KR100775678B1

KR100775678B1 - 13-에이치오디이의 혈관 생체적합성 조절제 및 세포이상증식 억제제로서의 용도

Info

Publication number: KR100775678B1
Application number: KR1020027013258A
Authority: KR
Inventors: 미첼알 부카난; 호로빈데이비드
Original assignee: 1411198 온타리오 리미티드
Priority date: 2000-04-07
Filing date: 2001-04-06
Publication date: 2007-11-09
Also published as: US20070197644A1; KR20030007495A; HK1050482A1; US20020028848A1; US7202276B2; EP1272169A2; MXPA02009831A; NZ522242A; DK1272169T3; WO2001076568A2; CA2304906A1; TWI287447B; AU2001250194A1; ATE414510T1; US20030153621A1; WO2001076568A3; DE60136618D1; WO2001076568B1; EP1272169B1

Abstract

본 발명은 혈관벽 기능장애 및/또는 손상에 따른 혈관 내피 생체적합성의 조절 및 혈관벽 세포 및 다른 타입의 세포 이상증식을 억제하는 것에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 13-하이드록시옥타데카-9Z, 11E-디에노익산(13-HODE)의 식이요법 및 약학적 제제, 그리고 혈관벽의 이상증식을 감소시키거나 억제하고 혈관벽 생체적합성을 회복시키는 그러한 용도에 관한 것이다.

Description

13-에이치오디이의 혈관 생체적합성 조절제 및 세포 이상증식 억제제로서의 용도{USE OF 13-HODE AS A REGULATOR OF VASCULAR BIOCOMPATIBILITY AND AN INHIBITOR OF CELL HYPERPLASIA}

본 발명은 혈관벽(VW)의 기능장애 및/또는 손상에 따른 혈관벽 세포 및 다른 타입의 세포 이상증식 억제뿐만 아니라 혈관내피 생체적합성의 조절에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 혈관내피세포 생체적합성을 회복시켜, 급성의 병리학적 반응중에 순환혈액 성분에 덜 반응성인 맥관구조가 되도록 하고, 혈관벽 자극, 기능장애 또는 손상 동안 및/또는 그에 따른 만성 이상증식세포 반응을 감소시키는, 13-하이드록시옥타데카-9Z, 11E-디에노익산(13-HODE)의 식이요법 및 의약적 조제물 그리고 그 용도에 관한 것이다.

세포간 상호작용은 심혈관질환, 암 및 전이, 그리고 감염 및 염증을 포함하는 대부분의 질병들의 발생에 있어서 근본적인 역할을 한다. 현재의 항혈전증 치료의 단점 및 한계 그리고 본 발명의 장점이 이하 심혈관질환과 관련하여 논의되지만, 이러한 논의는 다른 질환상태들과도 역시 관련된다.

심혈관질환: 치료 및 예방 - 기술의 설명

심혈관질환은 서구 사회에서 질병률 및 사망의 주 요인이다. 이 질환은 흡연, 과지방혈증, 고혈압 그리고 당뇨병에 의해서 더욱 악화된다. 지난 40여년 동안, 우리 사회는 특히 흡연 및 식이요법과 관련된 건강한 라이프 스타일을 장려하는 등의 심혈관질환을 줄이기 위한 여러 가지 단계를 밟아왔다. 그럼에도 불구하고, 매년 북아메리카에서만 600,000 이상의 경피투과 관상혈관확장술(PTCA) 및 예를 들어 관상동맥 우회로 이식술(CABG)과 같은 외과적 침입처리가 (심)혈관 혈류량을 개선하기 위하여 심혈관 질환자들에게 시술된다. 이러한 처리가 많은 환자들에게 효과가 있지만, 그 효과는 한정적이며 오래가지 못하고, 혈관벽 협착이 다시 발생하게 된다(RITA Trial Participants. 1993; Kirklin JW 등, 1989). 예를 들어, PTCA후 6개월 동안에 급성 헤파린 치료에 이어 계속적인 아스피핀(ASA) 치료 및/또는 경구 항응고제의 투여에도 불구하고 환자의 25-30%가 PTCA 6개월 이내에 재협착이 일어난다. 헤파린은 항트롬빈 III(AT III)에 의한 트롬빈 억제를 촉진하기 위하여 투여되어, 피브리노겐의 피브린으로의 분열을 방지하고 그에 따른 피브린 응혈 형성을 방지한다; 아스피린은 혈소판 고리산소화효소를 아세틸화 하기 위하여 투여되어, 혈소판이 프로트롬빈 자극에 덜 반응하도록 하는 트롬복산 A₂(TxA₂)의 합성을 억제한다; 경구 항응고제, 예를 들어, 큐마딘은 비타민 K-의존형 전응고제의 레벨을 줄이기 위하여 투여되어, 혈전형성에 적합한 전응고제 기질의 양을 감소시킨다. 따라서, 심현관질환을 치료하는 현재의 접근은 심장 및 혈관질환의 (재)발 생을 방지하기 위한 수단으로서 혈소판의 기능 및/또는 응고를 저하시키게 된다. 이는 근본적인 문제점을 해소하지 못하는 것으로, 이러한 문제점이 해소된다면, 환자들은 평상의 건강한 상태로 회복시킬 수 있을 것이다.

심혈관질환을 치료하기 위하여 현재 제안되는 유일한 방법들은, 아테롬성 동맥경화장애 형성의 위험을 감소시키는 지질감소제를 사용하는 방법과 유전자 치료법이다. 전자의 방법은 일정한 효과는 있으나 상기한 근본적인 문제점은 해결하지 못한다. 유전자 치료법은 사실상 상기 근본적인 문제점을 해소할 수 있는 것으로서 제안될 수 있으나, 심혈관질환에 대한 유전자 치료법은 아직 초기단계에 있으며, 복잡한 부작용의 위험성이 없는 것은 아니다(Libby P and Ganz P. 1997).

따라서, 질병의 근본적 요인들을 바로잡을 뿐만 아니라 그 발병을 예방하는 치료방법이 필요하게 되었다. 본 발명은 혈액세포/혈관벽 적합성을 본질적으로 조절하는 13-HODE의 이용과 관련된 것이며, 심혈관질환과 같은 질병을 치료하고 방지하기 위하여 현재의 항혈전증 치료보다 더욱 효과적인 치료법을 제공한다.

혈관벽 생체적합성을 조절하는 이론적 원리

혈관벽 생체적합성을 조절하는 이론적 원리와 현재의 항혈전 치료법보다 나은 장점을 보다 잘 이해하기 위하여, 현재의 항혈전 치료법 및 이들의 명확한 한계들 배후의 원리를 이하 설명한다. 그 다음에 혈관벽 생체적합성을 조절하는 개념을 이끌어왔던 몇몇 이론들 및 심혈관질환을 치료하고 예방하기 위하여 13-HODE를 이용하는 본 발명의 신규한 방법을 차례로 설명한다.

혈관벽 생체적합성의 조절

1. 혈관벽 협착 및 폐색

혈관협착 및 이에 따른 혈관폐색의 문제는 모든 의학적 문제중 가장 중요한 것중의 하나이며, 매우 광범위한 질병을 유발할 수 있는데, 그중 가장 잘 알려진 것이 관상동맥, 대뇌 및 말초동맥의 봉쇄이다. 물론, 인체에서 그러한 동맥봉쇄의 초기 진행을 파악하는 것은 매우 어렵고 거의 불가능하다. 건강하다고 느끼는 사람들은 이러한 질병에 대하여 적극적 조치를 취하려고 하지 않으며, 그 결과 의학적 증상이 명백해 지고 나서야 그 질병의 발병을 감지하게 된다. 혈관확장술과 같은 치료에 의하여 폐색 물질을 제거 또는 부분적으로 제거한 동맥의 재협착의 진행은 그 협착의 최초 발생과 관련된 진행과 많은 관점에서 유사할 것이라는 것이 일반적으로 인정되고 있다. 따라서, 혈관확장술후 또는 혈관벽 손상후의 혈관 재협착 및 폐색은 일차 및 이차 동맥폐색과 관련된 일련의 모든 경우의 모델로서 널리 이용된다.

혈관 재협착은 내막의 평활근세포(SMC)의 증식, SMC 합성 및 세포외 기질의 분비, 그리고 혈관벽 재형성의 조합의 결과로서 발생하는 것으로 생각된다 (Schwartz SM 등 1995; Strauss BH 등 1994; Chervu A, Moore WS. 1990; Bocan TMA, Guyton JR. 1985). 평활근세포의 증식은 혈관벽 손상시에 발생되는 트롬빈의 유사분열효과 및 혈관벽 손상위치에 부착되는 혈소판에 의하여 분비되는 혈소판-유도 성장인자(PDGF), 그리고 활성화된 내피세포에 의하여 분비되는 미토겐에 응하여 발생한다(Bocan TMA, Guyton JR. 1985; Chen LB, Buchanan JM. 1975; Ross R. 1993; Bretschneider E 등 1997; Fischman DL 등 1994; Grandaliano G 등 1998; Stouffer GA 등 1998).

다핵백혈구(PMNs) 및 단핵백혈구/대식세포 역시 혈관벽 손상부위에 침투하여 응고작용 및 혈소판을 활성화하여 이상증식을 증대시킨다(Alexander RW. 1994; Mallory GA 등 1939; Mehta JL 등 1998). 더우기, 침투하는 단핵백혈구는 대식세포, 섭취지질, 칼슘 그리고 다른 혈액유도 성분으로 분화되어 더욱 복잡한 아테롬성 동맥경화 플라크를 형성하게 된다(Chervu A, Moore WS. 1990; Bocan TMA, Guyton JR. 1985). 따라서, 다수의 세포간 상호작용이 있게 되어, 내막 이상증식 및 이에 따른 재협착을 유발하고 유지시킨다(Ross R. 1993; Schwartz RS. 1998; Cicala C, Cirino G. 1997).

이상의 모든 경우는 혈액성분들과 혈관벽의 상호작용에 관계하는 것으로서, '건강 상태'에서는 손상 및 감염에 대응하여 일어나고, (심)혈관질환까지는 가지 않게 된다. 그러나, 이러한 혈액성분과 혈관벽의 상호작용이 과하여 평활근세포의 증식, 혈소판/피브린 응고형성 및 혈관벽 이상증식 등이 유발되면, (심)혈관질환을 일으키게 된다.

