KR101168746B1

KR101168746B1 - 녹두 유산균 발효 추출물의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101168746B1
Application number: KR1020100081888A
Authority: KR
Inventors: 이유리; 천종우; 최성규; 이현상; 김윤정
Original assignee: (주)에이씨티
Priority date: 2010-08-24
Filing date: 2010-08-24
Publication date: 2012-07-26
Also published as: KR20120018914A

Abstract

본 발명은 녹두 유산균 발효 추출물의 제조방법에 관한 것으로서, 구체적으로는 녹두를 MCT(Medium Chain Triglyceride)오일로 추출한 후에 유산균 발효시켜 추출물을 제조하는 방법 및 이를 함유하는 주름개선용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 녹두의 추출용매로서 MCT 오일을 사용함으로써, 녹두의 지용성 성분을 추출하고, 이를 다시 유산균발효에 의하여 특정성분을 강화함으로써, 항염 및 피부주름개선 효과가 우수한 녹두 추출물을 제조할 수 있으므로, 이를 유효성분으로 포함하는 화장료조성물의 제조에 유용하다.

Description

녹두 유산균 발효 추출물의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{Preparing method for Mung bean extracts and cosmetic composition containing the same}

본 발명은 녹두 유산균 발효 추출물의 제조에 관한 것으로서, 구체적으로는 녹두를 MCT(Medium Chain Triglyceride)오일로 추출한 후에 유산균 발효시켜 추출물을 제조하는 방법 및 이를 함유하는 주름개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

인간은 성과 나이를 떠나서 청결, 미용, 피부 관리를 위해 화장품을 사용하고 있으며 더 나아가서는 아름다움을 표현하기위해 화장품을 이용하여 피부에 변화를 주고 있다. 따라서 화장품의 기능은 점차적으로 향상되고 있으며 산업이 발전함에 따라 화장품이 고급스러워지며 다양해져가고 있다. 화장품 산업이 커져가면서 인간에게 해롭지 않은 안전한 물질을 사용하고자 하였으며 특히, 천연물과 약용식물을 포함한 천연소재가 개발되고 있다. 그 일 예로서 녹두추출물을 이용한 화장료의 개발이 활발하게 이루어져 왔다.

한국특허공개 제2007-0111025호에는 녹두(Mung bean)추출물을 유효성분으로 포함하는 콜라겐 생합성 촉진용 조성물 및 주름 개선용 화장료 조성물이 개시되어 있으며, 한국특허공개 제2007-0111636호에는 발아 녹두 추출물을 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물 및 피부보습용 화장료 조성물에 관하여 개시되어 있다. 또한, 한국특허공개 제2009-0081721호에는 녹두를 효모(Saccharomyces cerevisiae) 또는 유산균(lactobacillus)으로 배양하여 얻은 녹두 발효액을 포함하는 피부보호용 화장료 조성물이 개시되어 있으며, 한국특허공개 제2007-0006960호에는 녹두 추출물과 MSG를 포함하는 배지에, 글루타메이트 디카르복실라아제를 발현하여 MSG를 가바로 전환시킬 수 있는 유산균을 접종한 후 배양하여 녹두 추출물과 가바가 함유된 녹두 유산균 배양물을 제조하는 방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 화장료에 대하여 개시되어 있다.

그러나 종래의 녹두추출물의 이용은 녹두분말을 직접 유산균 배양액에 첨가하여 배양액을 제조하거나, 녹두 또는 발아녹두를 물이나 유기용매 등의 친수성용매로 추출하여 직접 이용하거나, 또는 이를 발효시켜 이용하는 것들로서, 녹두 추출방법에 관한 연구는 미진하였다.

