KR100840452B1

KR100840452B1 - 신규한 투석 방법

Info

Publication number: KR100840452B1
Application number: KR1020017008703A
Authority: KR
Inventors: 군나르 파거
Original assignee: 아스트라제네카 아베
Priority date: 1999-01-11
Filing date: 2000-01-11
Publication date: 2008-06-20
Also published as: DE60025698D1; CA2356440A1; JP2002534217A; IL143824A0; CN100387296C; NO326996B1; NO20013301L; JP4054533B2; US20090192137A1; CN1354673A; AU763185B2; ES2255968T3; AU2140900A; ATE316384T1; SE9900043D0; US20080004225A1; EP1144000A1; WO2000041715A1; KR20010093250A; US20030042202A1

Abstract

치료를 필요로 하는 환자의 투석, 특히 혈액투석에 의한 치료를 위한 의약의 제조에 있어서 트롬빈 억제제가 투석 용액에 제공되는 저분자량 트롬빈 억제제의 용도, 그리고 멜라가트란과 같은 저분자량 트롬빈 억제제를 포함하는 투석 용액 및 농축물이 제공된다.

저분자량 트롬빈 억제제, 혈액투석, 투석 용액, 멜라가트란

Description

신규한 투석 방법 {New Dialysis Method}

본 발명은 트롬빈 억제제, 특히 저분자량 트롬빈 억제제의 신규한 용도에 관한 것이다.

<서론>

혈액투석은 신장 이상 또는 신부전증 환자의 혈액으로부터 폐 산물 및 독소를 제거하는 방법이다. 혈액은 인공 동정맥루공, 또는 일시 또는 영구의 내부 카테터를 통하여 순환계로부터 분리되고 되돌려지고, "인공 신장" 또는 투석기를 통과한다.

투석기는 고안 및 성능면에서 다양하지만, 모두 투석막과 투석 용액을 포함한다. 이 용액은 염화나트륨, 염화칼륨, 염화마그네슘, 염화칼슘 및 아세트산을 포함하는 필수 전해질 염 및 완충제를 함유할 수 있다. 농도는 전해질 불균형에 대하여 정상 상태로 회복할 목적에 따라 (때때로, 각 환자의 개인별로) 주의 깊게 선택된다.

글루코스, 중탄산나트륨, 락트산 및 EDTA를 함유할 수도 있는 투석 용액은 멸균의 피로겐-무함유 물을 사용하여 농축된 스톡 (투석 농축물)의 주의깊게 조절된 희석으로 제조되거나, 또는 직접 사용가능한 형태로 제공될 수 있다.

투석에서, 독소는 투석막을 통한 확산에 의하여 제거되어, 혈액이 정상 상태 로 복구된다. 그러나, 상기 과정은 규칙적인 간격으로 반복되어야만 한다 (예를 들면, 4시간 내지 6시간의 치료 기간으로 1주일에 2 내지 3회).

만성 신부전증 환자의 혈액투석에서, 투석막과 혈액 라인에서 일어날 수 있는 자연적인 혈액 응고 과정은 불충분한 여과 및(또는) 투석 기간의 조급한 종결을 포함하여 중요한 문제들을 발생시킨다.

이러한 문제를 방지하기 위하여 현재 가장 폭넓게 사용될 수 있는 방법은 항응고제의 비경구적 단회(bolus) 용량의 예비투여를 포함한다. 항응고 화합물은 헤파린일 수 있으며, 이는 미분획 (UH; MW 대략 5,000 내지 30,000) 또는 저분자량 (LMWH; MW 약 4,000) 형태로 사용될 수 있다. 헤파린 볼루스의 정맥내 투여는 통상적으로 투석이 수행되기 전에 행하여진다.

헤파린의 예비 투여가 상기 언급된 것과 같은 문제를 완화시킬 수 있지만, 전적으로 만족스러운 해법은 아니며, 실제로 추가의 문제들이 종종 관찰된다. 예를 들면, 개별적인 환자에 따라 사용될 수 있는 헤파린의 유효 투여량은 각각 출혈, 또는 투석막과 혈액 라인에서의 혈병 형성을 일으킬 수 있는 과투여 또는 저투여를 피하기 위해 적정에 의해 미리 결정되어야만 한다. 따라서, 투여량이 잘못되면 심각한 출혈 또는 투석 기간의 조급한 종결을 초래할 수 있다. 더욱이, 헤파린은 투석 필터를 통하여 빠져나갈 수 있으며, 그의 항응고 효과가 투석 과정 동안 감소되어 투석 누공 또는 카테터의 혈전성 폐색을 초래할 수 있다. 더욱이, 헤파린 유도성 혈소판감소증은 만성 신부전증 환자의 3%에서 발생하며, 헤파린 유도성 골다공증도 또한 일부 환자에서 발생할 수 있다고 알려져 있다. 저분자량 헤파린은 또한 값이 비싸다 (일반 헤파린보다 최대 10배 더 비싸다).

