KR100772058B1

KR100772058B1 - 항비만 효과를 갖는 결명자 추출물 및 그의 제조방법

Info

Publication number: KR100772058B1
Application number: KR1020060091698A
Authority: KR
Inventors: 김의용; 김갑식; 신종화
Original assignee: 김의용; 김갑식
Priority date: 2006-09-21
Filing date: 2006-09-21
Publication date: 2007-10-31

Abstract

본 발명은 볶지 않고 말린 결명자로부터 용매 추출한 후 컬럼크로마토그래피를 이용하여 효소활성 저해능이 탁월하여 항비만 효과를 갖는 결명자 추출물 및 그의 제조방법에 관한 것이다.

본 발명은 볶지 않은 결명자를 건조하고, 알콜로 추출한 후 실리카겔이 충전된 컬럼에서 에탄올 수용액을 전개액으로 컬럼크로마토그래피를 실시하여 상기 추출된 추출물을 10등분으로 분획하고 그 중 위에서 6번째 또는 7번째 분획물 중 어느하나를 수집하여 얻고, 상기 수집된 6번째 또는 7번째 분획물 중 어느하나에 대하여 추가적으로 실리카겔이 충전된 컬럼에서 에탄올 수용액을 전개액으로 2차 컬럼크로마토그래피를 실시하여 상기 추출된 추출물을 16등분으로 분획한 다음, 위에서 7번째 내지 10번째 분획물 중 어느 하나 또는 둘 이상의 조합을 수집하여 얻는 것을 특징으로 한다.

천연물, 결명자, 추출액, 컬럼크로마토그래피, 항비만

Description

항비만 효과를 갖는 결명자 추출물 및 그의 제조방법{CASSIA TORA LINNE EXTRACT WITH ANTI-FATNESS EFFECT AND PROCESS FOR PREPARATION THEREOF}

도 1은 본 발명에 따른 항비만 효과를 갖는 결명자 추출물의 컬럼크로마토그래피에 의한 1차 10분획 후 분획물의 리파아제 활성도에 대한 저해 효과를 나타낸 그래프,

도 2는 도 1의 6번째와 7번째 분획물을 추출하여 컬럼크로마토그래피에 의한 2차 16분획 후 분획물의 리파아제 활성도에 대한 저해 효과를 나타낸 그래프,

도 3은 귤껍질 추출물의 췌장 리파아제 활성제어효과 실험 결과를 나타낸 그래프,

도 4는 피망 추출물과 췌장 리파아제 활성제어효과 실험 결과를 나타낸 그래프,

도 5는 녹차 추출물과 췌장 리파아제 활성제어효과 실험 결과를 나타낸 그래프,

도 6은 결명자 추출물과 췌장 리파아제 활성제어효과 실험 결과를 나타낸 그래프이다.

본 발명은 항비만 효과를 갖는 천연추출물 및 그 제조방법에 관한 것으로 특히 볶지 않고 말린 결명자로부터 용매 추출한 후 컬럼크로마토그래피를 이용하여 효소활성 저해능이 탁월하여 항비만 효과를 갖는 결명자 추출물 및 그의 제조방법에 관한 것이다.

비만은 경제발전과 함께 사회적인 문제로 대두되는 대표적인 질병으로 경제발전과 더불어 채식과 탄수화물 위주로 이루어져있던 식단이 육식으로 대표되는 서양의 단백질 위주의 식단으로 변경됨과 함께 지방의 섭취가 증가하여 체중 과다와 비만이 늘어나고 있는 추세이다. 비만은 과체중으로 그치는 것이 아니라 체지방의 과다로 인해 비 이상적인 에너지대사 문제를 발생시키므로 일방적인 섭취제한으론 근본적 원인의 해소가 불가능하다. 따라서 비만발생의 여러 경로에 따른 약물연구가 이루어진바 대한민국 특허 348,818 및 376,942에서는 녹차 분말 20 내지 40 중량%와 비만억제작용이 있는 연자육, 동규자, 괴각, 적하수오, 진호로, 초결명, 택사, 대황, 옥수수수염, 산사육, 소태나무, 상엽 추출물을 배합한 항비만 녹차를 제공하고 있다. 한국특허 455,222 및 441,308에는 인삼 엑기스 분말 15 내지 20 중량%와 오가피, 두충, 당귀, 숙지황, 녹차, 상엽 엑기스를 배합한 비만억제 내지 치료 수준의 기능성 다이어트 제품을 제공하고 있으며, 한국특허 528,662 및 528,663에서는 리파아제 억제제 및 이를 함유하는 비만 방지용 기능성 식품으로서 디오신 및 디오신 유도체를 제공하고 있으며, 한국특허 출원번호 2002-0026032에서는 췌장 리파아제의 저해 및 이를 이용한 지방의 체내 흡수 억제용 조성물로서 가지 추출물을 제공하고 있다.

