BR112021010952A2

BR112021010952A2 - Uso de extrato de cóculo-hirsuto para tratamento de dengue

Info

Publication number: BR112021010952A2
Application number: BR112021010952-8A
Authority: BR
Inventors: Kaushal NAYYAR; Rahul Shukla; Mudgal Kothekar; Upasana Arora; Srinivas Palla; Mohan Prasad; Saravanan A.; Sumit Madan; Ruchi Sood; Navin Khanna; Ankur Poddar
Original assignee: Sun Pharmaceutical Industries Limited; International Centre For Genetic Engineering And Biotechnology; Department Of Biotechnology
Priority date: 2018-12-07
Filing date: 2019-12-09
Publication date: 2021-08-24
Also published as: MX2021006654A; WO2020115723A1; US20220023372A1; CN113710261A; SG11202105991TA; MA54382A; EP3890762A1

Abstract

A presente invenção se refere a um extrato composto de Cocculus hirsutus para uso na prevenção e tratamento da dengue e suas composições farmacêuticas. Além disso, fornece uma composição farmacêutica estável compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz do referido extrato para uso no tratamento de infecção pelo vírus da dengue em um mamífero. Também fornece um método para reduzir a carga viral no tratamento da infecção pelo vírus da dengue por meio da administração do extrato composto ou sua composição farmacêutica a um mamífero com necessidade do mesmo.

Description

Relatório descritivo da patente de invenção para “USO DE EXTRATO DE CÓCULO-HIRSUTO PARA TRATAMENTO DE DENGUE”

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção se refere a um extrato composto de Cocculus hirsutus para uso na prevenção e tratamento da infecção pelo vírus da dengue e suas composições farmacêuticas. Também se refere aos processos de preparação desses extratos.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[002] A dengue continua sendo uma grande preocupação de saúde pública em todo o mundo. A incidência da dengue cresceu dramaticamente em todo o mundo nas últimas décadas. A dengue ocorre em climas tropicais e subtropicais em todo o mundo, principalmente em áreas urbanas e semiurbanas. A dengue grave é a principal causa de doenças graves e morte entre crianças em muitos países asiáticos e latino-americanos. De acordo com estimativas da Organização Mundial da Saúde (OMS), ~2,5 bilhões de pessoas em todo o mundo correm o risco de contrair dengue, com ~50 milhões de infecções em todo o mundo anualmente. A dengue se espalha para os humanos por meio dos mosquitos Aedes, que funcionam como portadores dos vírus causadores da doença. Existem quatro sorotipos de vírus da dengue (DENV-1, -2, -3 e -4) pertencentes à família Flaviviridae. A recuperação da infecção por um sorotipo do vírus da dengue fornece imunidade vitalícia contra esse sorotipo particular. No entanto, a imunidade cruzada para os outros sorotipos após a recuperação é apenas parcial e temporária. As infecções subsequentes por outros sorotipos aumentam o risco de desenvolver dengue grave. A infecção com DENVs pode ser assintomática ou pode resultar em uma gama de sintomas clínicos de dengue leve (DF) a febre hemorrágica da dengue (DHF) grave e potencialmente fatal e síndrome do choque da dengue (DSS). Os sintomas clínicos da dengue leve incluem febre alta, forte dor de cabeça, dor atrás dos olhos, dores musculares e nas articulações, náuseas, vômitos, inchaço das glândulas e erupção cutânea. Os sintomas geralmente duram de 2 a 7 dias, após um período de incubação de 4 a 10 dias após a picada de um mosquito infectado. Os sintomas clínicos para dengue grave aparecem devido a vazamento de plasma, acúmulo de líquido, dificuldade respiratória, sangramento grave ou comprometimento de órgãos. Apesar do impacto alarmante na saúde humana e na economia global, ainda não há um tratamento específico para a dengue disponível. Embora algumas vacinas vivas atenuadas contra a dengue estejam sendo desenvolvidas, os desafios enfrentados no desenvolvimento de vacinas contra a dengue permanecem altos. No momento, para resistir a essa preocupação internacionalmente reemergente de saúde pública, não há uma vacina preventiva específica anti-dengue disponível nem uma terapia aprovada eficaz. A ocorrência de vários sorotipos DENV na mesma vizinhança representa um risco significativo para os residentes locais (Taylor-Robinson, J Clin Diag Treat. 2018; 1 (2): 50-52).

[003] Assim, existe uma necessidade urgente de um tratamento eficaz da dengue que possa encurtar a duração da doença, reduzir a gravidade dos sintomas comuns, prevenir o desenvolvimento de complicações graves e ser fácil de formular. Além disso, é altamente desejável desenvolver um tratamento para dengue que possa reduzir a carga viral em um estágio inicial, de modo que possa potencialmente prevenir a dengue, bem como uma forma grave de dengue com risco de vida.

[004] Cocculus hirsutus Linn (Menispermeaceae), comumente conhecido como Jal-Jammi (Chopra et al., 1958) ou trepadeira Broom é encontrada em regiões moderadamente frias e quentes da Ásia tropical e África; particularmente no subcontinente indiano (Indian Bihar, Gujarat, Orissa, Rajasthan, Tamil Nadu e Paquistão), Ásia Ocidental (Irã) e Ásia temperada (Arábia Saudita, Iêmen). É uma escalada perene e atinge 2 a 3 m de altura. O uso do extrato de Cocculus hirsutus para infecção pelo vírus da dengue não é conhecido na técnica anterior. Os atuais inventores descobriram que extratos de Cocculus hirsutus ajudam a prevenir e tratar eficazmente a doença viral da dengue. A presente invenção preenche a necessidade acima não atendida ao fornecer um tratamento seguro e eficaz para dengue compatível com o paciente.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[005] A presente invenção fornece um extrato composto de Cocculus hirsutus para uso na prevenção e tratamento da infecção pelo vírus da dengue e suas composições farmacêuticas. Também fornece um método para reduzir a carga viral no tratamento da infecção pelo vírus da dengue por meio da administração do extrato composto ou sua composição farmacêutica a um mamífero com necessidade do mesmo. Além disso, fornece uma composição farmacêutica estável compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz do referido extrato para uso no tratamento de infecção pelo vírus da dengue em um mamífero. Também se refere aos processos de preparação desses extratos. Além disso, fornece a atividade desses extratos contra o vírus da dengue em mamíferos. Além disso, esses extratos foram considerados seguros para administração a humanos e não mostraram quaisquer efeitos tóxicos, mesmo em doses relativamente altas.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[006] Em uma primeira modalidade, a presente invenção fornece um extrato composto de Cocculus hirsutus para o tratamento da infecção pelo vírus da dengue.

[007] O termo "extrato composto", tal como aqui utilizado, refere-se ao extrato obtido a partir de Cocculus hirsutus em qualquer concentração compreendendo uma mistura de constituintes e está presente na forma de líquido, semissólido, sólido, gel, pasta, dispersão, solução ou destilado. Preferencialmente, o extrato composto está na forma de um sólido, por exemplo, na forma de um pó. O uso do termo "extrato de composto" é usado indistintamente com "extrato" no presente relatório descritivo. O extrato composto é extraído usando a massa da planta de Cocculus hirsutus. Mais preferencialmente, o extrato composto é extraído usando o caule de Cocculus hirsutus.

