KR101012507B1

KR101012507B1 - 점막면역 유도능이 있는 면역증강제를 포함하는 여성위생용품용 조성물 및 그 제조방법

Info

Publication number: KR101012507B1
Application number: KR1020080002359A
Authority: KR
Inventors: 정환준; 양승훈; 김세중
Original assignee: (주)디딤바이오텍; 김세중; 정환준
Priority date: 2008-01-08
Filing date: 2008-01-08
Publication date: 2011-02-08
Also published as: KR20080070525A; WO2009088125A1

Abstract

본 발명은 점막면역 유도능이 있는 면역증강제를 포함하는 여성 위생용품(질세정제, 외음부세정제, 질정제 등) 용 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다. 또한 본 발명은 점막면역 유도능이 있는 면역증강제를 포함하는 여성 위생용품을 제공한다. 본 발명의 조성물은 비뇨생식기계를 통하여 각종 감염에 노출되기 쉬운 여성에게 점막면역유도를 통하여 감염 및 질병에 대한 면역력을 높여 주어, 여성 위생용품 고유의 용도 외에 감염 및 질병 예방 및 치료의 효과를 추가로 제공한다.

여성 위생용품, 질세정제, 외음부세정제, 질정제, 점막면역, 베타-글루칸(β-glucan), cholera toxin(CT), heat-labile enterotoxin(LT), 비메칠화 된 dinucleotide가 함유된 oligodeoxynucleotide(CpG ODN), monophosphoryl lipid A(MPL), lipopolysaccharide(LPS), 알루미늄 염, 겨우살이 렉틴, 면역증강제, 감염성질환

Description

점막면역 유도능이 있는 면역증강제를 포함하는 여성 위생용품용 조성물 및 그 제조방법 {A composition for sanitary supplies comprising mucosal immunoadjuvant and a preparation method thereof}

본 발명은 점막면역 유도능이 있는 면역증강제를 포함하는 여성 위생용품(질세정제 및 외음부세정제, 질정제 등) 용 조성물, 상기 조성물을 포함하는 여성위생용품 및 그 제조방법에 관한 것이다.

자궁, 질, 외음부, 뇨도 등을 포함하는 여성의 비뇨생식기계는 해부생리학적, 기능적 특성상 외부로부터의 감염에 노출되기 쉽다. 예를 들어, 질은 양분이 풍부하여 인체 깊숙히 위치하고 있으므로 온도와 습도가 높다. 따라서 질염의 주원인인 세균이나 곰팡이를 포함한 여러 균주들의 침범이 용이하여 여러 질환이 발생할 가능성이 크다. 그러므로 항상 질을 청결히 유지하고 외부로부터 세균감염에 노출되지 않도록 유의하는 것이 바람직하다.

여성생식기관은 성생활 중에 점막을 통해 병균에 쉽게 감염될 수 있다. 또한 장기간 자궁 내에 피임기구를 설치하는 경우 만성염증이 유발되며(Wagenlehner 등, Clin Microbiol Infect. 9(8), 881-5, 2003), 의료기구를 체내에 도입할 때 또는 포유동물의 출산 시 해당 신체 부위의 점막(mucous membrane)이 손상되는 일이 종종 생기게 되는데, 이러한 상처는 병원균의 감염의 기회를 높이고, 염증을 유발한다.

여성에 있어서 비뇨생식기계 염증은 부인과를 찾아오는 환자들의 가장 흔한 질환 중의 하나이며 이러한 염증은 세균성에서부터 기생충, 바이러스에 이르기까지 매우 다양하다. 이들 환자들은 소양감 및 심한 염증과 악취를 동반하게 되는데, 특히 인유두종 바이러스의 감염은 자궁경부암과 매우 밀접한 관계가 있어 세심한 주의가 필요하다. 그러므로 이에 따른 적절한 예방, 진단과 치료로서 치명적 합병증을 감소시켜야 하는 것은 매우 중요하다. 대표적인 여성 생식기(외음부, 질, 자궁경부 등)의 감염으로는 세균성 바지노시스(bacterial vaginosis) 트리코모나스 질염, 외음부 및 질 칸디다증, 만성 외음부 칸디다증, 일반 염증성 질염, 위축성 질염, 자궁경 질염 등이 있다. 또한 월경을 전 후로 다량의 출혈이 동반될 때에는 위생적으로 매우 불편한 느낌을 가질 뿐 만 아니라, 감염의 기회가 더 높아진다.

