KR101142080B1 - 전립선암 및 다른 암의 치료 방법 및 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 열충격단백질(heat shock protein; hsp27)을 과발현하는 전립선암 및 다른 암으로 고생하는 개체들, 특히 인간 개체들에게 치료법을 제공하기 위하여 생체내에서 hsp27을 타깃으로 하는 치료제들을 이용한다. 본 발명에 따르면, hsp27 mRNA, 예컨대, 인간 hsp27 mRNA에 대해 서열특이성을 갖는 RNAi 뉴클레오티드 억제제 또는 안티센스 올리고뉴클레오티드와 같은 치료제의 치료학적 유효량을 hsp27을 고발현하는 전립선암 및 다른 암으로 고생하는 개체에게 투여한다. 본 발명의 치료제는 약제학적으로 적절한 담체를 포함하는 약제학적 조성물로 적절하게 조제되고, 투여량 단위 형태로 포장된다. 바람직한 투여량 단위 형태는 주사할 수 있는 투여량 단위 형태이다.
열충격단백질, hsp27, 전립선암

Description

전립선암 및 다른 암의 치료 방법 및 조성물{Compositions and Methods for Treatment of Prostate and Other Cancers}
본 출원은 2002년 10월 2일에 출원된 미국 가출원 제60/415,859호 및 2003년 4월 18일에 출원된 제60/463, 952호에 대한 우선권을 주장하며, 상기 두 특허출원의 내용은 본 명세서에 참조로서 삽입되며 이러한 삽입은 법률적으로 허용된다.
본 출원은 질병발생의 적어도 몇몇 단계들에서, 정상조직과 비교할 때 hsp 27이 높은 수준으로 발현되는, 전립선암 및 다른 암들의 치료를 위한 방법과 조성물에 관한 것이다.
전립선암은 남성에서 발생하는 가장 흔한 암이며, 서양에서 암에 의한 남성 사망원인의 두 번째를 차지한다. 전립선암은 안드로겐에 민감한 종양이기 때문에, 안드로겐의 제거, 예를 들면 거세를 통한 안드로겐의 제거 가, 말기의 전립선암 환자를 위한 치료 요법에서 사용되고 있다. 안드로겐의 제거는 전립선암에서 광범위한 아폽토시스를 가져오고, 따라서 이 질병의 퇴화를 가져온다. 그러나, 거세가 야기한 아폽토시스는 완전하지 않고, 잔존하는 암세포들이 안드로겐-독립으로의 진행 이 최종적으로 발생한다. 이 진행은 삶의 질과 생존을 개선하는데 중요한 장애물이며, 따라서, 안드로겐-독립 세포들을 타겟팅하는 연구들이 실시되어왔다. 이러한 연구들은 안드로겐-독립 암세포들을 타겟팅하는 것을 목표로 하는 비호르몬 요법들에 초점이 맞추어져 왔다[Yagoda et al., Cancer 71 (Supp. 3): 1098-1109 (1993); Oh et al., J. UROL. 60: 1220-1229 (1998)]. 그러나, 지금까지 어떠한 비호르몬 제제도 생존을 개선하지 못하였다. 따라서 대안적 접근들이 지적되었다.
안드로겐이 제거된 후에 전립선암세포들에서 수많은 단백질들이 높은 양으로 발현되는 것이 관찰되었다. 적어도 몇몇의 이러한 단백질들은 안드로겐의 제거시 관찰되는 아폽토시스에 의한 세포 사멸에 관계된 것으로 추측된다 (Raffo et al., Cancer Res..: 4448-4445 (1995); Krajewska et al., Am. J. Pathol. 148: 1567-1576 (1996); McDonnell et AL., Cancer Res. 52: 6940-6944 (1992)).
본 발명은 열충격단백질(heat shock protein; hsp27)을 과발현하는 전립선암 및 다른 암으로 고생하는 개체들, 특히 인간 개체들에게 치료법을 제공하기 위하여 생체내에서 hsp27을 타깃으로 하는 치료제들을 이용한다. 본 발명에 따르면, hsp27 mRNA, 예컨대, 인간 hsp27 mRNA에 대해 서열특이성을 갖는 RNAi 뉴클레오티드 억제제 또는 안티센스 올리고뉴클레오티드와 같은 치료제의 치료학적 유효량을 hsp27을 고발현하는 전립선암 및 다른 암으로 고생하는 개체에게 투여한다. 본 발명의 치료제는 약제학적으로 적절한 담체를 포함하는 약제학적 조성물로 적절하게 조제되고, 투여량 단위 형태로 포장된다. 바람직한 투여량 단위 형태는 주사할 수 있는 투여량 단위 형태이다.
