KR101073984B1 - 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 신속 검출진단키트 및 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체진단방법 - Google Patents

면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 신속 검출진단키트 및 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체진단방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 신속 검출 진단키트 및 면역크로마토그라피를 이용한 이용한 광견병 항체 진단방법에 관한 것으로 보다 상세하게는 백킹 카드(backing card) 위에 검사선(test line)과 대조선(control line)을 포함하는 니트로셀룰로오스 멤브레인(nitrocellulose membrane)이 구비되고; 상기 니트로셀룰로오스 멤브레인의 일측에는 콘쥬게이트 패드(conjugate pad)가 중첩되어 형성되는 한편, 상기 콘쥬게이트 패드 위에 혈청 시료를 적하하는 샘플 패드(smaple pad)가 중첩되어 구비되며; 상기 니트로셀룰로오스 멤브레인의 타측에는 백킹 카드 위에 반응이 종료된 혈청을 흡수하는 흡수 패드(adsorbent pad)가 구비되는 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 신속 검출 진단키트 및 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 진단방법에 관한 것이다.
광견병, 항체, 진단, 키트, 면역크로마토그라피

Description

면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 신속 검출 진단키트 및 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 진단방법{Diagnostic kit and method for the rapid detection of Rabies antibodies using immunochromatography}
본 발명은 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 신속 검출 진단키트 및 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 진단방법에 관한 것으로 보다 상세하게는 백킹 카드(backing card) 위에 검사선(test line)과 대조선(control line)을 포함하는 니트로셀룰로오스 멤브레인(nitrocellulose membrane)이 구비되고; 상기 니트로셀룰로오스 멤브레인의 일측에는 콘쥬게이트 패드(conjugate pad)가 중첩되어 형성되는 한편, 상기 콘쥬게이트 패드 위에 혈청 시료를 적하하는 샘플 패드(smaple pad)가 중첩되어 구비되며; 상기 니트로셀룰로오스 멤브레인의 타측에는 백킹 카드 위에 반응이 종료된 혈청을 흡수하는 흡수 패드(adsorbent pad)가 구비되는 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 신속 검출 진단키트 및 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 진단방법에 관한 것이다.
현재까지 광견병 바이러스에 대한 항체를 검출하기 위해서 주로 광견병 바이러스를 중화시키는 항체(중화항체)를 검출하는 시험법이 표준 기술로 인정되고 있다. 이러한 중화항체 검사법은 살아있는 바이러스와 단계 희석된 검사 혈청을 일정시간 중화시킨 다음, 세포 혹은 마우스(mouse)와 같은 실험동물에 접종하여 바이러스의 증식 억제 여부를 판별함으로서 검사 혈청에 존재하는 항체 역가 수준을 측정하는 것이다.
그러나 중화시험법은 위험성이 있는 바이러스를 사용하고 검사기간도 4일이 소요되는 단점이 있다. 이러한 단점을 보완하기 위하여 본 기술과 원리가 비슷한 효소면역측정법(ELISA)이 개발되어 사용되고 있으나 효소면역측정법도 전문화된 검사인력과 고가의 실험장비를 요구할 뿐 만 아니라 검사 시간과 검사 비용이 많이 소요되는 단점이 있다.
이에 본 발명에서는 기존의 중화시험법이나 효소면역측정법과 같이 다양한 역가의 항체를 정량적으로 측정하는 대신 광견병 방어항체역가 국제기준인 0.5 IU/ml 역가에 대한 판별은 가능하도록 하는 한편, 고가의 시험장비 없이 20분 이내의 검사 시간으로 개의 광견병 백신의 존재 유무의 검사를 수행함으로서 개의 면역 수준을 파악하여 개의 광견병 보강접종 유무를 결정하는데에 매우 유용한 광견병 항체 신속 검출 진단키트를 제공하고자 한다.
본 발명의 광견병 항체 신속 검출 진단키트는 광견병 예방접종에 따른 항체 형성유무를 검사하기 위한 진단 기술 중의 하나로서 광견병 항원-항체간의 반응을 면역크로마토그라피 원리에 응용함으로서 결과 판정이 매우 신속한 간이 진단기술 이다.
본 발명의 광견병 항체 신속 검출 진단키트는 현재까지 이러한 면역크로마토그라피 원리 기술을 이용하여 광견병 바이러스에 대한 항체를 검사하는 것으로서, 이러한 키트는 전세계적으로 개발되어 있지 않다.