현재 비만치료약물은 크게 두 가지로 나누어 볼 수 있는데 식욕억제제, 에너지 대사 촉진제, 호르몬 및 펩타이드 조절제, 비 중추 신경계 작용 펩타이드제 등 신경 전달계나 호르몬 계통에 직접 작용하여 포만감을 주거나 식욕을 억제하는 약물과 소화효소에 작용하여 흡수를 억제하는 간접적인 약물이다. 이 약물들은, 신경 전달계나 호르몬 계통에 직접 작용하여 포만감을 주거나 식욕을 억제하는 약물의 경우 혈압이 상승하거나 불면증, 발한, 무기력 등의 부작용으로 건강에 이상이 발생 할 수 있는 심각한 문제점이 있다.

따라서 이를 극복하기 위하여 소화효소에 작용하여 흡수를 억제하는 간접적인 약물에 대한 예의 연구를 끊임없이 수행되고 있는 실정이다.

본 발명인들은 항비만 효과를 지닌 것으로 특허 또는 학술자료에 소개되었거나 전통적으로 우리의 식생활에 자주 이용되는 천연물을 예의주시하여 이로부터 예의 연구를 거듭한 결과 결명자의 항비만 효과의 가능성을 발견할 수 있었다.

결명자(학명 : Cassia tora L,)는 콩과에 속하는 1년생 초본으로 초결명의 성숙한 껍질은 윤이 나고 천립중은 약 32 그램 정도이다. 일반적으로 결명자는 약간 볶아서 물에 넣어 끓여 차로 만들어 음용하는데 색은 황갈색이고 맛은 약간 쓰지만, 알로에와 향이 유사하여 색, 향, 미에 있어서 다른 차에 비해서 손색이 없다. 한방서에 소개된 결명자중의 약리성분을 보면 비타민 에이(A)의 전구체인 카로 텐(Carotene(C₄₀H₅₆)), 노란색을 띠며 알로에 향과 쓴 맛을 내는 알로인(Alloin(C₂₁H₂₂O₄)), 역시 노란색을 내는 레인(Rhein(C₁₅H₈O₆)) 및 에모딘(Emodin (C₁₅H₁₀O₅)), 크리소판올(Chrysophanol), 알로에-에모딘(Aloe-emodin), 피지온(Physcion), 옵투신(Obtusin), 오란티오-옵투신(Aurantio-obtusin), 루브로푸사린(Rubrofusarin), 토라크립손(Torachryson), 토랄아세톤(Toralactone) 등이 들어있어서 결명자 수 추출액은 황갈색이고 쓴맛을 내며 독특한 향을 느끼게 하는 특징이 있다. 이들 성분들의 약리적 효과를 보면 카로텐은 시신경자극과 전달에 필수성분으로 좋은 시력 유지에 유효하고, 알로인은 혈중의 콜레스테롤 함량을 낮추어 줌은 물론 혈압강하에도 유효한 성분으로 알려지고 있다. 기타 결명자의 종합적인 효과로는 간과 콩팥의 이뇨작용을 도와주며 장의 열을 내며 변비를 예방 치료하는 효과가 있다.

그러나, 지금까지 결명자의 약리작용 및 효능에 대한 활발한 연구가 있었음에도 불구하고 항비만 효과에 대한 입증이 없었으며, 이에 대한 연구가 이루어지지 않았다. 또한 결명자를 포함한 녹차, 진피, 피망 등은 천연물로서 이들은 특정 성분을 수십 혹은 수백 종 함유하고 있어, 각 성분간 숨김효과(Hindered effect)에 의해 특정 약리효과가 발현되지 못하거나 거의 발현되지 못할 수도 있으며, 지금까지 항비만 효과에 대한 결명자의 연구가 거의 없었던 것도 상기 효과 때문이다.