본 발명은 생체내에서 활성 hsp27의 유효한 양을 감소시키는 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 유용한 예시적인 조성은 안티센스 hsp27 올리고뉴클레오티드 또는 RNAi 뉴클레오티드 억제제이다. 또한, 본 발명은 hsp27을 고발현하는 전립선암 및 다른 암들의 치료에 있어서 상기 조성물의 용도에 관한 것이다. 본 출원의 명세서 및 청구항에 기재된, 용어 "활성 hsp27"는 스트레스를 받을 때 단백질 구조를 안정화 시키는데 샤프론(chaperon)으로서의 활성이 있고, 특히 아폽토시스의 중개자인, 캐스파제-3(caspase-3)의 활성을 억제하는 hsp27을 의미한다. 활성 hsp27의 양의 감소는, hsp27의 생성을 제한하거나 이것이 생성되는 것보다 빠른 속도로 hsp27을 분해하여 hsp27의 총량을 감소시키거나, 또는 항-hsp27 항체 같은 비활성 복합체에 hsp27을 격리시켜 비활성 형태로 전환시킴으로써 달성될 수 있다.
본 명세서 및 청구항에 기재된, 치료될 수 있는 암들은, 동일 조직 유형의 비-종양적 세포와 비교할 때 많은 양의 hsp27을 발현하는 암들이다. 예시적 암은 전립선암, 방광암, 폐암, 유방암, 골육종, 췌장암, 대장암, 흑생종, 고환암, 직장암, 요로상피암, 신장세포암, 간세포암, 백혈병, 임파종, 난소암과 중추신경계 악성질환을 포함하며, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서 및 청구항에 기재된, "서열특이성"이라는 용어는 세포내 조건하에서 왓슨-크릭의 염기쌍에 따라 특이결합을 가져오는데 충분한 올리고뉴클레티드와 hsp27 사이의 상보적 관계의 존재를 의미한다. 완전한 상보성이 바람직하나, 이는 절대적으로 요구되는 것은 아니며, 특히, 긴 올리고뉴클레오티드가 사용되는 경우에서 그러하다.
예를 들면, NCBI 접근번호 AB020027, X54079, NM_006308, NM_001540과 NM_001541에, 인간 hsp27 mRNA의 서열은 공지되어 있다. cDNA 서열(서열번호 91)은 안티센스 올리고뉴클레오티드와 RNAi 뉴클레오티드 억제제의 개발의 기초를 형성한다.
안티센스와 RNAi을 위한 바람직한 서열은 서열번호 91에 있는 뉴클레오티드 131-161,241-261, 361-371, 551-580, 661-681 과 744-764 부분들에 있는 염기들을 타깃으로 하는 것이다. 이 부분 내에 있는 염기들을 타깃으로 하기 위하여, 안티센스 또는 RNAi 분자는 적어도 상기의 염기들 중의 하나, 바람직하게는 적어도 10개의 상기의 염기들을 포함하고 있는 부분에서 서열 특이성을 가지고 있어야 한다.
적당한 안티센스 올리고뉴클레오티드는 12 내지 35의 올리고뉴클레오티드의 길이를 갖으며, hsp27 mRNA 서열에 서열 특이성을 갖는다. 활성 hsp27 mRNA 양을 감소시키는 능력이 실험되고 제조된 안티센스 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1 내지 82에 기재되어 있다. 바람직한 안티센스 올리고뉴클레오티드는 hsp27 mRNA의 번역개시지점을 타깃으로 하는 5'-ggggacgcggcgctcggtcat-3' (서열번호 81) 또는 5'- gggacgcggcgctcggtcat-3' (서열번호 82)의 서열뿐만 아니라 서열번호 25, 36, 56, 57, 67 과 76의 서열을 갖는다.