이와 같은 여성질환을 예방하고 불쾌한 냄새를 제거하기 위하여 질세정제(청결제), 외음부세정제를 사용하는 경우가 많다. 질염을 예방하기 위해 일반적으로 사용되고 있는 국부용 세정제로는 지방산류 또는 증류된 라우릴 알콜(lauryl alcohol) 등을 설폰화하고 완화제, 점증제, 영양제, 기포제, 유기살균제 등을 함유한 투명 또는 로숀 타입의 것이 출하된 바 있다. 또한 세정력을 지닌 계면활성제 및/또는 의약품으로서의 포비돈-요오드를 주성분으로 하는 것을 예로 들 수 있다. 상기한 화학적 합성에 의한 소독제인 포비돈-요오드는 칸디다성 질염, 트리코모나스 질염 및 기타 질감염증의 예방 및 치료에 효능이 있는 것으로 알려져 있으나, 요오드 등의 과민 증상이나 점막 손상에 의한 소양감, 작열감, 피부 궤양, 접촉성 피부염 등을 일으킬 우려가 있으며 질내 무기 요오드 또는 혈중 총 요오드치가 상승하여 갑상선 기능 저하증을 유발할 수 있는 것으로 알려져 있다. 또한, 건강한 여성의 경우 질내 유익 미생물에 의한 젖산 분비에 의해 질내 산도가 pH 3.2로 유지되며 이러한 낮은 산도에서는 대부분의 유해균이 증식 억제 내지 사멸한다는 점에 기초하여, 젖산을 주성분으로 하며 우유에서 추출한 락토세럼(lactoserum)을 첨가한 pH3.5의 완충 용액 제제가 제안된 바 있으나, 이것은 질내 pH를 정상 상태로 유지시키는 질내 적정 산도 유지제이며, 근본적인 치료를 기대하기 힘들다.

또한 이들 질병의 예방 또는 치료를 위하여 항생물질 등과 같은 활성성분을 함유하는 질정, 로숀, 크림, 연고, 액제 형태의 질내 적용제제가 사용되기도 한다.

이와 같은 일반적인 살균제, 소독제, 항생제 등의 사용은 항생물질 내성 미생물의 발생가능성을 증가시킬 뿐만 아니라 질내에서 분비물의 적당한 산도를 유지하여 자정작용을 하는 질내의 정상적인 유산간균 등을 무차별적으로 공격하여 질내 유용 미생물까지 제거함으로서 병원성 혐기성 세균 등으로 대체시키는 결과를 초래하기 쉬워 완치가 어렵고 부작용이 많으며 재발이 되는 경우가 흔하다. 따라서 이러한 문제점들을 보완할 수 있는 방법의 개발이 필요하다.

한편, 병원균의 감염 및 염증은 생체의 면역력이 저하될 경우 발생할 확률이 높아진다. 따라서 이를 예방 또는 치료하기 위해서는 면역조절기구를 활성화함으로 써 체외에서 침입하는 병원균과 미생물, 바이러스, 또는 암세포로부터의 저항력을 높일 필요가 있다. 면역조절기구를 활성화하는 방법 중의 하나로서 점막을 통한 면역증강방법이 있다. 점막은 내배엽으로부터 유래된 것으로 흡수와 분비에 관련된 기관에 분포한다. 점막은 식품이나 공기 중에 있는 외부 물질이 체내로 들어올 때 가장 먼저 접촉하는 부위인 코, 기도, 편도선과 같은 호흡기관, 소장, 직장과 같은 소화기관, 생식기관을 덮고 있어 점막세포는 외부에서 침입하는 병원체에 대하여 최전선에서 방어기능을 수행하고 있다. 이와 같이 생체 방어에 있어서 점막세포를 통한 면역은 매우 중요하다.

점막면역 자극 증강효과 물질(mucosal immunoadjuvant)로는 베타-글루칸(β-glucan), CT B-subunit(콜레라 독소; cholera toxin B-subunit), LT(대장균의 이열성 독소; E.coli heat-labile toxin), 백일해 독소(pertusis toxin)를 비롯한 LPS(리포폴리사카라이드; Lipopolysaccharide), MPL(단일 인화 지질 A; monophosphoryl lipid A)과, CgP ODN(oligodeoxynucleotides containing unmethylated dinucleotides; 비메칠화 된 dinucleotide를 포함한 oligodeoxynucleotide), 알루미늄 염, 겨우살이 추출물, 백반(Alum) 등이 있다.

이곳에 기재된 정보들은 단지 본 발명의 기술적 배경에 대한 이해를 돕고자 하는 것으로서, 본 발명에 대한 선행기술로써 작용할 수 없음은 당연하다.

여성 비뇨생식기계의 청결, 감염예방 및 치료를 위하여 사용되는 기존의 여성용 위생용품들은 살균제 및 소독제로 질내 미생물을 무차별적으로 공격하여 질내 유용 미생물까지 제거함으로써 인체의 자정작용을 상실케 하는 문제점을 유발하는 경향이 있다. 최근 들어 공해, 가공식품 등의 영향으로 인체의 병원균에 대한 저항력이 계속적으로 감소되어 이러한 문제점에 대한 대처능력도 떨어지고 있다. 따라서 본 발명에서는 세정제 등의 여성위생용품 본래의 고유 기능을 갖으면서 체내의 자체 면역력을 높여주는 기능까지 겸비하여, 안정성이 뛰어나고 질내 유해 미생물을 인체가 스스로 억제할 수 있도록 하는 여성용품을 개발하는 것을 목적으로 한다.

