KR20080070482A

KR20080070482A - 점막면역 유도능이 있는 면역증강제를 포함하는 윤활제조성물 및 이의 제조방법

Info

Publication number: KR20080070482A
Application number: KR1020070053595A
Authority: KR
Inventors: 양승훈; 김세중; 박성민; 정환준; 김웅
Original assignee: (주)디딤바이오텍; 양승훈; 김세중
Priority date: 2007-05-31
Filing date: 2007-05-31
Publication date: 2008-07-30
Also published as: WO2008147049A1

Abstract

본 발명은 점막면역 유도능이 있는 면역증강제를 포함하는 윤활제 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 또한 본 발명은 점막면역 유도능이 있는 면역증강제를 포함하는 점막용 윤활제 조성물을 포함하는 피임기구 또는 의료기기를 제공한다. 본 발명의 윤활제 조성물은 각종 감염에 노출되기 쉬운 포유동물의 점막부위에서 감염 및 질병에 대한 면역력을 높여 줌으로써, 윤활제 고유의 용도 외에 감염 및 질병 예방의 효과를 추가로 제공한다.

윤활제, lubrication, 점막면역, 베타-글루칸(β-glucan), cholera toxin(CT), heat-labile enterotoxin(LT), 비메칠화 된 dinucleotide가 함유된 oligodeoxynucleotide(CpG ODN), monophosphoryl lipid A(MPL), lipopolysaccharide(LPS), 알루미늄 염, 겨우살이 렉틴, 면역증강제, 콘돔, 성병, 감염성질환,

Description

점막면역 유도능이 있는 면역증강제를 포함하는 윤활제 조성물 및 이의 제조방법 {A lubricating composition comprising agents which induce the mucosal immunity and a preparation method thereof}

도 1은 윤활제 조성에 따른 B-/T-세포의 비율을 나타낸 그림이다.

도 2는 윤활제 조성에 따른 T-세포 분화능을 나타낸 그림이다.

도 3은 윤활제 조성물로 질을 자극시킨 마우스의 혈청에서 IgG와 IgA의 역가를 조사한 그림이다.

도 4는 윤활제 조성물로 질을 자극시킨 마우스의 구강세척물에서 IgG와 IgA의 역가를 조사한 그림이다.

도 5는 윤활제 조성물로 질을 자극시킨 마우스의 비강세척물에서 IgG와 IgA의 역가를 조사한 그림이다.

도 6은 윤활제 조성물로 질을 자극시킨 마우스의 호흡관세척물에서 IgG와 IgA의 역가를 조사한 그림이다.

도 7은 윤활제 조성물로 질을 자극시킨 마우스의 비뇨기관 및 생식기관세척물에서 IgG와 IgA의 역가를 조사한 그림이다.

도 8은 윤활제 조성물로 질을 자극시켜 면역력이 증강된 마우스의 질에 임질 원인균인 Neisseria gonorrheae를 2X10⁴의 세포수로 마우스의 질에 접종시킨 후 생존율을 나타내는 그림이다.

도 9는 윤활제 조성물로 질을 자극시켜 면역력이 증강된 마우스의 질에 매독 원인균인 Treponema pallidum을 2X10⁴의 세포수로 마우스의 질에 접종시킨 후 생존율을 나타내는 그림이다.

도 10는 윤활제 조성물로 질을 자극시켜 면역력이 증강된 마우스의 질에 질염의 원인균인 Candida albicans를 2X10⁴의 세포수로 마우스의 질에 접종시킨 후 생존율을 나타내는 그림이다.

본 발명은 점막면역 유도능이 있는 면역증강제를 포함하는 윤활제 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 또한 본 발명은 점막면역 유도능이 있는 면역증강제를 포함하는 점막용 윤활제 조성물을 포함하는 피임기구 및 의료기기를 제공한다.

윤활제는 두 표면이 상대적으로 이동할 때 발생하는 두 표면 사이의 마찰과 마모를 줄여 주는 목적으로 사용된다. 생체용 윤활제는 의료용/수술용으로 또는 개인용으로도 널리 사용되고 있다. 의료용/수술용 윤활제는 질, 항문, 소화기관, 요도, 호흡기관, 외부생식기관 등 신체의 내부를 검사하거나 질병의 치료, 예방의 목 적으로 기구 등을 삽입할 때, 환자의 불편함을 덜어 주기 위하여 사용된다. 예를 들어 항문을 통한 체온 측정, 의료나 진단 과정 시 비좁은 체강 내나 괄약근 내로 측정기구, 수술기구, 체액배출기구, 시료채취기구나 손가락 등을 삽입할 때, 비강검사, 내시경, 직장검사 등에 다양하게 사용된다. 또한 출산의 경험이 있거나 노년 여성의 스트레스 비뇨기 요실금으로 인한 무의식적인 소변배설을 방지하기 위한 질 내 기구 설치 시 원활한 도입을 위하여 윤활제를 사용하기도 한다. 또한, 가축이나 사람의 출산 중 태아의 분만을 원활하게 하기 위한 용도(미국특허 US3971848호 참조)로도 사용된다. 개인용 윤활제(personal lubricant)는 고령자 또는 부인과적 수술 후에 여성의 질 내 분비액 부족 현상을 보완하기 위해서 또는 콘돔 및 생식기계에 도포하는 등의 용도로 사용된다.