[008] Em um aspecto da modalidade acima, o extrato pode estar na forma de um pó ou na forma de líquido. O extrato na forma de um líquido pode ser um extrato alcoólico, um extrato hidroalcoólico ou um extrato aquoso. Os extratos de Cocculus hirsutus incluem (a) os extratos obtidos por extração de massa vegetal de Cocculus hirsutus com um ou mais solventes, ou (b) as frações obtidas por partição dos extratos da etapa (a) com um ou mais solventes. Em uma modalidade preferida, os extratos de Cocculus hirsutus incluem (a) os extratos obtidos por extração do caule de Cocculus hirsutus com água purificada, ou (b) as frações obtidas por partição dos extratos da etapa (a) com um ou mais solventes. Em uma modalidade preferida, o extrato é um extrato aquoso. Mais preferencialmente, o extrato é um extrato aquoso obtido usando o caule de Cocculus hirsutus. Os solventes no extrato podem ser removidos completamente por evaporação ou secagem por pulverização para obter um extrato seco. O extrato seco pode ser usado para preparar uma composição farmacêutica ou pode ser usado como tal. Pode ser liofilizado para formar um pó, que pode então ser colocado em uma cápsula de tamanho adequado ou pode ser feito em outras composições farmacêuticas, tais como comprimidos.

[009] Em outra modalidade, a presente invenção fornece um processo para a preparação de extratos de Cocculus hirsutus para uso no tratamento da infecção pelo vírus da dengue, compreendendo a extração da massa vegetal de Cocculus hirsutus com um ou mais solventes, concentrando o extrato e secando o extrato, ou extraindo a massa da planta de Cocculus hirsutus com um ou mais solventes, concentrando o extrato, adicionando água e particionando o extrato com um ou mais solventes e secando o extrato, ou extraindo a massa vegetal de Cocculus hirsutus com um ou mais solventes, concentrando o extrato, extraindo o extrato com um ou mais solventes e secando o extrato.

Em outro aspecto da modalidade acima, a extração da massa vegetal de Cocculus hirsutus é feito a uma temperatura na faixa de cerca de 50º a cerca de 100ºC.

Em outro aspecto da modalidade acima, a extração da massa vegetal de Cocculus hirsutus é feito a uma temperatura de cerca de 80º a cerca de 85ºC.

Em outro aspecto da modalidade acima, a extração da massa vegetal de Cocculus hirsutus é feito a uma temperatura de cerca de 60º a 65ºC.

Em outro aspecto da modalidade acima, a secagem do extrato de Cocculus hirsutus é feito a uma temperatura na faixa de cerca de 40º a cerca de 95ºC.

Em outro aspecto da modalidade acima, a secagem do extrato de Cocculus hirsutus é feito a uma temperatura na faixa de cerca de 40º a cerca de 45ºC.

Em outro aspecto da modalidade acima, a secagem do extrato de Cocculus hirsutus é feito a uma temperatura na faixa de cerca de 45º a cerca de 50ºC.

Em outro aspecto da modalidade acima, a secagem do extrato de Cocculus hirsutus é feito a uma temperatura na faixa de cerca de 55º a cerca de 65ºC.

Em outro aspecto da modalidade acima, a secagem do extrato de Cocculus hirsutus é feito a uma temperatura na faixa de cerca de 90º a cerca de 95ºC.

Em outro aspecto da modalidade acima, a secagem do extrato de Cocculus hirsutus é feito à temperatura de refluxo.

A secagem do extrato pode ser feita por evaporação rotativa a vácuo ou secagem em cuba a vácuo ou secagem por pulverização, etc.

Preferencialmente, a secagem do extrato é feita por secagem por pulverização.

[0010] O termo "extrato alcoólico", tal como aqui utilizado, inclui qualquer extrato à base de álcool, por exemplo, extrato metanólico, etanólico, n-propanólico, isopropanólico, n-butanólico, iso-butanólico ou t- butanólico de Cocculus hirsutus.

[0011] O termo "extrato hidroalcoólico", conforme usado neste documento, inclui um extrato preparado usando uma mistura de álcool e água purificada. Exemplos de álcoois são metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, iso-butanol e t-butanol. O extrato hidroalcoólico pode estar na proporção de 95:1 a 1:95 de mistura de álcool e água purificada. Preferencialmente, um extrato hidroalcoólico pode estar na proporção de 95:1 a 1:1 de mistura de álcool e água purificada. Mais preferencialmente, o extrato hidroalcoólico pode estar na proporção de 1:1 de mistura de álcool e água purificada.

[0012] O termo "extrato aquoso", conforme usado neste documento, inclui um extrato de água purificada de Cocculus hirsutus.

[0013] Os solventes para extração podem ser, por exemplo, água; álcoois, por exemplo, metanol, etanol, propanol, isopropanol ou butanol; cetonas, por exemplo, acetona ou metil isobutil cetona; ésteres, por exemplo, acetato de metil ou acetato de etil; hidrocarbonetos halogenados, por exemplo, clorofórmio, diclorometano ou dicloreto de etileno; frações de petróleo, por exemplo, hexano, éter de petróleo ou heptano; ou mistura(s) dos mesmos.

[0014] Os solventes para partição podem ser, por exemplo, água; frações de petróleo, por exemplo, hexano, éter de petróleo ou heptano; hidrocarbonetos halogenados, por exemplo, clorofórmio, diclorometano ou dicloreto de etileno; ésteres, por exemplo, acetato de etil ou acetato de metil; cetonas, por exemplo, acetona ou metil isobutil cetona; álcoois, por exemplo, butanol; éteres, por exemplo, éter dietílico; ou mistura(s) dos mesmos.

[0015] O termo “massa vegetal de Cocculus hirsutus”, conforme usado neste documento, refere-se a toda a planta ou parte da planta, que inclui partes aéreas, por exemplo, frutas, flores, folhas, galhos, casca do caule, caules, sementes ou cerne e raízes. Em uma modalidade preferencial, a "massa de planta de Cocculus hirsutus" refere-se ao radical de Cocculus hirsutus.

[0016] Em uma outra modalidade, a presente invenção fornece um extrato composto de Cocculus hirsutus para uso na prevenção e tratamento da infecção pelo vírus da dengue em mamíferos, em que o extrato exibe um efeito protetor de plaquetas. Em uma modalidade preferida, a presente invenção fornece um extrato aquoso obtido usando o caule de Cocculus hirsutus para uso na prevenção e tratamento da infecção pelo vírus da dengue em mamíferos, em que o extrato exibe um efeito protetor de plaquetas.

[0017] Em outra modalidade, a presente invenção fornece um extrato composto de Cocculus hirsutus para uso no tratamento da infecção pelo vírus da dengue em um mamífero, em que o extrato reduz a carga viral.

[0018] Em outra modalidade, a presente invenção fornece um extrato composto de Cocculus hirsutus para reduzir a carga viral em um estágio inicial no tratamento da infecção pelo vírus da dengue em mamíferos, em que o extrato apresenta efeito protetor de plaquetas.

[0019] O extrato composto obtido de acordo com esta invenção é útil tanto para ser administrado diretamente a um mamífero quanto para ser usado na preparação de composições farmacêuticas. A dose de extrato pode estar na faixa de aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 1500 mg/kg de peso corporal, particularmente na faixa de aproximadamente 0,05 mg/kg a aproximadamente 1200 mg/kg de peso corporal, mais particularmente na faixa de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 500 mg/kg de peso corporal, mais particularmente na faixa de aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 150 mg/kg de peso corporal. Preferencialmente, a dose do extrato pode estar na faixa de aproximadamente 2 mg/kg a aproximadamente 70 mg/kg de peso corporal. O extrato composto ou sua composição pode ser administrado uma, duas, três ou quatro vezes ao dia.

[0020] Em uma modalidade, o extrato de Cocculus hirsutus compreendem um ou mais constituintes selecionados do grupo que consiste em flavonoides, lignanos e alcalóides ou combinações dos mesmos. Preferencialmente, o extrato composto de Cocculus hirsutus compreende magnofloro como um dos constituintes. Mais preferencialmente, o extrato composto de Cocculus hirsutus compreende magnofloro em uma quantidade de 0,1% a 1% do peso total do extrato na composição. Em uma modalidade preferida, o extrato composto de Cocculus hirsutus compreende magnofloro em uma quantidade de 0,45% do peso total do extrato na composição. Em outro aspecto da modalidade, o extrato composto de Cocculus hirsutus compreende quercetina como um dos flavonoides.

