KR100843168B1 - 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 미백제 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 미백제에 관한 것이다.　 특히 본 발명은 멜라닌 생성 억제와 멜라닌 생성 세포인 멜라노사이트의 증식 억제 효과를 동시에 제공할 수 있는 타이로시네이즈 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 알파-멜라노사이트 자극 호르몬(alpha-melanocyte stimulating hormone) 수용체 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 유효성분으로 포함하는 미백제를 제공한다.
올리고뉴클레오타이드, 미백제

Description

올리고뉴클레오타이드를 포함하는 미백제{WHITENNING AGENT CONTAINING OLIGONUCLEOTIDE}
[발명이 속하는 기술분야]
본 발명은 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 미백제에 관한 것으로, 보다 상세하게는 기미나 주근깨 개선 및 피부 미백제로서 사용이 가능한, 타이로시네이즈와 알파 멜라노사이트 자극 호르몬 수용체에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 관한 것이다.
[종래기술]
사람의 피부색은 피부내 멜라닌(melanin)의 농도와 분포에 따라 유전적으로 결정되나, 태양 자외선이나 피로, 스트레스 등의 환경적 또는 생리적 조건에 의해서도 영향을 받는다. 멜라닌은 아미노산의 일종인 타이로신(tyrosine)에 타이로시네이즈(tyrosinase) 효소가 작용하여 도파(DOPA)를 거쳐 도파퀴논(dopaquinone)으로 변환된 후 효소적 또는 비효소적인 산화 반응을 거쳐 만들어진다.
멜라닌은 피부 기저층에 존재하는 멜라노사이트(Melanocyte)라는 특이적인 세포에서 생성되는데, 이 세포의 활성도에 따라 생성되는 멜라닌의 양이 결정됨으 로써 피부색에 영향을 미칠 수 있는 결정적 인자로 작용한다. 이러한 멜라노사이트의 활성에 영향을 미치는 인자들 중 가장 중요하다고 알려진 것이 바로 알파-멜라노사이트 자극 호르몬(alpha-melanocyte stimulating hormone, alpha-MSH)이다.
알파-MSH는 멜라노사이트의 성장 및 멜라닌 생합성 활성에 직접적인 영향을 주는 호르몬으로, 과거 뇌하수체에서 생산되어 혈관을 통하여 피부에 영향을 미친다고 알려져 왔으나 근래 들어 피부세포(멜라노사이트, 케라티노사이트)에서도 자외선 등의 자극에 의하여 생성되어 피부의 흑화에 중요한 작용을 하는 것으로 확인되었다. 알파-MSH를 사람에게 다량 혈관투여 할 경우 피부색이 검어진다는 연구 결과가 보고된 바 있으며, 여러 인종의 사람으로부터 분리, 배양된 멜라노사이트 역시 알파-MSH에 의하여 세포 증식과 멜라닌 생성이 증가된다고 보고되었다. 이렇듯 알파-MSH는 사람의 평상시 피부색은 물론 자외선 등의 외부자극에 의한 색소침착과정에 있어서도 매우 중요한 역할을 한다. 상기 알파-MSH의 작용은 멜라노사이트의 세포막에 존재하는 알파-MSH 수용체로 알려진 멜라노코르틴-1 수용체(melanocortin-1 receptor; MC1R)를 통하여 이루어진다. ?알파-MSH가 MC1R에 결합하면 수용체와 연결된 아데닐레이트 사이클레이즈(adenylate cyclase)가 활성화되어 세포내 cAMP(cyclic adenosine monophosphate)의 농도가 증가하고, 증가된 cAMP가 신호전달 물질로 작용하여 멜라노사이트의 증식, 멜라닌 합성, 멜라닌의 각화세포(keratinocyte)로의 전달 등의 일련의 과정들이 증가한다.
