KR101260833B1

KR101260833B1 - 유럽종 포도의 씨 추출물 및 레바미피드를 포함하는 류마티스 관절염의 예방 또는 치료용 약학 조성물

Info

Publication number: KR101260833B1
Application number: KR1020100094091A
Authority: KR
Inventors: 조미라; 우윤주; 박미경; 민준기; 오혜좌; 류종현; 이근혁; 최병선; 조경주; 박진하; 곽은영
Original assignee: 가톨릭대학교 산학협력단; 한림제약(주)
Priority date: 2010-09-29
Filing date: 2010-09-29
Publication date: 2013-05-06
Also published as: KR20120032649A

Abstract

본 발명은 유효성분으로서 레바미피드 및 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 포함하는 류마티스 관절염의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

Description

유럽종 포도의 씨 추출물 및 레바미피드를 포함하는 류마티스 관절염의 예방 또는 치료용 약학 조성물{Pharmaceutical composition for preventing or treating rheumatoid arthritis comprising Vitis vinifera pip extract and rebamipide}

본 발명은 유효성분으로서 유럽종 포도의 씨 추출물 및 레바미피드를 포함하는 류마티스 관절염의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

류마티스 관절염(rheumatoid arthritis)은 활막 세포의 염증과 증식을 특징으로 하는 만성 염증성 질환으로서, 골관절염과 달리 관절 주위 뼈의 골다공증 및 골미란 등이 발생한다. 류마티스 관절염은 활막(synovial membrane)의 염증이 관절막(joint capsule)과 인대(ligament), 건(tendon)으로 퍼지는 단계(1 단계), 관절연골(joint cartilage)의 점차적인 파괴로 관절 간격이 좁아지고 관절막과 인대의 장력이 소실되는 단계(2 단계), 염증이 뼈로 침범하여 뼈의 부분적 침식이 발생하는 단계(3 단계), 및 관절기능이 소실되는 단계(4 단계)로 진행되게 된다.

종래에 류마티스 관절염의 치료를 위해서는, NSAID, 살리실레이트, COX-2 저해제 등의 비스테로이드 항염증제; 프레드니솔론, 트리암시놀론 등의 부신피질호르몬 제제; 메토트렉세이트(methotrexate), 설파살라진(sulfasalazine) 등의 항류마티스 약제(Disease-Modifying Anti-rheumatic Drugs, DMARDs); 및 에타너셉트(etanercept), 인플릭시맵(infliximab), 아달리무맵(adalimumab) 등의 생물학적 제제 등의 약물이 사용되고 있다. 통상, 증상 발현 초기에는 비스테로이드 항염증제 및 부신피질호르몬 제제가 사용되며, 증상 및 질병 활성도를 고려하여 항류마티스 약제가 사용되고, 심한 경우에는 생물학적 제제를 사용하거나 병합 요법 등이 임상에서 사용되고 있다.

그러나, 생물학적 제제는 기존 치료제들에 비해 고가의 치료 비용이 발생하여 의료 현장에서 적용이 곤란한 문제점이 있다. 상대적으로 치료비용이 저렴한 NSAID 등의 비스테로이드 항염증제는 대표적인 위장관 부작용을 유발하는 약물이며, 메토트렉세이트, 설파살라진 등의 항류마티스 약제 또한 위장 장애가 주요 부작용으로 지적되고 있다. 따라서, 류마티스 관절염 환자에게 상기 약물들을 적용할 경우, 레바미피드 등의 점막 보호제(cytoprotective agent)나 시메티딘, 라니티딘 등의 H₂-수용체 길항제가 병용 투여되고 있다. 위장관 질환은 공격인자(예를 들어, 위산)가 강하거나, 방어인자가 약해질 경우에 발생하게 된다. 오메프라졸 등의 프로톤 펌프 저해제 및 레바프라잔 등의 위산 펌프 길항제는 모두 공격인자 즉, 위산 분비를 억제하는 화합물이며, 수크랄페이트, 레바미피드 등의 점막 보호제는 방어인자를 증강시키는 화합물이다. 본 발명자들은 위장장애 부작용을 방지하기 위하여 병용 투여되는 레바미피드 자체가 류마티스 관절염에 대한 예방 및 치료 활성을 갖는다는 것을 발견하여 특허출원을 완료한 바 있다(대한민국 특허출원 제10-2009-0078547호, 미공개).

