KR101155145B1

KR101155145B1 - 혈류 개선용 조성물, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 건강기능식품

Info

Publication number: KR101155145B1
Application number: KR1020100019351A
Authority: KR
Inventors: 이명기; 김병목; 이영철; 양혜정; 김수경
Original assignee: 한국식품연구원
Priority date: 2010-03-04
Filing date: 2010-03-04
Publication date: 2012-06-12
Also published as: KR20110100397A

Abstract

본 발명은 혈류 개선용 조성물, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 건강기능식품에 관한 것으로, 구체적으로 본 발명의 혈류 개선용 조성물은 산약을 단백질 분해효소로 분해하여 생성된 효소 분해물로부터 분리된 분자량 100,000 dalton이하의 분획물을 포함한다.
본 발명의 혈류 개선용 조성물은 콜레스테롤의 합성을 저해하고 담즙산의 흡착 능력이 우수하여 혈중 콜레스테롤 농도를 저하시킴으로 혈류를 개선한다.

Description

혈류 개선용 조성물, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 건강기능식품 {Composition for improving blood flow, preparation method thereof and health functional foods comprising thereof}

본 발명은 혈류 개선용 조성물, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 건강기능식품에 대한 것으로, 구체적으로 산약을 이용하여 콜레스테롤의 합성을 저해하고 담즙산 결합 능력이 우수하여 혈류 개선 효과가 상승되는 혈류 개선용 조성물, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 건강기능식품에 대한 것이다.

최근 들어 혈행 장애로 발생하는 심혈관계 질환은 미국, 유럽, 아시아 등 전 세계적으로 주요한 사망 원인이 되고 있다. 우리나라에서도 심혈관계 질환이 사망원인의 1위를 차지하고 있는데 이는 서구화된 식생활에 따라 동물성 식품의 섭취빈도가 높아져 성인의 경우 혈중 총 콜레스테롤이나 중성지질의 수준이 높아지는 경향때문인 것으로 보인다. 이러한 지질성분의 증가는 혈액의 점성을 증가시키거나 혈류의 흐름을 방해함으로써 뇌졸중을 포함한 심혈관성 질환의 원인이 되는 것으로 알려져 있다.

혈류개선 관련 의약품들은 국내외로 판매되고 있지만 혈액순환제제의 경우 기능성소재의 단순복합제 형태이며, 일부 기능성 식품들은 약물중독 및 부작용에 의한 문제점이 있다.

예로부터 산약은 자양, 강정, 당뇨, 폐결핵, 소염, 해독, 신경통 및 류마티즘에 효과적인 것으로 알려져 있으나, 현재까지 산약으로 인한 인체 내 혈류개선 및 생리활성 효과에 관한 연구는 미미하여 더욱 진행되어야 할 분야이다.

상기의 문제점을 해결하고자 본 발명의 목적은 산약을 이용하여 콜레스테롤의 합성을 저해하고 담즙산 결합 능력이 우수하여 혈류 개선 효과가 상승되는 혈류 개선용 조성물, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 건강기능식품을 제공하는 것이다.

상기의 목적을 달성하기 위하여 본 발명은,

산약을 단백질 분해효소로 분해하여 생성된 효소 분해물로부터 분리된 분자량 100,000 dalton이하의 분획물을 포함하는 혈류 개선용 조성물을 제공한다.

상기 조성물은 분자량 50,000 dalton이하의 분획물을 포함할 수 있다.

상기 조성물은 분자량 30,000 dalton이하의 분획물을 포함할 수 있다.

상기 분획물은 산약을 단백질 분해효소로 분해하여 생성된 효소 분해물을 유기용매로 추출한 후 분리한 것일 수 있다.

상기 분획물은 산약을 단백질 분해효소로 분해하여 생성된 효소 분해물의 유기용매 추출물의 상등액으로부터 분리한 것일 수 있다.

상기 단백질 분해효소는 protamex 일 수 있다.

상기 유기용매는 에탄올일 수 있다.

본 발명의 다른 목적을 달성하고자 본 발명은

산약을 단백질 분해효소로 분해하는 효소 분해 단계; 및

상기 효소 분해 단계에서 얻어진 효소 분해물을 한외여과하여 분자량별로 분획물을 얻는 분획 단계를 포함하는 혈류 개선용 조성물의 제조 방법을 제공한다.