지금까지 공지된 많은 미백제는 그 작용 기작이 주로 타이로시네이즈 저해제나 산화 방지제 등 멜라닌 색소 생성과정의 하위 기작(downstream)에 초점이 맞추 어져 있다. 그 예로는 하이드로퀴논(hydroquinone)이나 아스코르빈산(ascorbic acid), 코직산(kojic acid), 글루타치온(glutathione)이 있는데, 피부에 자극적이며 제품 안정성이 낮아 사용에 제한이 있으며 그 효과도 미약한 단점이 있다.
최근 타이로시네이즈 등의 유전자발현 조절작용을 갖는 물질에 대한연구가 진행되고 있으나 스크리닝 하기가 쉽지 않을 뿐만 아니라 근본적인 색소침착 억제엔 한계가 있는 실정이다.
상기 종래기술의 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서, 본 발명은 멜라닌 색소 생성 및 멜라노사이트의 세포 증식을 동시에 억제할 수 있으며, 색소 침착에 관여하는 단백질의 발현을 조절할 수 있는 미백제를 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한 본 발명은 피부에 자극적이지 않으며 제품 안정성이 우수한 미백제를 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 타이로시네이즈 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 알파-멜라노사이트 자극 호르몬 수용체 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 유효성분으로 포함하는 미백제를 제공한다.
또한 본 발명은 서열번호 1 내지 18로 기재된 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 올리고뉴클레오타이드를 유효성분으로 포함하는 미백제를 제 공한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 색소 침착에 관여하는 인자들중, 타이로시네이즈 및 알파-멜라노사이트 자극 호르몬 수용체의 발현을 저해하여 멜라닌 생성 및 멜라노사이트의 증식을 동시에 억제할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 및 이의 미백제로의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 미백제는 타이로시네이즈 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및/또는 알파-멜라노사이트 자극 호르몬 수용체 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 유효성분으로 포함한다.
타이로시네이즈 유전자 및 알파-멜라노사이트 자극 호르몬 수용체 유전자는 사람을 비롯한 동물에서 유래된 것일 수 있으며, 바람직하기로는 사람에서 유래된 공지의 유전자일 수 있다.
상기 안티센스 올리고뉴클레오타이드는, mRNA에 상보적인 염기서열을 포함하는 올리고뉴클레오타이드이며, 이의 길이는 15 내지 25 bp일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 길이가 15 bp 미만인 경우 mRNA의 번역을 효과적으로 저해하지 않을 수 있으며, 25 bp 초과하는 경우 세포내 침투가 어려울 수 있다.
일예로, 타이로시네이즈 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 GeneBank accession no. Y00819에 기재된 서열에 대한 mRNA에 상보적인 15 내지 25 bp의 뉴클레오타이드일 수 있으며, 바람직하기로는 서열번호 1 내지 9로 기 재한 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택된 것일 수 있다. 알파-멜라노사이트 자극 호르몬 수용체 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 GeneBank accession no. BC007856에 기재된 서열에 대한 mRNA에 상보적인 15 내지 25 bp의 뉴클레오타이드일 수 있으며, 바람직하기로는 서열번호 10 내지 18로 기재한 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택된 것일 수 있다.
본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 화학적으로 합성된 것 일수 있으며, 생체내 안정성을 더욱 증강시키기 위하여 포스포로티오에이트 형태로 합성된 것 일 수 있다.
본 발명에 따른 미백제는 유효성분으로 타이로시네이즈 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 알파-멜라노사이트 자극 호르몬 수용체 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함할 수 있으며, 바람직하기로는 타이로시네이즈 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 멜라닌 합성 억제 효과가 우수하고, 알파-멜라노사이트 자극 호르몬 수용체 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 멜라노사이트의 증식 억제 효과가 탁월하므로, 타이로시네이즈 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드와 알파-멜라노사이트 자극 호르몬 수용체 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 유효성분으로 포함할 수 있다.
상기 유효성분의 함량은 건조중량으로 0.00001 내지 10.0중량%일 수있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 다만 유효성분의 함량이 0.00001 중량% 미만인 경우 미백효과가 미비할 수 있으며, 10.0 중량% 초과하는 경우 사용량 대비 효과가 미비할 수 있다. 바람직하기로는 유효성분의 함량이 0.001 내지 1.0 중량% 일수 있다.