본 발명의 발명자들은 점막면역 자극 증진효과가 있는 물질을 함유하는 질세정제 등의 여성 위생용품용 조성물을 제조함으로써 상기 기술적 과제를 해결하였다. 세정제, 질정 등 여성용 위생용품을 활용한 면역증강제의 도입은 전무한 실정으로, 본 발명으로 인해 본래 상기제품의 세정, 살균 등의 역할을 수행하도록 하면서 동시에 기초면역력의 증진을 도모할 수 있는 보다 안전하고 편리한 새로운 방법을 제공하게 되었다.

본 발명의 조성물 및 이를 함유하는 여성위생용품은 점막면역을 유도하여 성병, 감염 및 각종 질병에 대한 초기 면역력을 높여줌으로써, 위생용품 본래의 역할과 더불어 질감염을 근본적으로 예방, 치료하는 효과를 제공한다.

증가된 기초면역력을 통해 각종 감염을 조기에 막을 수 있으며 세계적으로 문제가 되고 있는 에이즈, SARS, 조류독감 등과 같은 감염성 질병 등에 대한 예방 또는 건강한 생식기를 유지할 수 있다.

또한 생식기 및 비뇨기관에서 발생한 점막면역은 체내의 점막 전체의 면역성을 증가시키기 때문에 생식기 및 비뇨기 계통의 감염뿐만 아니라 호흡기 및 위장관으로부터 유발되는 감염성 질병에 대한 면역력도 증진시킬 수 있다.

본 발명은 점막면역 유도능이 있는 면역증강제를 포함하는 여성 위생용품 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 또한 본 발명은 점막면역 유도능이 있는 면역증강제를 포함하는 조성물로 제조된 여성위생용품을 제공한다.

좀 더 자세하게는, 본 발명은 점막면역 유도능을 가지는 면역증강제를 질세정제 및 외음부세정제에 적정량 혼합하여 여성 생식기 및 비뇨기를 세척하는 세정제를 제조하고, 이 세정제가 적용되는 개체에서 세정제 고유의 역할 뿐만아니라 점막면역을 유도하여 성병과 감염 및 각종 질병에 대한 초기 면역력을 높여 이를 근본적으로 예방할 수 있는 효과를 발휘하는 기능성 세정제를 제공한다. 또한 질내 염증의 예방 및 치료를 위하여 질내에 투여되는 질정제, 로숀, 크림, 연고, 액제 형태의 제제에 면역증강물을 함께 포함시켜 여성의 질 내부에 삽입함으로써 점막자극 효과를 극대화시켜 점막면역 및 체내 전반적인 면역을 증강시키는 효과를 발휘하는 제제를 제조함으로써, 이의 고유의 살균력 외에 점막면역을 유도하여 상기와 같은 효과를 발휘하는 차세대 질정제 등 질내 적용제제를 제공한다.

본 발명은 점막면역 자극 증강효과를 갖는 것으로 알려진 물질을 첨가한 질세정제를 제조하여 마우스의 질 내에 적용할 경우, 상기 점막면역자극 증강물질이 없는 대조군을 적용하였을 때와 비교하여 비장세포로부터 B-/T-세포 분화비율 및 T세포의 분화능이 증가하며, 비뇨생식기관의 표면 상피세포들을 활성화시켜 다량의 이뮤노글로불린을 생산하고, Th1 타입의 사이토카인의 분비능이 증가함으로써 면역기능이 증진된다는 실험결과를 바탕으로 한다.

본 발명의 발명자들은 기존에 알려진 질세정제에 점막면역 자극 증강물질을 첨가하여 암컷 BALB/C 마우스의 질 내에 각각 주입하여 실험하였다. 실험에 사용된 점막면역 증진물질로는 베타-글루칸(β-glucan), 콜레라 독소 B 사슬 (cholera toxin B-subunit; CT B-subunit), 대장균의 이열성 독소(E.coli heat-labile toxin; LT), 백일해 독소(pertusis toxin)를 비롯한 리포폴리사카라이드 (Lipopolysaccharide; LPS), 비메칠화된 디뉴클레오티드를 포함하는 올리고데옥시뉴클레오티드 (oligodeoxynucleotides containing unmethylated dinucleotides; CgP ODN), 알루미늄 염, 겨우살이 렉틴 및 겨우살이 렉틴 B-chain 및 이들의 혼합물을 사용하였다. 상기 점막면역증진물질을 상업적으로 구입이 가능한 질세정제 및 외음부세정제(Cepee®,레이디스 클렌져®)에 첨가하여 사용하였다.

