KR100696705B1 - 폐암 진단용 단백질 마커 퍼옥시레독신-ｉ 및 이를 이용한진단키트 - Google Patents

폐암 진단용 단백질 마커 퍼옥시레독신-ｉ 및 이를 이용한진단키트 Download PDF

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Abstract

혈액을 이용하여 간편하게 폐암을 진단할 수 있는 단백질 마커 및 이의 항체를 포함하는 폐암 진단키트가 제시되어 있다. 본 발명의 폐암 진단용 마커 퍼옥시레독신-I 및 이의 항체를 포함하는 진단키트는 진단기술에 있어서의 낮은 감도로 인해 발생되는 폐암의 조기 진단의 어려움을 극복하는데 유용하게 사용될 수 있다.
폐암, 진단용 마커, 퍼옥시레독신-I

Description

폐암 진단용 단백질 마커 퍼옥시레독신-Ｉ 및 이를 이용한 진단키트 {Peroxiredoxin-I as a biomarker and diagnosis kit for lung cancer using the same}
도 1은 정상 50인의 혈청을 전기영동하고 퍼옥시레독신-I에 대한 항체로 면역블로팅(immunoblotting)을 수행하여 얻어진 결과 중 20인에 대한 결과를 대표적으로 나타낸 사진이고,
도 2는 57인의 폐암 환자 혈청을 전기영동한 후 퍼옥시레독신-I에 대한 항체로 면역블로팅을 수행하여 얻어진 결과 중 20인에 대한 결과를 대표적으로 나타낸 사진이다.
본 발명은 폐암을 진단할 수 있는 단백질 마커 퍼옥시레독신-I 및 이의 항체를 포함하는 진단키트에 관한 것이다.
폐암은 흡연인구의 증가와 대기 오염 등의 원인으로 우리나라에서도 급속히 증가하고 있는 종양으로 그 발생 빈도는 남자에서 위암 다음으로 2위, 여자에서 자궁암, 위암, 폐암, 대장암 다음으로 5위를 차지하고 있고 사망률은 남녀 모두 암 사망율 1위를 차지하고 있다 (서재환 et al., 통계청 (2005)).
이러한 폐암의 발생 빈도 및 폐암으로 인한 사망률의 증가는 현재의 흡연 실태로 보아 앞으로도 상당 기간 지속될 것으로 예상된다. 폐암은 암세포의 성장으로 인한 주변 조직 침범 또는 기도폐쇄, 림프절 전이 등의 증상을 초래하는 것이 보통이지만, 환자의 10-15% 정도는 아무런 증상 없이 정기 검진에서 진단된다. 또한, 대부분의 폐암이 진단 당시에 이미 제 III (3) 병기 이상으로 진행된 상태로 진단되므로 완치가 어려운 경우들이 대부분이라는 문제가 있다. 따라서 폐암을 조기에 진단하여 폐암으로 인한 사망률을 줄이는 것이 시급한 문제이다 (Wulfkuhle et al., Nat. Rev. Cancer 3, 267-275. (2003)).
폐암을 진단하기 위해서 여러 가지 방법이 복합적으로 사용되고 있는데, 현재까지는 종양의 크기, 림프절 전이 유무 등을 조사하거나, 폐 종양 조직 또는 림프절 등을 생검하여 면역조직화학방법으로 분석하거나 흉부 X-ray 촬영, 흉부 전산화 단층 촬영, 기관지 내시경을 이용하여 진단하고 있다 (Manser et al., Curr. Opin. Pulm. Med. 10, 266-271. (2004)).
그러나, 흉부전산화 단층 촬영의 경우 폐암의 크기가 약 0.1 cm 이상 되어야 측정가능한데, 이 시기는 이미 암이 다른 조직으로 전이되었을 가능성이 높다는 문제가 있고, 기관지 내시경을 이용한 방법은 내시경이 기관지로 삽입되어 폐 내부를 직접 관찰할 수 있으나 폐 말단에 있는 종양을 관찰하기 어렵다는 공간적 한계의 문제를 가지고 있다.
