KR100706134B1

KR100706134B1 - 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 유효성분으로포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물

Info

Publication number: KR100706134B1
Application number: KR1020050074232A
Authority: KR
Inventors: 고병섭; 박선민; 김호경; 이미영; 전원경; 천진미; 정필문
Original assignee: 한국 한의학 연구원
Priority date: 2005-08-12
Filing date: 2005-08-12
Publication date: 2007-04-12
Also published as: KR20070019344A

Abstract

본 발명은 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 녹나무 잎 추출물 및 그의 분획물은 전지방세포에서 지방세포로의 분화를 촉진시키고, 지방세포 내 중성지방의 축적을 증가시키며, 인슐린의 작용을 증진시켜 세포 내로의 포도당 섭취를 증가시키는 PPAR-γ 작용제와 같은 효과를 가지므로 당뇨병 예방 및 치료용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

녹나무, 당뇨

Description

녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물 { Composition containing Cinnamomum camphora PRESL leaves extract or fractions thereof for prevention and treatment of diabetes }

도 1은 본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물의 분획물 1 ~ 6이 지방세포 내 중성지방 축적에 미치는 영향을 나타낸 도이다.

도 2는 인슐린 농도에 따른 지방세포의 포도당 섭취를 나타낸 도이다.

도 3은 본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물의 분획물 1 ~ 6이 지방세포의 포도당 섭취에 미치는 영향을 나타낸 도이다.

도 4는 본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물의 분획물 1 ~ 6이 지방세포의 인슐린 분비에 미치는 영향을 나타낸 도이다.

도 5은 본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물의 분획물 1 ~ 6의 세포 독성을 나타낸 도이다.

본 발명은 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.

당뇨병(diabetes)은 전세계적으로 중요한 성인병 중의 하나로서, 최근 우리나라에서도 급속한 경제 성장과 더불어 당뇨병 유병율이 7 ~ 8％에 달하며, 60 ~ 70대의 경우 중요한 사망원인이 되고 있다. 예전에는 인간 수명이 길지 않아서 당뇨합병증으로 인한 고통을 당하기 전에 사망하였기 때문에 당뇨합병증에 대한 심각성이 적었다. 하지만 기술의 발달로 인간의 수명이 연장됨으로 인해 당뇨합병증이 심각하게 대두되고, 고혈당 상태가 지속되면 여러 가지 당뇨합병증을 유발한다. 당뇨합병증은 당뇨병에 의한 사망의 중요원인으로서, 당뇨병에 걸린 후 10 ~ 20년이 지나면 체내 여러 기관이 손상을 받아 당뇨성 망막병증(retinopathy), 당뇨성 백내장(cataract), 당뇨성 신증(nephropathy), 당뇨성 신경병증(Neuropathy) 등으로 나타난다. 특히, 만성 당뇨성 신증은 혈액 투석 치료 및 말기 신부전의 가장 중요한 원인이 되고 있으며, 당뇨성 백내장은 실명까지 초래하고 팔, 다리 등 사지절단을 해야하는 무서운 합병증이 나타나므로 그 예방 및 치료가 중요하다.

당뇨병은 인슐린이 분비가 되지 않거나 인슐린의 작용력이 감소하여 나타나는 것으로, 전자는 제 1형 당뇨병이고, 후자는 제 2형 당뇨병에 속한다. 제 2형 당뇨병은 인슐린이 분비되지만 인슐린 작용 조직에서 그 작용력이 낮아져 정상 혈당을 유지하지 못하므로, 혈당이 점점 높아지고 이에 대응하여 췌장의 베타세포에서 지속적으로 인슐린이 분비되어 고인슐린혈증을 동반한다[Kadowaki T, Hara K, Yamauchi T, Terauchi Y, Tobe K, Nagai R. 2003. Molecular mechanism of insulin resistance and obesity. Exp Biol Med ( Maywood ) 228: 1111-1117]. 그러나 우리나라의 제 2형 당뇨병은 인슐린 작용력이 낮은데, 인슐린 분비도 낮아서 서구에 비해 당뇨병 증세도 심하고 비만하지 않은 특징을 가지고 있다[Kim J, Choi S, Kong B, Oh Y, Shinn S. 2001. Insulin secretion and sensitivity during oral glucose tolerance test in Korean lean elderly women. J Korean Med Sci 16: 592-597]. 그러므로 우리나라의 제 2형 당뇨병을 치료함에 있어서, 인슐린 작용력을 향상시킴과 동시에 인슐린 분비능도 증가시키는 것이 중요한 것으로 알려져 있다.