점막면역 자극 증강효과 물질을 첨가한 세정제를 처리한 실험군이 인산완충액을 첨가한 대조군에 비하여 2배 이상의 B-세포 및 T-세포 활성을 나타내었다.

상기 점막면역 자극 증강효과 물질 또는 이들의 혼합물을 첨가한 세정제를 처리한 실험군은 인산완충액을 첨가한 대조군에 비하여 혈청에서 최소 1:64,000 이상, 비뇨기관의 점막세척물에서 최소 1:16,000의 IgG 역가를 나타내었으며, IgA는 점막세척물에서 최소 1:8,000의 역가를 나타내어, 체 내 전반적인 면역력이 증가하였다.

또한 혈청중 TNF-α, IL-2 및 INF-γ의 농도, 즉 Th1 타입의 사이토카인 분비능을 측정한 결과, 대조군에 비하여 면역증강물질을 첨가한 질세정제를 처리한 군에서 월등히 높아, 면역력이 증강되었다는 것을 확인하였다.

상기와 같은 실험결과를 토대로 본 발명은 다음에 기재된 것을 제공한다.

[1] 점막면역 유도능이 있는 면역증강제를 포함하는 것을 특징으로 하는 질 또는 외음부세정제 조성물.

[2] [1]에 있어서, 상기 면역증강제가 베타-글루칸(β-glucan), 콜레라 독소 B 사슬 (cholera toxin B-subunit; CT B-subunit), 대장균의 이열성 독소(E.coli heat-labile toxin; LT), 백일해 독소(pertusis toxin), 리포폴리사카라이드 (Lipopolysaccharide; LPS), 단일인화지질A(monophosphoryl lipid A; MPL), 비메칠화된 디뉴클레오티드를 포함하는 올리고데옥시뉴클레오티드 (oligodeoxynucleotides containing unmethylated dinucleotides; CgP ODN), 알루미늄 염, 가시오가피 추출물, 유럽산 겨우살이 렉틴, 유럽산 겨우살이 렉틴 B-chain, 한국산 겨우살이 추출물, 한국산 겨우살이 렉틴, 한국산 겨우살이 렉틴 B-chain 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 세정제 조성물.

[3] [1]에 있어서, 상기 면역증강제가 CT B-subunit, 유럽산 겨우살이 렉틴, 한국산 겨우살이 렉틴, 유럽산 겨우살이 렉틴 및 비메칠화된 디뉴클레오티드를 포함하는 올리고데옥시뉴클레오티드(CpG ODN), 한국산 겨우살이 렉틴 및 CpG ODN, 리포폴리사카라이드(LPS) 및 한국산 겨우살이 렉틴, CT B-subunit 및 한국산 겨우살이 렉틴, β-글루칸 및 한국산 겨우살이 렉틴으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 조성물.

[4] 점막면역 유도능이 있는 면역증강제를 첨가하는 것을 특징으로 하는 질 또는 외음부세정제 조성물의 제조방법

[5] [1] 내지 [3] 중 어느 하나의 조성물을 포함하는 질 또는 외음부세정제.

[6] 점막면역유도능이 있는 면역증강제를 포함하는 질내 적용제제.

[7] [6]에 있어서, 상기 질내 적용제제가 질정제, 로숀, 크림, 연고, 액체 형태로 구성된 군에서 선택되는 것인 질내 적용제제.

본 발명으로 인해 조성된 세정제는 여성 생식기를 자극시켜 점막면역을 유발하며 이로 인해 비특이적 면역을 형성하여, 혈청, 구강점막, 안구점막, 비강점막, 위장관점막, 호흡관점막, 비뇨기관점막, 생식기관점막 등 체내외에 존재하는 모든 점막기관에 점막면역을 확산시킨다. 따라서 병원체 초기 감염에 대한 면역력이 증가되어 호흡기 유래 감염성 질병, 식품 유래 감염성 질병, 항문 및 직장 유래 감염성 질병, 생식기 및 비뇨기 유래 감염성 질병에 대한 초기 면역력을 높여주는 기능을 수반한다. 특히 본 발명은 비특이적 면역을 활성화시켜 대부분의 미생물 및 소수의 바이러스 감염질환을 초기에 차단할 수 있어 의약외용품으로 뛰어난 가치가 있다. 또한 세계적으로 문제가 되고 있는 에이즈, SARS, 조류독감 등과 같은 감염성 질병 등에 대한 예방 또는 건강한 생식기를 유지하는 기능성 제품을 제조할 수 있다.