상기 유효성분으로 타이로시네이즈 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드와 알파-멜라노사이트 자극 호르몬 수용체 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 함께 사용하는 경우, 이의 혼합비율은 1: 0.1 내지 10 중량비일 수 있다.
본 발명의 미백제는, 멜라닌 합성을 저해하며 동시에 멜라노사이트증식을 억제할 수 있으며, 피부에 자극을 유발하지 않는 안전한 시료이다.
본 발명은 타이로시네이즈 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및/또는 알파-멜라노사이트 자극 호르몬 수용체 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 유효성분으로 포함하는 미백용 약제를 제공한다. 상기 미백용 약제는 상기 1종이상의 안티센스 올리고뉴클레오타이드만을 단독으로 포함할 수도 있으나, 제형 및 사용방법에 따라 약리학적으로 허용가능한 부형제를 더욱 포함할 수 있다. 부형제를 더욱 포함하는 경우, 상기 유효성분의 함량은 건조중량으로 0.00001 내지 10.0중량%일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 다만 유효성분의 함량이 0.00001 중량% 미만인 경우 미백효과가 미비할 수 있으며, 10.0 중량% 초과하는 경우 사용량 대비 효과가 미비할 수 있다. 바람직하기로는 유효성분의 함량이 0.001 내지 1.0 중량% 일수 있다.
상기 혼합가능한 부형제로는, 글리세린, 전분, 유당, 물, 알코올, 프로필렌글리콜, 살리실산, 다히아드로초산 및 생리식염수가 있으나 이에 한정되는 것은 아 니다.
미백용 약제는 경구 또는 비경구로 사용될 수 있으며, 바람직하기로는 경피 투여이다. 미백용 약제의 제형은 사용방법에 따라 적절히 조절할 수 있으며, 그 예로는 경고제(PLASTERS), 과립제(GRANULES), 로션제(LOTIONS), 산제(POWDERS), 시럽제(SYRUPS), 액제(LIQUIDS AND SOLUTIONS), 에어로솔제(AEROSOLS), 연고제(OINTMENTS), 유동엑스제(FLUIDEXTRACTS), 유제(EMULSIONS), 현탁제(SUSPESIONS), 침제(INFUSIONS), 정제(TABLETS), 주사제(INJECTIONS), 캅셀제(CAPSULES) 및 환제(PILLS) 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 
미백용 약제의 투여량은 사용목적, 부위, 방법, 환자의 연령, 성별, 상태, 체내에서 활성 성분의 흡수도, 불활성율 및 병용되는 약물을 고려하여 결정하는 것이 좋으며, 예컨대 1일 유효성분을 기준으로 하였을 때 0.0001 ㎎/㎏(체중) 내지 500 ㎎/㎏(체중)으로 투여할 수 있다.
또한 본 발명은 타이로시네이즈 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및/또는 알파-멜라노사이트 자극 호르몬 수용체 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 유효성분으로 포함하는 미백용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 화장료 조성물은 1종이상의 유효성분을 건조중량으로 0.00001 내지 10.0중량%일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 다만 유효성분의 함량이 0.00001 중량% 미만인 경우 미백효과가 미비할 수 있으며, 10.0 중량% 초과하는 경우 사용량 대비 효과가 미비할 수 있다. 바람직하기로는 유효성분의 함량이 0.001 내지 1.0 중량% 일수 있다. 상기 유효성분으로 타이로시네이즈 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드와 알파-멜라노사이트 자극 호르몬 수용체 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 함께 사용하는 경우, 이의 혼합비율은 1: 0.1 내지 10 중량비일 수 있다.
