KR101244250B1 - 인산결핍조건에서 발현되는 벼 유비퀴틴 결합 효소 유전자 （ＯｓＵＰＳ） - Google Patents

Abstract

본 발명은 벼 품종인 동진 벼에서 분리한 유비퀴틴 결합 효소에 관한 아미노산과 그것을 코딩하는 유전자 서열을 포함한다. 본 발명에서는 기존에 밝혀지지 않은 새로운 유전자인 인산결핍 조건에서 발현되는 유비퀴틴 결합 효소 OsUPS을 밝히는 것을 특징으로 하며, 상기 유전자는 전체 1338bp의 염기서열을 가지고 있으며 445 개의 아미노산을 암호화하고 있음을 특징으로 한다. 또한, 본 발명은 상기 유전자로 형질 전환된 대장균을 이용하여 재조합 단백질 생산을 하는 것을 포함하며, 재조합된 단백질은 유비퀴틴 결합 효소 활성을 갖는 것을 포함한다.

Description

인산결핍조건에서 발현되는 벼 유비퀴틴 결합 효소 유전자 （ＯｓＵＰＳ）{A phosphate starvation-induced rice E3 ligase gene (OsUPS) }

본 발명은 벼에서 분리된 유비퀴틴 결합 효소 유전자（ＯｓＵＰＳ） 를 밝히고, 보다 넓게는 이 결합 효소 유전자를 이용하여 아미노산 서열 분석 및 이를 이용한 재조합 벡터의 생산으로 재조합 단백질을 발현토록 하는 것이다. 더 구체적으로는 본 유비퀴틴 결합 효소 유전자는 인산 결핍 조건에서 발현되는 유전자이다.

인산은 식물의 성장과 발달에 가장 중요한 영양소 중의 하나이다. 인산은 인지질, 핵산, 에너지 대사, 효소활성의 조절, 신호전달과정 등에서 필수적인 생물학적 기능을 한다. 지구의 암석권에는 인산이 많이 존재하나 인산은 작물 생산성에 제한인자로 존재한다. 왜냐하면 토양에서 인산의 80% 정도가 고정되어 있어, 뿌리가 쉽게 이용할 수 없기 때문이다.

그래서 작물에 충분한 영양소를 주기 위해, 비료를 많이 주게 되고 그것으로 인하여 농업비용이 증가하게 된다. 그 뿐만 아니라 미처 흡수되지 못한 인산질 비료는 빗물에 씻겨 내려가 지하수를 오염시키고 부영양화를 일으켜 환경오염을 야기한다. 따라서 이런 문제를 해결하기 위해서는 인산결핍 조건에서도 효율적으로 생장 가능한 작물 개발이 필요하다. 인산이 결핍된 조건에서 식물은 뿌리의 생장과 뿌리털의 형성을 촉진하여 표면적을 넓히고 고친화성 인산운반체, 탈인산화효소, 유기산 생합성과 분비에 관련된 유전자들의 발현을 유도한다. 이러한 유전자들의 발현은 상위 유전자의 발현에 의해 조절되고 다양한 종류의 신호전달 유전자가 함께 발현하여 작용하게 된다.

유비퀴틴(ubiqutin) 단백질은 매우 잘 보존된 76개의 아미노산으로 구성되어 있으며, 모든 진핵 생물에 존재하고, 세포 주기 조절, 전사의 조절, 스트레스 반응, 신호전달 경로, 항원의 제시, 비정상적인 단백질의 분해 등 많은 세포 내 반응에 관여하는 것으로 알려져 있다(Wilkinson KD, (1995) Annu. Rev. Nutr. 15, 161; Hershiko amp; Ciechanover (1992) Annu. Rev. Biochem. 61, 761; Jentsch (1992) Annu. Rev. Genet. 26, 179; Glotzer et al. (1991) Nature 349, 132; Bond amp; Sciesinger (1986) Mol. Cell. Biol. 6, 4602).