본 발명자들은 녹두를 소수성 용매인 오일을 사용하여 추출하고, 적당한 유산균으로 발효시켜 녹두 추출물을 제조하는 경우에 피부주름개선 및 항염 활성에 있어서, 기존의 것에 비하여 더욱 우수한 추출물이 얻어진다는 것을 발견하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 녹두를 소수성 용매인 오일로 추출한 후, 이를 다시 유산균 발효시키는 방법에 의하여 피부주름개선 및 염증완화효과가 우수한 녹두 유산균 발효 추출물을 제조하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한 본 발명은 상기 제조방법에 의하여 제조된 유산균 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, 녹두에 5~10배의 MCT(Medium Chain Triglyceride) 오일을 가하고, 50~60℃에서 3~5시간 가온 후, 24~48시간 상온 방치하여 추출하는 녹두 오일추출물 제조단계;

상기 녹두 오일추출물을 포함하는 유산균 배양 배지를 제조하고 10⁴~10⁷cfu/ml의 유산균을 접종하는 단계;

교반하면서 pH 6~7, 37~42℃에서 24~36시간 배양하는 유산균 발효단계: 및

실활 시킨 후 감압 증류하여 물을 제거하는 단계를 포함하는 녹두 유산균 발효 추출물의 제조방법이 제공된다.

상기 MCT 오일은 C6 내지 C14의 중쇄지방산 트리글리세라이드이며, 바람직하게는 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드이다.

상기 유산균으로는 스트렙토코커스 속(Steptococcus sp .), 락토바실러스 속(Lactobascillus sp .) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium sp .)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 균주를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 스트렙토코커스 써모필루스(Steptococcus thermophilus)를 사용할 수 있다.

상기 유산균 배양 배지는 탄소원으로서 글루코오스, 수크로오스, 말토오스, 프럭토오스, 락토오스, 자일로오스, 갈락토오스 및 아라비노오스로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 것을, 바람직하게는 수크로우스(sucrose)를 포함하며, 질소원으로서 효모 추출물(yeast extract), 소이톤(soytone), 펩톤, 비프 추출물(beef extract), 트립톤 및 카시톤으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 것을, 바람직하게는 효모추출물(Yeast extract)을 포함하는 것을 특징으로 한다.

상기 다른 목적을 달성하기위하여 본 발명에 따르면, 상기 제조방법에 의하여 제조되는 녹두 유산균 발효 추출물을 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.001~50중량 %함유하는 화장료 조성물이 제공된다.

본 발명에 따르면 녹두의 추출용매로서 MCT 오일을 사용함으로써, 녹두의 지용성 성분을 추출하고, 이를 다시 유산균발효에 의하여 특정성분을 강화함으로써, 항염 및 피부주름개선 효과가 우수한 녹두 추출물을 제조할 수 있으므로, 이를 유효성분으로 포함하는 화장료조성물의 제조에 유용하다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 녹두 오일 유산균발효추출물의 콜라겐 생합성촉진효과를 나타내는 그래프이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 녹두 오일 유산균발효추출물의 항염 활성효과를 나타내는 그래프이다.

본 발명에서 유효성분으로 이용되는 녹두(綠豆)는 쌍떡잎식물 장미목 콩과에 속하는 한해살이풀로서 원산지는 인도로 추정되며 한국ㅇ중국ㅇ인도 등의 아시아지역에 주로 분포한다. 열매는 협과로 처음에는 녹색이지만 익으면 검어지고 길고 거친 털로 덮여 있다. 종자는 녹색인 것이 많으나 노란색, 녹색을 띤 갈색 및 검은빛을 띤 갈색인 것도 있다. 녹말 53~54%, 단백질 25-26%로 이루어져 있으며 영양가가 높고 향미가 좋다. 녹두(Mung Bean)는 원래 강한 해열, 해독 작용을 가지고 있어 한방에서 해열, 해독제로 널리 사용되는 것으로서, 동의보감 등의 문헌에도 피부미용과 관련된 처방에 많이 사용되는 것으로 나타난다. 또한 녹두는 피부 각질층에 피부 사상균이 침투하여 발생하는 부스럼, 종기 및 볼거리 등에도 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 녹두의 에탄올 추출물에는 비텍신(vitexin)과 이소비텍신(isovitexin)이 함유되어 있어, 항산화 및 황염증 효능을 나타내는 것으로 알려져 있다.

본 발명은 통상의 유기용매 추출법 대신에 녹두의 지용성 성분 추출을 위하여 MCT 오일을 이용하여 추출하고, 이를 다시 특정 유산균으로 발효시켜 항염 및 피부주름개선 활성이 강화된 녹두추출물을 제조하는데 그 특징이 있다.