상기 화장료 조성물은, 상기 유효성분 이외에, 통상의 화장품에 사용가능한 모든 종류의 성분, 예컨대 부형제, 희석제 등을 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은, 기초화장품, 메이크업 화장품, 바디 화장품, 두발용 화장품, 두피용 화장품, 면도용 화장품 또는 구강용 화장품의 용도로 제공될 수 있다. 상기 기초화장품의 예로는 크림, 화장수, 팩, 마사지 크림, 유액 등이 있으며, 상기 메이크업 화장품으로는 파운데이션, 메이크업 베이스, 립스틱, 아이새도, 아이라이너, 마스카라, 아이브로우 펜슬 등이 있으며, 바디 화장품으로는, 비누, 액체 세정제, 입욕제, 선스크린 크림, 선 오일 등이 있으며, 두발용 화장품으로는 샴푸, 린스, 헤어 트리트먼트, 헤어 무쓰, 헤어 리퀴드, 포마드, 헤어 칼라제, 헤어 블릿치제, 칼라 린스가 있으며, 두피용 화장품으로는 헤어 토닉, 스칼프 트리트먼트가 있으며, 면도용 화장품으로는 애프터셰이브로션, 셰이빙 크림 등이 있으며, 구강용 화장품으로는 치약, 마우스 워셔 등이 있다.
이하 본 발명의 실시예를 기재한다.  하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 
실시예 1-18: 멜라닌 합성을 저해하는 올리고뉴클레오타이드 합성
서열번호 1 내지 18의 총 18개의 올리고뉴클레오타이드를 각각 주식회사 바이오니아에의뢰하여 합성하였으며, 생체내 안정성을 높이기 위하여 포스포로티오에이트(phosphorothioate) DNA로 합성하였다. 제조된 각각의 올리고뉴클레오타이드를 실시예 1 내지 18로 하였다. 서열번호 1 내지 9는 타이로시네이즈 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드이고 서열번호 10 내지 18은 알파-멜라노사이트 자극 호르몬 수용체 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드이다.
서열번호 1: caggaacctctgcctgaaag
서열번호 2: gcccagatctttggatgaaa
서열번호 3: ctatgccaaggcagaaaagc
서열번호 4: attgtgcatgctgctttgag
서열번호 5: ctccacagcaggcagtacaa
서열번호 6: ggtgcattggacagaaggat
서열번호 7: atcccatgaagttgccagag
서열번호 8: tgaggagtggctgcttttct
서열번호 9: agcccagatctttggatgaa
서열번호 10: aggaagagcccgtcagagat
서열번호 11: gaagcaggaaggagtcgttg
서열번호 12: ccagcatagccaggaagaag
서열번호 13: acagttcttcccctccaggt
서열번호 14: agttcttcccctccaggtgt
서열번호 15: atggagatgtagcggtccac
서열번호 16: agtgcccagtctgagcctta
서열번호 17: gctgtgggagtagctcttgg
서열번호 18: gcagaggacgatgagtgtga
실험예 1: 멜라닌 합성 저해 효과 및 멜라노사이트 증식 저해 효과 검증
실시예 1 내지 18의 올리고뉴클레오타이드 각각을 사람의 정상 멜라노사이트 세포의 배양액에 첨가하여 멜라닌 합성에 대한 저해효과와 세포증식에 대한 저해효과를 실험하였다.
사람의 정상 멜라노사이트를 24 웰 배양용기에 2배수로 접종(2 x 104 cell/well)한 후 3일간 배양하였다. 배지는 실시예 1 내지 18을 최종농도 2 uM로 첨가하여 교체한 후 2일간 더욱 배양하였다. 이때 멜라닌의 합성을 측정하기 위하여, 한 개의 배양용기는 방사성 동위원소 14C-타이로신을 각 웰당 0.2 uCi씩 첨가하였으며, 세포의 증식을 측정하기 위하여 다른 한 개의 배양용기에는 방사성 동위원소 3H-티민을 각 웰 당 1 uCi씩 첨가하였다. 2일 후 배지를 제거하고, 세포를 PBS로 씻어준 후 세포에 삽입된 동위원소의 양을 방사선 측정기(베타-counter)를 이용하여 측정하였다. 측정값은 CPM이며 저해율은 하기 계산식 1로 계산한 후, 그 결과는 하기 표 1에 나타내었다.