질세정제, 외음부세정제, 질정 등 여성용 위생용품 및 질내 적용제제에 첨가되는 점막면역 유도능이 있는 면역증강제는 본 발명의 효과를 훼손하지 않는 범위에서 본 발명이 속하는 기술 분야에 공지된 것이면 어느 것을 사용해도 좋다. 예를 들어 베타-글루칸(β-glucan), 콜레라 독소 B 사슬 (cholera toxin B-subunit; CT B-subunit), 대장균의 이열성 독소(E.coli heat-labile toxin; LT), 백일해 독소(pertusis toxin)를 비롯한 리포폴리사카라이드 (Lipopolysaccharide; LPS), 단일인화지질A(monophosphoryl lipid A; MPL), 비메칠화된 디뉴클레오티드를 포함하는 올리고데옥시뉴클레오티드 (oligodeoxynucleotides containing unmethylated dinucleotides; CgP ODN), 알루미늄 염, 가시오가피 추출물, 유럽산 겨우살이 렉틴, 유럽산 겨우살이 렉틴 B-chain, 한국산 겨우살이 추출물, 한국산 겨우살이 렉틴, 한국산 겨우살이 렉틴 B-chain 및 이들의 혼합물(칵테일)을 사용할 수 있으며, 겨우살이 추출물이나 렉틴 또는 이들과 다른 면역증강제와의 혼합물을 사용하는 것 이 바람직하다.

본 발명에서 제공하는 조성물은 본 발명이 제공하는 효과를 훼손하지 않는 한, 이 발명이 속하는 기술 분야에 공지되어 있거나 상업적으로 입수 가능한 모든 여성용 위생용품에 추가로 포함시켜 제조될 수 있다.

본 발명의 질 세정제는 다양한 제형 형태를 취할 수 있다. 일 양태로서, 용액형, 현탁형, 유제형 등의 액상 제형을 들 수 있으며, 멸균수에 용해보조제, 유화제, pH 조절을 위한 완충제 등을 첨가하여 제조할 수 있다. 상기한 바와 같은 조성물은 유효 성분에 추가하여 이를 제형화하기 위한 담체를 포함할 수 있다. 이러한 담체에는 결합제, 활탁제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 색소, 향료, 완충제, 보존제, 가용화제, 등장제, 기제, 부형제, 윤활제, 계면활성제 등을 사용할 수 있다. 또한 다당, 올리고당, 유지, 단백질, 비타민, 스테로이드, 호르몬, 저급알코올, 다가알코올, 혈관확장제, 살정자제, 항균제 또는 항바이러스제 등등을 포함할 수 있다. 이들은 제약 분야에서 통상적으로 사용되는 양으로 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 점막면역증강물질을 전체 조성물에 대하여 0.1중량% 내지 15중량%, 바람직하게는 3중량% 내지 10중량%를 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여하며, 환자의 질병 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양 으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 점막면역 유도능이 있는 면역증강물질을 첨가하여 질세정제, 외음부세정제, 질정 등의 여성 위생용품 및 질내 적용제제를 제조하는 방법을 제공하는 것이다. 본 발명의 여성 위생용품 및 질내 적용제제는 기존에 알려진 제품의 제조방법을 사용하며, 여기에 점막면역 유도 증강물질을 제제형태에 맞는 적절한 방법으로 첨가하여 제조한다.

이하에서는 본 발명을 실시예에 따라 구체적으로 설명하는 바, 하기의 실시예는 본 발명을 설명하기 위하여 제시하는 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

<실시예>

실시예 1 : 점막면역 자극 증진효과물질을 포함하는 세정제의 제조

정제수와 에탄올, 향료, 소디움 벤조에이트, 유청, 젖산을 함유하는 시판 세정제 조성물을 토대로 표 1과 같은 점막면역 자극 증진효과물질이 첨가된 질세정제를 제조하였다.

또한 단일의 점막면역 증진효과물질을 혼합한 조성 외에, 복수의 점막면역증진물질을 칵테일 조성으로 혼합한 조성물(칵테일)도 제조하였다. 세정제에 첨가된 점막면역증진물질 및 이들의 조성비는 표 2와 같다.

기존의 세정제 완성품 (Cepee®,레이디스 클렌져®)에 표 2에서 열거한 조성물을 직접 혼합하여 제조하거나 또는 정제수에 점막면역 자극 증진효과물질을 용해시킨 후 여타의 세정제 조성물과 혼합하여 제조하였다.

점막면역 유도 증강물질은 상업적으로 시판되는 제품을 구입하거나 한국특허출원 제10-1996-5732호, 제10-2004-31109호 또는 제10-1999-41288호에 기재된 방법에 따라 제조하여 사용하였다.

상기의 방법으로 제조된 세정제는 혼합되어 있는 단일 혹은 칵테일 점막면역증진효과물질로 인해 점막면역을 일으켰으며, 이로 인해 신체 전반에 면역성이 증가하였다.