따라서, 투석, 특히, 혈액투석동안 더욱 안전하며, 더욱 신뢰성있고, 더욱 효과적인 항응고 효과를 제공할 수 있는 대안적인 방법이 필요하다.

국제 특허 출원 WO 94/29336은 트롬빈 억제제, 그에 따라 항응고제로서 유용한 화합물을 일반적이고 구체적으로 개시한다. 구체적으로 언급된 트롬빈 억제 화합물에는 멜라가트란으로 공지된 HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-H이 포함된다 (WO 94/29336 및 그 안의 약어 목록 참조). 혈액투석은 개시된 화합물이 유용한 것으로 설명된 많은 적응증 중 하나로 언급된다.

프랑스 특허출원 FR 2 687 070는 특히 나트륨 헤파리네이트를 포함하는 투석 농축물을 개시한다. 저분자량 트롬빈 억제제의 사용은 언급되지 않았다.

본 발명자들은 놀랍게도 혈액투석과 같은 투석에 앞서 및(또는) 투석 중에 저분자량 트롬빈 억제제를 투석 용액에 첨가함으로써 상기 언급된 문제가 해결될 수 있다는 것을 발견하였다.

본 발명의 첫 번째 관점에 따라, 투석, 특히 혈액투석에 의한 치료를 필요로 하는 환자의 치료용 의약의 제조에 있어서 저분자량 트롬빈 억제제가 투석 용액에 제공되는 저분자량 트롬빈 억제제의 용도를 제공한다.

"투석에 의한 치료를 필요로 하는" 환자의 치료란, 만성 및(또는) 급성 신부 전증을 포함하여 신장 합병증 및(또는) 신부전증을 초래할 수 있는 질환을 갖는 환자의 치료적 및(또는) 예방적 처치를 포함하여, 예를 들면 신장 합병증 환자의 치료적 및(또는) 예방적 처치 (즉, 투석중 (적어도 부분적으로는 체외일 수 있는) 치료적 및(또는) 예방적 항응고 효과의 제공)를 포함한다. 또한, 상기 용어는 기관 손상, 심각한 대사 장애 및(또는) 사망을 초래할 수 있는 화합물에 의한 중독 환자의 치료적 및(또는) 예방적 처치를 포함한다.

본 발명자들은 특히 놀랍게도 저분자량 트롬빈 억제제가 투석 용액에 제공될 때, 이들은 투석막을 자유롭게 통과하고, 따라서 고도의 예견가능하고, 재현가능하며 안정적인 농도의 항응고제를 투석 기간 내내 막의 환자측, 이에 따라 환자에 제공할 수 있다는 것을 발견하였다.

따라서, 저분자량 트롬빈 억제제는 투석에 직접 사용할 수 있는 투석 용액의 부분으로서 제공될 수 있다 (즉, 투석기에 직접 사용할 수 있는 투석 용액에 억제제를 용해, 또는 분산함으로써). 그러나, 본 발명자들은 저분자량 트롬빈 억제제가, 투석 용액의 일부로서 사용되기 전에 적절한 수단에 의하여 희석되는 투석 농축물의 부분으로서 제공되는 것을 선호한다.

본 발명자들은 저분자량 트롬빈 억제제가 표준 투석, 예를 들면 혈액투석의 농축물과 함께 사용될 수 있다는 유리한 사실을 발견하였다. 언급될 수 있는 "표준" 투석 농축물에는 당업자에게 공지된 임의의 현재 (예를 들면, 상업적으로) 이용가능한 농축물이 포함되나, 또한 투석 농축물로서 사용될 수 있는, 즉, 그러한 사용을 가능하게 하는데 필요한 특성을 부여하는 성분을 포함하는 임의의 약학 조 성물을 포함한다. 당업자는 제제를 투석 농축물로 사용할 수 있게 하는데 필요한 특성에는 예를 들면 멸균의 피로겐 무함유 물을 사용한 희석시 270 내지 300 mOsm/L, 바람직하게는 280 내지 295 mOsm/L의 삼투몰농도를 가질 수 있는 적절한 투석 용액이 형성될 수 있게 하며, 이 용액과 혈액 사이에 내인성으로 축적된 이온의 지배적인 질량 수송은 투석 용액쪽으로, 내인성으로 고갈된 이온의 지배적인 질량 수송은 반대 방향으로 향하게 하는 이온의 몰 구배를 제공할 수 있는 특성이 포함된다는 것을 인식할 것이다. 따라서, 생성된 투석 용액은 135 내지 142 mmol/L의 Na⁺ 이온, 0 내지 2 mmol/L의 K⁺ 이온, 1.25 내지 2 mmol/L의 Ca²⁺ 이온, 0.5 내지 1 mmol/L의 Mg²⁺ 이온, 107 내지 115 mmol/L의 Cl^- 이온을 포함할 수 있으며, 또한 2 내지 35 mmol/L의 아세테이트 이온, 0 내지 38 mmol/L의 HCO₃ ^- 이온, 0 내지 6 mmol/L의 글루코스 뿐만 아니라 EDTA 및 락테이트를 함유할 수 있다. 당업자들은 또한 적합한 농축물이 산- 및(또는) 알칼리-완충될 수 있으며, 생성된 용액에 상기 언급된 특성을 부여하는 데 사용될 수 있고(거나) 체액의 축적을 포함하여 신부전증과 관련될 수 있는 문제를 회피할 수 있도록 하는 다른 성분을 포함할 수 있다는 것을 인식할 것이다.