(계산식 1)
저해율 = (대조군 - 실험군)/대조군 X 100
(표 1)
실시예 14C CPM+ Std1 멜라닌합성 저해율% 3H CPM+ Std1 세포증식 저해율%
대조군 66034+ 1972 - 11146+ 364 -
실시예1 28394+ 1335 57 10958+ 554 -
실시예2 29715+ 1213 55 11095+ 382 -
실시예3 29055+ 1261 56 11175+ 625 -
실시예4 27734+ 1118 58 11302+ 289 -
실시예5 31035+ 1808 53 12013+ 520 -
실시예6 29702+ 1696 55 10968+ 422 -
실시예7 32356+ 1337 51 11333+ 585 -
실시예8 30375+ 1682 54 11668+ 564 -
실시예9 29736+ 1560 55 10992+ 423 -
실시예10 53487+ 3460 19 3901+ 364 65
실시예11 52166+ 3125 21 4458+ 253 60
실시예12 52827+ 2998 20 4012+ 389 64
실시예13 51506+ 2658 22 4130+ 193 63
실시예14 54147+ 3251 18 4346+ 331 61
실시예15 54808+ 3005 17 4578+ 292 59
실시예16 50846+ 3555 23 4235+ 236 62
실시예17 51490+ 2993 22 4226+ 263 62
실시예18 52820+ 2873 20 4569+ 381 59
* n = 3
표 1에 나타낸 바와 같이, 실시예 1 내지 9의 올리고뉴클레오타이드는 2 uM 처리농도에서 51 내지 57 %의 멜라닌 합성을 저해하며, 세포증식에는 별다른 영향을 미치지 않는다. 그러나 실시예 10 내지 18은 멜라닌 합성에 대해서는 약 20 % 수준의 약한 저해를 보이나, 세포의 증식은 59 % 내지 65 %로 저해한다.
실험예 2: 올리고뉴클레오타이드간의 혼합 사용시 효과 검증
멜라닌 합성 저해 효과가 우수한 실시예 1 내지 9의 올리고뉴클레오타이드와, 멜라노사이트 증식 억제 효과가 우수한 실시예 10 내지 18의 올리고뉴클레오타이드를 각각 동일 농도비로 혼합하여 세포에 최종농도 2uM로 처리한 다음 실험예 1과 동일한 방법으로 멜라닌 합성 저해율과 세포증식 저해율을 각각 측정하였다. 그 결과는 하기 표 2에 나타낸다.
(표 2)
실시예 14C CPM+ Std1 멜라닌합성 %저해율 3H CPM+ Std1 세포증식 % 저해율
대조군 66034+ 1972 - 11146+ 364 -
실시예1 + 실시예10 9905+ 935 85 3853+ 364 65
실시예3 + 실시예13 8584+ 661 87 4030+ 193 63
실시예5 + 실시예15 12546+ 1308 81 4562+ 292 59
n = 3
표 2에서, 멜라닌 합성 저해율이 우수한 실시예 1 내지 9와 세포증식 억제효과가 우수한 실시예 10 내지 18를 혼합사용하는 경우, 멜라닌 합성 저해율이 현저히 증가되며 그와 동시에 멜라노사이트의 세포 증식 역시 억제된다.
실시예 19: 피부 외용 연고 제조
하기 표 3의 조성(단위: 중량%)로 피부 외용 연고를 제조하였다.
(표 3)
조성물 중량 %
실시예 1 실시예 10 디에틸 세바케이트 경납 폴리옥시에틸렌올레일에테르포스페이트 벤조산 나트륨 바셀린 0.05 0.05 8 5 6 적량 to 100
실시예 20: 화장료(크림) 제조
하기 표 4의 조성(단위: 중량%)으로 크림을 제조하였다.
(표 4)
조성물 중량 %
실시예 2 실시예 13 스테아린산 세탄올 피이지-20 소비탄 모노스테아레이트 소비탄 모노스테아레이트 미네랄 오일 트리옥타노에이트 트리에탄올아민 카보머 글리세린 프로필렌글리콜 방부제 향 정제수 0.1 0.1 1.0 2.0 1.0 1.0 10.0 5.0 0.5 0.2 5.0 3.0 적량 적량 to 100
실시예 21: 화장료(유연화장수) 제조
하기 표 5의 조성(단위: 중량%)로 유연화장수를 제조하였다.
