KR100827045B1

KR100827045B1 - 이중 구획 포장 내에 레티노이드 및 피토에스트로겐을포함하는 피부 관리 제품

Info

Publication number: KR100827045B1
Application number: KR1020037008747A
Authority: KR
Inventors: 스리쿠마 필레; 스트워트패이톤 그랭거; 이안 리차드 스콧트; 데이빗 조세프 포칼리코
Original assignee: 유니레버 엔.브이.
Priority date: 2000-12-28
Filing date: 2001-12-06
Publication date: 2008-05-02
Also published as: DE60124307T2; CN1287764C; CA2431391A1; CN1484522A; EP1349537A2; WO2002053122B1; ZA200303935B; WO2002053122A2; US6565864B2; DE60124307D1; ATE344014T1; MXPA03005705A; EP1349537B1; JP4451062B2; AU2002233236B2; WO2002053122A3; KR20030074686A; US20020127255A1; JP2004517110A

Abstract

약 0.001% 내지 약 10%의 레티노이드를 포함하는 제 1 조성물; 약 0.001% 내지 약 10%의 피토에스트로겐을 포함하는 제 2 조성물; 제 1 조성물을 저장하기 위한 제 1 구획; 및 제 2 조성물을 저장하기 위한 제 2 구획을 포함하며, 여기에서 제 1 및 제 2 구획은 서로 연결되어 있는 안정한 피부 관리 제품.

레티노이드, 피토에스테로겐

Description

이중 구획 포장 내에 레티노이드 및 피토에스트로겐을 포함하는 피부 관리 제품{SKIN CARE PRODUCT CONTAINING RETINOIDS AND PHYTOESTROGENS IN A DUAL COMPARTMENT PACKAGE}

본 발명은 이중 구획 포장의 제 1 구획 내에 레티노이드를 포함하고 제 2 구획 내에 피토에스트로겐을 포함하는 안정한 피부 관리 조성물에 관한 것이다.

레티노이드(예를 들면, 레티놀 및 레티닐 에스테르)는 미용 제품에 일반적으로 사용되는 성분이다. 레티놀(비타민 A)은 인체에서 자연적으로 생성되는 내인성 화합물이며 정상적인 상피 세포 분화에 필수적이다. 천연 및 합성 비타민 A 유도체는 다양한 피부 질병의 치료에 광범위하게 사용되어 왔으며 피부 회복 또는 재생제로서 사용되어 왔다. 레티노산은 다양한 피부 상태, 예를 들면 여드름, 주름, 건선, 노화성 반점 및 변색을 치료하는데 사용되어 왔다. 예를 들면, 발퀴스트, 에이.(Vahlquist, A.) 등의 문헌[J. Invest. Dermatol., Vol. 94, Holland D.B. and Cunliffe, W.J.(1990), pp. 496-498]; 엘리스, 씨.엔.(Ellis, C.N.) 등의 문헌["Pharmacology of Retinols in Skin", Vasel, Karger, Vol.3, (1989), pp. 249-252]; 및 PCT 특허 출원 제 WO 93/19743 호를 참고한다.

그러나 레티노이드 대사는 레티노이드를 이롭지 못한 부산물로 전환시켜서 피부 상태를 치료할 수 있는 이로운 레티노산의 양을 감소시킬 수 있다. 그러므로 몇몇 선행기술 참고문헌은 여드름, 주름, 건선, 노인성 반점 및 변색과 같은 피부 상태의 치료를 돕기 위해 다양한 천연 활성제를 사용하는 것을 교시한다. 예를 들면, 피토에스트로겐(즉, 에스트로겐 유사 활성을 가지며 식물에서 발견되는 천연 화합물)의 미용 및 치료 목적을 위한 사용이 증가되고 있다. 에스트로겐 및 에스트로겐처럼 작용하는 합성 화합물은 피부 층의 두께를 증가시키며 노화 진행 피부의 주름 형성을 감소시키는 것으로 공지되어 있다. 폐경기 이후에 나타나는 피부 건조증, 피부 탄력성 상실 및 부품과 같은 피부의 변화는 에스트로겐 생산의 결핍으로 인한 것이다. 에스트로겐 요법은 피부 노화와 연관된 많은 변화를 방지하거나 늦춘다 (크레이디(Creidi) 등의 문헌["Effect of a Conjugated Oestrogen Cream(Premarin(등록상표)) on Aging Facial Skin", Maturitas, 19, p.211-213, 1994]).