상기 혈류 개선용 조성물의 제조 방법은 상기 효소 분해 단계에 의해 얻어진 분해물을 유기용매로 추출하는 유기용매 추출 단계를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위해 본 발명은

상기 혈류 개선용 조성물을 포함하는 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 혈류 개선용 조성물은 콜레스테롤 합성을 저해하고 담즙산 결합 능력이 우수하여 혈류 개선 효과가 향상된다.

본 발명의 혈류 개선용 조성물은 천연유래의 물질에서 분리한 것으로 인체에 무해하며 장기간 사용하여도 부작용이 없다.

본 발명의 혈류 개선용 조성물은 동맥경화 또는 뇌졸중 등의 성인병의 예방에도 효과가 있다.

본 발명의 혈류 개선용 조성물은 각종 건강기능식품으로도 제조 가능하여 간편하게 섭취할 수 있다.

도 1 은 산약을 단백질 분해효소로 분해시킨 효소 분해물을 분자량별로 분리하는 과정을 도식화한 것이다.
도 2 는 담즙산의 표준검량곡선을 나타낸 것이다.

이하, 당업자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 산약을 단백질 분해효소로 분해시킨 효소 분해물로부터 분리된 분자량 100,000 dalton이하의 분획물을 포함하는 혈류 개선용 조성물을 제공한다.

상기 산약의 효소 분해물은 산약의 아린맛이 감소되어 기호도를 상승시킬 수 있어 식품으로 적용이 용이하고, 콜레스테롤의 합성을 저해하며, 답즙산을 흡착하여 혈중 콜레스테롤 농도를 저하시키므로 혈류를 개선시킬 수 있다. 본 발명의 조성물은 상기 효소 분해물 중 혈류 개선에 가장 우수한 효과를 나타내는 유효성분을 분리하여 포함하므로 소량으로도 혈류 개선 효과를 나타낼 수 있으며, 천연 유래의 물질로 인체에 무해하고 장기간 사용하여도 부작용이 없다.

상기 산약은 Dioscorea batatas 또는 Dioscorea japonica의 주피를 제거한 담근체를 그대로 또는 쪄서 말린 약재로 주로 점질성 다당류인 mannan과 단백질, 무기질, steroid성 saponin 및 phenanthrene 유도체 등으로 구성되어 있으며 항산화, 항염, 항암, 고혈당, 비만 및 면역조절 등에 효과가 있다.

상기 효소 분해물은 산약을 단백질 분해효소로 분해하여 얻을 수 있다.

상기 산약은 건조하여 분쇄한 분말 형태를 사용할 수 있으며, 효소 분해가 용이하도록 물과 혼합한 현탁액의 형태를 사용할 수 있다. 상기 현탁액은 산약과 물을 1:5 내지 1:10 의 중량비로 혼합한 것일 수 있으며, 바람직하게는 1:9 의 중량비로 혼합할 수 있다. 상기 중량비로 산약과 물을 혼합한 현탁액 형태로 사용하는 경우 현탁액의 유동성이 우수하여 효소 침투가 용이하므로 효소 분해 반응이 용이하게 진행될 수 있다.

상기 단백질 분해효소는 바람직하게는, alcalase, flavourzyme 또는 protamex를 사용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 바람직하게는, protamex를 사용할 수 있다. 상기 protamex는 bacillus 균주에서 분리한 protease complex로 구성된 내열성 액화 효소로 식품내 단백질의 가수분해 및 새로운 식품 개발에 주로 이용되며, 35 ℃ 내지 60 ℃, pH 5.5 내지 7.5 에서 활성을 나타낸다. Protamex는 단백질을 무작위로 분해하는 endoprotease와 단백질 말단에서 아미노산 단위로 분해하는 exoprotease 중에서 endoprotease의 비율이 더 높아 단백질의 분해력이 우수하다. 따라서, protamex로 산약을 분해했을 경우 고분자 단백질의 분해능이 우수하여 콜레스테롤 합성 저해 능력 및 산약 단백질의 담즙산 흡착 능력이 향상된다. 상기 단백질 분해효소는 산약에 대하여 0.01 내지 2 중량부로 포함될 수 있으며, 바람직하게는 1 중량부로 포함될 수 있다. 상기 단백질 분해효소가 0.01 중량부 미만으로 포함되는 경우 산약이 효소에 의해 분해되지 않을 수 있고, 2 중량부를 초과하여 포함되는 경우 효소의 첨가량에 비하여 혈류 개선 효과의 상승도가 작으며, 효소의 과다 첨가로 비용만 상승될 수 있다.