2. 혈관벽 손상, 회복 그리고 재형성:

최근의 연구는 손상후의 혈관벽 재형성과 이어지는 임상 세팅에서의 혈관벽 재협착을 본질적으로 대비하여 내막 혈관벽 이상증식의 상대적인 기여를 검토하였다. 라퐁, 포스트, 민츠 등은, 내부 탄성층의 확장 또는 수축과 관계된 혈관벽 재 형성이 내막 이상증식보다 PTCA후의 재협착에 보다 기여한다고 주장한다(Lafont A 등 1995; Post MJ 등 1994). 베네스텐트 및 스트레스 연구의 결과는, 스텐트(stent)로 관상동맥의 직경을 늘리는 것은 재혈관화의 필요성을 줄이게 되므로 상기 주장과 일치한다고 이야기한다(Fischman DL 등 1994; Grandaliano G 등 1998). 코츠 등은 협착된 혈관벽에서보다 비협착된 혈관벽에서 평활근세포-유도 콜라겐(그리고 아마 보다 많은 평활근세포)이 보다 많이 있으므로 이에 동의하고 있다(Coats WD 등 1997; McGee MP 등 1995). 이상증식이 협착의 지배적 원인이었다면 그러한 주장에 이론이 있을 수 있다. 코츠 등은 기대만큼 효과적으로 협착을 억제하기 위한 현재의 항혈전증 치료의 실패는 그 치료가 평활근세포의 증식을 억제하는 것에만 현저하게 초점을 맞추었기 때문이라고 제시하였다. 그러나, 이러한 결론은 평활근세포 증식의 이질성 및 다양한 기질들을 합성하는 용량 또는 평활근세포 콜라겐 합성이 내피의 존재여부에 따라 영향을 받는다는 사실을 고려하지 않은 것이다. 특히, 내피세포는 평활근세포 단백질, 특히 타입 III 콜라겐의 합성을 억제한다 (Myers PR, Tanner MA. 1998). 이러한 이론은 사실이 아니다. 또한, 제1 손상 혈관벽의 이상증식 내막내의 세포외 기질은 엘라스틴이 풍부한 반면에, 제2 손상 혈관벽의 이상증식 내막내의 세포외 기질은 콜라겐이 풍부하다는 것이 알려졌다 (Buchanan MR, Brister SJ. 1998), (Capron Let 등 1997). 더우기, 이상에서 인용된 임상 연구는 손상의 복잡한 상태 때문에 스텐트를 필요로 하는 환자들을 대상으로 이루어진 것이다. 이러한 환자들의 재협착율은 스텐트를 필요로 하지 않는 PTCA 환자의 재협착율보다 4배 이상 높다. 스텐트를 필요로 하는 PTCA 환자의 치료는 스텐트를 필요로 하지 않는 PTCA 환자의 치료와는 많은 차이가 있다 (Antoniucci D 등 1998). 이러한 차이는 기초 레벨 및 임상학 말기 레벨에서 모두 그 결과에 영향을 미칠 것으로 보인다. 협착에 있어서 평활근세포의 이상증식 및 혈관벽 재형성의 상대적인 역할이 손상형태 및 항혈전증 치료 사용형태에 따라 변화될 것으로 보인다.

3. 혈액세포/손상된 혈관벽 상호작용:

통상적으로, 혈관벽은 비트롬보겐성이므로 순환혈액과 생체적합성을 가진다. 혈관벽이 손상되면, 그 혈관벽은 매우 높은 트롬보겐성이 된다. 손상된 정맥 및 동맥은 그들의 중막 및 내막 모두에서 조직인자를 발현한다. 이러한 발현은 손상후의 초과시간을 증가시킨다. 조직인자 발현은 손상되지 않은 혈관벽에서 최소로 나타난다(Channon KM 등 1997). 조직인자 발현은 손상부위를 침투하는 PMNs 및/또는 단핵백혈구/대식세포에 의하여 더욱 높아진다. 이러한 증진은 PMN 및/또는 단핵백혈구/대식세포 CD18 인티그린(integrin) 발현에 따라 좌우된다(Channon KM 등 1997; McGee MP 등 1995). 혈관벽 조직인자 발현은 SMCs내에 풍부한 혈관벽 조직에 걸쳐서 넓게 분포되어 있는 프로트롬빈을 활성화시킨다(McBane RD 등 1997). 트롬빈은 내피세포 PDGF 수용체의 발현을 상향 조절하여, SMC 증식(Grandaliano G 등 1998; DiCorleto PE, Bowen-Pope DF. 1983) 및 혈소판 활성화를 촉진시킨다. 활성화된 혈소판은 TxA2(혈관수축성인) 및 PDGF(SMCs의 분열촉진성인) 그리고 응고를 악화시키는 전응고제를 분비한다(Pakala R 등 1997). 손상된 혈관벽에 대한 혈 소판 관련인자 Xa/Va의 활동은 이것을 높은 트롬보겐성으로 이끈다. 이 후자의 효과는 96시간 이상 지속된다(Ghigliotti G 등 1998). 따라서, 이러한 다양한 경우들은 응고, 혈소판 기능 그리고 염증을 대상으로 하며, 또한 자체로서 혈관벽 혈전형성을 대상으로 하는 항혈전증 치료의 사용을 통하여 나타날 수 있다.

4. 항응고제 치료 및 혈관벽 이상증식:

헤파린이 시험관 및 생체내에서 실험을 통하여 유도된 SMC의 증식을 억제할 수 있다는 것이 많은 연구를 통하여 나타나고 있다(Castellot JJ Jr 등 1984; Clowes AW, Clowes MM. 1986; Ferrell M 등 1992; Hanke H 등 1992). 이것은 헤파린이 임상적으로 SMC의 이상증식 및 그에 따른 재협착을 방지할 수 있다는 것을 제시하고 있다. 그러나, 헤파린 치료에도 불구하고 재협착이 임상적으로 발생한다. 따라서, 트롬빈이 손상된 혈관벽 표면상에서 피브린 또는 다른 성분과 결합하면, 트롬빈이 AT III에 의한 억제 및 헤파린에 의한 그 효과의 촉진으로부터 보호됨을 알게 되었다(Okwusidi Jl 등 1991; Okwusidi Jl 등 1990; Hogg PJ, Jacson CM. 1989; Bar-Shavit R 등 1989). 더우기, 상기 표면에 결합된 트롬빈은 활성을 유지하여, 항응고 치료에도 불구하고 조직의 과응고에 기여하게 된다(Ghigliotti G 등 1998; Brister SJ 등 1993; Wells J 등 1994; Gill JB 등 1993). 결과적으로, 표면에 결합된 트롬빈은 혈소판 및 SMC 증식 그리고 다른 미확인 응고를 활성화시킨다. 또한 반복되는 손상에 의하여 증식하는 SMCs가 첫번째 손상에 의하여 증식하는 SMCs보다 헤파린 치료에 덜 민감하다는 입증이 있다(Capron L 등 1997; Geary RL 등 1995).

5. 항혈소판 치료 및 이상증식

항혈소판 치료가 본질적으로 SMC의 이상증식을 줄인다는 증거는 거의 없다. 명백히, 지속적인 아스피린 투여(ASA)는 다양한 심혈관질환을 가지는 환자들에 있어서 뇌졸증, 심근경색, 그리고 일시적 국소빈혈증의 위험을 줄이는데 효과가 있다(아스피린 시험자 공동연구. 1994). 그러나 지속적 아스피린 투여에 의한 전체적인 위험 감소는 단지 25% 정도이다(아스피린 시험자 공동연구 1994). 이러한 위험의 감소는 통계적으로는 상당해 보이지만, 기껏해야 어느 정도일 뿐이다.

또한, 지속적 아스피린 투여는 일부 환자들에게만 효과가 있을 수 있다 (Buchanan MR, Brister SJ. 1995; Grotemeyer K-H 등 1993; Grotemeyer KH. 1991). 이것은 부분적으로 지속적인 아스피린 섭취후, 다양한 자극에 대한 혈소판 반응이 광범위하게 가변적이기 때문일 수 있다(Mueller MR 등 1997). 지속적인 아스피린의 투여효과는 또한 한계가 있고 2년 후에는 거의 효과를 보지 못한다(아스피린 시험자 공동연구 1994).

혈소판 당단백질 Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa) 수용체를 차단하는 대안적인 항혈소판약제가 지속적 아스피린 투여법의 훌륭한 대안으로서 제안되고 있다. EPILOG 연구는 c7E3로 GPⅡb/Ⅲa 수용체를 차단하는 것이 PTCA를 받고 있는 환자에 있어서 급성 국소빈혈 합병증을 감소시킨다는 것을 증명하였다. 유사한 결과가 비펩티드 GPⅡb/Ⅲa 길항제인 아그레스테트(Aggrastat)를 이용한 PRISM 연구에서도 얻어졌다 ( 국소빈혈 증후군 관리 연구 연구자들의 혈소판 수용체 억제(PRISM). 1998). 지속적 아스피린 투여와 비교해서 이 화합물을 짧은 t¹/₂(반감기)만 투여하여도 유출 부작용을 피할 수 있다는 것이 제시되었다. 그러나, 유출문제는 여전히 논쟁의 여지를 남겨두고 있다. 보다 중요하게는, 아스피린 처럼 이 화합물들에 의하여 장기간의 이상증식이 억제된다는 것을 제시하는 임상적 증거는 거의 없다.