본 발명은 기존의 바이러스 중화시험과 같은 항체검출법 보다 간편하고 효과적으로 대체하기 위하여, 광견병 바이러스의 항원-항체 반응의 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 신속 검출 진단키트를 제공하고자 한다.
또한 본 발명은 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 신속 검출 진단방법을 제공하고자 한다.
백킹 카드(backing card) 위에 검사선(test line)과 대조선(control line)을 포함하는 니트로셀룰로오스 멤브레인(nitrocellulose membrane)이 구비되고; 상기 니트로셀룰로오스 멤브레인의 일측에는 콘쥬게이트 패드(conjugate pad)가 중첩되어 형성되는 한편, 상기 콘쥬게이트 패드 위에 혈청 시료를 적하하는 샘플 패드(smaple pad)가 중첩되어 구비되며; 상기 니트로셀룰로오스 멤브레인의 타측에는 백킹 카드 위에 반응이 종료된 혈청을 흡수하는 흡수 패드(adsorbent pad)가 구비되는 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 신속 검출 진단키트 및 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 진단방법을 제공하고자 한다.
본 발명은 상기의 광견병 항체 신속 검출 진단키트에 개의 혈청을 적하하여 광견병 백신접종에 따른 항체형성유무를 신속하게 검출할 수 있다.
광견병은 치사율이 100％로서 매우 위험한 질병이며 국가에서 지속적으로 관리하고 있는 주요 법정가축전염병이다. 따라서 본 발명에 따른 검출킷트를 사용하면 고가의 부대장비없이 현장에서 20분 이내에 광견병 백신접종에 따른 항체 형성 유무를 파악할 수 있어 광견병 국가방역 프로그램에 효율적으로 사용이 가능하고, 개에서의 광견병 백신 재접종유무를 신속히 파악하여 광견병 백신을 접종시킬 수 있어, 광견병의 발생을 감소시킬 뿐만 아니라 사람으로의 광견병 전파 방지에 매우 효과적이다.
본 발명은 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 신속 검출 진단키트를 나타낸다.
본 발명은 백킹 카드(backing card) 위에 검사선(test line)과 대조선(control line)을 포함하는 니트로셀룰로오스 멤브레인(nitrocellulose membrane)이 구비되고; 상기 니트로셀룰로오스 멤브레인의 일측에는 콘쥬게이트 패드(conjugate pad)가 중첩되어 형성되는 한편, 상기 콘쥬게이트 패드 위에 혈청 시료를 적하하는 샘플 패드(smaple pad)가 중첩되어 구비되며; 상기 니트로셀룰로오스 멤브레인의 타측에는 백킹 카드 위에 반응이 종료된 혈청을 흡수하는 흡수 패드(adsorbent pad)가 구비되는 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 신속 검출 진단키트에 관한 것이다.
상기에서 니트로셀룰로오스 멤브레인에 포함된 검사선은 광견병 항원이 처리되고, 대조선에는 항-마우스 항체가 처리된 것을 사용할 수 있다.
상기에서 콘쥬게이트 패드는 대조선의 항-마우스 항체와 반응하는 마우스 항체 콘쥬게이트와 개의 항체를 포획하는 항-개 항체 콘쥬게이트가 처리된 것을 사용할 수 있다.
본 발명은 광견병 항체 신속 검출 진단방법을 포함한다.
본 발명은 광견병 항체 신속 검출 진단방법에 있어서, 마우스 항체 콘쥬게이트와 개의 항체를 포획하는 항-개 항체 콘쥬게이트가 처리된 패드에 개의 혈청을 적하시켜 상기 개의 혈청이 모세관 현상에 의해 광견병 항원이 처리된 검사선 및 항-마우스 항체가 처리된 대조선을 이동하도록 하여 광견병 항원이 처리된 검사선의 색깔이 변화는 것에 의해 개의 혈청에 광견병 항체가 있는지의 여부를 검출하는 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 신속 검출 진단방법을 나타낸다.
이하 첨부한 도면에 의해 본 발명의 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 신속 검출 진단키트 및 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 신속 검출 진단방법을 보다 상세히 설명하고자 한다.
도 1은 본 발명의 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 신속 검출 진단키트의 구조도를 나타낸 것이다.