점막면역증진효과물질 조성

단 일 혼 합
조 성 물	정제수에 대한 혼합비
β-글루칸	0.01% ~ 90%
CT B-subunit	0.01% ~ 90%
LT	0.01% ~ 90%
CpG ODN	0.01% ~ 90%
MPL	0.01% ~ 90%
LPS	0.01% ~ 90%
알루미늄 염	0.01% ~ 90%
가시오가피 추출물	0.01% ~ 90%
유럽산 겨우살이 렉틴	0.01% ~ 90%
유럽산 겨우살이 렉틴 B-chain	0.01% ~ 90%
유럽산 겨우살이 추출물	0.01% ~ 90%
한국산 겨우살이 렉틴	0.01% ~ 90%
한국산 겨우살이 렉틴 B-chain	0.01% ~ 90%
한국산 겨우살이 추출물	0.01% ~ 90%
에키네시아	0.01% ~ 90%
칵 테 일 혼 합
조 성 물	효과물질의 배합비
β-글루칸 + CpG ODN	100:1 ~ 1:100
CT B-subunit + CpG ODN	100:1 ~ 1:100
LT + CpG ODN	100:1 ~ 1:100
알루미늄염 + CpG ODN	100:1 ~ 1:100
가시오가피 추출물 + CpG ODN	100:1 ~ 1:100
유럽산 겨우살이 추출물 + CpG ODN	100:1 ~ 1:100
유럽산 겨우살이 렉틴 + CpG ODN	100:1 ~ 1:100
한국산 겨우살이 추출물 + CpG ODN	100:1 ~ 1:100
한국산 겨우살이 렉틴 + CpG ODN	100:1 ~ 1:100
에키네시아 + CpG ODN	100:1 ~ 1:100
β-글루칸 + MPL	100:1 ~ 1:100
CT B-subunit + MPL	100:1 ~ 1:100
LT + MPL	100:1 ~ 1:100
알루미늄 염 + MPL	100:1 ~ 1:100
가시오가피 추출물 + MPL	100:1 ~ 1:100
유럽산 겨우살이 추출물 + MPL	100:1 ~ 1:100
유럽산 겨우살이 렉틴 + MPL	100:1 ~ 1:100
한국산 겨우살이 추출물 + MPL	100:1 ~ 1:100
한국산 겨우살이 렉틴 + MPL	100:1 ~ 1:100
에키네시아 + MPL	100:1 ~ 1:100

β-글루칸 + LPS	100:1 ~ 1:100
CT B-subunit + LPS	100:1 ~ 1:100
LT + LPS	100:1 ~ 1:100
알루미늄 염 + LPS	100:1 ~ 1:100
가시오가피 추출물 + LPS	100:1 ~ 1:100
유럽산 겨우살이 추출물 + LPS	100:1 ~ 1:100
유럽산 겨우살이 렉틴 + LPS	100:1 ~ 1:100
한국산 겨우살이 추출물 + LPS	100:1 ~ 1:100
한국산 겨우살이 렉틴 + LPS	100:1 ~ 1:100
에키네시아 + LPS	100:1 ~ 1:100
β-글루칸 + 유럽산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
CT B-subunit + 유럽산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
LT + 유럽산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
알루미늄 염 + 유럽산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
가시오가피 추출물 + 유럽산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
한국산 겨우살이 렉틴 + 유럽산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
에키네시아 + 유럽산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
β-글루칸 + 한국산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
CT B-subunit + 한국산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
LT + 한국산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
알루미늄 염 + 한국산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
CpG ODN + 한국산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
MPL + 한국산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
LPS + 한국산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
알루미늄 염 + 한국산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
가시오가피 추출물 + 한국산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
에키네시아 + 한국산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
β-글루칸 + 에키네시아	100:1 ~ 1:100
CT B-subunit + 에키네시아	100:1 ~ 1:100
LT + 에키네시아	100:1 ~ 1:100
알루미늄 염 + 에키네시아	100:1 ~ 1:100
가시오가피 추출물 + 에키네시아	100:1 ~ 1:100
유럽산 겨우살이 추출물 + 에키네시아	100:1 ~ 1:100
한국산 겨우살이 추출물 + 에키네시아	100:1 ~ 1:100
CT B-subunit + β-글루칸	100:1 ~ 1:100
LT + β-글루칸	100:1 ~ 1:100
알루미늄 염 + β-글루칸	100:1 ~ 1:100
가시오가피 추출물 + β-글루칸	100:1 ~ 1:100
유럽산 겨우살이 추출물 + β-글루칸	100:1 ~ 1:100
한국산 겨우살이 추출물 + β-글루칸	100:1 ~ 1:100
β-글루칸 + CpG ODN + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + CpG ODN + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + CpG ODN + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
알루미늄 염 + CpG ODN + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50