최근의 연구에 따르면, 혈소판기능 억제제가 이상증식 및 재협착을 방지함에 있어서 효과가 거의 없다는 것은 놀란만한 것이 아니다. 특히, Sirois 등은 동물들에게 혈소판 감소증을 일으키고 그들의 동맥을 손상시켰다. 혈소판 감소증은 짧거나 긴 기간동안 지속되었고, 그리고 나서 그들의 혈소판수는 보통의 수치로 회복되었다. 장기간의 혈소판 감소증 동물들의 경우 혈관벽 이상증식 발현이 지연된 반면에, SMC의 증식에 대한 잠재성은 결코 해소되지 못하였다. 따라서, 내측의 SMC PDGR-β 수용체 발현이 혈소판 감소증의 유무에도 불구하고 모든 동물들에 있어서 상향 조절되었다. 그 결과, 혈소판수가 보통의 상태로 회복되었을 때, SMC의 증식 및 이에 따른 내막 이상증식이 시작되었다(Sirois MG 등 1997). 이러한 데이터는 만성 내막 이상증식을 억제하기 위하여 급서의 혈소판/혈관벽 상호작용을 조절할 필요가 있다는 것을 강조할 뿐만 아니라, 모든 한정된 기간 동안의 혈소판 억제만으로는 지속적인 효과를 가질 수 없을 것이라는 것을 제시하는 것이다.

6. 현재의 항혈전증 치료의 한계

이상에서 인용된 모든 실험 및 임상 연구들은 아테롬성 동맥경화증의 진행에 있어서 각 진행단계를 약화시키기 위하여 다양한 방법을 이용하는 것이 임상적으로 효과가 있음을 나타내고 있지만, 그러한 다양한 방법중 어느 것도 발병을 예방하지 못하거나 그 병의 회복을 이끌지는 못한다. 더우기, 위에서 설명된 모든 치료방법들은 혈액의 응고, 혈소판 기능 및/또는 손상된 혈관벽의 치료와 절충함으로써 간접적으로 작용한다. 그 결과, 현재 권장되는 항혈전증 치료를 받고 있는 모든 환자들은 지혈기능 장애를 가지게 되어 심한 출혈 위험에 놓이게 된다. 따라서, 혈관질환을 방지 및/또는 치료할 수 있으며, 어떠한 부작용도 없는 보다 나은 효과를 이룰 수 있는 항혈전증 치료법이 필요하다.

7. 13-HODE 혈관벽 생체적합성 및 이상증식

혈관벽 생체적합성을 개선함으로써 혈관벽 이상증식을 방지하는 개념은, 혈관벽 지질축적 및 혈관벽에의 지방층의 형성을 줄이려는 시도로 지방 및 콜레스테롤의 섭취를 줄이는 견지를 제외하고는 직접적으로는 고려되어 오지 않았다. 대부분의 시도는 혈액성분 특성을 바꾸기 위한 혈관벽 구성성분의 격리 및 재조합 합성 및 그에 따른 이용에 초점을 더욱 맞추어 왔다. 예를 들어, 내피세포-유도 질소산화물, 조직 플라스미노겐 활성제 그리고 프로스타사이클린은 급성 혈전색전증의 질병을 가지는 환자들을 치료하는데 유용하다고 제시하는 실험 및 임상 데이터가 있다(Gershlick AH 등 1994; Zerkowski H-R 등 1993; GUSTO 연구원들 1993). 항혈소판 및 항응고제 치료법과 같이, 이들의 효과는 혈소판 기능, 혈관벽 보정 및 혈전 용해를 대상으로 하여, 지혈 및 응고를 이루게 한다. 더우기, 이들 모두는 혈관벽 손상 또는 활성화에 의해서만 생성되며, 본질적으로 건강하거나, 손상된 또는 질병화된 혈관벽의 선천적 생체적합성 특성을 조절하는 효과는 거의 없다는 것을 알아야 한다.

13-HODE는 인체의 다양한 세포 및 조직내에서, 특히 건강한 혈관벽내의 혈관내피세포 및 상피(표피) 세포에 의하여 생성된다. 13-HODE는 식이의 필수 지방산인 리놀레익산에 작용하는 15-리폭시게나제로 알려진 효소의 작용에 의하여 형성된다. 첫째 단계는 13-하이드로퍼옥시옥사데카-9Z, 11E-디에노익산(13-HODE)을 생성하기 위하여 리놀레익산을 산화시키는 것이다. 다음 이것은 13-HODE로 환원된다. 13-HODE는 짧은 수명을 가지며 모든 합성이 다양한 자극에 의해서 활성화되는 중요한 신호전달분자이다(Buchanan MR 등 1985; Haas TA 등 1990; Weber E 등 1990; Bertomeu M-C 등 1990; Brister SJ 등 1990; Buchanan MR, Bastida E. 1988; Cho Y, Ziboh VA. 1994; Mari I. 1998; Kang L-T 등 1999; Pongracz J, Lund JM. 1999; Friedrichs 등 1999; Cho Y, Ziboh VA. 1994). 13-HODE의 많은 효과들이 프로틴 키나제(PK), 특히 PKC 및 미토겐-유도 PK (MAP 키나제)의 억제에 의하여 조정된다.

유질 액체인 13-HODE는 이것의 모체 지방산, 리놀레익산과 마찬가지로 포스포리피드 및 트리글리세라이드를 포함하는 복합분자의 범위로 합입될 수 있다 (Spiteller G. 1998; Fang X 등 1999). 복합지질에 합입되지 않는 13-HODE는 수소화반응 및 베타-산화에 의하여 빠르게 대사된다(Bronstein JC, Bull AW. 1993; Hecht, Spiteller G. 1998).

13-HODE의 효과 조사에 대한 대부분의 연구는 내생적 13-HODE 생성을 바꾸는 것 또는 외생적 13-HODE(다양한 형태로)를 시험관에서 배양된 세포에 부가하는 효과를 측정하는 것에 뜻을 두고 있다. 과거에는, 동물 및 인간에게 경구 또는 비경구로 13-HODE를 투여했을 때 13-HODE의 효과를 측정하는 연구는 거의 없었다. 이러한 제한은 부분적으로 많은 양의 13-HODE를 만드는 것이 어렵고 과학분야의 적용이 어려웠기 때문이다. 그 결과 생체내 연구를 위하여 필요로 하는 13-HODE의 양은 매우 비싸지게 되었다. 둘째, 많은 신호분자들처럼 13-HODE는 불안전하고 쉽게 대사변화를 일으킨다고 믿어져 왔다. 이와 같이, 경구투여되는 물질중 어느 것도 이것이 작용하는 목표 부위에 도달되리라고 기대되지 않았기 때문에 13-HODE의 경구투여와 관련된 연구를 수행하는 것은 시간과 비용의 낭비라고 여겨져 왔다.

그러나, 경구 투여된 13-HODE가 생체내에서 생물학적으로 효과가 있음을 제시하는 몇몇 연구가 있다. Streber의 특허는 안드로겐을 에스트로겐으로 변환시키는 아로마타제 효소를 억제하기 위한 13-HODE와 다른 관련된 지방산의 이용에 대하여 개시하고 있다. 치료의 목적은 유방암 및 몇몇 타입의 양성 전립선 이상증식과 같은 에스트로겐에 의하여 발병되는 모든 질병에 작용하도록 하는 것이다. 그러나, Streber의 특허에서 제공되는 모든 증거는 시험관 내에서 얻어진 데이터를 근간으로 하는 것을 알아야 된다. 그 발명이 실제로 생체내에서 작용하는 것을 보여주는 어떠한 실험도 없다. 더우기, Streber는 (비록 정제, 캡슐 또는 당의정이 이용될 수 있다고 기재되어 있지만) 투여방법 또는 그 물질이 어떻게 형성될 수 있는 지에 대한 실질적인 상세한 설명을 제시하지 않고 있다. 결국, 100-1000 mg 범위, 바람직하게는 200-500 mg의 범위로 특정된 일일 복용량만이 명시되어 있다(Streber AS. 에스트로겐 의존적 질병을 치료하기 위한 하이드록시-옥타데카디에노익산. 미국특허 5,102,912호. 1992년 4월).

리놀레익산의 하이드록시 유도체를 경구 투여한 모든 실험을 실질적으로 설명하는 유일하게 우리에게 알려진 연구는 Kaminakai 등의 연구이다(일본특허 #7-291862, 1995.11.07). 그러나, 이들은 13-HODE에 대해서는 간단한 언급만을 하였다. 그들의 실험에서 특허에 따라 제조된 리놀레익산의 실질적인 하이드록시 유도체는 다른 지방산, 즉 그 특허 도 2에서 보여지고 있는 NMR 스펙트럼에서 설명되고, 그리고 그들의 실험에서 실질적으로 제조되고 연구된 물질로 설명서에 기재된 9-하이드록시-10(E)-12(Z) 옥타데카디에노익산(9-HODE)이다. 이 실험들은 쥐의 복강내에 이식한 사코마 180 종양의 활동에 영향을 주기 위하여 경구 투여된 9-HODE의 사용을 포함한다. 그들은 종양의 성장율에 대한 억제효과를 보고하고 있으며 필요한 최소 유효 복용량은 55 mg/kg/일이다.

혈전형성을 방지하기 위한 혈관벽 생체적합성의 변화에 특별히 초점을 맞춘 유일한 13-HODE 연구는 Buchanan 등에 의하여 보고되었다. 이들의 초기 연구는 건강한 혈관벽 세포가 계속하여 리놀레익산을 생성한다는 것을 보여주고 있다; 즉, 내피가 비트롬보겐성 또는 순환혈액과 생체적합성인 때에(Buchanan MR 등 1985). 세포내의 리놀레익산은 리폭시게나제 경로(lipoxygenase pathway)를 통하여 13-HODE로 대사변화된다(Haas TA 등 1990).

또한 그들은 다음과 같은 것을 보고하였다:

i) 내생적 혈관벽의 13-HODE는 건강한 상태 및 혈전성 상황에서는 혈관벽 생체적합성을 조절하는데 중요한 역할을 한다. 예를 들어, 혈관벽 세포의 혈전형성은 동물 및 인간 모두에 있어서 혈관벽 13-HODE 수치에 대하여 역으로 변화한다. 따라서, 동물 및 인간 모두에게 13-HODE의 내생적 수치를 증가시키는 것은 혈관벽 세포의 혈전형성을 감소시키는 결과(Weber E 등 1990; Bertomeu M-C 등 1990; Brister SJ 등 1990; Buchanan MR, Brister SJ. 1994); 손상후의 혈소판/혈관벽 상호작용을 감소시키는 결과(Weber E 등 1990; Bertomeu M-C 등 1990; Buchanan MR, Brister SJ. 1994)를 가져온다; 그리고

ii) 13-HODE는 리간드를 인식하기 위하여 비트로넥틴 수용체의 능력을 하향조절하여, 비트로넥틴, 피브로넥틴 그리고 피브린(피브리노겐)에 대한 접착성을 감소시킨다(Buchanan MR 등 1998).