상기 단백질 분해효소에 의한 산약의 분해는 산약과 물을 혼합한 산약 현탁액에 단백질 분해효소를 주입한 후 일정 온도에서 교반하면서 효소 분해를 수행할 수 있다. 구체적으로, 30 ℃ 내지 70 ℃에서 30 분 내지 120 분간 수행될 수 있으며, 바람직하게는 60 ℃에서 90 분간 수행할 수 있다. 상기 범위의 온도 및 시간에서 단백질 분해효소에 의한 분해가 잘 수행될 수 있으며, 30 ℃ 보다 저온인 경우 효소가 활성을 나타내지 못하고 70 ℃보다 고온인 경우 효소의 변성으로 인하여 저온인 일어나지 않는다. 또한 30 분 미만으로 분해를 수행서 단백질 단백질 분해효소에 의한 분해가 제대로 수행되지 못하여 혈류 개선 효과가 저하될 수 있으며, 120 분을 초과하는 경우 반응시간만 길어질 뿐 혈류 개선 효과의 상승은 미미할 수 있다.

상기 분획물은 상기 산약을 단백질 분해효소로 분해한 분해물로부터 분리한 분자량 100,000 dalton이하의 분획물일 수 있으며, 바람직하게는 분자량 50,000 dalton이하의 분획물일 수 있으며, 보다 바람직하게는 분자량 30,000 dalton이하의 분획물일 수 있다. 상기 산약의 효소 분해물로부터 혈류 개선 효과에 가장 우수한 활성을 보이는 특정 분자량 범위의 분획물을 분리하는 경우 콜레스테롤 합성 저해 능력과 담즙산 결합 능력이 더욱 상승되어 혈류 개선 효과는 더욱 상승된다.

상기 효소 분해물을 분자량별로 분획하는 방법은 당업계에 공지된 방법을 제한없이 사용할 수 있으나, 바람직하게는 한외여과를 이용하여 분자량별로 분리할 수 있다. 도 1 은 산약을 단백질 분해효소로 분해시킨 분해물을 분자량별로 분리하는 모습을 도식화한 것이다. 도 1 과 같이 분자량별로 분리하여 효소 분해물중 혈류 개선의 유효 성분을 수득할 수 있다.

상기 분획물은 산약을 단백질 분해효소로 분해한 후 얻어지는 효소 분해물을 유기용매로 추출한 후, 분자량에 따라 분리한 분획물일 수 있다. 상기 유기용매는 n-헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, n-부탄올, 에탄올로 이루어진 군으로부터 선택된 단독 또는 이들의 혼합물일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 바람직하게는, 에탄올일 수 있다. 에탄올은 인체에 무해하여 식품으로의 제조가 용이하고 에탄올 분획물은 HMG-CoA reductase 저해 활성이 우수하여 콜레스테롤 합성을 저해하므로 혈류를 개선시킨다. 상기 유기용매는 산약의 효소 분해물에 대하여 2:8 내지 8:2 의 중량비로 혼합되어 분획물을 얻을 수 있으며, 바람직하게는 4:6 의 중량비로 혼합될 수 있다. 상기보다 적은 함량으로 유기용매를 사용하는 경우 분획물 중 혈류 개선 활성 성분이 소량이어서 혈류 개선 효과가 미미할 수 있으며, 상기보다 과량으로 유기용매를 사용하는 경우 활성 성분이 희석되어 혈류 개선 효과가 미미하고, 유기용매로 인한 이취 등으로 식품에의 적용이 용이하지 않을 수 있다.

상기 분획물은 산약을 단백질 분해효소로 분해한 효소 분해물을 유기용매로 추출한 유기용매 추출물의 상등액으로부터 분리한 것일 수 있다. 상기 효소 분해물을 유기용매로 추출한 후 원심분리하면 상등액과 침전물로 분리되며, 이 때 침전물보다 상등액에 혈류 개선에 효과가 있는 유효성분이 다량 용해되어 혈류 개선 효과가 상승된다.

