KR101012313B1 - 염증질환 치료제 - Google Patents

Abstract

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 염증질환 치료제에 관한 것으로, 이러한 화합물은 LPS로 활성화된 RAW 264.7세포에서 NO, IL-6 및 TNF-a와 같은 염증성 매개물의 생성을 억제함으로써 염증 질환의 치료제로서 유용하게 이용될 수 있다.

[화학식 1]

염증질환, NO, IL-6, TNF-α

Description

염증질환 치료제{Treatment for inflammatory disease}

본 발명은 LPS로 활성화된 RAW 264.7세포에서 NO, IL-6 및 TNF-α와 같은 염증성 매개물의 생성을 억제함으로써 염증 질환의 치료제로서 유용하게 이용될 수 있는 화합물을 유효성분으로 함유하는 염증질환 치료제에 관한 것이다.

염증반응의 조절이 염증 관련 질환의 병인과 밀접하게 관련되며, 이러한 염증 반응은 다양한 신호전달 예를들어, 사이클로옥시게네이즈, NO 신테이즈, 사이토카인 등의 순차적인 활성화와 관련된다.

NO, IL-6 및 IL-1β와 같은 인터루킨, TNF-α를 포함한 염증 매개물의 과도한 생성은 류마티스 관절염, 염증성 장질환, 골다공증, 건선, 내독소혈증, 독성쇼크증후군과 같은 염증질환을 매개한다.

인체에서 발생하는 염증 반응은 크게 급성 염증 반응(Acute inflammation)과 만성 염증 반응(Chronic inflammation)으로 구분할 수 있다. 급성 염증 반응은 외부로부터 유입된 항원으로부터 신체를 보호하기 위해 급속하게 발생하는 반응이다.

급성 염증 과정의 시작은 인터루킨-1β(interleukin-1 beta), 인터루킨-6(interleukin-6), 종양괴사인자-α(tumor necorsis factor-alpha; TNF-α)와 같은 염증성 사이토카인의 분비 및 유도 산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase; iNOS) 및 사이클로옥시게나아제-2(cyclooxygenase-2; COX-2) 등과 같은 염증 매개 물질 합성 유전자들의 증가를 동반하게 된다.

이처럼 분비된 염증 조절 물질에 의해 활성화된 대식 세포들이 유입된 항원을 효과적으로 제거하게 되며 항원이 모두 제거되면 더 이상의 진행은 멈추게 된다.

그러므로 급성 염증 반응이 인체 질환으로 발전할 가능성은 매우 희박하나, 백일해(pertussis) 등 일부 만성염증질환으로 발전하는 경우에는 IL-23의 발현이 증가하여 만성염증으로 진행된다(Infect . Immun ., 73: 1590-1597, 2005).

급성과 달리 만성 염증 반응은 외부 항원보다는 인체 내부적 요인에 의해 장기간 동안 진행되는 염증 반응으로 대식 세포에 의한 단순 염증 반응이 아닌 대식 세포, 호중구와 T 림프구가 포함된 염증 반응으로 IL-17 및 IL-23의 발현이 증가되고 이로 인한 TNF-α 등 염증성 사이토카인들이 지속적으로 발현되어 일어난다(Trends in Immunol, 27: 17-23, 2006).

이와 같은 만성염증질환의 치료는 고전적으로 프레드니솔론과 같은 스테로이드에 의한 염증 억제제, 나프록센과 같은 비스테로이드성 항염치료제(nonsteroidal anti-inflammatory drugs; NSAID) 및 사이클로스포린이나 FK506과 같이 칼슘 및 칼모듈린 의존성 단백인산화 효소인 칼시뉴린(calcineurin)에 결합하여 그 작용을 억제하는 면역억제제가 가장 많이 사용되고 왔다.

그러나 이러한 스테로이드를 비롯한 면역억제제들은 신독성, 감염, 임파종, 당뇨병, 진전(tremor), 두통, 설사, 고혈압, 오심, 신기능 장애 등의 부작용이 따르게 된다.

그러므로, 현재 사용되는 염증질환 치료제의 부작용을 줄이면서도 염증 매개물의 과잉발현을 억제하는 효과적인 염증질환 치료제의 개발이 시급한 실정이다.

본 발명의 목적은 LPS로 활성화된 RAW 264.7세포에서 NO, IL-6 및 TNF-α와 같은 염증성 매개물의 생성을 억제함으로써 염증 질환의 치료제로서 유용하게 이용될 수 있는 화합물을 선별하여 이러한 화합물을 유효성분으로 함유하는 염증질환 치료제 및 염증질환 개선용 건강식품을 개발하는 데에 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 염증질환 치료제를 제공한다:

R은 COOH, COOCH₃, CH₂OH 또는 CH₂NHCOCF₃에서 선택된 어느 하나이며,

R₁ 및 R₂는 H, C₆H₅ 또는 Br에서 선택된 어느 하나이며,

m은 1 내지 5의 정수, n은 1 내지 4의 정수임.

상기 화합물은 (E)-10-옥소옥타데카-8-엔산[(E)-10-oxooctadec-8-enoic acid]; (E)-9-옥소옥타데카-10-엔산[(E)-9-oxooctadec-10-enoic acid]; 메틸-(E)-11-옥소옥타데카-9-에노에이트[methyl-(E)-11-oxooctadec-9-enoate]; 메틸-(E)-10- 옥소옥타데카-8-에노에이트[methyl-(E)-10-oxooctadec-8-enoate]; 메틸-(E)-9-옥소옥타데카-10-에노에이트[methyl-(E)-9-oxooctadec-10-enoate]; 메틸-(E)-8-옥소옥타데카-9-에노에이트[methyl-(E)-8-oxooctadec-9-enoate]; (E)-8-옥소옥타데카-9-엔산[(E)-8-oxooctadec-9-enoate]; (E)-11-옥소옥타데카-9-에놀[(E)-11-oxooctadec-9-enol]; (E)-10-옥소옥타데카-8-에놀[(E)-10-oxooctadec-8-enol]; (E)-9-옥소옥타데카-10-에놀[(E)-9-oxooctadec-10-enol]; (E)-8-옥소옥타데카-9-에놀[(E)-8-oxooctadec-9-enol]; (E)-N-트리플루오로아세틸-11-옥소옥타데카-9-에닐 아미드[(E)-N-trifluoroacetyl-11-oxooctadec-9-enyl amide]; (E)-N-트리플루오로아세틸-10-옥소옥타데카-8-에닐 아미드[(E)-N-trifluoroacetyl-10-oxooctadec-8-enyl amide]; (E)-N-트리플루오로아세틸-9-옥소옥타데카-10-에닐 아미드[(E)-N-trifluoroacetyl-9-oxooctadec-10-enyl amide]; (E)-N-트리플루오로아세틸-8-옥소옥타데카-9-에닐 아미드[(E)-N-trifluoroacetyl-8-oxooctadec-9-enyl amide]; 메틸-(Z)-10-브로모-11-옥소옥타데카-9-에노에이트[methyl-(Z)-10-bromo-11-oxooctadec-9-enoate]; 메틸-(Z)-9-브로모-10-옥소옥타데카-8-에노에이트[methyl-(Z)-9-bromo-10-oxooctadec-8-enoate]; 메틸-(Z)-10-브로모-9-옥소옥타데카-10-에노에이트[methyl-(Z)-10-bromo-9-oxooctadec-10-enoate]; 메틸-(Z)-9-브로모-8-옥소옥타데카-9-에노에이트[methyl-(Z)-9-bromo-8-oxooctadec-9-enoate]; (Z)-10-브로모-11-옥소옥타데카-9-엔산[(Z)-10-bromo-11-oxooctadec-9-enoic acid]; (Z)-9-브로모-10-옥소옥타데카-8-엔산[(Z)-9-bromo-10-oxooctadec-8-enoic acid]; (Z)-10-브로모-9-옥소옥타데카-10-엔산[(Z)-10-bromo-9-oxooctadec-10-enoic acid]; (Z)-9-브로모-8-옥소옥타데카-9-엔산[(Z)-9-bromo-8-oxooctadec-9-enoic acid]; 메틸-(Z)-10-페닐-11-옥소옥타데카-9-에노에이트[methyl-(Z)-10-phenyl-11-oxooctadec-9-enoate]; 메틸-(Z)-10-페닐-9-옥소옥타데카-10-에노에이트[methyl-(Z)-10-phenyl-9-oxooctadec-10-enoate]; (Z)-10-페닐-9-옥소옥타데카-10-엔산[(Z)-10-phenyl-9-oxooctadec-10-enoic acid]; 또는 (Z)-9-페닐-8-옥소옥타데카-9-엔산[(Z)-9-phenyl-8-oxooctadec-9-enoic acid]에서 선택된 어느 하나의 화합물일 수 있다.