13-HODE의 이러한 방지효과를 강조하는 메카니즘은 프로틴 키나제(PK), 특히 PKC 및 미토겐-활성 PK (MAP 키나제)의 억제와 관련하는 것으로 생각된다.

이러한 모든 연구에서, 그 목적은 항상 13 HODE의 내생성 합성 또는 파괴를 조절하여 13-HODE의 내생성 생상량 수치를 올리는 것이라는 중요한 사실이다. 이 연구들의 어떠한 것도 13-HODE의 외생성 투여에 의한 혈관벽 13-HODE 수치의 조절을 고려하지는 않았다. 이것은 포스포디에스테라제 억제제이며 내생성 13-HODE 대사를 조절하는 것으로 생각되는 페르산친(디피리다몰)의 투여와 관련된 일련의 실험에 의해서 명확히 보여지고 있다.

이러한 실험들은, 혈관벽 13-HODE 수치 증가와 관련되는 항혈전 치료법이 SMC의 이상증식을 감소시킨다는 것을 보여 주었다. 토끼들을 첫번째 또는 두번째 손상전에 페르산틴(7일 동안 1 mg/kg/일)으로 처리하였으며, 그리고 4주후에, 내막 SMC의 이상증식이 측정되었다. 페르산틴은 포스포디에스테라제를 억제한다는 것에 근거하여 투여되었는데, 그 결과 혈관벽 cAMP의 수치를 증가시켰다(Weber E 등 1990; Hass TA 등 1990). 혈관벽 cAMP의 증가는 혈관벽 리놀레익산의 생성량 및 이에 따른 손상시에 혈소판/혈관벽 상호작용의 감소와 관련있는 혈관벽 13-HODE의 합성을 증가시켰다(Weber E 등 1990). 상기 페르산틴 투여는 혈관벽이 손상된 후, 4주 동안 SMC의 이상증식을 억제하였다. 이 토끼들의 경우 혈소판기능은 변화가 없었다.

이러한 연구들은 손상시에 혈관벽 13-HODE의 증가에 의한 혈관벽 혈전형성 의 감소가 장기간의 내막 이상증식 및 그에 따른 재협착을 약화시킨다 발견과 부합한다. 더우기, 이러한 연구는 현재 이용되는 임상학적 방법과 마찬가지로 통상적인 지혈 및 응고를 악화시키지 않았다.

13-HODE, 항염증치료 및 혈관벽 이상증식

염증은 1939년부터 일찌기 혈전증 과정의 필수의 요소로서 알려져 왔으나 (Malory GA 등 1939), 현재의 항혈전증 치료에 대한 이론적 설명에서는 고려되지 않았다. 그러나, 어떤 염증반응을 가라앉히는 것이 중요한 효과를 제공한다는 설득적인 증거가 있다. 예를 들어, 단핵백혈구/대식세포 및 PMNs는 인티그린 CD11/CD18(ICAM)을 발현시키며, 이들은 활성화되었을 때 사이토킨을 방출하여 (Peracchia R 등 1997; Yasukawa H 등 1997; Turek JJ 등 1998), i) 혈소판, 내피세포 및 SMCs와 같은 다른 세포들내에서의 β₃인티그린의 발현(Blanks JE 등 1998; Golino P 등 1997); ii) 조직인자의 활성화(McGee MP 등 1995); 그리고 iii) PDGF의 발현(Rubin P 등 1998; Panek RL 등 1997)를 자극한다. 혈소판으로부터 유도되는 지질편들은 단핵백혈구/대식세포의 분화 및 성장을 유도하여 이러한 반응들을 증가시킨다(Ammon C 등 1998). 손상된 혈관벽과 상호작용하는 대식세포는 지질을 축적하여 더욱 복합적인 아테로마성 동맥경화증 기능장애를 일으킨다(Ross R. 1993; Post MJ 등 1994). 단핵백혈구/대식세포의 ICAM 발현을 차단하는 것은 혈관벽 이상증식을 상당한 정도로 감소시킨다(Golino P 등 1997; Nageh MR 등 1997; Natori S 등 1997). 다른 것들로서, 선택적으로 단핵백혈구/대식세포 기능을 손상시키는 수회의 방사능(⁹⁰Sr/Y 또는 ¹⁹²Ir) 조사도 역시 쥐 및 토끼의 실험에서 혈관벽이상증식을 감소시킨다는 것이 알려졌다(Rubin P 등 1998; Panek RL 등 1997; Williams DO. 1998; Kipshidze N 등 1998). 내혈관 방사능을 이용하는 SCRIPPS의 시험의 예비 임상연구에서, 스텐트를 필요로 하는 PTCA를 받은 35명의 환자에 있어서 재협착률은 11%로, 방사능 치료를 받지 않았을 경우의 37% 재협착률보다 상당히 적었다(Williams DO. 1988). 이러한 데이터는 염증반응의 변환이 내막 이상증식 및 그에 따른 혈관벽 재협착에 영향을 미친다는 주장을 직접적으로 증명하는 것이다.

Buchanan 등에 의한 연구들은 염증성 세포가 PMN이 아니라는 것을 제시하였 다. 사실, PMNs는 혈관벽의 손상시에 혈액세포/혈관벽의 상호작용하는 위치에 13-HODE 소스를 제공함으로써 혈관벽 혈전형성을 완화시킬 수도 있다(Buchanan MR. 1989; Buchanan MR 등 1993). 다른 것으로서, PMN-유도 산소 라디칼이 빈혈과 관련된 손상을 촉진시킬 수 있다고 논의되었으나(Shen J 등 1996), 그러나 이것은 장기간의 이상증식과 관련되지는 않고 있다. PMNs 역시 혈소판 기능 및 혈관수축을 억제하는 질소산화물-유사인자를 분비한다(Cerletti C 등 1992). 한편, 단핵백혈구/대식세포는 일반적으로 13-HODE를 합성하지 않는다(Shen J 등 1996; Shen J 등 1995). 그러나 흥미롭게도, Shen 등은 분화된 대식세포에서 15-리폭시게나제를 상향조절하여 13-HODE 합성이 증가하였음을 발견하였다. 이러한 증가는 감소된 대식세포 지질 축적과 관련되어 있다. Fan 등은 또한 리놀레익 및 감마 리놀레익산(각각 13-HODE 및 PGE₁의 기질)이 풍부한 대식세포가 세포내 SMC cAMP를 자극하여 SMC 이상증식을 감소시킨다는 것을 발견하였다(Fan YY 등 1997). 마지막으로, 13-HODE는 혈소판 활성화 인자(PAF)-유도 PMN 및 단핵백혈구/대식세포 과립감소 및 ICAM 발현을 억제하여 (Cerletti C 등 1992), 인티그린-의존형 세포와 세포 리간드의 상호작용을 더욱 방지한다.

13-HODE에 대한 최근의 연구들

상기의 데이터는 내생성 혈관벽의 13-HODE가 건강한 상황 및 혈전증 상황 모두의 경우에서 혈관벽 생체적합성을 조절함에 있어 중요한 역할을 한다는 것과 이 에 따라 13-HODE가 유용한 항혈전증제라는 것을 제시하고 있다. 그러나, 혈관벽 세포들, PMNs 또는 다른 관련 세포들에 의한 13-HODE의 합성을 직접 상향조절하는 약제의 부재로 인하여 그러한 개념을 발전시키는 어떠한 진전도 좌절되었다. 페르산틴이 예비 데이타를 생성하기 위한 유용한 툴이지만, 이것은 포스포디에스테라제의 약하고 가역성인 억제재이다. 리놀레익산(13-HODE의 기질)을 이용한 심혈관질환 환자들의 보조 식이요법은 혈관벽의 13-HODE 수치를 높이는데 효과가 있음을 보여주므로 유용하였다. 그러나, 그러한 방법은 환자들이 매일 20 g 이상의 리놀레익산이 풍부한 캡슐을 섭취하도록 하여야 하며, 이러한 치료는 원하지 않는 부작용이 없지는 않으며 증가된 칼로리 섭취를 포함한다.

놀라운 결과들

현재까지, 당해 분야에서 일하고 있는 연구원들은 13-HODE의 내생적 산물을 조절하거나, 그 합성을 억압하는 인자들을 피하거나 및/또는 13-HODE의 합성을 증가시킬 수 있는 리놀레익산을 포함하는 약제를 제공함으로써 건강한 내피세포 기능을 유지하는 아이디어에 초점을 맞추어 왔다. 경구 투여할 경우, 정제된 13-HODE의 소량만이 혈관벽 내피의 목표 부위에 도달하여 생물학적으로 불활성하다고 생각되었다. 최근에, 이러한 생각들을 실험하였는데, 놀랍게도 잘못된 생각으로 판명되었다. 특히, 경구 투여된 13-HODE는 그 의도된 위치까지 도달하여 생물학적 활성을 나타내는 것이 발견되었다. 또한, 13-HODE를 경구 투여할 수 있는 적절한 부형제가 확인되었다. 그리고, 가장 놀라운 것은, 경구 투여된 13-HODE의 유용한 효 과가 뜻밖에 낮은 복용량으로도 이루어 진다는 것이다.

본 발명의 이러한 목적 및 장점들은 다음의 상세한 설명 및 첨부된 청구범위를 통하여 당업자에게 보다 분명해질 것이다.

본 발명은 혈관벽의 혈전형성을 감소 또는 억제하는데 유효한 일정양의 13-하이드록시옥타데카-9Z, 11E-디에노익산(13-HODE)을 그러한 치료의 필요에 의하여 포유동물 또는 인간에게 경구 투여하는 것을 포함하는, 세포 및 혈관벽 이상증식을 감소 또는 억제하고 혈관벽 생체적합성을 회복시키는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 약학 조성물이 13-HODE의 자유형 또는 약학적으로 사용가능한 담체, 보조제 또는 부형제를 함유하는 상기 방법에 관한 것이다.