상기 윤활제는 주로 생체의 점막 부위에 도포된다. 점막은 코, 기도, 편도선과 같은 호흡기관, 소장, 직장과 같은 소화기관, 외부생식기관을 덮고 있어 식품이나 공기 중에 있는 외부 물질이 체내로 들어올 때 가장 먼저 접촉하는 부위이다. 따라서 인간의 기본적인 성생활 중에 생식기관이나 항문의 점막을 통해 병균의 감염이 일어날 수 있다. 또한 장기간 자궁 내에 피임기구를 설치하는 경우 자궁 점막에 만성염증이 유발된다고 보고되었다 (Wagenlehner 등, Clin Microbiol Infect. 9(8), 881-5, 2003). 또한, 의료기구를 체내에 도입할 때 또는 포유동물의 출산 시 해당 신체 부위의 점막(mucous membrane)이 손상되는 일이 종종 생기게 되는데, 이러한 상처는 병원균의 감염의 기회를 높이고, 염증을 유발한다. 병원균의 감염 및 염증은 생체의 면역력이 저하될 경우 발생할 확률이 높아진다.

따라서 성생활 또는 의료기구의 체내 도입 등으로 발생하는 병균의 감염 등을 예방하기 위해서는 생체내의 면역조절기구를 활성화함으로써 체외에서 침입하는 병원균과 미생물, 또는 암세포로부터의 저항력을 높일 필요가 있다. 면역조절기구는 일반적으로 전신면역 또는 점막면역에 의해 활성화된다.

점막면역 자극 증강효과 물질(mucosal immunoadjuvant)로는 베타-글루칸(β-glucan), CT B-subunit(콜레라 독소; cholera toxin B-subunit)과 LT(대장균의 이열성 독소; E.coli heat-labile toxin) 또는 백일해 독소(pertusis toxin)를 비롯한 LPS(리포폴리사카라이드; Lipopolysaccharide), MPL(단일 인화 지질 A; monophosphoryl lipid A)과, CgP ODN(oligodeoxynucleotides containing unmethylated dinucleotides; 비메칠화 된 dinucleotide를 포함한 oligodeoxynucleotide), 알루미늄 염, 겨우살이 추출, 백반 등이 있다. 이러한 애쥬번트로 점막을 지속적인 자극을 할 경우 면역기능이 증가하게 되어 AIDS 등의 감염에 대한 방어가 가능하다 (Mario C. 등 Immunology Letters 66 (1999) 21-25; Hirosh K, 등 Advanced Drug Delivery Reviews 18 (1995) 23-51).

미국 특허 US6114398호에서는 이산화염소(chlorine dioxide)를 포함하는 윤활제를 개시하고 있는데, 이는 캔디다 종의 곰팡이를 죽여 가려움증을 예방한다. 미국특허 제6,545,007호에는 후천성면역결핍증(HIV) 바이러스의 감염을 막기 위하여 항바이러스제가 첨가된 윤활제에 대하여 기재하고 있다. 그러나 생체의 면역조절기구를 활성화시키는 물질을 윤활제에 첨가하여 병원균의 감염을 저지하는 방법이 기재된 선행문헌은 찾아볼 수 없다.

이곳에 기재된 정보들은 단지 본 발명의 기술적 배경에 대한 이해를 돕고자 하는 것으로서, 본 발명에 대한 선행기술로써 작용할 수 없음은 당연하다.

점막에 적용되는 윤활제에 점막면역 자극 증진효과가 있는 물질을 첨가하여 윤활제가 적용되는 포유동물에서 점막면역을 유도함으로써, 윤활제 본래의 역할과 더불어 성병, 감염 및 각종 질병에 대한 초기 면역력을 높여주는 효과를 갖는 기능성 윤활제를 제공하는 것이 본 발명의 기술적 과제이자 목적이다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

상기 본 발명의 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 점막면역 유도능이 있는 면역증강제를 포함하는 윤활제 조성물 및 이의 제조방법을 제공한다. 또한 본 발명은 점막면역 유도능이 있는 면역증강제를 포함하는 점막용 윤활제 조성물을 포함하는 피임기구 및 생체 내로 투입되는 진단용 의료기기를 제공한다.

좀 더 자세하게는, 본 발명은 점막면역 유도능을 가지는 면역증강제를 윤활제에 적정량 혼합하여 콘돔, 페사리 등의 피임기구, 생체 내로 투입되는 진단용 기기, 의료용 기기 또는 생식기계에 도포하는 윤활제를 제조하고, 이 윤활제가 적용되는 개체에서 윤활제 고유의 역할 뿐 아니라 점막면역을 유도하여 성병과 감염 및 각종 질병에 대한 초기 면역력을 높여 이를 근본적으로 예방할 수 있는 효과를 발 휘하는 기능성 윤활제의 개발에 관한 것이다.

