_1), 342.05 (M++1), 381.05 (MAc+_1), 383.05 (MAc++1) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 7.76 (d, 2H, J= 9.0 Hz), 7.68 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 6.93 (d, 1H, J= 9.0 Hz), 6.56 (d, 1H, J= 2.5 Hz), 6.45 (dd, 1H, J= 2.5, 9.0 Hz), 5.53 (s, 2H), 1.26 (s, 9H) |
A2006 | 4-터트-뷰틸-N-(3,5-다이클로로-4-하이드록시-페닐)-벤젠설폰아미드 | ESI (m/z) 373.95 (M+_1), 375.95 (M++1), 415.00 (MAc+_1), 417.05 (MAc++1) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 7.87 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 7.71 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 6.60 (s, 2H), 5.82 (s, 2H), 1.32 (s, 9H) |
A2007 | 4-터트-뷰틸-N-(2-플루오로-4-하이드록시-페닐)-벤젠설폰아미드 | ESI (m/z) 324.00 (M+), 365.05 (MAc+) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 7.74 (d, 2H, J= 9.0 Hz), 7.67 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 6.69 (dd, 1H, J= 2.5, 11.5 Hz), 6.94 (t, 1H, J= 9.5 Hz), 6.53 (dd, 1H, J= 2.5, 9.0 Hz), 5.29 (s, 2H), 1.26 (s, 9H) |
A2008 | 바이페닐-4-설포닉 액시드 (2-플루오로-4-하이드록시-페닐)-아미드 | ESI (m/z) 344.00 (M+), 385.05 (MAc+) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 7.96 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 7.87 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 7.78 (d, 2H, J= 7.0 Hz), 7.53 (t, 2H, J= 7.1 Hz), 7.47 (t, 1H, J= 7.2 Hz), 6.78 (dd, 1H, J= 2.5, 11.5.0 Hz), 6.64 (t, 1H, J= 8.5 Hz), 6.57 (d, 1H, J= 9.0 Hz), 5.31 (s, 2H) |
A2009 | 나프탈렌-2-설포닉 액시드 (2-플루오로-4-하이드록시-페닐)-아미드 | ESI (m/z) 318.00 (M+), 359.05 (MAc+) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 8.53 (s, 1H), 8.22- 8.20 (m, 2H), 8.11 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 7.83 (d, 2H, J= 7.5 Hz), 7.79 (t, 1H, J= 7.5 Hz), 7.71 (t, 1H, J= 7.5 Hz), 6.76 (dd, 1H, J= 2.3, 11.8 Hz), 6.59 (t, 1H, J= 9.5 Hz), 6.50 (d, 1H, J= 9.0 Hz), 5.27 (s, 2H) |
A2010 | 4-터트-부틸-N-(3-플루오로-4-하이드록시-페닐)-벤젠설폰아미드 | ESI (m/z) 324.00 (M+), 346.00 (MNa+) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 7.75 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 7.69 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 6.71 (t, 1H, J= 9.5 Hz), 6.52 (dd, 1H, J= 2.5, 13.0 Hz), 6.26 (dd, 1H, J= 2.5, 9.0 Hz), 5.54 (s, 2H), 1.31 (s, 9H) |
A2013 | 나프탈렌-2-설포닉 액시드 (3-나이드로-4-하이드록시-페닐)-아미드 | ESI (m/z) 345.00 (M+), 367.05 (MNa+) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 8.51 (s, 1H), 8.23 - 8.21 (m, 2H), 8.12 (d, 1H, J= 8.0 Hz), 7.82 - 7.76 (m, 2H), 7.72 (t, 1H, J= 7.5 Hz), 7.05 (d, 1H, J= 2.5 Hz), 6.73 (d, 1H, J= 9.0 Hz), 6.68 (dd, 1H, J= 2.5, 9.0 Hz), 5.92 (s, 1H), 3.36 (s, 1H) |
