KR101055676B1 - ＰＰＡＲ의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물, ＰＰＡＲγ 작용제, ＰＰＡＲα 작용제, ＰＰＡＲ의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 개선하기 위한 건강식품 및 약학 조성물의 제조 방법 - Google Patents

Abstract

PPAR의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물, PPARγ 작용제, PPARα 작용제, PPAR의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 개선하기 위한 건강식품 및 약학 조성물의 제조 방법이 개시된다. 본 발명은 유효성분으로서 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물 및 채찍말 추출물, 이들 추출물로부터 얻어진 분획물, 활성 분획물, 사가퀴노익산 화합물 및 사가하이드로퀴노익산 화합물 중에서 선택된 적어도 하나의 물질을 함유한다. 본 발명에 따르면, 이러한 물질을 함유함으로써, 비만과 당뇨를 예방 및 치료할 수 있으므로 PPAR의 작용에 의해 조절되는 질환 예방 및 치료용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

PPAR, 해조류 추출물

Description

ＰＰＡＲ의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물, ＰＰＡＲγ 작용제, ＰＰＡＲα 작용제, ＰＰＡＲ의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 개선하기 위한 건강식품 및 약학 조성물의 제조 방법{Pharmaceutical composition for prevention or medical treatment of disease controlled by PPAR, PPARγ agonist, PPARα agonist, health food for prevention or improvement of disease controlled by PPAR and method for preparation of pharmaceutical composition}

본 발명은, PPAR의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물, PPARγ 작용제, PPARα 작용제, PPAR의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 개선하기 위한 건강식품 및 약학 조성물의 제조 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는, PPAR을 활성화시켜 PPAR의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 치료할 수 있는 물질을 함유하는 약학 조성물, 작용제, 건강식품, 및 약학 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.

최근 식생활의 다양화 및 서구화로 고열량 및 동물성 식품의 섭취가 증가함에 따라 뇌졸중, 동맥경화, 고지혈증, 당뇨병 및 비만 등 대사기능의 이상으로 인 한 질환의 발병률이 높아지고 있다. 또한 소득 수준이 향상됨에 따라 생활의 여유와 건강한 삶을 중시하는 경향이 확산되면서 생명에는 직결되지 않으나 생활에 불편을 가져오는 증상들을 치료하기 위한 의약품의 수요가 급증하고 있다.

퍼옥시좀(Peroxisome)은 이러한 대사기능 이상의 원인이 되는 세포 내 소기관 중 하나로서, 산소, 포도당, 지질 및 호르몬의 대사에 있어 중요한 역할을 하며, 세포 증식 및 분화의 조절, 염증 매개체들의 조절에도 폭 넓게 영향을 미친다. 또한 퍼옥시좀은 지질대사와 포도당대사를 통하여 인슐린 감수성뿐만 아니라 세포막과 비만세포의 형성에 영향을 주고, 산화적 스트레스에 영향을 주어 노화 및 종양 발생(tumorigenesis)에 있어서 중요한 역할을 한다.

퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체(peroxisome proliferator-activated receptor : PPAR)는 리간드(ligand) 결합에 의해 유전자 발현을 조절하는 핵 수용체(nuclear receptors) 중 하나로서, 여러 가지 지방산이 내인성 리간드(endogenous ligand)로 작용한다. 현재 밝혀진 PPAR은 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체 알파(PPARα), 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체 베타(PPARβ/δ) 및 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체 감마(PPARγ)의 세 가지이다.

PPARα는 주로 혈관벽, 간, 심장, 근육, 신장 및 갈색 지방조직 등에서 발견되며, 작용제(agonist)인 피브레이트(fibrate)류와 함께 동맥경화증을 예방하거나 발병을 지연시키고 지방 산화 촉진을 통한 항비만 작용을 한다.

PPARβ 또는 PPARδ는 피부, 뇌 또는 지방 조직에서 많이 발견되며, 콜레스테롤 역수송, 유수화(myelination) 및 상처 회복에 관여하고, 지방산 대사와 에너 지 생체항상성(homeostasis)에 중요한 조절자로서 작용한다.

PPARγ는 지방 조직에서 가장 많이 발견되고, 그 밖에 혈관 내피, 대식세포, 췌장의 β세포에서 발견되며, 지방 세포의 분화를 조절하고 전신 지질 항상성에 결정적인 역할을 한다. PPARγ의 전체적 또는 부분적 활성화 화합물은 지방 세포의 분화를 억제하여 비만을 효과적으로 치료할 수 있으며, 부분적 활성화 화합물은 비만 치료뿐 아니라 고혈당증의 치료에 효과적이다.

PPAR과 관련하여, PPARγ에 대한 효능제 활성을 갖는 치환된 4-히드록시-페닐알카논산 유도체(대한민국특허 제 474202호), PPAR 매개 질환의 치료에 유용한 신규 화합물(대한민국특허 공개번호 제 2005-0055790호), 키랄 옥사졸-아릴프로파이온산 유도체 및 PPAR 작용제로서 그의 용도(대한민국특허 공개번호 제 2005-0055750호), 체액 잔류, 부종 또는 울혈심부전증을 유발하지 않는 신규 PPAR 리간드(대한민국특허 공개번호 제 2005-0055701호), 당뇨병 치료에 유용한 PPAR 작용제로서 N-치환된-1H-인돌-5-프로파이온산 화합물(대한민국특허 공개번호 제 2005-0042809호), PPARγ와 PPARα의 활성을 항진시키는 신규화합물, 그것의 제조 방법 및 그것을 함유한 약제 조성물(대한민국특허 공개번호 제 2005-0040746호), PPARγ와 PPARα의 조절 물질로서 벤조산 유도체(대한민국특허 공개번호 제 2005-0014014호) 및 경구용 항당뇨병제(대한민국특허 공개번호 제 2004-0044515) 등이 신물질에 대한 특허로 알려져 있다.

또한 검색방법에 관한 특허로는 비만 및 당뇨 조절 물질의 검색 방법(대한민국특허 제 468046호), βGK유전자의 퍼옥시좀 증식 반응 요소(대한민국특허 제 4434948), PPARα에 대한 단일클론 항체, 특이항체분비 융합세포주 및 항체를 이용한 염증, 암, 대사성 질환과 같은 질병 관련 조절인자를 검색하는 방법(대한민국 공개특허 제 2005-0027808) 등이 있다.

용도발명에 대한 특허로는 육두구에서 추출한 메이스리그난 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 PPARα에 의해 매개되는 질환의 예방 또는 치료용 조성물(대한민국특허 공개번호 제 2007-0033938호), 카테킨 및 캄페롤 성분을 함유하는 피지억제용 화장료 조성물(대한민국특허 공개번호 제 2007-0028902호), PPARγ수용체의 활성화에 기인한 자가면역질환 및 알츠하이머병의 치료에 유용한, 천심련으로부터 추출된 랍단 디테르펜을 포함하는 조성물(대한민국특허 공개번호 제 2007-0026398호), 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물(대한민국특허 공개번호 제 2007-0019344호), PPARγ 작용제(agonist)로서의 인삼 PPT(대한민국특허 공개번호 제 2006-0131012호), 항지방화 및 항비만 활성을 갖는 박과 식물 추출물 또는 이로부터 분리한 정제물을 포함하는 조성물(대한민국특허 공개번호 제 2005-0054009, 2005-0054006호), 지질대사 개선용 조성물 및 식품(대한민국특허 공개번호 제 2004-0084908호), 심장 인슐린 내성 관련 증상의 치료 및 예방(대한민국 공개특허 제 2003-0019434), 뼈 형성의 조절(대한민국특허 공개번호 제 0093808호), 진성 당뇨병 치료를 위한 벤조산 유도체(대한민국특허 공개번호 제 2002-0087382호), 피부 관리 조성물(대한민국특허 공개번호 제 2002-0047101호), 심혈관 질환 치료용 ＰＰＡＲ 델타 억제제(대한민국특허 공개번호 제 2002-0012323호), 알쯔하이머병, 중추 신경계 손상 및 염증성 질환의 치료용 조성물 및 치료 방법(대한민국특허 공개번호 제 2001-0101085호), 증후군 X의 치료를 위한 PPAR 알파 및 PPAR 감마 길항제의 용도(대한민국특허 공개번호 제 1999-0077099) 등이 있다.