본 발명은 점막면역 자극 증강효과를 갖는 것으로 알려진 물질을 첨가한 윤활제를 제조하여 마우스의 질 내에 적용할 경우, 상기 점막면역자극 증강물질이 없는 대조군 윤활제를 적용하였을 때와 비교하여 비장세포에서의 T-세포분화능 및 B-세포 분화능/T-세포의 분화능 값이 증가하며, 기관지 및 폐와 같은 호흡기관과 소장, 직장과 같은 소화기관, 그리고 성기와 같은 생식 비뇨기관들의 표면 상피세포들이 활성화되어 다량의 이뮤노글로불린이 생산됨로써 면역기능이 증진된다는 본 발명자들의 실험결과를 바탕으로 한다.

본 발명의 발명자들은 기존에 알려진 윤활제에 점막면역 자극 증강물질을 농도별로 혼합하여 암컷 BALB/C 마우스의 질 내에 각각 도포하였다. FACScan을 이용하여 상기 마우스의 비장세포로부터 B-/T-세포의 분화능을 조사한 뒤, FACScan을 이용하여 비장세포로부터 T-세포 분화능을 조사함으로써 코, 기도, 기관지 및 폐와 같은 호흡기관과 소장과 같은 소화기관, 그리고 성기와 같은 생식 비뇨기관들에 대한 표면 상피세포들의 활성화 정도를 측정하였다. 또한, 혈청, 구강세척물, 비강세척물, 호흡관세척물, 비뇨기관세척물, 생식기관세척물에서 IgA 및 IgG의 역가를 조사하였다. 또한 점막면역 자극 증진물질 또는 이들의 혼합물을 질 내에 처치한 마우스에 임질, 매독및 질염 원인균을 질 내 접종하여 마우스의 생존률을 관찰하였다.

실험에 사용된 점막면역 증진물질은 베타-글루칸(β-glucan), 콜레라 독소 B 사슬 (cholera toxin B-subunit; CT B-subunit)과 대장균의 이열성 독소(E.coli heat-labile toxin; LT) 또는 백일해 독소(pertusis toxin)를 비롯한 리포폴리사카라이드 (Lipopolysaccharide; LPS), 단일인화지질A(monophosphoryl lipid A; MPL)과, 비메칠화된 디뉴클레오티드를 포함하는 올리고데옥시뉴클레오티드 (oligodeoxynucleotides containing unmethylated dinucleotides; CgP ODN), 알루미늄 염, 가시오가피 추출물, 유럽산 겨우살이 렉틴, 유럽산 겨우살이 렉틴 B-chain, 한국산 겨우살이 추출물, 한국산 겨우살이 렉틴, 한국산 겨우살이 렉틴 B-chain 및 이들의 혼합물(칵테일)이다. 상기 점막면역증진물질 또는 이들의 혼합물은 상업적으로 구입이 가능한 윤활제 (예를 들어 Unidus gel®, Astroglide®)에 첨가하여 사용하였다.

점막면역 자극 증강효과 물질 또는 이들의 혼합물을 첨가한 윤활제를 처리한 실험군이 인산완충액을 첨가한 윤활제로 처리한 대조군에 비하여 2배 이상의 B-세포 및 T-세포 활성을 나타내었으며, 특히 겨우살이 렉틴 또는 겨우살이 렉틴 및 다른 점막면역증강물질과의 칵테일에서 높은 활성을 나타내었다.

상기 점막면역 자극 증강효과 물질 또는 이들의 혼합물을 첨가한 윤활제를 처리한 실험군은 인산완충액을 첨가한 윤활제로 처리한 대조군에 비하여 혈청에서 최소 1:64,000 이상, 점막세척물에서 최소 1:16,000의 IgG 역가를 나타내었으며, IgA는 점막세척물에서 최소 1:8,000의 역가를 나타내어, 체 내 전반적인 면역력이 증가하였음을 알 수 있었다.

또한 임질, 매독, 질염의 원인균을 질내로 접종하였을 때 대조군의 마우스는 10일 후 모두 사망하였으나, 점막면역 유도능이 있는 면역증강물질 또는 이들의 혼 합물을 첨가한 윤활제를 처리한 실험군은 생존률이 높았으며, 특히 겨우살이 렉틴과 다른 점막면역 유도능이 있는 면역증강물질의 혼합물의 경우 생존률이 더욱 증가하였다.

상기와 같은 실험결과를 토대로 본 발명은 점막면역 유도능이 있는 면역증강제를 포함하는 윤활제 조성물을 제공한다.

본 발명으로 인해 조성된 윤활제는 여성 및 남성의 생식기를 비롯한 기관의 점막을 자극시켜 점막면역을 유발하며, 이로 인해 비특이적 면역을 형성하여 체내외에 존재하는 모든 다른 점막기관에 점막면역을 확산시킨다. 따라서 병원체 초기 감염에 대한 면역력이 증가되어 호흡기 유래 감염성 질병, 식품 유래 감염성 질병, 항문 및 직장 유래 감염성 질병, 생식기 및 비뇨기 유래 감염성 질병에 대한 초기 면역력을 높여주는 기능을 수반한다.

본 발명은 통상적으로 사용되고 있는 생식기 윤활제에 상기 열거한 점막면역 자극 증진효과물질을 첨가하여 비 특이적 면역, 조직적인 면역을 유도하는 윤활제를 개발하여 전 세계적으로 문제가 되고 있는 에이즈, SARS, 조류독감 등과 같은 감염성 질병 등에 대한 예방 또는 건강한 생식기를 유지하는 기능성 제품을 제공한다.