[0021] O termo "mamífero" aqui se refere a todos os mamíferos, incluindo humanos. Os mamíferos incluem, apenas a título de exemplo, humanos, primatas não humanos, vacas, cães, gatos, cabras, ovelhas porcos, ratos, ratinhos e coelhos.

[0022] Em outra modalidade, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica para uso no tratamento de infecção pelo vírus da dengue em mamíferos, compreendendo um extrato composto de Cocculus hirsutus e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Em um aspecto da modalidade, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica oral estável para uso no tratamento da infecção pelo vírus da dengue em mamíferos, compreendendo um extrato composto de Cocculus hirsutus e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

[0023] Em uma outra modalidade, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende um extrato composto de Cocculus hirsutus e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis para reduzir a carga viral em um estágio inicial no tratamento da infecção pelo vírus da dengue em mamíferos, em que o extrato exibe um efeito protetor de plaquetas. Preferencialmente, a composição é uma composição farmacêutica estável. Mais preferencialmente, a composição é uma composição farmacêutica oral estável.

[0024] Em outra modalidade, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica estável compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um extrato composto de Cocculus hirsutus para uso no tratamento de infecção pelo vírus da dengue em mamíferos.

[0025] Em outra modalidade, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica estável compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um extrato composto de Cocculus hirsutus para uso no tratamento de infecção pelo vírus da dengue em um mamífero, em que a composição, quando administrada a um mamífero em necessidade, reduz a carga viral.

[0026] Em outra modalidade, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica estável compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um extrato composto de Cocculus hirsutus para uso no tratamento de infecção pelo vírus da dengue em um mamífero, em que a composição, quando administrada a um mamífero em necessidade, reduz a carga viral, em que o extrato exibe ainda um efeito protetor de plaquetas.

[0027] Uma "quantidade terapeuticamente eficaz", tal como aqui utilizada, refere-se a uma quantidade do extrato da invenção suficiente para fornecer um benefício no tratamento ou prevenção da doença de infecção viral da dengue, para atrasar ou minimizar os sintomas associados à infecção, ou para curar ou melhorar a infecção ou sua causa. Em particular, uma quantidade terapeuticamente eficaz significa uma quantidade suficiente para fornecer um benefício terapêutico in vivo.

[0028] O termo "composição farmacêutica", tal como aqui utilizado, inclui qualquer composição que pode efetivamente entregar os extratos de Cocculus hirsutus para o local de ação desejado para tratar ou prevenir a infecção viral da dengue. A composição pode ser distribuída por qualquer via de administração adequada, tal como oral, nasal, pulmonar, transdérmica ou retal. A composição farmacêutica inclui um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. A composição farmacêutica oral pode estar na forma de pó, peletes, grânulos, esferoides, minicomprimidos, comprimidos ovais, comprimidos ou cápsulas. O pó pode estar na forma de um pó liofilizado cheio, com excipientes farmaceuticamente aceitáveis, em uma cápsula de tamanho adequado. Preferencialmente, a composição farmacêutica está na forma de um comprimido. A composição farmacêutica oral pode estar presente na forma de líquido, incluindo, mas não se limitando a soluções, suspensões, emulsões ou xaropes.

[0029] Uma "composição farmacêutica estável", tal como aqui utilizada, refere-se a uma composição que é estável ao longo de um período de tempo prolongado no armazenamento, conforme avaliado a partir do conteúdo de uma ou mais impurezas na composição, conforme descrito em livros-texto padrão. A composição farmacêutica estável da presente invenção foi considerada estável por pelo menos 3 meses em condição acelerada de 40± 2°C/75±5% UR; e por pelo menos 3 meses em condição de armazenamento de longo prazo de 30±2°C/75±5% UR. O produto pode ser armazenado em temperatura ambiente por um prazo de validade de 6 meses a 2 anos. Isso foi surpreendente, pois a composição compreende um extrato compreendendo flavonoides, alcalóides como magnofloro, lignanas, etc. como constituintes e foi um desafio preparar uma composição estável compreendendo esses constituintes. A estabilidade da composição pode ser avaliada determinando alguns parâmetros, como ensaio de uma ou mais substâncias marcadoras no armazenamento. Em uma modalidade preferida, o marcador é magnofloro. Além disso, a perda na secagem (LOD) e o tempo de desintegração (na composição do comprimido) durante o armazenamento podem servir como uma medida da estabilidade da composição. Para uma composição estável, a especificação de LOD foi determinada como sendo NMT 2-5% p/p da composição. A composição da presente invenção quando armazenamento por 6 meses em uma garrafa de HDPE em condição acelerada de 40oC/75% UR, não mostrou degradação do conteúdo de magnofloro, LOD foi encontrado dentro da faixa de 2-5% p/p e não houve mudança no tempo de desintegração.

[0030] A composição farmacêutica estável da presente invenção compreende ainda um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Além disso, a composição farmacêutica estável pode incluir um revestimento. Preferencialmente, o revestimento é um revestimento de filme.

[0031] O termo "excipientes farmaceuticamente aceitáveis", tal como aqui utilizado, inclui diluentes, ligantes, desintegrantes, lubrificantes, deslizantes, polímeros, agentes aromatizantes, surfactantes, conservantes, antioxidantes, tampões e agentes modificadores de tonicidade.

[0032] Exemplos de diluentes incluem celulose microcristalina, celulose em pó, amido, amido pré-gelatinizado, dextratos, lactitol, frutose, açúcar compressível, confeiteiros de açúcar, dextrose, lactose anidra, fosfato de cálcio dibásico, fosfato de cálcio tribásico, sulfato de cálcio e suas misturas.

[0033] Exemplos de ligantes incluem um amido solúvel em água, por exemplo, amido pré-gelatinizado; um polissacarídeo, por exemplo, ágar,

goma acácia, dextrina, alginato de sódio, goma tragacanto, goma xantana, ácido hialurônico, pectina ou sulfato de condroitina de sódio; um polímero sintético, por exemplo, polivinilpirrolidona, álcool polivinílico, polímero carboxivinílico, polímero da série de ácido poliacrílico, ácido polilático ou polietilenoglicol; um éter de celulose, por exemplo, metilcelulose, etilcelulose, carboximetilcelulose, hidroxietilcelulose, hidroxipropilcelulose ou hidroxipropilmetilcelulose; e suas misturas.

[0034] Exemplos de desintegrantes incluem carbonato de cálcio, carboximetilcelulose ou um sal deste, por exemplo, croscarmelose sódica, povidona reticulada, hidroxipropilcelulose pouco substituída e glicolato de amido sódico.

[0035] Exemplos de lubrificantes/deslizantes incluem talco, estearato de magnésio, óleos vegetais hidrogenados, estearil fumarato de sódio, estearato de cálcio, dióxido de silício coloidal, Aerosil®, ácido esteárico, lauril sulfato de sódio, benzoato de sódio, polietilenoglicol, óleo de rícino hidrogenado, ésteres de sacarose de gordura ácidos, cera microcristalina, cera de abelha amarela, cera de abelha branca e suas misturas.

[0036] Exemplos de agentes aromatizantes incluem óleos aromatizantes sintéticos e aromáticos aromatizantes; óleos naturais ou extratos de plantas, folhas, flores e frutos; e suas combinações. Estes podem incluir óleo de canela, óleo de gaultéria, óleos de hortelã-pimenta, óleo de louro, óleo de erva-doce, eucalipto, óleo de tomilho, baunilha, óleo cítrico, incluindo limão, laranja, lima e toranja, e essências de frutas, incluindo maçã, banana, uva, pêra, pêssego, morango, framboesa, cereja, ameixa, abacaxi e damasco.