한국산 겨우살이 렉틴 + CpG ODN + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
에키네시아 + CpG ODN + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
β-글루칸 + CpG ODN + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + CpG ODN + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + CpG ODN + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
알루미늄 염 + CpG ODN + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
에키네시아 + CpG ODN + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
β-글루칸 + CpG ODN + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + CpG ODN + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + CpG ODN + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
알루미늄 염 + CpG ODN + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
β-글루칸 + CpG ODN + 알루미늄 염	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + CpG ODN + 알루미늄 염	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + CpG ODN + 알루미늄 염	1:1:1 ~ 1:1:50
β-글루칸 + MPL + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + MPL + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + MPL + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
알루미늄 염 + MPL + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
한국산 겨우살이 렉틴 + MPL + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
에키네시아 + MPL + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
β-글루칸 + MPL + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + MPL + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + MPL + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
알루미늄 염 + MPL + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
에키네시아 + MPL + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
β-글루칸 + MPL + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + MPL + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + MPL + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
알루미늄 염 + MPL + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
β-글루칸 + MPL + 알루미늄 염	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + MPL + 알루미늄 염	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + MPL + 알루미늄 염	1:1:1 ~ 1:1:50
β-글루칸 + LPS + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + LPS + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + LPS + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
알루미늄 염 + LPS + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
한국산 겨우살이 렉틴 + LPS + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
에키네시아 + LPS + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
β-글루칸 + LPS + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + LPS + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + LPS + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
알루미늄 염 + LPS + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
에키네시아 + LPS + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
β-글루칸 + LPS + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + LPS + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + LPS + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
알루미늄 염 + LPS + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
β-글루칸 + LPS + 알루미늄 염	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + LPS + 알루미늄 염	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + LPS + 알루미늄 염	1:1:1 ~ 1:1:50
단순혼합 13, 칵테일 혼합 114, 총 127

실시예 2 : FACScan 을 이용하여 마우스 비장세포로부터 B-/T-세포의 분화능 조사

β-글루칸, CT B-subunit, CpG ODN, LPS, 알루미늄 염, 겨우살이 렉틴, 겨우살이 렉틴 B-chain을 각각 0.01 %를 포함하는 세정제를 마우스의 질에 각기 500㎕의 부피로 멸균된 피펫을 통해 세척하여 자극시켰다. 이와 같은 처리를 15일(1일, 1회)동안 하였으며, 대조구는 점막면역 증강물질 대신 인산완충용액(PBS)을 첨가하여 같은 처리를 하였다. 16일째 마우스를 희생시켜 비장으로부터 비장세포들을 분리하고 항체를 이용하여 B-/T-세포의 분화비율을 FACScan을 이용하여 관찰한 결과 점막면역 자극 증진효과물질을 첨가한 세정제로 처리한 시험군이 대조군보다 2배 이상의 값을 나타내었다(도 1).

실시예 3 : FACScan 을 이용하여 마우스 비장세포로부터 T-세포의 분화능조사

실시예2의 시험구 및 대조구의 마우스의 비장세포로부터 T-세포의 분화능을 조사하였다. CD3가 많이 관찰된 것으로부터 본 반응은 비특이적 면역반응으로 확인되었다(도 2). 만일 항원과 병행 투여한다면 CD3보다 CD4 또는 CD8이 많이 관찰될 것으로 추측된다. 결론적으로 면역증강물질을 첨가한 세정제를 질내 점막에 처리함으로써 비특이적인 면역 활성이 증강되었으며, 전반적으로 T-세포의 분화능이 증가함으로써 다양한 항원이나 병원균의 침입에 대처할 수 있는 면역 기능이 활성화되어 있다고 사료된다.

실시예 4 : 마우스의 점막기관 세척액에서의 항체 역가조사

실시예2의 시험군 및 대조군의 혈청, 비뇨기관 및 생식기관의 세척물을 취하였다. 이를 위해 혈청은 안하혈액채취법을 통해 획득하였고, 비뇨기 및 생식기 조직에 각기 500㎕의 PBS를 투여하여 20회 세척을 한 후 멸균된 E-tube에 옮겨 담았다. 이와 같은 조작을 10회 반복하여 각기 5㎖의 세척물을 취한 후, 6,000rpm의 원심분리를 실시하여 상등액만을 24시간 4℃에 보관하였다. 상기의 세척액을 protein G column 크로마토그래피를 실시하여 IgG를 분리하고, IgG가 분획된 IgA를 따로 취하였다.