본 발명은 녹두를 기존의 물이나 유기용매와 같은 친수성 용매로 추출하는 대신에, 소수성 용매, 그 중에서도 중쇄 지방산 트리글리세라이드 오일(MCT)을 사용하여 추출한다. 이를 통하여 녹두의 특정 지용성 성분을 효과적으로 추출하는 것이 가능하다. 이하, 녹두의 MCT 오일 추출과정에 관하여 상세히 설명한다.

먼저 녹두를 분쇄한 후 추출용매인 MCT 오일을 5~10배 부피로 가한다. 50~60℃로 가온하여 3~5시간 유지하고, 이를 24~48시간 상온 방치하여 추출한다. 이를 감압, 여과하여 녹두 오일추출물을 제조할 수 있다. 상기 추출용매인 MCT 오일은 C6 내지 C14의 중쇄지방산 트리글리세라이드이며, 바람직하게는 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드를 사용할 수 있다. 상기의 추출방법에 의하여 녹두의 지용성 생리활성 성분이 고효율로 추출된다.

상기 녹두 오일 추출물을 포함하는 유산균 배양 배지는 하기의 방법으로 제조할 수 있다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 유산균 배양배지는 상기 녹두 오일 추출물외에 추가적으로 탄소원, 질소원, 미량원소 및 계면활성제를 포함하여 이루어질 수 있다. 본 발명의 배지에서 상기 탄소원으로 이용 가능한 것은, 글루코오스, 수크로오스, 말토오스, 프럭토오스, 락토오스, 자일로오스, 갈락토오스 및 아라비노오스로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나가 사용될 수 있으며, 바람직하게는 수크로스가 사용될 수 있다. 탄소원의 사용량은 바람직하게는, 상기 녹두 오일추출물의 총 중량에 대하여 1 내지 20 중량%이고, 보다 바람직하게는 2 내지 10 중량%이며, 보다 더 바람직하게는 3 내지 6 중량%이다.

본 발명의 배지에서 상기 질소원으로 이용 가능한 것은, 효모 추출물(yeast extract), 소이톤(soytone), 펩톤, 비프 추출물(beef extract), 트립톤 및 카시톤으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 것이며, 바람직하게는 효모 추출물을 사용할 수 있다. 질소원의 사용량은 바람직하게는, 상기 녹두 오일추출물의 총 중량에 대하여 1 내지 20 중량%이고, 보다 바람직하게는 1 내지 10 중량%이며, 보다 더 바람직하게는 2 내지 4 중량%이다.

상기 탄소원 및 질소원 외에 미네랄 등의 미량원소가 사용될 수 있는데, 디포테슘 포스페이트, 마그네슘 설페이트, 소듐 아세테이트, 망가닉 설페이트, 페릭 설페이트 및 칼슘 클로라이드로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나가 사용될 수 있으며, 바람직하게는 디포테슘 포스페이트가 사용될 수 있다. 상기 미량원소의 사용량은 바람직하게는, 상기 녹두 추출물의 총 중량에 대하여 0.001 내지 1 중량%이고, 보다 바람직하게는 0.01 내지 1 중량%이며, 보다 더 바람직하게는 0.03 내지 0.3 중량%이다.

상기 제조된 배양 배지에 유산균을 접종하여 상기 녹두 오일추출물을 발효시킨다.

본 발명에 사용되는 유산균으로는 스트렙토코커스 속(Steptococcus sp .), 락토바실러스 속(Lactobascillus sp .) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium sp .)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 균주를 사용할 수 있으며, 스트렙토코커스 써모필루스(Steptococcus thermophilus)를 사용하여 발효시키는 경우에 가장 우수한 활성을 가지는 녹두 발효추출물이 제조되었다.

상기 유산균의 접종량은 접종 후의 초기 균수가 10⁴~10⁷cfu/ml가 되도록 하는 것이 바람직하다. 유산균이 접종된 상기 녹두 오일추출물 함유 배지를 교반하면서 pH 6~7, 온도 37~42℃ 조건에서 24~36시간 발효를 진행시킨다. 발효가 완료된 후에는 실활 시킨 후 감압 증류하여 물을 제거하여 녹두 유산균 발효 추출물을 제조하게 된다. 성분분석결과 상기와 같은 발효공정을 통하여, 녹두 오일추출물에 함유되어 있는 트리글리세라이드 계열의 성분이 강화되는 것을 확인할 수 있었다. 또한 상기의 유산균 발효를 통하여 피부자극성이 경감되며, 활성성분의 경피흡수가 촉진된다.