유비퀴틴화(ubiquitination)는 유비퀴틴 단백질을 기질 단백질에 공유 결합시키는 과정이다. 이 과정은 여러 단계로 구성되어 있으며, 유비퀴틴 활성화 효소 E1(ubiquitin-activating enzyme E1), 유비퀴틴 결합 효소 E2(ubiquitin-conjugating enzyme E2), 유비퀴틴 리가제 E3(ubiquitin ligase E3)에 의해 이루어진다. 유비퀴틴은 먼저 E1의 시스테인 잔기에 티오에스테르 결합으로 붙여지는데, 이 과정은 ATP가 필요하다. E1에 결합된 유비퀴틴은 E2의 시스테인 잔기에 티오에스테르 결합한다. 마지막으로 E2에 결합된 유비퀴틴의 C 말단 부분과 기질 단백질의 리신 잔기가 이소펩타이드(isopeptide) 결합을 이루는데 이 과정은 유비퀴틴 리가제 E3에 의해 이루어진다. Ubi-E2(유비퀴틴과 유비퀴틴 결합 효소 E2의 결합체)는 단일 유비퀴틴화된(monoubiquitinated) 기질 단백질에 결합된 유비퀴틴의 48번째 리신 잔기와 반응하고 이렇게 다중 유비퀴틴화된 (poly-ubiquitinated) 기질 단백질은 결국 26S 프로테아좀(proteasome)에 의해 분해되며, 이 과정에서 E2와 E3가 주된 역할을 한다고 알려져 있다.

유비퀴틴 결합 유전자는 세포 내 신호전달 경로에 중요한 역할을 하는 것으로 밝혀져 있다. 따라서, 화학 비료를 사용하여 환경 오염을 유발하는 것보다는 식물의 인산 이용성 증대 및 인산 결핍 스트레스에서의 생장을 촉진하기 위해 식물 자체의 인산 이용성 증대를 위하여 이러한 유전자의 발현에 대한 연구가 필요하다.

본 발명은 주된 목적은 인산이용 능력이 향상된 새로운 작물의 개발을 위해서 반드시 필요한 유전자원인 새로운 유비퀴틴 결합 유전자를 벼에서 분리하고 그 기능을 규명하는 것에 있다.

본 발명의 다른 목적은 인산 결핍 조건 시 과발현되는 유비퀴틴 결합효소를 코딩하는 유전자（ＯｓＵＰＳ）, 상기 유전자를 포함하는 재조합 벡터 및 상기 재조합벡터로 형질 전환된 미생물을 제공하는 데 있다.

비록 벼 전체의 게놈서열이 규명되어 있기는 하나(Kikuchi, S. et al., Science, 301:376, 2003), 본 발명에 따른 유전자의 기능에 대해서는 밝혀진 바 없었다. 본 유전자의 기능을 밝힘으로써 식물체의 인산이용을 증대시켜 산업 발전에 기여할 수 있다.

따라서 본 발명은 한 관점으로써, 기존에 밝혀지지 않은 새로운 유전자인 유비퀴틴 결합 효소기능을 갖는 유전자 OsUPS를 밝히고 그 유전자의 염기 서열과 아미노산 서열을 분석하였다. OsUPS유전자는 전체 1338bp의 염기서열을 가지고 있으며 445개의 아미노산을 암호화하고 있다.

본 발명의 유비퀴틴 결합 유전자는 인산 결핍 조건에서 발현 양이 증가하며 특히 조직 특이적인 발현을 조사한 결과 뿌리에서 증가하는 것을 포함한다. 더 구체적으로 살피면 상기 유전자의 발현은 인산 결핍 시간에 따라 발현 량에 차이가 있으며, 인산과 철 결핍 조건에서도 발현 양이 증가하는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 따르면, 벼로부터 전체의 genomic DNA를 분리하여 벼의 전체 유전체 염기서열을 토대로 벼 유래의 유비퀴틴 결합 유전자(OsUPS)에 특이적인 프라이머를 제작하고 공지되어 있는 PCR 방법을 통하여 유비퀴틴 결합 유전자를 증폭하는 방법을 통하여 유비퀴틴 결합 유전자의 염기 서열을 확인하는 것을 포함한다.

본 발명에 따른 효소의 범위는 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열로 구성되는 단백질 및 상기 단백질의 기능적 동등물을 의미한다. '기능적 동등물'이란, 아미노산의 부가, 치환 또는 결실의 결과 상기 서열번호: 1에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상의 서열 상동성을 갖는 것으로, 서열번호: 1로 표시되는 단백질과 실질적으로 동질의 생리활성을 나타내는 단백질을 말한다. '실질적으로 동질의 생리활성'이란 유비퀴틴 결합 효소 E3 효소 활성이 있음을 의미한다. 본 발명에 따른 단백질은 자연(예, 녹두)으로부터 추출하거나 또는 본 발명의 단백질을 암호화하는 재조합 핵산의 발현에 의해 또는 화학적 합성에 의해 수득 될 수 있다.