[0037] Exemplos de surfactantes incluem surfactantes aniônicos, por exemplo, um ácido sulfônico ou um sal do mesmo, tal como ácido benzenossulfônico, ácido dodecilbenzenossulfônico ou ácido dodecanossulfônico; um alquilsulfato, por exemplo, dodecilsulfato de sódio ou laurilsulfato de sódio; tensoativos catiônicos, por exemplo, um sal de tetraalquilamônio, tal como um haleto de tetraalquilamônio, cloreto de benzetônio, cloreto de benzalcônio ou cloreto de cetilpiridínio; um tensoativo não iônico, por exemplo, um éster de ácido graxo de cadeia longa de (poli)oxietileno sorbitano, como um monolaurato de polioxietileno sorbitano, por exemplo, um polissorbato; surfactantes anfotéricos, por exemplo, um composto de glicina como dodecil-di-(aminoetil)glicina, um composto de betaína como betaína ou dimetildodecilcarboxibetaína e um derivado de ácido fosfatídico como lecitina; surfactantes poliméricos, por exemplo, um polioxietileno polioxipropilenoglicol como Pluronic® ou poloxâmero; e suas misturas.

[0038] Exemplos de tampões incluem tampões de fosfato, tais como di-hidrogenofosfato de sódio, tampões de citrato, tais como citrato de sódio, meglumina, tri(hidroximetil) aminometano e suas misturas.

[0039] Exemplos de agentes modificadores de tonicidade incluem cloreto de sódio, manitol, dextrose, glicose, lactose, sacarose e suas misturas.

[0040] Exemplos de solventes para a preparação da composição farmacêutica incluem água; solventes orgânicos miscíveis em água, por exemplo, álcool isopropílico ou etanol; solventes apróticos dipolares; cloreto de metileno; acetona; polietileno glicol; éter de polietilenoglicol; derivados de polietilenoglicol de um mono- ou di-glicérido; tampões; solventes orgânicos; e suas combinações.

[0041] Em uma modalidade preferida, os excipientes farmaceuticamente aceitáveis na composição da invenção incluem celulose microcristalina, lactose anidra, croscarmelose de sódio, dióxido de silício coloidal e estearato de magnésio.

[0042] Em outra modalidade, a presente invenção fornece um processo de preparação de composição farmacêutica para uso no tratamento de infecção pelo vírus da dengue compreendendo extrato de Cocculus hirsutus e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

[0043] Em ainda outra modalidade, a presente invenção fornece um processo de preparação da composição de comprimido de extrato de Cocculus hirsutus para uso no tratamento da infecção pelo vírus da dengue, o processo compreendendo as etapas de:

[0044] (i) peneirar o extrato e misturar com excipientes farmaceuticamente aceitáveis;

[0045] (ii) lubrificar a mistura obtida na etapa (i) e comprimir em comprimidos e

[0046] (iii) revestimento de filme dos comprimidos da etapa (ii).

[0047] Em ainda outra modalidade, a presente invenção fornece um processo de preparação da composição de comprimido de extrato de Cocculus hirsutus para uso no tratamento da infecção pelo vírus da dengue, o processo compreendendo as etapas de:

[0048] (i) misturar o extrato com excipientes farmaceuticamente aceitáveis;

[0049] (ii) granular a mistura da etapa (i) com um solvente;

[0050] (iii) lubrificar e comprimir a mistura em comprimidos e

[0051] (iv) revestimento com filme dos comprimidos da etapa (iii).

[0052] Em uma outra modalidade, a presente invenção fornece um processo de preparação de composição de comprimido de extrato de Cocculus hirsutus para uso no tratamento da infecção pelo vírus da dengue, o processo compreendendo as etapas de:

[0053] (i) misturar o extrato com excipientes farmaceuticamente aceitáveis e compactar a mistura;

[0054] (ii) moagem dos compactos e mistura com excipientes extragranulares;

[0055] (iii) lubrificar a mistura da etapa (ii) e comprimir em comprimidos e

[0056] (iv) revestimento com filme dos comprimidos da etapa (iii).

[0057] Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método de tratamento da infecção pelo vírus da dengue em um mamífero, compreendendo a administração de uma composição farmacêutica que compreende a administração de uma quantidade terapêutica eficaz de um extrato composto de Cocculus hirsutus a um mamífero com necessidade do mesmo, em que o extrato reduz a carga viral.

[0058] Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método de tratamento da infecção pelo vírus da dengue em um mamífero, compreendendo a administração de um extrato composto de Cocculus hirsutus a um mamífero com necessidade do mesmo, em que o extrato reduz a carga viral.

[0059] Em ainda outra modalidade, a presente invenção fornece um método de tratamento da infecção pelo vírus da dengue em um mamífero, compreendendo a administração de uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade terapêutica eficaz de um extrato composto de Cocculus hirsutus a um mamífero com necessidade do mesmo, em que o extrato exibe um efeito protetor de plaquetas. Verificou-se que quando administrado a ratos winstar em uma dose de 600 ou 1200 mg/kg/dia por gavagem oral por 14 dias uma contagem de plaquetas maior foi observada.

[0060] Em ainda outra modalidade, a presente invenção fornece um método de tratamento da infecção pelo vírus da dengue em um mamífero, compreendendo a administração de um extrato composto de Cocculus hirsutus para os mamíferos com necessidade do mesmo, em que o extrato exibe um efeito protetor de plaquetas.

[0061] Em outra modalidade, a presente invenção fornece um método de tratamento da infecção pelo vírus da dengue em um mamífero,

compreendendo a administração de uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade terapêutica eficaz de um extrato de Cocculus hirsutus a um mamífero com necessidade do mesmo, em que o extrato reduz a carga viral e em que o extrato exibe ainda um efeito protetor de plaquetas.

[0062] Em outra modalidade, a presente invenção fornece um método de tratamento da infecção pelo vírus da dengue em um mamífero, compreendendo a administração de um extrato composto de Cocculus hirsutus a um mamífero com necessidade do mesmo, em que o extrato reduz a carga viral e em que o extrato exibe ainda um efeito protetor de plaquetas.

[0063] Em ainda outra modalidade, a presente invenção fornece um método para reduzir a carga viral em um estágio inicial no tratamento da infecção pelo vírus da dengue em mamíferos, compreendendo a administração de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapêutica eficaz de um extrato de Cocculus hirsutus a um mamífero com necessidade do mesmo, em que o extrato exibe um efeito protetor de plaquetas.

[0064] Em ainda outra modalidade, a presente invenção fornece um método para reduzir a carga viral em um estágio inicial no tratamento da infecção pelo vírus da dengue em mamíferos, compreendendo a administração de um extrato composto de Cocculus hirsutus para os mamíferos com necessidade do mesmo, em que o extrato exibe um efeito protetor de plaquetas.

[0065] Em ainda outra modalidade, a presente invenção fornece um método de tratamento de infecção primária e secundária do vírus da dengue em mamíferos, compreendendo a administração de um extrato composto de Cocculus hirsutus para os mamíferos que deles necessitam.

[0066] Em uma outra modalidade, a presente invenção fornece uma composição oral compreendendo um extrato composto de Cocculus hirsutus, em que a referida composição exibe uma atividade inibidora com valor de IC50 variando de cerca de 1 a 100 μg/ml, conforme determinado usando ensaio baseado em FACS, contra o vírus da dengue selecionado de DENV-1, DENV-2, DENV-3 e DENV-4. Em um aspecto da modalidade acima, o referido extrato e composição são usados no tratamento da infecção pelo vírus da dengue causada por serotipos selecionados de DENV-1, DENV-2, DENV-3 e DENV-4 ou combinações dos mesmos. Em outro aspecto da modalidade acima mencionada, a infecção pelo vírus da dengue é causada por serotipos selecionados dentre DENV-1 e/ou DENV-2 ou combinações dos mesmos. Em outro aspecto da modalidade, a infecção pelo vírus da dengue é causada por serotipos selecionados dentre DENV-1 e/ou DENV-3 ou combinações dos mesmos. Em outro aspecto da modalidade, a infecção pelo vírus da dengue é causada por serotipos selecionados dentre DENV-1 e/ou DENV-4 ou combinações dos mesmos. Em outro aspecto da modalidade, a infecção pelo vírus da dengue é causada por serotipos selecionados dentre DENV-2 e/ou DENV-3 ou combinações dos mesmos. Em outro aspecto da modalidade, a infecção pelo vírus da dengue é causada por serotipos selecionados dentre DENV-2 e/ou DENV-4 ou combinações dos mesmos. Em outro aspecto da modalidade, a infecção pelo vírus da dengue é causada por serotipos selecionados dentre DENV-3 e/ou DENV-4 ou combinações dos mesmos.