상기 화합물은 R이 CH₂OH 또는 CH₂NHCOCF₃에서 선택된 어느 하나이고, R₁ 및 R₂가 H인 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 상기 화합물이 (E)-11-옥소옥타데카-9-에놀, (E)-10-옥소옥타데카-8-에놀, (E)-9-옥소옥타데카-10-에놀 또는 (E)-8-옥소옥타데카-9-에놀에서 선택된 어느 하나의 화합물이다.

상기 염증질환은 류마티스 관절염, 염증성 장질환, 골다공증, 건선, 내독소혈증 및 독성쇼크증후군으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 질환인 것이 바람직하다.

이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.

본 발명자들은 합성된 상기 에논 지방산 화합물들이 LPS로 활성화된 RAW 264.7세포에서 NO, IL-6 및 TNF-α와 같은 염증성 매개물의 생성을 억제하는 활성을 나타내는 것을 확인하였으며, 이에 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 화합물은 전체 염증질환 치료제 100 중량부에 대하여 5 내지 10 중량부로 함유되는 것이 바람직하다. 만약, 상기 화합물이 상기 범위를 벗어나 소량으로 함유되면 약효 발생의 저하가 야기될 수 있는 반면, 다량으로 함유되면 복통, 설사, 오심, 구토와 같은 부작용이 야기될 수 있다.

또한, 본 발명의 화합물은 하기 반응식 1에 개시된 바와 같이 망간(III)-아세테이트 촉매 하에서 메틸 올레이트의 알릴 산화에 의해 제조될 수 있다(Org . Lett ., 8: 3149-3151, 2006). 이때, m 및 n은 각각 1 내지 4이다. 보다 바람직하게는 Mn₃O(OAc)₉, (CH₃)₃COOH 및 EtOAc 하 실온에서 48시간 동안 반응시킨다.

또한, 본 발명은 하기 반응식 2에 개시된 바와 같이 사염화탄소 하에서 브롬 분자를 이용하여 에논 지방산의 브롬화 반응을 수행한 후, 염기 촉매 제거반응을 수행하여 브롬기로 치환된 에논 지방산 화합물을 제조할 수 있다. 보다 바람직하게는, 사염화탄소 하에 브롬 분자를 실온에서 3시간 동안 반응시킨 후, NH₄OH/에탄올로 3시간 동안 처리한다.

또한, 본 발명은 추가적으로 상기 브롬화된 에논 지방산 화합물을 테트라키 스(트리페닐포스핀)팔라듐으로 매개된 페닐보론산을 이용하여 수즈키(Suzuki) 커플링함으로써 페닐기로 치환된 에논 지방산 화합물을 제조할 수 있다. 보다 바람직하게는 C₆H₇BO₂, Pd[(C₆H₅)₃P]₄, 2M Na₂CO₃, 에탄올 및 톨루엔으로 3시간 동안 환류하여 반응시킨다.

또한, 본 발명에 따른 염증질환 치료제는 약학조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에서 사용가능한 담체, 부형제 또는 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필 히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유 등을 들 수 있다.

본 발명에 따른 염증질환 치료제는, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물은 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제한다.

또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명에서 상기 에논 지방산 화합물의 사용량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 2 내지 10 mg/kg의 양을 일일 1회 내지 수회 투여할 수 있다.

또한, 이러한 화합물의 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

상기 염증질환 치료제는 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular)주사에 의해 투여될 수 있다.

상기 화합물은 마우스에서 복강투여하여 급성독성 실험한 결과, ID₅₀가 20 mg/kg 이상인 안전한 화합물로 확인되었다.

또한, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 에논 지방산 화합물을 유효성분으로 함유하는 염증질환 개선용 건강식품을 제공한다.

상기 건강식품은 본 발명의 에논 지방산 화합물 이외에 다른 식품 또는 식품 첨가물과 함께 사용되고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 그의 사용 목적 예를들어 예방, 건강 또는 치료적 처치에 따라 적합하게 결정될 수 있다.

상기 건강식품에 함유된 화합물의 유효용량은 상기 치료제의 유효용량에 준 해서 사용할 수 있으나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있음은 확실하다.

상기 건강식품의 종류에는 특별한 제한이 없고, 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등을 들 수 있다.

본 발명에 따른 에논 지방산 화합물은 LPS로 활성화된 RAW 264.7세포에서 NO, IL-6 및 TNF-α와 같은 염증성 매개물의 생성을 억제함으로써 류마티스 관절염, 염증성 장질환, 골다공증, 건선, 내독소혈증, 독성쇼크증후군과 같이 염증성 매개물에 의해 매개되는 염증질환의 치료제로써 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 하기에 제시한다. 그러나 이러한 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐 본 발명이 하기의 실시예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1> ( E )-10- Oxooctadec -8- enoic acid (9) 합성

화합물 9는 메틸 올레이트(methyl oleate)에 t-부틸 히드로퍼옥사이드(t- butyl hydroperoxide)와 분자 여과기(molecular sieve) 존재 하에서 Mn₃O(OAc)₉을 가하여 반응시켜 얻은 혼합물을 HPLC로 분리하여 해당 메틸 에스테르 화합물을 얻은 후 이를 산가수분해하여 카르복실산 형태로 얻었다.

무색 오일;

¹H NMR(CD₃OD, 500 MHz) δ 6.94 (1H, dt, J = 16.0, 6.5 Hz, H-8), 6.13 (1H, dt, J = 16.0, 1.5 Hz, H-9), 2.58 (2H, t, J = 7.5 Hz, H-11), 2.27 (4H, m, H-2, H-7), 1.62 (4H, m, H-3, H-12), 1.51 (2H, m, H-6), 1.40-1.33 (14H, m, CH₂), 0.92 (3H, t, J = 6.5 Hz, H-18);

FABMS m/z 319 [M+ Na]⁺, 341 [M-H + 2Na]⁺;

FAB-CID-MS/MS m/z 341 [M-H + 2Na]⁺ (100), 297 (14), 283 (17), 269 (14), 255 (86), 159 (57), 145 (19), 131 (12), 117 (88), 104 (89), 90 (81).

< 실시예 2> 10- Oxooctadecanoic acid (9a) 합성

실시예 1에서 제조된 화합물 9(0.6mg)를 메탄올에 용해시킨 용액에 10% Pd/C(0.6mg)을 가한 후, 얻어진 혼합물을 H₂ 가스 분위기 하에서 실온, 2시간 동안 교반하였다.

상기 혼합물을 셀라이트로 필터한 후, 여액을 감압 농축하고 90% 수용성 MeOH을 전개액으로 이용하여 역상 HPLC(YMC ODS-H80)에 의해 정제하였다. 이때, 얻어진 분말은 흰색 무정형 분말 0.3mg이었다.