최근에 제 2형 당뇨병의 새로운 치료제로 등장한 것이 인슐린 작용을 향상시킴으로 소량의 인슐린으로 혈당을 정상화할 수 있도록 도와주는 인슐린 민감성 물질들이다. 인슐린 민감성 물질은 제 2형 당뇨병의 근본적인 문제인 인슐린 저항성을 완화시켜 소량의 인슐린으로 혈당을 정상화시키고, 궁극적으로 혈당에 필요한 인슐린 양을 저하시켜 고인슐린혈증을 없애 줄 수 있는 것으로 알려지고 있다 [Ciaraldi TP, Kong AP, Chu NV, Kim DD, Baxi S, Loviscach M, Plodkowski R, Reitz R, Caulfield M, Mudaliar S, Henry RR. 2002. Regulation of glucose transport and insulin signaling by troglitazone or metformin in adipose tissue of type 2 diabetic subjects. Diabetes 51: 30-36]. 즉, 인슐린 민감성 물질은 당뇨병뿐 아니라 인슐린 저항성 증후군의 증세를 완화시킬 수 있을 것으로 사료된다. 결국 인슐린 저항성을 완화시킨다는 것은 인슐린이 인슐린 수용체와 결합한 후 세포 내에서 일어나는 신호전달 체계가 원활하게 일어날 수 있도록 도와주 어 세포에서 포도당의 이용을 향상시키는 것이다.

현재 제 2형 당뇨병 치료제를 살펴보면, 설포닐우레아(sulfonylurea) 계통의 약물이 있다. 인슐린 저항성이 제 2형 당뇨병의 발병에 중요한 요인이지만, 인슐린 저항성이 높아지더라도 인슐린 분비가 충분하면 당뇨병으로 진전되지는 않으므로, 과거에 가장 먼저 당뇨병 치료제로 사용되어 온 것이 인슐린 분비를 촉진시키는 약물들이었다. 가장 먼저 사용하기 시작한 것이 설포닐우레아 계통의 약물로, 이것은 췌장의 베타세포의 세포막에 존재하는 KATP(ATP-regulated potassium) 채널에 직접 작용하여 이 채널을 닫아 줌으로써, 세포막을 분극화(depolarization)시키고 Ca² ⁺을 세포 내로 유입시킴으로 인슐린의 분비를 촉진시키는 인슐린 분비 촉진제(insulin secretagogues)이다[Krentz AJ, Bailey CJ. 2005. Oral antidiabetic agents: current role in type 2 diabetes mellitus. Drugs 65: 385-411; Quesada I, Soria B. 2004. Intracellular location of KATP channels and sulphonylurea receptors in the pancreatic beta-cell: new targets for oral antidiabetic agents. Curr Med Chem . 11: 2707-2716]. 그러나, 이 약물의 큰 문제는 혈당 농도에 상관없이 KATP 채널을 닫아 줌으로써 혈당이 낮아도 인슐린의 분비시켜 저혈당을 유발시킬 수 있다.

최근에 개발된 포도당-자극 인슐린 분비 촉진제(glucose-stimulated insulin secretagogue)로는 글루카곤 유사 펩타이드-1 수용체 작용제(glucagon like peptide-1(GLP-1) receptor agonist)인 엑센딘-4(exendin-4)가 있는데, 이것은 직 접적으로 KATP 채널에 작용하지 않는다. 엑센딘-4는 세포막에 존재하는 GLP-1 수용체에 결합하여 세포 내의 cAMP 농도를 상승시키고, 이것은 단백질 키나제 A(protein kinase A; PKA)를 활성화시킨다. 활성된 PKA만으로는 세포 내로의 Ca² ⁺ 유입을 상승시키지 못하고, 혈당이 높아져 베타세포 내로 포도당이 흡수되어 해당작용(glycolysis)을 거쳐 ATP/ADP의 농도가 높아지면서 PKA가 활성화될 때, Ca² ⁺의 유입이 증가하여 인슐린 분비를 촉진시킨다[Drucker DJ. 2001. Development of glucagon-like peptide-1-based pharmaceuticals as therapeutic agents for the treatment of diabetes.Curr Pharm Res 7: 1399-1412]. 그러므로 엑센딘-4는 혈당이 정상일 때는 인슐린 분비를 촉진시키지 않고, 혈당이 상승될 때만 인슐린 분비를 촉진시키는 포도당-자극 인슐린 분비 촉진제로 작용한다.

또한, 탄수화물의 소화흡수를 방해하여 식후 혈당의 상승을 방지하는 아카보스(acarbose) 계통의 약물도 있다. 아카보스는 가역적으로 α-글루코아밀라제 활성을 억제시키는 약물로, 주로 소장 세포의 점막에 존재하는 말타제(maltase)의 활성을 억제시키는 것으로 알려져 있다[Carrascosa JM, Molero JC, Fermin Y, Martinez C, Andres A, Satrustegui, J. 2001. Effects of chronic treatment with acarbose on glucose and lipid metabolism in obese diabetic Wistar rats. Diabetes Obes Metab 3: 240-248]. 아카보스는 시험관 내 실험에서 α-글루코아밀라제와 말타제의 활성을 억제하는데, 생체 내에서는 말토즈(maltose) 분해를 억제시키는 효과는 약하고, 오히려 설탕의 분해를 강력하게 억제하는 것으로 알려져 있 다. 또한, 경구 내의 당 검사를 하기 전에 아카보스를 투여한 후, 30분 이내에 말토즈나 설탕을 경구 투여하여 혈당을 조사하였을 때에는 단기간의 효과는 거의 없었고, 장기간 아카보스를 공급한 후에 경구 내당 검사를 한 경우는 혈당을 약 40% 감소시키는 효과가 있었다고 보고하였다[Scheen AJ 1998. Clinical efficacy of acarbose in diabetes mellitus: a critical review of controlled trials. Diabetes Metab 24: 311-320].