본 발명의 유비퀴틴 결합 효소 유전자는 벼로부터 유래한 것을 특징으로 하는 것을 포함한다.

본 발명에서 "벡터(vector)"는 적합한 숙주 내에서 DNA를 발현시킬 수 있는 적합한 조절 서열에 작동 가능하게 연결된 DNA 서열을 함유하는 DNA 제조물을 의미한다. 벡터는 플라스미드, 파지 입자 또는 간단하게 잠재적 게놈 삽입물일 수 있다. 적당한 숙주로 형질 전환되면, 벡터는 숙주 게놈과 무관하게 복제하고 기능할 수 있거나, 또는 일부 경우에 게놈 그 자체에 통합될 수 있다. 바람직하게는 파지미드 중의 하나인 pBluescript를 사용할 수 있으며 pBluescript는 널리 상용되는 phagemid로써 박테리오파지를 이용하는 cloning을 위한 여러 개의 유용한 서열을 포함한다. 이 서열에는 E.coli의 복제 원점 서열도 포함된다.

본 발명에 따른 재조합 벡터는 당 분야에 공지된 방법을 이용하여 숙주세포 내로 도입될 수 있다. 형질전환 (또는 형질감염)은 Davis et al. Basic Methods in Molecular Biology, 1986과 같은 기본적인 실험지침서에 기술된 방법에 따라 수행될 수 있다. 바람직한 예로는 온도 충격, 전기천공(electroporation), 형질 도입(transduction), 칼슘 포스페이트 형질전환(calcium phosphate transfection), 양이온 지질-매개 형질전환(cationic lipid-mediated transfection) 등이 포함된다.

또한, 본 발명은 본 발명의 재조합 벡터로 형질 전환된 숙주세포를 제공한다. 상기 '숙주세포'로는 대장균, 슈도모나스, 바실러스, 스트렙토마이세스, 진균, 효모와 같은 주지의 진핵 및 원핵 숙주들, 스포도프테라 프루기페르다와 같은 곤충 세포, CHO 및 마우스 세포와 같은 동물세포, 조직 배양된 인간 세포 및 식물세포 등이 예시될 수 있다.

본 발명의 다른 양태는 유비퀴틴 결합 효소 OsUPS를 이용하여 재조합 단백질을 생산하는 것이다.

본 발명에 따르면, OsUPS 유전자를 벡터로부터 제한효소로 잘라 pGEX2T벡터의 GST아래 쪽에 옮긴 후 다시 숙주와 함께 공배양을 통하여 형질 전환 시키는 것을 포함한다. 이러한 형질전환 된 숙주 세포에서 발현되는 재조합 단백질은 ubiquitination assay를 통하여 효소 활성을 확인할 수 있다. 배양물로부터 본 발명의 유비퀴틴 결합 효소 E3를 분리하는 것은 당업계에 공지된 방법에 의할 수 있으며 이에 제한되는 것은 아니나 예를 들어 원심 분리, 여과, 추출, 분무 건조, 증발 또는 침전을 포함하는 방법에 의해 분리 가능하다.

본 발명은 인산이 결핍된 조건에서 발현이 유도되는 신규 유비퀴틴 결합 효소 E3 및 이를 암호화하는 유전자에 관한 것이다. 유비퀴틴 결합 효소 E3는 인산 신호전달 경로에서 중요한 역할을 하는 것으로 예상된다. 이는 식물의 인산 흡수 기작 연구에 기초가 될 것으로 보인다.