선행기술에 몇몇 피토에스트로겐의 미용적으로 이로운 효과에 대한 것이 개시되어 있다. 예를 들면, 미국 특허 제 5,728,726 호는 티로신 키나제 저해 활성을 위한 제니스테인의 용도를 교시한다. 아본(Avon)의 미국 특허 제 5,847,003 호 및 제 5,834,513 호는 레티노이드와 혼합된 산소산 및 산소이산의 용도를 개시한다. 아본의 두 특허 모두 항산화제 비보플라보노이드, 예컨대 제니스테인 및 다이드제인이 선택적 성분으로서 사용된다는 것을 개시한다.

그러나 피토에스트로겐은 레티놀의 산화를 유도하므로 레티놀 분해에 기여하는 것으로 발견되었다. 조성물을 전달하기 위한 다-구획 시스템이 선행기술에 기술되었지만, 어떠한 선행기술도 피토에스트로겐을 레티노이드로부터 분리해야 하는 필요성에 대하여 개시하지 않았다. 예를 들면, 본 발명의 양수인에게 등록된 미국 특허 제 5,914,116 호이다. 특히 이 특허는 제 1 구획은 레티노이드를 포함하고 제 2 구획은 제 2의 상이한 이로운 효과를 제공하기 위한 제 2 활성제를 포함하는, 2종의 상이한 피부 활성제를 분리시켜서 피부에 대한 이로운 효과를 이중으로 제공하기 위한 2개의 분리된 용기를 기술한다.

그러므로, 레티노이드의 피부에 대한 이로운 효과를 피토에스트로겐의 레티노이드 촉진 효과와 함께 제공하는 조성물이 여전히 요구되고 있다.

본 발명은:

약 0.001% 내지 약 10%의 레티노이드를 포함하는 제 1 조성물;

약 0.001% 내지 약 10%의 피토에스트로겐을 포함하는 제 2 조성물;

제 1 조성물을 저장하기 위한 제 1 구획; 및

제 2 조성물을 저장하기 위한 제 2 구획을 포함하며, 여기에서 제 1 및 제 2 구획은 서로 연결되어 있는 안정한 피부 관리 제품을 제공한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "포함하는"은 "포함하는, 만들어지는, 구성되는(구성되거나) 본질적으로 구성되는"을 의미한다. 실시예 및 비교예를 제외하고, 또는 특별한 언급이 없다면, 물질의 양 또는 비 또는 반응의 조건, 물질의 물리적 성질 및(또는) 사용을 나타내는 본 명세서에 있어서의 모든 숫자는 단어 "약"으로 수식되는 것으로 이해된다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "콘디쇼닝(conditioning)"은, 미용 또는 기타 목적으로, 건조 피부, 여드름, 광손상 피부, 주름 발생, 노인성 반점, 노화 피부를 예방 및 치료하고, 각질층 탄력성을 증가시키며, 피부를 미백하고, 피지 분비를 조절하며, 전반적으로 피부의 상태를 좋게하는 것을 의미한다. 조성물은 박피 및 표피 분화를 증진하기 위해 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은, 바람직한 성분으로서, 레티닐 에스테르, 레티놀, 레티날 및 레티노산으로부터 선택된 레티노이드, 바람직하게는 레티놀 또는 레티닐 에스테르를 포함한다. 용어 "레티놀"은 레티놀의 하기 이성질체를 포함한다: 모든-트랜스-레티놀, 13-시스-레티놀, 11-시스-레티놀, 9-시스-레티놀, 3,4-디데히드로-레티놀, 3,4-디데히드로-13-시스-레티놀; 3,4-디데히드로-11-시스-레티놀; 3,4-디데히드로-9-시스-레티놀. 바람직한 이성질체는 모든-트랜스-레티놀, 13-시스-레티놀, 3,4-디데히드로-레티놀, 9-시스-레티놀이다. 가장 바람직하게는 모든-트랜스-레티놀인데, 이의 광범위한 상업적 구입 가능성 때문이다.