본 발명의 목적은 항비만 효과를 갖는 결명자 추출물 및 그의 제조방법을 제공하는 것으로, 이와 같은 종래 기술에 의해 그 효능이 알려지지 않은 결명자의 항비만 효과를 갖는 특정 피크대의 결명자 추출물을 얻어 낮은 항비만 효과 또는 항비만 원료 확보의 어려움, 추출상의 문제를 최소화하여 이 추출물을 항비만 효과가 뛰어난 치료용 제제, 식품 및 차 등에 폭넓게 이용할 수 있도록 유도하는데 있다.

본 발명은 볶지 않은 결명자를 건조하고, 알콜로 추출한 후 실리카겔이 충전된 컬럼에서 에탄올 수용액을 전개액으로 컬럼크로마토그래피를 실시하여 상기 추출된 추출물을 10등분으로 분획하고 그 중 위에서 6번째 또는 7번째 분획물 중 어느 하나를 수집하여 얻는 것을 특징으로 하는 항비만 효과를 갖는 결명자 추출물의 제조방법을 제공한다.

또한, 상기 알콜은 에탄올 또는 메탄올인 것을 특징으로 하며, 상기 알콜은 99%인 것을 특징으로 한다.

그리고, 상기 알콜로의 추출은 1 ~ 3주일 동안 30 ~ 60℃에서 정치시켜 추출하는 것을 특징으로 한다.

이와 더불어, 본 발명은 상기 수집된 6번째 또는 7번째 분획물 중 어느 하나에 대하여 추가적으로 실리카겔이 충전된 컬럼에서 에탄올 수용액을 전개액으로 2차 컬럼크로마토그래피를 실시하여 상기 추출된 추출물을 16등분으로 분획한 다음, 위에서 7번째 내지 10번째 분획물중 어느 하나 또는 둘 이상의 조합을 수집하여 얻 는 것을 특징으로 하는 항비만 효과를 갖는 결명자 추출물의 제조방법을 제공한다.

또한, 상기 에탄올 수용액은 에탄올과 물이 1 : 1의 부피비율로 혼합된 것임을 특징으로 한다.

본 발명의 또 다른 특징은 상기의 제조방법에 따라 제조된 것을 특징으로 하는 항비만 효과를 갖는 결명자 추출물을 제공하는 것이다.

우선 본 발명에 사용된 시약으로는 효소로 시그마 케미칼에서 제조된 포오신 판크리틱 리파아제 타입 2(Porcine pancreatic Lipase; Type Ⅱ, Sigma chemical)를, 기질의 합성으로는 토로콜릭산 나트륨염(Taurocholic acid sodium salt, Sigma chemical), 콜레스테롤(Cholesterol, Sigma chemical), 엘-알파-포스파티디클로린 타입 엑스-이(L-α-Phosphatidycholine; type Ⅹ-E, Sigma chemical), 보빈 세롬 알부민(Bovine serum albumin; Sigma chemical), 염화나트륨(Sodium chloride, Junsei Chemical), 염화칼슘(Calcium chloride, Junsei Chemical) 및 올리브 기름(Olive oil,CJ)이다.

효소반응이 최적인 반응 조건을 확립하기 위해 인체내부와 가장 비슷한 환경을 만든다. 미 특허 4,598,089호의 실험방법으로 소장의 환경을 조성하였다. 100 밀리리터 수소이온농도 7.5 트리-염산 완충액을 용액으로 1 밀리몰 토로콜릭산 나트륨염, 0.1 밀리몰 콜레스테롤, 1 밀리몰 엘-알파-포스파티디클로린, 15 밀리그램/밀리리터 보빈 세롬 알부민, 100 밀리몰 염화나트륨, 1 밀리몰 염화칼슘과 같은 농도의 시약으로 용액을 제조하고 기질과 효소의 농도를 변경하여 최적조건을 선정하였다. 반응의 종결은 약 20초간 끓는 물에 반응물을 처리하여 효소의 활성을 없 앴다.

효소반응 실험의 결과분석은 산가측정방법(Acid Value)으로 채취한 시료 1 밀리리터를 15분간 1,800×중력에서 원심분리 한 후 기름 층인 상등부분을 0.02그램 취하여 에틸 에테르와 에탄올의 1:1 혼합액 4 밀리리터에 완전히 용해시킨다. 유리 지방산이 함유된 시료 일정량을 중성용매에 용해시킨 뒤 1% 페놀프탈레인 지시약과 0.1 노르말 수산화칼륨 용액을 이용하여 적정한다. 종말점은 30초간 색이 변하지 않을 때로 한다. 적정 값의 분석은 다음과 같은 식을 이용한다.