FABMS m/z 343 [M-H + 2Na]⁺;

FAB-CIDMS/MS m/z 343 [M-H + 2Na]⁺(100), 313 (19), 299 (13), 285 (7), 271 (25), 257 (90), 187 (85), 173 (31), 159 (33), 145 (16), 131 (11), 117 (45), 104 (42), 90 (34).

< 실시예 3> ( E )-9- Oxooctadec -10- enoic acid (10) 합성

화합물 10은 메틸 올레이트(methyl oleate)에 t-부틸 히드로퍼옥사이드(t-butyl hydroperoxide)와 분자 여과기(molecular sieve) 존재 하에서 Mn₃O(OAc)₉을 가하여 반응시켜 얻은 혼합물을 HPLC로 분리하여 해당 메틸 에스테르 화합물을 얻은 후 이를 산가수분해하여 카르복실산 형태로 얻었다.

무색 오일;

1H NMR(CD₃OD, 500 MHz) δ 6.91 (1H, dt, J = 14.0, 7.0 Hz, H-11), 6.10

(1H, dt, J = 14.0, 1.5 Hz, H-10), 2.58 (2H, t, J = 7.5 Hz, H-8), 2.25

(4H, m, H-2, H-12), 1.58 (4H, m, H-3, H-7), 1.49 (2H, m, H-13), 1.33-1.28 (14H, m, CH₂), 0.90 (3H, t, J = 7.0 Hz, H-18);

FABMS m/z 319 [M + Na]⁺, 341 [M-H + 2Na]⁺;

FAB-CID-MS/MS m/z 341 [M-H + 2Na]⁺ (100), 297 (15), 283 (20), 269 (78), 255 (32), 173 (53), 159 (19), 145 (20), 131 (15), 117 (75), 104 (90), 90 (58).

< 실시예 4> 9- Oxooctadecanoic acid (10a) 합성

실시예 3에서 제조된 화합물 10을 이용하여 실시예 2와 동일한 방법으로 흰색 무정형 분말을 제조하였다.

FABMS m/z 343 [M-H + 2Na]⁺;

FAB-CID-MS/MS m/z 343 [M-H + 2Na]⁺ (100), 313 (12), 299 (14), 285 (12), 271 (9), 257 (52), 243 (85), 173 (66), 159 (27), 145 (19), 131 (9), 117 (40), 104 (40), 90 (25).

< 실시예 5> Methyl -( E )-11- oxooctadec -9- enoate (15) 합성

EtOAc에 올레인산을 가하여 준비된 메틸 올레이트 용액(1.77 mmol)에 데칸에 용해된 tert-부틸히드로퍼옥사이드(8.85 mmol)를 가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 후, 망간(III) 아세테이트 2수화물(0.18 mmol)을 가하고 실온에서 48시간 동안 교반하였다. 에테르로 용액을 희석하고 셀라이트를 통해 여과하였다.

여액을 감압 하에서 농축하고 역상 HPLC(YMC ODS-H80, 250 × 20 mm, 4 μm, 80)에 의해 정제하였다. 이때, 95% 수용액 CH₃CN을 이용하여 전개함으로써 무색 오일인 화합물 15(Methyl-(E)-11-oxooctadec-9-enoate; 23mg)를 제조하였다.

1H NMR(CD₃OD, 400 MHz) δ 6.91 (1H, dt, J = 16.0, 6.8 Hz, H-9), 6.11 (1H, dt, J = 16.0, 1.2 Hz, H-10), 3.64 (3H, s, OCH₃), 2.57 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-12), 2.31 (2H, t, J ) 7.6 Hz, H-2), 2.22 (2H, q, J ) 6.8 Hz, H-8), 1.59 (4H, m, H-3, H-13), 1.49 (2H, m, H-7), 1.34.30 (14H, m, CH₂), 0.89 (3H, t, J ) 6.8 Hz, H-18);

FABMS m/z 333 [M + Na]⁺.

< 실시예 6> Methyl -11- oxooctadecanoate (15a) 합성

상기 제조된 화합물 15를 이용하여 실시예 2와 동일한 방법으로 흰색 무정형 분말을 제조하였다.

FABMS m/z 335 [M + Na]⁺;

FAB-CID-MS/MS m/z 335 [M + Na]+(100), 305 (9), 291 (9), 277 (16), 263 (80), 193 (51), 177 (25), 164 (14), 151 (5), 135 (5), 122 (4), 109 (10), 96 (13), 80 (9).

< 실시예 7> Methyl -( E )-10- oxooctadec -8- enoate (16) 합성

실시예 5와 동일한 방법으로 수행하여 무색 오일인 화합물 16(Methyl-(E)-10-oxooctadec-8-enoate; 25mg)을 제조하였다.

1H NMR(CD₃OD, 400 MHz) δ 6.91 (1H, dt, J = 16.4, 6.8 Hz, H-8), 6.11 (1H, dt, J = 16.4, 1.2 Hz, H-9), 3.64 (3H, s, OCH₃), 2.57 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-11), 2.31 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-2), 2.23 (2H, q, J = 6.8 Hz, H-7), 1.58 (4H, m, H-3, H-12), 1.49 (2H, m, H-6), 1.35.30 (14H, m, CH₂), 0.89 (3H, t, J = 6.8 Hz, H-18);

FABMS m/z 333 [M + Na]⁺.

< 실시예 8> Methyl -10- oxooctadecanoate (16a) 합성

상기 제조된 화합물 16을 이용하여 실시예 2와 동일한 방법으로 흰색 무정형 분말을 제조하였다.

FABMS m/z 335 [M + Na]⁺;

FAB-CID-MS/MS m/z 335 [M + Na]+(100), 305 (8), 291 (9), 277 (5), 263 (23), 249 (89), 179 (52), 166 (10), 151 (7), 135 (5), 122 (3), 109 (7), 96 (8), 80 (7).

< 실시예 9> Methyl -( E )-9- oxooctadec -10- enoate (17) 합성

실시예 5와 동일한 방법으로 수행하여 무색 오일인 화합물 17(Methyl-(E)-9-oxooctadec-10-enoate; 29mg)을 얻었다.

1H NMR(CD₃OD, 400 MHz) δ 6.92 (1H, dt, J = 16.0, 6.8 Hz, H-11), 6.10

(1H, dt, J = 16.0, 1.6 Hz, H-10), 3.64 (3H, s, OCH₃), 2.57 (2H, t, J =

7.2 Hz, H-8), 2.31 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-2), 2.23 (2H, q, J = 6.8 Hz, H-12), 1.58 (4H, m, H-3, H-7), 1.48 (2H, m, H-13), 1.32.29 (14H, m, CH2), 0.90 (3H, t, J = 7.6 Hz, H-18);

FABMS m/z 333 [M + Na]⁺.

< 실시예 10> Methyl -9- oxooctadecanoate (17a) 합성

상기 제조된 화합물 17을 이용하여 실시예 2와 동일한 방법으로 흰색 무정형 분말을 제조하였다.

FABMS m/z 335 [M + Na]⁺;

FAB-CID-MS/MS m/z 335 [M + Na]+(100), 305 (5), 291 (6), 277 (6), 263 (14), 249 (16), 235 (63), 165 (24), 151 (6), 135 (3), 122 (2), 109 (3), 96 (7), 80 (6).

< 실시예 11> Methyl -( E )-8- oxooctadec -9- enoate (18) 합성

실시예 5와 동일한 방법으로 수행하여 무색 오일인 화합물 18(Methyl-(E)-8-oxooctadec-9-enoate; 26mg)을 얻었다.