그 외에, 인슐린 작용력을 증진시키는 피오글리타존(pioglitazone) 계통의 약물이 있으며, 간에서 당신생 합성을 감소시키는 메트포민(metformin) 계통의 물질이 있다.

또한, 국내를 비롯한 아시아에서는 민간요법으로 여러 가지 약초들을 당뇨병 및 여러 질병의 치료제로 사용하여 왔다. 크레니스키(Krenisky) 등은 페루 전통의약식물 Otholobium pubescens에서 바쿠치올(bakuchiol)을 분리하여 인슐린 민감성에 관여하고 있는 물질이라고 보고하였고[Krenisky JM, Luo J, Carney JR. 1999. Isolation and antihyperglycemic activity of bakuchiol from Otholobium pubsecens (Fabaceae), a peruvian medicinal plant used for the treatment of diabetes. Biol Pharm Bull 22: 1137-1140], Hong 등은 인삼, 천문동, 황금, 지골피, 황백 및 맥문동으로 구성된 혼합처방이 3T3-L1 지방세포에서 포도당 흡수를 증가시켰다고 보고하고 있다[Hong SJ, Fong JC. Hwang JH. 2000. Effect of crude drugs on glucose uptake in 3T3-L1 adipocyte. Gaxiong Yi Xue Ke Xue Za Zhi 16: 445-451]. 그러나 민간요법으로 사용되고 있는 많은 약초에 대해서도 아직까지 그 효과가 밝혀진 것은 많지 않고, 특히 어떤 기전으로 혈당을 낮추는지에 대한 연구는 거의 없다.

다양한 한약재들이 당뇨에 효과가 있는 것으로 알려져 있으며, 대표적인 것으로 후박(대한민국 공개특허 제 2003-0039241호), 인삼 잎(대한민국 공개특허 제 2005-0054905호), 황련(대한민국 공개특허 제 2004-0014556호)이 있다. 또한, 인슐린의 작용을 향상시키는 인슐린 민감성 효과, 인슐린처럼 작용하는 인슐린성 효과, 탄수화물의 소화 흡수를 방해하는 α-글루코아밀라제 억제 효과를 가지고 있는 한약재로는 율무, 상백피, 둥굴레 뿌리, 오미자(대한민국 공개특허 제 2004-0016145호), 목단피(대한민국 공개특허 제 2003-0100558호)의 분획물에는 인슐린 민감성 물질이 함유되어 있는 것을 이미 발견하였다. 특히, 둥굴레 뿌리 추출물은 90% 췌장을 제거한 백서에서 인슐린 민감성을 호전시킴으로 체내 포도당 이용을 증가시켜 혈당을 강하시키는 효과를 나타내었다[Choi SB, Park S. 2002. The effects of water extract of Polygonatum Odoratum (Mill) Druce on insulin resistance in 90% pancreatectomized rats. J Food Sci 67: 2375-2379]. 또한, 둥굴레 뿌리에 함유되어 있는 스테로이드성 글리코시드(steroidal glycosides)가 90% 췌장 제거 백서에서 인슐린 민감성 물질로 작용한다는 것을 확인하였다[Choi BS, Park S. 2002. A Steroidal Glycoside from Polygonatum odoratum (Mill.) Druce. Improves Insulin Resistance but does not Alter Insulin Secretion in 90% Pancreatectomized Rats. Biosci Biotech Biochem 66: 2036-2043].

한편, 당뇨 연구에 많이 사용되는 3T3-L1 지방전구세포는 생물학적 특성이 잘 밝혀져 있고, 인슐린과 같은 유도물질의 존재하에서는 지방세포로 분화되는 특성을 갖지고 있기 때문에, 분화를 촉진하는 물질인 인슐린과 유사한 물질(인슐린성 물질)의 존재 여부를 탐색하는 실험에 사용한다. 3T3-L1 지방전구세포는 인슐린, DEX(Dexamethasone)와 IBMX(1-methy-3-isobutylxanthine)로 조성된 분화유도 물질을 첨가하였을 때, 지방세포로 전환되는데, 이 기전은 아직 확실하게 알려지지는 않았다. 알려진 기전으로는 지방세포로의 분화는 지방 조직세포에 특징적으로 발현되는 유전자들의 조절부위에 작용하는 전사인자(transcription factor)들이 지방전구세포가 지방세포로 분화되는 과정에 발현되어 진행된다고 한다. 이 과정에 관여하는 전사인자는 PPAR-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ), C/EBP(CCAAT/enhancing binding protein), ADD1(adipocyte differentiation and determinator factor 1) 및 SREBP1c(sterol regulatory element binding protein 1c) 등이 있다. 분화유도 물질은 상기의 전사인자들의 발현을 촉진시킴으로 지방전구세포를 지방 세포로 전환시키는 것으로 알려졌다. 특히, PPAR-γ는 세포의 성장을 막고, 지방세포로 전환을 시작할 뿐 아니라 지방세포의 분화를 조절하는 데에도 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 또한, C/EBP는 지방 조직에서 많이 발현되고, PPAR-γ를 도와서 전지방세포를 지방세포로 전환시키는 데 중요한 역할을 하는 것으로 알려졌다. 그러므로, 3T3-L1 지방전구세포의 분화와 지방 축적을 증가시키면서 포도당 흡수를 증가시키는 물질은 PPAR-γ 작용제로 작용할 가능성이 높다고 판단된다.