RNA간섭 또는 "RNAi" 이라는 것은 처음에 파이어(Fire)와 그 동료들에 의해서 이중쇄 RNA(dsRNA)가 벌레들에 도입되었을 때 유전자 발현을 차단할 수 있다는 관찰결과를 묘사하기 위하여 처음으로 만들어진 용어이다. [Fire et al. (1998) Nature 391,806-811, 본 명세서에 참고문헌으로 삽입됨]. dsRNA는 척추동물을 포함하는 많은 생물체에서, 유전자에 특이한, 전사후의 사일런싱(Silencing)을 유발하며, 유전자의 기능을 연구하는 새로운 도구를 공급하여 왔다. RNAi는 mRNA 분해에 관계되나, 이 간섭에 존재하는 생화학적 기작들의 많은 부분이 알려져 있지 않다. RNAi의 용도는 본 명세서에 참고문헌으로 삽입된 Carthew et al. (2001) Current Opinions in Cell Biology 13,244-248와 Elbashir et al. (2001) Nature 411, 494-4에 기재되어 있다. 본 발명의 RNAi 분자들은 RNA 억제를 중개하는 약 21 내지 약 23의 뉴클레오티드의 이중쇄 또는 단일쇄 RNA이다. 다시 말하면, 본 발명의 분리된 RNAi는 hsp27 유전자의 mRNA의 분해를 중개한다.
RNA, RNA 분자(들), RNA 단편(들), RNA 조각(들)이라는 용어들은 RNA 간섭을 중개하는 RNA를 가리키는데 호환적으로 사용될 수 있다. 이러한 용어들은 이중쇄 RNA, 단일쇄 RNA, 분리된 RNA(부분적으로 정제된 RNA, 필수적으로 정제된 RNA, 합성 RNA, 재조합으로 생산된 RNA) 뿐만 아니라, 하나 또는 그 이상의 뉴클레오티드의 부가, 결실, 치환 그리고/또는 변형에 의해서 자연적으로 생성되는 RNA와는 다른, 변형된 RNA를 포함한다.
이러한 변형들은 RNA의 끝부분에 또는 안쪽에서(RNA의 하나 또는 그 이상의 뉴클레오티드에서), 뉴클레오티드가 아닌 물질의 부가를 포함할 수 있다. 본 발명의 RNA 분자 내의 뉴클레오티드는, 자연적으로 생성되지 않는 뉴클레오티드 또는 데옥시리보뉴클레오티드를 포함하는, 표준이 아닌 뉴클레오티드를 또한 포함할 수 있다. 종합적으로, 이런 모든 변형된 RNAi 화합물은 유사체(analogs) 또는 자연적으로 생성되는 RNA의 유사체로 언급된다. 본 발명의 RNA는 RNAi를 중개할 능력을 가지는 자연적 RNA와 충분하게 유사할 정도의 필요성만을 갖는다. 본 명세서에 사용된 "RNAi를 중개한다"라는 문구는 RNAi 장치 또는 프로세스에 의해 영향을 받는 mRNA들을 구별할 수 있는 능력을 의미한다. RNAi를 중개하는 RNA는 RNAi 장치와 상호작용하여 상기 장치가 특정한 mRNA를 분해시키도록 하거나 또는 타깃 단백질의 발현을 감소시키도록 지시한다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명은 대응하는 특이 mRNA의 절단을 초래하는 RNA 분자에 관한 것이다. 서열들의 완벽한 대응이 필요하지는 않으나, 이러한 대응성은 타깃 mRNA의 발현을 억제하거나 또는 절단하도록 RNA가 RNAi 억제를 지시할 수 있을 정도로 충분하여야 한다.
상기한 바와 같이, 본 발명의 RNA 분자는 일반적으로 RNA 부분과, 추가적 부분, 예컨대, 데옥시리보뉴클레오티드 부분을 포함한다. RNA 분자에서 뉴클레오티드의 총수는, RNAi의 유효한 중개자가 되기 위하여 49보다 적은 것이 적합하다. 바람직한 RNA로서, 뉴클레오티드의 수는 16 내지 29, 보다 바람직하게는 18 내지 23, 그리고 가장 바람직하게는 21 내지 23이다.
적합한 RNAi 분자들의 RNA 부분은 서열번호 83 내지 90에 기재되어 있다. 이러한 서열들은 센스 RNA 가닥이다. 상기 서열들은 대응하는 안티센스 가닥과의 조합으로 RNAi 치료에 사용된다.