도1은 인산의 결핍 조건에서 발현 량이 증가하는 벼의 유비퀴틴 결합 효소의 OsUPS 유전자의 염기서열을 표시하였다.
도2 는 인산의 결핍 조건에서 발현 량이 증가하는 벼의 유비퀴틴 결합 효소인 OsUPS 유전자의 cDNA로부터 연역된 아미노산 서열을 표시하였다.
도3은 벼의 캘러스 배양세포를 이용하여 인산 결핍 조건에서 OsUPS 유전자의 발현 양상을 조사하였다. 인산 결핍 조건을 시간별로 실험한 결과 30분부터 발현 량이 급격히 증가하였다 (A). 영양결핍 조건에서 인산과 철 결핍 처리시 특이적으로 높은 발현을 보였다 (B). 벼 유식물체에 각각 인산결핍과 충분조건을 주어 지상부와 지하부로 나누어 실험한 결과 인산이 결핍된 뿌리에서 가장 많이 발현되었다 (C).
도4는 E.coli system을 이용하여 western blot 한 것으로 GST의 항체가 probe로 사용되었다. OsUPS가 재조합된 조건에서 강하게 발현되었다.
도5는 UPS 재조합 단백질을 이용한 ubiquitination assay를 수행하였다. E1, E2, E3와 ubiquitin이 모두 존재하는 조건에서 OsUPS 단백질에 유비퀴틴이 전달되면서 원래 단백질 사이즈 위쪽으로 여러 개의 밴드가 나타났다.

이하, 실시 예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로써, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시 예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

[실시 예 1- 유비퀴틴 결합 유전자 증폭을 통한 상동성 비교]

본 발명은 우리나라 재배 품종인 동진 벼를 사용하였다. 동진 벼에서 genomic DNA를 분리하여 벼의 전체유전체 염기서열을 토대로 벼 유래의 유비퀴틴 결합 유전자 (OsUPS)에 특이적인 oligonucleotide primer를 제작 하였다. 공지된 PCR 방법을 이용하여 유전자의 coding 영역을 증폭하였다. 증폭된 산물을 pBluescript cloning vector에 클로닝하여 sequencing을 통해 유전자의 염기서열을 확인하였다. 분리된 벼 유비퀴틴 결합 유전자와 다른 식물체의 유비퀴틴 결합 유전자와의 상동성을 비교하니 이들 유전자들 간에는 65% 정도의 아미노산 염기서열이 같았다.

[실시예2- 유비퀴틴 결합 유전자의 발현 양상]

일반적으로 유사기능을 하는 유전자의 발현은 조직 특이적 또는 유도 인자 특이적으로 조절되므로 분리된 유비퀴틴 결합 유전자의 발현 양상을 RNA blot 방법을 이용하여 조사하였다. 이때 유비퀴틴 결합 유전자 특이적인 염기서열을 가진 3′ UTR DNA 단편을 probe으로 사용하였다. 동진 벼 종자에서 유도된 callus 세포를 인산이 충분한 배지 (1 mM)와 인산이 결핍된 배지 (10 μM)에서 (시간별로) 배양하고 Trizol REAGENT (Invitrogen)을 이용하여 RNA를 분리 하였다. 10㎍의 RNA를 1.2% (W/V) denaturing formaldehyde agarose gel에서 전기 영동하여 nylon membrane (Amersham)에 RNA를 부착시켰다. RNA 가 부착된 nylon membrane은 [³²P] dCTP로 표지된 probe를 20% (W/V) SDS, 20X SSPE, 100 g/L PEG (8,000 mwt), 250 mg/L heparin, 그리고 10ml/L Hearing sperm DNA (10 mg/ml) 가 포함된 용액과 함께 65℃에서 하루 밤 동안 반응 시켰다. OsUPS 유전자의 cDNA clone의 염기서열 및 아미노산 서열은 도면 1, 2에 상세히 표기되어 있다.

벼 callus 세포에서의 OsUPS 유전자의 발현은 인산 결핍 시간에 따라 발현 량에 차이가 있음을 확인하였다 (도면 3A). 또한, 벼 유비퀴틴 결합 유전자인 OsUPS은 인산과 철 결핍 조건에서 발현 양이 증가하는 양상을 보였다 (도면 3B).

[실시예3-OsUPS유전자의 조직 특이적 발현 조사]

Callus 세포의 발현 양상을 기초로 하여 OsUPS 유전자의 식물체 내에서 조직 특이적인 발현을 조사한 결과, OsUPS 유전자는 인산 결핍 조건에서 벼의 뿌리에서 발현 량이 증가하였다 (도면 3C).

[실시예4- 재조합 단백질의 제작]

재조합 단백질의 제작을 위해 OsUPS 유전자를 pBluescript 벡터로부터 BamHⅠ 제한효소로 잘라 pGEX2T 벡터의 GST 아래쪽에 옮겼다. 이를 BL21(DE30)에 형질 전환한 뒤 IPTG 0.5mM 첨가한 뒤 30 ℃에서 2시간 배양하여 재조합 단백질을 제작하였다. 발현된 OsUPS 재조합 단백질을 SDS-PAGE 겔에서 전기 영동하여 분리하고 GST 항체를 이용하여 Western blot을 수행한 결과 목적 단백질인 OsUPS가 정상적으로 만들어진 것을 확인할 수 있었다 (도면 4).