이에, 본 발명자들은 인슐린의 작용을 증진시키는 인슐린 민감성 효과, 인슐린처럼 작용하는 인슐린성 효과, 탄수화물의 소화 흡수를 방해하는 α-글루코아밀라제 억제 효과를 나타내는 물질을 다양한 한약재 가운데 탐색하던 중, 녹나무 잎이 전지방세포에서 지방세포로의 분화를 촉진하고, 지방세포 내 중성지방의 축적을 증가시키며, 인슐린 작용을 증진시켜 세포의 포도당 섭취를 증가시켜 당뇨병의 예방 및 치료 효과가 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물을 제공하고자 한다.

또한, 본 발명은 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 지방세포로의 분화 및 지방세포 내 중성지방 축적 촉진제를 제공하고자 한다.

또한, 본 발명은 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 인슐린 작용 증진제를 제공하고자 한다.

본 발명은 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 지방세포로 의 분화 및 지방세포 내 중성지방 축적 촉진제를 제공한다.

또한, 본 발명은 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 인슐린 작용 증진제를 제공한다.

이하, 본 발명에 관하여 상세히 설명한다.

본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물 및 그의 분획물의 제조과정은 하기와 같다.

녹나무(Cinnamomum camphora PRESL)는 우리나라에서 천연기념물 제162호로 지정되었으며, 제주도 서귀포에서 자생한다. 녹나무는 녹나무과(Lauraceae)에 속한 식물로, 주로 가지를 말린 것을 장뇌라고 하며, 이를 약용으로 사용해 왔다. 장뇌에는 정유 성분인 캄포(camphor)가 주요성분이고, 이외에 시네올(cineol), α-피넨(α-pinene), 1-캄펜(l-camphene), δ-리모넨(δ-limonene), 사프롤(safrol), α-캄포렌(α-camphorene) 등이 함유되어 있다고 보고되고 있다. 아직까지 녹나무 잎의 혈당 강하 효과에 대한 연구는 거의 없지만, 제주도에서는 민간요법으로 녹나무 잎의 다린 물을 당뇨병 치료에 사용해 왔다.

우선, 녹나무 잎을 세척하여 이물질을 제거한 후, 그늘에서 건조하고 분쇄한다. 분쇄된 녹나무 잎에 적당한 양의 용매를 첨가하여 완전히 침지되도록 한다. 추출 용매로는 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합 용매로부터 선 택된 용매가 바람직하며, 더욱 바람직하게는 물이다. 상기 추출 용매의 양은 바람직하게 녹나무 잎 건중량의 5 ~ 20배이며, 바람직하게는 10배이다. 추출 방법은 실온에서 함침하거나, 가온할 수 있으며, 바람직하게는 열수 추출한다. 제조된 추출액은 여과, 농축 및/또는 동결건조 등의 과정을 거쳐 사용될 수 있다.

다음으로, 상기에서 얻은 녹나무 잎 수추출물을 크로마토그래피, 바람직하게는 앰버라이트 XAD-4 젤(amberlite XAD-4 gel)로 충진된 컬럼을 통과시켜 적당한 용매로 용출시켜 녹나무 잎 추출물의 분획물을 제조할 수 있다. 이때, 용출 용매로는 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합 용매로부터 선택된 용매가 바람직하며, 보다 바람직하게는 물 및 메탄올의 혼합용매이며, 가장 바람직하게는 물 및 메탄올이 100:0, 80:20, 60:40, 40:60, 20:80 또는 0:100으로 혼합된 혼합용매이다. 각각의 분획물들은 여과, 농축 및/또는 동결건조 등의 과정을 거쳐 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물 및 그의 분획물은 분화 유도 물질과 함께 처리되었을 때, 전지방세포에서 지방세포로의 분화를 촉진하며, 지방세포 내 중성지방의 축적을 촉진시킨다. 또한, 인슐린의 작용을 증진시켜 세포 내로의 포도당 섭취를 증가시킨다. 특히, 녹나무 잎 추출물의 분획물 5 ㎍/㎖의 농도와 인슐린 0.2 nM을 사용하였을 때, 메탄올이 40%, 60%로 혼합된 혼합용매로 용출한 분획물에서 인슐린의 작용을 증진시키는 효과가 탁월하게 나타나, 이 분획물에는 피오글리타존과 같은 PPAR-γ 작용제(agonist)로 작용하는 물질이 함유되어 있을 가능성이 높다.

따라서, 녹나무 잎 추출물 및 그의 분획물은 인슐린 작용을 증진시키는 인슐린 작용 증진제 역할을 하여 포도당 섭취를 증가시키므로 당뇨병 예방 및 치료용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 상기 녹나무 잎 추출물 및 그의 분획물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.