본 발명은 기존에 시판되고 있는 윤활제 조성물에 각종 점막면역 자극 증진효과물질 또는 이들의 혼합물을 첨가하여 혈청, 구강점막, 안구점막, 비강점막, 위장관점막, 호흡관점막, 비뇨기관점막, 생식기관점막에 발생하는 점막면역을 유도하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 비특이적 면역을 활성화시켜 대부분의 미생물 및 소수의 바이러스 감염질환을 초기에 차단할 수 있어 의약품이나 의약외용품으로 뛰어난 가치가 있다.

상기 윤활제 조성물에 첨가되는 점막면역 유도능이 있는 면역증강제는 본 발명의 효과를 훼손하지 않는 범위에서 본 발명이 속하는 기술 분야에 공지된 것이면 어느 것을 사용해도 좋다. 예를 들어 베타-글루칸(β-glucan), 콜레라 독소 B 사슬 (cholera toxin B-subunit; CT B-subunit)과 대장균의 이열성 독소(E.coli heat-labile toxin; LT) 또는 백일해 독소(pertusis toxin)를 비롯한 리포폴리사카라이드 (Lipopolysaccharide; LPS), 단일인화지질A(monophosphoryl lipid A; MPL)과, 비메칠화된 디뉴클레오티드를 포함하는 올리고데옥시뉴클레오티드 (oligodeoxynucleotides containing unmethylated dinucleotides; CgP ODN), 알루미늄 염, 가시오가피 추출물, 유럽산 겨우살이 렉틴, 유럽산 겨우살이 렉틴 B-chain, 한국산 겨우살이 추출물, 한국산 겨우살이 렉틴, 한국산 겨우살이 렉틴 B-chain 및 이들의 혼합물(칵테일)을 사용할 수 있으며, 겨우살이 추출물이나 렉틴 또는 이들과 다른 면역증강제와의 혼합물을 사용하는 하는 것이 바람직하다.

본 발명에서 제공하는 윤활제 조성물은 의료용/수술용 윤활제 조성물일 수 있으며, 또는 개인용 윤활제 조성물일 수 있다. 예를 들어 상기 윤활제 조성물은 직장체온계, 자궁 내 장치, 뇨실금장치, 내시경, 피임기구(페사리, 탐폰, 콘돔, 루프, 링, 질내 스폰지, diaphram, cervical cap 등), 질 내 장치, 체 내 삽입 진단장치 등 직장, 질, 자궁, 뇨도, 항문, 소화관 등 점막이 덮고 있는 부분에 적용되는 기구에 도포되어 사용될 수 있으며, 개인용 윤활제의 제조를 위하여 사용될 수 있다. 또한 포유동물의 출산 시 산도의 손상을 방지하고 출산을 부드럽게 하는데 사용될 수 있다.

본 발명에서 제공하는 윤활제는 본 발명이 제공하는 효과를 훼손하지 않는 한, 이 발명이 속하는 기술 분야에 공지되어 있거나 상업적으로 입수 가능한 모든 윤활제에 점막면역증강제를 추가로 포함시켜 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 윤활제 조성물은 점막면역증강제를 전체 조성물에 대하여 0% 이상 내지 30%, 바람직하게는 2-10% 포함한다. 본 발명의 윤활제의 투여량 및 투여 방법은 통상의 윤활제와 동일하다.

본 발명에 따른 점막면역증강제가 포함된 윤활제는 점막에 적용할 수 있는 통상적인 모든 형태, 즉 수성용액, 수성-알코올성 용액, 또는 오일성 용액, 로션 또는 세럼 형태의 분산액, 무수성 또는 친유성 젤, 지방층을 수층에 또는 수층을 지방층에 현탁시켜 얻은 액상 또는 반고형의 분산액, 크림 또는 젤 타입의 분산액 또는 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 거품 형태 또는 이온성 및/또는 비이온성 소포체 현탁액의 형태 또는 분말형태일 수 있다. 상기 윤활제는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 사용되는 표준적인 방법으로 제조된다. 본 발명의 조성물에 포함되는 성분들의 양 또한 제약분야에서 통상적으로 사용되는 양을 사용한다.

본 발명의 윤활제가 분산액 형태인 경우, 지방층(fatty phase)의 범위는 조성물 전체 중량에 대하여 5-80 중량% 일 수 있다. 분산액 형태의 조성물에 사용되는 오일, 분산화제는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 것들을 사용할 수 있다. 본 발명의 조성물의 분산화제는 조성물 전체 중량에 대하여 0.3 중량% 내지 30 중량% 일 수 있다.

본 발명의 조성물이 오일성 젤 또는 오일성 용액일 경우, 지방층은 조성물 전체 중량에 대하여 90% 이상으로 존재할 수 있다.

본 발명의 윤활 분말은 윤활유체를 캡슐로 싼 형태일 수 있다.

