KR100755508B1

KR100755508B1 - 신규한 락토바실러스 크리스파터스 ｒｍｋ５６７ 균주 및 이를 이용한 감마-아미노부티르산의 생산방법

Info

Publication number: KR100755508B1
Application number: KR1020060041691A
Authority: KR
Inventors: 임상동; 김기성; 차성관
Original assignee: 한국식품연구원
Priority date: 2006-05-09
Filing date: 2006-05-09
Publication date: 2007-09-04

Abstract

본 발명은 신규한 락토바실러스 크리스파터스 RMK567 균주 및 이를 이용한 감마-아미노부티르산의 생산방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 발효유 제조에 적합한 젖산 및 감마-아미노부티르산 생성능력이 있는 신규한 젖산균인 락토바실러스 크리스파터스(Lactobacillus crispatus) RMK567 및 이를 이용한 감마-아미노부티르산의 생산방법에 관한 것이다. 본 발명의 젖산균은 종래에 발견된 젖산 발효균보다 감마-아미노부티르산 생성능력이 뛰어나며, 발효유를 제조하는데 적합하다.

GABA, 발효유, 락토바실러스 크리스파터스

Description

신규한 락토바실러스 크리스파터스 ＲＭＫ５６７ 균주 및 이를 이용한 감마-아미노부티르산의 생산방법 {Novel Strains of Lactobacillus crispatus ＲＭＫ５６７ and Method for Preparing GABA Using the Same}

도 1은 락토바실러스 크리스파터스 RMK567을 10% 환원탈지유에 접종하였을 때의 성장을 나타낸 그래프이다.

도 2는 락토바실러스 크리스파터스 RMK567을 10% 환원탈지유에 접종하였을 때의 pH변화를 나타낸 그래프이다.

도 3은 담즙첨가 유무에 따라 L-시스테인이 함유된 MRS배지에서의 락토바실러스 크리스파터스 RMK567의 성장을 나타낸 그래프이다.

본 발명은 신규한 락토바실러스 크리스파터스 RMK567 균주 및 이를 이용한 감마-아미노부티르산의 생산방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 발효유 제조에 적합한 젖산 및 감마-아미노부티르산 생성능력이 있는 신규한 젖산균인 락토바실러 스 크리스파터스(Lactobacillus crispatus) RMK567 및 이를 이용한 감마-아미노부티르산의 생산방법에 관한 것이다.

감마-아미노부티르산(GABA; Gamma-Amino Butyric Acid)은 자연계에 분포하는 비단백질 아미노산의 일종으로 포유동물의 뇌나 척수에 존재하는 신경 전달 물질로서 GABA의 합성경로는 글루탐산탈탄산효소(GDC)가 작용하여 글루탐산으로부터 만들어진다는 것이 알려져 왔다(Satya & Nair, Phytochem. 29, 367, 1990).

GABA의 기능으로는 뇌의 혈류를 개선하여 뇌의 산소공급을 증가시켜 뇌의 대사 향상 및 의욕저하 등의 치료제로 사용되어 brain food 라고도 하며 이 외에도 연수의 혈관 중추에 작용하여 항이뇨호르몬인 바소프레신의 분비를 억제하고 혈관을 확장시켜 혈관을 낮추는 고혈압 저하효과(anti-hypertensive effect) 및 이뇨효과(diuretic effect) 등 여러 생리작용이 보고되고 있다(Mody et al, Trends Neurosci. 17, 517, 1994).

그러나 GABA는 배아미, 녹차 및 뽕잎 등에 다소 함유되어 있으나 약리작용을 발휘하기에는 턱없이 함량이 낮아 자연적인 섭취로 GABA의 생리작용을 기대하기는 어려운 실정이다. 지난 수년 동안 GABA의 대량생산에 관한 연구가 활발히 진행되어 왔으나 합성 GABA의 경우 식욕부진, 변비, 설사 등의 부작용이 있어 발효 제법을 이용한 GABA의 생산이 연구되고는 있으나 아직은 수율이 낮은 형편이다.

GABA는 대략 홍국쌀(red mold rice)에 20㎎/100g 건물량, 가바론티(Gabaron tea)에 150㎎/100g 건물량, 불린 쌀눈(soaked rice germ)에 400㎎/100g 건물량이 함유되어 있다(Kono & Himeno, Biosci. Biotechnol. Biochem. 64, 617, 2000; Tsushida et al, Nippon Nogeikagaku kaishi. 61, 817, 1987; Saikura et al, J. Agric. Food Chem. 42, 1122, 1994; Saikusa et al, Nippon Shokuhin Kagaku Kogaku Kaishi. 48, 196, 2001).