본 발명의 조성물은, 투여를 위해서 상기 기재한 유효성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 당분야의 적정한 방법으로 또는 Remington's Pharmaceutical Science(Mack Publishing Company, Easton PA, 18th, 1990)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.

본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 비경구 투여(예를 들어 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)하거나 경구 투여할 수 있으며, 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 일일 투여량은 본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물 및 그의 분획물을 동결건조하였을 때의 양으로 1 ~ 100 ㎎/㎏, 바람직하게는 10 ㎎/㎏로, 하루 1회 ~ 수회에 나누어 투여하는 것이 바람직하다.

본 발명의 조성물은 당뇨의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

본 발명의 조성물은 당뇨의 예방 및 치료를 목적으로 건강식품에 첨가될 수 있다. 본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물 및 그의 분획물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 녹나무 잎 추출물 및 그의 분획물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있음은 확실하다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크 제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01∼0.04 g, 바람직하게는 약 0.02∼0.03 g 이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01∼0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예 및 실험예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제 공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물 및 그의 분획물의 제조

1-1: 본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물의 제조

녹나무 잎 추출물을 제조하기 위하여, 제주도 한라수목원의 협조를 받아 직접 채취하고, 한국한의학연구원 표본실에 보관중인 녹나무 잎을 사용하였다.

건조된 녹나무 잎 1 ㎏을 분쇄하여 증류수 10 ℓ을 넣고, 100℃에서 2 시간 동안 열수추출을 2회 반복한 후, 거즈로 여과하였다. 여과액을 450 × g로 원심분리 (Megafuge 1.0R, USA)하여 상등액을 회수하고, 이를 회전진공 농축기 (Buchi R-114, USA)로 35℃에서 감압농축한 후, 동결건조 (Ilshin Freeze dryer, Korea)하여 분말 형태의 녹나무 잎 추출물을 제조하였다.

1-2: 본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물의 분획물의 제조

녹나무 잎 추출물의 분획물은 상기 실시예 1-1에서 제조한 녹나무 잎 추출물을 이용하여 제조하였다.

상기 녹나무 잎 추출물 1 g을 증류수 10 ㎖에 현탁시켜 현탁액으로 만든 후, 앰버라이트 XAD-4 젤(amberlite XAD-4 gel)을 충진한 유지컬럼 (직경 30 ㎜, 길이 300 ㎜)으로 정제하였다. 이때 용출액은 메탄올의 양을 증량시켜 극성을 변화시키면서 H₂O:메탄올이 100:0(분획물 1), 80:20(분획물 2), 60:40 (분획물 3), 40:60(분 획물 4), 20:80(분획물 5) 및 0:100(분획물 6)로 혼합된 용매로 나누어 분획하여 6개의 분획물을 얻었다. 각각의 분획물을 감압농축 및 동결건조하여 사용하였으며, 10% DMSO에 1 ㎎/㎖로 녹인 후에 초음파 분쇄기로 20초 동안 진탕하여 침전물이 없어지도록 모두 용해시켰다.

실험예 1: 본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물의 분획물이 지방세포 내 중성지방 축적에 미치는 영향 측정

상기 실시예에서 제조한 녹나무 잎 추출물의 분획물 1 ~ 6이 지방세포 내 중성지방 축적에 미치는 영향을 측정하기 위하여, 하기와 같은 실험을 실시하였다.

배양된 3T3-L1 세포(ACTT 미국세포주은행)를 혈구계산기(Haemacytometer)로 계수하여 5×10³ 세포/㎖로 24 웰 플레이트의 각 웰에 넣고, 인산 완충 용액(phosphate buffer saline; PBS)으로 세척한 후, 1% 우 태아 혈청 알부민(bovine serum albumin; BSA)을 함유하고 있는 고농도 포도당 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium) 배지에서 2일 동안 배양하였다. 배양한 후 새로운 DMEM 배지로 교환하였다. 3T3-L1 지방전구세포에 10 ㎍/㎖의 녹나무 잎 추출물의 분획물 및 분화유도물질인 0.25 μM의 덱사메타손(dexamethasone; DEX, Sigma-Aldrich, St. Louis, MI, USA), 0.5 mM의 1-메틸-3-이소부틸잔틴(1-methyl-3-isobutylxanthine; IBMX, Sigma-Aldrich, St. Louis, MI, USA), 10 ㎍/㎖의 인슐린(Sigma, St. Louis, MI, USA)을 함께 처리하여 4일 동안 분화시켰다. 이때 음성대조군으로 녹나무 잎 추출물의 분획물을 처리하지 않고 DMSO만을 처리한 군을 사용하였고, 양성대조군으로 녹나무 잎 추출물의 분획물 대신 20 μM의 피오글리타존(pioglitazone)을 처리한 군을 사용하였다. 4일 배양 후, 배지를 교환하고 분화유도물질 없이 DMSO, 피오글리타존 또는 녹나무 잎 추출물의 분획물을 처리하고 6일 동안 배양하였다. 6일째에 글리세롤(glycerol)이 포함되어 있지 않은 분해 완충 용액(lysis buffer)으로 세포를 용출시킨 후, 축적된 중성지방(triglyceride)의 함량을 트린더 키트(Trinder kit; 영동제약, 서울)로 측정하였다. 결과는 DMSO 만을 처리한 음성대조군의 중성지방 함량에 대한 녹나무 잎 추출물의 분획물을 처리한 실험군의 중성지방 함량을 백분율로 계산하여 비교하였다.