상기의 방법으로 획득한 두 가지 시료를 각각 Time-resolved fluoroscence Immunoassay(TR-FIA)를 실시하였다. 전 과정은 Kensner등(Steriods, 59, 1994, 206)의 방법에 따라 실시하였으며 간단히 설명하면, 분리된 IgG 항체를 1000배 희석배율부터 2배씩 희석하여 128,000배까지 8개의 희석시료를 분석판(96 well plate)에 0.1ml로 37℃에서 2시간동안 피복시킨다. 이 후, 5~6회 반복 자동세척기로 세척하고 염소 유래 항 마우스 면역글로불린 이차항체에 Eu 입자가 연결된 Goat IgG Anti-Mouse IgG-Eu particle conjugate를 1:5000의 희석농도로 37℃에서 2시간동안 반응시킨다. 이 후, 다시 5~6회 반복 자동세척기로 세척하고 200㎕의 증가용액(Enhancement solution)을 넣고 5분 정도 추가 반응 시킨 후에 측정하였다. 사용된 기기는 DELFIA(Wallac by Model 1420)를 이용하였다.

또한 IgG가 분획된 IgA 항체에 대한 역가도 상기의 방법과 동일하게 시행하였으며 염소 유래 항 마우스 면역글로불린 이차항체에 Eu 입자가 연결된 Goat IgG Anti-Mouse IgA-Eu particle conjugate를 차별적으로 사용하였다.

면역증강제를 혼합한 세정제로 질을 자극시킨 마우스는 대조군에 비하여 혈청에서 최소 1:64,000 이상, 점막세척물에서 최소 1:16,000의 IgG 역가를 나타내는 것을 확인하였다. 또한 IgA는 혈청에서 측정되지 않았으며, 혈청을 제외한 점막세척물에서 최소 1:8,000의 역가를 나타내는 것으로 확인되었다(도3 및 도4).

실시예 5 : 마우스 혈액 내의 사이토카인 분비능 조사

실시예2의 시험구 및 대조구의 혈액에서 TNF-α, IL-2 및 INF-γ의 농도를 측정하였다. 면역증강제를 혼합한 세정제로 질을 자극시킨 마우스는 대조군에 비하여 사이토칸의 농도가 10 배 내지 25배 증가하였다. 이 결과로부터 본 발명의 세정제 조성물의 처치로 Th1 타입의 면역이 증강되었다는 것을 확인하였다(도5 및 도6).

도 1은 본 발명의 질세정제 조성물로 질을 자극시킨 마우스의 비장세포에서의 B세포/T세포의 비율을 나타낸 것이다.

도 2는 본 발명의 질세정제 조성물로 질을 자극시킨 마우스의 비장세포의 T-세포 분화능을 나타낸 것이다.

도 3은 본 발명의 질세정제 조성물로 질을 자극시킨 마우스의 혈청에서의 IgG 및 IgA의 농도를 나타낸 것이다.

도 4는 본 발명의 질세정제 조성물로 질을 자극시킨 마우스의 비뇨기관 및 생식기관 세척물에서의 IgG 및 IgA의 농도를 나타낸 것이다.

도 5는 본 발명의 질세정제 조성물로 질을 자극시킨 마우스의 혈청에서의 TNF-a 및 IL-2의 농도를 나타낸 것이다.

도 6은 본 발명의 질세정제 조성물로 질을 자극시킨 마우스의 혈청에서의 INF-γ의 농도를 나타낸 것이다.

Claims

베타-글루칸(β-glucan), 콜레라 독소 B 사슬 (cholera toxin B-subunit; CT B-subunit), 리포폴리사카라이드 (Lipopolysaccharide) 및 비메칠화된 디뉴클레오티드를 포함하는 올리고데옥시뉴클레오티드 (oligodeoxynucleotides containing unmethylated dinucleotides)로 구성된 군으로부터 선택되는 점막면역 유도능이 있는 면역증강제를 포함하며 비특이적 면역을 활성화시키는 것을 특징으로 하는 질 또는 외음부세정제 조성물.
삭제
삭제
베타-글루칸, 콜레라 독소 B 사슬, 리포폴리사카라이드 및 비메칠화된 디뉴클레오티드를 포함하는 올리고데옥시뉴클레오티드로 구성된 군으로부터 선택되는 점막면역 유도능이 있는 면역증강제를 첨가하는 것을 특징으로 하는 비특이적 면역을 활성화시키는 질 또는 외음부세정제 조성물의 제조방법.
제1항의 조성물을 포함하는 질 또는 외음부세정제.
베타-글루칸, 콜레라 독소 B 사슬, 리포폴리사카라이드 및 비메칠화된 디뉴클레오티드를 포함하는 올리고데옥시뉴클레오티드으로 구성된 군으로부터 선택되는 점막면역 유도능이 있는 면역증강제를 포함하며 비특이적 면역을 활성화시키는 것을 특징으로 하는 질내 적용제제.
제6항에 있어서, 상기 질내 적용제제가 질정제, 로숀, 크림, 연고, 액체 형태로 구성된 군에서 선택되는 것인 질내 적용제제.