이와 같이 PPAR의 작용에 의해 조절되는 각종 질환들의 예방 및 치료를 위해 PPAR의 활성을 보다 효과적으로 조절할 수 있는 새로운 조성물에 대한 필요성이 제기되고 있다.

본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체(PPAR)를 활성화시켜서 PPAR의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물, PPAR 작용제, 건강식품 및 약학 조성물의 제조 방법을 제공하는 데 있다.

상기의 기술적 과제를 달성하기 위한, 본 발명에 따른 PPAR의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물은, 유효성분으로서 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물 및 채찍말 추출물 중에서 선택된 적어도 하나의 물질을 함유한다.

상기의 다른 기술적 과제를 달성하기 위한, 본 발명에 따른 PPAR의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물은, 유효성분으로서 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물 및 채찍말 추출물 중에서 선택된 적어도 하나의 물질에 유기 용매를 가하여 추출한 분획물을 함유한다.

상기의 다른 기술적 과제를 달성하기 위한, 본 발명에 따른 PPAR의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물은, 유효성분으로서 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물 및 채찍말 추출물 중에서 선택된 적어도 하나의 물질에 유기 용매를 가하여 추출한 분획물로부터 컬럼 크로마토그래피에 의하여 추출한 활성 분획물을 함유한다.

상기의 다른 기술적 과제를 달성하기 위한, 본 발명에 따른 PPAR의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물은, 유효성분으로서 사가퀴노익산 화합물, 사가하이드로퀴노익산 화합물 및 이들 화합물의 염 중에서 선택된 적어도 하나의 물질을 함유한다.

상기의 다른 기술적 과제를 달성하기 위한, 본 발명에 따른 PPARγ 작용제는, 유효성분으로서 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물 및 채찍말 추출물 중에서 선택된 적어도 하나의 물질에 유기 용매를 가하여 추출한 분획물, 사가퀴노익산 화합물 및 사가하이드로퀴노익산 화합물 중에서 선택된 물질을 함유한다.

상기의 다른 기술적 과제를 달성하기 위한, 본 발명에 따른 PPARα 작용제 는, 유효성분으로서 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물 및 채찍말 추출물 중에서 선택된 적어도 하나의 물질에 유기 용매를 가하여 추출한 분획물, 사가퀴노익산 화합물 및 사가하이드로퀴노익산 화합물 중에서 선택된 물질을 함유한다.

상기의 다른 기술적 과제를 달성하기 위한, 본 발명에 따른 PPAR의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 개선하기 위한 건강식품은, 유효성분으로서 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물 및 채찍말 추출물 중에서 선택된 적어도 하나의 물질에 유기 용매를 가하여 추출한 분획물, 사가퀴노익산 화합물 및 사가하이드로퀴노익산 화합물 중에서 선택된 물질을 함유한다.

상기의 또 다른 기술적 과제를 달성하기 위한, 본 발명에 따른 약학 조성물의 제조 방법은, (a) 부챗살, 왜모자반, 작은구슬산호말, 놀래기, 모로우붉은실, 개지누아리, 붉은까막살, 단박, 꽈배기모자반, 잔가시모자반 및 채찍말 중에서 선택된 적어도 하나의 물질에 40℃ 내지 100℃의 온도에서 추출 용매를 가하여 추출물을 추출하는 단계; 및 (b) 상기 추출물을 여과 및 농축하여 농축물을 수득하는 단계;를 갖는다.

본 발명에 따르면, PPAR을 활성화하는 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물, 채찍말 추출물, 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산 중에서 선택된 물질을 함유함으로써, 비만과 당뇨를 예방 및 치료할 수 있으므로 PPAR의 작용에 의해 조절되는 질환 예방 및 치료용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

이하에서 첨부된 도면들을 참조하여 본 발명에 따른 PPAR의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물, PPARγ 작용제, PPARα 작용제 및 PPAR의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 개선하기 위한 건강식품의 바람직한 실시예에 대해 상세하게 설명한다.

본 발명에 따른 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체(PPAR)의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물은 유효성분으로서 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물 및 채찍말 추출물 중에서 선택된 적어도 하나의 물질을 함유한다.

부챗살은 학명이 Ahnfeltiopsis flabelliformis로서 부챗살과(Phyllophoraceae)에 속하는 홍조류의 바닷말이고, 왜모자반(Sargassum yezoense)과 꽈배기모자반(Sargassum siliquastrum), 잔가시모자반(Sargassum micracanthum)은 모자반과(Sargassaceae)에 속하는 갈조류이고, 작은구슬산호말(Corallina pilulifera)은 산호말과(Corallinaceae)에 속하는 홍조류이다. 놀래기는 학명이 Dermonema pulvinatum으로서 국수나물과(Liagoraceae)에 속하는 홍조류이고, 모로우붉은실(Polysiphonia morrowii)은 빨간검둥이과(Rhodomelaceae)의 홍조류이고, 개지누아리(Grateloupia prolongata)와 붉은까막살(Prionitis cornea)은 지누아리과(Halymeniaceae)의 홍조류이다. 단박은 학명이 Ceramium boydenii로 비단풀과(Geramiaceae)에 속하는 홍조류이고, 채찍말(Cutleria cylindrica)은 채찍말과(Cutleriaceae)에 속하는 갈조류의 바닷말이다.

이 중에서 모자반류에 대한 여러 가지 제조 및 용도 특허가 있는데, 꽈배기모자반에서 항산화활성이 있는 신규크로마놀 유도체인 사르가솔의 분리(대한민국특허 제 0833121호), 항산화활성을 가진 크로마놀의 분리(대한민국특허 제 0765160호), 모자반을 먹인 닭에서 나온 항암 기능성 계란의 제조방법 (대한민국특허 제 0670615호), 모자반과 주엽나무 추출액을 이용한 항암 기능성 쌀 (대한민국특허 공개번호 제 2006-0125078호) 과 건강기능식품 (대한민국특허 공개번호 제 2006-0125075호), 짝잎모자반을 이용한 피부용 조성물(대한민국특허 공개번호 제 2005-0095300호)과 항산화효과(대한민국특허 공개번호 제 2000-0025274호), 모자반의 당뇨합병증 중 신경독성 저해효과 (대한민국특허 제 0527094호), 모자반의 항균(대한민국특허 공개번호 제 2004-0064462호) 및 항암효과(대한민국특허 공개번호 제 2004-0064461호), 지충이로부터 모노갈락토실디아실글리세롤의 분리(대한민국특허 제 0772078호), 지충이 열수추출물의 항알레르기 용도 (대한민국특허 공개번호 제 2002-0048836호), 갈조류 다당체의 항암효과(대한민국특허 공개번호 제 1994-0019240호), 괭이모자반으로부터 푸코이단 등을 채집하는 방법 (대한민국특허 제 0590187호), 비틀대모자반의 항염 항알레르기 항천식효과(대한민국특허 제 0812878호), 비틀대모자반에서 분리한 불포화지방산의 항염, 항알레르기, 항천식효과(대한민국특허 제 0796458호) 등이 공개 및 등록되어 있다. 작은구슬산호말(Corallina pilulifera)의 경우는 항암효과(대한민국특허 제 0658950호)에 대한 특허가 등록되어 있다.

이 밖에도 모자반류에 대한 여러 가지 효능이 알려져 있으나, PPAR의 활성을 조절하여 PPAR의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 치료하는 기능에 대하여는 알려져 있지 않다.

본 발명에 따른 약학 조성물에 의하여 예방 또는 치료할 수 있는 질환은 PPAR 중에서 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체 알파(PPARα) 또는 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체 감마(PPARγ)에 의해 조절되는 질환이 해당된다. 특히, 이러한 질환 중에서도 비만, 대사성 질환 또는 심혈관계 질환이 본 발명에 따른 약학 조성물에 의하여 조절되는 질환에 해당한다. 대사성 질환은 당뇨, 고지질혈증, 고인슐린혈증, 고요산혈증, 고콜레스테롤혈증, 고중성지방혈증, 대사증후군(syndrome X) 또는 내피기능장애이며, 대사성 질환 중 고콜레스테롤혈증은 저 HDL-콜레스테롤증, 고 LDL-콜레스테롤증 또는 고트리글리세라이드혈증이다. 심혈관계 질환은 고혈압, 응집전 상태(precoagulant state), 이상 지질혈증 또는 아테롬성 경화증성 질환이다.