한편, 포도속(Vitis) 식물은 갈매나무목(Rhamnales), 포도과(Vitaceae)에 속하는 덩굴성 식물로 적도부근 및 위도 50°이상 지역을 제외한 지구상 전역에서 자생 혹은 재배되고 있다. 포도과에는 11속 700 여종이 알려져 있으며, 유럽종 포도(Vitis vinifera), 미국종 포도(Vitis labrusca), 강변 포도(Vitis riparia), 사막 포도(Vitis rupestris), 겨울 포도(Vitis berladieri), 머루(Vitis coignetiae), 왕머루(Vitis amurensis) 등이 주로 과실을 이용하기 위하여 재배되고 있다. 이 중, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨로부터 얻어지는 추출물은 (-)에피카테킨, 프로안토시아니딘 B1 및 B2, (+)카테킨, 및 이들의 중합 유도체들의 혼합물들을 포함하며, 이들은 프로시아니돌 또는 플라보놀 올리고머로서 알려져 있다 (GB-A-1541469 및 FR-A-2092743).

유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물은 주로 결합조직, 혈관, 림프, 관절 등의 글리코스아미노글리칸(glycosaminoglycan)에 선택적으로 작용하여 콜라겐, 엘라스틴, 피브로넥틴 등의 결합능에 관련하는 섬유들의 합성을 촉진하고 분해를 억제하여, 증가된 모세혈관 투과성을 억제하고 정맥의 신축성을 빠르게 회복시켜 주는 것으로 보고되고 있다.[Arteres et veines Vol.5(5), 397∼401(1986); Sem-dex Hopitaux 48/47, 2009∼2013(1981)] 또한, 포도씨 추출물은 당뇨병 환자의 모세혈관 취약증, 고혈압에 관련된 망막증, 망막분리후의 잔여 망막부종에 대한 치료효과를 갖는 것이 보고된 바 있으며[Gazette Mde France Vol.88, No.14, 2035∼2038(1981)], 망막의 여러 구조를 보호함으로써 시각색소의 재생속도를 빠르게 하며, 임상시험에서 섬광에 노출된 후에 망막을 회복시키는데도 효과가 있는 것으로 보고된 바 있다[Bull. Soc. Opth. France Vol 88(2), 173-4, 177-9(1988)].

본 발명자들은 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 추출물의 개선된 제조방법을 개발한 바 있으며, 또한, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물이 류마티스 관절염에 대한 우수한 예방 및 치료효과를 갖는다는 것을 보고한 바 있다(대한민국 특허공개 제10-2009-0024647호).

본 발명자들은 본 발명자들의 선행 연구 결과, 즉 레바미피드 자체가 류마티스 관절염에 대한 예방 및 치료 활성을 갖는다는 선행 연구 결과를 기초로 다양한 시험을 수행하는 과정에서, 놀랍게도 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물과 레바미피드를 병용하여 투여하였을 때, 류마티스 관절염의 개선이나 치료 활성이 더욱 증가됨으로써 즉, 상승효과(synergistic effect)에 의하여 장기간 동안(예를 들어 10주 이상) 류마티스 관절염의 예방 및 치료 활성을 유지시킬 수 있다는 것을 발견하였다.

따라서, 본 발명은 레바미피드 및 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 유효성분으로 포함하는, 류마티스 관절염의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명의 일 태양에 따라, 유효성분으로서 레바미피드 및 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 포함하는 류마티스 관절염의 예방 또는 치료용 약학 조성물이 제공된다.

본 발명의 약학 조성물에 있어서, 상기 약학 조성물은 경구 투여용 약학 조성물인 것이 바람직하며, 상기 약학 조성물의 단위 투여 형태는 정제 또는 캅셀제 형태의 경구 투여용 고형 제형인 것이 바람직하다.