이러한 기존 진단방법의 단점을 보완하기 위한 방법으로 환자의 혈액에서 CBC (Complete blood count), 혈청 전해질 (칼슘 포함), 염기성 탈인산화효소 (Alkaline phosphatase), 알부민 (Albumin), AST (Aspartate aminotransferase), ALT (Alanine transaminase), 총 빌리루빈 (Total bilirubin) 또는 크레아티닌 (Creatinine)의 농도를 측정하여 폐암을 진단하려는 시도가 있었다 (Fishman et al., Cancer Res. 28,150-154 (1968), Nagamine et al., Clin. Chem. 29, 379-381 (1983), Muggia et al., 1, 217-228. (1974)).
그러나, 이러한 종양 표지자 (Marker)들의 진단적 또는 예후 인자로서의 가치가 연구되어 왔지만 아직까지 제한적으로 사용되고 있을 뿐으로 공식적으로 권장되고 있는 폐암 표지자는 없는 실정이다.
본 발명자들은 폐암 환자에서 얻어진 생물학적 검체 시료 내에서 특이하게 변화하는 단백질을 발굴하였고, 폐암 특이적인 단백질을 이용하여 폐암을 조기 진단하는 방법을 연구하여 왔다. 그 결과, 퍼옥시레독신-I 단백질이 폐암 조직에서 과발현될 뿐만 아니라 조직 밖으로 분비되어 환자의 혈청 속에도 존재한다는 사실을 알아내었고 이의 항체를 이용한 면역화학법으로 폐암을 간편하게 진단할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
따라서 본 발명의 목적은 혈액 내 존재하는 퍼옥시레독신-I을 이용하여 간편하게 폐암을 진단할 수 있는 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여,
본 발명의 일 측면은 폐암 진단용 퍼옥시레독신-I 단백질 마커를 제시할 수 있다.
또한, 본 발명의 다른 측면은 퍼옥시레독신-I 단백질 마커의 항체를 포함하는 폐암 진단키트를 제시할 수 있다.
아울러, 본 발명의 또 다른 측면은 검체에서 퍼옥시레독신-I 단백질 마커를 검출하는 방법을 제시할 수 있다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명의 일 측면에 의하면, 폐암 진단용 퍼옥시레독신-I 단백질 마커를 제시할 수 있다.
활성 산소는 정상적인 대사과정뿐만 아니라 약, 독 및 방사선 조사 등의 다양한 자극에 의해 생성되어 여러 생명 기본 물질에 손상을 주게 된다. 대부분의 진핵 세포에는 싸이오레독신 (Thioredoxin)을 전자공여체로 이용하여 과산화수소를 환원시키는 항산화 단백질이 있는데, 이를 퍼옥시레독신 (Peroxiredoxin, Prx)이라 한다 (Jacobson FS et al., J Biol chem. 264(3), (1989)).
퍼옥시레독신-I (Prx-I)은 자연적 킬러 강화 인자 (Natural killer enhancing factor)로 알려져 있어서, 세포성 면역능을 증가시키며 세포 내에서 활성산소나 염증 반응에 의해 발생하는 스트레스로부터 세포를 방어하는 항산화 기능을 가지는 것으로 알려져 있다.
Prx-I 유전자에 대한 염기서열 및 아미노산 서열 정보는 사람, 생쥐, 소, 돼지, 잉어, 무지개 송어 등에서 보고된 바 있다. 사람의 퍼옥시레독신 아미노산 서열은 서열번호 1에 나타나 있으며, 유전자 서열은 서열번호 3에 나타나 있다.
본 발명자들은 퍼옥시레독신-I 단백질이 폐암 조직에서 재현성 있게 과발현되어 있음을 확인하였다. 그러나, 조직에서 과발현되어 있는 단백질은 생검 (Biopsy)을 통해서만 진단이 가능한 어려움이 있으나 혈액 등의 체액에서 질환 마커의 검출이 가능하다면 매우 유용하게 활용될 수 있다.
본 발명자들은 폐암 조직에서 과발현된 퍼옥시레독신-I이 폐암 환자의 혈액 내에 존재할 가능성을 검증하기 위해 폐암 환자 및 정상인의 혈청 단백질을 SDS-PAGE 방법으로 질량에 따라 분리하였다. 분리된 혈청 단백질들을 니트로셀룰로즈 막에 전이 (Transfer) 시킨 후 제작된 퍼옥시레독신-I 항체와 결합시킨 결과 상기 단백질이 폐암환자의 혈액에서 존재하고 있음을 확인하였다.