레티닐 에스테르는 레티놀의 에스테르이다. 용어 "레티놀"은 상기 정의한 바와 같다. 본 발명에 사용하기에 적절한 레티닐 에스테르는 레티놀의 C₁-C₃₀에스테르, 바람직하게는 C₂-C₂₀에스테르, 가장 바람직하게는 C₂,C ₃ 및 C₁₆에스테르인데, 이들을 보다 일반적으로 구입할 수 있기 때문이다. 레티닐 에스테르의 예는: 레티닐 팔미테이트, 레티닐 포르메이트, 레티닐 아세테이트, 레티닐 프로피오네이트, 레티닐 부티레이트, 레티닐 발러레이트, 레티닐 이소발러레이트, 레티닐 헥사노에이트, 레티닐 헵타노에이트, 레티닐 옥타노에이트, 레티닐 노나노에이트, 레티닐 데카노에이트, 레티닐 운데칸데이트, 레티닐 라우레이트, 레티닐 트리데카노에이트, 레티 닐 미리스테이트, 레티닐 펜타데카노에이트, 레티닐 헵타데코노에이트, 레티닐 스테아레이트, 레티닐 이소스테아레이트, 레티닐 노나데카노에이트, 레티닐 아라키도네이트, 레티닐 베헤네이트, 레티닐 리놀레이트, 레티닐 올레이트를 포함하는데 이것으로 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 사용하기 바람직한 에스테르는 레티닐 팔미테이트, 레티닐 아세테이트 및 레티닐 프로피오네이트로부터 선택되는데, 이들이 상업적으로 구입하기 가장 용이하며 가격이 가장 저렴하기 때문이다. 레티닐 리놀레이트 및 레티닐 올레이트가 또한 그의 효능때문에 바람직하다.

레티놀 또는 레티닐 에스테르는 본 발명의 조성물에 약 0.001% 내지 약 10%, 바람직하게는 약 0.01% 내지 약 1%, 가장 바람직하게는 약 0.01% 내지 약 0.5%의 양으로 사용된다.

피토에스트로겐

본 발명의 일부분으로서, 레티노이드의 피부에 대한 이로운 효과를 피토에스트로겐이 상승적으로 증진하는 것이 놀랍게도 발견되었다. 본질적으로, 피토에스트로겐은 피부의 레티노이드에 대한 감수성을 증가시킨다.

그러므로, 본 발명은 제 2 조성물 중에 약 0.001% 내지 약10%의 1종 이상의 피토에스트로겐을 포함한다.

피토에스트로겐은 플라보노이드, 예컨대 에스트로겐 플라보노이드, 제니스테인, 다이드제인, 글리시틴, 비오카닌 A, 포르모노네틴 및 이퀄과 그의 혼합물, 제니스테인 및 다이드제인의 아세틸 및 말로닐 에스테르, 및 제니스테인 및 다이드제 인의 글루코시드를 포함한다. 상기 리스트는 제한적이지 않으며, 당업계 숙련인에게 공지된 기타 피토에스트로겐을 포함할 수 있다.

이중 구획 포장

레티노이드를 포함하는 조성물은 전반적으로 불안정하고 화학적으로 분해될 수 있다. 추가적인 레티노이드 증진 효과 때문에, 피토에스트로겐이 본 발명의 필수 성분이다. 제니스테인 및 다이드제인과 같은 피토에스트로겐은 레티노이드와 상승적으로 작용하여 피부에 이로운 효과를 제공한다. 그러나 피토에스트로겐은 산화에도 기여하므로, 레티노이드를 분해한다. 두 성분이 단일 배합물에 포함될 때 피토에스트로겐 유도 레티놀 불안정화는 촉진된 레티노이드 조성물의 전체 효능을 현격하게 감소시킨다. 그러므로, 피토에스트로겐의 상승적인 효과는 그대로 제공하면서 레티노이드 파괴를 방지하기 위하여, 본 발명은 제 1 구획 내에 레티노이드를 포함하는 제 1 조성물을 포함하고 제 2 구획 내에 1종 이상의 피토에스트로겐을 포함하는 제 2 조성물을 포함하는 이중 구획 포장을 제공한다. 제 1 조성물은 피부에 첫번째 이로운 효과를 제공하며 제 2 조성물은 첫번째 이로운 효과를 촉진하거나 증진하는 역할을 한다.

이중 구획 포장은 분리된 2개의 용기에 제 1 및 제 2 조성물을 제공하기 위한 목적이 달성된다면 당업계 숙련인에게 공지된 여러 방법으로 디자인될 수 있다. 한 실시태양에 있어서, 이중 구획 포장은 서로 부착된 2개의 자아 또는 병의 형태이다. 제 2 실시태양에 있어서, 이중 구획 포장은 병/자아의 내부가 제 1 및 제 2의 구획으로 분리되도록 분할되어 있는 단일 병/자아의 형태이다. 조성물이 별개 로 유지될 수 있다면 본 발명의 취지 내에서 기타 실시태앙도 구상될 수 있다.