저분자량 트롬빈 억제제를 포함하는 투석 농축물은 당업자에게 공지된 기술에 따라 트롬빈 억제제 또는 이러한 억제제를 포함하는 제제를 투석 농축물의 다른 성분과 혼합함으로써 제조될 수 있다. 생성된 농축물은 공지된 기술에 따라 표준 투석기에 사용될 수 있다.

저분자량 트롬빈 억제제를 포함하는 투석 농축물은 투석에 사용하기 위해 트롬빈 억제제를 함유하는 형태로 제공되거나, 또는 (a) 저분자량 트롬빈 억제제를 포함하는 제제 및 (b) 투석 농축물을 포함하는 투석에 사용하기 위한 키트로 제공될 수 있다.

저분자량 트롬빈 억제제는 이러한 키트에 사용하기 위해 투석 농축물과 용이하게 혼합될 수 있는 제제, 예를 들면 억제제 그 자체 (예를 들면, 고체 형태), 또는 억제제가 용해되거나 균일하게 분산된 농축물을 얻기 위해 농축물과 혼합될 수 있는 제약상 허용되는 담체에 예비 용해 또는 예비 분산된 제제로 제공될 수 있다.

키트에 사용하기 위한 적합한 투석 농축물은 바람직하게는 상기 언급된 것을 포함하나, 또한 키트의 다른 성분에 사용되는 것과 동일한 또는 상이한 트롬빈 억제제 일정량을 포함할 수 있다.

본 발명의 또 다른 관점에 따라, 저분자량 트롬빈 억제제를 포함하는 투석 농축물이 제공된다.

용어 "저분자량 트롬빈 억제제"는 당업자에게 이해될 수 있다. 상기 용어는 또한 생체내 및(또는) 시험관내 시험에서 실험적으로 측정될 수 있는 정도로 트롬빈을 억제하며, 2,000 미만, 바람직하게는 1,000 미만의 분자량을 갖는 물질의 임의의 조성물 (예, 화합물), 또는 본 발명의 내용상 이러한 조성물/화합물의 전구약물을 포함하는 것으로 이해될 수 있다.

바람직한 저분자량 트롬빈 억제제에는 저분자량 펩티드-, 아미노산-, 및(또 는) 펩티드 유사체-기재 트롬빈 억제제가 포함된다.

용어 "저분자량 펩티드-, 아미노산-, 및(또는) 펩티드 유사체-기재 트롬빈 억제제"는 당분야의 숙련자에게는 1 내지 4개의 펩티드 연결을 갖고(갖거나), 분자량이 1000 미만인 트롬빈 억제제, 및 본 발명의 내용상 트롬빈 억제제의 전구약물을 포함하는 것으로 잘 이해되며, 클래슨의 평론 논문(Blood Coagul. Fibrin. (1994) 5, 411)에서 설명된 화합물 (활성 트롬빈 억제제, 및 적절하다면 활성 트롬빈 억제제의 전구 의약) 뿐만 아니라, 미국특허 제4,346,078호; 국제 특허출원 WO 93/11152, WO 95/23609, WO 93/05069, WO 97/46577, WO 98/01422, WO 95/35309, WO 96/25426, WO 94/29336, WO 93/18060, WO 95/01168, WO 97/23499, WO 97/02284, WO 97/46577, WO 96/32110, WO 98/06740, WO 97/49404, WO 98/57932, WO 99/29664, WO 96/31504, WO 97/11693, WO 97/24135 및 WO 97/47299 및 유럽 특허출원 648 780, 468 231, 559 046, 641 779, 185 390, 526 877, 542 525, 195 212, 362 002, 364 344, 530 167, 293 881, 686 642, 669 317, 601 459, 623 596, 796 271 및 809 651에서 개시된 화합물을 포함하며, 상기 문헌들 모두에 개시된 것이 본원에 참고로 도입된다.

바람직한 저분자량 펩티드-기재 트롬빈 억제제에는 집합적으로 "가트란"으로 공지된 것이 포함된다. 언급될 수 있는 특정 가트란에는 HOOC-CH₂-(R)Cha-Pic-Nag-H (이노가트란으로 공지; 국제 특허출원 WO 93/11152 및 그 안의 약어 목록 참조) 및 HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-H (멜라가트란으로 공지; 국제 특허출원 WO 94/29336 및 그 안의 약어 목록 참조), 및 본 발명의 내용상 멜라가트란의 전구약물 (예를 들면, WO97/23499 참조)이 포함된다. 특히 바람직한 트롬빈 억제제에는 멜라가트란이 포함된다.