도 1은 백킹 카드(backing card)(70) 위에 검사선(test line)(40)과 대조 선(control line)(50)을 포함하는 니트로셀룰로오스 멤브레인(nitrocellulose membrane)(30)이 구비되고; 상기 니트로셀룰로오스 멤브레인의 일측에는 콘쥬게이트 패드(conjugate pad)(20)가 중첩되어 형성되는 한편, 상기 콘쥬게이트 패드(20) 위에 혈청 시료를 적하하는 샘플 패드(smaple pad)(10)가 중첩되어 구비되며; 상기 니트로셀룰로오스 멤브레인(30)의 타측에는 백킹 카드(70) 위에 반응이 종료된 혈청을 흡수하는 흡수 패드(adsorbent pad)(60)가 구비되는 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 신속 검출 진단키트(100)를 나타내고 있다.
본 발명의 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 신속 검출 진단키트의 원리를 간단히 설명하면 다음과 같다.
도 1에서와 같이 혈청시료를 적하하는 샘플 패드(10), 콘쥬게이트가 전처리되어 있는 콘쥬게이트 패드(20), 검사선(40)과 대조선(50)이 처리된 니트로셀루로즈 멤브레인(30), 반응이 종료된 혈청을 흡수하는 흡수 패드(60) 등이 서로 중첩되어 있는 광견병 항체 신속 검출 진단키트에서 개의 혈청시료를 상기 샘플 패드(10)에 적하하면 개의 혈청시료는 모세관 이동현상에 따라 전개되면서 검사선(40)과 대조선(50)이 처리된 니트로셀루로즈 멤브레인(30)을 거쳐 흡수 패드(60)에서 흡수된다. 이때 상기 콘쥬게이트 패드(20)는 대조선의 항-마우스 항체와 반응하는 마우스 항체 콘쥬게이트와 개의 항체를 포획하는 항-개 항체 콘쥬게이트가 처리되어 있고, 니트로셀루로즈 멤브레인(30)에 포함된 검사선(40)은 광견병 항원이 처리되고, 대조선(50)에는 항-마우스 항체가 처리되어 있다.
본 발명의 진단키트의 대조선(50)은 검사선(40)의 반응과는 상관없이 본 발명의 광견병 항체 신속 검출 진단키트가 적절히 작동하는 지를 파악하기 위한 품질검사용으로 사용된다. 따라서 개의 혈청시료 중에 광견병 백신 항체가 없다면 검사선(40)의 광견병 항원에 부착할 항체가 없기 때문에 검사선(40)은 아무런 표시가 나타나지 않고 대조선(50)만 나타나게 된다. 만일 개가 광견병 백신을 접종받았고 충분한 면역반응으로 혈중에 항체가 존재한다면 이러한 개의 혈청을 상기 샘플 패드(10)에 적하하면 컨쥬케이트 패드(20)에 전처리된 항-개 항체 콘쥬게이트가 개의 혈청에 있는 광견병 항체와 1차적으로 항원-항체 복합체를 형성한 다음 이들이 검사선(40)에 있는 광견병 항원과 반응하여 2차적인 항원-항체 복합체를 형성하여 결과적으로 검사선(40)에 붉은 선을 나타내게 된다.
상기에서 진단키트의 검사선(40)에는 순수 배양된 광견병 백신 바이러스 항원을(ERA주) 슈크로즈 분획기법으로 순수정제하여 이를 진단킷트의 검사선에 부착시킬 수 있고, 대조선(50)에는 항-마우스 항체를 부착시킨다.
상기에서 콘쥬게이트 패드(20)에는 2종류의 콘쥬게이트를 전처리할 수 있는데 대조선(50)의 항-마우스 항체와 항상 일정하게 반응하는 마우스 항체 콘쥬게이트와 개의 항체를 포획하는 항-개 항체 콘쥬게이트를 처리할 수 있다.
한편 도 3은 본 발명의 광견병 항체 신속 검출 진단키트에 개 혈청 시료를 적하 후 진단키트의 반응양상을 나타낸 사진으로서,
도 3의 첫 번째 사진은 광견병 백신 미접종 개의 혈청을 진단키트에 적하하여 상단의 대조선만 형성된 것을 나타낸 것이고,
도 3의 두 번째 사진은 광견병 백신 접종 개의 혈청(저역가)을 진단키트에 적하하여 상단의 대조선과 하단의 검사선이 동시에 형성된 것을 나타낸 것이고,
도 3의 세 번째 사진은 광견병 백신 접종 개의 혈청(고역가)을 진단키트에 적하하여 상단의 대조선과 하단의 검사선이 동시에 형성된 것을 나타낸 것이고,
도 3의 네 번째 사진은 개의 혈청시료 적하 전 진단키트를 나타낸 것이다.