상기 담체, 보조제, 부형제는 모노-, 디- 또는 트리글리세라이드오일, 옥수수, 해바라기, 잇꽃, 목화씨, 포도씨, 올리브, 왕달맞이꽃, 지치, 생선몸체 및 생선 간 오일 또는 하나 이상의 이중결합을 가지는 탄소원자 16-26을 함유하는 지방산 에스테르로 이루어질 수 있다. 상기 에스테르는 에틸-에이코사펜타에노익 (에틸-EPA), 올레익, 리놀레익, 알파-리놀레익, 스테아리도닉, 감마-리놀레닉, 디호모감마리놀레닉, 아라키도닉, 도코사펜타에노익 또는 도코사헥사에노익 (에틸-DHA)으로 이루어질 수 있다.

본 발명은 또한 13-HODE와 아스코빌 팔미테이트, 토코페롤 및 레시틴 존재하의 아스코빅산과 같은 지용성 산화방지제를 포함하는 약학 조성물을 포함한다.

또한, 본 발명은 13-HODE와 응집체, 비응집체, 삼투압 조절염, 완충제, 감미료 그리고 착색제로 이루어지는 군으로부터 선택된 첨가제를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 상기 약학 조성물 또는 13-HODE는 식이 조성물의 형태로 투여되거나 또는 정제, 당의정, 캅슐, 과립, 좌제, 용액, 현탁액, 그리고 동결건조 조성물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 제형으로서 투여될 수 있다. 상기와 같은 약학 조성물에 있어서, 13-HODE의 일일 복용량은 100 mg 또는 그 이하가 될 수 있다.

본 발명은 13-HODE 및 오메가-3 지방산(EPA, DHA 또는 에틸-EPA 혹은 에틸-DHA와 같은 EPA 또는 DHA 유도체와 같은)을 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 13-HODE를 오메가-3 지방산의 제형에 혼합함으로써 오메가-3 지방산에 의하여 내생적 13-HODE 합성의 억제를 보정하는 방법에 관한 것이다.

본 발명의 방법 및 13-HODE의 약학 조성물은 심혈관 또는 뇌혈관 질환, 염증 또는 자가면역 질환, 박테리아, 바이러스, 곰파이, 또는 원생동물에 의한 감염, 호흡기 질환, 소화기 질환, 신장 또는 비뇨기 질환, 피부 질환, 신경 또는 정신계 질환, 생식기 질환, 그리고 당뇨병, 증후군 A 또는 다른 당뇨합병증, 프로틴 키나제의 활동과다와 관련된 질환 및 내피 기능장애와 관련된 질환을 치료하는데 이용될 수 있다.

본 발명의 방법 및 13-HODE의 약학 조성물은 암 또는 암의 전이를 치료 및/또는 방지하기 위하여 이용될 수 있다.

본 발명의 또 다른 장점 및 특징은 첨부한 도면과 함께 상세히 설명되는 다 음의 설명으로부터 당업자라면 분명히 알 수 있을 것이다.

도 1은 7일 동안 100-1000 ㎍/kg/일 양의 13-HODE(옥수수 오일(상부); 또는 EPA(하부)에 현탁되어 있는)를 경구 투여하여 처리된 토끼들의 무세포 플라즈마 13-HODE 수치를 나타내고 있는 도면이다.

도 2는 7일 동안 0-100 ㎍/kg/일 양의 13-HODE를 경구 투여하여 처리된 토끼들로부터 얻어진 혈관벽의 13-HODE 수치를 나타내고 있는 도면이다. 13-HODE는 옥수수 오일(상부) 또는 EPA(하부)에 현탁되어 있고 1일에서 7일까지 투여되었다.

도 3은 7일 동안 0-1000 ㎍/kg/일 양의 옥수수 오일에 현탁된 13-HODE를 경구 투여하여 처리된 토끼들로부터 손상된 혈관벽의 혈관벽 영역 증가에 대한 13-HODE의 효과를 도시하고 있는 도면이다.

도 4은 7일 동안 100-1000 ㎍/kg/일 양의 13-HODE(옥수수 오일, 상부; 또는 EPA, 하부에 현탁되어 있는)를 경구 투여하여 처리된 토끼들의 무세포 플라즈마 13-HODE 수치를 도시하고 있는 도면이다.

도 5는 7일 동안 0-1000 ㎍/kg/일 양의 옥수수 오일(상부) 또는 EPA(하부)에 현탁되어 있는 13-HODE를 경구 투여하여 처리된 토끼들로부터 손상된 혈관벽의 혈관벽 영역 증가에 대한 13-HODE의 효과를 도시하고 있는 도면이다.

도 6은 13-하이드록시옥타에카-9Z, 11E-디에노익산(13-HODE)의 특성을 보여주고 있는 도면이다.

발명의 상세한 설명 및 바람직한 실시예

본 발명은 혈관벽의 혈전형성을 감소 또는 억제하는데 유효한 일정양의 13-하이드록시옥타데카-9Z, 11E-디에노익산(13-HODE)을 그러한 치료의 필요에 의하여 포유동물 또는 인간에게 경구 투여함으로써 혈관벽 이상증식을 감소 또는 억제하고 혈관벽 생체적합성을 회복시키는 방법을 제시한다.

본 발명은 또한 혈관벽 질환의 복귀를 촉진할 뿐만 아니라 혈관벽의 이상증식을 방지 및 치료하는 것을 포함하는, 혈관벽 손상에 대한 혈관반응에 있어서 동물과 사람에게 외생적으로 투여되는 13-HODE의 유익한 효과를 특히 증명한다.

앞서 설명한 바와 같이, 13-HODE는 혈관벽 생체적합성을 조절하여 혈액성분/ 혈관벽의 바람직하지 못한 상호작용을 감소시키는 인자들중의 하나이다. 13-HODE는 이러한 작용을 몇가지 방식으로 할 수 있는데, 그중 하나는 비트로넥틴 수용체의 발현 및 활성화를 감소시키는 것이다. 최근에는, 혈관벽 생체적합성의 이상이 염증과 관련된 문제들, 섬유증 및 정상적인 대사조절의 상실 (Valance 등 1997), 그리고 종양세포의 전이 뿐만 아니라 감염 및 여러 타입의 심혈관 문제들을 포함하는 매우 많은 질병들과 관련되어 있다는 것이 밝혀졌다. 이 모든 병들에서, 혈관 내피세포가 활성화되어 정상 혈관 투과장벽의 상실, 로이코사이트 유착분자의 발현, 혈관벽 표면의 혈전 재활성화의 변화, 광범위한 사이토킨의 생성 및 HLA 항원의 상향조절로 이행하게 된다(Hunt BJ, Jurd KM.). 내피세포의 활성화 및 손상은 광범위한 병들의 발병 및 악화의 원인이 될 수 있다.

따라서, 본 발명은 13-HODE에 의한 바람직한 방향으로의 내피기능의 조절을 통하여, 거의 모든 양상의 의학과 관련되는 매우 다양한 질병들에 있어서 바람직한 효과를 가진다. 본 발명에서 특히 흥미로운 사실은 외생적인 13-HODE의 투여가 알파-리놀레익산, 도코사펜타에노익산 그리고 특히 EPA 및 도코사헥사에노익산(DHA)과 같은 오메가-3-지방산의 투여 결과로 인하여 발생될 수 있는 내성적 13-HODE 합성의 억제를 보상할 수 있다는 사실이다(상기 Miller 및 Ziboh). EPA 및 DHA는 많은 바람직한 작용을 하나, 때때로 혈관확장술후의 재폐색을 방지하기 위하여 시도되는 경우에, EPA 및 DHA의 투여로 인한 임상적 결과들은 기대에 미치지 못한다. 따라서, 13-HODE와 EPA 또는 DHA 또는 다른 오메가-3 지방산을 함께 투여하는 것은 특별한 가치가 있다.

본 발명에 따른 조성물은 경구 투여용으로 제형화될 수 있다. 따라서 상기 조성물은 정제, 캡슐, 현탁액, 유제 및 용액의 형태로 이루어질 수 있다.

경구 투여용 제형은 비독성의 약학적으로 사용가능한 부형제와 혼합되어 있는 활성성분을 함유하고 있는 정제를 포함한다. 상기 부형제로서는, 예를 들어 칼슘 카보네이트, 소디움 클로라이드, 락토스, 칼슘 포스페이트 또는 소디움 포스페이트과 같은 불활성 희석제; 과립제 및 붕해제, 예를 들어 감자녹말 또는 알기닉산; 결합제, 예를 들어, 녹말, 제라틴 또는 아카시아; 그리고 윤활제, 예를 들어, 마그네슘 스테아레이트, 스테아릭산 또는 타르크(talc)를 사용할 수 있다. 다른 약학적으로 사용가능한 부형제로서는, 색소, 향료, 가소제, 습윤제 등이 있다. 상기 정제는 코팅되지 않을 수 있으며 또는 위장관 내에서 분해 및 흡수되는 것을 선택적으로 지연시켜 더욱 오랜 시간동안 지속적인 효과를 제공할 수 있도록 알려진 기술에 의해서 코팅될 수 있다. 예를 들어, 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트와 같은 시간지연재가 이용될 수 있다.

경구 투여용 제형은 씹는 정제로서 또는 활성성분이 불활성 고체 희석제, 예를 들어 칼슘 카보네이트, 칼슘 포스페이트 또는 카오린과 혼합되어 있는 경질 제라틴 캡슐로서, 또는 활성성분이 물 또는 오일 매체, 예를 들어, 땅콩오일, 유체 파라핀 또는 올리브오일과 혼합되어 있는 연질 제라틴 캡슐로서 제공될 수 있다. 물을 첨가하여 수성 현탁액을 제조하는데 적절한 분말 및 확산 가능한 분말 또는 과립 또한 본 발명의 편리한 복용 형태이다. 현탁액으로서의 제형은 분산제 또는 침윤제, 현탁제 및 하나 이상의 보존제와 혼합되어 있는 활성성분을 제공한다. 적절한 분산제 또는 습윤제로서는, 예를 들어, 레시틴과 같은 천연 포스파티드 또는 에틸렌 옥사이드와 예를 들어 지방산과의 축합체, 긴 연쇄 알리파틱 알콜 또는 지방산과 헥시톨 또는 헥시톨 무수물로부터 생성되는 부분 에스테르, 예를 들어 폴리옥시에틸렌 스테아레이트, 폴리옥시에틸렌 솔비톨 모노올리에이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올리에이트 등이 있다. 적절한 현탁제로서는, 예를 들어 소디움 카르복시메틸셀룰로오스, 메틸셀루로오스, 소디움 알기네이트 등이 있다.