안티센스 또는 RNAi 분자들로 사용되는 올리고뉴클레오티드는 생체에서 올리고뉴클레오티드의 안정성을 증가시키기 위하여 변형될 수도 있다. 예를 들어, 그 올리고뉴클레오티드들은 뉴클레아제에 의한 분해(nuclease digestion)에 증가된 내성을 갖는 포스포로티오에이트(phosphorothioat)유도체(결합하지 않은 포스포릴 산소원자들을 황 원자로 대체된 것)로서 사용될 수 있다. MOE 변형(ISIS 기본골격) 또한 효과적이다.
안티센스 올리고뉴클레오티드의 투여는, 당업계에서 공지된 다양한 기전을 통하여 실시될 수 있으며, 이는 담체 없이 하는 투여와 약제학적으로 허용되는 지질 담체에 의한 투여를 포함한다. 예를 들어, 안티센스 운반을 위한 지질 담체들은 참고문헌으로 본 명세서에 삽입된 미국 특허 제5,855, 911호 및 제5,417, 978호에 개시되어 있다. 일반적으로, 본 발명의 안티센스는 정맥내, 복막내, 피하 또는 경구적으로 또는 직접적인 국소 종양 주입에 의해 투여된다.
투여된 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 다른 치료제의 양은 활성 hsp 27의 양을 감소시키는데 유효한 양이다. 상기 투여량은 사용된 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 다른 치료제의 유효성과 사용된 담체의 종류에 따라 다양해진다. 특정의 조성에 대한 적합한 양의 결정은, 적절한 치료 수준을 평가하도록 디자인된 일련의 표준 실험들을 통하여, 당업계의 기술 수준 내에 있다.
본 발명의 RNAi 분자들은, 타깃 단백질의 발현의 억제에 의하여 치료이익이 얻어지는 종류의 암 또는 다른 질병을 갖는 인간을 포함한 환자들을 치료하는 치료요법에 사용된다. 본 발명의 siRNA 분자들은 환자들에게, 타깃 mRNA와 단백질의 조절에 적절한 혈장 또는 조직의 농도에 도달하기 위하여 경구적으로, 1일 1회 또는 그 이상의 주입(정맥, 피하, 방광내 또는 난포막내)으로 또는 한번 또는 그 이상의 처리 주기 동안 계속적인 정맥 또는 난포막내 투여를 통해 투여된다.
전립선암은 암의 말기에서 hsp27이 과발현되는 암이고, 특히 안드로겐-독립성으로 전환되는 암이다. 도 9는 NHT 조직 어레이에서 hsp27의 면역조직학적 평가로부터 결정된 hsp27의 면역반응성을 나타낸다. 양성의 표본들에서, 면역반응성은 기저층에 제한된다. 새로운 보조적(neoadjuvant) 치료의 기간이 증가됨에 따라, 안드로겐에 독립적인 종양들은 매우 강한 반응성을 보이면서, 면역반응성이 증가된다. 전립선암의 치료를 위해서, 안드로겐 제거의 개시 후에, 본 발명의 치료학적 조성물들이 적절하게 투여된다. 안드로겐 제거의 시작은, 최근의 전립선암의 치료를 가리키는, 외과적(고환 둘 다의 제거) 또는 내과적(약에 의한 테스토스테론의 억제) 거세를 통하여 달성될 수 있다. 내과적 거세는 LHRH 약제들 또는 항안드로겐을 포함하는 다양한 요법들에 의해 달성될 수 있다[Gleave et al., CMAJ 160: 225-232 (1999)]. 가역적인 안드로겐 제거를 가져오는 간헐적인 치료는 Gleave et al. Eur. UROL. 34 (Supp. 3): 37-41 (1998)에 개시되어 있다.
hsp27 발현의 억제는 일시적일 수 있고, 전립선암의 치료를 위해서 이상적으로는 안드로겐 제거와 함께 이루어져야 한다. 사람에서, 이것은 발현의 억제가 안드로겐 제거(전 또는 후)의 하루 또는 이틀 내에 시작되고 3개월 내지 6개월 가량 지속되도록 효과적이어야 한다는 것을 의미한다. 이것은 성공을 위해서 여러 번의 투여를 요구할 수 있다. 그러나, 본 발명의 범주를 벗어나지 않고, 거세 전에 시작되어 그 후 상당한 시간 동안 지속되도록, 상기 기간은 더 연장될 수 있다.
