KR100782972B1 - 해란초 추출물을 포함하는 항산화, 항염 효과 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 해란초(Linaria japonica MIQ.) 추출물을 포함하는 항산화, 항염 효과 화장료 조성물에 관한 것으로서, 채취한 해란초를 유기용매로 추출한 후 이의 건조물을 항산화 및 항염효과가 있는 화장료의 조성물을 제공하는 것이다. 본 발명의 해란초 추출물은 자유라디칼 소거, 지질과산화, 히아루로니다아제 활성억제, 리폭시게나아제 활성 억제, 면역세포 탈과립화 억제 효과 등과 같은 항산화, 항염 효과를 갖는다.

해란초, 화장료, 항산화, 항염

Description

해란초 추출물을 포함하는 항산화, 항염 효과 화장료 조성물{make-up cream containing linaria japonica extract}

본 발명은 항염 및 항산화 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 해란초 추출하여 인체에서 면역세포 탈과립화, 히아루로니다아제, 리폭시게나아제, 지질과산화, 자유라디칼, 자외선 등에 의한 염증 또는 기타 라디칼 반응을 억제함으로써 염증 및 항산화 효과가 있는 화장료 조성물에 관한 것이다.

자유라디칼 이론은 1950년대 중반 디 하만(D. Harman)에 의해서 제시되었으며, 최근들어 학회와 관련업계에서 주목을 받고 있다.　 라디칼이 인체에 존재하는 원인은 여러 가지 원인이 있으며, 이 라디칼은 세포를 파괴하거나 피부 진피층의 결합조직을 절단하거나 교차 결합을 일으키므로 주름형성, 피부암, 세포살상, 류마티스성 관절염, 아토피성 피부염, 여드름 등 여러 가지 문제를 발생시킨다.　 radical이 생성되는 원인은 백혈구의 식작용, 미토콘드리아에서의 ATP 생산과정 중 전자 전달계, 미엘로퍼 옥사이드(Myeloper Oxide(MPO)) 의 작용, 자외선, 담배, 정상적인 대사 과정, 스트레스, 공해 물질, 세균 등이다.　

물론 인체에는 항산화물질(라디칼 소거제)인 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 (SuperOxide Dismatase:SOD), 카탈라아제, 비타민 E, 비타민 C, 유비퀴놀 (Uviquinol) 등이 있다. 그러나 점차적으로 항산화 체계는 나이, 공해, 자외선, 스트레스 등에 의해 깨지기 시작한다. 그러므로 항산화 체계가 무력화되고, 라디칼이 점차로 증가하게 된다.

이 증가된 라디칼은 진피의 결합조직인 콜라겐(Collagen), 엘라스틴 (Elastin), 히아루론산(Hyaluronic aicd) 등을 파괴하여 피부의 일정 부위 침하 현상을 (주름) 일으키며 또한 세포막의 지질 부분을 산화시켜 세포의 파괴 현상을 일으켜 피부염, 여드름, 피부암 등의 질병을 유발하게 되는 것이다.　 또한 이 라디칼은 멜라닌 형성과정 중 자발적인 산화반응 (도파퀴논→ 멜라닌)에 관여하여 기미, 주근깨 등의 원인 및 주름생성의 원인이 되기도 한다. (대한 화장품학회지 23권 1호 75~132)　

염증은 해로운 주위 환경, 즉 세균과 같은 외부 이물질의 침입과 기계적 손상으로부터 생체를 보호하는 생리적인 반응이다. 이 염증현상은 여러 종류의 다형핵 백혈구(PMNs)와 면역 물질의 많은 증가를 초래하고, 이들 세포들은 염증성 세포산물인 다양한종류의 단백질 분해효소와 시토키닌(cytokine) 등을 분비 함으로써 치료 및 방어을 할 수 있게 한다. Elastase, hyalurinidase 및 lipoxygenase와 같은 효소들은 염증시 생성되는 단백질 및 지질 분해 효소들로 잘 알려져 있다.

한편 이들의 작용은 때로는 인접해 있는 조직 세포와 비세포 성분들에게도 해로운 손상을 일으키키도 하므로, 따라서 적절한 조건하에서는 염증은 초기 상태 가 지난 후에는 정상기능을 되찾게 되지만 염증을 자극하는 자극제가 없어지지 않거나 계속해서 만들어지면 결과적으로 만성염증이 일어나게 되어서 더욱더 심각한 조직의 손상을 가져온다.

이처럼 과다 염증에 의해 유발도는 단백질 분해 효소들에 의해 세포 및 결합조직이 손상을 입고 결합 조직의 손상은 피부의 탄력을 감소시켜 주름의 원인이 될 뿐 아니라 나아가 세포의 재생 및 증식에도 나쁜영향을 미치게 되어 빠른 피부노화를 초래하게 된다. 또한 피부에 있어서 염증은 국소적인 홍반과 부풀음에 의해 특정지어지며, 손상이 보다 커지게 되면 정상조직은 섬유아세포의 증식과 결합조직 단백질의 축적의 결과로 나타나는 흉터조직에 의한 소산단계에 있어서 복원된다. 그러나 만일 조직이 보다 심각하게 손상되고 염증반응이 지속된다면 정상적인 조직구조와 기능을 회복시키는 일은 훨씬 어렵게 된다.