GABA를 생산하는 젖산균에 관한 연구(Nomura et al. International Journal of Systematic Bacteriology. 49, 163, 1999)로 Lactococcus lactis가 GABA를 생산하는 능력이 있음을 밝힌 바 있으나 높은 GABA 생성 젖산균으로 발효유에 이용된 사례는 없다.

종래에 발견된 락토바실러스 크리스파터스(Lactobacillus crispatus)는 그램양성, 간상형, 호모젖산발효균으로서, 전분을 발효하고, 젖산을 생성하는 것으로 알려져 있다. 현재까지 발효유제품의 스타터로서 이용된 사례가 없었다.

본 발명은 상기한 바와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위해 제안된 것으로, 본 발명의 목적은 원유에서 분리한 신규의 젖산균 락토바실러스 크리스파터스 RMK567을 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적은 락토바실러스 크리스파터스 RMK567(KCCM 10745P) 균을 배양하여 배양물로부터 감마-아미노부티르산을 생산하는 방법을 제공하는데 있다.

상기의 목적을 달성하기 위한 본 발명은 우유 응고력 및 GABA 생성 능력이 우수한 균주 락토바실러스 크리스파터스(Lactobacillus crispatus) RMK567(KCCM 10745P)를 포함한다.

또한, 본 발명은 락토바실러스 크리스파터스 RMK567(KCCM 10745P) 균을 배양하여 배양물로부터 감마-아미노부티르산을 생산하는 방법을 포함한다.

이하 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.

본 발명의 신규 미생물은 원유에서 분리되었으며, 후술하는 실시예의 방법에 따라 스크리닝 및 동정하였다. 미생물의 동정은 그의 형태학적, 생리학적 및 생화학적 특성을 기초로 하여 이루어졌다. 원유에서 분리한 신규의 젖산균이 젖산 및 GABA 생성 능력이 우수하여 발효유 제조에 적합함을 알아내고, 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명자들은 원유에서 변형 MRS배지에서 배양한 다음, 각 균락을 순수분리하고 노란색으로 변한 균락을 잠정적 젖산균으로 선발하였다. 선발된 균주는 전기 변형 MRS 배지에서 도말한 후, 호기배양하여 순수분리 하였다. 순수분리된 균주를 동정한 결과, 균주는 그램양성 간균이며, 산소 유무와 상관없이 잘 생장하고 카탈라제와 운동성에 대해서는 음성으로 밝혀졌다. 또한, 15℃에서는 생장하지 않은 반면, 45℃에서는 생장하였으며, 글루코오스(glucose)로부터 가스와 알긴산으로부터 암모니아를 생성하지 않아 락토바실러스(Lactobacillus)에 속하는 것으로 확인하였다. 한편, 종명을 확인하기 위하여 49종의 당발효 시험을 실시한 결과, 락토스 등 18종으로부터 산을 생성하였는바, 그 결과를 ATB 동정시스템에 입력하여 조사한 결과, 본 발명의 젖산균이 락토바실러스 크리스파터스(Lactobacillus crispatus)로 판명되었다. 원유에서 분리한 탈지유 응고 균주들 중 탈지유 응고속도와 GABA 생성 능력이 우수한 균주를 락토바실러스 크리스파터스(Lactobacillus crispatus) RMK567로 명명하였다.

생균수와 pH를 측정하여 젖산균의 생장을 시험한 결과, 최적온도는 40℃이며, 발효유의 최적 pH 조건인 pH 4.3-4.4에 도달하는데 15시간 소요된다. 또한, 항생제 내성시험을 통해 생장 여부를 관찰하여 최저억제농도(MIC)값을 측정한 결과, 타 계열의 항생제에 비해 아미노글리코사이드계 특히 가나마이신, 네오마이신 및 스트렙토마이신에 대해 내성이 높은 반면, 페니실린-G에 가장 감수성이 높다. 효소활성시험을 통해 나타난 결과, 류신 아릴아미다제, β-갈락토시다제에서 효소 활성이 높게 나타난다. 담즙 내성을 MRS배지에서의 젖산균 성장을 시험함으로써 측정하였는바 OD값이 0.3 증가하는데 소요되는 시간은 담즙을 첨가하지 않을 때는 2시간, 담즙을 첨가할 때는 3.8시간 소요됨에 따라 약간 억제를 받기는 하나 담즙에 대한 내성이 있는 것으로 나타난다.