본 발명에 따른 전립선암을 포함하는 암을 치료하는 방법은 더 나아가 다른 타깃을 겨냥한 화학요법 제제 그리고/또는 추가적인 안티센스 올리고뉴클레오티드들의 투여를 포함할 수 있다. 다른 치료제들의 예들은, 탁산(taxanes)[파클리탁셀(paclitaxel) 또는 도세탁셀(docetaxel)], 미토악산트론(mitoaxanthrone) 과 Bcl-2, Bcl-xl 또는 c-myc에 대한 안티센스를 제한없이 포함한다. 안티센스 또는 RNAi를 사용한 hsp27의 억제는, 전립선암, 유방암, 폐암, 요로상피암과, 다른 암들의 치료를 위한 생물학적 제제들뿐만 아니라, 탁산(taxanes) 또는 젬시타빈(gemcitabine) 같은 것들의 활성을 증가시키는데도 사용될 수 있다.
본 발명은 다음의 비-제한 실시예들에 의해서 보다 상세하게 설명된다.
도1A 내지 도1G는 서열번호 1 내지 81의 안티센스 올리고뉴클레오티드에 노출된 세포들에서 mRNA 발현 실험의 결과를 나타낸다.
도2는 PC3세포에서 hsp27 발현에 대한 hsp27 안티센스의 효과를 나타낸다.
도3A와 도3B는 각각 hsp27 안티센스를 처리한 후의 종양의 부피와 혈청 PSA(serum prostate-specific antigen; PSA)를 나타낸다.
도4A와 도4B는 탁솔(taxol)과 함께 그리고 탁솔(taxol)없이 hsp27 안티센스의 처리 후, 종양부피의 변화들을 나타낸다.
도5는 RNAi 처리 후, hsp27 mRNA의 감소를 나타낸다.
도6A와 도6B는 RNAi 처리 후, 발현된 hsp27 단백질의 양을 나타낸다.
도7A 내지 도7C는 전립선암 세포들에 대한 안티센스와 RNAi 처리의 결과를 나타낸다.
도8은 T24 방광암세포들에서 hsp27의 발현을 나타낸다. 도9는 NHT 조직 어레이에서 hsp27의 면역조직학적 평가로부터 결정된, hsp27의 면역반응성을 나타낸다.
[실시예 1]
서열번호 1 내지 81에 기재된 안티센스 화합물들의 다수를 준비하였고, 올리고펙타민(oligofectamine) 담체 내의 특정 안티센스 올리고뉴클레오티드 50 nM에 노출 후, 노던 블롯(Northern blot)에 의해 인간 전립선암 PC3 세포들의 hsp27 mRNA의 발현수준들을 각각의 서열에 대하여 조사하였다. 서열번호 1 내지 81에 대한 이러한 시험들의 결과들은 올리고펙타민만 처리된 대조군의 백분율로서 도 1의 A부터 G까지 나타나 있다. 도 1에 나타난 바와 같이, 모든 안티센스 서열들이 효과적인 것은 아니지만, 효과적인 안티센스 서열들은 hsp27 mRNA 서열 전체에 걸쳐 발견된다.
[실시예 2]
올리고펙타민 담체를 사용하여, 10 cm 디쉬에서 연속적으로 6개의 다른 hsp27-안티센스 올리고뉴클레오티드들의 세가지 농도(10, 30 및 50 nM)로 2회 40% 컨플루언시(confluency)에 있는 PC3 전립선암 세포들을 형질감염시켰다. 최초 처리후 48 시간째, RNA를 추출하였고, 노던 블롯으로 분석하였다. 시험된 안티센스 올리고뉴클레오티드는 서열번호 67, 57, 25, 76, 56 및 36의 서열을 가진 것들이다. 대조군에서는, 스크램블링된(scrambled) 올리고뉴클레오티드 및 올리고펙타민만의 실험을 수행하였다. 시험된 모든 올리고뉴클레오티드는 적어도 그 농도들 중 하나에 있어서 대조군에 비하여 hsp27의 하향조절을 보여준다. 서열번호 71과 74는 10 nM에서 현저한 하향조절을 나타내어 가장 효과적으로 나타난다. GAPDH 대조군에 상대적인 이러한 결과들은 도 2에서 도시되어 있다.