[0067] O extrato de Cocculus hirsutus não é conhecido na técnica anterior por sua atividade inibidora contra diferentes serotipos do vírus da dengue. Quando testado em um Teste de Neutralização baseado em FACS (FNT), que é um método conhecido para testar a eficácia de uma droga contra uma determinada espécie de vírus, um extrato composto de Cocculus hirsutus foi considerado muito eficaz na inibição do sorotipo DV4.

Sabe-se que a recuperação da infecção por um sorotipo da dengue fornece imunidade vitalícia contra aquele sorotipo particular. No entanto, a imunidade cruzada para os outros sorotipos após a recuperação é apenas parcial e temporária. As infecções subsequentes (infecção secundária) por outros sorotipos aumentam o risco de desenvolver dengue grave. Assim, os presentes compostos proporcionam vantagem sobre os tratamentos conhecidos na técnica que são eficazes apenas contra um serótipo particular, como foi surpreendentemente descoberto que o extrato composto de Cocculuc hirsutus e a composição da presente invenção foram ativos contra todos os sorotipos do vírus da dengue DENV-1, DENV- 2, DENV-3 e DENV-4. O extrato do composto de Cocculus hirsutus e a composição da invenção, exibe uma atividade inibidora com valor de IC50 variando de cerca de 1 a 20 μg/ml, conforme determinado usando ensaio baseado em FACS, contra todos os vírus da dengue DENV-1, DENV-2, DENV-3 e DENV-4. Assim, o extrato e a composição foram eficazes contra a infecção primária e secundária do vírus da dengue. Os presentes inventores descobriram que o extrato e a composição, quando testados em modelo animal de infecção primária e secundária por dengue, exibiram proteção tanto no modelo de camundongo AG129 primário e secundário com dengue.

[0068] Em outro aspecto da modalidade, a referida composição compreendendo quercetina como um constituinte exibe um IC50 valor variando de cerca de 2 a 10 μg/ml contra DENV-1. Em outro aspecto da modalidade, a referida composição compreendendo quercetina exibe um valor de IC50 variando de cerca de 1 a 10 μg/ml contra DENV-2. Em outro aspecto da modalidade, a referida composição compreendendo quercetina exibe um valor de IC50 variando de cerca de 5 a 15 μg/ml contra DENV-3. Em outro aspecto da modalidade, a referida composição compreendendo quercetina exibe um valor de IC50 variando de cerca de 5 a 20 μg/ml contra DENV-4.

[0069] Em uma outra modalidade, a presente invenção fornece um método de prevenção de vazamento vascular em infecção grave de dengue devido à infecção primária ou secundária de dengue em mamíferos, compreendendo a administração de um extrato composto de Cocculus hirsutus para os mamíferos que deles necessitam.

[0070] Além disso, o extrato e a composição foram considerados eficazes na prevenção de vazamento vascular em infecção grave de dengue devido à infecção primária ou secundária de dengue. O vazamento vascular é uma manifestação proeminente de infecções graves por dengue (DHF/DSS). Isso geralmente ocorre durante a fase crítica da infecção e os níveis de citocinas como TNFα e IL6 tornam-se elevados. Em um modelo de camundongo AG129, o vazamento vascular intestinal foi avaliado usando o corante azul de Evans que serve como um marcador para extravasamento de albumina. Resumidamente, 100 μL de corante azul de Evans foram injetados por via intravenosa nos camundongos. Duas horas após a injeção, os animais foram sacrificados e extensivamente perfundidos com PBS estéril. A permeabilidade vascular nos tecidos foi determinada visualmente e quantitativamente. Os resultados indicam que os camundongos alimentados por via oral com o extrato ou a composição da invenção exibiram menor vazamento vascular (de forma dose-dependente) em comparação ao grupo não tratado, o que corrobora que o extrato inibe a infecção por DENV.

[0071] Em uma outra modalidade, a presente invenção fornece um método para inibir a secreção de citocinas na infecção grave de dengue em mamíferos, compreendendo a administração de um extrato composto de Cocculus hirsutus para os mamíferos que deles necessitam.

[0072] O extrato e a composição também foram eficazes na inibição da secreção de citocinas na infecção grave por dengue. Citocinas pró- inflamatórias como TNF-α e IFN-γ são produzidas em quantidades excessivas, o que leva à progressão da doença e vazamento vascular. Em um estudo in vivo, o extrato ou a composição da invenção inibiu a secreção de citocinas no intestino delgado. O intestino delgado de camundongos AG129 desafiados com DENV-2 S221-4G2 Immune Complex (IC) e alimentados com o extrato ou a composição da invenção possuíam menores quantidades de TNFα e IL-6.

[0073] Em ainda outra modalidade, a presente invenção fornece um método de tratamento da infecção pelo vírus da dengue em mamíferos, compreendendo a administração de um extrato composto de Cocculus hirsutus para os mamíferos em necessidade do mesmo, em que o extrato é eficaz no início do tratamento retardado. O extrato e a composição da invenção quando administrados após 6 a 12 horas do estabelecimento da infecção primária por dengue em um modelo de camundongo AG129, verificou-se que o atraso no tratamento não afetou a eficácia protetora do extrato ou da composição.

[0074] Em ainda outra modalidade, a presente invenção fornece um método de prevenção da infecção pelo vírus da dengue em mamíferos, compreendendo a administração de um extrato composto de Cocculus hirsutus para os mamíferos que deles necessitam. O extrato e a composição da presente invenção, quando administrados pré-infecção, demonstraram eficácia protetora contra a infecção secundária da dengue quando testados em um estudo in vivo em modelo de camundongo AG129.

[0075] Em uma outra modalidade, o extrato e a composição da presente invenção foram considerados seguros e não mostraram nenhum efeito tóxico quando administrados em uma dose terapeuticamente eficaz ao mamífero em necessidade. Após administração oral repetida em níveis de dose de 100, 300, 600 ou 1.200 mg/kg/dia por gavagem oral em ratos wistar por 14 dias, as alterações hematológicas, macroscópicas e histológicas foram determinadas. Nessas doses, foi observada uma contagem de plaquetas mais alta. Com base nesses resultados, o NOAEL em ratos Wistar foi estabelecido em 300 mg/kg/dia. Assim, o extrato foi considerado seguro e não tóxico para uso humano na dose de 4000mg/dia.

[0076] Em outra modalidade, o extrato pode ser coadministrado com um ou mais agentes terapêuticos adicionais. Em outra modalidade, a composição da invenção pode compreender ainda um ou mais agentes terapêuticos adicionais. Um ou mais agentes terapêuticos adicionais podem ser selecionados a partir de compostos antipiréticos/analgésicos, tais como NSAIDs como paracetamol, outros medicamentos antivirais, etc.

[0077] O termo "coadministração" neste documento refere-se à administração de um ou mais agentes terapêuticos adicionais com o extrato a um mamífero. O extrato e os agentes terapêuticos adicionais podem estar em uma única composição farmacêutica ou podem estar em composições farmacêuticas separadas. Cada um dos extratos ou agentes terapêuticos adicionais pode ser administrado através da mesma ou diferentes vias de administração. A coadministração abrange a administração em paralelo ou sequencialmente.

[0078] Embora os exemplos a seguir sejam fornecidos para certas modalidades da invenção, eles não se destinam a limitar o escopo da invenção.