이와 같이 제조된 녹두 유산균 발효 추출물은 항염 및 피부주름개선용 화장료 조성물에 유용하게 사용될 수 있다. 구체적으로는 상기 녹두 유산균 배양물로부터 균체 및 불용성 성분을 제거하여 준비되는 상기 녹두 유산균 발효 추출물을 이를 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.001~50중량% 함유시켜 통상의 제조방법에 의하여 화장료 조성물을 제조한다.

상기 녹두 유산균 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징 폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도로 구성된 그룹에서 선택된 어느 하나의 제형으로 적용되어질 수 있다.

[실시예]

이하, 하기의 실시예와 시험예들을 통하여 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명이 이 예들에 의하여 한정되는 것은 아니다.

제조예 1:녹두 MCT 오일 추출물의 제조

200메쉬로 분쇄한 녹두분말 200g에 Caprylic/Capric Triglyceride(제품명:Wagnolol MCT)를 5배량 넣고 60℃에서 3시간 가온 후, 24시간 상온 방치하여 추출하였다. 그 후, 감압, 여과하여 녹두 MCT 오일 추출물 920g을 얻었다.

제조예 2:녹두 에탄올 추출물의 제조

200메쉬로 분쇄한 녹두분말 200g에 70% 에탄올을 6배량 넣고 60℃에서 3시간 가온 하고, 여과 후 감압 농축하여 녹두 에탄올 추출물 2.7g을 얻었다.

실시예 1:녹두 오일 추출물의 유산균 발효

상기 제조예 1의 녹두 오일추출물을 포함하는 배지로서, 하기 표 1의 조성으로 이루어지는 배지를 1500rpm 세기로 Homo-mixer를 이용하여 혼합하여 유산균 배양이 가능한 배지를 제조하였다. 유산균 스트렙토코커스 써모필루스(Streptococcus thermophilus)를 균수가 10⁶cfu/㎖가 되도록 접종한 후, 60rmp으로 교반하면서 37℃에서 24시간 배양하였다. 배양 후, 10분간 80℃에서 실활 후, 60℃에서 감압하여, 물을 증류하여 녹두 지방산 오일 유산균 추출물 480g을 얻었다.

성분	Grams/Liter
Casein enzymic hydrolysate	10.0
효모추출물(Yeast extract)	5.0
수크로우스(Sucrose)	10.0
Dipotassium phosphate	2.0
녹두 Caprylic/Capric Triglyceride 추출물	500g
Tween 80	2g

(조건 pH 6.8)

제조예 3:녹두 에탄올 추출물의 유산균발효

상기 제조예 1에서 제조된 녹두 MCT 오일 추출물을 첨가하는 대신에, 상기 제조예 2의 70% 에탄올 추출물을 첨가하여 하기 표 3의 조성으로 이루어지는 배지를 제조하고, 나머지는 상기 실시예 1과 동일하게 하여 녹두 유산균발효 추출물을 제조하였다.

성분	Grams/Liter
Casein enzymic hydrolysate	10.0
효모추출물(Yeast extract)	5.0
수크로우스(Sucrose)	10.0
Dipotassium phosphate	2.0
녹두 에탄올 추출물(제조예 2)	20g

시험예 1:콜라겐 생합성 촉진효과시험

상기 실시예 1의 녹두 유산균 발효추출물의 콜라겐 생합성 촉진 효과시험을 하였다. 상기 제조예 1 내지 3의 추출물들을 비교예로 하였다.