A2033 | 바이페닐-4-설포닉 액시드 (3-하이드록시-페닐)-아미드 | 500 MHz, DMSO-d6, δ 7.95 (q, 4H, J= 24.5 Hz), 7.77 (d, 2H, J= 7.0 Hz), 7.67 (d, 1H, J= 8.5 Hz), 7.61 (d, 1H, J= 8.0 Hz), 7.53 (t, 3H, J= 8.3 Hz), 7.48 (t, 2H, J= 7.2 Hz), 7.17 (dd, 1H, J= 2.8, 9.2 Hz), 6.98 (d, 1H, J= 9.5 Hz) | |
A2037 | 4-터트-뷰틸-N-(2-나이트로-4-하이드록시-페닐)-벤젠설폰아미드 | ESI (m/z) 351.00 (M+), 373.05 (MNa+) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 7.78 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 7.69 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 7.55 (s, 2H), 7.32 (d, 1H, J= 3.0 Hz), 7.16 (dd, 1H, J= 2.8, 9.0 Hz), 6.98 (d, 1H, J= 9.0 Hz), 1.30 (s, 9H) |
A2038 | 바이페닐-4-설포닉 액시드 (2-나이트로-4-하이드록시-페닐)-벤젠설폰아미드 | ESI (m/z) 371.00 (M+), 393.00 (MNa+) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 7.94 (q, q, 4H, J= 25.3 Hz), 7.78 (d, 2H, J= 7.5 Hz), 7.53 (t, 2H, J= 7.5 Hz), 7.47 (t, 1H, J= 7.5 Hz), 6.95 (t, 1H, J= 8.0 Hz), 6.45 (d, 1H, J= 9.0 Hz), 6.30 (s, 1H), 6.08 (d, 1H, J= 5.5 Hz), 5.40 (s, 2H) |
A2040 | 바이페닐-4-설포닉 액시드 (4-하이드록시-3-메틸-페닐)-아미드 | ESI (m/z) 340.05 (M+), 381.10 (MAc+) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 9.73 (s, 1H), 9.19 (s, 1H), 7.83 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 7.74 - 7.70 (m, 4H), 7.49 (t, 2H, J= 7.2 Hz), 7.42 (t, 1H, J= 6.8 Hz), 6.79 (s, 1H), 6.70 (d, 1H, J= 8.5 Hz), 6.60 (d, 1H, J= 8.5 Hz), 1.9 (s, 3H) |
A2041 | 바이페닐-4-설포닉 액시드 (4-하이드록시-3-메틸-페닐)-아미드 | ESI (m/z) 340.05 (M+), 381.10 (MAc+) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 7.97 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 7.92 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 7.77 (d, 2H, J= 7.5 Hz), 7.68 - 7.66 (m, 3H), 7.61 (d, 2H, J= 8.0 Hz), 7.66 (t, 2H, J= 7.6 Hz), 7.37 (t, 1H, J= 7.6 Hz). 2.17 (s, 3H) |
A2043 | 바이페닐-4-설포닉 액시드 (3,5-다이클로로-4-하이드록시-페닐)-아미드 | ESI (m/z) 393.95 (M+_1), 395.90 (M++1), 415.90 (MAc+_1), 417.95 (MAc++1) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 8.01 (q, 4H, J= 8.5 Hz), 7.79 (d, 2H, J= 7.0 Hz), 7.54 (t, 2H, J= 7.5 Hz), 7.48 (t, 1H, J= 7.0 Hz), 6.63 (s, 2H), 5.84 (s, 2H) |
A2044 | 나프탈렌-3-설포닉 액시드 (3,5-다이클로로-4-하이드록시-페닐)-아미드 | ESI (m/z) 367.95 (M+_1), 369.95 (M++1), 389.80 (MNa+_1), 391.90 (MNa++1) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 8.67 (s, 1H), 8.27 (d, 1H, J= 8.5 Hz), 8.22 (d, 1H, J= 8.5 Hz), 8.12 (d, 1H, J= 8.5 Hz), 7.95 (d, 1H, J= 8.5 Hz), 7.79 (t, 1H, J= 7.5 Hz), 7.72 (t, 1H, J= 7.5 Hz), 6.59 (s, 2H), 5.83 (s, 2H) |