본 발명에 따른 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체(PPAR)의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물에 유효성분으로서 함유된 위 해조류의 추출물은 부챗살, 왜모자반, 작은구슬산호말, 놀래기, 모로우붉은실, 개지누아리, 붉은까막살, 단박, 꽈배기모자반, 잔가시모자반 또는 채찍말을 추출 용매로 추출하여 얻어진다.

이때 추출 용매로는 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있으며, 알코올은 C₁ 내지 C₄의 저급 알코올을 이용하는 것이 바람직하다. 저급 알코올 중에서는 에탄올 또는 메탄올을 이용하는 것이 효과적이다. 추출시 용매를 부챗살, 왜모자반, 작은구슬산호말, 놀래기, 모로우붉은실, 개지누아리, 붉은까막살, 단박, 꽈배기모자반, 잔가시모자반, 채찍말 분량의 5 내지 15배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하며, 10배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다.

추출 용매를 가한 후 환류 냉각하여 추출하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 추출시 용매의 온도는 40 ~ 100℃인 것이 바람직하며, 80℃인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 2 ~ 4 시간이 바람직하며, 3 시간이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 추출 횟수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 3회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.

이러한 방법에 의하여 부챗살, 왜모자반, 작은구슬산호말, 놀래기, 모로우붉은실, 개지누아리, 붉은까막살, 단박, 꽈배기모자반, 잔가시모자반, 채찍말을 추출, 여과한 뒤 여과액을 농축 및 동결건조하여 추출물을 수득할 수 있다.

또한 본 발명에 따른 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체(PPAR)의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물은 유효성분으로서 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물 및 채찍말 추출물 중에서 선택된 적어도 하나의 물질에 유기 용매를 가하여 추출한 분획물을 함유한다.

위 분획물은 부챗살, 왜모자반, 작은구슬산호말, 놀래기, 모로우붉은실, 개지누아리, 붉은까막살, 단박, 꽈배기모자반, 잔가시모자반, 채찍말의 추출물에 유기 용매를 가하여 얻어진다. 이때 사용되는 유기 용매로는 헥산, 디클로로메탄, 아세톤, 에틸아세테이트 또는 아세토니트릴이 해당될 수 있으나, 이에 한정하지 않는다.

또한 본 발명에 따른 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체(PPAR)의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물은 유효성분으로서 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물 및 채찍말 추출물 중에서 선택된 적어도 하나의 물질에 유기 용매를 가하여 추출한 분획물로부터 컬럼 크로마토그래피에 의하여 추출한 활성 분획물을 함유한다.

이때 Preparative ODS column(YMC-PACK ODS-AQ, 250 X 10mm, YMC Co., Japan) 크로마토그래피를 사용하여 활성 분획물을 분리 및 정제할 수 있다. 분획물을 0.03% 트리플루오로아세트산(trifluoroacetic acid)이 함유된 80% 메탄올 용액을 사용하여 평균유속 분당 3ml로 하여 흘려주었을 때 30분 내지 35분이 경과한 시점에 활성 분획물을 수득할 수 있다. 컬럼 크로마토그래피는 필요에 따라 적절한 충진제를 선택하여 수차례 실시할 수 있다.

본 발명에 따른 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체(PPAR)의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물은 유효성분으로서 화학식 1의 사가퀴노익산(sargaquinoic acid) 화합물, 화학식 2의 사가하이드로퀴노익산(sargahydroquinoic acid) 화합물, 또는 이들 화합물의 염을 함유한다.

사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산은 위에서 설명한 방법에 의해 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출 물, 잔가시모자반 추출물, 또는 채찍말 추출물로부터 얻어진 활성 분획물로부터 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography)를 사용하여 수득할 수 있다.

HPLC(TSK gel silica-60 컬럼, 4.6 X 250mm, Tosoh, Japan)에서 chloroform:hexane:acetone:methanol=72:18:9:1의 비율로 혼합한 용매를 사용하여 평균유속 분당 1ml로 하여 흘려주었을 때 5분이 경과한 시점에 분리되어 나오는 물질 및 10분이 경과한 시점에 분리되어 나오는 물질을 통해 활성 화합물을 수득할 수 있다. 5분 경과 시점 및 10분 경과 시점에 분리되어 나오는 물질의 구조를 핵자기공명(nuclear magnetic resonance : NMR)으로 확인한 결과, 5분 경과 시점에 분리되어 나오는 물질은 화학식 1의 사가퀴노익산(Sargaquinoic acid)이며, 10분 경과 시점에 분리되어 나오는 물질은 화학식 2의 사가하이드로퀴노익산(Sargahydroquinoic acid)이다.

또한 사가퀴노익산 또는 사가하이드로퀴노익산 화합물의 염에는 약학적으로 허용 가능한 염뿐만 아니라 통상의 방법에 의해 제조될 수 있는 모든 염, 수화물 및 용매화물이 모두 포함될 수 있다.

약학적으로 허용 가능한 염은 유리산(free acid)에 의해 형성된 부가염이 유용하다. 적합한 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 브롬산, 황산 및 인산 등을 사용할 수 있고 유기산으로는 구연산(citric acid), 초산, 젖산, 주석산(tartariac acid), 말레인산, 푸마르산(fumaric acid), 포름산, 프로피온산(propionic acid), 옥살산, 트리플루오로아세트산, 벤조산, 글 루콘산, 메탄술폰산, 글리콜산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 갈룩투론산, 엠본산, 글루탐산 또는 아스파르트산 등을 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체(PPAR)의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물은 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물, 채찍말 추출물, 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산 중에서 선택된 적어도 하나의 물질 외에 추가적으로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.

또한 본 발명에 따른 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체(PPAR)의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물은 임상 투여 시에 경구 또는 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다. 즉, 본 발명에 따른 약학 조성물은 실제 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제 및 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.

경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제 및 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 본 발명의 약학적 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스, 락토오스 및 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.

경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제 및 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제 및 좌제가 포함된다. 비수성용제와 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤 및 젤라틴 등이 사용될 수 있다. 또한 본 발명에 따른 약학 조성물을 비경구 투여시 피하주사, 정맥주사 또는 근육내 주사를 통할 수 있다.

본 발명에 따른 PPARγ 작용제는 유효성분으로서 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물 및 채찍말 추출물 중에서 선택된 적어도 하나의 물질에 유기 용매를 가하여 추출한 분획물, 화학식 1로 표시되는 사가퀴노익산 화합물 및 화학식 2로 표시되는 사가하이드로퀴노익산 화합물 중에서 선택된 물질을 함유한다.

또한 본 발명에 따른 PPARα 작용제는 유효성분으로서 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추 출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물 및 채찍말 추출물 중에서 선택된 적어도 하나의 물질에 유기 용매를 가하여 추출한 분획물, 화학식 1로 표시되는 사가퀴노익산 화합물 및 화학식 2로 표시되는 사가하이드로퀴노익산 화합물 중에서 선택된 물질을 함유한다.

PPARγ 작용제와 PPARα 작용제에 함유되는 분획물, 사가퀴노익산 화합물 및 사가하이드로퀴노익산 화합물은 앞에서 설명한 바와 동일한 방법에 의해 제조된 물질을 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체(PPAR)의 작용에 의해 조절되는 질병을 예방 또는 개선하기 위한 건강식품은 유효성분으로서 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물 및 채찍말 추출물 중에서 선택된 적어도 하나의 물질에 유기 용매를 가하여 추출한 분획물, 화학식 1로 표시되는 사가퀴노익산 화합물 및 화학식 2로 표시되는 사가하이드로퀴노익산 화합물 중에서 선택된 물질을 함유한다.

본 발명에 따른 건강식품에 함유되는 분획물, 사가퀴노익산 화합물 또는 사가하이드로퀴노익산 화합물은 위에서 설명한 방법에 의해 제조된 것, 또는 위에서 설명한 방법에 의해 제조된 추출물, 분획물 또는 화합물을 함유하는 본 발명에 따른 약학적 조성물을 사용하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.

유효성분의 혼합량용 목적(예방, 건강 또는 치료)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로 건강식품 또는 음료의 제조시에 본 발명에 따른 약학적 조성물이 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 위 범위 이하로 첨가될 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 위 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 건강식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 유효성분으로 함유되는 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명에 따른 건강식품의 하나인 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물, PPARγ 작용제, PPARα 작용제 및 건강식품에 함유되는 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출 물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물, 채찍말 추출물, 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수도 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하지 않지만 본 발명에 따른 약학 조성물, PPARγ 작용제, PPARα 작용제 및 건강식품 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 바람직하다.