(A=산가, F=0.1N-KOH역가, B=적정량, S=시료채취량)

전체 시료는 올리브 기름이므로 자유지방산이 올레인산이라 할 때 자유지방산의 %는 다음과 같은 식으로 알 수 있다.

효소의 최적농도를 찾기 위해 기질을 1 밀리리터(기질농도 0.2 부피/부피l), 수분량을 4 밀리리터(수분농도 0.8 부피/부피)로 고정하고 섭씨 36.5도, 230 알피엠 에서 1 시간 동안 반응시켰다.

이에 올리브 기름의 분해 활성은 반응 리파아제의 농도가 20 유닛까지는 증가하였으나 그 이후의 증가량은 미비하였다.

췌장 리파아제의 반응 농도가 20 유닛이 최적이므로 효소의 농도를 20 유닛 으로 잡고 기질의 최적농도를 결정하기 위해 기질의 농도 별 실험을 실시하였다.

반응 효소의 량(20 유닛/밀리리터)과 수분의 량을 4 밀리리터로 고정하고 기질의 농도별 실험을 실시한 결과 기질의 농도가 0.2(부피/부피)일 때가 최대이고 0.33(부피/부피) 보다 증가하였을 경우 반응 활성도가 오히려 감소하는 것을 알 수 있었다 체내에서 토로콜릭산 나트륨염, 엘-알파-포스파티디클로린은 계면활성제로 쓰인다.

즉, 기질과 수분을 에멀젼화하여 반응표면적을 넓게 해준다. 기질의 농도가 0.33 이상인 경우에는 기질의 크기가 커져 상대적인 효소반응의 표면적이 작아짐으로써 효소의 활성이 떨어졌다고 생각 할 수 있다. 기질의 농도가 0.3, 0.38, 0.43 인 반응물을 약 10초간 정치시킨 후 시료를 관찰하면 기질의 농도가 0.38과 0.43 일 때 쉽게 상분리가 일어나는 것을 관찰할 수 있었다.

이하, 본 발명의 잇점은 실시예를 통해 보다 상세히 설명하지만, 본 발명이 하기 실시예들에만 제한되는 것은 아니다.

<실시예 1>

결명자는 볶지 않은 것으로 사용하였다. 분리 정제 시 컬럼크로마토그래피의 충진 물질로 사용한 실리카 젤은 독일의 머크에서 제공하는 실리카젤 60을 이용하였다. 추출용매에 따르는 추출물의 수득률 비교와 췌장 리파아제 활성 저해 실험을 실시하였다. 에탄올(20, 50, 99%)와 메탄올(20, 50, 99%), 에틸아세테이트, 클로로포름, 증류수를 추출용매로 삼고 각각 2주일 간 45℃에서 추출하였다. 실험의 재료 가 건조된 결명자이기 때문에 물의 함량이 50%보다 높은 경우 결명자의 싹이 돋아나 추출물을 회수 할 수가 없어 실험이 불가능하였고, 에틸아세테이트와 클로로포름은 추출되는 량이 극소량으로 실험이 불가능하였다. 따라서 이들 용매를 제외한 나머지 실험 용매로 추출한 후 반응 실험을 실시한 결과 표 1에서 보여 주듯이 99% 에탄올의 실험결과가 가장 우수하였다.

용매	추출수득율(%)	저해 %
물	-	-
50% 에탄올	3.121	53.70
99% 에탄올	2.613	67.04
50% 메탄올	3.931	39.74
99% 메탄올	1.06	57.10