EXEMPLOS Exemplo 1: Preparação de Etanol 95:5: extrato de água purificada de Cocculus hirsutus

[0079] A massa vegetal de Cocculus hirsutus (1 kg) foi carregada em um extrator à temperatura ambiente*. Uma mistura de etanol e água purificada (95:5; 6L) foi adicionada e a mistura de reação foi aquecida a uma temperatura de 60-65ºC durante cerca de 3 horas. A massa extraída foi filtrada, coletada e armazenada em um recipiente. As etapas de extração e filtração foram repetidas com mistura de etanol e água purificada (95:5; 3L) duas vezes. Os três extratos filtrados foram combinados e concentrados o máximo possível sob pressão reduzida e baixa temperatura. O extrato foi decantado em bandejas de aço inoxidável e, em seguida, seco sob vácuo a 45-50ºC até o teor de etanol não ser superior a 10.000 ppm e umidade o conteúdo não é superior a 5%. O extrato seco foi resfriado a cerca de 20- 25ºC e descarregado em temperatura controlada umidade (RH NMT 40%).

[0080] Rendimento obtido = 90 g a 120 g Exemplo 2: Preparação de Etanol 1:1: extrato de água purificada de Cocculus hirsutus

[0081] A massa vegetal de Cocculus hirsutus (1 kg) foi carregada em um extrator à temperatura ambiente*. Uma mistura de etanol e água purificada (1:1; 6L) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida a uma temperatura de 60-65ºC durante cerca de 3 horas. A massa extraída foi filtrada, coletada e armazenada em um recipiente. As etapas de extração e filtração foram repetidas com etanol e água purificada (1:1, 3L) duas vezes. Os três extratos filtrados foram combinados e concentrados o máximo possível sob pressão reduzida e baixa temperatura. O extrato foi decantado em bandejas de aço inoxidável e, em seguida, seco sob vácuo a 45-50ºC até o teor de etanol não ser superior a 10.000 ppm e umidade o conteúdo não é superior a 5%. O extrato seco foi resfriado a cerca de 20-25ºC e descarregado em temperatura controlada umidade (RH NMT 40%).

[0082] Rendimento obtido = 80 g a 120g Exemplo 3: Preparação de um extrato aquoso de Cocculus hirsutus

[0083] A massa vegetal (caule) de Cocculus hirsutus (1 kg) foi carregada em um extrator à temperatura ambiente*. Água purificada (6L) foi adicionada e a mistura reacional foi aquecida à temperatura de refluxo durante cerca de 3 horas. A massa extraída foi filtrada, coletada e armazenada em um recipiente. As etapas de extração e filtração foram repetidas duas vezes com água purificada (3L). Os três extratos filtrados foram combinados e concentrados. Estes são posteriormente secos por evaporador rotativo a vácuo ou secador de bandeja a vácuo ou secador por spray. O extrato seco foi resfriado a cerca de 20-25ºC e descarregado em temperatura controlada umidade (RH NMT 40%).

[0084] Rendimento obtido = 70 g a 110 g

[0085] *O termo "temperatura ambiente", conforme usado neste documento, inclui uma temperatura variando de cerca de 18°C a cerca de 25°C. Exemplo 4: Preparação de comprimidos a partir do extrato de Cocculus hirsutus usando técnica de compressão direta Tabela 1: Quantidade em mg/comprimido S/N Ingredientes (1) (2) (3) (4) Extrato (dos Exemplos 1, 2 ou 1 1000,0 1000,0 1000,0 1000,0 3) Trissilicato de magnésio e 2 300,0 300,0 300,0 300,0 alumínio 3 Lactose monohidratada 90,0 - - - 4 Fosfato dicálcico - 90,0 - - 5 Amido pré-gelatinizado - - 90,0 - 6 Silicato de cálcio - - - 90,0 7 Celulose microcristalina 40,0 40,0 40,0 40,0 8 Dióxido de silício coloidal 20,0 20,0 20,0 20,0 9 Croscarmelose 40,0 40,0 40,0 40,0 10 Estearato de magnésio 10,0 10,0 10,0 10,0 Peso da guia principal 1500,0 1500,0 1500,0 1500,0 11 Verde Opadry 45,0 45,0 45,0 45,0 12 Água purificada Qs. Qs. Qs. Qs. Peso total do comprimido 1545,0 1545,0 1545,0 1545,0 revestido PROCEDIMENTO DE FABRICAÇÃO:

[0086] 1. O extrato foi passado pela peneira malha # 10 (2mm).

[0087] 2. Etapa 1 material junto com trissilicato de magnésio e alumínio foi peneirado através da malha # 14 (1,4 mm).

[0088] 3. Lactose monohidratada, fosfato dicálcico, amido pré- gelatinizado e silicato de cálcio foram peneirados através da malha #36 (420µ)

[0089] 4. Celulose microcristalina, dióxido de silício coloidal e croscarmelose foram passados através da malha # 25 (600 µ)

[0090] 5. O material das etapas 3 e 4 foi misturado em um misturador com o material da etapa 2.

[0091] 6. A mistura obtida na etapa 5 foi lubrificada com estearato de magnésio e comprimida em comprimidos.

[0092] 7. Verde Opadry foi disperso em água purificada para preparar uma dispersão.

[0093] 8. Os comprimidos da etapa 6 foram revestidos com a dispersão da etapa 7. Exemplo 5: Preparação de comprimidos a partir do extrato de Cocculus hirsutus usando Técnica de Granulação Úmida (por granulador misturador rápido) Tabela 2: Quantidade em mg/comprimido S/N Ingredientes (1) (2) (3) (4) Parte (a): Parte Intra granular Extrato (dos Exemplos 1, 2 1 1000,0 1000,0 1000,0 1000,0 ou 3) Trissilicato de magnésio e 2 250,0 250,0 250,0 250,0 alumínio 3 Metanol Qs. Qs. Qs. Qs. Total 1250,0 1250,0 1250,0 1250,0 Parte (b): Parte extra granular Trissilicato de magnésio e 4 40,0 40,0 40,0 40,0 alumínio 5 Lactose monohidratada 90,0 - - - 6 Fosfato dicálcico - 90,0 - - 7 Amido pré-gelatinizado - - 90,0 - 8 Silicato de cálcio - - - 90,0 9 Celulose microcristalina 40,0 40,0 40,0 40,0

10 Dióxido de silício coloidal 20,0 20,0 20,0 20,0 11 Croscarmelose 40,0 40,0 40,0 40,0 12 Estearato de magnésio 10,0 10,0 10,0 10,0 Peso da guia principal 1490,0 1490,0 1490,0 1490,0 13 Verde Opadry 44,7,0 44,7 44,7 44,7 14 Água purificada Qs. Qs. Qs. Qs. Peso total do comprimido 1534,7 1534,7 1534,7 1534,7 revestido PROCEDIMENTO DE FABRICAÇÃO:

[0094] 1. O extrato foi passado pela peneira malha # 10 (2mm).

[0095] 2. Trissilicato de magnésio e alumínio foi peneirado em peneira malha # 36 (420 µ)

[0096] 3. O material da Etapa 1 e Etapa 2 foi granulado com metanol e seco.

[0097] 4. O material seco da etapa 3 foi passado através de 16 malhas (1 mm).

[0098] 5. Trissilicato de magnésio e alumínio, lactose monohidratada, fosfato dicálcico, amido pré-gelatinizado e silicato de cálcio foram peneirados através da malha #36 (420 µ)

[0099] 6. Celulose microcristalina, dióxido de silício coloidal e croscarmelose foram passados através da malha #25 (600 µ)

[00100] 7. O material das etapas 5 e 6 foi misturado em um liquidificador junto com o material da etapa 4.

[00101] 8. A mistura obtida no passo anterior foi lubrificada com estearato de magnésio e comprimida em comprimidos.