[실시예 3]
LNCaP 전립선암세포들의 이종조직을 마우스에 도입하였고, 거세에 의한 안드로겐 제거 후, 10 mg/kg의 용량으로 4주 동안 1일 1회 복막내에 hsp27-안티센스 올리고뉴클레오티드(서열번호 82)를 투여하였으며, 복막내 주입의 효과를 평가하였다. 도 3의 A와 B에 나타난 바와 같이, 종양의 부피와 혈청 PSA가, 스크램블링된 대조군의 치료 후 수 주 내에 증가하였으며, 이는 안드로겐 독립으로 진행하였고 이에 거세치료 효능의 상실을 가리킨다. 대조적으로, hsp27 안티센스 올리고뉴클레오티드가 처리되었을 때, 안드로겐 독립으로의 상기한 진행은 같은 기간 동안 관찰되지 않았다.
[실시예 4]
PC3 전립선암세포들의 이종조직을 마우스에 도입하였고, 거세에 의한 안드로겐 제거 후에 10 mg/kg의 용량으로, 4주 동안 1일 1회, 탁솔(Taxol)과 함께 그리고 탁솔(Taxol) 없이, 복막내에 hsp27-안티센스 올리고뉴클레오티드(서열번호 82)를 투여하였으며, 복막내 주입의 효과를 평가하였다. 도 4A와 도 4B에 나타난 바와 같이, 종양의 부피가 스크램블링된 올리고뉴클레오티드와 비교할 때 hsp27-안티센스의 처리에 의하여 상당히 감소되었다. 탁솔처리가 안티센스처리와 결합되었을 때, 이 효과는 증대되었다. 도 4의 A는 단일제제의 항종양 활성을 보여주며, 도 4B는 hsp27 안티센스의 투여가 세포들을 생체내에서 파클리탁셀(paclitaxel)에 민감하게 할 수 있다는 것을 나타낸다. 도 4B의 대조군은 스크램블링된 것과 탁솔(taxol)이다.
[실시예 5]
서열번호 84, 85, 87, 88 과 90에 따르는 RNAi 분자들에 대하여 PC3세포들에서 시험하였다. PC 세포들을 다양한 양의 hsp27 siRNA 또는 스크램블링된 대조군으로 형질감염시켰다. 감염 이틀 후에, 총 RNA를 추출하였고, hsp27과 28S 수준을 확인하기 위하여 노던블롯팅으로 분석하였다. 올리고펙티민만으로 처리된 세포들이 추가적인 대조군으로 사용되었다. 도 5는 28S mRNA 대조군에 대한 정규화 후, hsp27 mRNA의 덴시토미터 측정결과들을 나타낸다. 도 5에 나타난 바와 같이, 서열번호 84, 85, 87, 88과 90은 스크램블링된 대조군과 비교할 때, hsp27 발현을 상당히 감소시키는데 모두 효과적이다.
[실시예 6]
서열번호 84에 적합한 서열을 갖는 RNAi로 PC3 세포들을 형질감염시켰고, 발현된 hsp27 단백질의 양을, 빈큘린(Vinculin) 발현과 비교하여 결정하였다. 이 결과들은 도 6A 및 6B에 나타나 있다. 상기 RNAi 분자의 처리 후, 투여량-의존적인 hsp27 발현의 감소가 관찰되었다.
[실시예 7]
LNCaP 세포(104 cells/well로, 12-웰 배양접시에서 배양됨)를 시험관내에서 서열번호 84의 서열을 갖는 1 nM의 RNAi로 형질감염시켰다. 세포의 성장은 크리스탈 바이올렛 분석을 사용하여 관찰하였다. 도 7A에 나타난 바와 같이, RNAi 처리는 올리고펙타민만 처리하거나 스크램블링된 대조군에 비하여 세포성장의 감소를 가져왔다. 이 실험은 PC3 세포들을 사용하여 반복실시 되었다. 도 7B는 감염후 3일째에 생존한 세포들의 백분율을 나타낸다. 도 7C는 hsp27 안티센스 서열번호 82의 서열 처리 후에 시험관내에서 PC3 세포들의 생장억제를 나타낸다.