미용학적으로 허용 가능한 부형제

본 발명에 따른 조성물은 또한 활성 성분에 대한 희석제, 분산제 또는 담체로서 작용하는 미용학적으로 허용 가능한 부형제를 제 1 조성물 및 제 2 조성물 중 하나에 또는 둘 다에 포함하여, 조성물이 피부에 도포될 때 그의 분산을 촉진한다.

물 이외의 또는 물에 추가되는 부형제는 액체 또는 고체 연화제, 용매, 연석제, 증점제 및 분말을 포함할 수 있다. 특히 바람직한 비수성 담체는 폴리디메틸 실록산 및(또는) 폴리디메틸 페닐 실록산이다. 본 발명의 실리콘은 25℃에서 약 10 내지 10,000,000센티스토크 범위의 점도를 갖는 것들일 수 있다. 특히 바람직한 것은 저 및 고 점도 실리콘의 혼합물이다. 이들 실리콘은 제너럴 일렉트릭 캄파니(General Electric Company)로부터 상표명 비스카실 (Vicasil), SE 및 SF로 그리고 다우 코닝 캄파니(Dow Corning Company)로부터 상표명 200 및 550 시리즈로 구입할 수 있다. 본 발명의 조성물에 사용될 수 있는 실리콘의 양은 조성물 중량의 5 내지 95%, 바람직하게는 25 내지 90%의 범위이다.

피부에 이로운 선택적인 물질 및 미용 보조제

본 발명의 제 1 및 제 2 조성물의 하나 또는 둘 다에, 오일 또는 유성상 물질이 유화제와 함께 존재하여, 사용되는 유화제의 평균 친수성-친유성 균형(HLB)에 따라서 유중수 유탁액 또는 수중유 유탁액이 제공될 수 있다.

활성 성분의 여러 유형이 본 발명의 제 1 및 제 2 미용 조성물 중 하나 또는 둘 다에 존재할 수 있으며 하기에 기술된다. 활성제는 연화제이외의 그리고 단지 조성물의 물리적 성질만을 개선하는 성분이외의 피부 또는 모발에 이로운 물질로 정의된다. 일반적인 예는 햇빛차단제, 피부 미백제, 일광욕제를 포함하며, 이 범위로 제한되는 것은 아니다.

햇빛차단제는 자외선을 차단하기 위해 일반적으로 사용되는 물질이다. 이 화합물의 예는 PABA, 신나메이트 및 살리실레이트의 유도체이다. 예를 들면, 옥틸 메톡시신나메니트 및 2-히드록시-4-메톡시 벤조페논(옥시벤존으로도 공지되어 있음)이 사용될 수 있다. 옥틸 메톡시신나메이트 및 2-히드록시-4-메톡시 벤조페논을 각각 상표명, 파르솔(Parsol) MCX 및 벤조페논-3으로 상업적으로 구입할 수 있다.

유탁액에 사용되는 햇빛차단제의 정확한 양은 태양의 UV 조사로부터의 원하는 보호 정도에 따라서 변화될 수 있다.

또 하나의 바람직한 선택적 성분은 필수 지방산(EFA), 즉 모든 세포의 원형질 막 형성에 필수적인 지방산으로부터 선택된다. 각화세포에 있어서, EFA 결핍은 세포를 과증식성으로 만든다. EFA를 보충하면 이것은 교정된다. EFA는 또한 표피의 지질 생합성을 증진하며 표피의 벽 형성을 위한 지질을 제공한다. 필수 지방산은 바람직하게는 리놀레산, Y-리놀렌산, 호모-Y-리놀렌산, 콜룸빈산, 에이코사-(n-6,9,13)-트리에노산, 아라키돈산, Y-리놀렌산, 팀노돈산, 헥사에노산 및 그의 혼합물로부터 선택된다.

연화제가 종종 본 발명의 미용 조성물에 혼입된다. 상기 연화제의 양은 총 조성물 중량의 약 0.5% 내지 약 50%, 바람직하게는 약 5% 내지 30%의 범위일 수 있 다. 연화제는 에스테르, 지방산 및 알콜, 폴리올과 탄화수소와 같은 일반적인 화학적 범위로 분류될 수 있다.