<실시예 2>

1주일 간 대류 오븐, 섭씨 70도에서 완전히 건조한 약 50 그램의 결명자를 500 밀리리터의 용매로 2주간 섭씨 45도에서 정치시켜 추출하였다. 결명자는 1회 추출마다 세척과 건조를 거쳐 같은 방법으로 3회 추출하였다. 결명자 추출용액은 섭씨 50 내지 60도에서 감압 증류하여 용매를 제거하고 과량의 증류수를 첨가하여 추출물을 수거하였다. 증류수로 수거한 추출물은 섭씨 영하 50도, 압력 9 토르에서 동결건조하여 수분을 완전히 제거하고 냉장실에서 보관하였다. 결명자추출물로부터 효소활성저해물질을 분리 정제하기 위해 칼럼크로마토그래피를 이용하였다. 칼럼크로마토그래피를 실리카겔로 충전하고 에탄올과 물의 1:1혼합물을 전개액으로 사용하였다. 칼럼크로마토그래피 분리 실험에서는 전개액에서 73%의 활성저해 효과가 있는 분획을 분리할 수 있었다. 추출물 중 리파아제 저해제의 정제를 위해 칼럼크로마토그래피를 이용하였다. 동결 건조된 시료를 99% 에탄올에 용해시킨 후 완전히 용해된 부분을 회수하였다. 머크사에서 제조된 실리카겔인 실리카겔60으로 충전된 20×300 칼럼에 에탄올로 평형 한 후 에탄올에 완전 용해된 시료를 로딩하였다. 에탄올 과 물의 1:1 혼합 용액을 전개액으로 이용하여 분획수집기를 사용하여 10개의 분획으로 분획한 후 각 분획을 농축하고 반응 실험을 실시하여 그 결과를 도 1에 나타내었다. 1차 분리 결과 저해 활성이 가장 높았던 위에서 6번째 또는 7번째 분획물 중 어느하나를 회수하여 16개의 분획으로 2차 분리 정제하여 도 2에 나타내었다. 2차 분리 결과 73%의 저해 활성을 보이는 추출물을 회수 할 수 있었다.

<실시예 3>

결명자 추출물의 수소이온농도에 대한 안정성을 확인하기 위해 수소이온농도 2, 4, 7 트리-염산 완충액을 제조한 후 30분과 60분간 추출물을 녹여두었다. 30분과 60분이 지난 후 수소이온농도 7로 만든 후 효소반응을 실시하였다. 실험의 결과를 표 2에 나타내었으며, 수소이온동도 4에서는 70% 이상의 활성을 유지하였으나 수소이온동도 2에서는 저해활성이 상당부분 감소되어 60분 처리 시 약 40%감소되었다. 그러나 실제 소화기관에서의 체류시간을 감안할 때 위 자료의 결과는 그리 큰문제가 되지는 않을 것으로 판단된다.

수소이온농도	처리시간(분)	상대활동도(%)
컨트롤	-	100
2	30	65.37
4	30	79.67
7	30	100.00
2	60	57.77
4	60	69.25
7	60	100.00

<실시예 4>

결명자 추출물의 온도 안정성을 확인하기 위해 밀리리터당 0.1 그램 농도로 제조한 추출물용액을 추출 시 온도 섭씨 45 도 보다 높은 온도인 60, 80, 100 도 온도에서 30 분, 60 분간 정치시킨 후 섭씨 36.5 도에서 2시간 정도 보관하여 온도가 일정해지면 유화용액과 효소용액을 넣고 반응시켰다. 실험 결과 열처리 시 표 3에서 보듯 저해활성이 다소 감소함을 알 수 있었다. 열처리 온도가 높을수록 처리시간이 길수록 그 감소폭이 증가하였다. 그러나 80℃의 고온에서도 70%이상의 활성을 나타내는 것으로 보아 본 추출물은 우수한 열안정성을 가지고 있는 것으로 판단되었다.

온도	처리시간(분)	상대활동도(%)
컨트롤	-	100
60	30	86.34
80	30	75.63
100	30	75.41
60	60	80.43
80	60	70.50
100	60	60.04