[실시예 8]
hsp27 안티센스(서열번호 82) 또는 RNAi(서열번호 84)로 형질감염된 인간 방광암 T24 세포들에서의 hsp27 발현을 조사하였다. 도 8에 나타난 바와 같이, RNAi 및 안티센스 둘 모두 이러한 세포들에서 발현된 hsp27의 양을 효과적으로 감소시킨다.
<110> The University of British Columbia <120> Compositions and Methods for Treatment of Prostate and Other Cancers <150> US60/415,859 <151> 2002-10-02 <150> US60/463,952 <151> 2003-04-18 <160> 91 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 gctgactctg ctcctcgtgc c 21 <210> 2 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 ggtcatgctg gctgactctg c 21 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 cgcggcgctc ggtcatgctg g 21 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4 gagaagggga cgcggcgctc g 21 <210> 5 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5 ccgcaggagc gagaagggga c 21 <210> 6 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 6 agctggggcc ccgcaggagc g 21 <210> 7 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 7 aaggggtccc agctggggcc c 21 <210> 8 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 8 ccagtcgcgg aaggggtccc a 21 <210> 9 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 9 tatgcgggta ccagtcgcgg a 21 <210> 10 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 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agaacacaca ggtggcgggg g 21 <210> 71 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 71 atgtatcaaa agaacacaca g 21 <210> 72 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 72 cagaagataa atgtatcaaa a 21 <210> 73 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 73 ttgagaaaaa cagaagataa a 21 <210> 74 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 74 tgaactttat ttgagaaaaa c 21 <210> 75 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 75 gtggttgctt tgaactttat t 21 <210> 76 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 76 caggtggttg ctttgaactt t 21 <210> 77 <211> 18 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 77 taggcgggcg cggccact 18 <210> 78 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 78 gatctccacc acgccatcct t 21 <210> 79 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 79 tccgagaccc cgctgctgag t 21 <210> 80 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 80 ccgagacccc gctgctgagt t 21 <210> 81 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 81 ggggacgcgg cgctcggtca t 21 <210> 82 <211> 20 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 82 gggacgcggc gctcggtcat 20 <210> 83 <211> 19 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 83 cucugcugcg gggucucgg 19 <210> 84 <211> 20 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 84 gcugcuuuuu ccguuguguc 20 <210> 85 <211> 19 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 85 gguuggcgug gugguguuc 19 <210> 86 <211> 19 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 86 gcucguggug cggcugguc 19 <210> 87 <211> 19 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 87 cgagaucacc aucccaguc 19 <210> 88 <211> 19 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 88 guucuccuuc ccugucucc 19 <210> 89 <211> 21 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 89 ccuucguguc gcgggcccug c 21 <210> 90 <211> 19 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 90 augaccgagc gccgcgucc 19 <210> 91 <211> 764 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 91 ggcacgagga gcagagtcag ccagcatgac cgagcgccgc gtccccttct cgctcctgcg 60 gggccccagc tgggacccct tccgcgactg gtacccgcat agccgcctct tcgaccaggc 120 cttcgggctg ccccggctgc cggaggagtg gtcgcagtgg ttaggcggca gcagctggcc 180 aggctacgtg cgccccctgc cccccgccgc catcgagagc cccgcagtgg ccgcgcccgc 240 ctacagccgc gcgctcagcc ggcaactcag cagcggggtc tcggagatcc ggcacactgc 300 ggaccgctgg cgcgtgtccc tggatgtcaa ccacttcgcc ccggacgagc tgacggtcaa 360 gaccaaggat ggcgtggtgg agatcaccgg caagcacgag gagcggcagg acgagcatgg 420 ctacatctcc cggtgcttca cgcggaaata cacgctgccc cccggtgtgg accccaccca 480 agtttcctcc tccctgtccc ctgagggcac actgaccgtg gaggccccca tgcccaagct 540 agccacgcag tccaacgaga tcaccatccc agtcaccttc gagtcgcggg cccagcttgg 600 gggcccagaa gctgcaaaat ccgatgagac tgccgccaag taaagcctta gcccggatgc 660 ccacccctgc tgccgccact ggctgtgcct cccccgccac ctgtgtgttc ttttgataca 720 tttatcttct gtttttctca aataaagttc aaagcaacca cctg 764

Claims (25)

  1. 서열번호 91에 의해 코딩되는 hsp27의 발현을 억제하기에 유효한 올리고뉴클레오티드로서, 상기 올리고뉴클레오티드는
    (a) 12 내지 35개의 염기를 포함하는 안티센스 올리고뉴클레오티드로서, 상기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 서열번호 91 내의 표적 영역에 대해 상보적인 서열 특이성을 가지며, 상기 표적 영역은 서열번호 2 내지 4, 6, 9, 11 내지 15, 18, 20 내지 22, 24 내지 32, 34, 36, 38 내지 44, 46, 47, 49 내지 72, 76 내지 78, 및 82 중 하나에 의해 표적화되는, 서열번호 91 내의 표적 영역의 군으로부터 선택되는 것인 안티센스 올리고뉴클레오티드이거나; 또는
    (b) hsp27 발현의 RNAi 억제제로서, 상기 RNAi 억제제는 서열번호 83 내지 90 중 하나로 이루어진 제1 가닥 및 상기 제1 가닥에 상보적인 RNA 서열의 제2 가닥을 포함하는 이중 가닥 RNA인 것인 올리고뉴클레오티드.