염증과 함께 백혈구의 이주를 촉진시키는 매개체의 생성은 arachidonic acid를 통한 과정에 의해서도 이루어진다. 이 경로는 cyclooxygenase에 의한 과정과 lipoxygenase에 의한 과정으로 되어 있으며 이들 효소에 의해 생성된 leukotriene과 prostagladine이 염증 유발 인자로 작용한다. 따라서 lipoxygenase와 cyclooxygenase의 저해제는 염증유발물질의 생성 억제뿐만 아니라 염증시 생성되는 활성산소에 의한 세포막 파괴와 지질의 과산화반응을 억제하는 물질로서 항염증 작용을 나타낼 수 있다. 또한 과다 염증에 의해 생성되는 단백질 및 지질분해효소들을 억제함으로서 그로 인해 손상되는 세포들을 보호하여 피부노화를 억제할 수 있다.

따라서, 이러한 자유라디칼과 염증에 의한 피부 트러블의 개선을 위해서는 항산화, 항염의 효과가 우수하며, 부작용이 없고 비용이 저렴한 물질의 개발 및 그 물질을 함유하는 사용이 용이한 화장료의 개발이 필수적이다.

해란초(Linaria japonica MIQ.)는 현삼과(Scrophulariaceae)의 식물로서 한국, 일본, 중국 동북부 및 내몽골 등지에 분포하는 다년생 초본 식물로 높이는 20~70 Cm 이다. 사질토, 초원, 건조한 산의 경사지와 산골짜기에서 자란다. 생약명으로는 유천어(柳穿魚)라 하고 이명으로는 운란초라 불리운다. 성분으로는 지상부에 알칼로이드인 페가닌(Peganine) 함유되어 있고, 꽃에는 플라보노이드(flavonoiid)인 리나린(Linarin), 펙토리나린(Pectolinarin), 네오리나린(Neolinarin)등이 있다. 해란초는 중의서인 내몽고중초약에 전하기를 황달, 피부병, 화상등에 이용하였다고 기록되어 있으며, 국내의 민간에서는 이뇨제, 피부질환에 사용하면 그 효과가 우수하다고 하여 자주 애용되었다. (약초의 성분과 이용, 과학 백과사전 출판사편, 일월서각, 1994, 중약대사전, 중약대사전편찬위원회, 도서출판 정담, 1997)

해란초 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 자유라디칼 소거, 면역세포 탈과립화 억제 및 항염의 효과가 우수하며, 피부 자극시험에서 부작용이 없는 안전하고 또한 생산비용이 저렴하고 사용이 용이한 화장료로서 효능성과 안전성 그리고 저렴성, 사용의 용이성이 탁월한 화장료 조성물이다.

현재 일반적으로 사용되고 있는 항산화 및 항염 효과있는 물질은 종래에는 아스코르브산, 토코페롤, SOD 등이 자유 라디칼 소거 효과를 가지는 물질로 화장료나 의약품에 배합함으로써 주름 및 기타 피부 질환을 방지하는 방법으로 이용되어 왔는데, 가격이 고가일 뿐만 아니라 배합 시 안정성이 좋지 못하여 실질적인 효과를 얻기가 어려운 문제점이 있었다.

본 발명은 항염, 항산화 작용을 동시에 가지며 피부트러블에도 유용하게 이용될 수 있는 신규한 화장료 소재를 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한 본 발명은 상기 효능을 갖는 신규한 화장료 소재를 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

이러한 본 발명의 목적을 해결하기 위해 항산화 및 염증에 효과가 있는 근본적인 물질을 찾고자 자연의 여러가지 천연물질들을 검색한 결과, 해란초 추출물이 매우 우수한 항염, 항산화, 등의 효능을 나타냄을 발견하였으며, 해란초 추출물 적용 제품들의 안정성, 안전성 문제를 동시에 해결하였다. 또한 화장료 조성물에서 일정 농도이상 배합하여 사람 피부에 직접 도포한 실험결과에서도 뚜렷한 피부 상태가 개선되는 효과를 발휘하게 됨을 발견하게 되었다. 본 발명은 리폭시게나아제, 히아루로니다아제 의 활성억제 및 면역세포 탈과립화 억제, 자유라디칼의 소거 등의 항산화 효과를 가짐으로 인해 피부 염증 개선 효과를 줌으로써 피부 트러블 개선을 근본적으로 할 수 있는 해란초 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공함으로써 달성된다.

본 발명에 따른 해란초 추출물을 포함하는 항산화, 항염 효과 화장료 조성물은 항산화, 항염, 세포 증식 효과를 가지며, 종래의 화장료에 비해 항산화, 항염, 피부 트러블 개선 효과 및 세포 증식 효과가 우수하며 각종 화장료에 배합하여 사용하는 것이 가능하였다.