본 발명은 또한, 효소 분해 단계; 및 분획 단계를 포함하는 혈류 개선용 조성물의 제조 방법을 제공한다. 또한, 유기용매 추출 단계를 더 포함할 수 있다.

상기와 같이 산약을 효소로 분해하여 혈류 개선에 효과가 있는 활성 성분을 얻을 수 있으며, 효소 분해로 인해 산약 특유의 아린맛 등을 감소시킬 뿐만 아니라 산약 분해물 중의 유효성분을 분자량에 따라 분리함으로 혈류 개선 효과를 보다 상승시킬 수 있는 조성물을 얻을 수 있다.

상기 효소 분해 단계는 산약을 단백질 분해효소로 분해하는 단계이다. 바람직하게는 산약 분말과 물을 혼합한 산약 현탁액에 단백질 분해효소를 주입하고 30 ℃ 내지 70 ℃ 의 shaking water bath에서 30 분 내지 120 분간 반응시켜 산약의 효소 분해물을 얻을 수 있다. 상기 단백질 분해효소는 상기에서 설명한 것과 동일하므로 여기서는 설명을 생략한다. 바람직하게는 protamex 를 사용하여 산약을 분해할 수 있다. 상기 protamex로 산약을 분해하여 얻은 효소 분해물은 HMG-CoA reductase 저해 활성 및 답즙산 흡착 능력이 우수하다. 상기 효소 분해물은 분해물 자체를 사용하거나 또는 상기 분해물을 5000 내지 10000 rpm 으로 20 분 내지 40 분간 수 회 원심분리하여 그 상등액을 취하여 사용할 수 있다. 또한, 상기 침전물을 재원심분리하여 얻어진 여액을 다시 상등액에 포함시킬 수 있으며, 이러한 과정을 수회 반복할 수 있다. 산약의 효소 분해물 중 상등액에 혈류 개선 활성 성분이 주로 분포해 있어 상등액을 취하는 경우 적은 양으로도 혈류 개선 효과를 상승시킬 수 있는 잇점이 있다.

상기 유기용매 추출 단계는 상기 산약의 효소 분해물을 유기용매로 추출하는 단계이다. 산약의 효소 분해물을 유기용매로 추출함으로 원하는 활성성분을 고농도로 함유하는 유기용매 분획물을 수득할 수 있다.

상기 유기용매는 상기 산약 분해물에 대하여 2:8 내지 8:2의 중량비로 첨가할 수 있으며, 바람직하게는 4:6의 중량비로 첨가할 수 있다. 구체적으로 산약 분해물에 대하여 2:8 내지 8:2 의 중량비로 유기용매를 가한 뒤, 상온 내지 30 ℃에서 10 시간 이상 추출하면 상등액과 침전물로 분리된다. 상기 추출은 1 내지 5 회 반복하여 실시할 수 있으며, 상등액을 분리하여 유기용매 분획물을 수득할 수 있다. 또한, 상등액을 여과한 뒤, 여과물을 농축하여 유기용매 분획물을 수득할 수도 있다.

상기 분획 단계는 상기 효소 분해물 또는 효소 분해물의 유기용매 추출물을 한외여과하여 분자량별로 분획물을 얻는 단계이다. 산약을 발효시켜 얻은 발효물 또는 발효물의 유기용매 추출물을 한외여과막을 이용하여 300,000 dalton이상, 300,000 dalton이하, 100,000~300,000 dalton, 100,000 dalton이하, 50,000~100,000 dalton, 50,000 dalton이하, 30,000~50,000 dalton, 30,000 dalton이하, 10,000~30,000 dalton, 10,000 dalton이하의 크기로 순차적으로 여과하여 분자량에 따른 분획물을 얻을 수 있다. 또한, 상기 분획 단계에서 상기 효소 분해물 또는 효소 분해물의 상등액을 사용하여 분자량별 분획물을 얻을 수 있다.

아울러, 본 발명은 상기 혈류 개선용 조성물을 포함하는 건강기능식품을 제공한다. 상기 건강기능식품은 혈류 개선의 효과가 있을 뿐만 아니라, 천연 유래의 물질로부터 분리한 물질을 포함하므로 인체에 안전하고 장기간 복용하여도 부작용이 없는 장점이 있다.