이하에서 실시예 및 실험예에 의하여 본 발명에 따른 약학 조성물, PPARγ 작용제, PPARα 작용제 및 건강식품에 대해 상세히 설명한다.

<실시예 1> 부챗살 추출물의 제조

본 발명에서 사용된 부챗살은 강원도 삼척의 임원항 연안에서 자생하고 있는 것을 사용하였으며, 전초 습중량 100g을 100% 메탄올 300mL에 담그어 3시간 동안 환류 추출하였다. 이를 3회 반복하여 얻은 추출액을 감압건조 및 농축하여 농축물 105mg을 얻었다.

<실시예 2> 왜모자반 추출물의 제조

본 발명에서 사용된 왜모자반은 강원도 삼척의 임원항 연안에서 자생하고 있는 것을 사용하였으며, 전초 습중량 2000g을 100% 메탄올 300mL에 담그어 3시간 동 안 환류 추출하였다. 이를 3회 반복하여 얻은 추출액을 감압건조 및 농축하여 농축물 27200mg을 얻었다.

<실시예 3> 작은구슬산호말 추출물의 제조

본 발명에서 사용된 작은구슬산호말은 강원도 삼척의 장호항 연안에서 자생하고 있는 것을 사용하였으며, 전초 습중량 100g을 100% 메탄올 300mL에 담그어 3시간 동안 환류 추출하였다. 이를 3회 반복하여 얻은 추출액을 감압건조 및 농축하여 농축물 117mg을 얻었다.

<실시예 4> 놀래기 추출물의 제조

본 발명에서 사용된 놀래기는 강원도 강릉의 안목항 연안에서 자생하고 있는 것을 사용하였으며, 전초 습중량 100g을 100% 메탄올 300mL에 담그어 3시간 동안 환류 추출하였다. 이를 3회 반복하여 얻은 추출액을 감압건조 및 농축하여 농축물 67mg을 얻었다.

<실시예 5> 모로우붉은실 추출물의 제조

본 발명에서 사용된 모로우붉은실은 강원도 양양의 남애항 연안에서 자생하고 있는 것을 사용하였으며, 전초 습중량 100g을 100% 메탄올 300mL에 담그어 3시간 동안 환류 추출하였다. 이를 3회 반복하여 얻은 추출액을 감압건조 및 농축하여 농축물 71mg을 얻었다.

<실시예 6> 개지누아리 추출물의 제조

본 발명에서 사용된 개지누아리는 강원도 강릉의 사근진 연안에서 자생하고 있는 것을 사용하였으며, 전초 습중량 100g을 100% 메탄올 300mL에 담그어 3시간 동안 환류 추출하였다. 이를 3회 반복하여 얻은 추출액을 감압건조 및 농축하여 농축물 66mg을 얻었다.

<실시예 7> 붉은까막살 추출물의 제조

본 발명에서 사용된 붉은까막살은 강원도 양양의 남애항 연안에서 자생하고 있는 것을 사용하였으며, 전초 습중량 100g을 100% 메탄올 300mL에 담그어 3시간 동안 환류 추출하였다. 이를 3회 반복하여 얻은 추출액을 감압건조 및 농축하여 농축물 105 mg을 얻었다.

<실시예 8> 단박 추출물의 제조

본 발명에서 사용된 단박은 강원도 삼척의 임원항 연안에서 자생하고 있는 것을 사용하였으며, 전초 습중량 100g을 100% 메탄올 300mL에 담그어 3시간 동안 환류 추출하였다. 이를 3회 반복하여 얻은 추출액을 감압건조 및 농축하여 농축물 165mg을 얻었다.

<실시예 9> 꽈배기모자반 추출물의 제조

본 발명에서 사용된 꽈배기모자반은 강원도 고성의 대진 연안에서 자생하고 있는 것을 사용하였으며, 전초 습중량 100g을 100% 메탄올 300mL에 담그어 3시간 동안 환류 추출하였다. 이를 3회 반복하여 얻은 추출액을 감압건조 및 농축하여 농축물 1357mg을 얻었다.

<실시예 10> 잔가시모자반 추출물의 제조

본 발명에서 사용된 잔가시모자반은 강원도 고성의 대진 연안에서 자생하고 있는 것을 사용하였으며, 전초 습중량 100g을 100% 메탄올 300mL에 담그어 3시간 동안 환류 추출하였다. 이를 3회 반복하여 얻은 추출액을 감압건조 및 농축하여 농축물 1500mg을 얻었다.

<실시예 11> 채찍말 추출물의 제조

본 발명에서 사용된 채찍말은 강원도 삼척의 장호항 연안에서 자생하고 있는 것을 사용하였으며, 전초 습중량 100g을 100% 메탄올 300mL에 담그어 3시간 동안 환류 추출하였다. 이를 3회 반복하여 얻은 추출액을 감압건조 및 농축하여 농축물 300mg을 얻었다.

<실시예 12> 왜모자반 추출물로부터 분획물의 제조

<12-1> 분획물의 제조

실시예 2에서 얻어진 추출물 1.3g을 500ml의 물에 현탁시킨 다음 500ml 에틸아세테이트 용액을 넣어 3회 흔들어 추출하여 얻은 추출액을 감압건조 및 농축하여 분획물 1g을 수득하였다.

<12-2> 활성 분획물의 제조

위 분획물 1g에 대해 preparative ODS column(YMC-Pack ODS-AQ, 250 X 10mm, YMC Co., Japan) 크로마토그래피를 수행하였다. 용매는 0.05% 트리플루오로아세트산(trifluoroacetic acid)을 함유한 80% 메탄올을 사용하였으며, 유속을 분당 3ml로 하여 흘려주었을 때, 30분 내지 35분이 경과한 시점에서 얻어진 분획물의 활성이 가장 우수했다.

도 1은 왜모자반에 에틸아세테이트를 가하여 얻어진 분획물에 컬럼 크로마토그래피를 실시한 결과를 도시한 그래프이다. 도 1을 참조하면, HPLC의 실시 시작 시점부터 약 30분이 경과한 시점에 흡광도가 가장 높으므로, 분획물의 활성이 가장 우수하다는 것을 확인할 수 있으며, 이 시점에서 얻어지는 물질이 왜모자반의 활성 분획물이다.

<실시예 13> 사가퀴노익산의 분리

30분 내지 35분 경과 시점에서 얻어진 분획물을 고성능 액체 크로마토그래피, 즉 HPLC(TSK gel silica-60 column, 4.6 X 250mm, Tosoh, Japan)로 분석하였다. 클로로포름(chloroform) : 헥산(hexane) : 아세톤(acetone) : 메탄올(methanol)이 72 : 18 : 9 : 1의 비율로 혼합된 용매를 제조하여 평균유속 분당 1ml로 하여 흘려주었을 때 5분 경과 시점에 분리되어 나오는 화합물 25mg을 수득하였다.

위 화합물을 핵자기공명, 즉 NMR(¹H 및 ¹³C-NMR, Lambda 300, Jeol, Japan)과 질량 분석법, 즉 Mass spectrometry(Q STAR Pulsar 1, Applied Biosystems)로 그 구조와 분자량을 확인한 결과 5분대에 분리되어 나오는 화합물은 사가퀴노익산(Sargaquinoic acid)임이 확인되었다. 핵자기공명 및 질량 분석으로부터 얻어진 데이터는 다음과 같다.

₁H NMR (300 MHz, CDCl₃) 1.59 (3H, s), 1.61 (3H, s), 1.62 (3H, s), 1.68 (3H, s), 2.27 (2H, t, J = 7.2, 7.2 Hz), 2.61 (2H, q, J = 7.2, 7.5 Hz), 3.13 (2H, d, J = 7.2 Hz), 5.12 (3H, m), 6.01 (1H, t, J = 7.2 Hz), 6.47 (1H, m), 6.55 (1H, m), ppm; ₁₃C NMR (300 MHz, CDCl₃) 15.9, 16.0, 16.1, 17.7, 25.7, 26.4, 27.6, 27.9, 28.2, 34.6, 39.1, 39.6, 118.0, 123.5, 124.5, 130.6, 132.3, 133.2, 134.6, 139.8, 145.5, 145.9, 148.5, 173.0, 188.0, 188.1, ppm; TOF MS(ESI) (m/z) 425.2543(M⁺).