A2060 | 바이페닐-4-설포닉 액시드 [2-(4-하이드록시-페닐)-에틸]-아미드 | ESI (m/z) 354.10 (M+), 376.10 (MNa+) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 9.18 (s, 1H), 7.86 (q, 4H, J= 9.0 Hz), 7.74 (d, 3H, J= 8.5 Hz), 7.51 (t, 2H, J= 7.5 Hz), 7.44 (t, 1H, J= 7.5 Hz), 6.94 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 6.64 (d, 2H, J= 8.5 Hz), 2.92 (t, 2H, J= 9.3 Hz), 2.58 (t, 2H, J= 7.5 Hz) |
A2069 | 나프탈렌-2-설포닉 액시드 [4-(2-하이드록시-에틸)-싸이틀로헥실]-아미드 | ESI (m/z) 334.15 (M+), 356.10 (MNa+) | 500 MHz, DMSO-d6, δ 8.43 (s, 1H), 8.15 (d, 1H, J= 8.0 Hz), 8.12 (d, 1H, J= 9.0 Hz), 8.03 (d, 1H, J= 8.0 Hz), 7.88 - 7.82 (m, 1H), 7.71 - 7.65 (m, 3H), 4.27 - 4.23 (m, 1H), 3.18 (s, 1H), 3.38 - 3.30 (m, 2H), 1.57 (t, 2H, J= 13.2 Hz), 1.40 - 1.30 (m, 6H), 1.21 - 1.18 (m, 1H), 1.20 (d, 1H, J= 12.0 Hz), 0.81 (q, 1H, J= 11.0 Hz) |
HIF
-1α 안정성 분석
HepG2 세포에 합성 유도체들을 지시된 농도로 30분간 전처리하고 1% O2에 4시간 동안 노출시켰다. HIF-1α 및 튜불린 단백질 수준은 웨스턴 블롯팅 분석으로 측정하였다. HepG2 세포에 A1893 및 A1938를 처리한 경우 저산소-유도 HIF-1 α 단백질 축적이 가장 크게 감소하였다(표 2 및 도 1).
KBH-A-Nr | IC50(μM) |
A1882 | 20 |
A1883 | 20 |
A1891 | 10 |
A1893 | 5 |
A1938 | 5 |
A1958 | 20 |
A1959 | 20 |
A1961 | 20 |
A1999 | 20 |
A2000 | 10 |
A2001 | 5 |
A2002 | 20 |
A2003 | 10 |
A2006 | 10 |
A2007 | 10 |
A2008 | 5 |
A2009 | 20 |
A2010 | 10 |
A2013 | 20 |
A2033 | 5 |
A2037 | 10 |
A2038 | 5 |
A2040 | 5 |
A2041 | 10 |
A2043 | 10 |
A2044 | 10 |
A2060 | 10 |
A2069 | 10 |
이하, IC50 값이 가장 낮은 두 화합물인 A1893 및 A1938를 이용하여 추가적인 실험을 진행하였다
SPR
(
surface
plasmon
resonance
) 분석
A1893 및 A1938의 UQCRB에의 결합을 좀더 조사하기 위하여, 본 발명자들은 SPR (BIAcore) 분석을 실시하였다. 바이오틴 및 바이오틴화된 테르페스타신을 순차적으로 스트렙타비딘-코팅 센서 칩 표면에 고정하였다. 경쟁결합 분자(A1893 및 A1938, 25 μM)를 정제된 UQCRB 단백질(25 μM)과 함께 완충액(10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA (pH 7.4))에서 반응시키고, UQCRB-경쟁결합 분자 복합체를 센서칩 위에 30 μL/min의 유속으로 주입하였다. 센서 칩의 표면은 재생 완충액(regeneration buffer, 50 mM NaOH)을 5μL 주입함으로써 재생하였다. 분자 상호작용의 분석은 BIAcore 2000 시스템(BIAcore AB)을 이용하여 수행하였으며, 명확한 결합 친화도를 바이오틴화된 테르페스타신(BT)에 결합하는 UQCRB의 공명 값에서 대조군 바이오틴에 결합하는 UQCRB의 공명 값을 뺌으로써 계산하였다. 경쟁결합 분석을 위하여, 테르페스타신 및 본 발명의 화합물들을 각각 UQCRB 단백질과 함께 배양하고, 복합체들을 센서 칩의 유세포(flow cell)에 주입하였다. 결론적으로, 테르페스타신 및 본 발명의 화합물들을 각각 UQCRB 단백질과 함께 미리 반응시킨 경우 UQCRB의 BT에 대한 결합 효율은 크게 감소하여 A1893 및 A1938이 UQCRB에 직접적으로 결합한다는 사실을 확인하였다(도 3).