본 발명은 항산화 및 염증에 효과가 있는 근본적인 물질을 찾고자 자연의 여러가지 천연물질들을 검색한 결과, 해란초 추출물이 매우 우수한 항염, 항산화, 등의 효능을 나타냄을 발견하였으며, 해란초 추출물 적용 제품들의 안정성, 안전성 문제를 동시에 해결하였다. 또한 화장료 조성물에서 일정 농도이상 배합하여 사람 피부에 직접 도포한 실험결과에서도 뚜렷한 피부 상태가 개선되는 효과를 발휘하게 됨을 발견하게 되었다. 본 발명은 리폭시게나아제, 히아루로니다아제 의 활성억제 및 면역세포 탈과립화 억제, 자유라디칼의 소거 등의 항산화 효과를 가짐으로 인해 피부 염증 개선 효과를 줌으로써 피부 트러블 개선을 근본적으로 할 수 있는 해란초 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

이러한 본 발명의 해란초 추출물을 포함하는 항산화, 항염 효과 화장료 조성물은 다음과 같다.

먼저, 채취한 해란초의 전초를 음건하여 세절한 후 그 건조 중량의 1~15배 부피량의 물, 탄소수 1~4의 저급 알코올 또는 이들 저급 알코올과 물과의 혼합용매, 에틸아세테이트 중에서 선택된 추출용매를 부가하여 4∼30℃에서 3∼20일간 침적시켜 유효성분을 추출한 후, 추출용매를 감압농축기로 농축하여 추출물을 얻는다.

또 다른 추출 방법으로는, 채취한 해란초의 전초를 음건하여 세절한 후 그 건조 중량의 1~15배 부피량의 물, 탄소수 1~4의 저급 알코올 또는 이들 저급 알코올과 물과의 혼합용매, 에틸아세테이트, 물, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용매를 사용한다. 이어서 용매가 증발되는 것을 방지하기 위해 냉각 콘덴서를 구비한 추출기로 30∼100℃에서 3∼48시간 동안 가열 추출하거나 5∼30℃에서 1~5일간 침적시켜 유효성분을 추출하는 방법을 사용하여 추출한 다음, 추출 용매를 감압농축기로 농축하여 추출물을 얻는다.

본 발명의 화장료 조성물에서 해란초 추출물을 액상의 중량으로서 0.1%~10%의 양을 화장료에 첨가할 수 있고, 또한 냉각 콘덴서가 달린 증류 장치를 이용하여 증발되어 나오는 용매를 회수하면서 그 건조중량으로서 0.001∼5중량%, 바람직하게는 0.01∼3중량%의 양으로 화장료에 첨가할 수 있다.

본 발명의 항산화 및 항염 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 화장수, 영양로션, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 팩 등의 제형을 가질 수 있다.

또한, 각 제형의 항산화 및 항염 화장료 조성에 있어서, 상기의 해란초 추출물 외에 다른 성분들을 기타 화장료의 제형 또는 사용목적 등에 따라 임의로 선정하여 배합할 수 있다.

이하, 실시예, 처방예 및 비교예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 상세히 설명하나, 본 발명이 이들에만 한정되는 것은 아니다.

해란초 추출물의 제조

실시예 1.

채취한 후 통풍이 잘되는 음지에서 건조한 해란초 100g을 메틸알코올 1㎏에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 100℃로 3시간 중탕 추출한 후 300메쉬 여과지로 여과하고, 약 50℃의 온도에서 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 47㎜ 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 완전히 농축하여 건조 중량 30.5 g을 얻었다.

실시예 2 ~ 4.

하기 표1의 용매로 하여 해란초를 실시예 1과 동일한 방법으로 추출하여 그 결과를 하기 표1에 기재하였다.

	용매	수득량(g)
실시예 2	물	26.3
실시예 3	30% 에틸알콜	28.1
실시예 4	70% 에틸알콜	29.6

실시예 5 ~ 7.

채취한 후 통풍이 잘되는 음지에서 건조한 해란초 100g을 하기 표2의 용매 각각 1㎏에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 90℃로 3시간 중탕 추출한 후 300메쉬 여과지로 여과하고, 1주일간 방치한 후 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 47㎜ 여과지 그리고 에드벤텍 0.2㎛ 제균 필터로 여과하여 하기 표2에 기재하였으며, 추출액 2g을 취하여 115℃에서 2시간 건조하여 측정한 결과를 중량 %(w/w)로 하기 표 2에 기재하였으며, 이는 추출액에 용해되어 있는 추출 고형분의 함량이다. (참고문헌 대한약전 증발 잔류물 측정법)

	용매	수득량(g)	고형분함량(%)
실시예 5	30% 1,3부틸렌글리콜 수용액	820	2.73
실시예 6	30% 프로필렌글리콜 수용액	810	3.15
실시예 7	30% 글리세린 수용액	790	2.32
실시예 8	20% 1,3부틸렌글리콜, 10 에틸알콜 수용액	830	3.47
실시예 9	20% 프로필렌글리콜, 10 에틸알콜 수용액	835	3.59

실시예 10.