pH 내성을 시험한 결과, 대조구 pH인 6.4에 비해 강산인 pH 2에서조차도 거의 영향이 없음에 따라 내산성이 있음을 보인다. 항균력 시험에서도 Escherichia coli에 대해 29.21%, Salmonella typhimurium에 대해 39.06%, Staphylococcus aureus에 대해 51.40%의 억제력을 보인다. 상기에서 살펴본 바와 같이 본 발명의 락토바실러스 크리스파터스 RMK567이 발효유 제조에 적합한 젖산균임을 확인할 수 있다.

본 발명의 락토바실러스 크리스파터스 RMK567은 2006년 4월 12일 한국종균협회(KFCC)에 기탁번호 KCCM 10745P로 기탁하였다.

이하, 본 발명에서는 상기 락토바실러스 크리스파터스 RMK567을 편의상 L. crispatus RMK567로 칭하였다.

이하 본 발명의 내용을 실시예를 통해 더욱 상세하게 설명하기로 한다. 다만, 이들 실시예는 본 발명의 내용을 이해하기 위해 제시되는 것일 뿐 본 발명의 권리범위가 이들 실시예로 한정되는 것은 아니다.

[실시예 1] 미생물의 분리

시료로 사용된 원유는 국내 각 지역의 목장에서 수거하여 브롬크레졸 퍼플(Bromcresol purple)과 소듐아자이드(sodium azide)를 첨가한 변형 MRS배지(표 1)에 0.3㎖씩 평면도말법으로 접종한 후 37℃에서 48시간 배양하였다. 그런 다음, 각각의 균락을 전기 변형 MRS 배지에서 순수분리하고, 노란색으로 변한 균락을 잠정적 젖산균으로 선발하였다. 선발된 균주는 전기 변형 MRS 배지에 3회 백금이로 도말한 후 호기배양 하여 순수분리 하였다. 순수분리 균주를 10% 환원 탈지유(Difco Laboratories, USA)에 접종하고 37℃에서 24시간 동안 배양하여 응고 여부를 확인하였다.

표 1. 본 발명에서 미생물 분리에 사용된 변형 MRS 배지의 조성

성 분	성분비(그람/리터)
프로테오스 펩톤 #3	10.0
쇠고기 추출물	10.0
효모 추출물	5.0
락토오스	20.0
트윈 80	1.0
암모늄 시트레이트	2.0
소디움 아세테이트	5.0
마그네슘 설페이트	0.1
망간 설페이트	0.05
디포타시움 포스페이트	2.0
소듐 아자이드	0.25
브롬크레졸 퍼플	0.04

[실시예 2] GABA 생산 젖산 균주 선발

상기에서 분리된 젖산균과 상업용 젖산균 1%를 모노소디움글루탐산monosodium glutamate, MSG) 1%가 첨가된 10% 환원탈지유에 37℃에서 18시간 배양 후 pH와 GABA 생산 양을 측정한 결과는 다음 표 2와 같다.

표 2. 상업 균주, 한국식품연구원에서 보관 젖산 균주 및 분리 균주의 탈지유 응고 여부와 배양 후의 pH 및 GABA 생산 양

보관 젖산균	출 처	탈지유 응고반응		pH	GABA (ppm/g건물)
보관 젖산균	출 처	24hr	48hr	pH	GABA (ppm/g건물)
L. acidophilus*	NCFM, Rhone-poulenc	+	+	4.21	32.50
L. acidophilus*	Culture System	+	+	4.53	22.65
Streptococcus themophilus *	Culture System	+	+	4.32	30.53
L. acidophilus*	NCFM, Rhone-poulenc	+	+	4.12	23.64
L. lactis subsp . lactis	ATCC 21053	+	+	5.81	5.91
L. lactis	ARRL B-633	+	+	6.07	9.85
L. diacetylactis	NRRL B-2356	+	+	4.75	6.89
L. casei	ATCC 393	+	+	5.44	5.91
L. acidophilus	ATCC 11506, IFO 3205	+	+	5.45	5.91
L. cremoris	KFRI 00349	+	+	5.66	3.94
L. delbrueckii subsp . lactis	ATCC 7830, IFO 3376	+	+	5.30	5.94
L. bulgaricus	ATCC 33409	+	+	5.30	8.86
L. amylophilus	NRRL B-4437	+	+	6.07	5.91
L. reuteri	KFRI 00661	+	+	5.84	10.83
선발 젖산균 RMK567		+	+	4.33	602.13