본 발명의 윤활제의 조성은 특별히 한정되는 것은 아니나, 물, 증점제(예를 들어, 셀룰로즈, 셀룰로즈 유도체, 아카시아, 아가, 알긴산, 카라기난, 산탄검, 콜라겐, 카르복시폴리메틸렌, 글리세릴 모노스테아린산, 폴리비닐피롤리돈, 폴리아크릴아미드) 및 윤활성분(예를 들어, 글리세린, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 폴리이소부텐, 폴리옥시에틸렌, 베헨산(behenic acid), 베헤닐알콜(behenyl alcohol), 소르비톨, 폴리디메틸실록산)을 포함할 수 있다. 그 외 본 발명의 목적을 달성할 수 있는 다양한 증점제 및 윤활성분을 선택하여 사용할 수 있다.

본 발명의 조성물은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제, 예를 들어 친수성 또는 친유성 겔화제, 보존료, 항산화제, 용매, 향료, 충진제, 색소, 적당한 pH를 유지할 수 있도록 하는 완충용액, 계면활성제, 다당, 올리고당, 유지, 단백질, 비타민, 스테로이드, 호르몬, 저급알코올, 다가알코올, 혈관확장제, 살정자제, 항균제 또는 항바이러스제 등등을 포함할 수 있다. 이러한 보조제의 양은 제약 또는 피부학 분야에서 통상적으로 사용되는 양으로 사용할 수 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 점막면역 유도능이 있는 면역증강물질을 첨가하여 윤활제를 제조하는 방법을 제공하는 것이다. 본 발명의 윤활제는 기존에 알려진 윤활제 조성물 및 제조방법을 사용하며, 여기에 점막면역 유도 증강물질을 제제형태에 맞는 적절한 방법으로 첨가하여 제조한다.

본 발명의 또 다른 측면은 본 발명의 윤활제 조성물이 코팅된 제품을 제공하는 것이다. 예를 들어, 본 발명의 점막면역 증강제가 포함된 윤활제는 제조공정 중에 콘돔에 도포할 수 있다. 바람직한 윤활제는 글리세린, 프로필렌글리콜과 같은 하나 이상의 윤활 성분과 점막면역 증강제를 포함한다. 물이 사용된 경우는, 셀룰로즈 유도체, 천연고무화합물, 친수성 고분자와 같은 증점제나 현탁제를 추가하여 젤 형태로 만들 수 있다. 또는 크림, 분산제, 연고형태로 제조할 수 있다. 콘돔에는 전통적인 남성용 콘돔 뿐 아니라, 질 내에 삽입되는 여성용 콘돔도 포함된다. 또한 본 발명은 본 발명의 윤활제 조성물을포함하는 피임기구 및 의료기기를 제공한다. 여기에는 생리 탐폰, 요실금 기구, 약물, 붕대, 피임용 위생용품 또는 기타 유사한 부재가 포함될 수 있다.

이하에서는 본 발명을 실시예에 따라 구체적으로 설명하는 바, 하기의 실시예는 본 발명을 설명하기 위하여 제시하는 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

실시예

<실시예 1> 윤활제의 제조

현재 시판되는 윤활제는 윤활물질인 글리세린 등과 수용성 알코올의 일종인 프로필렌글리콜 등의 윤활제 및 보습제를 기반으로 형성된 조성이다. 이러한 윤활제에 점막면역 자극 증진효과물질을 다양한 비율로 첨가하여 실험에 사용하였다. 사용한 점막면역 자극 증진효과물질은 각각 단독 또는 이들의 혼합물(칵테일)로 첨가되었다. 이에 대한 자세한 조성물 및 조성비는 표 1과 같다. 실험에 사용된 윤활제는 기존의 시판되는 윤활제 완성품 (Unidus gel®, Astroglide®)에 표 1에 열거된 조성물을 직접 혼합 제조하여 실험에 사용하였다. 또는 윤활물질(프로필렌글리콜)을 용해시킨 수용성 에탄올에 점막면역 자극 증진효과물질을 용해시킨 후 글리세린과 혼합하여 제조하였다.

점막면역 유도 증강물질은 상업적으로 시판되는 제품을 구입하거나 한국산 겨우살이 추출물의 경우는 한국특허출원번호 제10-1996-5732호, 제10-2004-31109호 또는 10-1999-41288호에 기재된 방법에 따라 제조하여 사용하였다.