(표 5)
조성물 중량%
실시예 5 실시예 15 에탄올 폴리옥시에틸렌경화피마자유 파라옥시안식향산메칠 글리세린 1,3-부틸렌글리콜 향 색소 정제수 0.02 0.02 10.0 1.0 2 5.0 6.0 적량 적량 to 100
실시예 22: 화장료(에센스) 제조
하기 표 6의 조성(단위: 중량%)으로 에센스를 제조하였다.
(표 6)
조성물 중량%
실시예 1 실시예 11 프로필렌글리콜 글리세린 히아루론산나트륨수용액(1%) 에탄올 폴리옥시에틸렌경화피마자유 파라옥시안식향산메칠 카보머 트리에탄올아민 향 정제수 0.2 0.2 10.0 10.0 5.0 5.0 1.0 0.1 0.3 0.4 적량 to 100
실시예 23: 화장료(팩) 제조
하기 표 7의 조성(단위: 중량%)으로 팩을 제조하였다.
(표 7)
조성물 중량%
실시예 6 실시예 16 글리세린 프로필렌글리콜 폴리비닐알코올 에탄올 폴리옥시에틸렌경화피마자유 폴리옥시에틸렌올레일에칠 파라옥시안식향산메칠 향 색소 정제수 0.01 0.01 5.0 4.0 15.0 8.0 1.0 1.0 0.2 적량 적량 to 100
실시예 24: 화장료(영양화장수) 제조
하기 표 8의 조성(단위: 중량%)으로 영양화장수를 제조하였다.
(표 8)
조성물 중량%
실시예 7 실시예 10 폴리옥시에틸렌경화피마자유 파라옥시안식향산메칠 글리세린 1,3-부틸렌글리콜 카보머 트리에탄올아민 프로필렌글리콜 에탄올 카르복시비닐폴리머 색소 향 정제수 0.03 0.03 1.0 적량 6.0 5.0 0.2 0.3 5.0 3.2 0.1 적량 적량 to 100
비교예 1 내지 6
하기 표 9 내지 14의 조성(단위: 중량%)으로 피부 외용 연고, 크림, 유연화장수, 에센스, 팩, 영양화장수를 각각 제조하였다.
(표 9)
비교예 1, 피부 외용 연고 중량%
실시예 1 실시예 10 디에틸 세바케이트 경납 폴리옥시에틸렌올레일에테르포스페이트 벤조산 나트륨 바셀린 - - 8 5 6 적량 to 100
(표 10)
비교예 2, 크림 중량%
실시예 2 실시예 13 스테아린산 세탄올 피이지-20 소비탄 모노스테아레이트 소비탄 모노스테아레이트 미네랄 오일 트리옥타노에이트 트리에탄올아민 카보머 글리세린 프로필렌글리콜 방부제 향 정제수 - - 1.0 2.0 1.0 1.0 10.0 5.0 0.5 0.2 5.0 3.0 적량 적량 to 100
(표 11)
비교예 3, 유연화장수 중량%
실시예 5 실시예 15 에탄올 폴리옥시에틸렌경화피마자유 파라옥시안식향산메칠 글리세린 1,3-부틸렌글리콜 향 색소 정제수 - - 10.0 1.0 2 5.0 6.0 적량 적량 to 100
(표 12)
비교예 4, 에센스 중량%
실시예 1 실시예 11 프로필렌글리콜 글리세린 히아루론산나트륨수용액(1%) 에탄올 폴리옥시에틸렌경화피마자유 파라옥시안식향산메칠 카보머 트리에탄올아민 향 정제수 - - 10.0 10.0 15.0 5.0 1.0 0.1 0.3 0.4 적량 to 100
(표 13)
비교예 5, 팩 중량%
실시예 6 실시예 16 글리세린 프로필렌글리콜 폴리비닐알코올 에탄올 폴리옥시에틸렌경화피마자유 폴리옥시에틸렌올레일에칠 파라옥시안식향산메칠 향 색소 정제수 - - 5.0 4.0 15.0 8.0 1.0 1.0 0.2 적량 적량 to 100
(표 14)
비교예 6, 영양화장수 중량%
실시예 7 실시예 10 폴리옥시에틸렌경화피마자유 파라옥시안식향산메칠 글리세린 1,3-부틸렌글리콜 카보머 트리에탄올아민 프로필렌글리콜 에탄올 카르복시비닐폴리머 색소 향 정제수 - - 1.0 적량 6.0 5.0 0.2 0.3 5.0 3.2 0.1 적량 적량 to 100
실험예 3: 미백효과 검증