본 명세서 내 실험예 모든 결과는 3 ~ 4번 반복에 대한 평균과 표준편차로 계산하여 나타내었다. 각 실험예에서 녹나무 잎 추출물의 분획물들과 대조군과의 통계적 유의성은 스튜던트 T-테스트(student t-test)로 검증하였으며, 모든 통계 처리의 유의성 검증은 p<0.05로 정하였다.

결과는 도 1에 나타내었다.

도 1에 나타난 바와 같이, 녹나무 잎 추출물의 분획물 처리군 중, 40% 메탄올 분획물인 분획물 3이 양성대조군인 피오글리타존과 비슷하게 3T3-L1 지방전구세포 내 중성지방의 함량을 가장 많이 증가시켰으며, 음성대조군에 비해 3T3-L1 지방전구세포에서 지방세포로의 전환을 증가시켰다.

실험예 2: 본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물의 분획물이 지방세포 내로의 포도당 섭취에 미치는 영향 측정

2-1: 인슐린의 농도에 따른 지방세포 내로의 포도당 섭취

본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물의 분획물이 지방세포 내로의 포도당 섭취에 미치는 영향을 측정하기에 앞서, 인슐린 농도에 따른 지방세포 내로의 포도당 섭취를 하기와 같이 측정하였다.

계대 배양한 3T3-L1 지방전구세포를 75 ㎠ 플라스크에 완전히 채워질 때까지 배양하였다. 배양용기 바닥을 완전히 채운 지 2일 후에 실험예 1에서와 동일한 유도 분화 물질을 넣어 3일 동안 배양한 후, 2일에 한 번씩 고농도 포도당 DMEM 용액으로 새로 바꾸어 주어 지방세포로 완전히 전환되는 10 ~ 15일 경과 후에 포도당 섭취 실험을 하였다. 단, 인슐린의 농도를 0, 0.2, 0.6, 1, 5, 10 또는 15 nM로 처리하였다. 배양용기에 있는 지방세포의 수를 세어 24 웰 플레이트의 웰을 빈 공간없이 완전히 채울 수 있도록 분주하였다. 웰 플레이트에 옮긴 지방세포를 PBS로 세척하고, 500 ㎕의 1% BSA를 함유하고 있는 저농도 포도당 DMEM에서 12 시간 이상 배양하였다. 다음으로, HEPES 용액으로 37℃에서 30분 동안 배양하고, 1 μCi/㎖의 [¹⁴C]2-데옥시-글루코스와 1 mM 포도당을 첨가하고 22℃에서 30분 동안 배양한 후, ¹⁴C이 세포 내로 이동한 양을 통해 포도당의 세포내로의 섭취 정도를 측정하였다. 비특이적인 포도당 섭취를 배제하기 위해서, GLUT 4(glucose transporter 4)의 작용을 억제하는 cyto B와 함께 배양하였을 때의 포도당 이동량을 빼고 세포 내로 이동한 포도당의 양을 측정하였다. 세포는 10 mM 포도당이 함유한 PBS으로 세척하고 0.5 N NaOH로 세포를 분해하였다. 분해된 세포를 초산으로 중화시키고, 함유된 ¹⁴C의 함량을 베타 카운터(Tri-Carb 2100TR, Packard Bioscience, IL)로 측정하였다.

결과는 도 2에 나타내었다.

도 2에 나타난 바와 같이, 인슐린 농도 10 nM까지는 인슐린 농도가 증가함에 따라 포도당 섭취가 증가하였고, 10 nM보다 높은 인슐린 농도에서는 인슐린 농도에 따른 세포 내로의 포도당 섭취에 차이가 없었다. 즉, 10 nM 인슐린 농도가 인슐린 수용체를 통한 인슐린 작용을 나타내는 최대 농도로, 이 농도 이하에서는 인슐린 농도에 비례하여 인슐린 작용이 증가하지만, 그 이상 증가하지 않는다는 것을 알 수 있었다.

2-2: 본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물의 분획물이 지방세포 내로의 포도당 섭취에 미치는 영향

본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물의 분획물이 세포 내로의 포도당 섭취에 미치는 영향을 조사하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.

포도당 섭취는 상기 실험예 2-1의 실험 방법과 동일한 방법으로 측정하였으며, 단, 녹나무 잎 추출물의 분획물을 DMSO에 1 ㎎/㎖로 녹인 후, 이것을 PBS에 0.5와 5 ㎍/㎖로 희석, 처리하여 두 가지 농도에서 포도당 섭취를 측정하였다.