섬유아세포를 10% FBS를 첨가한 IMDM 배지에 5×10⁵의 세포농도로 접종하여 37℃, 5% CO₂배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 24시간 배양하여 실시예 1과 제조예 2~4에서 제조한 녹두추출물을 최종 농도가 100, 500㎍/㎖가 되도록 디메틸설폭시드에 희석하여 제조한 희석용액을 첨가하여 18시간 동안 동일 조건에서 배양 하였다. 이후 Trizol reagent(invitrogen, USA)를 이용하여 섬유아세포를 회수하여 mRNA를 추출하여 일련의 과정을 거쳐 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA로부터 PROCOLLAGEN TYPEⅠ유전자 부위를 증폭시켜 전기영동을 통해 유전자 발현 양을 확인하였으며, 유전자 증폭은 thermal cycler(GenePro, Hangzhou bioer tech., CHINA)를 사용하여 10x taq polymerase buffer, 10 mM dNTP, 10 pmol primer (F: AGC CAG CAG ATC GAG AAC AT, R: TCT TGT CCT TGG GGT TCT TG), taq polymerase를 혼합하고 증류수를 더하여 50 uL로 조정 후 95도 5분 1cycle/95도 1분/51도 2분/72도 1분 28 cycle 증폭, 72도에서 5분간 반응하는 조건으로 수행하였다. 생성된 procollagen의 발현율은 아래 식에 따라 계산하였으며 대조구로는 시료를 처리하지 않은 정상 섬유아세포를 사용하였다.

procollagen 발현율(%) = B/A x 100(%)

A: 상기 대조군에서의 procollagen 발현량

B: 시료 처리 및 UV 조사 섬유아세포의 procollagen 발현량

그 결과를 하기의 표 3과 도 1에 나타내었다.

COL1A1 gene expression(%)		UV 조사
COL1A1 gene expression(%)	0.00%	0.00%	0.10%	0.50%
Blank	100	0.64
녹두 MCT 오일 추출물			5.67	197.45
녹두 ethanol 추출물			2.21	52.01
녹두 MCT 오일 추출물 유산균발효			32.35	278.25
녹두 ethanol 추출물 유산균발효			3.22	98.54

상기 표 3과 도 1에서 확인되는 바와 같이 상기 실시예 1의 녹두 MCT 오일추출 및 유산균 발효추출물의 경우 다른 녹두 추출물에 비하여 콜라겐 생합성촉진 효과가 월등하게 나타났다.

시험예 2: 항염 효과시험

상기 실시예 1의 녹두 유산균 발효추출물의 항염 활성 효과를 확인해 보기 위해 초기 염증성 분자 중 하나인 TNF-α 생성에 대한 효과를 알아보았다. TNF-α와 같은 염증성 사이토카인(pro-inflammatory cytokine)의 형성은 포스포리파제 A2(phospholipase A2)의 활성으로 인해 아라키돈산(arachidonic acid)이 프로스타글란딘(prostaglandin)으로 바뀌는 과정 및 NO 형성 과정으로 이어지게 된다.

실험에 사용된 세포는 HaCaT(Human Skin Keratinocytes cell line)이며 37℃, 5%의 CO₂ _,10%의 Fetal bovine serum(FBS, Lonza), 50μg/mL의 streptomycin(Sigma)을 첨가한 Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM, Invitrogen)에서 배양하였다. 배양 후 1시간 동안 UV를 조사시켜 세포에 스트레스를 주었다. 대조구로는 시료를 처리하지 않고 UV를 조사한 세포를 사용하였다.

RNA 분석을 위해 세포 내의 total RNA를 세포 배양으로부터 Trizol reagent(Invitrogen, USA)를 사용하여 추출하였다. RNA의 순도와 무결성은 A₂₆₀nm/A₂₈₀nm비율 측정을 통해 확인하였고, RNA 수율은 260nm에서 흡광도로 측정하였다.

cDNA합성은 3㎍의 total RNA를 Oligo dT 15(500ng/㎕l) primer, dNTP (10mM), RTase inhibitor(40 U/㎕), Powerscript Ⅱ RTase(Clontech, USA)를 첨가하여 25℃에서 10분간 primer annealing, 42℃에서 60분간 cDNA를 합성하고 95℃에서 5분간 RTase denaturation 시켰다. PCR은 cDNA로부터 TNF-α, GAPDH를 증폭하기 위하여 cDNA 3㎕, 10X taq polymerase buffer 5㎕, 10mM dNTP 2㎕, 10pmol primer 각각 2㎕, taq polymerase 0.5㎕를 혼합하고 증류수를 더하여 50㎕로 조정한 후 증폭시켰다. 프라이머 서열은 표 4에 나타내었다. PCR에 의하여 생성된 산물은 1% ㅇ아가로우스 겔(arose gel)에서 전기영동하여 image analyzer(UGEN, U:Genius)로 확인하였으며 각 밴드의 밀도는 밀도계측프로그램(Gene Tools from Syngene)을 이용하여 측정하였다.