이하 본 발명의 내용을 실시예 및 시험예를 통하여 구체적으로 설명한다. 그러나, 이들은 본 발명을 보다 상세하게 설명하기 위한 것으로 본 발명의 권리범위가 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 광견병 바이러스의 배양 및 정제
본 발명에 사용한 바이러스는 Evelyn-Pokitnicky-Abelseth(ERA)주를 사용하였다. BHK-21 세포에 ERA주를 배양하였으며, 감염 후 3일간 배양하였다. 감염된 세포주는 2∼3회 냉동과 해동을 반복하여 세포를 플라스크에서 유리시켰으며, 3,000 g에 20분간 원심분리하여 세포찌꺼기들을 제거하였다. 바이러스 입자들은 4℃, 50,000 g에서 2시간 동안 초원심분리하여 바이러스 입자를 수집하였다. 원심 상층액은 버리고 바이러스 입자들을 초기 배양액의 1∼2％ 정도 되도록 NTE 버퍼(0.1M NaCl, 0.01M Trometamol HCl, 1mM EDTA, pH 7.4)로 농축하였다.
농축된 광견병 바이러스 입자들은 슈크로즈 밀도구배를 이용하여 초원심분리를 실시하였다. 간락히 말하면, NTE 버퍼에 10∼50％의 슈크로즈(sucrose) 농도를 갖도록 각 단계별로 준비하였다. 계속된 농도 경사를 만들기 위하여 각 농도별로 4℃, 78시간 동안 보관하였다. 정제하고자 하는 바이러스 용액은 제작된 슈크로즈 가장 윗부분에 조심스레 붓고 4℃, 100,000 g에서 1시간 동안 초원심분리를 실시하였다.
원심후 바이러스 입자들은 단층의 밴드를 형성하는데, 1.17g/cm3의 부유밀도를 가지게 된다. 이러한 바이러스 입자들은 주사용 바늘을 이용하여 채취하였으며, 10mM PBS, pH 7.2를 이용하여 4℃에서 2일간 투석을 실시하였다. 투석이 종료된 용액을 본 발명의 항원용액으로 사용하였다.
<실시예 2> 40nm 콜로이드 골드용액의 제조
40nm 크기의 콜로이드 골드 용액은 증식법으로 제조하였다. 수세한 플라스크에 속시렛(Soxhlet)과 수온계를 장착하여 초순수 증류수 89ml를 넣고 자석교반식 가온 멘틀(mentle)에서 60℃로 가열한 후 1％(w/v) 테트라클로우릭산(tetrachloroauric acid)를 1ml 첨가하여 교반하였다. 5분 경과 후 1％(w/v) 소디움 시트레이트(sodium citrate) 4ml와 초순수 증류수 6ml를 혼합한 용액을 교반중인 반응액에 주입하였다. 반응용액의 색깔이 노란색, 검정색, 보라색 순으로 바뀌었다가 최종적으로 맑은 선홍색이 되면, 15분 동안 추가로 끓이면서 20nm 크기의 콜로이드 골드 용액을 제조하였다.
제조된 콜로이드 골드 용액 25ml와 초순수 증류수 153ml를 혼합하여 핫 플레 이트(hot plate)에서 교반하면서 100℃로 가열한 후 1％ 소디움 시트레이트(sodium citrate) 2ml를 주입하였다. 초순수 증류수 18ml와 1％ 테트라클로우릭산(tetrachloroauric acid) 2ml를 혼합한 용액을 1ml/min의 속도로 한 방울씩 플라스크에 모두 첨가한 후 추가로 20분 동안 끓이면서 40nm 크기의 콜로이드 골드 용액을 제조하였다(도 2 참조).
<실시예 3> 마우스 항체 콘쥬게이트 제작
콜로이드 골드 용액은 제조시마다 약간의 크기나 형태에서 차이가 나타날 수 있어 이들을 안정화시키는데 필요한 최소량의 항체 농도를 결정하는 것이 필요하며, 본 발명에서는 염 측정법으로 실시하였다.