트롬빈 억제제, 또는 트롬빈 억제제를 포함하는 투석 농축액이 전체 투석 기간에 걸쳐 투석막을 가로질러 조절된 속도로 환자에게 약물을 전달할 수 있는 적절한 양으로 투석 용액 (농축물의 경우, 적절한 양의 물 (예를 들면, 피로겐 무함유 멸균수)을 사용한 희석에 이어서)에 제공될 수 있다. 이것은 투석 용액의 입구 튜브로의 일정한 주입을 포함할 수 있다.

투석 농축물 및(또는) 투석 용액에서 저분자량 트롬빈 억제제의 적합한 농도는 사용되는 트롬빈 억제제 (및(또는) 그러한 억제제의 전구약물), 치료될 질환의 심각도 및 치료될 환자의 특성에 따라 달라지지만, 비-발명적으로 결정될 수 있다. 사용될 수 있는 저분자량 트롬빈 억제제 및 전구약물의 적합한 농도는 일단 평형에 도달하면 치료가 필요한 기간에 걸쳐 트롬빈 억제제의 평균 혈장 농도가 0.001 내지 100 μmol/L, 바람직하게는 0.005 내지 20 μmol/L, 특히 0.009 내지 15 μmol/L 범위가 되게 하는 것을 포함한다. 이노가트란 및 그의 전구약물의 경우 적합한 투여량은 0.1 내지 10 μmol/L, 바람직하게는 0.5 내지 2 μmol/L 범위의 평균 혈장 농도가 되게 하는 것이고, 멜라가트란 및 그의 전구약물의 경우 0.01 내지 5 μmol/L, 바람직하게는 0.1 내지 1 μmol/L 범위의 평균 혈장 농도가 되게 하는 것이다.

저분자량 트롬빈 억제제의 최대 혈장 농도는 사용되는 투석 용액 및(또는) 투석 농축액내 약물의 농도에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 정상 상태 평형 (혈 액과 투석 용액내 농도가 동일한 지점이며, 투석막을 통한 통과가 양 방향으로 동일한 속도로 진행되는 시점)에 도달하는 데 걸리는 시간은 사용되는 투석막의 특성, 투석기의 흐름 수준, 및 사용되는 트롬빈 억제제의 물리화학적 특성을 포함하는 요인에 따라 달라진다.

투석에 의하여 치료될 환자의 질환의 심각도에 따라, 투석 기간의 초기 단계에서 발생할 수 있는 투석 필터 또는 혈액 라인의 혈전 폐색을 완화하고자 처음에 (투석 기간 개시전 60분까지를 포함시킴) 트롬빈 억제제의 단회 용량을 투여하는 것이 바람직할 수 있다. 그러나, 이러한 처리는 본 발명에 따른 용도 수행에 있어 필수적인 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 관점에 따라, 저분자량 트롬빈 억제제를 포함하는 투석 용액을 사용하여 투석을 수행하는 것을 포함하는, 투석, 특히 혈액투석을 필요로 하는 환자, 특히 인간 환자의 치료 방법을 제공한다.

본원에서 설명된 본 발명은 투석용으로 현재 이용가능한 항응고 기술보다 더욱 안전하고, 더욱 신뢰성이 있으며, 더욱 재현 가능성이 크고, 더욱 가격 경제적이고, 더욱 효과적인 방식으로 투석, 예를 들면 혈액투석이 필요한 환자에게서 응고가 감소하는 이점을 가질 수 있으며, 따라서 이들 기존 기술과 관련된 문제를 해결할 수 있다. 본 발명은 또한 투석 도중뿐 아니라 투석 기간 사이에도 이들 이점을 제공할 수 있다.

본 발명은 하기 실시예를 사용하여 비제한적인 방식으로 설명된다.

도 1은 혈액투석 모의 실험 (개방 1회 통과 시스템)의 개략도이다 (A, B 및 C는 시료채취 지점이다).

도 2는 공여측의 입구 C (사각형, 실선), 출구 B (채워진 원, 음영선) 및 수여측의 출구 A (빈 원, 파선)에서의 시간에 따른 저분자량 트롬빈 억제제인 멜라가트란의 농도 플롯을 나타낸다. 이들 곡선은 지수 함수로 맞추었다.

도 3은 혈액투석 모의 실험 (폐쇄 재순환 시스템)의 개략도이다 (A, B 및 C는 시료채취 지점이다).