[실시예5-재조합 단백질의 활성 확인]

OsUPS 재조합 단백질을 이용하여 ubiquitination assay를 수행하였다. 이는 단백질의 유비퀴틴 결합 효소 활성을 확인하기 위한 실험으로 E1, E2, E3와 유비퀴틴이 모두 존재하는 조건에서 OsUPS가 ubiquitination되었고 이 결과로 미루어 본 유전자가 효소 활성을 갖는 것을 확인할 수 있었다. (도면 5D).

<110> Dong-A University Research Foundation For Industry-Academy Cooperation <120> A phosphate starvation-induced rice E3 ligase gene (OsUPS) <160> 2 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 445 <212> PRT <213> Oryza sativa <400> 1 Met Ala Leu Leu Ala Arg Arg Ala Arg Lys Ala Val Met Ala Lys Ala 1 5 10 15 Pro Ala Pro Leu Leu Gln Lys Arg Gly Gly Gly Ala Ala Ala Glu Leu 20 25 30 Ala Ile Pro Ala His Phe Arg Cys Pro Ile Ser Leu Asp Leu Met Arg 35 40 45 Asp Pro Val Thr Ala Pro Thr Gly Ile Thr Tyr Asp Arg Glu Gly Ile 50 55 60 Glu Ala Trp Leu Asp Thr Gly Arg Ala Val Cys Pro Val Thr His Ala 65 70 75 80 Pro Leu Arg His Glu Asp Leu Val Pro Asn His Ala Ile Arg Arg Val 85 90 95 Ile Gln Asp Trp Cys Val Ala Asn Arg Ser Arg Gly Val Glu Arg Ile 100 105 110 Pro Thr Pro Lys Ile Pro Val Thr Pro Val Gln Ala Ser Glu Leu Leu 115 120 125 Phe Asp Val Ala Glu Ser Ala Ala Arg Arg Gly Ala Ala Gly Arg Ala 130 135 140 Ala Gly Ala Val Ala Arg Val Arg Ala Leu Ala Arg Asp Ser Glu Arg 145 150 155 160 Asn Arg Arg Cys Phe Val Ser Val Gly Thr Gly Arg Val Leu Ala Ala 165 170 175 Ala Phe Glu Ser Leu Ala Ala Ala Gly Glu Ala Gly Val Leu Glu Asp 180 185 190 Val Leu Ala Ala Leu Val Cys Met Met Pro Leu Asp Glu Glu Ala Ala 195 200 205 Arg Val Leu Ala Ser Ser Ser Ser Met Gly Ser Leu Val Ala Ile Ala 210 215 220 Lys His Gly Ser Leu Ala Gly Arg Leu Asn Ala Val Leu Ala Ile Lys 225 230 235 240 Glu Ala Val Ser Arg Asp Gly Ala Phe Val Asp Leu Ala Asp Asp Lys 245 250 255 Val Asp Lys Val Val Asp Ala Leu Val Val Ile Ile Lys Ala Pro Ile 260 265 270 Cys Pro Gln Ala Thr Lys Ala Ala Met Val Ala Thr Tyr His Leu Ala 275 280 285 Ser Ser Asp Glu Arg Val Ala Ala Arg Val Ala Ser Thr Gly Leu Val 290 295 300 Pro Thr Leu Ile Glu Ala Leu Val Asp Ala Asp Lys Ser Val Ser Glu 305 310 315 320 Lys Ala Leu Ala Val Leu Asp Ala Met Leu Ala Ser Glu Glu Gly Arg 325 330 335 Ala Ser Ala Arg Gly His Ala Leu Ala Met Pro Ala Leu Val Lys Lys 340 345 350 Met Phe Arg Val Ser Asp Val Ala Thr Glu Leu Ala Val Ser Ala Met 355 360 365 Trp Arg Leu Gly Cys Lys Ala Ser Ser Gly Asp Glu Glu Ala Ala Ala 370 375 380 Thr Gly Cys Leu Val Glu Ala Leu Arg Val Gly Ala Phe Gln Lys Leu 385 390 395 400 Leu Leu Leu Leu Gln