실시예 1과 동일한 방법으로 추출하여 얻은 추출 고형분을 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 완전히 농축한 후 이 농축액에 물 1㎏를 가하고 다시 디에틸에테르 1㎏를 가하여 잘 섞어준 후 두 층으로 완전히 분리시켰다. 하층인 수층에 다시 1㎏의 에틸아세테이트를 가하여 잘 섞어준 후 두 층으로 완전히 분리시켜 에틸아세테이트 층을 감압 농축기를 이용하여 50℃로 완전히 농축하여 건조 중량 19.7g를 얻었다.

실시예 11.

상기의 실시예 10에서와 같이 에틸아세테이트로 층분리를 한 수층에 다시 부탄올을 약 1Kg 가하여 층분리를 시킨 후 감압 농축기를 이용하여 8.2g을 얻었다.

제조예 1.

실시예 4의 해란초 추출물 분말을 함유한 화장료 중 화장수(스킨로션)의 처방예는 다음과 같다.

번호	원 료	함량(중량%)
1	해란초 추출물 분말(실시예4)	1.0
2	글리세린	3.0
3	부틸렌 글리콜	2.0
4	프로필렌 글리콜	2.0
5	폴리옥시에칠렌 경화피마자유	1.0
6	에탄올	10.0
7	트리에탄올아민	0.1
8	방부제	미량
9	색소	미량
10	향료	미량
11	정제수	잔량

<제조방법>

11번에 2,3,4,8번을 순서대로 투입하고 교반하여 용해시킨 후, 5번을 60℃ 정도 가열하여 용해시킨 후, 10번을 투입하여 용해한 후 11번에 투입한다. 마지막으로 1,6,7,9번을 투입하여 충분히 교반한 뒤 숙성시킨다.

제조예 2.

실시예 4의 해란초 추출물 분말을 함유한 화장료 중 영양로션의 처방예는 다음과 같다.

번호	원 료	함량(중량%)
1	해란초 추출물 분말(실시예4)	1.0
2	밀납	1.0
3	폴리솔베이트 60	1.5
4	솔비탄 세스퀴올레이트	0.5
5	유동 파라핀	10.0
6	소르비탄 스테아레이트	1.0
7	친유형 모노스테아린산 글리세린	0.5
8	스테아린산	1.5
9	글리세릴스테아레이트/피이지-400 스테아레이트	1.0
10	프로필렌글리콜	3.0
11	카르복시폴리머	0.1
12	트리에탄올아민	0.2
13	방부제	미량
14	색소	미량
15	향료	미량
16	정제수	잔량

<제조방법>

10, 11, 13, 16을 혼합교반하면서 80 ~ 85℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 12를 80 ~ 85℃사이로 가열 용해한 후 유화한다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 50℃까지 냉각한 뒤 15번을 투입하고 45℃까지 냉각한 뒤 14번을 투입하고 35℃에 1번을 투입하여 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시킨다.

제조예 3

실시예 4의 해란초 추출물 분말을 함유한 화장료 중 영양크림의 처방예는 다음과 같다.

번호	원 료	함량(중량%)
1	해란초 추출물 분말(실시예4)	1.0
2	스테아린산	2.0
3	세틸알콜	2.0
4	글리세릴모노스테아레이트	2.0
5	폴리옥시에틸렌소르비탄모노스테아레이트	0.5
6	솔비탄세스퀴올레이트	0.5
7	글리세릴모노스테아레이트/글리세릴스테아레이트/폴리옥시에틸렌스테아레이트	1.0
8	왁스	1.0
9	유동파라핀	4.0
10	스쿠알란	4.0
11	카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	4.0
12	카르복시비닐폴리머	0.3
13	부틸렌글리콜	5.0
14	글리세린	3.0
15	트리에탄올아민	0.5
16	정제수	잔량

<제조방법>

12, 13, 14, 16을 혼합교반하면서 80 ~ 85℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11을 80 ~ 85℃사이로 가열하여 용해한 후 15를 투입 교반하여 제조부에 투입하고 유화한다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 35℃까지 냉각하고 1번을 투입하여 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시킨다.

제조예 4.

실시예 4의 해란초 추출물 분말을 함유한 화장료 중 에센스의 처방예는 다음과 같다.

번호	원 료	함량(중량%)
1	해란초 추출물 분말(실시예4)	1.0
2	시토 스테롤	1.7
3	폴리글리세릴 2-올레이트	1.5
4	세라마이드	0.7
5	스테아레스-4	1.2
6	콜레스테롤	1.5
7	디세틸포스페이트	0.4
8	농글리세린	5.0
9	마카다미아 오일	15.0
10	카르복시비닐폴리머	0.2
11	산탄검	0.2
12	방부제	미량
13	향료	미량
14	정제수	잔량

<제조방법>

2, 3, 4, 5 및 6을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질이라 칭한다. 상기 비이온계 양친매성 지질과 1, 7, 8 및 14를 혼합하고 일정한 온도에서 균질화하여 마이크로플루이다이져를 통과하고 이어 9를 일정한 온도에서 서서히 첨가하여 균질화한 후 다시 마이크로플루이다이져에 재차 통과시킨다 그리고 10, 11, 12, 13을 투입하여 분산시켜 안정화하고 숙성시킨다.