도 4는 공여측의 입구 C (사각형, 실선), 출구 B (채워진 원, 음영선) 및 수여측의 출구 A (빈 원, 파선)에서의 시간에 따른 저분자량 트롬빈 억제제인 멜라가트란의 농도 플롯을 나타낸다. 이들 곡선은 지수 함수로 맞추었다.

도 5는 인간 혈액투석 구성의 개략도로, 여기에서 실시예 3의 돼지 연구가 유도되었다.

도 6은 투석 기간 (돼지 연구) 동안 시간에 따른 혈장 (상부 패널) 및 투석 용액 (하부 패널)에서의 이오헥솔의 제거 플롯을 나타낸다.

도 7은 투석 기간 (돼지 연구) 동안 원심성 동맥의 돼지 혈액과 투석 유체 출구에서의 멜라가트란의 농도 플롯을 나타낸다.

도 8은 투석 기간 (돼지 연구) 동안 TAS-ECT 시간의 플롯을 나타내며, 멜라가트란 유도성 트롬빈 억제의 정도를 보여준다.

도 9는 투석 기간 (돼지 연구) 동안 APTT 시간의 플롯을 나타내며, 멜라가트란 유도성 트롬빈 억제의 정도를 보여준다.

<실시예 1>

개방 1회 통과 시스템에서의 멜라가트란의 여과 - 투석 모의 실험

LunDia Pro 600 (감브로, 스웨덴 룬트) 투석 필터를 감브로 AK-100 (감브로) 투석 장비에 연결하고, 15 분 동안 바이오졸 A201.5 글루코스 (파마링크, 스웨덴 솔나) 농축액 (희석 1:35)으로부터 제조된 투석 유체로 프라이밍시켰다. 그 구성은 도 1에 나타내었다. 투석 유체를 막의 한 쪽 (본원에서는 공여측으로 지정)에 500 ㎖/분의 유속으로 통과시켰다. 동시에, 0.15 mol/L의 염화나트륨 용액을 막의 환자쪽 (본원에서는 수여측으로 지정)에서 250 ㎖/분으로 펌핑하고 재순환없이 폐기하였다. 막의 양쪽에서 흐름은 반대방향이었다.

그 후, 펌프를 정지시키고, 투석 농축액을 1:35 희석 후 약 0.2 μM의 최종 농도를 제공하는 3 ㎎/L (7 μM)의 멜라가트란을 함유하는 새 농축물 주머니로 대체하였다. 투석 유체를 필터 유니트를 지나면서 평행 회로를 통하여 우회시킨 것을 제외하고는 펌프를 동일한 속도로 재시동하였다. 필터 관류는 시간 0에서 다시 시작하고, 5분에 걸쳐 미리 지정된 시점에서 위치 A (수여측의 출구), 위치 B (공여측의 출구) 및 위치 C (공여측의 입구)에서 관으로부터 시료를 모았다.

액체 크로마토그래피/매스 스펙트로메트리 방법 (생분석 방법 BA-216)을 사용하여 멜라가트란의 존재에 대하여 시료 (≒ 5 ㎖)를 분석하였다. 정량 한계 (10 nM) 미만의 값은 0으로 정정하였다.

실험적 정상 상태는 약 5분 후에 달성되었으며, 이 때 공여측 입구 C에서 약 180 nM의 멜라가트란의 농도가 달성되었다 (도 2 참조). 동시에, 공여측 출구 B에서의 멜라가트란의 농도는 약 50 nM이었다. 이것은 멜라가트란의 농도가 공여측에서 약 130 nM 떨어짐을 제안한다.

수여측에서, 멜라가트란의 농도는 5분 후에 약 130 nM의 고원부(plateau)로 증가하고, 이는 공여측에서의 감소에 필적할 만하다. 이러한 발견은 막의 양쪽에서 흐름이 반대방향이라는 것에 부합되는 것이었다. 즉, 본 실험 동안 막의 수여측으로 일정하게 투입되는 새로운 물은 공여측 출구 말단의 저농도의 멜라가트란에 먼저 노출되고, 이어서 입구쪽으로 가면서 증가되는 농도에 노출되게 된다. 결과적으로, 막을 통한 확산 구배는 약 50 nM이고, 양측에서 막의 길이를 따른 구배는 130 nM이었다. 즉, 공여측에서는 180 nM에서 50 nM로 떨어지며, 수여측에서는 반대 방향의 흐름으로 인해 0에서 130 nM로 증가되었다.

<실시예 2>

폐쇄 재순환 시스템에서의 멜라가트란의 여과 - 투석 모의 실험

시스템의 수여측이 폐쇄되어 15 L의 식염수 및 자기 교반기를 포함하는 탱크를 통하여 유체가 재순환되는 것을 제외하고는 실시예 1에서 설명된 것과 유사한 방식으로 실험을 수행하였다 (도 3 참조). 실험은 120분 동안 계속하였으며, 시료를 미리 지정된 시점에서 모았다. 시료 채취 위치 B 및 C는 앞서의 실험과 동일하였다. 그러나, 이번 경우에는 시료채취 위치 A는 탱크 하류의 수여측의 필터 입구였다.