약학적으로 사용가능한 담체 또는 부형제는 에멀전제, 산화방지제, 완충제, 보존제, 보습제, 침투강화제, 킬레이트화제, 겔형성제, 연고기제, 향수 및 피부보호제를 포함할 수 있다. 에멀젼제의 예로서는, 아카시아 고무 또는 트래거캔스 고무와 같은 천연고무, 콩 레시틴과 같은 천연 포스파티드 그리고 소르비탄 모노올리에이트 유도체가 있다. 산화방지제의 예로서는, 부틸레이티드 하이드록시 아니솔 (BHA), 아스코빅산 및 그 유도체, 토코페롤 및 그 유도체 그리고 시스테인이 있다. 보존제의 예로서는, 파라벤 및 벤즈알코니움 클로라이드가 있다. 보습제의 예로서는, 글리세린, 프로릴렌글리콜, 솔비톨 그리고 우레아가 있다. 침투강화제의 예로서는, 프로필렌글리콜, DMSO, 트리에탄올아민, N,N-디메틸아세타마이드, N,N-디메틸포름아마이드, 2-피롤리돈 및 그 유도체, 테트라하이드로푸르푸릴 알콜 그리고 Azone.RTM이 있다. 킬레이트화제의 예로서는, 소디움 EDTA, 사이트릭산 및 포스포릭산이 있다. 겔형성제의 예로서는, 카보폴, 셀룰로오스 유도체, 벤토니트, 알기네이트, 제라틴 그리고 PVP가 있다. 연고기제의 예로는, 밀납, 파라핀, 세틸 팔미테이트, 야채오일, 지방산의 소르비탄 에스테르(Span), 폴리에틸렌글리콜 그리고 예를 들어 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올리에이트와 같은 지방산의 소르비탄 에스테르와 에틸렌 옥사이드의 축합체가 있다. 상기 기술한 조성물의 제형 및 제조는 약학 제조분야의 당업자에게는 잘 알려진 것이다. 특정한 제형은 레밍톤의 '약학 과학'에서 찾아볼 수 있다.

본 발명의 식이성 조성물은 소스, 마요네즈 또는 마가린과 같은 에멀젼 형태로 만들어질 수 있다.

본 발명의 일 실시예는 이하 설명되는 치료효과를 위하여 약학적으로 사용 가능한 담체와 함께 약학 조성물을 투여하는 것에 관한 것이다.

본 발명의 바람직한 실시예에 따르면, 상기 13-HODE의 약학 조성물은 경구 투여되며, 옥수수, 해바라기, 잇꽃, 목화씨, 포도씨, 올리브, 왕달맞이꽃, 지치, 생선몸체 및 생선 간 오일, 에틸-에이코사펜타에노익, 올레익, 리놀레익, 알파-리 놀레닉, 디호모감마리놀레닉, 아라키도닉, 도코사펜타에노익 또는 도코사헥사에노익으로 구성되는 군으로부터의 담체와 혼합되어 있는 13-HODE를 함유하는 혼합물을 포함한다.

또 다른 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명의 약학 조성물은 약 1:3 내지 약 1:100의 비율로 옥수수 오일과 혼합되어 있는 13-HODE를 함유하고 있는 혼합물을 포함한다. 예를 들어, 50 mg의 13-HODE는 450 mg의 옥수수 오일과 혼합될 수 있다.

또 다른 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명의 약학 조성물은 약 1:3 내지 약 1:100의 비율로 에스테르 담체와 혼합되어 있는 13-HODE를 함유하고 있는 혼합물을 포함한다.

또 다른 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명의 약학 조성물은 에틸-올리에이트, 에틸-리놀레이트, 에틸-EPA 또는 에틸-DHA와 같은 하나 이상의 이중결합을 가지는 탄소원자 16-26 지방산의 에틸에스테르와 혼합되어 있는 13-HODE를 함유하고 있는 혼합물을 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시예에 따른 상기 약학 조성물은 담체와 혼합되기 전에 적절한 포스포리피드의 Sn1 또는 Sn2의 위치에 결합되어 있는 13-HODE를 포함한다.

또 다른 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명의 약학 조성물은 EPA, DHA, EPA 및 DHA의 유도체, 에틸-EPA 및 에틸-DHA와 같은 오메가-3 지방산 및 13-HODE를 포함한다.

상기 조성물은, 질병, 장애 또는 심혈관 또는 뇌혈관, 염증 또는 자가면역, 호흡기, 소화기, 신장, 피부, 신경계 및 정신질환 그리고 암을 포함하는 혈관벽 생체적합성의 이상과 관련된 비정상 신체상태의 의학적 치료 또는 예방방법에 있어서 투여되면 효과적이다. 본 발명의 약학 조성물을 투여함으로서 치료되거나 예방되는 질병의 예들로서, 타입 I, 타입 II, 그리고 전구체 타입 II 당뇨병, 증후군 X (Cosentino F, Lucher TF. 1998), 류마티스성 관절염 및 골관절염 그리고 자가면역질환을 포함하는 여러 종류의 염증 이상(Perretti M. 1887), 박테리아와 말라리아 및 수면병과 같은 원생동물, 내독소를 발생시킬 수 있는 곰팡이에 의한 감염 (Gerrity 등 1997), 낫(겸상)세포 질환 및 이와 관련된 헤보글로빈 이상(Lubin BH. 1997), 신장 질환(Clausen 등 1999), 염증성 장질환(Binion DG 등 1998), 임신 고혈압 및 전자간증(Endresen MJR 등 1998), 정상 노화(Hashimoto M 등 1999), 치매(Iadecola C 등 1999), 망막빈혈 및 노화와 관련된 반점퇴화 (Jid일 JM, Zhu Y. 1998; Wada M 등 1999), 암 및 암의 전이 그리고 맥관형성(Pinedo HM 등 1998; Shureigi I 등 1999; baron Ja 등 1998; Hazelton D 등 1999), 모든 타입의 심혈관질환(Kanai PM 등 1999), 과지방혈증 및 모든 타입의 아테로마성 동맥경화증 (Lefer DJ, Granger DN. 1999; Mombouli J-V. 1999; Blann AD. 1999; Brown BG, Zhao X-Q. 1998; Freedman JE, Loscalzo J. 1997; Abe Y. 1998), 이식(Labarrere CA 등 1997), 폐 고혈압(Higenbottom TW, Laude EA. 1998), 고혈압 및 심장이상 (Boulanger CM. 1999), Raynaud 증후군(Edwards CM 등 1997)이 있다. 또한, 고지방식을 섭취하는 보통의 사람들에게(Plotnick GD 등 1997), 그리고 출생시의 무게가 가벼웠거나 심장병의 위험이 있는 외견적으로 건강한 사람들에게도(Goodfellow J 등) 내피기능은 흡연에 의하여 손상되므로(Motoyama T 등 1997), 본 발명에서 흡연 역시 처리될 수 있다. 내피기능은 출생체중이 낮은 건강한 젊은 성인에게서 저하된다(Ridker PM 등 1998). (Plasma concentrations of soluble intercellular adhesion molecule 1 and risks of future myocardial infaraction in apparently healthy men(Lancent, 1998).

투여양은 각각의 환자의 상태, 약의 적용, 약의 물리적 및 화학적 안정성, 원하는 효과의 독성 그리고 선택된 투여 경로에 따라 다르다(Robert Rakel, ed., Conn's Current Therapy 1995, W.B. Sanuders Company, USA).

다음의 실시예들은 본 발명을 설명하기 위한 것으로서, 실시예에 기재한 상세한 설명이 본 발명을 한정하지는 않는다.

실시예 1

13-HODE의 적절한 부형제의 확인

13-HODE는 무색 또는 매우 엷은 노란색 오일 유체이다. 신체내에서 13-HODE는 앞서 설명한 바와 같이 대사되거나 트리글리세라이드, 디아글리세라이드 (디아실글리세롤), 모노글리세라이드, 콜레스테롤 에스테르를 포함하는 다양한 복합지질과 여러 가지 다른 형태의 포스포리피드들 사이에 변하지 않은 상태로 전달된다. 제제로서, 13-HODE 자체가 이용되거나, 다양한 담체내에 용해되거나, 또는 글리세라이드, 에스테르, 포스포리피드 또는 적절한 담체를 가지는 다른 분자들과 결합될 수 있다. 13-HODE에 공유결합되는 글리세라이드, 프로판디올의 에스테르, 에틸에스테르 및 포스포리피드 및 13-HODE를 체내에서 생물학적으로 활성 형태로 방출할 수 있는 다른 분자 또는 부형제가 모두 본 발명에 포함된다.