[00102] 9. Verde Opadry foi disperso em água purificada para preparar uma dispersão.

[00103] 10. Os comprimidos da etapa 8 foram revestidos com a dispersão da etapa 9. Exemplo 6: Preparação de comprimidos a partir do extrato de Cocculus hirsutus usando Técnica de granulação a seco (por compactador de rolo)

Tabela 3: Quantidade em mg/comprimido S/N Ingredientes (1) (2) (3) (4) Parte (a): Parte Intra granular Extrato (dos Exemplos 1, 2 1 1000,0 1000,0 1000,0 1000,0 ou 3) Trissilicato de alumínio 2 300,0 300,0 300,0 300,0 magnésio e alumínio 3 Estearato de magnésio 15,0 15,0 15,0 15,0 Total 1315,0 1315,0 1315,0 1315,0 Parte (b) Parte extra granular 4 Lactose monohidratada 30,0 - - - 5 Fosfato dicálcico - 30,0 - - 6 Amido pré-gelatinizado - 30,0 - 7 Silicato de cálcio - - 30,0 8 Celulose microcristalina 100,0 100,0 100,0 100,0 9 Dióxido de silício coloidal 10,0 10,0 10,0 10,0 10 Croscarmelose 30,0 30,0 30,0 30,0 11 Estearato de magnésio 15,0 15,0 15,0 15,0 Peso da guia principal 1500,0 1500,0 1500,0 1500,0 12 Verde Opadry 45,0 45,0 45,0 45,0 13 Água purificada Qs. Qs. Qs. Qs. Peso total do comprimido 1545,0 1545,0 1545,0 1545,0 revestido PROCEDIMENTO DE FABRICAÇÃO:

[00104] 1. O extrato foi passado através da malha #10 (2 mm),

[00105] 2. O material da etapa 1 foi peneirado junto com trissilicato de magnésio e alumínio através da malha #14 (1,4 mm).

[00106] 3. Estearato de magnésio foi peneirado através da malha #36 (420 µ) e misturado com o material da etapa 2 em um liquidificador.

[00107] 4. O material misturado foi compactado com compactador de rolo.

[00108] 5. Os compactos obtidos na etapa 4 foram moídos.

[00109] 6. Os excipientes extra granulares foram peneirados e misturados com estearato de magnésio para obter uma mistura lubrificada.

[00110] 7. A mistura lubrificada da etapa 6 foi comprimida em comprimidos.

[00111] 8. Verde Opadry foi disperso em água purificada para preparar uma dispersão.

[00112] 9. Os comprimidos da etapa 7 foram revestidos com a dispersão da etapa 8. Exemplo 7: Preparação de comprimidos a partir do extrato de Cocculus hirsutus Tabela 4: Quantidade : % p/p INGREDIENTES Para comprimido Para comprimido contendo extrato de 25 contendo extrato de 100 mg mg/300 mg/500 mg Parte Intragranular Extrato aquoso de Cocculus 16,0 64,1 hirsutus* (exemplo 3) Celulose microcristalina IP ** 30,0 9,0 Lactose anidra IP 38,5 3,9 Croscarmelose de sódio IP 9,0 3,9 Dióxido de silício coloidal IP 1,3 0,6 Estearato de magnésio IP 1,3 0,5 Parte Extra Granular Celulose microcristalina IP - 7,7 Croscarmelose de sódio IP - 5,0 Dióxido de silício coloidal IP - 0,6 Estearato de magnésio IP - 0,8 Revestimento de filme Marrom Opadry AMB II 3,9 - Verde Opadry AMB II - 3,9 Água purificada IP ## Q.S. Q.S.

[00113] *Esta quantidade de extrato aquoso de Cocculus hirsutus é baseada em 100% p/p de LOD. A quantidade real de API deve ser calculada com base no LOD real.

[0048] 25/100/300/500 x 100

[00114] = ------------------------------------------------------ mg

[0049] (100 - % p/p de LOD)

[00115] **Ajuste a quantidade de celulose microcristalina com base na quantidade real de Cocculus hirsutus para manter o peso médio do comprimido constante.

[00116] ## Perda durante o processo de revestimento/secagem. BREVE PROCESSO DE FABRICAÇÃO (Para 25 mg)

[00117] 1. Peneirar extrato aquoso de Cocculus hirsutus, celulose microcristalina, lactose anidra, croscarmelose de sódio e dióxido de silício coloidal através de um crivo adequado.

[00118] 2. Misturar o material da etapa (1) no liquidificador

[00119] 3. Peneirar o estearato de magnésio através de uma peneira adequada e misturar com o material da Etapa (2).

[00120] 4. Comprimir a mistura da etapa (3) usando as ferramentas apropriadas.

[00121] 5. Dispersar marrom Opadry AMB II em água purificada para fazer uma dispersão de 20% p/p e agitar bem para obter uma dispersão uniforme.

[00122] 6. Carregar os núcleos dos comprimidos na bandeja de revestimento e cobrir usando dispersão de revestimento até atingir um peso alvo de aproximadamente 4,0% p/p (3,5 - 4,5% p/p). BREVE PROCESSO DE FABRICAÇÃO (Para 100/300/500 mg)

[00123] 1. Peneirar extrato aquoso de Cocculus hirsutus, celulose microcristalina, lactose anidra, croscarmelose de sódio e dióxido de silício coloidal através de um crivo adequado.

[00124] 2. Misturar o material da etapa (1) no liquidificador.

[00125] 3. Peneirar o estearato de magnésio através de uma peneira adequada e misturar com o material da Etapa (2).

[00126] 4. Compactação/Fluidização agregativa dos materiais da etapa (3).

[00127] 5. Moer os compactos/blocos da etapa (4) por meio de granulador/multimil oscilante.

[00128] 6. Peneirar os grânulos obtidos na etapa (5) através de uma peneira adequada.

[00129] 7. Se necessário, repetir a etapa (4) até a etapa (6) até obter a porcentagem desejada de grânulos (NLT 65%).

[00130] 8. Peneirar materiais extra granulares, ou seja, celulose microcristalina, croscarmelose de sódio & dióxido de silício coloidal através de uma peneira adequada.

[00131] 9. Misturar os materiais da etapa (7) e etapa (8) em um liquidificador.

[00132] 10. Peneirar o estearato de magnésio através de uma peneira adequada e misturar com o material da etapa (10).

[00133] 11. Comprimir a mistura da etapa (10) usando ferramentas apropriadas para as respectivas resistências.

[00134] 12. Dispersar verde Opadry AMB II em água purificada para fazer uma dispersão de 20% p/p e agitar bem para obter uma dispersão uniforme.

[00135] 13. Carregar os comprimidos de núcleo com as respectivas concentrações na bandeja de revestimento e revestir usando a dispersão de revestimento até atingir um peso alvo de aproximadamente 4,0% p/p (3,5 - 4,5% p/p). Exemplo 8: Estudo de Estabilidade

[00136] A estabilidade das etiquetas preparadas no Exemplo 7 foi testada em uma condição acelerada de 40oC/75% UR por 6 meses.