실시예 1에서처럼, 공여측의 투석 유체 입구 C에서 멜라가트란의 농도는 5분 내에 약 180 nM의 고원부에 도달하였고, 실험 전반에 걸쳐 일정하게 유지되었다 (도 4 참조).

수여측의 농도가 작을 때 공여측의 입구 C 및 출구 B 사이의 구배는 약 130 nM이었다. 멜라가트란이 탱크에 축적되면서, 이러한 구배는 지수 함수로 감소되었다. 약 2시간 후, 시스템은 평형을 이루었고, 이러한 구배는 사라졌다. 즉, 공여측의 입구 및 출구는 약 180 nM의 비슷한 멜라가트란 농도를 나타내었다. 동시에, 탱크에서의 멜라가트란의 농도는 증가하여 공여측에 비교할 때 다소의 지연을 두면서 약 180 nM이 되었다. 이것은 멜라가트란이 투석막을 통과한 것을 가리킨다.

<실시예 3>

돼지 연구

본 연구의 목적은 신장 기능이 없는 마취된 돼지를 사용한 급성 실험에서 투석 동안 투석 용액을 통하여 주어진 멜라가트란이 응고를 방지하고 투석 기간 내내 필터 기능이 유지되게 하는 지를 시험하는 것이었다.

본 방법의 유용성에 대한 의미있는 결론의 도출을 방해할 수 있는, 혈액 라인 및 필터의 매우 초기의 혈전 폐색을 피하기 위해, 이들 실험에서 체외 혈액 순환의 시작 직전에 멜라가트란을 정맥내 볼루스 투여하였다.

<재료 및 방법>

체중이 각각 59 ㎏ 및 57 ㎏인 두 마리의 스웨덴 육상종 돼지를 사용하였다. 케타미놀 (등록상표) (스위스 베테리나리아 아게, 10 ㎎/㎏ 근육내)과 도르미쿰 (등록상표) (스위스 바젤 로세, 1 내지 2 ㎎/㎏, 근육내), 이어서 20분 후에 디프리 반 (등록상표) (영국 체셔 마클스필드의 제네카 리미티드, 80 내지 160 ㎎/㎏ 정맥내)를 사용하여 마취를 유도한 후, 관을 삽입하고, 서보 벤틸레이터 900C (스웨덴 솔나, 지멘스 일레마)를 사용하여 2 내지 3%의 포렌 (등록상표) (스웨덴 키스타, 아보트 스칸디나비아 아베)를 함유하는 공기를 사용하여 15 주기/분으로 환기하였다.

혈액 기체 및 혈액 pH를 모니터하고 (ABL (등록상표) 시스템 625, 덴마크 코펜하겐, 라디오미터), 일호흡량을 변화시켜 정상적인 범위 (pH 7.38 내지 7.48; pCO₂ 10 내지 12 kPa; pO₂ 4.5 내지 5.8 kPa)로 조정하였다. 링거 용액 (스웨덴 스톡홀름, 파마시아 업존 아베)을 귀 정맥에 20 ㎖/㎏/시간 이상으로 주입하여 체액 손실을 보충하였다. 체온은 외부 가열로 39℃로 유지하였다. ECG는 V3 및 V5 위치에 해당하는 바늘 전극을 사용하여 모니터하였다.

마취된 돼지에서 측면 플랭크 방법을 사용하여 신장 동맥 및 정맥의 양측 결찰을 수행하였다. 그 후, 상처를 봉합하고, 동물을 눕혔다. 두 카테터 (키말, K41/3B/LL, 영국 옥스브리지)를 우 대퇴 동맥 및 정맥에 삽입하여 투석 장비에 연결하였다. 동맥 카테터를 사용하여 혈액을 (원심성 혈액 라인) 투석 필터로 제공하고, 정맥 카테터는 (구심성 혈액 라인) 투석 필터로부터 혈액을 받도록 하였다. 혈압 (MAP) 기록 (생산자 페터 폰 베르크 메디진테크닉 게엠베하, 독일 키르시온/에글하르팅) 및 혈액 시료, pH, 및 혈액 기체 측정을 위하여 하나의 폴리에틸렌 카테터 (인트라메딕 PE-200, 클레이 아담스, 미국 뉴저지주 파르시패니)를 동맥 (돼지 A의 우측 복재 동맥과 돼지 B의 상완 동맥)에 삽입하였다.