점막면역 자극 증진효과물질 조성

단 일 혼 합
조 성 물	수용성 알콜에 대한 혼합비
β-글루칸	0.01% ~ 90%
CT B-subunit	0.01% ~ 90%
LT	0.01% ~ 90%
CpG ODN	0.01% ~ 90%
MPL	0.01% ~ 90%
LPS	0.01% ~ 90%
알루미늄 염	0.01% ~ 90%
가시오가피 추출물	0.01% ~ 90%
유럽산 겨우살이 렉틴	0.01% ~ 90%
유럽산 겨우살이 렉틴 B-chain	0.01% ~ 90%
유럽산 겨우살이 추출물	0.01% ~ 90%
한국산 겨우살이 렉틴	0.01% ~ 90%
한국산 겨우살이 렉틴 B-chain	0.01% ~ 90%
한국산 겨우살이 추출물	0.01% ~ 90%
에키네시아	0.01% ~ 90%
칵 테 일 혼 합
조 성 물	효과물질의 배합비
β-글루칸 + CpG ODN	100:1 ~ 1:100
CT B-subunit + CpG ODN	100:1 ~ 1:100
LT + CpG ODN	100:1 ~ 1:100
알루미늄염 + CpG ODN	100:1 ~ 1:100
가시오가피 추출물 + CpG ODN	100:1 ~ 1:100
유럽산 겨우살이 추출물 + CpG ODN	100:1 ~ 1:100
유럽산 겨우살이 렉틴 + CpG ODN	100:1 ~ 1:100
한국산 겨우살이 추출물 + CpG ODN	100:1 ~ 1:100
한국산 겨우살이 렉틴 + CpG ODN	100:1 ~ 1:100
에키네시아 + CpG ODN	100:1 ~ 1:100
β-글루칸 + MPL	100:1 ~ 1:100
CT B-subunit + MPL	100:1 ~ 1:100
LT + MPL	100:1 ~ 1:100
알루미늄 염 + MPL	100:1 ~ 1:100
가시오가피 추출물 + MPL	100:1 ~ 1:100
유럽산 겨우살이 추출물 + MPL	100:1 ~ 1:100
유럽산 겨우살이 렉틴 + MPL	100:1 ~ 1:100
한국산 겨우살이 추출물 + MPL	100:1 ~ 1:100
한국산 겨우살이 렉틴 + MPL	100:1 ~ 1:100
에키네시아 + MPL	100:1 ~ 1:100

β-글루칸 + LPS	100:1 ~ 1:100
CT B-subunit + LPS	100:1 ~ 1:100
LT + LPS	100:1 ~ 1:100
알루미늄 염 + LPS	100:1 ~ 1:100
가시오가피 추출물 + LPS	100:1 ~ 1:100
유럽산 겨우살이 추출물 + LPS	100:1 ~ 1:100
유럽산 겨우살이 렉틴 + LPS	100:1 ~ 1:100
한국산 겨우살이 추출물 + LPS	100:1 ~ 1:100
한국산 겨우살이 렉틴 + LPS	100:1 ~ 1:100
에키네시아 + LPS	100:1 ~ 1:100
β-글루칸 + 유럽산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
CT B-subunit + 유럽산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
LT + 유럽산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
알루미늄 염 + 유럽산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
가시오가피 추출물 + 유럽산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
한국산 겨우살이 렉틴 + 유럽산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
에키네시아 + 유럽산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
β-글루칸 + 한국산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
CT B-subunit + 한국산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
LT + 한국산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
알루미늄 염 + 한국산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
CpG ODN + 한국산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
MPL + 한국산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
LPS + 한국산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
알루미늄 염 + 한국산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
가시오가피 추출물 + 한국산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
에키네시아 + 한국산 겨우살이 렉틴	100:1 ~ 1:100
β-글루칸 + 에키네시아	100:1 ~ 1:100
CT B-subunit + 에키네시아	100:1 ~ 1:100
LT + 에키네시아	100:1 ~ 1:100
알루미늄 염 + 에키네시아	100:1 ~ 1:100
가시오가피 추출물 + 에키네시아	100:1 ~ 1:100
유럽산 겨우살이 추출물 + 에키네시아	100:1 ~ 1:100
한국산 겨우살이 추출물 + 에키네시아	100:1 ~ 1:100
CT B-subunit + β-글루칸	100:1 ~ 1:100
LT + β-글루칸	100:1 ~ 1:100
알루미늄 염 + β-글루칸	100:1 ~ 1:100
가시오가피 추출물 + β-글루칸	100:1 ~ 1:100
유럽산 겨우살이 추출물 + β-글루칸	100:1 ~ 1:100
한국산 겨우살이 추출물 + β-글루칸	100:1 ~ 1:100
β-글루칸 + CpG ODN + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + CpG ODN + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + CpG ODN + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
알루미늄 염 + CpG ODN + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50

한국산 겨우살이 렉틴 + CpG ODN + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
에키네시아 + CpG ODN + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
β-글루칸 + CpG ODN + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + CpG ODN + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + CpG ODN + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
알루미늄 염 + CpG ODN + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
에키네시아 + CpG ODN + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
β-글루칸 + CpG ODN + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + CpG ODN + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + CpG ODN + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
알루미늄 염 + CpG ODN + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
β-글루칸 + CpG ODN + 알루미늄 염	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + CpG ODN + 알루미늄 염	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + CpG ODN + 알루미늄 염	1:1:1 ~ 1:1:50
β-글루칸 + MPL + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + MPL + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + MPL + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
알루미늄 염 + MPL + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
한국산 겨우살이 렉틴 + MPL + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
에키네시아 + MPL + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
β-글루칸 + MPL + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + MPL + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + MPL + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
알루미늄 염 + MPL + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
에키네시아 + MPL + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
β-글루칸 + MPL + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + MPL + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + MPL + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
알루미늄 염 + MPL + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
β-글루칸 + MPL + 알루미늄 염	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + MPL + 알루미늄 염	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + MPL + 알루미늄 염	1:1:1 ~ 1:1:50
β-글루칸 + LPS + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + LPS + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + LPS + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
알루미늄 염 + LPS + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
한국산 겨우살이 렉틴 + LPS + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
에키네시아 + LPS + 유럽산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
β-글루칸 + LPS + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + LPS + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50