1H NMR(CD₃OD, 400 MHz) δ 6.92 (1H, dt, J = 15.6, 6.8 Hz, H-10), 6.10 (1H, dt, J = 15.6, 1.6 Hz, H-9), 3.64 (3H, s, OCH₃), 2.58 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-7), 2.31 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-2), 2.23 (2H, q, J = 6.8 Hz, H-11), 1.58 (4H, m, H-3, H-6), 1.48 (2H, m, H-12), 1.33.28 (14H, m, CH₂), 0.89 (3H, t, J = 6.8 Hz, H-18);

FABMS m/z 333 [M + Na]⁺.

< 실시예 12> Methyl -8- oxooctadecanoate (18a) 합성

상기 제조된 화합물 18을 이용하여 실시예 2와 동일한 방법으로 흰색 무정형 분말을 제조하였다.

FABMS m/z 335 [M + Na]⁺;

FAB-CID-MS/MS m/z 335 [M + Na]+(100), 305 (8), 291 (10), 277 (8), 263 (19), 249 (13), 235 (19), 221 (91), 151 (24), 135 (14), 122 (3), 109 (7), 96 (5), 80 (5).

< 실시예 13> ( E )-11- oxooctadec -9- enoic acid (19) 합성

올레인산으로부터 산 유도체의 제조를 앞선 메틸 에스테르 유도체(화합물 15 내지 화합물 18)의 제조방법과 동일하게 수행하여 무색 오일인 화합물 19를 얻었다.

1H NMR (CD₃OD, 400 MHz) δ 6.92 (1H, dt, J = 16.4, 7.2 Hz, H-9), 6.11 (1H, dt, J = 16.4, 1.2 Hz, H-10), 2.57 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-12), 2.25 (4H, m, H-2, H-8), 1.59 (4H, m, H-3, H-13), 1.49 (2H, m, H-7), 1.34-1.30 (14H, m, CH₂), 0.89 (3H, t, J = 6.8 Hz, H-18);

FABMS m/z 341 [M + 2Na-H]⁺.

< 실시예 14> 11- Oxooctadecanoic acid (19a) 합성

상기 제조된 화합물 19를 이용하여 실시예 2와 동일한 방법으로 흰색 무정형 분말을 제조하였다.

FABMS m/z 343 [M-H + 2Na]⁺;

FAB-CIDMS/MS m/z 343 [M-H + 2Na]⁺ (100), 313 (16), 299 (11), 285 (21), 271 (76), 201 (94), 187 (31), 173 (64), 159 (35), 145 (23), 131 (12), 117 (56), 104 (52), 90 (35).

< 실시예 15> ( E )-8- Oxooctadec -9- enoic acid (20) 합성

올레인산으로부터 산 유도체의 제조를 앞선 메틸 에스테르 유도체(화합물 15 내지 화합물 18)의 제조방법과 동일하게 수행하여 무색 오일인 화합물 20을 얻었다.

1H NMR (CD₃OD, 400 MHz) δ 6.91 (1H, dt, J = 16.0, 7.6 Hz, H-10), 6.10 (1H, dt, J = 16.0, 1.4 Hz, H-9), 2.58 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-7), 1.58 (4H, m, H-3, H-6), 1.46 (2H, m, H-12), 1.35-1.21 (14H, m, CH₂), 0.89 (3H, t, J = 6.8 Hz, H-18);

FABMS m/z 341 [M + 2Na-H]⁺.

< 실시예 16> 8- Oxooctadecanoic acid (20a) 합성

상기 제조된 화합물 20을 이용하여 실시예 2와 동일한 방법으로 흰색 무정형 분말을 제조하였다.

FABMS m/z 343 [M-H + 2Na]⁺;

FAB-CIDMS/MS m/z 343 [M - H + 2Na]+(100), 313 (11), 299 (11), 285 (12), 271 (37), 257 (7), 243 (16), 229 (92), 159 (52), 145 (17), 131 (11), 117 (48), 104 (42), 90 (33).

< 실시예 17 내지 20> 히드록시 유도체(화합물 21 내지 화합물 24) 제조

올레일 알코올로부터 히드록시 유도체의 제조를 앞선 메틸 에스테르 유도체(화합물 15 내지 화합물 18)의 제조방법과 동일하게 실시하였다.

( E )-11- Oxooctadec -9- enol (21)

무색 오일;

1H NMR (CD₃OD, 400 MHz) δ 6.92 (1H, dt, J = 15.6, 6.4 Hz, H-9), 6.10 (1H, dt, J = 15.6, 1.2 Hz, H-10), 3.53 (2H, t, J = 6.8 Hz, H-1), 2.57 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-12), 2.25 (2H, q, J = 6.4 Hz, H-8), 1.59 (2H, m, H-13), 1.50 (4H, m, H-2, H-7), 1.34-1.28 (16H, m, CH₂), 0.89 (3H, t, J = 6.8 Hz, H-18);

FABMS m/z 281 [M-H]^-.

( E )-10- Oxooctadec -8- enol (22)

무색 오일;

1H NMR (CD₃OD, 400 MHz) δ 6.92 (1H, dt, J = 16.0, 6.8 Hz, H-8), 6.10 (1H, dt, J = 16.0, 1.6 Hz, H-9), 3.53 (2H, t, J = 6.4 Hz, H-1), 2.58 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-11), 2.25 (2H, q, J = 6.8 Hz, H-7), 1.58 (2H, m, H-12), 1.50 (4H, m, H-2, H-6), 1.37.30 (16H, m, CH₂), 0.89 (3H, t, J = 6.8 Hz, H-18);

FABMS m/z 281 [M-H]^-.

( E )-9- Oxooctadec -10- enol (23)

무색 오일;

1H NMR (CD₃OD, 400 MHz) δ 6.93 (1H, dt, J = 16.4, 6.8 Hz, H-11), 6.10 (1H, dt, J = 16.4, 1.6 Hz, H-10), 3.53 (2H, t, J = 6.8 Hz, H-1), 2.58 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-8), 2.25 (2H, q, J = 6.8 Hz, H-12), 1.58 (2H, m, H-7), 1.50 (4H, m, H-2, H-13), 1.33-1.29 (16H, m, CH₂), 0.89 (3H, t, J = 7.2 Hz, H-18); FABMS m/z 281 [M-H]^-.

( E )-8- Oxooctadec -9- enol (24)

무색 오일;

1H NMR (CD₃OD, 400 MHz) δ 6.92 (1H, dt, J = 16.0, 6.8 Hz, H-10), 6.10 (1H, dt, J = 16.0, 1.6 Hz, H-9), 3.53 (2H, t, J = 6.4 Hz, H-1), 2.58 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-7), 2.24 (2H, q, J = 6.8 Hz, H-11), 1.58 (2H, m, H-6), 1.50 (4H, m, H-2, H-12), 1.33-1.28 (16H, m, CH₂), 0.89 (3H, t, J = 7.2 Hz, H-18);

FABMS m/z 281 [M-H]^-.

< 실시예 21> ( E )- N - Trifluoroacetyl -11- oxooctadec -9- enyl amide (25) 합성

올레일 아민 및 트리플루오로아세트산 무수물로부터 준비된 (Z)-니트로플루오로아세틸-옥타데카-9-데닐 아미드 [(Z)-Ntrifluoroacetyl-octadec-9-enyl amide] 로부터 아미드 유도체인 화합물 25의 제조도 역시 앞선 메틸 에스테르 유도체(화합물 15 내지 화합물 18)의 제조방법과 동일하게 수행하여 무색 오일인 화합물 25를 제조하였다.