주) * 상업 균주

[실시예 3] 미생물의 동정

미생물의 분류학적 동정은 Hammes 등[The prokaryotes, 1563-1578, 2nd Edition, Springer-Verlag Co.(1992)]의 방법에 따라 수행하였으며, 그 결과는 표 3에서 보는 바와 같다. 이들 균주는 모두 그램 양성, 간균이며, 산소 유무와 상관없이 잘 생장하였고, 카탈라제와 운동성은 음성이었다. 또한, 15℃에서는 생장하지 않은 반면 45℃에서는 생장하였으며 포도당(glucose)으로부터 가스(gas)와, 아르기닌(arginine)으로부터 암모니아를 생성하지 않아 Lactobacillus 속(genus)에 속하였다. 종(species)을 정하기 위하여 API 50CHL kit(API bioMerieux, France)를 이용하여 49종의 당발효 시험을 실시하였을 때 락토스 등 18종으로부터 산을 생성하였고, 그 결과를 ATB identification system에 입력한 결과 락토바실러스 크리스파터스로 판명되었다. 원유에서 분리한 탈지유 응고 균주들 중 탈지유 응고속도와 GABA 생성 능력이 우수한 균주를 Lactobacillus crispatus RMK567로 명명하고, 2006년 4월 12일 사단법인 한국종균협회(KFCC)에 기탁번호 KCCM 10745P로 기탁하였다.

표 3. 본 발명의 신규 미생물 L. crispatus RMK567의 생리적 및 생화학적 특성

그램 반응 세포 형태 포자 형성 운동성 호기적 성장 혐기적 성장 카탈라제 반응 15℃에서 성장 45℃에서 성장 포도당으로 부터 가스생성 알기닌으로부터 암모니아 생성		+ 간균 - - + + - - + - -
당이용 능력
글리세롤 에리티톨 D-아라비노스 L-아라비노스 리보스 글루코스 프락토스 만노스 소르보스 람노스 둘시톨 이노시톨 만니톨 솔비톨 α-메칠-D-만노사이드 α-메칠-D-글루코사이드 N 아세칠 글루코스아민 아미그달린 아르부틴 에스쿨린 살리신 셀로비오스 말토스 락토스 멜리비오스	- - - - - + + + - - - - - - - - + + + + + + + + -	D-사이로스 L-사이로스 아도니톨 β-메칠-D-사이로사이드 갈락토스 수크로스 트레할로스 이눌린 멜레지토스 라피노스 스타치 글리코겐 실리톨 겐티오비오스 D-투라노스 D-라이소스 D-타가토스 D-후코스 L-후코스 D-아라비톨 L-아라비톨 글루코네이트 2-케토-글루코네이트 5-케토-글루코네이트	- - - - + + + - - - + + - + - - - - - - - - + -

발효유용 스타터로서 적합한지 여부를 확인하기 위하여 L. crispatus RMK567을 10% 환원탈지유에 배양하면서 시험에 사용하였다.

[실시예 4] 미생물의 생장시험

젖산균의 생장은 생균수, pH를 측정하여 시험하였다. 생균수는 10% 탈지분유 150㎖에 젖산균을 1㎖ 용 피펫으로 1방울 접종한 후 34, 37, 40℃에서 3시간 간격으로 24시간까지 배양한 각 시료를 0.1% 펩톤용액에 희석하여 BCP plate count agar 평판에서 부어 굳힌 후 35℃에서 48시간 배양하여 계수하였고, 온도 및 시간별로 pH 변화를 측정하고 결과를 도 1과 도 2에 나타내었다. 도 1과 도 2에서 볼 수 있는 바와 같이 최적온도는 40℃이며, 발효유의 최적 pH 조건인 pH 4.3-4.4에 도달하는데 15시간 소요되었다.

[실시예 5] 항생제 내성시험

항생제 내성시험은 트립틱 소이 브로스(tryptic soy broth, Difco, USA)를 사용하여 2배 희석방법에 의해 생장 여부를 관찰하여 최저억제농도(MIC) 값을 정하였으며, 측정한 결과는 표 4에 나타내었다.