에스테르는 모노- 또는 디-에스테르일 수 있다. 지방 디-에스테르의 허용 가능한 예는 디부틸 아디페이트, 디에틸 세바케이트, 디이소프로필 디메레이트 및 디옥틸 숙시네이트를 포함한다. 허용 가능한 분지쇄 지방산 에스테르는 2-에틸-헥실 미리스테이트, 이소프로필 스테아레이트 및 이소스테아릴 팔미테이트를 포함한다. 허용 가능한 삼염기산 에스테르는 트리이소프로필 트리리놀레이트 및 트리라우릴 시트레이트를 포함한다. 허용 가능한 직쇄 지방산 에스테르는 라우릴 팔미테이트, 미리스틸 락테이트, 올레일 에루케이트 및 스테아릴 올레이트를 포함한다. 바람직한 에스테르는 코코카프릴레이트/카프레이트(코코-카프릴레이트 및 코코-카프레이트의 혼합물), 프로필렌 글리콜 미리스틸 에테르 아세테이트, 디이소프로필 아디페이트 및 세틸 옥타노에이트를 포함한다.

적합한 지방 알콜 및 산은 탄소수 10 내지 20의 이들 화합물을 포함한다. 특히 바람직하게는 세틸, 미리스틸, 팔미트 및 스테아릴 알콜 및 산과 같은 상기 화합물이다.

연화제로서 작용할 수 있는 폴리올은 직쇄 및 분지쇄 알킬 폴리히드록실 화합물이다. 예를 들면, 프로필렌 글리콜, 소르비톨 및 글리세린이 바람직하다. 중합체 폴리올 중에서, 예컨대 폴리프로필렌 글리콜 및 폴리에틸렌 글리콜이 유용할 수 있다. 부틸렌 및 프로필렌 글리콜은 또한 침투 증진제로서 특히 바람직하다.

연화제로서 작용할 수 있는 탄화수소의 예는 탄소수 12 내지 30의 탄화수소 사슬을 갖는 것들이다. 특정 예는 광유, 석유 젤리, 스쿠알렌 및 이소파라핀을 포함한다.

본 발명의 미용 조성물 중 기능 성분의 다른 예는 증점제이다. 증점제는 보통 본 발명의 조성물 중량의 0.1 내지 20%, 바람직하게는 약 0.5% 내지 10%의 양으로 존재할 것이다. 증점제의 예는 비. 에프. 굿리치 캄파니(B. F. Goodrich Company)로부터 상표명 카르보폴(Carbopol)로 구입할 수 있는 가교결합 폴리아크릴레이트 물질이다. 검이 사용될 수 있는데, 예컨대 크산탄, 카라기난, 젤라틴, 카라야, 펙틴 및 로커스트 빈 검이다. 특정 경우에는 증점 기능이 실리콘 또는 연화제로서 작용하는 물질에 의해 달성될 수 있다. 예를 들면, 10센티스토크 초과의 실리콘 검 및 글리세롤 스테아레이트와 같은 에스테르가 이중 기능을 갖는다.

분말이 본 발명의 미용 제품의 제 1 및 제 2 미용 조성물의 1종 또는 둘 다에 혼입될 수 있다. 이들 분말은 쵸크, 탈크, 산성백토, 고령토, 전분, 스멕틱 점토, 화학적으로 변형된 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 유기학적으로 변형된 몬모릴로나이트 점토, 수화 알루미늄 실리케이트, 훈증 실리카, 알루미늄 전분 옥테닐 숙시네이트 및 그의 혼합물을 포함한다.

기타 보조적인 소량 성분이 또한 본 발명의 미용 제품의 제 1 및 제 2 조성물의 하나 또는 둘 다에 혼입될 수 있다. 이들 성분은 착색제, 유백제 및 향료를 포함할 수 있다. 이들 물질의 양은 조성물 중량의 0.001% 내지 20%의 범위일 수 있다.

본 발명의 미용 제품의 제 1 및 제 2 조성물은 주로 인간 피부에 대한 국소 적용을 위한 제품으로서, 특히 피부를 콘디쇼닝하고 유연하게 하기 위한 작용제로서 그리고 주름지거나 노화된 피부로 되는 것을 예방하거나 완화하기 위해 사용된다.

사용시, 적절한 용기 또는 도포기로부터의 제 1 조성물의 소량, 예를 들면 1 내지 5ml를 피부의 노출된 부분에 도포하고, 필요하다면 손 또는 손가락 또는 적합한 장치를 사용하여 피부에 펴바르고(펴바르거나) 문지른다. 동시에, 적절한 용기 또는 도포기로부터의 소량의 제 2 조성물, 예를 들면 1 내지 5ml를 피부의 노출된 부분에 도포하고, 필요하다면 손 또는 손가락 또는 적합한 장치를 사용하여 피부에 펴바르고(펴바르거나) 문지른다. 그러므로, 치료 효과의 원하는 정도에 따라서, 제 1 및 제 2 조성물을 단독으로, 동시에 또는 연속적으로 사용할 수 있다.