건강한 남자 40명을 실험대상자로 선별하고, 이들을 2그룹으로 나누었다. 한쪽 팔 상박부에 1.5㎝ x 1.5㎝ 의 크기 3개씩 2줄의 구멍이 뚫린 알루미늄 호일을 덮은 후 각 구멍의 위치를 표시하였다. 제 1그룹 실험자들은 한 줄 3곳에는 실시예 19 내지 21을, 다른 줄에는 비교예 1 내지 3을 1일 2회로 2주간 도포하였다. 또한 제2그룹은 실시예 22 내지 24를, 다른줄에는 비교예 4 내지 6을 동일한 방법으로 도포하였다. 2주일 후, 70% 에탄올로 잘 세척한 다음 일광조사기(ORIEL Solar Simulator 1000W)를 이용하여 50㎝ 거리에서 120 mJ/㎠ 의 광량을 조사하였다. 자외선 조사 후 같은 위치에 같은 시료를 1일 2회, 4주간 계속 도포하였다. 4주후에 육안으로 색소 침착의 정도를 비교예와 비교하였다. 판정기준은 현저한 저해효과, 약간의 저해효과, 저해효과 없음의 3단계로 평가하였다. 그 결과는 하기 표15에 나타낸다.
(표 15)
시료 현저한 저해 효과 있음(명) 약간의 저해 효과 있음(명) 저해 효과 없음(명)
실시예 19 7 10 3
실시예20 5 11 4
실시예21 9 8 3
실시예22 10 7 3
실시예23 8 6 4
실시예24 5 11 4
표 15의 결과로부터, 실험대상자 20면에서 최소 16명 이상에서 미백효과가 검증되었다. 또한 상기 실험실시시 실험대상자들에서 피부 부작용이 관찰되지 않아, 안전한 시료임을 확인하였다.
이상 살펴본 바와 같이, 본 발명의 타이로시네이즈의 mRNA및 멜라노사이트 자극 호르몬 수용체의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오는 멜라닌 생성을 억제하며 동시에 멜라닌 생성 세포인 멜라노사이트의 증식을 억제함으로써, 현저한 미백효과를 제공한다.
서열목록 전자파일 첨부

Claims (8)

  1. 삭제
  2. 삭제
  3. 서열번호 1 내지 9로 기재된 염기서열로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택된 타이로시네이즈 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 및
    서열번호 10 내지 18로 기재된 염기서열로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택된 알파-멜라노사이트 자극 호르몬(alpha-melanocyte stimulating hormone) 수용체 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드
    로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 포함하는 미백제.
  4. 제3항에 있어서, 상기 미백제는 타이로시네이즈 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 알파-멜라노사이트 자극 호르몬 수용체 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 1: 0.1 내지 10 중량비율로 포함하는 것인 미백제.
  5. 서열번호 1 내지 18로 기재된 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 올리고뉴클레오타이드를 유효성분으로 포함하는 미백제.
  6. 제3항 또는 제 5항에 있어서, 상기 미백제는 화장료인 미백제.
  7. 제3항 또는 제 5항에 있어서, 상기 미백제는 상기 유효성분을 건조중량으로 0.00001 내지 10.0중량%로 포함하는 것인 미백제.
  8. 제3항 또는 제 5항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오타이드는 포스포로티오에이트(phosphorothioate) 올리고뉴클레오타이드인 미백제.
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