표 4. L. crispatus RMK567의 항생제 감수성

항생제	최저억제농도(㎍/㎖)
아미노글리코사이드계
아미카신 Amikacin	160
겐타마이신	160
가나마이신	1600
네오마이신	1600
스트렙토마이신*	1600
β-락탐계
페니실린-G*	20
메치실린 Methicillin	160
옥사실린	120
암피실린	640
그램-양성 스펙트럼
바시트라신*	50
리팜피신	120
노보바이오신	30
린코마이신	400
그램-음성 스펙트럼
폴리마이신B*	600
광범위 스펙트럼
클로람페니콜	80
반코마이신*	400

* : units/㎖

표 4에서 볼 수 있는 바와 같이 L. crispatus RMK567은 타 계열의 항생제에 비해 아미노글리코사이드계가 내성이 있었고, 이중 가나마이신, 네오마이신 및 스트렙토마이신이 공히 1,600㎍/㎖이였으며, 반면 페니실린-G에 가장 감수성이 높았다.

[실시예 6] 효소활성 시험

효소활성 시험은 MRS 액체배지에서 37℃, 18시간 동안 배양한 균주를 생리식염수로 희석하여 10⁵ - 10⁶cfu/㎖ 수준의 시료를 조제한 후, API ZYM kit(API bioMerieux, France)를 이용하여 37℃에서 5시간 동안 배양한 다음 효소반응을 시켰다. 효소활성은 표준색상표를 비교하여 0-5의 수치로 표시한 결과는 표 5에 나타내었다.

표 5. L. crispatus RMK567의 효소활성 비교

효 소

효소활성

알칼라인 포스파타제 에스테라제(C4) 에스테라제 리파제(C8) 리파제(C14) 류신 아릴아미다제 발린 아릴아미다제 시스틴 아릴아미다제 트립신 카이모트립신 산 포스파타제 나프톨-AS-BI-포스포하이드로라제 α-갈락토시다제 β-갈락토시다제 β-글루크로니다제 α-글루코시다제 β-글루코시다제 N-아세칠-β-글루코스아민니다제 α-만노시다제 β-푸코시다제

0 1 0 0 4 1 1 0 0 2 0 0 4 1 1 3 0 0 0

* : 0 에서 5까지 단계별로 표준색이 명시되어 있으며, 0은 음성이고 5는 최대의 강도를 나타낸 다. 1은 5나노몰(nanomoles), 2는 10나노몰, 3은 20나노몰, 4는 30나노몰, 5는 40나노몰 이상의 효소활성을 나타냄.

표 5에서 볼 수 있는 바와 같이 L. crispatus RMK567은 류신 아릴아미다제, β-갈락토시다제에서 효소 활성이 높게 나타났다.

[실시예 7] 담즙내성시험

담즙내성시험은 길리랜드와 월커의 방법(Gilliland & Walker, J. Dairy Sci., 73, 905, 1990)에 따라 측정한 결과는 제 3도에 나타내었다. 제 3도에서 볼 수 있는 바와 같이 OD값이 0.3 증가하는데 소요되는 시간은 담즙을 첨가하지 않을 때는 2시간, 담즙을 첨가할 때는 3.8시간 소요됨에 따라 억제를 받기는 하나 성장을 하는 것으로 볼 때 담즙에 대한 내성이 있는 것으로 나타났다.

[실시예 8] pH 내성시험

pH 내성시험은 클라크등의 방법(Clark et al., Cultured Dairy Products J., 28(4), 11, 1993)에 따라 측정한 결과는 표 6에 나타내었다.

표 6. 염산용액에서 3시간 후의 L. crispatus RMK567 내성 비교

단위 : CFU per ㎖(Log number)

배양시간(hr)	pH 2	pH 3	pH 4	pH 6.4
0	9.13	9.14	9.28	9.41
1	9.12	9.12	9.27	9.42
2	9.07	9.09	9.26	9.43
3	9.04	9.05	9.25	9.44

상기 표 6에서 볼 수 있는 바와 같이 대조구 pH인 6.4에 비해 강산인 pH 2에서조차도 거의 영향이 없음에 따라 내산성이 있음을 보였다.

[실시예 9] 항균력 시험

항균력 시험은 길리랜드와 스펙(Gilliland & Speck, J. Food Prot., 40(12), 820, 1977)에 따라 측정한 결과는 표 7에 나타내었다.