본 발명의 퍼옥시레독신-I 단백질은 폐암의 발병 및 진행과 직접적으로 연관된다고 알려져 있지 않았기 때문에, 지금까지 폐암의 진단 마커로 이용되지 않은 실정이었다.
본 발명에서는 상기 퍼옥시레독신-I 단백질이 폐암 환자의 혈액에서 다량으로 발현됨을 확인하였고, 이에 대한 항체를 제조하여 정상인과 폐암 환자의 혈액 시료를 대상으로 면역화학법을 수행한 결과, 유의한 결과를 얻어 상기 퍼옥시레독신- I 단백질을 폐암의 진단 마커로 사용할 수 있음을 확인하였다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 피검자의 혈액 시료를 채취하고, 피검자의 혈액 시료에 함유된 상기 폐암 진단 마커 단백질을 검출함으로써, 폐암의 발병 여부를 확인할 수 있다.
즉, 퍼옥시레독신-I에 대한 항체를 이용하여 실제 폐암 환자 및 정상인의 혈액 시료를 분석한 결과, 전체 53명의 환자 중 18명 (33.9%)이 양성 반응을 보였다. 선암의 경우 28명 중 10명 (35.7%), 편평상피암의 경우는 25명 중 8명 (32%)이 양성 반응을 나타내었다. 정상인의 경우는 50 명 중 1명 (2%) 만이 양성 반응을 보였으므로, 본 발명의 퍼옥시레독신-I 마커 단백질 및 상기 단백질의 항체를 이용한 폐암의 발병 확인방법은 환자의 혈액을 이용하는 새로운 면역학적 진단도구로서 민감도가 우수하여, 폐암의 조기 진단에 기여할 수 있음을 확인하였다.
또한, 본 발명의 다른 측면에 의하면, 퍼옥시레독신-I 마커 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 폐암 진단키트를 제시할 수 있다.
퍼옥시레독신-I 마커 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 제조하기 위해서는 퍼옥시레독신-I 의 입수가 선행되어야 하며, 이는 서열번호 1의 아미노산 서열을 이용하여 합성하거나 유전자 재조합을 이용하여 미생물에서 생산하거나 혈액으 로부터 분리하여 준비할 수 있다.
상기 퍼옥시레독신-I 마커 단백질에 특이적으로 결합하는 항체는 폴리클로날 항체일 수도 있으나, 항원과 보다 특이적으로 결합할 수 있는 모노클로날 항체일 수도 있다. 폴리클로날 항체는 당업자에 알려진 종래 방법에 따라 면역원인 퍼옥시레독신-I 마커 단백질 또는 그 단편을 외부 숙주에 주사함으로써 제조될 수 있다. 외부 숙주는 마우스, 래트, 양, 토끼와 같은 포유동물을 포함한다. 면역원 (Antigen)은 근육 내, 복강 내 또는 피하 주사 방법으로 주사되며, 일반적으로 항원성을 증가시키기 위한 보조제 (Adjuvant)와 함께 투여되고 외부 숙주로부터 정기적으로 혈청을 채취하여 향상된 역가 및 항원에 대한 특이성을 보이는 혈청을 수거하거나 이로부터 항체를 분리 정제하여 제조된다.
모노클로날 항체는 당업자에 알려진 융합에 의한 불멸화된 세포주 생성기술 (Koeher and Milstein, Nature, 256:495 (1975))에 의하여 제조될 수 있다. 그 제조방법을 간단히 설명하면 다음과 같다. 먼저 순수한 단백질을 약 20 ㎍을 얻어서 쥐에 면역화를 시키거나 펩타이드를 합성하여 소혈청 알부민과 결합시켜 쥐에 면역화 시킨다. 그 후 쥐에서 분리된 항원-생산 B 임파구를 인간 또는 마우스의 골수종세포와 융합하여 불멸화된 하이브리도마를 생성한다. 이어, ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay)로 하이브리도마 세포의 모노클노날 항체의 생성여부를 알아보고 양성 클론을 택하여 배양한 후 항체를 분리 정제하거나 쥐의 복강에 주입한 후 복수를 채취한다.