1H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 6.79 (1H, dt, J = 15.6, 6.8 Hz, H-9), 6.42 (1H, brs, NH), 6.06 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-10), 3.33 (2H, q, J = 6.4 Hz, H-1), 2.49 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-12), 2.18 (2H, q, J = 6.8 Hz, H-8), 1.55 (4H, m, H-2, H-13), 1.43 (2H, m, H-7), 1.28-1.17 (16H, m, CH₂), 0.85 (3H, t, J = 6.0 Hz, H-18);

FABMS m/z 400 [M + Na]⁺.

< 실시예 22> N - Trifluoroacetyl -11- oxooctadecanyl amide (25a) 합성

상기 제조된 화합물 25를 이용하여 실시예 2와 동일한 방법으로 흰색 무정형 분말을 제조하였다.

FABMS m/z 402 [M + Na]⁺;

FAB-CID-MS/MS m/z 402 [M + Na]+ (100), 372 (12), 358 (9), 344 (21), 330 (71), 260 (68), 247 (27), 233 (14), 218 (12), 204 (10), 190 (7), 177 (9), 163 (9), 149 (14), 135 (3).

< 실시예 23> ( E )- N - Trifluoroacetyl -10- oxooctadec -8- enyl amide (26) 합성

올레일 아민 및 트리플루오로아세트산 무수물로부터 준비된 (Z)-니트로플루 오로아세틸-옥타데카-9-데닐 아미드 [(Z)-Ntrifluoroacetyl-octadec-9-enyl amide]로부터 아미드 유도체인 화합물 26의 제조도 역시 앞선 메틸 에스테르 유도체(화합물 15 내지 화합물 18)의 제조방법과 동일하게 수행하여 무색 오일인 화합물 26을 제조하였다.

1H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 6.79 (1H, dt, J = 15.6, 7.2 Hz, H-8), 6.50 (1H, brs, NH), 6.05 (1H, dt, J = 15.6, 1.2 Hz, H-9), 3.33 (2H, q, J = 6.8 Hz, H-1), 2.49 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-11), 2.18 (2H, q, J = 7.2 Hz, H-7), 1.55 (4H, m, H-2, H-12), 1.43 (2H, m, H-6), 1.29-1.19 (16H, m, CH₂), 0.85 (3H, t, J = 6.8 Hz, H-18);

FABMS m/z400 [M + Na]⁺.

< 실시예 24> N - Trifluoroacetyl -10- oxooctadecanyl amide (26a) 합성

상기 제조된 화합물 26을 이용하여 실시예 2와 동일한 방법으로 흰색 무정형 분말을 제조하였다.

FABMS m/z 402 [M + Na]⁺;

FAB-CID-MS/MS m/z 402 [M + Na]+ (100), 372 (9), 358 (10), 344 (5), 330 (22), 316 (85), 246 (68), 233 (21), 218 (9), 204 (8), 190 (9), 177 (9), 163 (7), 149 (14), 135 (4).

< 실시예 25> ( E )- N - Trifluoroacetyl -9- oxooctadec -10- enyl amide (27) 합성

올레일 아민 및 트리플루오로아세트산 무수물로부터 준비된 (Z)-니트로플루오로아세틸-옥타데카-9-데닐 아미드 [(Z)-Ntrifluoroacetyl-octadec-9-enyl amide]로부터 아미드 유도체인 화합물 27의 제조도 역시 앞선 메틸 에스테르 유도체(화합물 15 내지 화합물 18)의 제조방법과 동일하게 수행하여 무색 오일인 화합물 27을 제조하였다.

1H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 6.79 (1H, dt, J = 16.0, 6.8 Hz, H-11), 6.45 (1H, brs, NH), 6.06 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-10), 3.33 (2H, q, J = 6.8 Hz, H-1), 2.49 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-8), 2.18 (2H, q, J = 6.8 Hz, H-12), 1.56 (4H, m, H-2, H-7), 1.42 (2H, m, H-13), 1.28.18 (16H, m, CH₂), 0.85 (3H, t, J ) 6.8 Hz, H-18);

FABMS m/z400 [M + Na]⁺.

< 실시예 26> N - Trifluoroacetyl -9- oxooctadecanyl amide (27a) 합성

상기 제조된 화합물 27을 이용하여 실시예 2와 동일한 방법으로 흰색 무정형 분말을 제조하였다.

FABMS m/z 402 [M + Na]⁺;

FABCID-MS/MS m/z 402 [M + Na]⁺ (100), 372 (10), 358 (12), 344 (9), 330 (8), 316 (52), 302 (88), 232 (61), 218 (19), 204 (9), 190 (9), 177 (5), 163 (8), 149 (10), 135 (3).

< 실시예 27> ( E )- N - Trifluoroacetyl -8- oxooctadec -9- enyl amide (28) 합성

올레일 아민 및 트리플루오로아세트산 무수물로부터 준비된 (Z)-니트로플루오로아세틸-옥타데카-9-데닐 아미드 [(Z)-Ntrifluoroacetyl-octadec-9-enyl amide]로부터 아미드 유도체인 화합물 28의 제조도 역시 앞선 메틸 에스테르 유도체(화합물 15 내지 화합물 18)의 제조방법과 동일하게 수행하여 무색 오일인 화합물 28을 제조하였다.

1H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 6.80 (1H, dt, J = 16.4, 6.8 Hz, H-10), 6.44 (1H, brs, NH), 6.06 (1H, d, J = 16.4 Hz, H-9), 3.33 (2H, q, J = 6.4 Hz, H-1), 2.50 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-7), 2.18 (2H, q, J = 6.8 Hz, H-11), 1.56 (4H, m, H-2, H-6), 1.43 (2H, m, H-12), 1.30-1.20 (16H, m, CH₂), 0.85 (3H, t, J = 6.8 Hz, H-18);

FABMS m/z 400 [M + Na]⁺.

< 실시예 28> N - Trifluoroacetyl -8- oxooctadecanyl amide (28a) 합성

상기 제조된 화합물 28을 이용하여 실시예 2와 동일한 방법으로 흰색 무정형 분말을 제조하였다.

FABMS m/z 402 [M + Na]⁺;

FABCID-MS/MS m/z 402 [M + Na]⁺ (100), 372 (8), 358 (10), 344 (11), 330 (28), 316 (11), 302 (17), 288 (90), 218 (47), 205 (15), 190 (5), 177 (4), 163 (5), 149 (11), 135 (4).

< 실시예 29> Methyl -( Z )-10- bromo -11- oxooctadec -9- enoate (29) 합성

사염화탄소(0.5ml)에 용해된 화합물 15(20mg) 용액에 브롬(4 μL)를 가하고 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 감압 하에서 용매를 제거한 후 잔사를 0.5ml 에탄올에 용해하고, 28% NH₄OH 50 μL를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 3시간 동안 더 교반하였다. 용매 제거후, 잔사를 역상 HPLC(YMC ODS-H80)를 이용하여 정제하였다. 이때, 이때, 95% 수용액 CH₃CN을 이용하여 전개함으로써 무색 오일인 화합물 29(6mg)을 얻었다.

1H NMR (CD₃OD, 400 MHz) δ 7.30 (1H, t, J = 6.8 Hz, H-9), 3.64 (3H, s, OCH3), 2.81 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-12), 2.42 (2H, q, J = 6.8 Hz, H-8), 2.31 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-2), 1.60-1.53 (6H, m, H-3, H-7, H-13), 1.36-1.31 (14H, m, CH₂), 0.89 (3H, t, J = 6.8 Hz, H-18);

FABMS m/z 411/413 [M + Na]⁺.

< 실시예 30> Methyl -( Z )-9- bromo -10- oxooctadec -8- enoate (30) 합성

화합물 16을 이용하여 상기 화합물 29와 동일한 방법으로 무색 오일인 화합물 30을 제조하였다.