<실시예 14> 사가하이드로퀴노익산의 분리

30분 내지 35분 경과 시점에서 수득한 분획물을 HPLC(TSK gel silica-60 column, 4.6 X 250mm, Tosoh, Japan)로 분석 및 정제하였다. 클로로포름 : 헥산 : 아세톤 : 메탄올이 72 : 18 : 9 : 1의 비율로 혼합된 용매를 제조하여 평균유속 분당 1ml로 하여 흘려주었을 때 10분이 경과한 시점에 분리되어 나오는 화합물 142mg을 수득하였다.

위 화합물을 NMR(¹H 및 ¹³C-NMR, DMX 600, Bruker, Germany)과 Mass spectrometry(JMS-700 Mstation, Jeol)로 그 구조와 분자량을 확인한 결과 10분 경과 시점에 분리되어 나오는 화합물은 사가하이드로퀴노익산(Sargahydroquinoic acid)임이 확인되었다. 핵자기공명 및 질량 분석으로부터 얻어진 데이터는 다음과 같다.

¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) 1.61 (6H, d, J= 7.2 Hz) 1.69 (3H, s), 1.76 (3H, s), 2.09 (4H, m), 2.14 (4H, m), 2.18 (3H, s), 2.27 (2H, t, J = 7.2, 7.2 Hz), 2.60 (2H, q, J = 7.2, 7.2 Hz), 3.30 (1H, d, J = 7.2 Hz), 5.11 (2H, m), 5.28 (1H, t, J = 7.1 Hz), 6.00 (1H, t, J = 7.2 Hz), 6.47 (1H, d, J = 3.0 Hz), 6.51 (1H, d, J = 3.0 Hz), ppm; ¹³C NMR (600 MHz, CDCl₃) 16.2, 16.3, 16.4, 17.9, 25.9, 26.3, 28.1, 28.5, 30.1, 34.7, 39.2, 39.7, 114.2, 115.7, 121.9, 123.7, 124.5, 125.8, 127.9, 130.8, 132.5, 134.9, 138.5, 145.8, 146.6, 148.9, 173.1, ppm. TOF MS(ESI) (m/z) 427.2811(M⁺), HRMS (FAB+) calcd for C₂₇H₃₈O₄Na (M⁺+Na) 449.2668, found:449.2698.

도 2는 왜모자반의 활성 분획물에 HPLC를 실시한 결과를 도시한 그래프이다. 도 2를 참조하면, 크로마토그래피의 실시 시작 시점부터 5분 및 10분이 경과한 시점에 각각 그래프의 피크가 나타나는 것을 확인할 수 있다. 위 실험 결과를 참조하면, 5분 경과 시점에 나타난 그래프의 피크는 사가퀴노익산이 분리되었다는 것을 말하고, 10분 경과 시점에 나타난 그래프의 피크는 사가하이드로퀴노익산이 분리되었다는 것을 말한다.

<실험예 1> PPARγ 활성화 실험

본 발명에 따른 약학 조성물, PPARγ 작용제 및 건강식품이 PPARγ의 활성화에 미치는 영향을 루시퍼라아제(luciferase) 에세이 시스템에 의해 측정하였다.

플라스미드(Plasmid)는 일반적인 배양 조건에서도 발현되는 유니버셜 프로모터(universal promoter) 뒤에 PPARγ 유전자를 지닌 것, 리간드 결합형의 PPARγ가 결합하여 활성화되는 PPRE(PPARs Response Element)를 프로모터로 가지고 뒤에 리포터로서 역할을 하는 반디불 루시퍼라아제(firefly luciferase) 유전자를 지닌 것, 그리고 레퍼런스(reference)로 사용될 유니버셜 프로모터에 레닐라 루시퍼라아제(Renilla luciferase) 유전자가 결합된 플라스미드(pRL-SV40, Promega, USA)가 사용되었다(KLIEWER SA., Proc. Nadl. Acad. Sci. USA, 91: 7355-7359, 1994).

CV-1 세포(CCL-70, ATCC)를 5x10⁴의 농도로 24-웰(well)형 플레이트에 깐 후 24 시간 배양 후 상기 세 종류의 플라즈미드 유전자를 일시적 주입법(transient transfection)으로 주입하였다. 이를 24시간 동안 배양한 후 1x 인산완충식염수(Phosphate Buffered Saline, PBS)로 세척하였다. 후보물질인 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물, 채찍말 추출물, 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산을 10ug/ml의 농도로 처리 24시간 배양하고 1x PBS로 세척한 후, 1x 수동 라이시스 버퍼(Passive Lysis Buffer, PLB)로 세포를 깨고 듀얼-루시퍼라아제 수용체 분석 시스템 키트(dual-Luciferase^R Reporter Assay System kit, Promega, USA)를 사용하여 샘플과 레퍼런스의 루시퍼라아제 활성(luciferase activity)을 측정하였다.

본 실험에서 양성대조군은 PPARγ의 리간드 중 하나로 알려진 트로글리타존(Troglitazone)을 사용하였고, 음성대조군은 무처리군으로 하였다. 표 1에 양성 대조군의 활성화 정도를 1로 하여 비교치를 나타내었다.

시료	농도	활성화 정도
무처리군		0
트로글리타존	10uM	1
실시예 1	10ug/ml	<0.05
실시예 2	10ug/ml	0.72
실시예 3	10ug/ml	0.24
실시예 4	10ug/ml	0.36
실시예 5	10ug/ml	0.13
실시예 6	10ug/ml	0.21
실시예 7	10ug/ml	0.34
실시예 8	10ug/ml	0.28
실시예 9	10ug/ml	0.69
실시예 10	10ug/ml	0.60
실시예 11	10ug/ml	0.77
실시예 13	1uM	0.38
	3uM	0.43
	10uM	0.55
	30uM	0.75
실시예 14	1uM	0.30
	3uM	0.30
	10uM	0.45
	30uM	0.50

도 3은 표 1에 나타낸 PPARγ 활성화 실험의 결과를 도시한 그래프이다. 표 1 및 도 3을 참조하면, 실시예에 따라 얻어진 왜모자반 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물, 채찍말 추출물, 왜모자반 분획물에서 분리한 화합물인 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산을 처리한 경우에 이러한 물질들을 처리하지 않은 대조군에 비해 PPARγ의 활성화 정도가 더욱 높은 수치를 나타내었으며, 처리량이 높을수록 수치가 더 높아졌음을 확인할 수 있다. 따라서 PPARγ를 활성화시키는 이러한 물질들이 지방 및 당 대사 개선 역할을 하는 우수한 성분들임을 알 수 있다.

<실험예 2> 지방세포 분화 실험

왜모자반 추출물, 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산이 지방세포 분화에 미치는 영향을 알아보기 위한 실험을 수행하였다.

당이나 지방대사의 개선을 위해 사용되는 글리타존류의 약물들은 핵수용체이자 전사인자인 PPARγ를 활성화시켜 지방대사 관련 유전자들이 활성화되어 지방세포 내로 당의 유입을 촉진시켜 지방으로 축적되게 하고, 이로 인해 지방세포의 분화가 촉진되도록 한다. 따라서 글리타존류인 트로글리타존(trogritazone)과 대비하여 왜모자반 추출물, 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산의 효능을 확인하는 실험을 설계하였다.

마우스 전지방세포(preadipocyte)인 3T3L1 세포(CL-173, ATCC)를 6-웰 플레이트(well plate)에 well 당 3 X 10⁵ 개의 농도로 깔고, 48 시간 후 최종농도가 덱사메타손(dexamethasone) 1uM, 인슐린(insulin) 10ug/ml, 이소부틸메틸크산틴(isobutylmethylxantine, IBMX) 500uM을 함유한 분화배지(differentiation media)로 교환해주었다. 이때 분화군은 분화만 시킨 군이고, 양성대조군인 트로글리타존(troglitazone) 및 화합물은 각각 10uM 농도로, 추출물은 10μg/ml 농도로 동시에 처리하였다. 48시간 후에 인슐린(insulin) 10ug/ml와 양성대조군 및 실험에 사용한 시료를 함유한 배지로 교환해주었다. 이후 48시간마다 배지를 교체해주며, 분화의 진행 정도를 체크하였다.