본 발명의 진단키트는 퍼옥시레독신-I 단백질에 특이적인 항체; 기질과의 반 응에 의해서 발색하는 표지체가 접합된 2차 항체 접합체 (Conjugate); 상기 표지체와 발색 반응할 발색 기질 용액; 세척액; 및 효소반응 정지용액을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 진단키트는 퍼옥시레독신-I표준 항원을 포함하는 양성 대조군과 상기 항원이 주입되지 않은 동물의 항혈청을 포함하는 음성 대조군을 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 진단키트는 항원-항체 결합반응을 통하여 항체 단백질에 대한 항원을 정량분석 또는 정성분석함으로써 폐암을 진단할 수 있으며, 상기 항원-항체 결합반응은 통상의 ELISA, RIA (Radioimmnoassay), 샌드위치 측정법 (Sandwich assay), 폴리아크릴아미드 겔 상의 웨스턴 블롯, 면역 블롯 분석 또는 면역조직화학염색 방법 (Immnohistochemical staining)으로 측정할 수 있다. 예를 들어, 검체 및 대조군을 표면에 코팅시킨 96 웰 마이크로타이터 플레이트 등을 이용하여 재조합 모노클로날 항체 단백질과 반응하는 ELISA를 수행하도록 상기 진단키트를 제공할 수 있다.
항원-항체 결합 반응을 위한 고정체로는 니트로셀룰로오즈 막, PVDF 막, 폴리비닐 (Polyvinyl) 수지 또는 폴리스티렌 (Polystyrene) 수지로 합성된 웰 플레이트 (Well plate) 및 유리로 된 슬라이드 글래스 등이 사용될 수 있다.
2차 항체의 표지체는 발색반응을 하는 통상의 발색제가 바람직하며, HRP (Horseradish peroxidase), 염기성 탈인산화효소 (Alkaline phosphatase), 콜로이드 골드 (Coloid gold), FITC (Poly L-lysine-fluorescein isothiocyanate), RITC (Rhodamine-B-isothiocyanate) 등의 형광물질 (Fluorescein) 및 색소 (Dye) 등의 표지체가 사용될 수 있다.
발색을 유도하는 기질은 발색반응을 하는 표지체에 따라 사용하는 것이 바람직하며, TMB (3,3',5,5'-tetramethyl bezidine), ABTS [2,2'-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)], OPD (o-phenylenediamine) 등을 사용할 수 있다. 이 때, 발색제 기질은 완충용액 (0.1 M NaAc, pH 5.5)에 용해된 상태로 제공되는 것이 더욱 바람직하다. TMB와 같은 발색기질은 2차 항체 접합체의 표지체로 사용된 HRP에 의해 분해되어 발색 침적체를 생성하고 그 발색 침적체의 침적 정도를 육안으로 확인함으로써 퍼옥시레독신-I 단백질 항원의 존재 유무를 검출한다.
세척액은 인산염 완충용액, NaCl 및 트윈 20을 포함하는 것이 바람직하며, 0.02 M 인산염 완충용액, 0.13 M NaCl, 및 0.05% 트윈 20 (Tween 20)으로 구성된 완충용액 (PBST)이 더욱 바람직하다. 세척액은 항원-항체 결합반응 후 항원-항체 결합체에 2차 항체를 반응시킨 다음 적당량을 고정체에 첨가하여 3 내지 6회 세척한다. 반응 정지용액은 황산용액(H2SO4)이 바람직하게 사용될 수 있다.
아울러, 본 발명의 또 다른 측면은 검체에서 퍼옥시레독신-I 단백질 마커를 검출하는 방법을 제시할 수 있다. 상기 검출방법은 혈액 내 단백질을 고정화 시키거나 전기영동 (SDS-PAGE)으로 분리시킨 후 니트로셀룰로즈 막으로 전이시키고 퍼옥시레독신-I 항체와 접촉시켜 항원항체 반응을 통해 퍼옥시레독신-I 단백질의 존 재를 간접적으로 확인하는 것을 포함한다. 상기 항원항체 반응으로서 효소면역측정법 (ELISA), 면역침강법, 형광면역법, 효소기질발색법, 항원항체응집법 등을 들 수 있다. 검체로서는 혈청, 혈장 또는 혈액을 사용할 수 있고, 혈청이 가장 바람직하다.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 검출방법은,
1) 검체 및 대조군의 단백질을 고정체에 코팅시키는 단계;
2) 단계 1)의 고정체에 퍼옥시레독신-I 특이적인 항체를 넣어 반응시키는 단계;
3) 단계 2)의 반응을 통해 생성된 항원항체 반응물을 2차 항체 접합체 (conjugate) 및 발색기질 용액을 이용하여 검출하는 단계; 및
4) 검체와 대조군에 대한 검출 결과를 비교하는 단계를 포함할 수 있다.