제품 형태 및 포장

본 발명의 국소 피부 치료 조성물을 로션, 유체 크림, 크림 또는 겔로서 제형할 수 있다.

실시예 1

레티노이드 및 피토에스트로겐의 상승작용

(a) 세포 배양 방법:

25-30세 여성 자원자의 햇빛 차단된 팔 안쪽에서 얻은 성인의 섬유아세포를 여기에서 사용했다. 세포를 10% FBS를 포함하는 1:1 DMEM/Hams F12 배지 중에서, 정상적인 대기 산소 압력하 5% CO₂ 대기 중에서 37℃를 유지하면서 배양했다. 제 3 경로 성인 섬유아세포를 12웰 플레이트 내의 10% FBS와의 DMEM 배지 중에서 2500세포/ml/웰의 접종 밀도로 성장시켰다. 80% 밀집 시에 세포를 무혈청 및 무페놀레드(PRF) DMEM 배지로 2회 세정했다. 피토-화합물에 의한 4시간 동안의 예비처리를 수행한 다음에 레티노이드를 투여하고 48시간 동안 배양했다. 배양 후에, 웰을 1xPBS로 2회 세척하고 세포 단층을 100㎕의 세포 용균 완충액(1xPBS, 1% Triton X, 0.5% 소듐 데옥시콜레이트, 프로테아제 저해제(이소프로판올 중 100mg/ml PMSF, 10㎕/ml) 포함 0.1% SDS를 포함한다) 중에서 회수했다. 현탁액을 14000rpm에서 10분간 회전시키고, 상청액을 수집하고, 이 상청액의 부분표본을 단백질 정량에 사용했다. 단백질 농도를 피어스 (Pierce) 단백질 키트를 사용하여 측정했다. 100㎕ 상청액(세포용해물)의 나머지를 40㎕의 샘플 완충액(노벡스(NOVEX)) 및 0.5% 베타 메르캅토에탄올(BME)의 혼합물 중에서 5분간 샘플을 비등시켜서 변성시켰다. 동량의 단백질을 16% 트리스-글리신 겔에 SDS 페이지에 의한 단백질 분석 및 CRABP-2 단백질 발현에 대한 웨스턴 이뮤노-블로팅(Western Immuno-blotting)을 위해 로드했다.

(b) 세포 레티노산 결합 단백질 2(CRABP-2)의 검출:

세포 내에서, 레티놀 및 레티노산은 특정한 세포 내 결합 단백질에 결합되는데, 2종의 주요 단백질은 CRABP-1 및 2이다(루스(Roos) 등의 문헌[Pharmacological reviews: 50, 315-333, 1988]). 이들 단백질은 레티노이드 대사에 있어서 저장 또는 이동 단백질 모두로서 작용하여 레티노이드의 세포 내 농도를 조절하는 역할을 한다. 레티놀의 과다하거나 부족한 양은 세포사를 포함하는 세포 손상을 야기하므 로 레티노이드 및 그의 결합 단백질을 일정한 양으로 조절하는 것이 세포 생존에 매우 중요하다. 이 단백질의 양은 세포 내에서 레티노산의 양에 의해 조절된다. 세포의 레티노이드의 양이 많을수록 CRABP-2의 발현이 증가된다. 그러므로, 이 단백질의 세포 내 양이 세포의 레티노이드 활성도의 척도이다. 피부 세포는 다량의 CRABP-2를 표피 및 진피에서 모두 포함한다. 시험관 내 섬유아세포 중에서 레티노이드 투여에 대한 CRABP-2 반응이 인간 피부 반응을 예측하는 레티노이드 생활성의 재현 가능한 척도이다(엘더(Elder) 등의 문헌[J. Invest Dermatol., 106:517-521, 1996]). CRABP-2의 증가는 또한 증가된 표피 분화 및 피부 레티노이드 작용에 관련된다. 그러므로, 이들 연구에 있어서 본 발명자들은 증가된 표피 분화(피부 콘디쇼닝 및 건조 피부에 대한 효과) 및 피부 콜라겐 및 세포외 매트릭스 합성(노화방지, 주름방지 효과)을 유도하는 레티노이드 활성도의 척도로서 섬유아세포의 CRABP-2 발현을 이용했다.