  2. 삭제
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 82의 서열을 포함하고, 상기 표적 영역은 서열번호 82의 서열에 의해 표적화되는 것인 올리고뉴클레오티드.
  4. 제 3 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 82의 서열로 구성된 것인 올리고뉴클레오티드.
  5. 제 1 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 2 내지 4, 6, 9, 11 내지 15, 18, 20 내지 22, 24 내지 32, 34, 36, 38 내지 44, 46, 47, 49 내지 72, 76 내지 78, 및 82 중 하나의 서열로 구성되는 것인 올리고뉴클레오티드.
  6. 제 1 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드는 번역 개시 부위를 표적으로 하는 것인 올리고뉴클레오티드.
  7. 제 1 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드는 번역 종결 부위를 표적으로 하는 것인 올리고뉴클레오티드.
  8. 제 1 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 91의 부분(portion)에 상보적인 10개 이상의 염기를 포함하고, 상기 부분은 염기 131번 내지 161번 부분, 241번 내지 261번 부분, 361번 내지 371번 부분, 551번 내지 580번 부분, 661번 내지 681번 부분 및 744번 내지 764번 부분으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 올리고뉴클레오티드.
  9. 제 8 항에 있어서, 상기 부분은 염기 241번 내지 261번 부분인 것인 올리고뉴클레오티드.
  10. 제 9 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 25의 서열을 포함하는 것인 올리고뉴클레오티드.
  11. 제 8 항에 있어서, 상기 부분은 염기 361번 내지 371번 부분인 것인 올리고뉴클레오티드.
  12. 제 11 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 36 또는 서열번호 85의 서열을 포함하는 것인 올리고뉴클레오티드.
  13. 제 8 항에 있어서, 상기 부분은 염기 551번 내지 580번 부분인 것인 올리고뉴클레오티드.
  14. 제 13 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 56, 서열번호 57, 서열번호 87 또는 서열번호 88의 서열을 포함하는 것인 올리고뉴클레오티드.
  15. 제 8 항에 있어서, 상기 부분은 염기 661번 내지 681번 부분인 것인 올리고뉴클레오티드.
  16. 제 15 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 67의 서열을 포함하는 것인 올리고뉴클레오티드.
  17. 제 8 항에 있어서, 상기 부분은 염기 744번 내지 764번 부분인 것인 올리고뉴클레오티드.
  18. 제 17 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 76의 서열을 포함하는 것인 올리고뉴클레오티드.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드는 인 비보에서 뉴클레아제에 의한 분해(nuclease digestion)에 대한 저항성을 제공하는 백본 변형을 갖는 것인 올리고뉴클레오티드.
  20. 삭제
  21. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 올리고뉴클레오티드 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 비-종양 대조군(non-cancerous control)에 비해 증가된 양의 hsp27을 발현하는 암의 치료를 위한 약학적 조성물.
  22. 제21항에 있어서, 상기 조성물은 투여량 단위 제형(dosage unit form)으로 포장되는 것인 조성물.
  23. 제22항에 있어서, 상기 투여량 단위 제형은 주사용액인 것인 조성물.
  24. 제21항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드는 인 비보에서 뉴클레아제에 의한 분해에 대한 저항성을 제공하는 백본 변형을 갖는 것인 조성물.
  25. 삭제
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