<비교실시예>

본 비교실시예에서 녹차는 시중에서 판매되는 건조이외의 가공을 하지 않은 녹차 잎을 사용하였고, 피망과 귤껍질은 판매되는 것을 사용하되 완전히 세척하여 농약을 제거하여 사용하였으며, 결명자는 시중에서 구입한 볶지 않고 말린 것을 이용했다. 각 시료는 1 주일간 섭씨 70도 대류 오븐에서 건조하였다. 결명자는 씨앗내부의 배아에서 지방산이 검출되므로 분쇄하지 않고 실험하였으나, 나머지 건조시료는 분쇄기를 이용하여 분말로 만든 후 분말화된 시료를 섭씨 45도 인큐베이터에서 24시간 동안 용매 추출하였다. 효소 반응 최적화실험의 결과로 밀리리터당 효소 20 유닛과 기질농도 20%, 수분량 80%를 확정하였다. 따라서 추출물용액은 밀리리터당 0.1 그램의 농도로 제조하고 최종 반응 농도가 밀리리터당 20 유닛이 되도록 효소 용액을 제조한다. 유화용액은 100 밀리리터 수소이온농도 7.5 트리-염산 완충액(Tris-HCl buffer)과 50 밀리리터 올리브 기름에 1 밀리몰 타우로-콜릭산 나트륨염(Tauro-cholic acid sodium salt), 0.1 밀리몰 콜레스테롤, 1 밀리몰 엘-알파-포스파티디콜린(L-α-Phosphatidycholine), 밀리리터당 15 밀리그램 보빈 세롬 알부민(Bovine serum albumin), 100 밀리몰 염화나트륨, 1 밀리몰 염화칼슘과 같은 농도의 시약으로 제조하였다. 실험시작 시 유화용액 3 밀리리터, 효소용액 1 밀리리터, 추출물용액 1 밀리리터를 섭씨 36.5도, 230 알피엠에서 4 시간 동안 반응시키고 끓는 물에서 약 20 초간 처리하여 반응을 종결시켰다. 도 3은 귤껍질 추출물과 컨트롤 실험을 비교하여 나타낸 것이고, 도 4는 피망추출물과 컨트롤 실험을 비교하여 나타낸 것이며, 도 5는 녹차추출물과 컨트롤 실험을 비교, 도 6은 결명자추출물과 컨트롤 실험을 각각 비교한 것으로 상기 도에서 보는바와 같이 건조한 귤껍질추출물의 췌장 리파아제 활성저해 효과는 7%, 피망추출물은 13%, 녹차 추출물는 22%인데 반해, 결명자 추출물은 47%로 결명자의 효소활성저해 효과가 가장 높은 것을 확인하였다.

본 발명에 따라 천연물로부터 비만억제 기능성 식품 및 식품의약 개발에 활용가능하며 국내 비만 관련 기능성 식품 소재 개발을 위한 기반을 구축 할 수 있으며, 점차 증가하고 있는 비만인구로 인해 발생하는 사회비용 또한 비만예방물질의 개발로 절감할 수 있는 효과가 있다.

Claims

볶지 않은 결명자를 건조하고, 알콜로 추출한 후 실리카겔이 충전된 컬럼에서 에탄올 수용액을 전개액으로 컬럼크로마토그래피를 실시하여 상기 추출된 추출물을 10등분으로 분획하고 그 중 위에서 6번째 또는 7번째 분획물 중 어느 하나를 수집하여 얻는 것을 특징으로 하는 항비만 효과를 갖는 결명자 추출물의 제조방법.
청구항 1에 있어서, 상기 알콜은 에탄올 또는 메탄올인 것을 특징으로 하는 항비만 효과를 갖는 결명자 추출물의 제조방법.
청구항 1에 있어서, 상기 알콜은 99%인 것을 특징으로 하는 항비만 효과를 갖는 결명자 추출물의 제조방법.
청구항 1에 있어서, 상기 알콜로의 추출은 1 ~ 3주일 동안 30 ~ 60℃에서 정치시켜 추출하는 것을 특징으로 하는 항비만 효과를 갖는 결명자 추출물의 제조방법.
청구항 1에 있어서, 상기 수집된 6번째 또는 7번째 분획물중 어느 하나에 대하여 추가적으로 실리카겔이 충전된 컬럼에서 에탄올 수용액을 전개액으로 2차 컬럼크로마토그래피를 실시하여 상기 추출된 추출물을 16등분으로 분획한 다음, 위에 서 7번째 내지 10번째 분획물 중 어느 하나 또는 둘 이상의 조합을 수집하여 얻는 것을 특징으로 하는 항비만 효과를 갖는 결명자 추출물의 제조방법.
청구항 1 또는 청구항 5에 있어서, 상기 에탄올 수용액은 에탄올과 물이 1 : 1의 부피비율로 혼합된 것임을 특징으로 하는 항비만 효과를 갖는 결명자 추출물의 제조방법.
상기 청구항 1 내지 청구항 4 중 선택된 어느 한 항의 제조방법에 따라 제조된 것을 특징으로 하는 항비만 효과를 갖는 결명자 추출물.
상기 청구항 5의 제조방법에 따라 제조된 것을 특징으로 하는 항비만 효과를 갖는 결명자 추출물.