섬유아세포 중 CRABP-2의 양을 측정하기 위해 동량의 세포 상청액의 단백질을 도트 블로트(dot blot) 장치 내 니트로셀룰로스 블로트에 제조사의 지시에 따라서 로드하고, 면역염색을 표준 절차에 따라서 CRABP-2에 대한 단클론성 항체를 사용하여 수행했다. CRABP-2 단백질 밴드를 도트 블로트 내에 산타 크루즈 바이오테크놀로지(Santa Cruz Biotechnology)(미국 캘리포티아주 산타크루즈)로부터 구입한 화학발광분석계 시스템을 사용하여 가시화했다. 필름 중 밴드를 농도계 스캐닝에 의해 정량하고 삼중 샘플로부터의 데이터를 대조용의 %로서 계산하고 하기 표에 대조용에 비교한 % 증가로서 나타내었다(대조용이 100%) +/- SD 삼중 샘플.

실시예 2

피토에스트로겐 플라보노이드 존재 시의 레티놀의 안정성:

레티놀을 수성 에탄올(1:1 물:에탄올) 중에 10% 용액으로 용해시켰다. 이 용액을 0.001%(대략 30μM)로 희석했다. 이 용액에 의해 96웰 플레이트 분광광도계 중에서 360nm에서 약 0.35의 흡광도 단위를 얻었다.

제니스테인, 다이드제인의 수성 에탄올 원액을 0.1%, 0.01% 또는 0.001%로서 제조했다. 96웰 플레이트 중 200㎕의 0.001% 레티놀 용액에 20㎕의 플라보노이드(즉, 1-10 희석)를 첨가하여 0.01, 0.001 및 0.0001%의 최종 플라보노이드 농도를 얻었다. 플레이트를 혼합하고 초기 OD 기록을 360nm에서 취했다. 플레이트를 실온, 어두운 장소에서 2일까지 배양하고 연속적으로 기록을 8, 24 및 48시간에 얻었다. 이들 시점에서의 OD 기록을 0시간 시점 기록으로 정규화했다. 레티놀 안정성을 0시간의 레티놀(OD 기록)에 대한 %로서 기록했다. 데이터를 하기 표에 나타내었다.

하기 2개의 표에서, 제니스테인 및 다이드제인과 레티노이드 사이의 상승작용을 시험했다. 두 연구에서 모두 제니스테인을 세포에 DMSO:에탄올에 가용성인 형태로 전달했다. 1μM 제니스테인만으로 CRABP-2를 현격하게 촉진했다. 제니스테인 및 다이드제인 모두 상승 방식으로 레티노이드의 활성을 촉진했다. 레티닐 아세테이트를 제외한 모든 시험된 레티노이드가 제니스테인 및 다이드제인과 함께 상승작용을 나타내었다. 이들 데이터는 피토에스트로겐 플라보노이드 제니스테인 및 다이드제인이 가용성 형태로 세포에 공급될 때 레티노이드 활성을 상승적으로 증진한다는 본 발명자들의 청구 내용을 뒷받침한다.

제니스테인 및 레티노이드 사이의 상승작용
	CRABP-2 생산	% 대조용	대조용에 대한 p값	레티노이드에 대한 p값	상승작용
			p<0.05	p<0.05
대조용	0.29+/-0.07	100+/-27	1
10nM 레티노산	1.24+/-0.29	428+/-101	0.0055	1
1nM 레티노산	0.97+/-0.47	335+/-162	0.068	1
100nM 레티닐 리놀레이트	0.52+/-0.3	181+/-110	0.28	1
100nM 레티닐 팔미테이트	1.26+/-0.51	434+/-177	0.032	1
100NM 레티닐 아세테이트	0.60+/-0.32	209+/-118	0.19	1
1μM 제니스테인	1.9+/-0.71	655+/-247	0.018
1μM 제니스테인+10nM 레티노산	4.18+/-0.31	1441+/-108	3.23E-5	2.96E-04	있음
1μM 제니스테인+1nM 레티노산	4.01+/-0.61	1383+/-394	0.00049	0.012	있음
1μM 제니스테인+100nM 레티닐 리놀레이트	4.08+/-1.14	1408+/-213	0.0045	0.000982	있음
1μM 제니스테인+100nM 레티닐 팔미테이트	4.32+/-0.13	1489+/-47	160E-06	5.76E-04	있음
1μM 제니스테인+100nM 레티닐 아세테이트	2.32+/-0.91	800+/-313	1.80E-02	3.80E-02	없음