혈관신생 저해활성 분석
1. 침투 분석
영양부족(serum-starved) HUVEC에 A1893 또는 A1938를 첨가하거나 첨가하지 않은 채 VEGF를 처리하고 인 비트로 혈관신생 분석을 수행하였다. 8.0 μm 포어 크기의 폴리카보네이트 필터가 포함된 트랜스웰 챔버 시스템(Corning Costar)을 이용하여 HUVEC의 침투성을 조사하였다. 우선, 상기 필터의 하부를 10 ㎕ 젤라틴 (10 mg/ml)으로 1시간 동안 코팅하고, 필터의 상부를 10 ㎕ 마트리겔 (3 mg/ml)로 2시간 동안 코팅하였다. 이어, 트랜스웰에 600 ㎕ EBM-2 배지를 넣은 후, VEGF (30 ng/㎖) 및 본 발명 화합물인 DPCN (2.5 μM 및 5 μM)를 첨가하였다. 코팅된 필터를 상기 트랜스웰위에 올려 놓았고, 필터의 상부에 혈관내피세포 (HUVECs, 1 x 105 세포/웰)를 접종하여 항온에서 18시간 동안 배양하였다. 그 후, 70% 메탄올로 세포를 고정시키고 헤마톡실린/에오신으로 염색한 후, 침투된 전체 세포의 숫자는 100 배율의 광학 현미경을 이용하여 측정하였다. 측정 결과, A1893 및 A1938는 상피세포의 생존성에 영향을 미치지 않으면서 VEGF-유도 침투를 억제함을 확인하였다(도 4a).
2. 관-형성 분석
관 형성 분석은 마트리젤(Matrigel, Collaborative Biomedical Products)에서 배양한 HUVEC을 이용하여 수행하였다. 48-웰 플레이트에 150 ㎕의 마트리겔을 코팅하고, 37℃에서 2시간 동안 중합시켰다. 이어, 혈관내피세포(HUVECs, 1 x 105 세포/웰)를 상기 마트리겔에 접종하고, VEGF (30 ng/㎖, Upstate Biotechnology) 및 본 발명 화합물인 DPCN (2.5 μM 및 5 μM)를 첨가하였다. 상온에서 8시간 동안 배양하면서 세포의 형태학적 변화를 현미경으로 관찰하였으며, 관 형성은 무작위로 선정한 필드에서 연결된 세포들의 숫자를 측정하고, 이를 동일한 필드 내 전체 세포 숫자로 나눔으로써 정량화하였다. 측정 결과, A1893 및 A1938는 상피세포의 생존성에 영향을 미치지 않으면서 HUVEC의 관 형성을 크게 억제하였다(도 4b).
미토콘드리아
ROS
생성 분석
저산소 상태동안 복합체-Ⅲ로 인한 ROS 생성의 증가는 HIF-1a 안정화를 촉발하며, 결과적으로 VEGF와 같은 타겟 유전자의 발현을 매개한다. UQCRB는 미토콘드리아 복합체 Ⅲ의 핵심 요소로서 O2 센서로 작용하며, 저산소-유도 종양 혈관신생을 매개한다. A1893 및 A1938의 항-혈관신생 활성이 UQCRB의 O2 감지기능과 조절과 관련되는지를 조사하기 위하여, 본 발명자들은 A1893 및 A1938의 미토콘드리아 ROS-매개 저산소 신호전달 과정을 조사하였다. HepG2 간암세포를 A1893 또는 A1938로 30분간 전처리하고 1% O2에 10분간 동안 노출시켰으며, 세포내 ROS 수준은 DCF 형광으로 측정하였다. A1893 및 A1938는 HepG2 세포에서 저산소-유도 미토콘드리아 ROS 생성을 용량-의존적으로 억제하였다(도 5). 이러한 결과는 A1893 및 A1938의 항-혈관신생 활성이 UQCRB의 O2 감지기능의 조절과 관련되어 있음을 보여준다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
Claims (11)
- 제 1 항에 있어서, 상기 R1의 A1은 메틸, 에틸, 페닐, 또는 tert-부틸인 것을 특징으로 하는 조성물.
- 제 1 항에 있어서, 상기 R2의 B1은 수소, 염소, 플루오르 또는 니트로인 것을 특징으로 하는 조성물.
- 제 1 항에 있어서, 상기 R2의 하이드록시 나프탈릴은 7-하이드록시 나프탈릴인 것을 특징으로 하는 조성물.