투석 시작 전에, LunDia Pro 600 투석 필터 (감브로, 스웨덴 룬트)를 15 분 동안 감브로 AK-100 (감브로, 스웨덴 룬트) 혈액투석 장비를 사용하여 1:35로 희석한 바이오졸 A201.5 글루코스 (파마링크, 스웨덴 솔나) 투석 농축물을 사용하여 양측에서 프라이밍시켰다 (도 5 참조). 투석 농축액에 멜라가트란 (35 μM; 따라서 희석 후 1 μM 제공)을 보충하였다. 유속은 별도의 펌프를 사용하여 막의 투석 용액 측에서 500 ㎖/분, 혈액 측에서 250 ㎖/분으로 조정하였다. 투석막의 양 측에서 압력을 측정하였다 (제조자 피터 폰 베르크 매디진테크닉).

원심성 및 구심성 혈액 라인의 연결 전에, 20 ㎖ (300 ㎎/㎖)의 이오헥솔 (옴니파크 (등록상표), 니코메드 아베, 스웨덴 리드인괴)를 귀 정맥에 투여하고 필터 제거를 모니터하였다. 투석 시작 2분 전에, 0.15 μmol/㎏의 멜라가트란을 볼루스로 우대퇴 정맥에 주입하였다.

혈액 라인의 연결 후 및 멜라가트란 볼루스 투여 2분 후에, 투석을 시작하고 3시간 동안 수행하였다. 이후, 절차를 중단하고, 혈액 라인의 연결을 해제하고, 필터와 혈액 라인을 혈액 대신에 식염수를 펌핑하여 세척하여 육안에 보이는 혈액 응고물의 존재를 검사하였다.

혈류동력학적 변수는 7 D 그래스 폴리그래프 (그래스 인스트루먼트, 미국 매사추세츠주 퀸시)에서 모니터하고, 주문 제조의 팜-랩 5.0 (아스트라제네카 R&D, 스웨덴 뮐른달) 상에서 시료 채취하였다.

활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간 (APTT), 에카린 응고 시간 (ECT) 및 혈장 중의 멜라가트란의 양을 측정하기 위하여 12개 할당량의 혈액을 특정 시점에 1 부피의 0.13 M의 시트르산나트륨을 함유하는 플라스틱 튜브에 넣었다. 원심분리 (10,000 g에서 5분) 직후 혈장을 회수하고 분석 전까지 -20 ℃에서 보관하였다. 혈장 중의 이오헥솔의 양을 측정하는 경우, 혈액을 헤파린처리된 튜브에 넣고, 원심분리 (10,000 g에서 5분)하고 분석전까지 -20 ℃에서 보관하였다.

혈장 중의 멜라가트란의 양은 액체 크로마토그래피 및 매스 스펙트로메트리 방법 (BA-285, 아스트라제네카 R&D, 스웨덴 뮐른달)을 사용하여 정량하였다.

ECT는 TAS 기구 (트롬빈용해 측정 시스템, 카디오바스큘라 다이아그노스틱 인크., 노쓰캐롤리아나주 랄라이) 및 추천된 적절한 고체 시약 시험 카드를 사용하여 30 ㎕의 시트레이트 혈장에서 측정하였다.

APTT는 KC10 A 마이크로 응고측정계 (아멜렁, 독일 레마고)를 사용하여 측정하였다. 25 ㎕의 시트르산 혈장을 25 ㎕의 PTT-자동화 시약 (다이아그노스티카 스타고, 프랑스 아쉬니에)와 3분간 반응시켰다. 응고는 0.025 M CaCl₂ (다이아그노스티카 스타고, 프랑스 아쉬니에) 25 ㎕를 사용하여 시작하였고, 응고 시작에 걸리는 시간을 측정하였다.

혈장 및 투석 용액 중의 이오헥솔의 양은 리어날라이저 PRX 90 (프로발리드 아베, 스웨덴 룬트)를 사용하여 신장학 실험실 (스웨덴 고텐베르크의 살그렌스 대학병원)에서 측정하였다.

결과

두 돼지 모두에서, 3시간 투석 절차를 성공적으로 수행하였다. 한 돼지에 서, 원심성 혈액 라인의 압력은 약 275 mmHg로 안정적이었으며, 다른 돼지에서는 약 250에서 375 mmHg로의 소폭 증가가 관찰되었다. 투석 후, 필터 및 튜브를 15분에 걸쳐 식염수로 세척하자 혈액이 제거되었으며, 이는 투석 절차 동안 육안으로 관찰할 수 있는 혈전이 형성되지 않았음을 가리킨다.

여과에서의 임의의 변화를 모니터하기 위하여 투석 기간 동안 매 30분 간격으로 이오헥솔의 제거를 측정하였다 (도 6 참조). 이오헥솔의 제거는 두 실험에서 약 150 ㎖/분이었다. 투석 용액 중의 이오헥솔의 양은 투석 처리 기간 내내 각 30분 기간이 시작될 때의 혈장내 농도에 비례하였다 (각각 r²= 0.925, p<0.001 및 r²= 0.952, p< 0.003). 이것은 필터 기능이 3시간의 투석 기간 전체에 걸쳐 유지되었음을 가리킨다.