LT + LPS + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
알루미늄 염 + LPS + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
에키네시아 + LPS + 한국산 겨우살이 렉틴	1:1:1 ~ 1:1:50
β-글루칸 + LPS + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + LPS + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + LPS + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
알루미늄 염 + LPS + 에키네시아	1:1:1 ~ 1:1:50
β-글루칸 + LPS + 알루미늄 염	1:1:1 ~ 1:1:50
CT B-subunit + LPS + 알루미늄 염	1:1:1 ~ 1:1:50
LT + LPS + 알루미늄 염	1:1:1 ~ 1:1:50
단순혼합 13, 칵테일 혼합 114, 총 127

<실시예 2> FACScan을 이용한 마우스 비장세포에서의 B-/T-세포의 분화능 조사

상기의 조성으로 혼합된 점막면역증강제가 첨가된 윤활제 중에서 특히 높은 활성을 지닌 조성을 분리해냈다. 고활성물질 및 혼합물의 조성은 표2와 같다.

점막면역 자극 증진효과물질 조성

순 번	조 성 물
1	CT B-subunit
2	유럽산 겨우살이 렉틴
3	한국산 겨우살이 렉틴
4	유럽산 겨우살이 렉틴 + CpG ODN (1:1)
5	한국산 겨우살이 렉틴 + CpG ODN (1:1)
6	LPS + 한국산 겨우살이 렉틴 (1:1)
7	CT B-subunit + 한국산 겨우살이 렉틴 (1:1)
8	β-글루칸 + 한국산 겨우살이 렉틴 (1:1)

상기의 조성물을 마우스의 질에 각기 0.1㎍/head의 농도로 멸균된 면봉을 통해 자극시켰다. 실험의 대조구는 점막면역 증강물질 대신 인산완충용액(PBS)을 첨가하였다. 이와 같은 실험을 15일(1일, 1회)동안 처리하여 비 특이적인 면역 실험을 실시하였다. 16일째 마우스를 희생(sacrify)시켜 비장으로부터 비장세포들을 분리한 후, 항체를 이용하여 B-/T-세포의 분포비율을 FACScan을 이용하여 관찰한 결과 B-세포와 T-세포 모두 점막면역 자극 증진효과물질을 첨가한 윤활제로 실험한 실험군이 대조군보다 2배 이상의 세포활성을 나타내었다(도1).

<실시예 3> FACScan을 이용한 마우스 비장세포에서의 T-세포의 분화능 조사

실시예2에 기재된 바와 같이 인산완충용액(대조군), 표 2의 조성물(시험군)이 포함된 윤활제로 처리한 마우스의 비장세포에서 T-세포의 분화능을 조사하였다. 본 반응은 비특이적 면역반응이므로, CD3가 많이 관찰된 것을 도 2를 통하여 알 수 있다. 만일 항원과 병행 투여한다면 CD3보다 CD4 또는 CD8이 많이 관찰될 것으로 추측된다. 결론적으로 특이적인 면역 활성은 일어나지 않았지만 대조구에 비해 각종 조성물이 첨가된 윤활제에서 전반적으로 T-세포의 분포가 많이 존재함으로 다양한 항원이나 병원균의 침입에 대처 할 수 있는 면역 기능이 활성화되어 있다고 사료된다.

<실시예 4> 마우스의 점막기관 세척액에서의 항체 역가조사

실시예2에 기재된 바와 같이 인산완충용액(대조군), 표 2의 조성물(시험군)이 포함된 윤활제로 처리한 마우스의 혈청, 구강세척물, 비강세척물, 호흡관세척물, 비교기관 및 생식기관세척물을 취하였다. 이를 위해 혈청을 제외한 기타 점막조직에 각기 500㎕의 PBS를 투여하여 20회 세척을 한 후 멸균된 E-tube에 옮겨 담았다. 이와 같은 조작을 10회 반복하여 각기 5㎖의 세척물을 취한 후, 6,000rpm의 원심분리를 실시하여 상등액만을 24시간 4℃에 보관하였다. 상기의 세척액을 protein G column 크로마토그래피를 실시하여 IgG를 분리하고, IgG가 분획된 IgA를 따로 취하였다.

상기의 방법으로 획득한 두 시료를 각각 Time-resolved fluoroscence Immunoassay(TR-FIA)의 방법으로 실시하였다. 전 과정은 Kensner등(Steriods, 59, 1994, 206)의 방법에 따라 실시하였으며 간단히 설명하면, 분리된 IgG 항체를 1000배 희석배율부터 2배씩 희석하여 128,000배까지 8개의 희석시료를 분석판(96 well plate)에 0.1ml로 37℃에서 2시간동안 피복시켰다. 이 후, 5~6회 반복 자동세척기로 세척하고 염소 유래 항 마우스 면역글로불린 이차항체에 Eu 입자가 연결된 Goat IgG Anti-Mouse IgG-Eu particle conjugate를 1:5000의 희석농도로 37℃에서 2시간동안 반응시켰다. 이 후, 다시 5~6회 반복 자동세척기로 세척하고 200㎕의 증가용액(Enhancement solution)을 넣고 5분 정도 추가 반응 시킨 후에 측정하였다. 사용된 기기는 DELFIA(Wallac by Model 1420)를 이다.