Gene	Primer
GAPDH	Forward 5'- AAC GAA TTT GGT CGA ACA GC-3'
	Reverse 5'- TGA GGA GGG ATT CAG TG-3'
TNF-α	Forward 5'- CAG AGG GAA GAG TTC CCC AG-3'
	Reverse 5'- CCT TGG TCT GGT AGG AGA CG-3'

그 결과를 하기의 표 5와 도 2에 나타내었다.

TNF-α expression(%)		UV 조사
TNF-α expression(%)	0.00%	0.00%	0.01%	0.05%	0.10%	0.50%
Blank	6.13	100.00
녹두 MCT오일 추출물			58.29	34.47	6.17	2.95
녹두 ethanol 추출물			95.74	86.68	70.58	65.52
녹두 MCT오일추출물 유산균발효			35.24	15.01	3.87	0.45
녹두 ethanol추출물 유산균발효			77.70	58.88	45.33	40.01
Bisabolol						30.92

상기 표 5와 도 2에서 확인되는 바와 같이 상기 실시예 1의 녹두 MCT 오일추출 및 유산균 발효추출물의 경우 다른 녹두 추출물에 비하여 항염 활성 효과가 월등하게 나타났다.

실시예 2:크림 제조

하기의 표 6과 같은 조성을 가지는 크림을 제조하였다.

조성물	제형(중량%)				비교 제형
조성물	a	b	c	d	비교 제형
녹두 MCT 오일 추출물	0.50
녹두 ethanol 추출물		0.50
녹두 MCT 오일 추출물 유산균발효			0.50
녹두 ethanol 추출물 유산균발효				0.50
프로필렌글라이콜	10.00	10.00	10.00	10.00	10.00
글리세린	8.00	8.00	8.00	8.00	8.00
베타인	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00
부틸렌글라이콜	5.00	5.00	5.00	5.00	5.00
폴리글리세릴-3 메칠글루코오스 디스테아레이트	2.00	2.00	2.00	2.00	2.00
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	10.00	10.00	10.00	10.00	10.00
세탄올	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00
미네랄오일	5.00	5.00	5.00	5.00	5.00
카보머	0.50	0.50	0.50	0.50	0.50
트리에탄올아민	0.50	0.50	0.50	0.50	0.50
프로필파라벤	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05
부틸파라벤	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05
메칠파라벤	0.20	0.20	0.20	0.20	0.20
향	적량	적량	적량	적량	적량
정제수	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100

시험예 3:피부주름개선 효과 시험

상기 실시예 2에 의해 제조된 화장료 조성물에 대한 피부 주름 개선 효과를 다음과 같이 측정하였다. 50대 여성 75명을 각각 15명씩 다섯 그룹으로 나누어 상기 제형 a, b, c, d 및 비교 제형의 화장료 조성물을 눈가에 매일 아침, 저녁으로 2회 0.2g의 양으로 8주간 도포한 후 눈가의 주름 부위를 ARAMO TS(아람 휴비스, 대한민국)를 사용 측정하여 주름 개선 효과를 평가하였다. 결과는 하기 표 7과 같다.