녹나무 잎 추출물의 각 분획물에 인슐린 민감성 성분가 함유되어 있는 지의 여부를 조사하기 위하여 3T3-L1 지방전구세포에 인슐린 0.2 nM과 함께 각 분획물 또는 20 μM 피오글리타존(양성대조군)을 넣고, 1시간 동안 배양한 후에 포도당 섭취 정도를 인슐린 10 nM에서의 결과와 비교하였다. 비교군으로 인슐린 1, 0.2 및 10 nM을 첨가한 군을 사용하였다. 모든 실험은 3회 반복하였고, 실험 결과는 인슐린과 녹나무 잎 추출물의 분획물을 모두 처리하지 않은 음성대조군의 값에 대한 비로 나타내었다. 분획물 내 물질이 인슐린의 작용에 관계없이 계면활성제(detergent)로 작용하여 세포막을 파괴시켜 포도당 섭취를 증가시키는 것을 배제하기 위해서, 인슐린을 0 ng/㎖로 처리한 군에서 포도당 섭취를 측정하였을 때의 기저(basal) 값보다 높게 측정된 경우는 포도당 섭취를 증가시킨다고 해도 인슐린 민감성 성분으로서의 작용이 없는 것으로 간주하였다.

결과는 도 3에 나타내었다.

도 3에 나타난 바와 같이, 녹나무 잎 추출물의 분획물을 0.5 ㎍/㎖ 농도로 처리하였을 때, 그 중 60% 메탄올 분획물에서인 분획물 4에서 포도당 섭취를 효과적으로 증가시켰다. 특히, 인슐린을 0.2 또는 10 nM로 녹나무 잎 추출물의 분획물과 함께 처리하였을 때는 40% 메탄올 분획물인 분획물 3 및 60% 메탄올 분획물인 분획물 4에서 포도당의 섭취를 효과적으로 증가시켰다. 또한, 분획물 3은 인슐린을 10 nM로 처리하였을 때만큼 포도당 흡수를 증가시켰으며, 인슐린 민감성 성분으로 판매되고 있는 20 μM 피오글리타존 만큼 인슐린-촉진에 의한 포도당 흡수 (insulin-stimulated insulin uptake)를 증가시켰다. 또한, 인슐린을 첨가하지 않고 분획물 만을 넣은 상태에서 포도당 섭취 정도를 측정하였을 때, 그 값이 기저값 과 유사하거나 오히려 낮아 분획물이 세포막을 투과적으로 만드는 계면활성제(detergent)로 작용하여 비특이적으로 포도당의 흡수를 증가시키는 것은 아니라는 것을 확인하였다.

따라서, 분획물 3 및 4에는 인슐린 작용을 증진시키는 인슐린 민감성 물질이함유되어 있음을 확인할 수 있었다.

실험예 3: 본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물의 분획물이 인슐린 분비능에 미치는 영향 측정

항당뇨 효과가 있는 인슐린 분비 촉진제는 혈당이 높았을 때만 인슐린 분비를 촉진하는 물질이어야 하므로, 본 발명에서는 저농도 포도당 배지와 고농도 포도당 배지에서 본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물의 분획물이 인슐린 분비를 촉진하는지 여부를 하기와 같이 살펴보았다.

실험에 사용한 세포는 베타세포주인 Min6 세포로 한국세포주은행에서 구입하였다. Min6 세포를 24 웰 플레이트에 분주한 후, 고농도 포도당 DMEM 배지에서 배양하여 배양용기의 약 70% 정도가 채워지면 저농도 포도당 DMEM 배지로 교환하여 16시간을 배양하였다. 이 웰들을 두 군으로 나누어, 반은 저농도 포도당 KRB(Krebs Ringer Bicarbonate) 배지로 교환하였고, 나머지 반은 고농도 포도당 KRB 배지로 교환하였다. KRB 배지는 115 mM NaCl, 4.7 mM KCl, 1.2 mM MgSO₄, 1.28 CaCl₂, 1.2 KH₂PO₄, 25 mM Hepes, 8.4% (w/v) NaHCO₃ (pH 7.4) 및 0.1% BSA을 배지에 첨가하여 제조하였다. 각 웰에 DMSO(음성대조군), 녹나무 잎 추출물의 분획물 또는 5 nM 엑센딘-4(양성대조군)을 처리한 후, 30분 동안 분비되는 인슐린의 양을 배지에 함유된 인슐린 농도로 측정하였다. 인슐린 농도는 방사선면역측정법(radioimmunoassay)으로 린코 인슐린 키트(Linco Research, St. Charles)를 사용하여 측정하였다.

결과는 도 4에 나타내었다.

도 4에 나타난 바와 같이, 녹나무 잎 추출물의 분획물은 저농도와 고농도 포도당 배지에서 모두 인슐린 분비량에 큰 영향을 미치지 않았다. 반면에 양성대조군으로 5 nM 엑센딘-4를 처리하였을 때, 저농도 포도당 배지에서는 인슐린 분비를 촉진하지 않았고, 고농도 포도당 배지에서는 인슐린 분비를 현저하게 증가시켜 엑센딘-4가 포도당 촉진 인슐린 분비(glucose-stimulated insulin secretion)를 향상시킨다는 것을 확인할 수 있었다.

실험예 4: 본 발명의 녹나무 잎 추출물의 분획물의 세포 독성 측정

본 발명의 녹나무 잎 추출물의 분획물이 독성을 나타내는지를 조사하기 위해서 하기와 같이 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 분석을 실시하였다.