다이드제인 및 레티노이드의 상승작용
	CRABP-2 생산	% 대조용	대조용에 대한 p값	레티노이드에 대한 p값	상승작용
			p<0.05	p<0.05
대조용	0.29+/-0.07	100+/-27	1
10nM 레티노산	1.24+/-0.29	428+/-101	0.0055	1
1nM 레티노산	0.97+/-0.47	335+/-162	0.068	1
100nM 레티닐 리놀레이트	0.52+/-0.3	181+/-110	0.28	1
100nM 레티닐 팔미테이트	1.26+/-0.51	434+/-177	0.032	1
100NM 레티닐 아세테이트	0.60+/-0.32	209+/-118	0.19	1
1μM 다이드제인	1.49+/-0.66	513+/-227	0.035
1μM 다이드제인+10nM 레티노산	3.42+/-1.01	1181+/-350	0.0059	0.023	있음
1μM 다이드제인+1nM 레티노산	3.52+/-0.47	1213+/-163	0.000309	0.027	있음
1μM 다이드제인+100nM 레티닐 리놀레이트	3.29+/-0.14	1136+/-142	0.00024	0.00078	있음
1μM 다이드제인+100nM 레티닐 팔미테이트	2.51+/-0.19	865+/-65	4.90E-05	1.69E-02	있음
1μM 다이드제인+100nM 레티닐 아세테이트	2.27+/-1.4	782+/-489	0.07	0.11	없음

하기 표는 제니스테인 및 다이드제인의 레티놀 불안정화에 대한 효과를 보여준다. 실험은 방법 부분에서 기술된 바와 같이 수행되었다. 이중 측정으로부터의 OD 기록을 평균내고 여기에 기록했다.

제니스테인 존재 시의 레티놀의 안정성
시간(hr)	0% 제니스테인	0.0001%	0.001%	0.01%
8	92	84	82	82
24	86	76	74	80
48	81	77	73	76

다이드제인 존재 시의 레티놀의 안정성
시간(hr)	0% 다이드제인	0.0001%	0.001%	0.01%
8	92	82	80	73
24	86	78	79	69
48	81	76	76	68

어떠한 작용제도 존재하지 않을 때 레티놀 단독으로는 천천히 분해되었다(8시간 8%, 24시간 14% 및 48시간 19%). 그러나, 제니스테인 및 다이드제인이 존재하면 레티놀의 분해는 가속화되었다. 8시간의 짧은 시간 동안, 16-18%의 레티놀이 이들 플라보노이드의 존재 시에 분해되었다. 이것은 제니스테인 및 다이드제인 모두가 레티놀의 불안정성을 현저하게 증가시킨다는 것을 제안한다. 이로 인해 특별한 포장, 즉 레티놀에 대한 하나의 구획 및 플라보노이드에 대한 또 하나의 구획을 포함하는 포장을 레티노이드 및 플라보노이드를 포함하는 제품에 사용해야할 필요성이 야기되었다.

Claims

0.01% 내지 1%의, 레티닐 에스테르, 레티놀, 레티날 및 그의 혼합물로부터 선택되는 레티노이드를 포함하는 제 1 조성물;

0.001% 내지 10%의, 제니스테인, 다이드제인, 글리시틴, 비오카닌 A, 포르모노네틴 및 이퀄과 그의 혼합물로부터 선택되는 1종 이상의 피토에스트로겐을 포함하는 제 2 조성물;

제 1 조성물을 저장하기 위한 제 1 구획; 및

제 2 조성물을 저장하기 위한 제 2 구획을 포함하며, 여기에서 제 1 및 제 2 구획은 서로 연결되어 있고 제 1 및 제 2 조성물은 상승적으로 효과적인 양으로 제공되는 안정한 피부 관리 제품.
제 1 항에 있어서, 상기 제 2 조성물이 2종 이상의 상기 피토에스트로겐을 0.001% 내지 10%의 양으로 포함하는 안정한 피부 관리 제품.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 피부 콘디쇼닝(conditioning)을 위해 상기 제 1 및 제 2 조성물이 피부에 국소적으로 도포되는 안정한 피부 관리 제품.
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제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 피부 관리 제품이 건조 피부, 여드름, 광손상 피부, 주름 발생, 노인성 반점 또는 노화 피부의 치료; 각질층 탄력성의 증가; 피부 미백; 피지 분비 조절; 박피 증진; 또는 표피 분화 증진을 위한 것인 안정한 피부 관리 제품.
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