상기 혈류 개선용 조성물은 각종 음식, 음료, 곡류, 껌, 차, 비타민 복합제 및 엑기스 등과 같은 기호성 식품이나 건강 보조 식품류등에 첨가되어 통상적으로 알려진 방법에 따라 각종 식품을 제조할 수 있다. 또한, 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸등의 형태로 제형화하여 사용할 수도 있다. 이외에도 일반적인 제형으로 제형화될 수 있으며, 식품에 사용되는 통상적인 첨가제, 예를 들면, 부형제, 증량제, 결합제, 증점제, 유화제, 활택제, 습윤제, 현탁제, 착색료, 향료, 식품 첨가물 등의 성분을 당업자가 적의하게 선택하여 배합할 수 있다.

이하, 실시예 및 비교예를 통하여 본 발명을 상세히 설명한다. 이는 본 발명의 설명을 위한 것일 뿐, 이로 인해 본 발명의 범위가 제한되지 않는다.

< 실시예 1> 산약의 효소 분해물의 분자량별 분획물의 수득

생산약을 건조하여 분쇄한 분말산약과 물을 1:9 의 중량비로 첨가하여 현탁액을 얻었다. 상기 현탁액에 대하여 1 중량부의 protamex를 첨가하여 60℃ shaking water bath에서 90분간 효소분해 하였다. 효소분해가 끝난 후 8,000 rpm, 4℃에서 30분간 원심분리하여 상등액을 얻었다.

상온에서 separate funnel에 상기 효소 분해물의 상등액과 에탄올을 4:6의 중량비로 첨가하고 혼합하여 6 시간 동안 정치시킨 후 침전물과 상등액으로 분리되면 상등액을 취하고 이를 여과한 뒤, 감압농축하여 에탄올 추출물을 얻었다.

상기 에탄올 추출물을 한외여과 필터에 각각 15 mL씩 분주하여 5000 rpm 에서 20분간 원심분리하여 상등액을 분리하였다. 이때 사용한 한외여과 필터는 원심분리기(J251, Beckman, Germany)를 이용하여 분리할 수 있는 필터로 micro centrifuge tube형태의 membrane cell(ultrafree-15, Millipore)을 사용하였으며, 한외여과 필터의 pore size는 300,000 dalton, 100,000 dalton, 50,000 dalton, 30,000 dalton 및 10,000 dalton 크기별로 총 5개의 필터를 사용하여 분리하였다. 여과순서는 고분자량에서 저분자량으로 순차 분리를 실시하였다. 분리는 4℃에서 실시하였으며 분리하여 여과된 상등액 역시 4℃에서 보관하며 실험에 사용하였다.

< 실시예 2> 건강기능음료의 제조

상기 실시예 1 에서 제조한 산약의 효소 분해물을 에탄올로 추출한 후 얻은 분자량 50,000 dalton이하의 분획물을 포함하는 건강기능음료를 하기 표 1 과 같은 조성으로 제조하였다.

성 분	함량(mg)
분자량 50,000 dalton이하의 분획물	1.28
꿀	522
치옥토산아미드	5
니코틴산아미드	10
염산리보플라빈나트륨	3
염산피리독신	2
이노시톨	30
오르트산	50
물	200