[00137] Como pode ser visto na Tabela 5, após armazenamento por 6 meses em uma garrafa de HDPE em condição acelerada de 40oC/75% UR, nenhuma degradação do conteúdo de magnofloro foi observada, o LOD estava dentro da faixa de 2-5% da especificação e não houve mudança no tempo de desintegração. Tabela 5: Dados de estabilidade acelerada 6M para comprimidos de 100/300/500 mg Força 100mg Estágio Inicial 1M 2M 3M 6M Teor de magnofloro (% p/p) 0,37 0,37 0,37 0,38 0,43 LOD (%p/p) 4,0 2,9 2,8 6,7 2,7 Tempo de desintegração 12 13 13 14 13 (minutos)

Força 300mg Estágio Inicial 1M 2M 3M 6M Teor de magnofloro (% p/p) 0,41 0,41 0,40 0,41 0,45 LOD (%p/p) 3,4 2,9 2,9 6,7 3,2 Tempo de desintegração 16 18 18 17 16 (minutos) Força 500mg Estágio Inicial 1M 2M 3M 6M Teor de magnofloro (% p/p) 0,41 0,40 0,40 0,41 0,45 LOD (%p/p) 3,9 3,6 3,5 5 3,8 Tempo de desintegração 21 24 23 24 24 (minutos) Exemplo 9: Atividade biológica Ensaio baseado em FACS:

[00138] Este ensaio foi usado para detectar o número de células infectadas com DENV na população total de células. Células Vero em uma placa de fundo plano de 96 poços (estéril, cultura de tecidos tratada) com meio Eagle modificado por Dulbecco suplementado com 10% de soro fetal bovino inativado por calor ΔFBS (20.000-25.000 células/200μl/poço) foram semeadas e incubadas a 37°C uma incubadora umidificada com 10% de CO2 por 24-26 h (tempo de duplicação para células Vero). Neste método, as células não devem ser inferiores a 20.000/poço. O meio foi aspirado e as células foram infectadas com DENV-1, 2, 3, 4 a 0,1 MOI em DMEM suplementado com meio ΔFBS a 0,5% (100μl/poço). As placas foram incubadas por 2 h a 37°C em uma incubadora umidificada com 10% de CO2. Os estoques de trabalho de extrato de Cocculus hirsutus aquoso foram preparados e suas diferentes concentrações viz. 100 μg/ml, 50 μg/ml, 25 μg/ml, 12,5 μg/ml, 6,25 μg/ml e 3,125 μg/ml para os respectivos poços da placa de 96 poços. As placas foram incubadas a 37°C em uma câmara umidificada com 10% de CO2 por 42-46 h após a infecção. Após a conclusão do período de incubação, as células foram coradas para a presença de DENVs citosólicos com um anticorpo marcado com fluorescência. Para a coloração, o meio foi aspirado do topo das células, lavado com PBS. As células foram tripsinizadas e transferidas para uma placa de fundo em U de 96 poços. Em seguida, centrifugou-se e o sobrenadante foi aspirado. As células foram lavadas duas vezes com permeabilização ou tampão de permeabilização e bloqueadas com soro de camundongo normal a 1% (preparado em tampão de permeabilização) por 30 minutos. O anticorpo 2H2-Alexa488 foi adicionado para corar as células para DENVs e incubado com agitação suave. Após a incubação, as células foram centrifugadas e o sobrenadante aspirado. As células foram lavadas e ressuspensas em PBS. As células processadas acima foram analisadas através de citômetro de fluxo e 5000 células foram contadas por poço. Os dados obtidos foram analisados (por meio do software FlowJo) para determinar a porcentagem relativa de células infectadas para cada concentração de extrato em relação ao grupo de controle apenas com vírus (sem nenhum tratamento com extrato). O IC50 do extrato foi determinado como a concentração do extrato que inibiu 50% da infecção pelo vírus da dengue, calculada usando o software GraphPad Prism.

[00139] Após avaliação por FNT, o extrato foi considerado eficaz na inibição de todos os quatro serotipos de DENV. Os valores de IC50 para cada serotipos de DENV variaram tipicamente entre 5-10 μg/ml (Tabela 6), indicando que 5-10 μg/ml de extrato são necessários para inibir todas as quatro infecções por DENV em 50% neste ensaio. Tabela 6: Representação tabular de IC50 (μg/ml) do extrato contra todos os quatro sorotipos do vírus da dengue conforme examinado por FNT.

IC50 (μg/ml) Candidato de Teste DENV-1 DENV-2 DENV-3 DENV-4 Extrato aquoso de 7,3 8,2 5,5 6,9 Cocculus hirsutus

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composição farmacêutica estável, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um extrato composto de Cocculus hirsutus para uso no tratamento de infecção pelo vírus da dengue em um mamífero, em que a composição, quando administrada a um mamífero em necessidade, reduz a carga viral.

2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o referido extrato composto de Cocculus hirsutus exibe ainda um efeito protetor de plaquetas.

3. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o referido extrato composto de Cocculus hirsutus é selecionado a partir de um extrato alcoólico, um extrato hidroalcoólico e um extrato aquoso.

4. Composição, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que o referido extrato composto de Cocculus hirsutus é um extrato aquoso.

5. Composição, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que o referido extrato aquoso de Cocculus hirsutus é extraído usando o caule de Cocculus hirsutus.

6. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a referida composição é eficaz contra todos os serotipos do vírus da dengue DENV-1, DENV-2, DENV-3 e DENV-4.

7. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a composição é uma composição oral.

8. Composição, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que a composição é estável por pelo menos 3 meses em condição acelerada de 40±2oC/75±5% UR.

9. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

10. Composição, de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que os excipientes farmaceuticamente aceitáveis são selecionados do grupo que compreende diluentes, ligantes, desintegrantes, lubrificantes, deslizantes, polímeros, agentes aromatizantes, surfactantes, conservantes, antioxidantes, tampões e agentes modificadores de tonicidade.

11. Composição, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que os diluentes são selecionados de celulose microcristalina, celulose em pó, amido, amido pré-gelatinizado, dextratos, lactitol, frutose, açúcar compressível, confeiteiros de açúcar, dextrose, lactose anidra, fosfato de cálcio-dibásico, fosfato de cálcio-tribásico, sulfato de cálcio e suas misturas e desintegrantes são selecionados a partir de carbonato de cálcio, carboximetilcelulose ou um sal do mesmo, por exemplo, croscarmelose sódica, povidona reticulada, hidroxipropilcelulose pouco substituída e glicolato de amido sódico e lubrificantes/deslizantes são selecionados a partir de talco, estearato de magnésio, óleos vegetais hidrogenados, estearil fumarato de sódio, estearato de cálcio, dióxido de silício coloidal, Aerosil®, ácido esteárico, lauril sulfato de sódio, benzoato de sódio, polietilenoglicol, óleo de rícino hidrogenado, ésteres de sacarose de ácidos graxos, cera microcristalina, cera de abelha amarela, cera de abelha branca e suas misturas.

12. Composição, de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que os excipientes farmaceuticamente aceitáveis compreendem celulose microcristalina, lactose anidra, croscarmelose de sódio, dióxido de silício coloidal e estearato de magnésio.

13. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o extrato composto de Cocculus hirsutus compreende magnofloro como um dos constituintes.

14. Composição, de acordo com a reivindicação 13, caracterizada pelo fato de que o extrato composto de Cocculus hirsutus compreende magnofloro em uma quantidade de 0,1% a 1% do peso total do extrato na composição.

15. Composição, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que o extrato composto de Cocculus hirsutus compreende magnofloro em uma quantidade de 0,45% do peso total do extrato na composição.

16. Método de tratamento da infecção pelo vírus da dengue em um mamífero, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma composição farmacêutica incluindo uma quantidade terapêutica eficaz de um extrato composto de Cocculus hirsutus a um mamífero com necessidade do mesmo, em que o extrato reduz a carga viral.

17. Método, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o referido extrato composto de Cocculus hirsutus exibe ainda um efeito protetor de plaquetas.

18. Método, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o referido extrato composto de Cocculus hirsutus é selecionado a partir de um extrato alcoólico, um extrato hidroalcoólico e um extrato aquoso.

19. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o referido extrato composto de Cocculus hirsutus é um extrato aquoso.

20. Composição, de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pelo fato de que o referido extrato aquoso de Cocculus hirsutus é extraído usando o caule de Cocculus hirsutus.

21. Método, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o referido extrato composto de Cocculus hirsutus é eficaz contra todos os serotipos do vírus da dengue DENV-1, DENV-2, DENV-3 e DENV-4.

22. Método, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que a composição reduz a carga viral em um estágio inicial no tratamento da infecção pelo vírus da dengue.