1H NMR (CD₃OD, 400 MHz) δ 7.30 (1H, t, J = 7.2 Hz, H-8), 3.64 (3H, s, OCH₃), 2.81 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-11), 2.42 (2H, q, J = 7.2 Hz, H-7), 2.32 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-2), 1.63-1.54 (6H, m, H-3, H-6, H-12), 1.38-1.31 (14H, m, CH₂), 0.89 (3H, t, J = 6.8 Hz, H-18);

FABMS m/z 411/413 [M + Na]⁺.

< 실시예 31> Methyl -( Z )-10- bromo -9- oxooctadec -10- enoate (31) 합성

화합물 17을 이용하여 상기 화합물 29와 동일한 방법으로 무색 오일인 화합물 31을 제조하였다.

1H NMR (CD₃OD, 400 MHz) δ 7.31 (1H, t, J = 6.8 Hz, H-11), 3.64 (3H, s, OCH3), 2.82 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-8), 2.43 (2H, q, J = 6.8 Hz, H-12), 2.31 (2H, t, J = 8.0 Hz, H-2), 1.60-1.51 (6H, m, H-3, H-7, H-13), 1.35-1.31 (14H, m, CH₂), 0.90 (3H, t, J = 7.2 Hz, H-18);

FABMS m/z 411/413 [M + Na]⁺.

< 실시예 32> Methyl -( Z )-9- bromo -8- oxooctadec -9- enoate (32) 합성

화합물 18을 이용하여 상기 화합물 29와 동일한 방법으로 무색 오일인 화합물 32를 제조하였다.

1H NMR (CD₃OD, 400 MHz) δ 7.31 (1H, t, J = 6.8 Hz, H-10), 3.64 (3H, s, OCH3), 2.82 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-7), 2.43 (2H, q, J = 6.8 Hz, H-11), 2.31 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-2), 1.63-1.53 (6H, m, H-3, H-6, H-12), 1.35-1.28 (14H, m, CH₂), 0.89 (3H, t, J = 6.8 Hz, H-18);

FABMS m/z 411/413 [M + Na]⁺.

< 실시예 33> ( Z )-10- Bromo -11- oxooctadec -9- enoic acid (33) 합성

화합물 19를 이용하여 상기 화합물 29와 동일한 방법으로 무색 오일인 화합물 33을 제조하였다.

1H NMR (CD₃OD, 400 MHz) δ 7.31 (1H, t, J = 7.2 Hz, H-9), 2.81 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-12), 2.43 (2H, q, J = 7.2 Hz, H-8), 2.27 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-2), 1.60-1.53 (6H, m, H-3, H-7, H-13), 1.37-1.31 (14H, m, CH₂), 0.90 (3H, t, J = 7.6 Hz, H-18);

FABMS m/z 397/399 [M + Na]⁺.

< 실시예 34> ( Z )-9- Bromo -10- oxooctadec -8- enoic acid (34) 합성

화합물 9를 이용하여 상기 화합물 29와 동일한 방법으로 무색 오일인 화합물 34를 제조하였다.

1H NMR (CD₃OD, 400 MHz) δ 7.31 (1H, t, J = 7.2 Hz, H-8), 2.81 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-11), 2.43 (2H, q, J = 7.2 Hz, H-7), 2.27 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-2), 1.62-1.53 (6H, m, H-3, H-6, H-12), 1.37-1.31 (14H, m, CH₂), 0.90 (3H, t, J = 7.6 Hz, H-18);

FABMS m/z 397/399 [M + Na]⁺.

< 실시예 35> ( Z )-10- Bromo -9- oxooctadec -10- enoic acid (35) 합성

화합물 10을 이용하여 상기 화합물 29와 동일한 방법으로 무색 오일인 화합물 35를 제조하였다.

1H NMR (CD₃OD, 400 MHz) δ 7.30 (1H, t, J = 6.8 Hz, H-11), 2.81 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-8), 2.42 (2H, q, J = 6.8 Hz, H-12), 2.27 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-2), 1.63-1.53 (6H, m, H-3, H-7, H-13), 1.34-1.31 (14H, m, CH₂), 0.90 (3H, t, J = 6.8 Hz, H-18);

FABMS m/z 397/399 [M + Na]⁺.

< 실시예 36> ( Z )-9- Bromo -8- oxooctadec -9- enoic acid (36) 합성

화합물 20을 이용하여 상기 화합물 29와 동일한 방법으로 무색 오일인 화합물 36을 제조하였다.

1H NMR (CD₃OD, 400 MHz) δ 7.31 (1H, t, J = 7.2 Hz, H-10), 2.82 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-7), 2.43 (2H, q, J = 7.2 Hz, H-11), 2.28 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-2), 1.63-1.51 (6H, m, H-3, H-6, H-12), 1.36-1.31 (14H, m, CH2), 0.90 (3H, t, J = 6.8 Hz, H-18);

FABMS m/z 397/399 [M + Na]⁺.

< 실시예 37> Methyl -( Z )-10- phenyl -11- oxooctadec -9- enoate (37) 합성

화합물 29(5mg) 및 페닐보론산 1.6mg을 혼합용매에 용해시켜 교반한 혼합물에 1mg의 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐을 가하였다. 이때, 상기 혼합용매는 1ml의 톨루엔, 1ml의 에탄올 및 35 μL의 2M Na₂CO₃를 혼합한 것이다.

3시간 동안 격렬하게 교반하면서 환류한 후, 용매를 진공 상태에서 제거하였다. 용매 제거후, 잔사를 역상 HPLC(YMC ODS-H80)를 이용하여 정제하였다. 이때, 이때, 95% 수용액 CH₃CN을 이용하여 전개함으로써 무색 오일인 화합물 37(2mg)을 얻었다.

1H NMR (CD₃OD, 400 MHz) δ 7.40-7.30 (4H, m, Ar-H), 7.06 (1H, dd, J = 6.8, 1.6 Hz, Ar-H), 6.94 (1H, t, J = 7.2 Hz, H-9), 3.64 (3H, s, OCH₃), 2.61 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-12), 2.27 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-2), 2.05 (2H, q, J = 7.2 Hz, H-8), 1.55 (4H, m, H-3, H-13), 1.43 (2H, m, H-7), 1.28-1.22 (14H, m, CH₂), 0.88 (3H, t, J = 7.6 Hz, H-18);

FABMS m/z 409 [M + Na]⁺.

< 실시예 38> Methyl -( Z )-10- phenyl -9- oxooctadec -10- enoate (38) 합성

화합물 31을 이용하여 상기 화합물 37과 동일한 방법으로 무색 오일인 화합물 38을 제조하였다.

1H NMR (CD₃OD, 400 MHz) δ 7.40.30 (4H, m, Ar-H), 7.07 (1H, dd, J = 6.8, 1.2 Hz, Ar-H), 6.95 (1H, t, J = 7.6 Hz, H-11), 3.64 (3H, s, OCH₃), 2.62 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-8), 2.30 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-2), 2.05 (2H, q, J = 7.6 Hz, H-12), 1.57 (4H, m, H-3, H-7), 1.43 (2H, m, H-13), 1.29-1.22 (14H, m, CH₂), 0.87 (3H, t, J = 6.8 Hz, H-18);

FABMS m/z 409 [M + Na]⁺.

< 실시예 39> ( Z )-10- Phenyl -9- oxooctadec -10- enoic acid (39) 합성

화합물 35를 이용하여 상기 화합물 37과 동일한 방법으로 무색 오일인 화합물 39를 제조하였다.