- 삭제
- 제 6 항에 있어서, 상기 화합물은 상기의 화학식 5, 6, 12, 17, 21, 23 및 24로 표시되는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
- 제 1 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 암, 당뇨병성 망막증, 미숙아 망막증, 각막 이식 거부, 신생혈관 녹내장, 증식성 망막증, 건선, 혈우병성 관절, 켈로이드, 상처 과립화, 혈관 접착, 류마티스 관절염, 골관절염, 자가면역 질환, 크론씨병, 재발협착증, 아테롬성 동맥경화, 장관 접착, 궤양, 간경병증, 사구체신염, 당뇨병성 신장병증, 악성 신경화증, 기관 이식 거부, 신사구체병증, 당뇨병, 염증 또는 신경퇴행성 질환의 비조절성 혈관신생-관련 질병 또는 질환의 예방 또는 치료에 이용되는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
- 제 8 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 암, 당뇨병성 망막증 또는 증식성 망막증의 예방 또는 치료에 이용되는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
- 제 9 항에 있어서, 상기 증식성 망막증은 연령관련황반변성인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
Priority Applications (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020110023211A KR101298651B1 (ko) | 2011-03-16 | 2011-03-16 | 효능이 강화된 혈관신생 억제용 약제학적 조성물 |
PCT/KR2011/003773 WO2012124858A1 (ko) | 2011-03-16 | 2011-05-23 | 효능이 강화된 혈관신생 억제용 약제학적 조성물 |
US14/232,598 US9371286B2 (en) | 2011-03-16 | 2011-05-23 | Pharmaceutical composition with enhanced efficacy for inhibiting angiogenesis |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020110023211A KR101298651B1 (ko) | 2011-03-16 | 2011-03-16 | 효능이 강화된 혈관신생 억제용 약제학적 조성물 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20120105653A KR20120105653A (ko) | 2012-09-26 |
KR101298651B1 true KR101298651B1 (ko) | 2013-08-21 |
Family
ID=46830906
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020110023211A KR101298651B1 (ko) | 2011-03-16 | 2011-03-16 | 효능이 강화된 혈관신생 억제용 약제학적 조성물 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9371286B2 (ko) |
KR (1) | KR101298651B1 (ko) |
WO (1) | WO2012124858A1 (ko) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2016096720A1 (en) * | 2014-12-16 | 2016-06-23 | Glucox Biotech Ab | Compounds for use in the treatment of conditions associated with nadph oxidase |
US20220363742A1 (en) * | 2019-11-08 | 2022-11-17 | Spiral Therapeutics, Inc. | Treatments of meniere's disease |
CA3180229A1 (en) * | 2020-05-29 | 2021-12-02 | Cathy A. Swindlehurst | Biarylsulfonamides and pharmaceutical compositions thereof, and their use for treating fibrotic lung disease |
WO2023059589A1 (en) | 2021-10-05 | 2023-04-13 | Smith & Nephew, Inc. | Cutting guide systems |
WO2023064433A1 (en) | 2021-10-13 | 2023-04-20 | Smith & Nephew, Inc. | Methods for surgical registration and tracking using hybrid imaging devices and systems thereof |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20090084335A (ko) * | 2008-02-01 | 2009-08-05 | 연세대학교 산학협력단 | 혈관신생 억제용 약제학적 조성물 |
KR20090095127A (ko) * | 2008-03-04 | 2009-09-09 | 연세대학교 산학협력단 | 혈관신생 억제용 약제학적 조성물 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH11184056A (ja) | 1997-10-14 | 1999-07-09 | Fuji Photo Film Co Ltd | カラー拡散転写ハロゲン化銀感光材料及び熱現像画像形成方法 |
WO2006075012A2 (en) * | 2005-01-12 | 2006-07-20 | Nycomed Gmbh | Pyrrolodihydroisoquinolines as antiproliferative agents |
FI20055496A0 (fi) * | 2005-09-16 | 2005-09-16 | Biotie Therapies Corp | Kollageenireseptorien alfa-l-domeeniin sitoutuvat modulaattorit |