13-HODE의 효과적인 일일 복용량이 50-1000 ㎍/kg/일 범위에 있다는 사실에 의해서 실질적인 문제가 제시된다. 이 범위의 하단부, 즉 100 ㎍/kg/일은 토끼에게 높은 생물학적 효과를 나타낸다. 이는 70 kg의 사람에게 7 mg/일 용량에 해당된다. 무게/신체 표면적의 척도에 의하여, 인간에 대한 복용량이 동물의 복용량에 비하여 상당히 낮기 때문에, 일일 복용량이 5 mg 이하로 되어야 실제로 가능하다. 이러한 적은 양을 오일 액체로 형성하는 것은 문제가 있다. 이것이 정제 물질내로 흡수되어 정제화 및 코팅되거나 또는 당업자에게 잘 알려진 방법에 의하여 미세 캡슐화 되어야 한다. 그러나, 13-HODE의 가장 편리하고 바람직한 복용 형태 및 분해되지 않고 안정한 것으로 알려진 형태는 13-HODE를 트리글리세라이드 오일 담체 또는 에스테르에 용해시키는 것이다. 옥수수 오일이 특히 가장 유용한 희석제이고, 13-HODE가 용이하고 편리하게 이 옥수수 오일과 예를 들어 1:3∼1:100의 비율로 혼합될 수 있다는 것이 알려졌다. 해바라기, 잇꽃, 콩, 왕달맞이꽃, 지치, 코코넛 또는 팜 오일, 목화씨, 포도씨, 올리브를 포함하는 야채 오일, 생선몸체 또는 생선 간 오일과 같은 다른 트리글리세라이드 오일들도 이러한 목적을 위하여 이용될 수 있다. 이러한 목적에 부합하는 특히 유용한 에스테르는, 체인에 하나 이상의 이중결합을 가지고 16-26의 탄소원자를 가지는 지방산의 에스테르이다. EPA의 에틸에스테르가 특히 적절한 것으로 알려졌으나, 올레익, 리놀레익, 알파-리놀레익, 스테 아리도닉, 감마-리놀레익, 디호모감마리놀레익, 아라키도닉, 도코사펜타에노익 및 DHA와 같은 지방산의 등가 에스테르 역시 13-HODE를 운반하는데 유용한 에스테르의 예들이다.

다음으로, 최종의 투약형태를 얻기 위하여 조제물을 더욱 가공할 수 있다. 오일들은 직접 섭취될 수 있거나, 또는 적절한 산화방지제 또는 향료가 부가될 수 있거나, 또는 이 조제물을 당업자에게 잘 알려진 에멀젼화제 또는 향료를 사용하여 맛있고 향이 있는 에멀젼 상태로 변환할 수 있다. 특히 효과적인 제형으로는, 연성 제라틴 또는 결합된 경성 제라틴 캡슐, 또는 한천 또는 다른 적절한 재질로 만들어진 유사 캡슐이 있다.

현재까지, 13-HODE는 실험실용 시약으로서의 이용을 위하여 mg 단위로 매우 비싸게 공급되고 있다. 이 순수 재료의 특성들이 도 6에 도시되고 있다. 이제 더욱 많은 양이 콩 리폭시게나제 또는 유사 특성의 효소를 이용하여 조제될 수 있다. 이 효소는 리놀레익산을 13-HODE로 대사한다. 이러한 반응은 냉각 및 교반 시스템 그리고 pH, 산소(용존산소 함량, DOC), 그리고 온도감지기를 갖춘 적절한 용기내에서 이루어질 수 있다. 상기 반응은 먼저 0.1 M 붕산염 완충제로 채워지고, 다음으로 100 ℃ 이하로 냉각된다. 상기 완충제는 DOC가 100%에 이를 때까지 산소로 씻어낸다. 콩 리폭시게나제를 약 2500 U/ℓ의 비율로 첨가한 후, 그 혼합물을 교반하고, 산소로 씻어내어 DOC를 100%로 유지한다. 에탄올에 1:1의 비율로 용해된 옥타-데카-9Z, 12Z-디에노익산을 약 10 g/ℓ의 비율로 첨가한다. 다음으로, 상기 반응은 산소의 오버블랜켓으로 가압되고 강하게 교반된다. 상기 반응은 계속 진행하 도록 되어 있으며, 리놀레익산이 13-HODE로 변환되는 것을 확인하기 위하여, 자외선 분석 및 박막 크로마토그래피 분석에 의해서 15분 간격으로 모니터된다.

이러한 반응이 완료되면, 상기 반응기는 질소로 세척되고, 약 3.3 g/ℓ의 비율로 소디움 보로하이드라이드를 첨가함으로써 환원된다. 환원공정이 완료되면, 상기 혼합물은 사이트릭산을 이용하여 pH 6으로 산성화시킨다. 다음으로 역상 실리카(OD53)를 첨가하여 교반하고, 이 혼합물은 실온 질소 환경하에서 밤새도록 교반이 계속된다. 상기 실리카는 13-HODE를 흡수하는데, 이 13-HODE는 실리카를 여과하여 회복되고, 물로 세척하고 그리고 아세토니트릴에 의한 다단계 세척에 의하여 생성물로 추출된다. 다음으로 용매를 씻어내고, 그리고 컬럼 크로마토그래피를 통하여 천연 오일을 디에틸에스테르 및 메틸렌클로라이드로 정제하여 점성의 연노란 오일 성분인 순수한 13-HODE를 생성한다. 다음으로 이 물질을 상기에서 언급한 바와 같이 제형화한다.

수행된 몇몇 실험에서는, 옥수수 오일내의 현탁 리놀레익산이 혈관벽에 의한 이것의 선택적 흡수를 촉진한다는 것이 이미 알려져 있기 때문에 옥수수 오일이 이용되었다(Bertomeu M-C 등 1990). 다른 실험에서는, 참치, 정어리와 같은 바다 생선 오일 또는 다른 오일들 또한 13-HODE의 안전성을 유지하는데 적합하기 때문에, 바다 생선 오일(특히, 바다 청어 또는 97% 순수 에틸 에이코사펜타에노익(에틸-EPA))이 이용되었다. EPA가 혈관벽 내피상에서, 혈소판 응집 억제, 트리글리세라이드 수치의 저하 그리고 염증의 완화와 같은 많은 바람직한 작용을 가지기 때문에, 에틸-EPA는 치료법적으로 매우 관심을 가질만 하였다. 그러나, 이것은 내생적 13-HODE의 형성을 억제할 수도 있으므로, 역효과의 가능성이 있을 수도 있다(Miller CC, Ziboh, VA. 1990; Gimenez-Arnau A 등 1997).

EPA의 이러한 억제효과는 왜 EPA의 기대되는 원하는 심혈관 효과가 실제적으로 일어나지 않는가에 설명하는데 도움이 될 수 있다. 예를 들어, 폐쇄된 관상동맥을 혈관확장술에 의하여 개방한 후에, EPA 치료를 계속하여도 재협착 감소에 실패하였다(Cairns JA 등. 1996).

물질 및 방법:

뉴질랜드산 백토끼들 (암수 반반; 2.5-2.9 kg)이 이용되었다. 토끼들을 7일동안 옥수수 오일 또는 에틸-에이코사펜타에노익산(EPA)에 현탁되어 있는 정제된 13-HODE를 100, 400 또는 1000 ㎍/kg/일, 또는 다른 현탁제(총부피 1 ml)중의 동량으로 치료하였다. 플라즈마내의 13-HODE의 수치를 측정하기 위하여 치료전, 치료중 그리고 치료후에 연속의 혈액 샘플을 채취하였다. 7일째 되는 날, 치료를 중단하였다. 이때, 토끼들은 아트라벳, 케타민, 베트레팜 및 글리코피롤레이트의 혼합물로 피하주사하여 마취시켰다. 먼저 가까운 쪽을 결찰하고, 그 단절로부터 피를 유출시키고, 그리고 먼 쪽을 결찰함으로써 마취된 토끼들의 양 경동맥을 상기 2 임시 결찰부 사이에 분리하였다. 멸균 식염수로 채워져 있는 튜브에 부착되며 압력계에 연결된 24-게이지 엔지오카스를 상기 고립된 단절내로 삽입하였다. 다음으로, 그 단절에 약 5분 동안에 걸쳐서 600 mmHg의 압력으로 식염수를 채워넣었다. 압력을 해지한 후, 엔지오카스 및 결찰부들을 제거하여 피의 흐름이 회복되도록 하 였다. 바늘 천공 위치로부터 피가 나오는 것이 어떠한 수동 조작 없이 3분내에 멈추었다. 절개부를 000 프롤린으로 봉합하였다. 토끼들에게 고통을 최소화 하기 위하여 템게식 및 항생물질로서 12.5 mg 바이트릴을 근육주사하였고, 회복되도록 하였다. 이 손상 과정은 혈류 회복 1시간 이내에 내피 노출 및 혈전 표면의 노출을 일으키고, 이어서 SMC의 증식 및 4주 동안 정체기를 거치고 12주 이상 계속되는 내막 이상증식을 일으켰다(Buchanan MR, Brister SJ: 1998; Buchanan MR 등 1999).

2주, 4주 또는 12주 후에, 토끼들을 다시 마취하였고, 이들의 손상된 경동맥들을 다시 분리시켰다. 손상된 경동맥과 손상되지 않은 경동맥의 단절들을 채취하여 혈관벽 이상증식을 평가하기 위하여 조직학적으로 처리하였다. 다른 혈관벽 단절 및 혈액 샘플들을 채취하여 혈관벽 및 플라즈마 13-HODE 수치를 위하여 처리하였다.

결과

플라즈마 13-HODE 수치: 옥수수 오일내에 현탁되어 있는 13-HODE 100 ㎍/kg/일 치료후 7일 후에 플라즈마 13-HODE의 수치는 3배 증가하였다(도 1의 상부). 13-HODE의 복용량을 1000 ㎍/kg/일 까지 증가시켰을 때 별다른 효과는 없었다. 상기 플라즈마 13-HODE 수치는 14-21일내에 거의 조절수치로 복귀하였다. 플라즈마 13-HODE의 절대치는 테스트된 모든 치료수치 내에서 낮았지만, 13-HODE를 에틸-EPA에 현탁시켰을 때에 유사한 결과가 나타났다(도 1의 하부). 그럼에도 불구하고, 상기 두개의 현탁제 치료군들 사이에서 복용량과 관련한 플라즈마 13-HODE의 수치 증가는 큰 차이가 없었다.

혈관벽의 13-HODE 수치: 옥수수 오일에 현탁된 13-HODE로 치료된 토끼들의 혈관벽 13-HODE 수치는 복용량과 관련한 증가가 있었고 치료를 중단한 후 28일 동안 그 수치를 측정하였다(도 2의 상부). 이 데이터는 치료를 증단하였음에도 불구하고 혈관벽 13-HODE 수치는 상승 상태로 남아있었다. 이것은 Fang 등에 의하여 제시된 바와 같이 13-HODE가 복합지질내에 혼합되어 있기 때문일 수 있다.