투석 절차의 시작 시에, 0.15 M/㎏의 멜라가트란의 정맥내 볼루스 투여를 투여한지 2분 후에 돼지에서 혈장 (원심성 혈액) 중의 멜라가트란의 농도는 두 돼지 모두에서 약 0.9 내지 1 μM이었다 (도 7 참조). 이것은 급속히 감소하여 투석 최초 30분이 지나면 약 0.25 μM로 수렴하였다. 이후, 혈장 농도는 꽤 일정하였다. 투석 출구에서, 멜라가트란의 농도는 투석 시작시 정맥내 볼루스 투여 직후에 취한 최초의 시료의 경우를 제외하고는 혈액 측보다 약 0.2 μM 더 높았다. 희석 전의 투석 농축액의 멜라가트란의 농도는 각각 33.7 및 34.9 μM이었다. 따라서, 투석 출구에서의 농도는 투석 입구에서 기대된 1 μM보다 명백히 작았다 이것은 이러한 실험 조건하에서 급성의 신장 제거 돼지에서 한시간 내에 평형이 이루어졌음을 가리킨다.

종전의 연구 (멜라가트란을 피하투여한 정상인에 대해 수행됨)에서처럼, TAS 장비를 사용한 임상의 에카린 응고 시간 (ECT)은 멜라가트란 유도성 트롬빈 억제의 약물동력학적 척도를 제공하는데, 이는 혈장내 약물 농도를 밀접하게 반영하였다.

ECT 시간과 멜라가트란 농도 사이의 선형 관계와 달리, APTT 시간은 멜라가트란 농도와 로그함수로 비례하였다. 이것은 두 돼지 사이에서 APTT 값의 더 큰 상대적 차이로 반영되었다 (도 9 참조).

<결론>

멜라가트란은 혈액투석 동안 체외 혈병 형성을 방지하는 데 유용하다. 투석 용액 중에 적합한 농도로 멜라가트란을 제공함으로써 전체 투석 기간 동안 멜라가트란의 안정적인 항혈전 수준을 얻을 수 있다. 이것은 새로운 방법의 유용성을 입증한다. 명백히, 투석 용액을 통한 멜라가트란과 같은 저분자량 트롬빈 억제제의 투여는 전체 투석 기간 동안 유용한 혈장 농도를 제공하고, 체외 혈병 형성을 방지하며, 투석 기간 전반에 걸쳐 최적의 필터 기능을 유지한다.

<실시예 4>

환자 연구

3가지 상이한 투석 농축물내 멜라가트란 농도에 대해 개방 교차 연구를 수행하였다. 신부전증으로 인해 장기 혈액투석 치료를 받고 있는 6명의 환자에게 무작위적인 순서로 처치를 수행하였다. 비교를 위하여 1회의 치료 기간에는 각 환자에 대한 통상 용량의 LMWH를 경피투여하였다. 투석 농축물에서의 멜라가트란의 농도는 정상 상태일 때 환자의 혈장 농도가 약 0.2, 0.3 및 0.4 μM/L이 되도록 선택하 였다. 유용한 농도에 관한 최종 결정에 실시예 3의 돼지 연구로부터의 결과를 사용하였다.

본 연구는 투석 유체로부터의 여과와 투석 필터의 응고 방지에서 혈액투석 환자에 대한 멜라가트란의 투여 가능성에 대한 예비 데이터를 제공한다. 또한, 멜라가트란의 유용한 농도에 관한 예비 데이터와 기존 LMWH 치료법과의 비교를 제공한다.

Claims

투석 용액 중에 가트란을 포함하는, 투석 치료를 필요로 하는 환자의 투석 치료를 위한 약학 조성물.
삭제
삭제
제1항에 있어서, 투석이 혈액투석인 약학 조성물.
가트란을 포함하는 투석 용액.
가트란을 포함하는 투석 농축액.
(a) 가트란을 포함하는 제제 및 (b) 투석 농축물을 포함하는 투석에 사용하기 위한 키트.
제5항에 있어서, 투석이 혈액투석인 용액.
삭제
제1항 또는 4항에 있어서, 가트란이 이노가트란 또는 멜라가트란인 약학 조성물.
가트란을 포함하는 제제와 투석 용액을 혼합하는 것을 포함하는, 제5항 또는 8항에서 정의된 용액의 제조 방법.
삭제
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제6항에 있어서, 투석이 혈액투석인 농축액.
제7항에 있어서, 투석이 혈액투석인 키트.
삭제
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삭제
제5항 또는 8항에 있어서, 가트란이 이노가트란 또는 멜라가트란인 용액.
제6항 또는 14항에 있어서, 가트란이 이노가트란 또는 멜라가트란인 농축액.
제7항 또는 15항에 있어서, 가트란이 이노가트란 또는 멜라가트란인 키트.
가트란을 포함하는 제제와 투석 농축물을 혼합하는 것을 포함하는, 제6항 또는 14항에서 정의된 농축액의 제조 방법.