실험예 1.

상기 실시예 1 ~ 4, 10, 11에서 제조된 추출물 건조분말에 대하여 세포배양을 이용한 세포 증식 효과를 측정하였다.

1) 실험방법

세포 독성 및 증식 실험을 다음과 같은 방법으로 실시하였다. 배양하고 있는 세포(파이브로블라스트,3T3)를 96 웰 마이크로플레이트에 5,000세포/웰로 분주하여 30분간 항온조에서 배양하고, 시료를 농도 별 각각 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1.0(%,W/V))로 투여하여 72시간동안 배양하였다. 그리고 티아졸린 블루(Thiazoline blue)를 투여하고 4시간동안 추가 배양을 하였다. 배양액을 모두 버리고 마이크로플레이트의 각 웰에 반응 정지액을 가하고 5분간 교반한 후, 570㎚에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 시료 주입량만큼 10 % 우태아혈청(Fetal Bovine Serum, FBS) 배지를 투여하여 세포 성장의 최적 조건으로 동시배양을 하였으며, 대조군의 세포증식을 100%로 하고 시료 투입 실험군의 세포 증식율을 계산하였다.

2) 실험결과

세포증식 효과는 계산식1에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 3에 나타내었으며, 도1의 그래프로 도식화하였다.

<계산식 1>

세포 증식	시료	추출물 농도(%)
		대조군	0.01	0.05	0.1	0.5	1
	실시예 1	100	102.6	111.4	120.9	124.5	128.9
	실시예 2	100	101.3	107.6	117.1	126.6	134.3
	실시예 3	100	102.1	109.3	118.6	126.1	132.5
	실시예 4	100	100.8	105.1	113.1	120.7	123.0
	실시예 10	100	104.3	110.3	121.6	128.6	137.2
	실시예 11	100	101.0	106.7	115.5	122.4	127.8

본 실험은 해란초를 용매별로 추출 하였을 때 독성 및 증식을 확인하기 위한 실험이었다. 표 3에 나타난 바와 같이, 세포 성장 최적 조건에서의 세포 증식을 100%로 하였을 때, 해란초 추출물은 세포의 독성이 없으며 세포 증식 효과가 우수하고 안전한 것임을 확인할 수 있었다. 해란초 추출물의 세포증식 효과를 도식화하여 도1에 표시하였다.

실험예 2.

상기 실시예 1 ~ 4, 10, 11에서 제조된 추출물 건조분말에 대하여 자유라디칼(Free Radical) 소거 효과를 측정하였으며 비교 물질로 Quercetin을 사용하였다.

1)실험방법

DPPH(1,1-디페닐-2피크릴-히드라질)법 (참조:Blois.M.S.Nature 181, 1190, 1958)을 사용하여 실험을 수행하였으며, DPPH와 Quercetin은 시그마(SIGMA)사의 것을 사용하였다. 0.2mM DPPH 메탄올 용액 1ml에 여러 농도(1, 5, 10, 20, 30, 40ppm)의 실시예 1~4, 10, 11 그리고 대조물인 Quercetin의 에탄올 또는 메탄올 용액 2ml를 첨가하고 잘 교반한 후 실온에서 10분간 반응을 시킨다. 그리고 517nm에서 흡광도를 측정하였으며, 이때 공시험으로 각 시료 대신 정제수를 사용하였다.

하기 계산식2를 이용하여 자유라디칼 소거효과를 구하고 그 결과를 아래의 표 4에 기재하였다.

<계산식 2>

2) 실험결과

자유라디칼소거효과	시료	추출물 농도(ppm)
		1	5	10	20	40	60
	실시예 1	7.3	19.4	46.3	88.7	97.2
	실시예 2	4.4	7.9	27.4	50.8	89.8	97.2
	실시예 3	4.6	11.7	37.2	80.6	94.2
	실시예 4	5.2	15.7	41.5	86.2	95.7
	실시예 10	8.3	23.4	50.3	93.7
	실시예 11	3.1	7.4	23.7	48.9	89.5	96.9
	Quercetin	8.9	25.6	54.8	95.2