13-HODE가 에틸-EPA에 현탁되었을 경우에도 유사한 결과가 나타났으나(도 2의 하부), 마찬가지로 혈관벽 13-HODE의 절대치는 테스트된 모든 치료수치내에서 낮았다. 혈관벽 13-HODE 수치가 물론 내생적 및 외생적 유도 13-HODE의 측정이었기 때문에, 에틸-EPA 치료군에서 보여지는 낮은 혈관벽 13-HODE 수치는 Miller와 Ziboh(1990)에 의하여 설명된 바과 같이 내생적 13-HODE 억압에 영향을 미치는 것이 가능하다.

생물학적 효과: 정제된 13-HODE를 이용한 초기의 실험에서, 혈관벽 13-HODE의 상당한 증가는 손상후 2주 및 4주째 측정된 내막 이상증식의 상당한 감소와 관련이 있었다. 따라서, 1000 ㎍/kg/일의 13-HODE로 치료한 토끼들의 내막 이상증식은, 플라시보 치료받은 토끼들이 2주 및 4주에 각각 18% 및 38% 이상증식인 것과 비교하여, 2주 및 4주에 각각 8% 및 16%이었다, p < 0.002 (도 3). 더우기, 내막이상증식은 13-HODE로 치료된 동물들의 경우 복귀되어 내막 이상증식은 단지 12주 에서 발견된다, 즉 > 3%, p < 0.01. 이것은 정제된 13-HODE가 혈관벽 내막 이상증식을 억제한다는 첫번째 직접적인 증거이다. 그러한 동물들의 무세포 플라즈마내의 13-HODE 수치가 치료 3일내에 상당히 증가할 뿐만 아니라, 7일후에 13-HODE의 치료를 중단하였음에도 불구하고 4주 동안 상승 상태로 남아있었다. 이 후자의 데이터는 경구 투여된 13-HODE가 잘 흡수되고, 긴 반감기를 가지며 그리고 임상장치내에서 상대적으로 쉽게 관찰될 수 있다는 것을 보여주고 있다. 또한 이 후자의 데이터는 아주 적은 용량의 13-HODE도 혈관벽 내막 이상증식을 예방하는데 효과가 있다는 것을 보여준다.

실시예 2

옥수수 오일 또는 에틸-EPA에 현탁된 13-HODE 100 ㎍/kg/일을 7일 동안 토끼들에게 투여하였고, 내막 혈관벽 이상증식이 상당히 억제되었다, p < 0.001(도 5). 혈관벽 13-HODE의 상승 및 혈관벽 이상증식의 억제가, 예를 들어 13-HODE의 전구체 리놀레익산을 공급하거나 또는 페르산틴을 공급하는 것과 같이 간접적으로 13-HODE 수치를 증가시키는 시도에 의하여 이루어지는 것보다 훨씬 크다. 대조적으로, 환자가 30일 동안 매일 3.2 gm(20 캡슐)의 리놀레익산을 섭취하였을 때, 혈관벽 13-HODE 수치는 단지 2배 증가하며(Buchanan MR. Brister SJ. 1994), 그리고 임상적으로 사용되는 양과 동등량의 페르산틴으로 토끼들을 치료하였을 때, 혈관벽 13- HODE는 단지 30 내지 50% 증가하였다(Weber E 등 1990). 혈소판/손상된 혈관벽의 상호작용은 두 경우 모두 2배 이상 줄어들었다.

이러한 최신의 데이터는 이상증식의 복귀로 인하여 내막 이상증식 억제 효과가 놀랄 만큼 적은 복용량의 13-HODE로도 이루어진다는 것을 보여준다. 어떠한 현재의 혈전증 치료법도 이러한 효과를 가지지 못한다. 이러한 효과는, 앞선 연구들 (Weber E 등 1990; Bertomeu M-C 등 1990; Brister 등 1990)에서 나타난 바와 같이, 혈소판 기능 및 응고를 손상시키지 않고 이루어지며, 어떠한 실험 동물에서도 탐지할만한 출혈 이상이 발견되지 않았다.

실험 결론: 다음의 결론들은 이 실험들로부터 나온것이다.

1) 13-HODE는 생물학적으로 활성이며 혈관벽 생체적합성을 회복시키는 농도로 혈관조직 및 다른 조직에 도달하므로, 이를 경구 투여 하였을 때 혈관벽 이상증식 효과를 방지한다.

2) 생물학적으로 활성인 13-HODE의 복용량은 놀라울 정도로 적다.

3) 트리글리세라이드 및 에스테르 오일은 13-HODE를 위한 적절한 부형제이다.

4) 혈관벽에 미치는 13-HODE의 생물학적 효과는 매우 좋다. 그 효과들은 혈관벽 질환의 복귀를 촉진할 뿐만 아니라 혈관벽 이상증식의 방지 및 치료 모두를 포함한다.
도 1에서, 도면의 좌측에서 우측으로 빈 막대, 흑색 막대 및 그물눈 막대는 각각 100, 400 및 1000 ㎍/㎏/일의 13-HODE의 용량을 나타내고,
도 3에서는 빈 막대 및 흑색 막대는 각각 0 및 1000 ㎍/㎏/일의 13-HODE의 용량을 나타내고,
도 4에서, 상부 도면에서는 좌측에서 우측으로 그물눈 막대 1, 빈 막대, 흑색 막대 및 그물눈 막대 2는 각각 0, 100, 400 및 1000 ㎍/㎏/일의 13-HODE의 용량을 나타내고, 하부 도면에서는 그물눈 막대 1, 빈 막대 및 그물눈 막대 2는 각각 0, 100 및 1000 ㎍/㎏/일의 13-HODE의 용량을 나타낸다.

실시예 3

13-HODE을 트리글리세라이드 오일, 특히 옥수수 오일과 1:3 내지 1:100, 또는 1:1000 까지의 비율로 혼합하여 이용하였다. 예를 들어, 50 mg의 13-HODE를 450 mg의 옥수수 오일과 연질 제라틴 또는 경질 제라틴 캡슐내에 혼합하거나, 5 gm을 유사한 타입의 캡슐내에 앵초 오일 또는 다른 적절한 오일 100 mg과 혼합할 수 있다.

실시예 4

실시예 3에서와 같은 조성물이 사용되나, 오일은 집접 투여하기 위하여 액체 상태로 하고, 그리고 예를 들어 레몬과 같은 적절한 수단을 이용하여 맛을 낸다.

실시예 5

실시예 3에서와 같은 조성물이 사용되나, 적당한 에멀젼화제 및 향미료를 이용하여, 오일을 물에 혼합하여 5-40%의 오일-물 에멀젼을 형성된다.

실시예 6

실시예 3-5와 같은 조성물이 사용되나, 오일이 에스테르, 특히 하나 이상의 이중결합을 가지는 탄소원자 16-18 지방산의 에틸에스테르와 혼합된다. 에틸 올리에이트, 에틸-리놀레이트, 에틸-EPA 및 에틸-DHA들은 13-HODE를 위한 적절한 담체의 예이다.

실시예 7

실시예 3-6과 같지만, 13-HODE 자체가 담체와 혼합되기 전에 모노-, 디- 또는 트리글리세라이드와 혼합된다.

실시예 8

실시예 3-6과 같지만, 13-HODE 자체가 담체와 혼합되기 전에 적당한 포스포리피드의 Sn1 또는 Sn2 위치에 결합된다.

실시예 9

실시예 3-6과 같지만, 13-HODE가 생물학적으로 활성 상태로 혈관 내피와 같은 목표 위치에 전달되도록 하는 다른 적당한 담체 분자와 13-HODE가 혼합된다.

이상 본 발명의 바람직한 실시예들이 설명되었지만, 당업자라면 본 발명의 개념과 첨부되는 청구범위로부터 벗어나지 않고 여러가지로 변형하여 실시하는 것이 가능할 것이라는 것을 이해할 것이다.

Claims

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13-HODE가 모노-, 디, 또는 트리글리세라이드 오일 또는 16-26 탄소원자 및 하나 이상의 이중결합을 가지는 지방산 에스테르를 포함하는 담체와 제제화되는 것을 특징으로 하는, 항혈전증 치료, 과지방혈증, 고혈압, 당뇨병, 항염증치료, 아테로마성 동맥경화증 및 Raynaud 증후군용 13-HODE의 경구 투여용 약학 조성물.
제11항에 있어서, 13-HODE의 일일 복용량은 100 mg 이하인 약학 조성물.
제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 담체는 옥수수, 해바라기, 잇꽃, 목화씨, 포도씨, 올리브, 왕달맞이꽃, 지치, 생선몸체 및 생선 간 오일로 이루어지는 군으로부터 선택되는 약학 조성물.
제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 담체는 다음 지방산의 에틸에스테르 그룹으로부터 선택되는 약학 조성물: 에이코사펜타에노익, 올레익, 리놀레익, 알파-리놀레익, 스테아리도닉, 감마-리놀레닉, 디호모감마리놀레닉, 아라키도닉, 도코사펜타에노익 및 도코사헥사에노익.
제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 조성물은 정제, 당의정, 캡슐, 과립, 용액, 현탁액 및 동결건조 조성물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 제형으로서 투여되는 약학 조성물.
제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 조성물은 아스코빌 팔미테이트, 토코페롤 및 레시틴 존재하의 아스코빅산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 지용성 산화방지제를 더욱 포함하는 약학 조성물.
제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 조성물은 응집체, 비응집체, 삼투압 조절염, 완충제, 감미료 및 색소제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 첨가제를 더욱 포함하는 약학 조성물.
13-HODE 및 담체를 포함하는 혈관벽의 혈전형성을 감소 또는 억제하는 13-HODE 약학 조성물.
제18항에 있어서, 상기 담체는 EPA, DHA, (C1-C6)알킬 EPA 유도체 및 (C1-C6)알킬 DHA 유도체로 이루어지는 군으로부터 선택되는 약학 조성물.
제18항에 있어서, 상기 오메가-3 지방산은 에틸-EPA 및 에틸-DHA로부터 선택되는 약학 조성물.
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