< 실험예 1> HMG - CoA reductase 저해 활성

상기 실시예 1 에서 수득한 분자량별 분획물을 시료로 하여 Kleinsek(1981) 방법을 토대로 일부 수정하여 HMG-CoA reductase 저해활성을 측정하였다. 분자량별 분획물 0.1 ㎖에 인산완충용액(pH 7.0)을 첨가하여 첨가될 시약에 의한 pH 변화를 감소시킨 후 20 mM dithiotreitol(DTT, D-0632, sigma, U.S.A) 0.1mL, 3 mM β-NADPH(sigma) 0.1mL 및 HMG-CoA reductase 0.1 mL을 첨가하고 37 ℃에서 5분간 반응을 유도하였다. 상기 HMG-CoA reductase는 다음과 같은 방법으로 수득하였다. 1주일간 고지방 식이를 섭취한 흰 쥐의 간을 적출하여 간 1 g당 ice cold buffer A(50 mM phosphate buffer pH 7.0 with 0.2 M sucrose)와 2 mM dL-dithiothreitol (DTT, D-0632, sigma aldrich chemical) 2 mL을 첨가한 후 homogenizer로 15초간 균질화하고 15000×g에서 10분간 원심분리 후, 이의 상등액을 다시 100000×g에서 75분간 초원심분리한 후 상등액 및 흰색의 지방층을 제거하여 microsome pellet을 회수하였다. 이 pellet을 buffer A(containing 50 mM EDTA)로 1 g당 1 mL씩 첨가하여 세척하고 100000×g에서 60분간 원심분리 한 후 상등액을 버리고 buffer B(50 mM phosphate buffer pH 7.0 with 0.1 M sucrosd, 2 mM DTT, 50 mM KCl, 30 mM EDTA)을 micro pellet 1.5 g당 3 mL 가하여 균질화하였다. 다시 같은 buffer를 7 mL 혼합하고 상온에서 15~30분 방치한 후, 100000×g, 20 ℃에서 60분간 초원심분리하여 상등액을 취한 후 효소원으로 하였고 사용시까지 -70℃에서 보관하여 사용하였다. 그리하여, 5분간 반응을 유도한 시료에 HMG-CoA(sigma, U.S.A)를 넣고 5분간 반응시키면서 340 nm의 흡광도 변화를 측정하여 다음의 식으로 억제활성을 계산하였다. 그 결과는 하기 표 2 와 같다. 하기 표 2 에서 control 은 한외여과로 분획하기 전의 효소 분해물의 에탄올 추출물을 의미한다.

HMG-CoA reductase inhibition rate(%)= ([1-(T/C)]×100

(T: OD of sample, C: OD of blank)

분자량(dalton)	Inhibition activity (%)
Control	59.9
300,000 이상	4.5
300,000 이하	62.0
100,000~300,000	17.0
100,000 이하	67.2
50,000~100,000	7.5
50,000 이하	71.3
30,000~50,000	9.6
30,000 이하	85.0
10,000~30,000	43.6
10,000 이하	56.7

상기 표 2 에 나타난 바와 같이, 산약을 단백질 분해효소로 분해시킨 효소 분해물을 유기용매로 추출한 추출물에 비해 이를 한외여과하여 분자량이 낮은 분획물일수록 HMG-CoA reductase 저해 활성이 우수함을 알 수 있다. 즉, 분자량 100,000 dalton이하의 분획물이 control보다 저해활성이 우수하였으며, 50,000 dalton이하는 더욱 우수하였고, 30,000 dalton이하가 가장 우수하였다. 따라서, 분자량 30,000 dalton이하의 물질이 혈류 개선 효과를 가지고 있을 것으로 추정된다.

< 실험예 2> 답즙산 결합 능력의 측정

담즙산(bile acid)은 콜레스테롤을 전구체로 하여 형성되며 지질의 소화 및 배설에 관여하는 것으로 알려져 있다. 담즙산 또는 담즙산염으로는 cholic acid, deoxycholic acid, taurocholic acid 및 glycocholic acid가 대표적이다. 담즙산은 전구체가 콜레스테롤로서 산약 효소물이 담즙산과 결합하여 배출되면 최종적으로 혈중 콜레스테롤 농도가 저하되므로 상기 실시예에서 제조된 분자량에 따른 분획물을 대상으로 Camire의 방법(1993)으로 다음과 같이 담즙산 결합능력을 측정하였다. 시료 1 mL에 0.1N HCl(Dae-jung, Korea) 용액 2 mL을 가하고 항온수조에서 1 시간동안 진탕교반한 후 1N NaOH(Dae-jung-Korea)용액으로 pH를 7.0으로 조절하였다. 여기에 cholic acid(Sigma, U.S.A), deoxycholic acid(Sigma, U.S.A), taurocholic acid(Sigma, U.S.A) 및 glycocholic acid(Sigma, U.S.A)를 각각 31.25 μmol/mL이 되도록 조제한 0.1 M phosphate buffer 4 mL와 0.01 M phosphate buffer에 porcine pancreation(Sigma, U.S.A)을 10 mg/mL 농도로 녹인 용액 5 mL을 각각 가한 후 항온수조에서 1시간 재 진탕교반하였다. 교반된 용액에 1.33 M phosphoric acid(Sigma, U.S.A) 2 mL을 가하고 26,890×g에서 10분간 원심분리 한 후 상등액을 취하였고 남은 잔사에 0.01 M phosphate buffer를 가한 후 혼합하여 다시 원심분리를 행하여 상등액을 모두 모았다. 상등액의 pH를 7.0으로 재 조절한 뒤, 위의 용액 0.28 mL와 증류수 3 mL을 test tube에 넣고 test reagent(nitroamide dinucleotide, NAD), nitro blue tetrazolium salt(NBT), diaphorase, 3a-hydroxysteroid dehydrogenase 0.5 mL을 가하여 5분간 반응시켰다. 그 후 1.33M phosphoric acid를 가하여 반응을 정지시키고 530 nm에서 흡광도를 측정하여 담즙산 표준검량곡선을 통하여 담즙산 결합력을 계산하여 그 결과를 하기 표 3 에 나타내었다. 이 때, 담즙산의 표준검량곡선은 도 2 와 같다.