실시예 1의 SC₅₀ : 15.37ppm

실시예 2의 SC₅₀ : 25.38ppm

실시예 3의 SC₅₀ : 17.42ppm

실시예 4의 SC₅₀ : 16.32ppm

실시예 10의 SC₅₀ : 10.40ppm

실시예 11의 SC₅₀ : 25.98ppm

Quercetin의 SC₅₀ : 9.98ppm

표 4에서 확인할 수 있는 바와 같이 에틸아세테이트 층으로 물질 분리한 실시예 10의 자유라디칼 50% 소거 농도(SC₅₀)는 10.40ppm이고 Quercetin의 자유라디칼 50% 소거 농도(SC₅₀)는 9.98ppm으로 거의 동일한 효과가 있었다. 또한 실시예 4의 자유라디칼 50% 소거 농도(SC₅₀)는 16.320ppm으로 Quercetin과 다소 차이는 있었으나, Quercetin이 단일 물질이며 이를 추출하여 그 순수 물질의 생산성과 사용상의 안정성 및 비용을 고려한다면 해란초 추출물이 더 효과적이다는 것을 알 수 있다. 해란초 추출물의 자유라디칼의 소거 효과를 도식화하여 도2에 표시하였다.

실험예 3.

상기 실시예 1 ~ 4, 10, 11에서 제조된 추출물 건조분말에 대하여 지질과산화(Lipid peroxydation) 억제 효과를 측정하였으며 비교 물질로 녹차 추출물을 사용하였다. 녹차 추출물과 동일한 추출물 조건으로 비교하기 위하여 실시예 1~4를 측정하였다.

1)실험방법

8% Sodium lauryl sulfate 수용액에 linolenic acid를 0.1%가 되게 용해하여 3.9ml을 취해서 여기에 농도별(0.5, 1, 3, 5, 10%)로 시료를 0.1ml를 첨가한 후 자외선을 한시간 조사한다. 그리고 1 ml를 취해서 0.8% TBA 수용액 1.5ml와 20% 초산(pH 3.5) 1.5ml를 첨가하고 1시간동안 중탕하여 냉각한 후 정제수 1ml와 n-BuOH:Pyridine(15:1) 5ml를 가하여 진탕하고 원심분리 후 n-BuOH층을 취해 532nm에서 흡광도를 측정한다.

공시험은 시료를 첨가하지 않은 것으로 하였다. 하기 계산식3를 이용하여 지질과산화 효과를 구하고 그 결과를 아래의 표 5에 기재하였다.

<계산식 3>

지질 과산화 억제 효과(%)

=100-(각시료의 반응흡광도/대조군의 반응흡광도*100)

2) 실험결과

지질과산화억제효과	시료	추출물 농도(%)
		0	0.5	1	3	5	10
	실시예 1	0	7.3	23.3	54.6	79.4	98.1
	실시예 2	0	6.7	19.6	51.7	73.2	95.3
	실시예 3	0	6.9	21.9	50.2	74.9	94.1
	실시예 4	0	7.1	22.2	53.5	76.2	96.3
	실시예 10	0	8.8	28.9	61.5	84.2	98.7
	실시예 11	0	6.3	15.7	42.4	68.7	92.3
	녹차추출물	0	6.5	19.7	49.8	70.6	97.5

실시예 1의 IC₅₀ : 3.87%

실시예 2의 IC₅₀ : 4.17%

실시예 3의 IC₅₀ : 4.16%

실시예 4의 IC₅₀ : 4.01%

실시예 10의 IC₅₀ : 3.55%

실시예 11의 IC₅₀ : 4.56%

녹차 추출물 IC₅₀ 4.20%

표 5에서 확인할 수 있는 바와 같이 실시예 1~4 및 10 그리고 11의 지질과산화 50% 억제 농도(IC₅₀)는 3.87, 4.17, 4.16, 4.01, 3.55, 4.56 %로 녹차 추출물의 지질과산화 50% 억제 농도(IC₅₀)인 4.20%보다 우수한 지질 과산화 억제 효과가 있음을 확인하였다. 해란초 추출물의 지질 과산화 억제 효과를 도식화하여 도3에 표시하였다.

실험예 4.

상기 실시예 1 ~ 4, 10, 11에서 제조된 추출물 건조분말에 대하여 리폭시게나아제(Lpoxygenase) 활성억제 효과를 측정하였으며 비교 물질로 Quercetin을 사용하였다.

1)실험방법

TBAS법을 사용하여 실험을 수행하였으며, 실험에 사용하는 Linoleic acid와 Lipoxygenase, Thiobabiturlic acid, Quercetin는 시그마(SIGMA)사의 것을 사용하였다. 1mM Linoleic acid 1ml에 여러 농도(1, 5, 10, 20, 40ppm)의 실시예 1~4 및 10 그리고 11, 그리고 Quercetin을 0.05ml를 첨가하고 Lipoxygenase 0.95ml를 투여 후 잘 교반하고 25℃에서 10분간 반응을 시킨다. 그리고 Trichloroacetic acid를 0.5ml 투여하고 Thiobarbiturlic acid 1ml 첨가한 후 10분간 heating을 한 후 얼음물에서 2~3분간 냉각시켜 반응을 종료시킨다. 반응이 종결된 반응액에 Butanol 2ml를 넣고 4000g로 5분간 원심분리 한 후 535nm에서 흡광도를 측정하였으며, 이때 공시험으로 각 시료 대신 정제수를 사용하였다.