녹나무 잎 추출물의 분획물을 1 ㎍/㎖ ~ 1 ㎎/㎖의 농도로 처리하여 96-웰 플레이트에 키운 3T3-L1 세포(1×10⁶세포/㎖)를 FBS가 포함되지 않은 DMEM 배지로 2 번 세척한 다음, FBS가 포함되지 않은 DMEM 배지에 2% MTT 용액(Roche Molecular system, Alameda, CA U.S.A.)을 부가하였다. 이를 37 ℃에서 2 ~ 24 시간 배양한 후, 492 ~ 690 nm 파장에서 흡광도를 측정함으로써 세포 생존률을 측정하였다.

결과는 도 5에 나타내었다.

도 5에 나타난 바와 같이, 최고 농도인 1 ㎎/㎖로 녹나무 잎 추출물의 분획물들을 처리하였을 때, 대조군인 분획물을 처리하지 않고 DMSO 만을 처리한 군에 비해 세포 생존율이 거의 감소하지 않음을 확인하였다. 따라서, 본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물의 분획물은 세포 독성이 없음을 알 수 있었다.

제제예 1 : 약학적 제제의 제조

1-1. 산제의 제조

본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물 2g

유당 1g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

1-2. 정제의 제조

본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물 100㎎

옥수수전분 100㎎

유 당 100㎎

스테아린산 마그네슘 2㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

1-3. 캡슐제의 제조

본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물 100㎎

옥수수전분 100㎎

유 당 100㎎

스테아린산 마그네슘 2㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

제제예 2 : 식품의 제조

본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.

2-1. 밀가루 식품의 제조

본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물 0.5 ~ 5.0 중량%를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.

2-2. 유제품(dairy products)의 제조

본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물 5 ~ 10 중량%를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

2-3. 선식의 제조

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다.

검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.

본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.

상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.

곡물류(현미 30중량%, 율무 15중량%, 보리 20중량%),

종실류(들깨 7중량%, 검정콩 8중량%, 검정깨 7중량%),

본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물의 건조분말(3 중량%),

영지(0.5중량%),

지황(0.5중량%)

제제예 3 : 음료의 제조

3-1. 탄산음료의 제조

설탕 5~10%, 구연산 0.05~0.3%, 카라멜 0.005~0.02%, 비타민 C 0.1~1%의 첨가물을 혼합하고, 여기에 79~94%의 정제수를 섞어서 시럽을 만들고, 상기 시럽을 85~98℃에서 20~180초간 살균하여 냉각수와 1:4의 비율로 혼합한 다음 탄산가스를 0.5~0.82%를 주입하여 본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 탄산음료를 제조하였다.

3-2. 건강음료의 제조

액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 건강음료를 제조하였다.

3-3. 야채쥬스의 제조

본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물 5g을 토마토 또는 당근 쥬스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 야채쥬스를 제조하였다.

3-4. 과일쥬스의 제조

본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물 또는 그의 분획물 1g을 사과 또는 포도 쥬스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 과일쥬스를 제조하였다.

본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물 및 그의 분획물은 3T3-L1 지방전구세포에 분화 유도물질과 함께 처리하였을 때, 지방세포로의 분화를 촉진시키고, 지방세포 내 중성지방의 축적을 증가시키며, 인슐린의 작용을 증진시켜 세포 내로의 포도당 섭취를 증가시킨다. 특히, 녹나무 잎 추출물을 메탄올이 40%, 60%로 혼합된 혼합용매로 용출한 분획물에서 인슐린의 작용을 증진시키는 효과가 탁월하게 나타나, 이 분획물에는 피오글리타존과 같은 PPAR-γ 작용제(agonist)로 작용하는 물질이 함유되어 있을 가능성이 높으며, 세포 독성을 나타내지 않는다. 따라서, 본 발명에 따른 녹나무 잎 추출물 및 그의 분획물은 당뇨병 예방 및 치료용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Claims

녹나무 잎 추출물을 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 녹나무 잎 추출물은 녹나무 잎 추출물을 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매로 추출된 것임을 특징으로 하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물.
녹나무 잎 추출물을 크로마토그래피용 컬럼에 충진시킨 다음, 물:메탄올이 60:40 내지 40:60으로 혼합된 물 및 메탄올의 혼합용매로 용출시킨 부분 정제 유효 분획물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물.
삭제
제 3항에 있어서, 상기 혼합용매는 물:메탄올이 60 : 40으로 혼합된 것임을 특징으로 하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물.
제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 녹나무 잎 추출물은 지방전구세포의 지방세포로의 분화 및 지방세포 내 중성지방 축적을 촉진시키는 것을 특징으로 하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물.
제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 녹나무 잎 추출물은 인슐린 작용을 증진시켜 포도당의 세포내 섭취를 증가시키는 것을 특징으로 하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물.
녹나무 잎 추출물 또는 상기 녹나무 잎 추출물을 크로마토그래피용 컬럼에 충진시킨 다음, 물:메탄올이 60:40 내지 40:60으로 혼합된 물 및 메탄올의 혼합용매로 용출시킨 분획물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함하는 당뇨병 예방 및 개선용 건강기능식품.
제 8항에 있어서, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료 형태인 건강기능식품.