표 7. MRS 배지에서 L. crispatus RMK567이 식중독균 억제(*)

식중독균	생장
	식중독균^a		L. crispatus RMK567^a		억제율(%)
	CFU/㎖	pH	CFU/㎖	pH	억제율(%)
Escherichia coli	1.8 × 10⁷	6.65	1.3 × 10⁷	5.04	29.21
Salmonella typhimurium	1.3 ×10⁷	6.65	7.8 × 10⁷	4.93	39.06
Staphyloccous aureus	2.5 × 10⁷	6.68	1.2 × 10⁷	4.98	51.40

* L. crispatus RMK567의 초기 수 : 1.32×10⁶CFU/㎖

^a 37℃에서 6시간 배양 후 측정

상기 표 7에서 볼 수 있는 바와 같이, L. crispatus RMK567이 에스케리키아 콜리(Escherichia coli)에 대해 29.21%, 살모넬라 타이피머리움(Salmonella typhimurium)에 대해 39.06%, 스테피로코커스 오레우스(Staphylococcus aureus)에 대해 51.40%의 억제력을 보였다.

[실시예 10] GABA 생산 최적배양조건 설정

가. 환원탈지유 함량과 MSG 첨가량이 GABA함량에 미치는 영향

환원탈지유 및 MSG 함량별로 L. crispatus RMK567을 1% 접종하고 37℃에서 18시간 배양한 후 GABA 함량을 측정한 결과는 다음 표 8과 같다.

환원 탈지유	MSG 0.1%	MSG 0.5%	MSG 1.0%
환원 탈지유	GABA 함량
8 %	719.74±14.65	566.25±25.23	411.38±32.56
10 %	666.82±56.27	587.14±26.56	602.13±13.41
12 %	739.98±9.08	558.50±36.33	553.11±11.21

환원 탈지유 농도가 증가할수록, MSG 첨가농도가 감소할수록 GABA 함량이 증가하는 경향을 나타내었다. 따라서 환원탈지유는 12%, MSG는 0.1% 첨가했을 때가 가장 적합한 조건이었다.

나. L. crispatus RMK567 첨가량이 GABA 함량에 미치는 영향

상기에서 얻어진 최적조건인 환원 탈지유 농도 12%에 MSG 0.1%를 첨가하고, L. crispatus RMK567 첨가량별로 37℃에서 18시간 배양했을 때의 GABA 함량을 측정한 결과는 다음 표 9와 같다.

표 9. L. crispatus RMK567 첨가량이 GABA함량에 미치는 영향 (단위: ppm)

균 첨가량	0.1%	0.5%	1.0%
GABA 함량	672.49±11.95	741.84±1.53	733.58±0.68

표 9에서 보는 바와 같이 균 첨가량 0.5%일 때 GABA 함량이 741.84ppm으로서 가장 높은 값을 나타내었다.

다. 배양온도가 감마-아미노부티르산 함량에 미치는 영향

상기에서 얻어진 최적조건인 환원 탈지유 농도 12%에 MSG 0.1%를 첨가하고, L. crispatus RMK567 첨가량 0.5%로 한 다음 배양온도별로 18시간 배양했을 때의 GABA 함량을 측정한 결과는 다음 표 10과 같다.

표 10. 배양온도가 GABA 함량에 미치는 영향 (단위 : ppm)

배양온도	34℃	37℃	40℃
GABA 함량	660.98±2.47	727.46±0.64	745.66±0.99

표 10에서 보는 바와 같이 GABA 생산 최적배양조건은 환원탈지유 12%, MSG 첨가량 0.1%, L. crispatus RMK567 첨가량 0.5% 및 배양온도 40℃에서 18시간 배양할 때 감마-아미노부티르산 함량이 745.66ppm이었다.

이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명은 원유에서 분리한 젖산 발효균인 락토바실러스 크리스파터스 RMK567을 제공한다. 본 발명의 젖산균은 종래에 발견된 젖산 발효균보다 감마-아미노부티르산 생성 능력이 뛰어나며, 발효유를 제조하는데 적합하다.

Claims

우유 응고력 및 GABA 생성 능력이 우수한 균주 락토바실러스 크리스파터스(Lactobacillus crispatus) RMK567(KCCM 10745P).
락토바실러스 크리스파터스 RMK567(KCCM 10745P) 균을 배양하여 배양물로부터 감마-아미노부티르산을 생산하는 방법.