본 발명에 의해, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물과 레바미피드를 병용하여 투여하였을 때, 류마티스 관절염의 개선이나 치료 활성이 더욱 증가되어 상승효과(synergistic effect)를 나타낸다는 것이 밝혀졌다. 즉, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물과 레바미피드를 병용하여 투여할 경우, 장기간 동안(예를 들어 10주 이상) 류마티스 관절염의 예방 및 치료 활성을 유지시킬 수 있다는 것이 밝혀졌다. 따라서, 유효성분으로서 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 및 레바미피드를 함유하는 약학 조성물은 류마티스 관절염의 예방 또는 치료를 위하여 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 콜라겐 유도 관절염 동물(CIA 동물, ●)과 CIA 동물에 레바미피드(□) 0.3 mg/kg, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물(△) 100 mg/kg, 또는 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 100 mg/kg과 레바미피드 0.3 mg/kg(○)를 경구투여하였을 때, 관절염 평가지수를 측정한 결과이다.
도 2는 콜라겐 유도 관절염 동물(CIA 동물)과 CIA 동물에 레바미피드(Reba 0.3 mg/kg), 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물(GSPE 100 mg/kg), 또는 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물과 레바미피드(GSPE 100 + Reba 0.3)를 경구투여한 동물을 치사시켜 관절과 연골 조직의 파괴정도를 조직염색[톨루이딘 블루(toluidine blue), 사프라닌 O(safranin O), H&E, 및 TRAP 염색]을 통해 관찰한 결과를 나타낸다.

본 명세서에서 "레바미피드(rebamipide)"라 함은 무수물, 수화물(예를 들어, 1/2 수화물 등), 결정형 등의 모든 형태의 레바미피드를 포함하며, 또한 레바미피드의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다. 상기 레바미피드의 약학적으로 허용가능한 염은 칼슘, 칼륨, 나트륨 및 마그네슘 등으로부터 제조된 무기이온염, 염산, 질산, 인산, 브롬산, 요오드산 및 황산 등으로부터 제조된 무기산염, 아세트산, 포름산, 숙신산, 타타르산, 시트르산, 트리클로로아세트산, 트리프루오로아세트산, 글루콘산, 벤조산, 락트산, 푸마르산, 및 말레인산 등으로부터 제조된 유기산염, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산 및 나트탈렌설폰산 등으로 제조된 설폰산염, 글리신, 아르기닌, 라이신 등으로부터 제조된 아미노산염 및 트리메틸아민, 트리에틸아민, 암모니아, 피리딘, 피콜린 등으로부터 제조된 아민염 등을 포함한다.

또한, 본 발명에 있어서, "유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물"은 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 사용하여 종래의 제조방법 예를 들어, GB-A-1541469 및 FR-A-2092743에 개시된 제조방법에 의해 얻어진 것을 사용할 수 있다. 바람직하게는, 본 발명자들이 개발한 개선된 제조방법, 예를 들어 대한민국 특허공개 제10-2009-0024647호에 개시된 제조방법에 따라 얻어진 추출물을 사용할 수 있다. 상기 개선된 제조방법에 의해 얻어진 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물은 80 ∼ 130의 프로시아니돌릭 값(Procyanidolic value, PCV); 30 % 이하의 (+)카테킨 및 (-)에피카테킨의 함량; 및 95 ∼ 105 %의 프로안토시아디딘 함량을 갖는다.

하기 실시예에서 확인할 수 있는 바와 같이, 콜라겐 유도 관절염 질환 동물에서 레바미피드 및 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 병용 투여하였을 때, 우수한 류마티스 관절염 치료 활성을 나타내었다. 특히, 레바미피드 또는 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 투여한 경우에 비하여, 이들을 병용 투여하였을 때 지속적으로 관절염 지수가 억제되었으며, 이러한 억제 활성은 10주간 동안의 시험기간 동안에도 지속되었다 (도 1). 조직학적 시험 결과 역시 레바미피드 및 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 병용 투여한 군이 투여하지 않은 군이나 단독 투여군에 비해 관절과 연골의 파괴정도가 현저하게 적게 일어났다 (도 2). 상기 결과들은 유효성분으로서 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 및 레바미피드를 함유하는 약학 조성물이 상승효과(synergistic effect)를 나타냄으로써, 우수한 류마티스 관절염 치료활성을 갖는다는 것을 보여준다.

본 발명의 약학 조성물은 경구 또는 비경구 투여될 수 있으며, 바람직하게는 경구로 투여될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물에 있어서, 상기 레바미피드 및 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물은 하나의 단위 투여 형태(예를 들어, 정제, 캡슐제 등의 단위 투여 형태)로 제제화하거나, 각각 별도의 단위 투여 형태로 제제화할 수 있다. 상기 단위 투여 형태는 바람직하게는 정제 또는 캅셀제 형태의 경구 투여용 고형 제형(solid dosage form for oral administration)이다.