상기 검출방법을 구체적으로 설명하면, 검체로부터 혈청 단백질을 분자량에 따라 분리한다. 퍼옥시레독신-I은 분자량 22 kDa이므로 12% 폴리아크릴아마이드 젤을 이용하여 전기영동을 수행하고 분획화된 단백질들을 고정시킬 수 있는 고정체인 니트로셀룰로즈 막으로 전이 (transfer)시킨다. 이어, 고정된 단백질 항원에 퍼옥시레독신-I 특이적인 항체를 가하여 항원항체 반응을 수행한다. 검체에 퍼옥시레독신-I 단백질이 존재한다면 상기 단백질이 고정된 막에 퍼옥시레독신-I 항체가 가해졌을 때 항원항체 결합 반응이 일어나게 된다. 퍼옥시레독신-I과 항체의 결합 정도를 측정하기 위해서, 퍼옥시레독신-I 항체와 친화성을 가지고 있는 이차항체, anti-human IgG-HRP과 결합시키는 단계를 거치는데, 이차항체에 접합된 HRP (Horse radish peroxidase)가 기질인 ECL (Enhanced chemiluminescence)과 반응하여 발색반응을 일으키는지의 여부와 그 정도를 대조군과 비교함으로써 퍼옥시레독신-I 단백질 마커의 존재 여부를 검출하게 된다.
한편, 퍼옥시레독신-I 특이적인 항체를 생물학적 마이크로칩 (Biological microchip) 상에 고정시킨 후 대상자로부터 분리된 검체 시료와 반응시켜 상기 항체 단백질에 대한 항원을 검출할 수 있는 생물학적 마이크로칩 (Biological microchip) 및 자동화된 미세배열 시스템 (Microarray system)을 이용하면, 대량으로 시료를 분석할 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
실시예1: 폐암조직으로부터 퍼옥시레독신-I의 동정
본 발명자들은 폐암 환자의 조직 내에 존재할 것으로 예측되는 단백질 마커를 찾아내기 위하여, 폐암 환자 및 정상인의 조직 단백질을 아이소일렉트릭포커싱 (Isoelectricfocusing, IEF)과 SDS 전기영동방법으로 등전점과 질량에 따라 분리하였다. 분리된 단백질을 쿠마쉬 R-250 (Coomassie R-250)으로 중복 염색한 다음, 이들을 컴퓨터 프로그램으로 비교, 분석하고 정상인의 조직과 비교하여 폐암 환자 의 조직에서 다량 발현된 단백질을 선별하였다. 이들을 동정하기 위하여 선별된 단백질을 트립신으로 처리하여 다수의 펩타이드 절편으로 분리한 다음, 각 절편의 질량을 측정하고, 컴퓨터 분석프로그램을 사용하여 데이터베이스를 검색한 결과, 상기 선별된 단백질은 등전점 8.3, 분자량 22 kDa을 가지는 퍼옥시레독신-I으로 밝혀졌다.
실시예2: 퍼옥시레독신-I 항원 및 항체의 제조
퍼옥시레독신-I 항체를 제조하기 위하여 서열번호 1의 첫번째 아미노산인 메치오닌 뒤에 여섯 개의 히스티딘과 21개의 아미노산이 첨가된 서열번호 2의 아미노산 서열을 가지는 재조합 퍼옥시레독신 H6-Prx-I 을 박테리아에서 생산하여 항원으로 사용하였다. 이를 위하여 사람의 폐에서 얻어진 cDNA library (Clontech사)를 주형(template)으로, BamHI 제한효소 부위를 갖는 서열번호 4 및 HindIII제한효소 부위를 갖는 서열번호 5의 프라이머 쌍을 이용하여 퍼옥시레독신-I 유전자를 PCR로 증폭한 후 BamHI 및 HindIII로 절단된 pET28a 벡터 (Novagen 사)에 직접 클로닝하여 재조합 퍼옥시레독신-I 발현벡터 pET/H6-Prx-I을 제조하였다.