Val Gly Cys Arg Asp Ala Thr Lys Glu Lys Ala 405 410 415 Thr Glu Leu Leu Lys Met Leu Asn Lys His Lys Gly Leu Gly Glu Cys 420 425 430 Val Asp Ala Val Asp Phe Arg Gly Leu Asn Arg Leu Ser 435 440 445 <210> 2 <211> 1338 <212> DNA <213> Oryza sativa <400> 2 atggcgctgc tggcgcggag ggcgcggaag gcggtgatgg cgaaggcgcc ggcgccgctg 60 ctgcagaaga ggggtggcgg cgcggcggcg gagctggcga tcccggcgca cttccggtgc 120 ccgatctcgc tggacctgat gcgcgacccg gtgacggcgc cgacggggat cacgtacgac 180 agggagggga tcgaggcgtg gctggacacc gggcgcgcgg tgtgccccgt cacccacgcg 240 ccgctccggc acgaggacct cgtccccaac cacgccatcc gccgcgtcat ccaggactgg 300 tgcgtcgcca accggtcccg cggcgtggag cgcatcccca cgcccaagat ccccgtcacg 360 cccgtgcagg cctccgagct gctgttcgac gtcgcggagt cggcggcgcg gcgcggcgcg 420 gcggggcgcg ccgccggggc ggtcgccagg gtccgggcgc tcgcgaggga cagcgagcgg 480 aaccggcggt gcttcgtgtc cgtcggcacg gggcgcgtgc tggccgcggc gttcgagtct 540 ctcgccgccg ccggggaggc gggcgttctc gaggacgtcc tggcggcatt ggtctgcatg 600 atgccgttgg acgaggaggc ggccagggtc ttggcctcgt ctagctcgat gggttcactc 660 gtcgccattg ccaagcacgg gagcttggcc ggaaggctga acgctgtgct ggcgatcaag 720 gaggccgtgt cgcgggacgg agcgttcgtg gacctggcgg atgacaaggt cgacaaggtc 780 gtcgacgcgc tggtcgtgat catcaaggct ccgatctgcc cgcaggccac caaggctgcc 840 atggtcgcca cctaccacct ggcgagctcc gacgagcgcg tcgctgcgag ggtagcatcc 900 acggggctcg tcccaacgct catcgaggcc ctcgtagacg ccgacaagag cgtgtccgag 960 aaggccctgg cggtgctcga cgcaatgctc gcctcggagg aaggccgcgc gagcgcgcgg 1020 ggccacgccc tcgcaatgcc ggccctcgtg aagaagatgt tccgcgtgtc cgacgtggcc 1080 accgagctcg ccgtgtcggc gatgtggcgg ctcggctgca aggcctcctc cggcgacgag 1140 gaggccgccg cgacggggtg cctggtcgag gcgctgcgtg tgggcgcgtt ccagaagctt 1200 ctcctcctcc tgcaggtggg ctgcagggac gcgaccaagg agaaggccac tgagctgctc 1260 aagatgctca acaagcacaa agggttgggg gagtgtgtcg acgctgtgga tttcagaggg 1320 ctcaataggc tgtcatga 1338

Claims (7)

1. 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유비퀴틴 결합 효소 유전자（ＯｓＵＰＳ）를 포함하는, 식물의 인산 이용성 증대용 조성물.
   
2. 제1항에 있어서, 상기 유전자는 서열번호 2로 표시되는 염기서열로 이루어진 것을 특징으로 하는, 식물의 인산 이용성 증대용 조성물.
   
3. 제1항에 있어서, 상기 아미노산은 벼로부터 분리된 것을 특징으로 하는, 식물의 인산 이용성 증대용 조성물.
   
4. 제1항에 있어서, 상기 유전자（ＯｓＵＰＳ）는 인산이 결핍된 환경에서 발현이 증가하는 것을 특징으로 하는, 식물의 인산 이용성 증대용 조성물.
   
5. 제4항에 있어서, 상기 발현의 증가는 식물체의 뿌리에서 이루어지는 것을 특징으로 하는, 식물의 인산 이용성 증대용 조성물.
   
6. 서열번호 2의 유전자를 식물체에 도입하여, OsUPS 단백질의 발현을 증가시켜, 식물체의 인산 이용능력을 증대시키는 방법.
7. 삭제

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