IgG가 분획된 IgA 항체에 대한 역가도 상기의 방법과 동일하게 시행하였으며 염소 유래 항 마우스 면역글로불린 이차항체에 Eu 입자가 연결된 Goat IgG Anti-Mouse IgA-Eu particle conjugate를 차별적으로 사용하였다. 이에 대한 자세한 결과는 도 3, 4, 5, 6, 7과 같다.

이 실시예를 통하여 면역증강제를 혼합한 윤활제로 질을 자극시킨 마우스는 대조군에 비하여 혈청에서 최소 1:64,000 이상, 점막세척물에서 최소 1:16,000의 IgG 역가를 나타내는 것을 확인하였다. 또한 IgA는 혈청에서 측정되지 않았으며, 혈청을 제외한 점막세척물에서 최소 1:8,000의 역가를 나타내는 것으로 확인되었다.

<실시예 5> 점막면역 증강 마우스에 대한 공격실험

실시예 4에서 체내 전반적인 면역이 증가한 암컷 마우스의 질에 임의적으로 임질 원인균인 Neisseria gonorrheae와 매독 원인균인 Treponema pallidum 그리고 질염의 원인균인 Candida albicans를 각각 2X10⁴의 세포수로 마우스의 질에 접종시켰다. 최초 3일 동안 매일 상기의 농도로 접종을 실시하였으며, 10일 동안 살아남은 개체수에 대한 분석을 시행했다. 위의 결과는 도 8, 9, 10과 같다. 이 실시예에서 비특이적으로 증강된 면역체계를 통해 인위적인 원인균 접종에 대해서 높은 생존율을 보였다는 것을 확인할 수 있다.

본 발명은 기존의 윤활제 조성물에 점막면역 유도 증강물질이 첨가된 조성물을 제조함으로써, 윤활제 본래의 역할 이외에 병원균의 감염, 염증을 근 본적으로 예방할 수 있도록 면역기능이 강화된 기능성 윤활제를 제공한다. 상기의 방법으로 제조된 각 윤활제 조성물을 콘돔을 비롯한 젤 및 비뇨기계 검사기구를 비롯한 의료기구/수술기구 또는 인체에 도포하면 체내의 점막조직을 자극하게 되어 기초적인 면역력이 증가하게 된다. 증가된 기초면역력을 통해 각종 감염을 조기에 막을 수 있으며 세계적으로 문제가 되고 있는 에이즈, SARS, 조류독감 등과 같은 감염성 질병 등에 대한 예방 또는 건강한 생식기를 유지할 수 있는 효과를 제공한다. 또한 한 기관(예를 들어 생식기 또는 비뇨기관)에서 발생한 점막면역은 체내의 다른 점막 전체로 면역성을 증가시키기 때문에 생식기 및 비뇨기 계통의 감염뿐만 아니라 호흡기 및 위장관으로부터 유발되는 감염성 질병에 대한 면역력도 증진시킬 수 있다.

윤활제를 활용한 면역증강제의 도입은 전무한 실정이기 때문에, 본 발명으로 인해 윤활제 본래의 역할을 수행하도록 하면서 동시에 기초면역력의 증진을 도모할 수 있는 보다 안전하고 편리한 새로운 방법을 제공하게 되었다.

Claims

점막면역 유도 증강제를 포함하는 것을 특징으로 하는 윤활제 조성물.
제1항에 있어서, 상기 점막 유도 증강제가 베타-글루칸(β-glucan), 콜레라 독소 B 사슬 (cholera toxin B-subunit; CT B-subunit)과 대장균의 이열성 독소(E.coli heat-labile toxin; LT) 또는 백일해 독소(pertusis toxin), 리포폴리사카라이드 (Lipopolysaccharide; LPS), 단일인화지질A(monophosphoryl lipid A; MPL)과, 비메칠화된 디뉴클레오티드를 포함하는 올리고데옥시뉴클레오티드 (oligodeoxynucleotides containing unmethylated dinucleotides; CgP ODN), 알루미늄 염, 가시오가피 추출물, 유럽산 겨우살이 렉틴, 유럽산 겨우살이 렉틴 B-chain, 한국산 겨우살이 추출물, 한국산 겨우살이 렉틴, 한국산 겨우살이 렉틴 B-chain 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 윤활제 조성물.
제1항에 있어서, 상기 점막 유도 증강제가 CT B-subunit, 유럽산 겨우살이 렉틴, 한국산 겨우살이 렉틴, 유럽산 겨우살이 렉틴 + 비메칠화된 디뉴클레오티드를 포함하는 올리고데옥시뉴클레오티드(CpG ODN), 한국산 겨우살이 렉틴 + CpG ODN, 리포폴리사카라이드(LPS) + 한국산 겨우살이 렉틴, CT B-subunit + 한국산 겨 우살이 렉틴, β-글루칸 + 한국산 겨우살이 렉틴으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
점막면역 유도 증강제를 첨가하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 윤활제 조성물의 제조방법.
점막면역유도 증강제가 첨가된 윤활제를 포함하는 피임기구 또는 의료/진단 기구.
점막면역유도 증강제가 첨가된 윤활제가 코팅된 콘돔.