분화가 진행된 후 진행된 정도는 오일 레드 O(Oil red O) 염색을 통해 확인하였다. 오일 레드 O 염색은 분화된 세포를 37 ℃의 인산완충식염수(phosphate buffered saline, PBS)으로 2회 세척하고 3.7% 포르말린(in PBS)으로 상온에서 30분간 고정함으로써 수행되었다. 그 후 포르말린을 제거하고 고정된 세포를 PBS로 2회, 70% 에탄올로 1회 씻어준 후 오일 레드 O(이소프로판올에 0.5%로 제조한 후 사용할 때마다 stock : DDW = 6 : 4로 희석하여 사용)로 상온에서 30분 동안 염색하고 현미경을 사용하여 염색된 정도를 관찰하였다. 또한 염색된 오일은 4% Nonidet P-40가 함유된 이소프로판올로 녹여내어 520nm에서 흡광도를 측정하여 정량화하였다.

도 4는 왜모자반 추출물, 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산에 의한 지방세포의 분화 정도를 나타낸 도면이고, 도 5는 왜모자반 추출물, 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산에 의한 지방세포의 분화 정도를 흡광도로 정량화하여 도시한 그래프이다.

도 4 및 도 5를 참조하면, 왜모자반 추출물, 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산을 처리한 경우에 지방세포의 분화를 촉진하는 트로글리타존을 처리한 경우와 지방세포의 분화 정도가 비슷하며, 흡광도 역시 비슷하게 나타났으므로 왜모자반 추출물, 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산이 PPARγ를 활성화시키는 물질이라는 것을 확인할 수 있다.

<실험예 3> 지방세포 분화 관련 유전자 발현 실험

왜모자반 추출물, 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산이 PPARγ 및 지방세포 분화에 관련된 유전자들의 발현에 미치는 영향을 확인하기 위해 역전사 중합효소 연쇄반응법(reverse transcriptase-polymerase chain reaction : RT-PCR)을 통해 PPARγ 및 지방세포와 관련된 유전자 C/EBPα(CCAAT Enhancer Binding Protein Alpha), Ap2(Adipocyte fatty acid-binding protein 2), 아디포넥틴(Adiponectin), 지방산합성효소(FAS, Fatty Acid Synthase), ADD1/SREBP1c(Adipocyte determination- and differentiation-dependent factor 1/sterol-regulatory element binding protein 1c), 글루코즈 트랜스포터 4(Glucose transporter 4, GLUT4) 및 레지스틴(Resistin)의 발현 정도를 조사하였다. RT-PCR은 특정 서열을 가지는 mRNA를 증폭하여 유전자 발현 정도를 확인하는 방법이다.

마우스 전지방세포(preadipocyte)인 3T3L1 세포를 60파이 디쉬(dish)에 5 X 10⁵ 개의 농도로 깔고, 48시간 후 최종 농도가 덱사메타손(dexamethasone) 1uM, 인슐린(insulin) 10ug/ml, IBMX 500uM을 함유한 분화배지(differentiation media)로 교환해주었다. 이때 분화군은 분화만 시킨 군이고, 양성대조군은 트로글리타존(troglitazone) 10uM을 처리한 군, 나머지는 왜모자반 추출물 10μg/ml 또는 사가퀴노익산과 사가하이드로퀴노익산을 각 10uM씩 동시에 처리하였다. 48시간 후에 인슐린(insulin) 10ug/ml와 양성대조군 및 실험에 사용한 시료를 함유한 배지로 교환해주었다. 이후 48시간마다 배지를 교체해주며, 분화의 진행 정도를 조사하였다.

분화가 진행된 후 트리졸(trizol)을 이용하여 전체 RNA를 추출하고, RT-PCR을 통해 지방세포 분화 관련 유전자들의 발현정도를 확인하였다. RT-PCR에서 역전사(reverse transcription)는 시중에 판매되는 키트(reverse transcription system, Promega)를 사용하여 수행하였으며, PCR은 변성(denaturation)은 94℃, 1분, 풀림(annealing)은 54℃, 1분, 연장(extension)은 72℃, 1분씩 총 30사이클(cycle)로 수행하였다. 각 유전자에 대하여 PCR에 사용된 프라이머(primer)들은 다음의 표 2에 나타난 바와 같다.

유전자	프라이머 서열		서열번호
PPARγ	포워드	5' ttcgctgatgcactgcctat 3'	1
	리버스	5' gccaacagcttctccttctc 3'	2
C/EBPα	포워드	5' aggtgctggagttgaccagt 3'	3
	리버스	5' cagcctagagatccagcgac 3'	4
Ap2	포워드	5' atgtgtgatgcctttgtggga 3'	5
	리버스	5' tgccctttcataaactcttgt 3'	6
Adiponectin	포워드	5' agcctggagaagccgcttat 3'	7
	리버스	5' ttgcagtagaacttgccagtgc 3'	8
Fas	포워드	5' ctgcgtggctatgattatggc 3'	9
	리버스	5' cgtgaggttgctgtcgtctgt 3'	10
ADD1	포워드	5' caaactgcccatccaccgac 3'	11
	리버스	5' tgcctcctccactgccacaa 3'	12
GLUT4	포워드	5' tcgtcattggcattctggtt 3'	13
	리버스	5' ggtcatcaagatggcacagc 3'	14
Resistin	포워드	5' tcaactccctgtttccaaatgc 3'	15
	리버스	5' tcttcacgaatgtcccacga 3'	16
GAPDH	포워드	5' accacagtccatgccatcac 3'	17
	리버스	5' tccaccaccctgttgctgta 3'	18

도 6은 왜모자반 추출물에 의한 PPARγ 관련 유전자들의 발현 정도를 RT-PCR로 확인한 결과를 나타낸 도면, 그리고 도 7은 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산에 의한 PPARγ 관련 유전자들의 발현 정도를 RT-PCR로 확인한 결과를 나타낸 도면이다.

도 6 및 도 7을 참조하면, PPARγ및 이와 관련 유전자인 C/EBPα(CCAAT Enhancer Binding Protein Alpha), Ap2(Adipocyte fatty acid-binding protein 2), 아디포넥틴(Adiponectin), 글루코즈 트랜스포터 4(Glucose transporter 4, GLUT4), 레지스틴(Resistin)은 그 발현 정도가 왜모자반 추출물, 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산을 처리한 각 군에서 양성대조군으로 사용한 트로글리타존(Troglitazone)을 처리한 군만큼 증가하는 것을 확인할 수 있다. 따라서 왜모자반 추출물, 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산이 당 및 지방 대사에 관여함을 알 수 있다.

<실험예 4> 리간드-수용체 결합 실험(PPARγ competitor assay)

사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산이 PPARγ에 직접적으로 결합하는지 확인하기 위하여 형광을 붙인 리간드와 경쟁시켜 그 결합 정도를 측정하였다.

실험에는 Invitrogen사에서 판매하는 PolarScreen™ PPAR Competitor Assay, Green(cat. No. PV3355)을 사용하였다. 대조군으로는 트로글리타존을, 시험군으로는 실시예 13 및 실시예 14에 의해 얻어진 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산을 25μM에서 1.5nM까지 4배 농도로 단계별로 희석하여 각각 2배 농도가 되도록 Complete PPAR Green Screening Buffer에 녹인다. 총 반응 용액 40㎕에 20㎕ 2X 시료와 20㎕ 2XPPAR-LBD(0.002mg/ml) Fluormone^TM PPAR Green complex를 384 well plate에 넣고 plate shaker에서 혼합한다.

빛이 없는 상온에서 두 시간 반응시킨 후, 형광극성(Fluorescence polarization)을 safire^2TM microplatereader (Tecan,Salzburg,.Austria)를 사용하여 excitation 파장 485nm, emission 파장 535nm에서 측정하여 시료의 농도에 따른 mP값을 구하고, 아무런 처리도 하지 않은 대조군을 0으로 놓고, 시료 없이 40㎕ 1X PPAR-LBD(0.002mg/ml) Fluormone^TM PPAR Green complex를 384 well plate에 넣고 2시간 동안 반응시킨 것을 100으로 하여 IC₅₀ 값을 계산하였다.