하기 계산식4를 이용하여 Lipoxygenase 활성억제 효과를 구하고 그 결과를 아래의 표 6에 기재하였다.

<계산식 4>

2) 실험결과

리폭시게나아제활성	시료	추출물 농도(ppm)
		1	5	10	20	40
	실시예 1	4.3	22.2	45.7	85.8	97.3
	실시예 2	3.7	11.7	40.5	73.1	93.5
	실시예 3	2.1	18.8	46.3	82.7	98.2
	실시예 4	6.11	23.7	47.4	87.2	96.2
	실시예 10	8.8	31.5	59.2	95.7
	실시예 11	2.5	10.7	38.6	70.5	90.2
	Quercetin	9.1	30.2	60.5	94.64

실시예 1의 IC₅₀ : 15.61ppm

실시예 2의 IC₅₀ : 17.94ppm

실시예 3의 IC₅₀ : 16.02ppm

실시예 4의 IC₅₀ : 15.31ppm

실시예 10의 IC₅₀ : 9.51ppm

실시예 11의 IC₅₀ : 18.80ppm

Quercetin IC₅₀ : 9.56ppm

표 6에서 확인할 수 있는 바와 같이 에틸아세테이트 층으로 물질 분리한 실시예 10의 리폭시게나아제 50% 활성억제 농도(IC₅₀)는 9.51ppm이고 Quercetin의 리폭시게나아제 50% 활성억제 농도(IC₅₀)는 9.56ppm으로 동일한 효과가 있었다. 또한 실시예 1~4 및 11의 리폭시게나아제 50% 활성억제 농도(IC₅₀)는 15.61, 17.94, 16.02, 15.31, 18.80ppm 으로 Quercetin과 다소 차이는 있었으나, Quercetin이 단일 물질이며 이를 추출하여 그 순수 물질의 생산성과 사용상의 안정성 및 비용을 고려한다면 해란초 추출물이 더 효과적이다는 것을 알 수 있다. 해란초 추출물의 리폭시게나아제 활성억제 효과를 도식화하여 도4에 표시하였다.

실험예 5.

상기 실시예 1 ~ 4, 10, 11에서 제조된 추출물 건조분말에 대하여 히아루로니다아제 활성 억제효과를 측정하였다.

1) 실험방법

Morgan-Elson 법을 응용한 방법이다. Hyaluronidase의 최종 효소 활성을 400NF unit/㎖, HA의 최종 농도를 0.4㎎/㎖로 하고 게다가 활성제인 Compound 48/80 buffer 용액 (0.1㎎/㎖)을 사용하여 불활성형 Hyaluronidase의 활성화 단계의 저해작용을 중심으로 Hyaluronidase 활성을 측정하였다. 시료는 buffer에 용해하여 시료 용액으로 하고 대조군은 시료용액 대신에 buffer를 사용하였다. 또한 각각의 blank로는 효소용액 대신에 buffer를 사용하였으며, 대조군으로는 녹차 추출물을 사용하였다.

하기 계산식5를 이용하여 히아루로니다아제 활성억제 효과를 구하고 그 결과를 아래의 표 7에 기재하였다.

<계산식 5>

히아루로니다아제 활성 억제 효과(%)

=100-(각시료의 반응흡광도/대조군의 반응흡광도*100)

2) 실험결과

히아루로니다아제활성	시료	추출물 농도(%)
		0	0.5	1	3	5
	실시예 1	0	11.6	29.6	61.1	98.3
	실시예 2	0	5.3	19.4	48.6	90.1
	실시예 3	0	7.2	21.5	50.6	93.3
	실시예 4	0	9.3	25.6	58.2	97.2
	실시예 10	0	15.9	44.3	93.8
	실시예 11	0	7.9	24.6	52.6	94.1
	녹차추출물	0	6.2	20.4	49.2	91.3

실시예 1의 IC₅₀ : 2.42%

실시예 2의 IC₅₀ : 2.87%

실시예 3의 IC₅₀ : 2.74%

실시예 4의 IC₅₀ : 2.52%

실시예 10의 IC₅₀ : 1.50%

실시예 11의 IC₅₀ : 2.67%

녹차 추출물 IC₅₀ : 2.82%

표 7에서 확인할 수 있는 바와 같이 실시예 1~4 및 10 그리고 11의 히아루로니다아제 50% 활성억제 농도(IC₅₀)는 2.42, 2.87, 2.74, 2.52, 1.50, 2.67%이고 녹차 추출물은 2.82%로 우수한 히아루로니다아제 활성 억제 효과가 있음을 확인하였다. 해란초 추출물의 히아루로니다아제 활성 억제 효과를 도식화하여 도5에 표시하였다.

실험예 6. 면역세포의 탈과립화 억제 효과

상기 실시예 1 ~ 4, 10, 11에서 제조된 추출물 건조분말에 대하여 면역세포의 탈과립화 효과를 측정하였다.