WO2007076055A2 (en) * | 2005-12-22 | 2007-07-05 | Entremed, Inc. | Compositions and methods comprising proteinase activated receptor antagonists |
CN101448784B (zh) | 2006-05-18 | 2012-07-04 | 冬姆佩股份公司 | (2r)-2-[(4-磺酰基)氨基苯基]丙酰胺及含有它们的药物组合物 |
PE20091846A1 (es) * | 2008-05-19 | 2009-12-16 | Plexxikon Inc | DERIVADOS DE PIRROLO[2,3-d]-PIRIMIDINA COMO MODULADORES DE CINASAS |
BRPI0916356B1 (pt) * | 2008-07-24 | 2022-08-23 | Nerviano Medical Sciences S.R.L | 3,4-diaril pirazois como inibidores da proteína quinase |
-
2011
- 2011-03-16 KR KR1020110023211A patent/KR101298651B1/ko active IP Right Grant
- 2011-05-23 US US14/232,598 patent/US9371286B2/en active Active
- 2011-05-23 WO PCT/KR2011/003773 patent/WO2012124858A1/ko active Application Filing
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20090084335A (ko) * | 2008-02-01 | 2009-08-05 | 연세대학교 산학협력단 | 혈관신생 억제용 약제학적 조성물 |
KR20090095127A (ko) * | 2008-03-04 | 2009-09-09 | 연세대학교 산학협력단 | 혈관신생 억제용 약제학적 조성물 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2012124858A1 (ko) | 2012-09-20 |
US9371286B2 (en) | 2016-06-21 |
US20140315947A1 (en) | 2014-10-23 |
KR20120105653A (ko) | 2012-09-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0556310B1 (en) | Quinazolines derivatives for enhancing antitumor activity | |
KR101298651B1 (ko) | 효능이 강화된 혈관신생 억제용 약제학적 조성물 | |
JP5284291B2 (ja) | 潜在的制癌剤としての新規アントラニル酸誘導体及びその調製方法 | |
TWI739825B (zh) | 一種製備酪胺酸激酶抑制劑及其衍生物的方法 | |
EP3904351A1 (en) | Fak inhibitor and drug combination thereof | |
MX2007000856A (es) | Derivados de guanidina y sus usos terapeuticos. | |
CN101225070A (zh) | 用于抗肿瘤的药物 | |
CN109867675B (zh) | 一种吡咯并嘧啶衍生的化合物、药物组合物以及其用途 | |
EP1992622A1 (en) | 4-(3-benzoylaminophenyl)-6,7-dimethoxy-2- methylaminoquinazoline derivative | |
CN110105356B (zh) | 一种氮杂吲哚类化合物及其制备方法和用途 | |
US8486959B2 (en) | Dibenzo[f,h]isoquinoline derivatives | |
CN112334458A (zh) | 3-吲唑啉酮类化合物、其制备方法及其在医药学上的应用 | |
JP7329052B2 (ja) | フッ素含有置換ベンゾチオフェン化合物ならびにその医薬組成物および応用 | |
KR101835562B1 (ko) | Bcr-abl 이배체 억제제, 이의 제조 방법 및 용도 | |
WO2008136631A1 (en) | 3,4-dihydroquinazoline derivatives | |
CN115466289A (zh) | 具有tyk2抑制活性的化合物,包含其的药物组合物,及其应用 | |
JP4204980B2 (ja) | 9−アミノアクリジン誘導体及びその製造方法 | |
CN115572247B (zh) | 一类维生素k3衍生物及其医药用途 | |
CN107349194B (zh) | 一种磺酸酯类化合物在制备抗宫颈癌药物中的应用 | |
CN106749311B (zh) | 映-三白草酮类衍生物及其制备方法和应用 | |
CN105198898A (zh) | 一种用于预防和/或治疗癌症的化合物 | |
WO2021092892A1 (zh) | 喹啉或喹唑啉类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
KR101713678B1 (ko) | 신규 화합물 4-Ethyl-7-(2-fluoro-benzylsulfanyl)-2-methyl-1-thia-3b, 5, 6-triaza-cyclopenta[a]indene 및 이를 포함하는 항암제용 약제학적 조성물 | |
CN101816659A (zh) | 用于抗肿瘤的药物 | |
JP2023504428A (ja) | オレアナンシンナムアミド誘導体及びその製造方法と用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A201 | Request for examination | ||
E902 | Notification of reason for refusal | ||
E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
GRNT | Written decision to grant | ||
FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20160809 Year of fee payment: 4 |
|
FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20180813 Year of fee payment: 6 |