상기 실시예 2에서 만들어진 콜로이드 골드 용액을 10개의 시험관에 각각 1ml씩 분주한 후 10mM 인산염 버퍼(phosphate buffer, pH 7.0)에 희석된 마우스 항체(BBInternational)와 초순수 증류수를 각각 5㎕씩 증가 또는 감소시키면서 시험관내 총량이 1050㎕가 되도록 조정하였다(표 1 참조). 이를 혼합하여 30분 정치한 후 10％(w/v) NaCl 용액을 각 시험관에 40㎕씩 혼합하고 15분 후 육안적으로 콜로이드 골드 용액의 색깔 변화가 없는 최소 항체농도를 관찰하였다.
표 1. 염 측정법에 따른 최적 단백질 농도 설정
시약
 지시한 시험관에 첨가될 시약 용량 (㎕)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
콜로이드용액 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000
마우스 항체 0 5 10 15 20 25 30 35 40 50
증류수 50 45 40 35 30 25 20 15 10 0
색깔 변화가 없는 최소 단백질 농도를 확인한 후 이를 이용하여 마우스 항체 컨쥬케이트를 다음과 같이 제작하였다. 콜로이드 골드 40ml에 마우스 항체용액을 한 방울씩 천천히 적하한 후 30분 동안 교반하였다. 이를 0.1％(w/v) NaOH로 용액의 pH를 9.0으로 조정하였고, 0.4ml의 10％(w/v) 소혈청알부민(bovine serum albumin, BSA)을 한 방울씩 적하하였다. 30분 동안 혼합한 후 0.1％(v/v) HCl을 이용하여 pH 7.2로 재조정한 후 10,000rpm에서 1시간 동안 원심 분리하여 상층액을 제거하였다. 침전된 필렛을 2mM 붕사(borax) 용액에 부유시켜 상기 조건으로 원심 분리하여 상층액을 제거하였다. 0.3ml의 10％ BSA, 3ml의 1％(w/v) 소디움 아지드(sodium azide), 26.7ml의 2mM 붕사(borax, pH 7.2)가 혼합된 용액에 필렛을 완전히 부유시켜 냉장보관하면서 콘쥬게이트 패드(밀리포어사) 전처리에 사용하였다.
<실시예 4> 항-개 항체 콘쥬게이트 제작
실시예 3과 동일한 방법으로 실시하되, 마우스 항체대신에 항-개 항체(affinity purified, Immunology Consultant Laboratory)를 사용하여 항-개 항체 콘쥬게이트를 제작하였다.
<실시예 5> 간이검출킷트의 각 부분별 전처리 조건 및 조립
샘플 패드(밀리포어사)(10)는 PBS에 0.5％ BSA와 0.5％ Tween 20을 혼합하여 전처리하였다.
콘쥬게이트 패드(밀리포어사)(20)는 마우스 항체 콘쥬게이트가 0.5 OD 되도록 조정하였고, 항-개 항체 콘쥬게이트는 3.0 OD가 되도록 하였으며, 5％ 트레할로스(trehalose)를 첨가하였다.
Matrix 1600(Kinematic Automation, USA)을 이용하여 니트로셀룰로오스 멤브레인(30)에 검사선(40)과 대조선(50)을 전처리하였다. 즉, 검사선(40)은 실시예 1에서 제작된 광견병 항원액 1㎕가 니트로셀룰로오스 멤브레인(30) 1cm에 분사되도록 농도를 조정하였으며, 분사속도는 초당 5cm의 속도로 하였다. 대조선(50)도 검사선과 동일한 조건으로 항-마우스 항체(BBI)를 분사하였다. 검사선과 대조선이 분사 완료된 니트로셀룰로오스 멤브레인은 37℃에서 24시간 건조시켜 광견병 항원액과 항-마우스 항체용액이 충분히 니트로셀룰로오스 멤브레인에 부착되도록 처리하였다.
전처리가 완료된 샘플 패드(10), 콘쥬게이트 패드(20), 니트로셀룰로오스 멤브레인(30), 흡수 패드(60)들을 도 1에 나타난 것처럼 백킹 카드(70) 위에서 2mm씩 서로 중첩되도록 순차적으로 부착시킨 후 폭 4mm로 절단하여 광견병 항체 신속 검출 진단키트(100)를 제작하였다.
<실시예 6> 본 발명의 키트와 바이러스중화시험법간의 효능비교시험
개 혈청 105건을 대상으로 광견병 항체 표준측정법인 바이러스 중화시험과 본 발명의 광견병 항체 신속 검출 진단키트를 동시에 적용하여 광견병 백신 항체 검출양상을 비교하고 그 결과를 아래의 표 2에 나타내었다.