분자크기	Binding capacity (μM)
분자크기	Cholic acid	Deoxycholic acid	Taurocholic acid	Glycocholic acid
Control	11.4	16.1	14.0	13.6
300,000 이상	1.2	2.0	1.7	2.2
300,000 이하	18.7	22.2	19.2	18.2
100,000~300,000	4.4	2.5	3.6	3.1
100,000 이하	19.4	21.2	23.2	18.6
50,000~100,000	2.7	1.4	4.7	4.4
50,000 이하	19.8	25.0	25.2	22.2
30,000~50,000	1.5	1.4	1.7	1.4
30,000 이하	21.8	27.8	29.5	30.1
10,000~30,000	10.9	14.8	13.2	14.6
10,000 이하	16.3	18.3	18.0	15.5

상기 표 3 에 나타난 바와 같이, 상기 담즙산 결합 능력도 효소 분해물을 에탄올로 추출한 추출물보다 이를 분자량 100,000 dalton이하로 분리한 분획물이 우수하였으며, 분자량 30,000 dalton이하의 분획물이 가장 우수하였다.

상기에서 살펴본 바와 같이 산약을 단백질 분해효소로 분해시킨 분해물을 분자량별로 분획한 분획물은 분자량 100,000 dalton이하, 바람직하게는 50,000 dalton이하, 보다 바람직하게는 30,000 dalton이하의 분획물이 콜레스테롤 합성 저해 능력과 담즙산 결합 능력이 우수하여 혈류 개선의 활성을 나타내는 유효성분일 것으로 예상된다.

Claims

산약을 단백질 분해효소로 분해시킨 효소 분해물로부터 분리된 분자량 100,000 dalton이하의 분획물을 포함하는 것을 특징으로 하는 혈류 개선용 식품 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물이 분자량 50,000 dalton이하의 분획물을 포함하는 것을 특징으로 하는 것을 특징으로 하는 혈류 개선용 식품 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물이 분자량 30,000 dalton이하의 분획물을 포함하는 것을 특징으로 하는 혈류 개선용 식품 조성물.
제1항에 있어서,
상기 분획물이 산약을 단백질 분해효소로 분해시킨 효소 분해물을 유기용매로 추출한 추출물로부터 분리한 것을 특징으로 하는 혈류 개선용 식품 조성물.
제1항에 있어서,
상기 분획물이 산약을 단백질 분해효소로 분해시킨 효소 분해물의 유기용매 추출물의 상등액으로부터 분리한 것을 특징으로 하는 혈류 개선용 식품 조성물.
제4항에 있어서,
상기 유기용매가 에탄올인 것을 특징으로 하는 혈류 개선용 식품 조성물.
제1항에 있어서,
상기 단백질 분해효소가 protamex인 것을 특징으로 하는 혈류 개선용 식품 조성물.
산약을 단백질 분해효소로 분해하는 효소 분해 단계; 및
상기 효소 분해 단계에서 얻어진 효소 분해물을 한외여과하여 분자량별로 분획물을 얻는 분획 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 혈류 개선용 조성물의 제조 방법.
제8항에 있어서,
상기 효소 분해 단계 후에, 상기 효소 분해 단계에서 얻어진 효소 분해물을 유기용매로 추출하는 유기용매 추출 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 혈류 개선용 조성물의 제조 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 혈류 개선용 조성물을 포함하는 것을 특징으로 하는 건강기능식품.