주름 측정 수치		a			b			c			d			비교제형
주름 측정 수치		D0	D8	차이	D0	D8	차이	D0	D8	차이	D0	D8	차이	D0	D8	차이
피 검 자	1	45	44	1	52	51	1	40	35	5	58	55	3	47	46	1
	2	42	40	2	53	53	-	43	38	5	44	43	1	43	44	1
	3	47	42	5	45	42	3	47	42	5	47	46	1	45	43	2
	4	51	38	13	57	55	2	42	35	7	53	50	3	54	50	4
	5	40	39	1	50	48	2	53	45	8	51	50	1	52	51	1
	6	58	55	3	53	51	2	58	53	5	56	53	3	53	53	-
	7	42	38	4	47	45	2	55	51	4	47	45	2	45	44	1
	8	43	39	4	48	47	1	42	36	6	48	46	2	47	46	1
	9	44	40	4	44	43	1	43	39	4	50	48	2	45	45	-
	10	47	45	2	50	48	2	44	40	4	55	53	2	50	48	2
	11	51	47	4	42	42	-	43	41	2	47	45	2	51	50	1
	12	58	55	3	49	48	1	47	43	4	43	41	2	53	50	3
	13	55	50	5	43	40	3	49	42	7	40	39	1	45	44	1
	14	42	40	2	40	39	1	52	47	5	43	40	3	42	40	2
	15	48	43	5	48	46	2	56	45	11	47	40	7	44	43	1
평균		47.5	43.7	3.9	48.1	46.5	1.5	47.6	42.1	5.5	48.6	46.3	2.3	47.7	46.5	1.3

상기 표 7에서 확인되는 바와 같이, 본 발명 실시예 1의 녹두 오일 유산균 추출물을 함유하는 제형 c 화장료 조성물의 경우 가장 우수한 주름개선효과를 나타내었다.

시험예 4:피부자극성 시험

50대 여성 75명을 대상으로 본 발명의 화장료 조성물의 자극 정도를 평가하기 위하여 IQ chambers(Chemotechnique, Sweden)를 사용하였으며, 자세한 시험 방법은 다음과 같다.

IQ chamber의 각각의 chamber에 sodium lauryl sulfate 0.1% 수용액과 상기 실시예 2에서 제조한 제형을 첨가한 후 피검자의 등에 부착하였다. 48시간 후에 부착된 패치(patch)를 제거하고 부착 후 72시간에 결과를 확인하였다.

피부반응정도	피검자 수
피부반응정도	제형 a +0.1% SLS	제형 b +0.1% SLS	제형 c +0.1% SLS	제형 d +0.1% SLS	비교제형 +0.1% SLS
홍반없음	5	3	13	3	1
아주경미한 홍반	8	5	2	7	5
명료한 홍반	2	6	-	5	7
중증의 홍반	-	1	-	-	2

상기 표 8의 결과를 통해, 녹두 MCT 오일 추출물 유산균 발효를 포함하는 본 발명의 화장료 조성물은 화장품의 자극원으로 작용하는 락트산에 의한 피부자극을 완화하여 부작용(홍반 발생)을 크게 감소시킴을 알 수 있었다. 또한 그 효과는 유산균 발효 전의 녹두 추출물을 사용한 제형 a 화장료나 제형 b의 녹두 에탄올 추출물을 사용한 화장료, 제형 d의 에탄올 추출물 유산균 발효 추출물을 포함하는 화장료에 의한 자극 완화 효과보다 우수하였다.

Claims

녹두에 5~10배의 MCT(Medium Chain Triglyceride) 오일을 가하고, 50~60℃에서 3~5시간 가온 후, 24~48시간 상온 방치하여 추출하는 녹두 오일추출물 제조단계;
상기 녹두 오일추출물을 포함하는 유산균 배양배지를 제조하고 10⁴~10⁷cfu/ml의 유산균을 접종하는 단계;
교반하면서 pH 6~7, 37~42℃에서 24~36시간 배양하는 유산균 발효단계: 및
실활 시킨 후 감압 증류하여 물을 제거하는 단계를 포함하는 녹두 유산균 발효 추출물의 제조방법.
제 1항에 있어서, 상기 MCT 오일은 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드인 것임을 특징으로 하는 녹두 유산균 발효추출물의 제조방법.
제1항에 있어서, 상기 유산균은 스트렙토코커스 속(Steptococcus sp .), 락토바실러스 속(Lactobascillus sp .) 및 비피도박테리움 속(Bifidobacterium sp .)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 균주인 것임을 특징으로 하는 녹두 유산균 발효추출물의 제조방법.
제 1항에 있어서, 상기 유산균 배양 배지는 탄소원으로서 수크로우스(sucrose), 질소원으로서 효모추출물(Yeast extract)을 포함하는 것임을 특징으로 하는 녹두 유산균 발효추출물의 제조방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 의하여 제조되는 녹두 유산균 발효 추출물을 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.001~50중량 %함유하는 화장료 조성물.