표 2에 나타난 바와 같이, 본 발명품은 바이러스 중화시험법에 비하여 특이 도 91.4％, 민감도 77.1％, 카파 값 0.63, 일치도 82％를 나타내었다.
표 2. 본 발명의 진단키트와 바이러스 중화시험법간의 광견병 항체 검출양상 비교
바이러스 중화시험 결과 본 발명의 진단키트 적용에 따른 결과
양성 음성 총계
< 0.5 unit 3 32 35
≥ 0.5 unit 54 16 70
총계 57 48 105
상술한 바와 같이, 본 발명의 바람직한 실시예를 참조하여 설명하였지만 해당 기술 분야의 숙련된 당업자라면 하기의 특허청구범위에 기재된 본 발명의 사상 및 영역으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서 본 발명을 다양하게 수정 및 변경시킬 수 있음을 이해할 수 있을 것이다.
본 발명의 광견병 항체 신속 검출 진단키트를 사용하면 고가의 부대장비없이 현장에서 20분 이내에 광견병 백신접종에 따른 항체 형성 유무를 파악할 수 있어 개의 광견병 백신 재접종유무를 신속히 파악하여 광견병 백신을 접종시킬 수 있으므로, 광견병의 발생을 감소시킬 뿐만 아니라 사람으로의 광견병 전파 방지에 매우 효과적이어서 본 발명은 산업상 이용가능성이 매우 유용하다.
도 1은 본 발명에 사용된 광견병 항체 신속 검출 진단키트의 구조도이다.
도 2는 콜로이드 골드를 전자현미경으로 촬영한 사진이다.
도 3은 본 발명의 광견병 항체 신속 검출 진단키트에 개 혈청 시료를 적하 후 진단키트의 반응양상을 나타낸 사진으로서,
도 3의 첫 번째 사진은 광견병 백신 미접종 개의 혈청을 진단키트에 적하하여 상단의 대조선만 형성된 것을 나타낸 것이고,
도 3의 두번째 사진은 광견병 백신 접종 개의 혈청(저역가)을 진단키트에 적하하여 상단의 대조선과 하단의 검사선이 동시에 형성된 것을 나타낸 것이고,
도 3의 세번째 사진은 광견병 백신 접종 개의 혈청(고역가)을 진단키트에 적하하여 상단의 대조선과 하단의 검사선이 동시에 형성된 것을 나타낸 것이고,
도 3의 네번째 사진은 개의 혈청시료 적하 전 진단키트를 나타낸 것이다.
<도면의 주요 부분에 대한 부호의 설명>
10 : 샘플 패드(smaple pad)
20 : 콘쥬게이트 패드(conjugate pad)
30 : 니트로셀룰로오스 멤브레인(nitrocellulose membrane)
40 : 검사선(test line)
50 : 대조선(control line)
60 : 흡수 패드(adsorbent pad)
70 : 백킹 카드(backing card)
100 : 광견병 항체 신속 검출 진단키트

Claims (4)

  1. 백킹 카드 위에 광견병 항원이 처리된 검사선과 항-마우스 항체가 처리된 대조선을 포함하는 니트로셀룰로오스 멤브레인이 구비되고,
    상기 니트로셀룰로오스 멤브레인의 일측에는 상기 대조선의 항-마우스 항체와 반응하는 마우스 항체 콘쥬게이트와 개의 항체를 포획하는 항-개 항체 콘쥬게이트가 처리된 콘쥬게이트 패드가 중첩되어 형성되는 한편, 상기 콘쥬게이트 패드 위에 혈청 시료를 적하하는 샘플 패드가 중첩되어 구비되며,
    상기 니트로셀룰로오스 멤브레인의 타측에는 백킹 카드 위에 반응이 종료된 혈청을 흡수하는 흡수 패드가 구비되는 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 신속 검출 진단키트.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 광견병 항체 신속 검출 진단방법에 있어서,
    마우스 항체 콘쥬게이트와 개의 항체를 포획하는 항-개 항체 콘쥬게이트가 처리된 패드에 개의 혈청을 적하시켜 상기 개의 혈청이 모세관 현상에 의해 광견병 항원이 처리된 검사선 및 항-마우스 항체가 처리된 대조선을 이동하도록 하여 광견병 항원이 처리된 검사선의 색깔이 변화는 것에 의해 개의 혈청에 광견병 항체가 있는지의 여부를 검출하는 것을 특징으로 하는 면역크로마토그라피를 이용한 광견병 항체 신속 검출 진단방법.
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