1H NMR (CD₃OD, 400 MHz) δ 7.40.30 (4H, m, Ar-H), 7.07 (1H, dd, J = 6.8, 1.6 Hz, Ar-H), 6.95 (1H, t, J = 7.6 Hz, H-11), 2.62 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-8), 2.25 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-2), 2.05 (2H, q, J = 7.6 Hz, H-12), 1.57 (4H, m, H-3, H-7), 1.43 (2H, m, H-13), 1.30-1.21 (14H, m, CH₂), 0.87 (3H, t, J = 6.8 Hz, H-18);

FABMS m/z 395 [M + Na]⁺.

< 실시예 40> ( Z )-9- Phenyl -8- oxooctadec -9- enoic acid (40) 합성

화합물 36을 이용하여 상기 화합물 37과 동일한 방법으로 무색 오일인 화합물 40을 제조하였다.

1H NMR (CD₃OD, 400 MHz) δ 7.40-7.30 (4H, m, Ar-H), 7.07 (1H, dd, J = 6.8, 2.0 Hz, Ar-H), 6.95 (1H, t, J = 7.6 Hz, H-10), 2.62 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-7), 2.25 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-2), 2.04 (2H, q, J = 7.6 Hz, H-11), 1.57 (4H, m, H-3, H-6), 1.43 (2H, m, H-12), 1.31.21 (14H, m, CH₂), 0.88 (3H, t, J = 6.8 Hz, H-18);

FABMS m/z 395 [M + Na]⁺.

< 실험예 1> 세포배양 및 세포독성 분석

ATCC (Rockville, MD)로부터 구매한 마우스 대식세포 RAW 264.7를 10% (v/v) 열활성화된 태아소혈청, 스트렙토마이신(100 ㎍/mL) 및 페니실린(100 U/mL)을 보강한 Dulbecco’ modified Eagle’ medium (DMEM)에서 배양하였다. 이때, 37℃에서 5% CO₂ 분위기 하에서 배양하였다.

LDH 유출(Lactate dehydrogenase leakage)은 시토졸로부터 배지로 유리된 세포질 LDH의 양으로 세포막 손상 정도를 측정하는 것으로, LDH 활성은 락테이트를 피루베이트로 전환하는 동안 NADH의 생성을 측정하여 결정하였다.

RAW 264.7 세포로부터의 LDH 유리는 세포독성을 감지하기 위해 사용되었고, 각 증식 실험의 마지막에 측정되었다. 즉, 세포 배지는 실온, 12,000 rpm에서 3분 동안 원심분리되어 세포 축적물을 얻었다.

세포 없는 배양배지(50 ㎍/mL)를 모은 후, 암소에서 실온, 30분 동안 세포독성검출 키트[Cyto Tox 96, Non-Radioactive Cytotoxicity Assay, 제조회사: Promega Corporation (Madison, WI, USA), Cat No.: G1780) 50 μL와 배양하였다.

그후, 각 웰에 1 N HCl (50 μL)를 가하여 효소반응을 중지하였다. 각 용액의 흡광도는 ELISA 플레이트리더를 이용하여 490nm에서 측정하였다. 퍼센트 세포 독성은 대조군과 비교한 것이다. 이때, 대조군으로 본 발명의 화합물을 투여하지 않았으며, 본 발명의 화합물은 20 ㎍/mL의 농도로 처리되었다.

그 결과, 하기 표 1 및 도 1에 나타난 바와 같이, 화합물 29 내지 36에 해당하는 브롬 치환된 화합물에서 강한 세포독성을 나타내었다.

화합물 구분	퍼센트 세포 독성 (%)
대조군	0
화합물 9	10.4
화합물 10	8.6
화합물 15	1.3
화합물 16	9.2
화합물 17	9.4
화합물 18	0.4
화합물 19	8.2
화합물 20	7.6
화합물 21	9.8
화합물 22	17.0
화합물 23	13.2
화합물 24	9.7
화합물 25	0.8
화합물 26	2.9
화합물 27	6.0
화합물 28	1.6
화합물 29	37.3
화합물 30	38.6
화합물 31	33.9
화합물 32	41.4
화합물 33	39.8
화합물 34	40.8
화합물 35	30.4
화합물 36	42.4
화합물 37	5.4
화합물 38	0
화합물 39	0
화합물 40	0

< 실험예 2> NO 분석

NO 생성은 잘 알려진 방법(Planta Med., 66, 358-360, 2000)에 따라 그리스 시약(Griess reagent; Sigma, MO)을 이용하여 측정하였다. 즉, 본 발명의 화합물들을 하기 표 2와 같은 농도로 각각 24시간 동안 전처리한 RAW 264.7 세포 1.5X10⁵ cells/ml를 LPS(1 ㎍/mL)로 자극하고, 100 μL의 상등액을 100 μL의 그리스 시약(0.1% 나프틸렌디아민디히드로클로라이드, 1% 설파닐아미드, 2.5% H₃PO₄)과 혼합하였다.

상기 혼합물을 빛이 차단된 실온에서 10분 동안 배양하였다. ELISA 리더(Amersham Pharmacia Biotech, UK)를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였고, 아질산나트륨을 표준물질로 이용한 검량선과 비교하였다.

그 결과, 표 2 및 도 1에 나타난 바와 같이 유의성 있는 NO 생성억제 결과를 얻었다.

화합물 구분	NO 생성 억제 정도 (%)
	20 ㎍/ml	10 ㎍/ml
화합물 9	73.6 ± 0.6	39.8 ± 1.6
화합물 10	84.2 ± 0.9	44.6 ± 0.5
화합물 15	38.8 ± 1.1	9.3 ± 6.9
화합물 16	43.8 ± 0.9	9.2 ± 6.4
화합물 17	67.6 ± 1.1	9.2 ± 6.0
화합물 18	33.4 ± 0.9	10.2 ± 0.9
화합물 19	34.4 ± 1.1	19.6 ± 4.1
화합물 20	86.2 ± 0.3	45.6 ± 2.5
화합물 21	56.4 ± 1.1	24.0 ± 7.1
화합물 22	69.8 ± 9.6	26.8 ± 2.6
화합물 23	97.0 ± 0.3	47.7 ± 0.8
화합물 24	93.6 ± 0.6	22.7 ± 5.3
화합물 25	86.6 ± 0.9	25.4 ± 5.6
화합물 26	82.4 ± 1.1	24.5 ± 6.4
화합물 27	97.6 ± 0.6	43.4 ± 2.1
화합물 28	90.0 ± 0.6	19.1 ± 5.7
화합물 29	94.5 ± 0.2	24.9 ± 1.6
화합물 30	94.5 ± 0.2	43.2 ± 0.6
화합물 31	85.2 ± 0.6	38.7 ± 3.9
화합물 32	97.3 ± 0.5	47.0 ± 3.7
화합물 33	94.7 ± 0.2	51.0 ± 6.2
화합물 34	96.3 ± 0.5	62.9 ± 6.1
화합물 35	94.9 ± 0.1	51.6 ± 2.9
화합물 36	96.5 ± 1.1	97.3 ± 0.1
화합물 37	12.5 ± 0.7	16.9 ± 7.0
화합물 38	18.0 ± 0.5	16.0 ± 3.4
화합물 39	31.9 ± 0.7	9.7 ± 3.9
화합물 40	26.3 ± 0.1	12.2 ± 6.0

<실험예 3> 염증성 사이토카인 생성 측정

IL-6 및 TNF-α 생성에 대한 상기 화합물들의 억제활성을 검토하기 위하여 잘 알려진 방법(Eur. J. Pharmacol., 398, 399-407, 2000)을 이용하였다. 각 화합물을 에탄올에 용해시키고, DMEM으로 희석하였다. 화합물 용매의 최종 농도는 배양 배지에서 0.1%를 초과하지 않도록 하였다. RAW 264.7 세포에서는 이렇게 용해된 용매에서 어떠한 IL-6 및 TNF-α 생성의 변화가 관찰되지 않았다.