도 8은 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산의 PPARγ에 대한 결합능을 측정하기 위한 실험 결과를 도시한 도면이다. 도 8을 참조하면, 양성대조군으로 사용한 트로글리타존은 IC₅₀값이 658nM, 사가퀴노익산은 255nM, 그리고 사가하이드로퀴노익산은 725nM로, PPARγ 수용체와 아주 우수한 결합능을 나타내어 이의 리간드임을 확인할 수 있다.

<실험예 5> 렙틴 수용체가 결여된 db/db 마우스 모델에서의 항당뇨 활성 측정

C57BLKS/6-db/db 5주령 마우스를 일본 SLC사로부터 구입하여 동물실에서 1주일간 적응 후 실험에 사용하였다. 식이는 일반식이로 하고, 각 군당 8마리로 하여 실험군을 대조군, 로지글리타존 투여군, 실시예 2에 의하여 얻어진 왜모자반 추출물 투여군으로 하여 8주동안 진행하였다. 실험을 진행하면서 매일 일정한 시간에 몸무게와 먹이섭취량, 음료 섭취량을 측정하였고, 1~2주에 한번씩 혈당을 측정하였다. 몸무게 및 음료 섭취량, 혈당은 8마리 평균값으로 나타내었다.

도 9는 렙틴 수용체가 결여된 마우스 모델에서의 로지글리타존과 왜모자반 추출물 투여 후 몸무게의 변화를 도시한 그래프이다. 도 9를 참조하면, 8주 동안 로지글리타존을 투여한 군은 아무것도 투여하지 않은 대조군에 비해 약 9.3% 정도 체중이 증가하였고, 왜모자반 추출물을 투여한 군들은 투여한 양에 관계없이 대조군과 동일하게 정상체중을 유지하였다.

도 10은 렙틴 수용체가 결여된 마우스 모델에서의 로지글리타존과 왜모자반 추출물 투여 후 혈당 변화를 도시한 그래프이다. 도 10을 참조하면, 8주동안 로지글리타존을 투여한 군은 아무것도 투여하지 않은 대조군에 비해 약 74% 정도 혈당이 감소하였으며, 왜모자반 추출물 100mg/Kg 투여군은 23%, 200mg/Kg투여군은 47% 정도 감소하여 농도의존적으로 혈당강하효과를 보이는 것을 확인할 수 있다.

<실험예 6> PPARα 활성화 실험

본 발명에 따른 약학 조성물, PPARγ 작용제 및 건강식품이 PPARα의 활성화에 미치는 영향을 루시퍼라아제(luciferase) 에세이 시스템에 의해 측정하였다.

플라즈미드(Plasmid)는 PPARγ 대신 PPARα를 사용하고, 실험예 1에서 사용한 것과 동일한 것을 사용하였다.

CV-1 세포를 5x10⁴의 농도로 24-웰(well)형 플레이트에 깐 후 24시간 배양 후 상기 세 종류의 플라즈미드 유전자를 일시적 주입(transient transfection)하였다. 이후 24시간 배양하고 1x 인산완충식염수(Phosphate Buffered Saline, PBS)로 세척한 후, 각 실시예에 의해 얻어진 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물, 채찍말 추출물, 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산을 농도별로 처리하여 24시간 배양하고, 1xPBS로 세척 후 1xPLB로 세포를 깨고 듀얼-루시퍼라아제 수용체 분석 시스템 키트(Dual-Luciferase Reporter Assay System kit, Promega, USA)를 사용하여 사용자 지시서에 따라 샘플과 레퍼런스(reference)의 루시퍼라아제 활성(luciferase activity)을 측정하였다. 본 실험에서 양성대조군은 PPARα의 리간드 중 가장 강력한 것으로 알려진 Wy-14,643(Sigma, USA)을 사용하였고 음성대조군은 무처리군으로 하였다.

표 3에 양성대조군의 활성화 정도를 1로 하여 그 결과를 나타내었다.

시료	농도	활성화 정도
무처리군		0
Wy-14,643	10uM	1
실시예 1	10ug/ml	0.50
실시예 2	10ug/ml	0.70
실시예 3	10ug/ml	0.50
실시예 4	10ug/ml	0.72
실시예 5	10ug/ml	0.57
실시예 6	10ug/ml	0.58
실시예 7	10ug/ml	0.56
실시예 8	10ug/ml	0.57
실시예 9	10ug/ml	0.16
실시예 10	10ug/ml	0.23
실시예 11	10ug/ml	0.46
실시예 13	1uM	0.29
	3uM	0.47
	10uM	0.55
	30uM	0.58
실시예 14	1uM	0.44
	3uM	0.42
	10uM	0.67
	30uM	0.96

도 11은 표 3에 나타낸 PPARα 활성화 실험의 결과를 도시한 그래프이다. 표 3 및 도 11을 참조하면, 대조군과 비교하여 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물 및 채찍말 추출물, 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산을 처리한 경우에 PPARα의 활성화 정도가 더욱 높은 수치를 나타내었으며, 처리양이 높을수록 수치가 더 높아졌음을 확인할 수 있다. 따라서 PPARα를 활성화시키는 이러한 물질들이 지방 및 당 대사 개선 역할을 하는 우수한 성분들임을 알 수 있다.

<실험예 7> 경구투여 급성 독성실험

부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물 및 채찍말 추출물, 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산의 급성 독성을 알아보기 위해 다음과 같은 실험을 수행하였다.

6주령의 특정병원부재(SPF) SD계 랫트를 사용하여 급성 독성실험을 실시하였다. 부챗살추출물, 왜모자반추출물, 작은구슬산호말추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실추출물, 개지누아리추출물, 붉은까막살추출물, 단박추출물, 꽈배기모자반추출물, 잔가시모자반추출물, 채찍말추출물, 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산을 각각 0.5% 메틸셀룰로오스 용액에 현탁하여 5 g/kg/15 ㎖의 용량으로 단회 경구 투여하였다. 실험물질 투여 후 동물의 폐사 여부, 임상 증상, 체중 변화를 관찰하여 혈액학적 검사와 혈액 생화학적 검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 복강장기와 흉강장기의 이상 여부를 관찰하였다.

실험 결과, 실험물질을 투여한 모든 동물에서 특기할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학검사, 부검소견 등에서도 독성 변화는 관찰되지 않았다. 즉, 랫트에서 5g/kg까지 독성 변화를 나타내지 않으며, 경구 투여 최소 치사량 (LD₅₀)은 5g/kg 이상인 안전한 물질로 판명되었다.

이상에서 본 발명의 바람직한 실시예에 대해 도시하고 설명하였으나, 본 발명은 상술한 특정의 바람직한 실시예에 한정되지 아니하며, 청구범위에서 청구하는 본 발명의 요지를 벗어남이 없이 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 누구든지 다양한 변형 실시가 가능한 것은 물론이고, 그와 같은 변경은 청구범위 기재의 범위 내에 있게 된다.

도 1은 왜모자반에 에틸아세테이트를 가하여 얻어진 분획물에 컬럼 크로마토그래피를 실시한 결과를 도시한 그래프,

도 2는 왜모자반의 활성 분획물에 HPLC를 실시한 결과를 도시한 그래프,

도 3은 표 1에 나타낸 PPARγ 활성화 실험의 결과를 도시한 그래프,

도 4는 왜모자반 추출물, 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산에 의한 지방세포의 분화 정도를 나타낸 도면,

도 5는 왜모자반 추출물, 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산에 의한 지방세포의 분화 정도를 흡광도로 정량화하여 도시한 그래프,

도 6은 왜모자반 추출물에 의한 PPARγ 관련 유전자들의 발현 정도를 RT-PCR로 확인한 결과를 나타낸 도면,

도 7은 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산에 의한 PPARγ 관련 유전자들의 발현 정도를 RT-PCR로 확인한 결과를 나타낸 도면,

도 8은 사가퀴노익산 및 사가하이드로퀴노익산의 PPARγ에 대한 결합능을 측정하기 위한 실험 결과를 도시한 도면,

도 9는 렙틴 수용체가 결여된 마우스 모델에서의 로지글리타존과 왜모자반 추출물 투여 후 몸무게의 변화를 도시한 그래프,

도 10은 렙틴 수용체가 결여된 마우스 모델에서의 로지글리타존과 왜모자반 추출물 투여 후 혈당 변화를 도시한 그래프, 그리고,

도 11은 표 2에 나타낸 PPARα 활성화 실험의 결과를 도시한 그래프이다.