본 발명의 약학 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하며, 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등, 바람직하게는 정제 또는 캅셀제 형태의 경구 투여용 고형 제형으로 제제화할 수 있다. 상기 약제학적으로 허용가능한 담체는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오즈, 메틸 셀룰로오즈, 미결정 셀룰로오즈, 히드록시프로필셀룰로오스, 저치환도히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메칠셀룰로오즈2910, 폴리에틸렌글리콜 6000, 폴리비닐 피롤리돈, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 산화티탄, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함한다. 또한, 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 포함한다. 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등의 경구투여용 투여형태는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 포함할 수 있으며, 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제 등을 포함할 수 있다. 예를 들어, 레바미피드를 포함하는 단위 투여 형태는 레바미피드에 추가하여, 담체로서 저치환도히드록시프로필셀룰로오스, 미결정셀룰로오스, 산화티탄, 히드록시프로필메칠셀룰로오스2910, 폴리에틸렌글리콜 6000, 히드록시프로필셀룰로오스, 및 스테아린산마그네슘을 포함하는 정제 형태일 수 있다. 또한, 별도의 단위 투여 형태로 제제화하는 경우, 레바미피드를 포함하는 단위 투여 형태는 상업적으로 시판되는 레바미피드-함유 정제[예를 들어, 무코스타정(오츠카제약)]의 형태일 수 있으며; 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 포함하는 단위 투여 형태는 본 발명자들의 선행 문헌, 예를 들어 대한민국 특허공개 제10-2009-0024647호에 개시된 경구 투여용 고형 제형일 수 있다.

본 발명의 약학조성물에 함유되는 상기 레바미피드 및 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물의 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 예를 들면, 상기 레바미피드는 1일 약 0.3 mg/kg의 용량으로 경구투여될 수 있으며, 상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물은 1일 약 100 mg/kg의 용량으로 경구투여될 수 있다. 물론, 상기 용량은 전임상 시험을 기준으로 한 용량으로서, 임상적으로 사용될 수 있는 용량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간 등에 따라 조절될 수 있다. 일 예로서, 1일 투여에 적합한 제제로서, 본 발명의 약학 조성물은 단위 제제 당 150 mg 내지 300 mg의 레바미피드 및 300 mg 내지 600 mg의 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 포함할 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예. 경구투여에 따른 류마티스 관절염 치료 효능 평가

제2형 콜라겐을 투여하여 류마티스 관절염을 유발시킨 마우스를 준비하고, 레바미피드, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물, 및 이들을 병용하여 경구투여한 후, 10 주 동안 관절염 지수를 평가하였다. 또한, 10 주 후에 각각의 마우스를 치사시키고, 조직염색[톨루이딘 블루(toluidine blue), 사프라닌 O(safranin O), H&E, 및 TRAP 염색]을 통해 관절과 연골 조직의 파괴정도를 관찰하였다. 하기 실시예에서, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물은 본 발명자들의 선행 문헌, 즉 대한민국 특허공개 제10-2009-0024647호의 실시예 1에 따라 얻어진 추출물을 사용하였다.

1. 동물모델의 준비 및 투여

시험동물은 6∼7 주령의 수컷 DBA/1J계 마우스를 사용하였다. 제2형 콜라겐 (CII)을 4 mg/ml이 되도록 0.1N 아세트산 용액에 녹인 후 투석 완충액 (dialysis buffer, 50mM Tris, 0.2N NaCl)으로 투석하여 M. 투베루쿨로시스(tuberculosis)를 함유하는 Complete Freud's 애주번트 (CFA, Chondrex)와 동량으로 섞은 후 마우스의 꼬리 기저부에 피하 주사하여 면역원을 마리당 50㎕(즉 100㎍/50㎕)으로 주사하였다(1차 주사). 이로부터 2주 후 bovain type II collagen 4mg/ml을 멸균된 PBS와 1:3으로 섞고 DBA/1J의 복강(I.P) 100ul(즉 100㎍/100㎕)를 주사하였다(2차 주사). 2차 주사 후 0.3 mg/kg 용량의 레바미피드, 100 mg/kg 용량의 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물, 또는 이들을 혼합한 혼합물을 경구용 존대를 이용하여 경구투여하였다. 경구투여는 20일 동안 이틀에 한번 씩, 총 10 회 시행하였다. 각 군은 6 마리씩을 대상으로 진행하였으며 관절염 평가는 10주까지 평가하였고, 10 주 후에 각 동물을 치사시켜, 혈액, 관절조직 내에서 류마티스 관절염의 병의 활성 정도를 조사하였다.