LPS (1 ㎍/mL) 자극 및 상기 화합물의 투여 전에 RAW 264.7 세포를 동일 조건 하에서 24 웰 플레이트에서 18시간 동안 배양하였다. 그후, LPS 및 상기 화합물이 각 웰에 첨가되었고, 마우스 ELISA 키트(R & D Systems Inc., MN)를 이용하여 IL-6 및 TNF-α 분석을 하였다.

그 결과, 표 3 및 표 4에 나타난 바와 같이, 유의성 있는 IL-6 생성억제 결과를 얻었다.

화합물 구분	IL-6 생성 억제 정도 (%)
	20 ㎍/ml	10 ㎍/ml
화합물 9	76.4 ± 0.6	37.9 ± 0.3
화합물 10	76.6 ± 0.9	51.3 ± 0.4
화합물 15	63.9 ± 0.6	24.3 ± 0.1
화합물 16	54.1 ± 0.6	19.5 ± 1.4
화합물 17	61.2 ± 0.8	23.6 ± 0.1
화합물 18	51.6 ± 0.6	2.3 ± 0.1
화합물 19	43.3 ± 0.6	18.2 ± 0.3
화합물 20	87.5 ± 0.8	43.3 ± 1.1
화합물 21	99.5 ± 0.3	44.7 ± 0.8
화합물 22	99.2 ± 0.5	63.7 ± 0.5
화합물 23	99.0 ± 0.8	63.4 ± 0.3
화합물 24	99.8 ± 0.9	33.5 ± 0.7
화합물 25	73.7 ± 0.7	32.6 ± 0.2
화합물 26	76.1 ± 0.8	43.6 ± 0.4
화합물 27	79.6 ± 0.8	50.3 ± 0.2
화합물 28	81.2 ± 0.8	32.7 ± 0.3
화합물 29	NT	47.2 ± 2.4
화합물 30	NT	62.6 ± 1.1
화합물 31	NT	53.2 ± 0.4
화합물 32	NT	77.1 ± 0.1
화합물 33	NT	80.9 ± 0.2
화합물 34	NT	91.3 ± 0.1
화합물 35	NT	63.9 ± 0.6
화합물 36	NT	Toxic
화합물 37	N.D.	NT
화합물 38	N.D.	NT
화합물 39	49.9 ± 0.4	NT
화합물 40	39.7 ± 0.3	NT

화합물 구분	TNF-α 생성 억제 정도 (%)
	20 ㎍/ml	10 ㎍/ml
화합물 9	41.0 ± 2.1	24.7 ± 0.1
화합물 10	43.5 ± 0.1	10.9 ± 0.4
화합물 15	32.5 ± 0.8	N.D.
화합물 16	20.9 ± 1.3	N.D.
화합물 17	33.4 ± 0.9	3.14 ± 1.1
화합물 18	48.7 ± 0.8	30.0 ± 0.8
화합물 19	26.9 ± 1.3	16.1 ± 0.3
화합물 20	55.4 ± 0.4	21.1 ± 0.2
화합물 21	86.3 ± 0.9	14.3 ± 0.2
화합물 22	87.0 ± 1.0	31.2 ± 1.0
화합물 23	90.4 ± 0.8	43.01 ± 0.5
화합물 24	91.2 ± 1.1	32.2 ± 0.7
화합물 25	68.6 ± 1.3	18.6 ± 0.4
화합물 26	68.9 ± 1.8	4.8 ± 1.0
화합물 27	71.2 ± 1.6	15.3 ± 0.2
화합물 28	72.2 ± 1.4	22.3 ± 0.3
화합물 29	NT	27.8 ± 0.4
화합물 30	NT	44.8 ± 0.1
화합물 31	NT	14.3 ± 0.1
화합물 32	NT	35.3 ± 0.1
화합물 33	NT	34.9 ± 0.2
화합물 34	NT	47.5 ± 0.1
화합물 35	NT	49.1 ± 0.3
화합물 36	NT	Toxic
화합물 37	18.5 ± 1.3	NT
화합물 38	16.2 ± 1.0	NT
화합물 39	15.9 ± 0.5	NT
화합물 40	16.7 ±2.5	NT

<실험예 4> 독성실험

150±5g의 ICR계 마우스(중앙실험동물)를 각각 3마리씩 3군으로 나누어 실시예에서 제조된 화합물 22를 각각 20 mg/㎏, 10 mg/㎏, 1 mg/㎏의 용량으로 복강투여한 후 24시간 동안 독성여부를 관찰하였다.

그 결과, 3군 모두에서 사망한 예를 전혀 관찰할 수 없었고, 체중 증가, 사료 섭취량 등에서 외견상 대조군과 별다른 증상을 찾아볼 수 없었다.

이하, 본 발명의 화합물을 함유하는 염증질환 치료제의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

<제제예 1> 주사제의 제조

실시예에서 제조된 화합물 22 10 mg, 소디움 메타비설파이트 3.0 mg, 메틸파라벤 0.8 mg, 프로필파라벤 0.1 mg 및 주사용 멸균증류수 적량을 혼합하고 통상의 방법으로 최종 부피가 2㎖이 되도록 제조한 후, 2㎖ 용량의 앰플에 충전하고 멸균하여 주사제를 제조하였다.

<제제예 2> 정제의 제조

실시예에서 제조된 화합물 22 10 mg, 유당 100 mg, 전분 100 mg 및 스테아린산 마그네슘 적량을 혼합하고 통상의 정제 제조방법에 따라 타정하여 정제를 제조하였다.

<제제예 3> 캡슐제의 제조

실시예에서 제조된 화합물 22 10 mg, 유당 50 mg, 전분 50 mg, 탈크 2 mg 및 스테아린산 마그네슘 적량을 혼합하고 통상의 캡슐제 제조방법에 따라 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

<제제예 4> 건강식품의 제조

실시예에서 제조된 화합물 22 0.5 mg, 비타민 혼합물 적량(비타민 A 아세테이트 70 ㎍, 비타민 E 1.0 mg, 비타민 B 1 0.13 mg, 비타민 B 2 0.15 mg, 비타민 B 6 0.5 mg, 비타민 B 12 0.2 ㎍, 비타민 C 10 mg, 비오틴 10 ㎍, 니코틴산아미드 1.7 mg, 엽산 50 ㎍, 판토텐산 칼슘 0.5 mg) 및 무기질 혼합물 적량(황산제1철 1.75 mg, 산화아연 0.82 mg, 탄산마그네슘 25.3 mg, 제1인산칼륨 15 mg, 제2인산칼슘 55 mg, 구연산칼륨 90 mg, 탄산칼슘 100 mg, 염화마그네슘 24.8 mg)을 혼합한 다음 과립을 제조하고 통상의 방법에 따라 건강식품을 제조하였다.

도 1은 본 발명에 따른 화합물의 NO 생성 억제 활성 및 세포 독성의 지표로서 LDH 유리 정도를 나타낸 것이다.

Claims (4)

1. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 염증질환 치료제:

   [화학식 1]

   

   R은 CH₂OH이며,

   R₁ 및 R₂는 H이며,

   m은 1 내지 5의 정수, n은 1 내지 4의 정수임.
2. 삭제
3. 제 1항에 있어서, 상기 화합물은 (E)-11-옥소옥타데카-9-에놀, (E)-10-옥소옥타데카-8-에놀, (E)-9-옥소옥타데카-10-에놀 또는 (E)-8-옥소옥타데카-9-에놀에서 선택된 어느 하나의 화합물인 것을 특징으로 하는 염증질환 치료제.
4. 제 1항에 있어서, 상기 염증질환은 류마티스 관절염, 염증성 장질환, 내독소혈증 및 독성쇼크증후군으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 질환인 것을 특징으로 하는 염증질환 치료제.

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