Claims (23)

1. 유효성분으로서 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물 및 채찍말 추출물 중에서 선택된 적어도 하나의 물질을 함유하며, 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체(Peroxisome Proliferator-activated Receptor : PPAR)의 작용에 의해 조절되는 질환으로서, 비만, 고지질혈증, 고인슐린혈증, 고요산혈증, 고콜레스테롤혈증, 고중성지방혈증, 대사증후군(Syndrome X), 내피기능장애, 고혈압, 응집전 상태(Precoagulant state), 이상 지질혈증 및 아테롬성 경화증성 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물.
2. 제 1항에 있어서,

   상기 알코올은 탄소수가 1 내지 4인 저급 알코올인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서,

   상기 PPAR은 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체 알파(PPARα) 또는 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체 감마(PPARγ)인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
4. 유효성분으로서 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물 및 채찍말 추출물 중에서 선택된 적어도 하나의 물질에 유기 용매를 가하여 추출한 분획물을 함유하며, 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체(Peroxisome Proliferator-activated Receptor : PPAR)의 작용에 의해 조절되는 질환으로서, 비만, 고지질혈증, 고인슐린혈증, 고요산혈증, 고콜레스테롤혈증, 고중성지방혈증, 대사증후군(Syndrome X), 내피기능장애, 고혈압, 응집전 상태(Precoagulant state), 이상 지질혈증 및 아테롬성 경화증성 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물.
5. 제 4항에 있어서,

   상기 유기 용매는 헥산, 디클로로메탄, 아세톤, 에틸아세테이트 및 아세토니트릴 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
6. 유효성분으로서 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물 및 채찍말 추출물 중에서 선택된 적어도 하나의 물질에 유기 용매를 가하여 추출한 분획물로부터 컬럼 크로마토그래피에 의하여 추출한 활성 분획물을 함유하며, 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체(Peroxisome Proliferator-activated Receptor : PPAR)의 작용에 의해 조절되는 질환으로서, 비만, 고지질혈증, 고인슐린혈증, 고요산혈증, 고콜레스테롤혈증, 고중성지방혈증, 대사증후군(Syndrome X), 내피기능장애, 고혈압, 응집전 상태(Precoagulant state), 이상 지질혈증 및 아테롬성 경화증성 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물.
7. 유효성분으로서 하기 화학식 1로 표현되는 사가퀴노익산(Sargaquinoic acid) 화합물 또는 상기 화합물의 염을 함유하며, 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체(Peroxisome Proliferator-activated Receptor : PPAR)의 작용에 의해 조절되는 질환으로서, 비만, 고지질혈증, 고인슐린혈증, 고요산혈증, 고콜레스테롤혈증, 고중성지방혈증, 대사증후군(Syndrome X), 내피기능장애, 고혈압, 응집전 상태(Precoagulant state), 이상 지질혈증 및 아테롬성 경화증성 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물.

   [화학식 1]

   
8. 유효성분으로서 하기 화학식 2로 표현되는 사가하이드로퀴노익산(Sargahydroquinoic acid) 화합물 또는 상기 화합물의 염을 함유하며, 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체(Peroxisome Proliferator-activated Receptor : PPAR)의 작용에 의해 조절되는 질환으로서, 비만, 고지질혈증, 고인슐린혈증, 고요산혈증, 고콜레스테롤혈증, 고중성지방혈증, 대사증후군(Syndrome X), 내피기능장애, 고혈압, 응집전 상태(Precoagulant state), 이상 지질혈증 및 아테롬성 경화증성 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물.

   [화학식 2]

   
9. 삭제
10. 삭제
11. 제1항, 제4항, 제6항, 제7항 및 제8항 중 어느 한 항에 있어서,

    상기 고콜레스테롤혈증은 저 HDL-콜레스테롤증, 고 LDL-콜레스테롤증 및 고트리글리세라이드혈증 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
12. 삭제
13. 유효성분으로서 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물 및 채찍말 추출물 중에서 선택된 적어도 하나의 물질에 유기 용매를 가하여 추출한 분획물, 하기 화학식 1로 표시되는 사가퀴노익산 화합물 및 하기 화학식 2로 표시되는 사가하이드로퀴노익산 화합물 중에서 선택된 물질을 함유하며, 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체(Peroxisome Proliferator-activated Receptor, PPAR) 중에서 PPARγ의 활성을 조절하는 PPARγ 작용제.

    [화학식 1]

    

    [화학식 2]

    
14. 유효성분으로서 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물 및 채찍말 추출물 중에서 선택된 적어도 하나의 물질에 유기 용매를 가하여 추출한 분획물, 하기 화학식 1로 표시되는 사가퀴노익산 화합물 및 하기 화학식 2로 표시되는 사가하이드로퀴노익산 화합물 중에서 선택된 물질을 함유하며, 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체(Peroxisome Proliferator-activated Receptor, PPAR) 중에서 PPARα의 활성을 조절하는 PPARα 작용제.

    [화학식 1]

    

    [화학식 2]

    
15. 유효성분으로서 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 부챗살 추출물, 왜모자반 추출물, 작은구슬산호말 추출물, 놀래기 추출물, 모로우붉은실 추출물, 개지누아리 추출물, 붉은까막살 추출물, 단박 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 잔가시모자반 추출물 및 채찍말 추출물 중에서 선택된 적어도 하나의 물질에 유기 용매를 가하여 추출한 분획물, 하기 화학식 1로 표시되는 사가퀴노익산 화합물 및 하기 화학식 2로 표시되는 사가하이드로퀴노익산 화합물 중에서 선택된 물질을 함유하며, 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체(Peroxisome Proliferator-activated Receptor : PPAR)의 작용에 의해 조절되는 질환을 예방 또는 개선하기 위한 건강식품.

    [화학식 1]

    

    [화학식 2]

    
16. (a) 부챗살, 왜모자반, 작은구슬산호말, 놀래기, 모로우붉은실, 개지누아리, 붉은까막살, 단박, 꽈배기모자반, 잔가시모자반 및 채찍말 중에서 선택된 적어도 하나의 물질에 40℃ 내지 100℃의 온도에서 추출 용매를 가하여 추출물을 추출하는 단계; 및

    (b) 상기 추출물을 여과 및 농축하여 농축물을 수득하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물의 제조 방법.
17. 제 16항에 있어서,

    (c) 상기 농축물에 유기 용매를 가하여 분획물을 수득하는 단계;를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물의 제조 방법.
18. 제 16항 또는 제 17항에 있어서,

    상기 추출 용매를 가한 후 환류 냉각하여 추출물을 추출하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물의 제조 방법.
19. 제 17항에 있어서,

    상기 유기 용매는 헥산, 디클로로메탄, 아세톤, 에틸아세테이트 및 아세토니트릴 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 약학 조성물의 제조 방법.
20. 제 17항에 있어서,

    (d) 컬럼 크로마토그래피 방법에 의하여 상기 분획물로부터 활성 분획물을 수득하는 단계;를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물의 제조 방법.
21. 제 20항에 있어서, 0.03% 농도의 트리플루오로아세트산(trifluoroacetic acid)을 함유하는 80% 농도의 메탄올 용액을 이용하여 분당 3ml의 유속으로 컬럼 크로마토그래피 방법을 수행하고, 30분 내지 35분이 경과한 시점에 상기 활성 분획물을 수득하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물의 제조 방법.
22. 제 20항에 있어서,

    (e) 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography : HPLC) 방법에 의하여 상기 활성 분획물로부터 하기 화학식 1로 표현되는 사가퀴노 익산(sargaquinoic acid) 및 하기 화학식 2로 표현되는 사가하이드로퀴노익산(sargahydroquinoic acid)을 수득하는 단계;를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물의 제조 방법.

    [화학식 1]

    

    [화학식 2]

    
23. 제 22항에 있어서,

    클로로포름, 헥산, 아세톤 및 메탄올을 각각 72%, 18%, 9% 및 1%의 비율로 함유하는 용매를 이용하여 분당 1ml의 유속으로 상기 고성능 액체 크로마토그래피 방법을 수행하며, 5분이 경과한 시점에 상기 사가퀴노익산을 수득하고, 10분이 경과한 시점에 상기 사가하이드로퀴노익산을 수득하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물의 제조 방법.

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