2. CIA 동물에서의 류마티스 관절염 치료 활성 평가

(2-1) 평균관절지수 평가

첫 번째 접종을 시작점으로 하여 2주 후부터 실험의 내용을 알고 있지 않은 관찰자 세 명이 일주일에 세 번씩 관절 염증의 위증도를 평가하여 10주까지 관찰하였다. 이때 관절염의 평가는 Rossoliniec 등에 의한 평균 관절염 지수에 기준하여 마리당 2차 접종 때 CII/CFA를 투여한 다리를 제외한 나머지 세 다리에서 아래의 척도에 따라 매긴 점수를 합하여 3으로 나눈 평균치를 얻고, 다시 각 동물 모델에서 3명의 관찰자가 얻은 수치를 합산하여 나눈 평균치를 사용하였다. 관절염 평가에 따른 점수와 기준은 다음과 같다.

0점 : 부족이나 종창이 없다.

1점 : 발 또는 발목관절에 국한된 경한 부종과 발적

2점 : 발목관절에서 족근골(metatarsal)에 걸친 경한 부종과 발적

3점 : 발목관절에서 족근골에 걸친 중등도의 부종과 발적

4점 : 발목에서 다리 전체에 걸쳐 부종과 발적

마리당 최고의 관절염 지수는 4점이므로 쥐 1마리당 최고의 질병지수는 16이다. 레바미피드를 0.3 mg/kg의 용량으로 경구투여한 군 및 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 100 mg/kg의 용량으로 경구투여한 군은 초기(약 4주)에는 관절염 지수가 억제됨으로써 류마티스 관절염의 치료활성을 나타내었으나, 약 5 주 이후부터는 관절염 지수가 유의성 있게 증가하였다. 이는 상기 용량에서 류마티스 관절염의 예방 또는 치료활성이 만족스럽지 못한 것을 나타낸다. 반면에, 레바미피드 및 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 병용투여한 경우에는 관절염 지수가 지속적으로 억제되었으며, 이러한 억제 활성은 10 주 동안의 시험기간 동안 지속적으로 유지되었다 (도 1).

(2-2) 조직학적 검사

10주 후에 시험동물을 치사시킨 후, 마우스의 뒷발을 10% 포르말린 (formalin)으로 고정하고 뼈에서 석회질을 제거한 후 파라핀을 묻혔다. 관절 절편 (5-7um)을 준비하고 헤마톡실린(hematoxylin)과 에오신 (eosin)으로 염색하였다. 또한, 연골파괴 정도를 확인하기 위하여 톨루이딘 블루(Toluidine blue), 사프라닌 O (safranin O), 및 TRAP 염색으로 조직학적 검사를 실시하였다.

조직학적 검사 결과, CIA 동물의 관절은 많은 면역 세포들이 침식 (infiltration) 되어 있었으며 판누스(pannus) 형성, 연골파괴 및 뼈 침식 등이 관찰되었다. 반면, 레바미피드 및 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 병용 투여한 동물은 관절과 연골의 파괴정도가 정상 마우스와 유사하게 유지되었으며, 이는 각각의 단독으로 투여한 경우에 비하여 정상 마우스와 훨씬 유사하였다 (도 2).

따라서, 상기 시험결과는 레바미피드 및 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 병용 투여할 경우, 연골의 파괴를 억제함으로써 류마티스 관절염에 대한 우수한 예방 및 치료 활성을 가지는 것을 나타낸다.

Claims

유효성분으로서 레바미피드 및 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 포함하는 류마티스 관절염의 예방 또는 치료를 위한 경구 투여용 약학 조성물.
삭제
제1항에 있어서, 상기 약학 조성물의 단위 투여 형태가 정제 또는 캅셀제 형태의 경구 투여용 고형 제형인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.