1) 실험방법

본 발명의 파테놀라이드를 RBL-2H3 세포주(Rat mast cell line)에 처리하여 안티젠에 의한 탈과립화를 억제하는 효과를 나타낸 것이다.　　　　 RBL-2H3 세포주를 1% 어린 소 혈청(Fetal bovine serum)과 L-글루타민(Glutamine)을 포함하는 둘베코(Dulbeccos)에 의해 수정된 이글(Eagle)의 배지(Dulbeccos' modified Eagle's medium, 이하 DMEM)을 이용하여 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 배양하며, 고착성을 갖는 세포를 트립신(Trypsin)-EDTA 용액을 사용하여 부유시키며 이를 분리, 회수하여 실험에 이용하였다.

RBL-2H3 세포주를 활성인자(Dinitrophenol-conjugated human serum albumin, (DNP-HSA)-specific IgE)로 활성화 시킨 후 활성화된 세포에 안티젠(DNP-HSA) 50 ng/mL을 처리하고 추출물 각각을 0, 5, 25, 125 ㎍/㎖로 처리하여 60분및 120분 동안 배양하였다.　　　　 이후 엘리사 관측기(ELISA reader)를 이용하여 배지 내로 분비된 β-헥소사미니다제(hexosaminidase) 양을 측정하였다.　　　　 β-헥소사미니다제 분비 양의 억제는 면역세포의 탈과립화를 방지함을 의미한다.

면역세포탈과립화억제효과	시료	추출물 농도 (ug/ml)
		0	5	25	125
	실시예 1	0	25.6	59.0	97.2
	실시예 2	0	19.6	46.7	93.4
	실시예 3	0	22.1	53.4	96.2
	실시예 4	0	23.7	58.4	97.1
	실시예 10	0	28.7	67.9	98.8
	실시예 11	0	22.3	49.9	95.2

실시예 1의 IC₅₀ : 45.71 ug/ml

실시예 2의 IC₅₀ : 54.07 ug/ml

실시예 3의 IC₅₀ : 49.41 ug/ml

실시예 4의 IC₅₀ : 46.64 ug/ml

실시예 10의 IC₅₀ : 40.53 ug/ml

실시예 11의 IC₅₀ : 51.11 ug/ml

표 8에서 확인할 수 있는 바와 같이 실시예 1~4 및 10 그리고 11의 면역세포 탈과립화 50% 활성억제 농도(IC₅₀)는 45.71, 54.07, 49.41, 46.64, 40.53, 51.11 ug/ml로 우수한 면역세포의 탈과립화 억제 효과가 있음을 확인하였다. 해란초 추출물의 면역세포 탈과립화 억제 효과를 도식화하여 도6에 표시하였다.

도 1은 해란초(Linaria japonica MIQ.) 추출물의 세포증식 효과에 관한 그래프이다.

도 2는 해란초(Linaria japonica MIQ.) 추출물의 자유라디칼 소거 효과에 관한 그래프이다.

도 3은 해란초(Linaria japonica MIQ.) 추출물의 지질과산화 억제 효과에 관한 그래프이다.

도 4은 해란초(Linaria japonica MIQ.) 추출물의 리폭시게나아제 활성억제 효과에 관한 그래프이다

도 5는 해란초(Linaria japonica MIQ.) 추출물의 히아루로니다아제 활성억제 효과에 관한 그래프이다.

도 6은 해란초(Linaria japonica MIQ.) 추출물의 면역세포 탈과립화 억제 효과에 관한 그래프이다.

Claims (6)

1. 해란초 추출물을 포함하는 항산화, 항염 효과 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서, 해란초 추출물이 화장료 조성물 총 건조중량에 대하여 0.001∼5중량%의 양으로 포함되는 것을 특징으로 하는 항산화, 항염 효과 화장료 조성물.
3. 제1항에 있어서, 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 맛사지크림, 에센스, 팩의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 항산화, 항염 효과 화장료 조성물.
4. 제1항에 있어서, 해란초 추출물이 해란초를 물,탄소 수 1～3의 무수 또는 함수 알코올, 또는 에틸 아세테이트로 50～100℃에서 3～24시간 동안 추출한 다음, 농축하여 제조된 것임을 특징으로 하는 해란초 추출물을 포함하는 항산화, 항염 효과 화장료 조성물.
5. 제1항에 있어서, 해란초 추출물이 해란초를 물, 탄소 수 1～3의 무수 또는 함수 알코올, 또는 에틸 아세테이트로 4～30℃에서 3～20일간 추출한 다음, 농축하여 제조된 것임을 특징으로 하는 해란초 추출물을 포함하는 항산화, 항염 효과 화장료 조성물.
6. 제4항 또는 제5항에 있어서, 해란초 추출물이 추출공정의 수행 전 또는 후에 디에틸에테르 가용성분을 제거한 다음, 농축하여 제조된 것임을 특징으로 하는 해란초 추출물을 포함하는 항산화, 항염 효과 화장료 조성물.

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