상기 발현벡터를 대장균 BL21에 도입하고, 형질전환체를 선별한 후 30㎍/㎖의 가나마이신과 1 mM의 IPTG 을 포함하는 LB 배지로 37 ℃ 에서 4시간 동안 진탕 배양하였다. 배양된 균체를 5,000 x g에서 원심분리하여 상등액만 회수하고 초음파파쇄법으로 세포를 파쇄하였다. 본 발명에서 사용한 발현벡터 pET28a는 히스티 딘이 태깅되어 있으므로 재조합 퍼옥시레독신-I 단백질은 Ni-NTA 친화성 크로마토그래피로 분리 정제하였다. 정제 과정을 거친 단백질을 ㈜ 랩프런티어 (LabFrontier)에 의뢰하여 토끼에서 폴리클로날 항체를 제작하였다.
실시예3: 면역블로팅을 이용한 혈액 내 퍼옥시레독신-I의 검출
폐암 환자 53인 (선암 (Adenocarcinoma) 28인, 편평상피암 (Squamous cell carcinoma) 25인) 및 정상 50인의 혈액으로부터 혈청을 각각 10 μl씩 취하고 1% SDS가 포함된 완충용액에 섞은 후 12% SDS 폴리아크릴아마이드 젤을 이용하여 전기영동을 수행하였다. 분리된 혈청 단백질을 50 mM 트리스 (Tris-HCl), 130 mM 글리신 (Glycine), 0.05% SDS, 12.5% 메탄올 (Methanol)이 포함된 용액 내에서 니트로셀룰로즈 막으로 전이 (transfer) 시키고 전이된 막을 5% 탈지분유가 함유된 TBST (Tris Buffered Saline Tween 20)에서 2시간 동안 반응시켰다.
이어, 상기 실시예 2에서 제작된 항 퍼옥시레독신-I 항체 (1:2000)와 2시간 동안 반응시키고 TBST로 3번 세척한 후 토끼의 면역글로불린과 결합하는 토끼 IgG-HRP (1:5000)과 반응시켰다. 그 뒤, 상기 니트로셀룰로즈 막을 ECL (Enhanced chemiluminescence)과 반응시켜 X-ray 필름에 감광시켰다 (도 1).
그 결과, 표 1에 나타난 바와 같이, 폐암 환자의 경우 전체 53명의 환자 중 18명 (33.9%)이 양성 반응을 보였는데 선암의 경우 28명 중 10명 (35.7%)이, 편평상피암의 경우 25명 중 8명 (32%)이 양성 반응을 보였다. 정상인의 경우는 50명 중 1명만이 양성 반응을 보였다. 상기 결과로부터 혈액 내에 퍼옥시레독신-I이 검 출되는 경우는 폐암 환자로 추정할 수 있으므로 본 발명의 방법은 폐암의 조기 진단에 기여할 수 있다.
시료수 양성
비소세포폐암 53 18 (33.9%)
선암 28 10 (35.7%)
편평상피암 25 8 (32.0%)
정상 50 1 (0.0%)
상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 폐암 진단용 마커 단백질 및 이의 항체를 이용한 폐암 진단키트는 비교적 채취가 용이한 혈액을 검체로 하므로 기존의 폐암 진단방법이 가지는 문제를 해소할 수 있을 뿐만 아니라 진단의 민감도가 높아 폐암을 조기에 진단할 수 있다.
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  8. 검체 혈액으로부터 항원항체 반응을 이용하여 폐암진단용 퍼옥시레독신-I 단백질 마커를 검출하는 방법.
  9. 제8항에 있어서, 상기 항원항체 반응이 면역블롯법, 효소면역법, 면역침강법, 형광면역법, 효소기질발색법, 항원항체 응집법으로 이루어진 군 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 제8항에 있어서, 상기 혈액은 혈청 또는 혈장인 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 1) 검체 혈액 및 대조군의 단백질을 고정체에 코팅시키는 단계;
    2) 단계 1)의 고정체에 퍼옥시레독신-I 특이적인 항체를 넣어 반응시키는 단계;
    3) 단계 2)의 반응을 통해 생성된 항원항체 반응물을 2차 항체 접합체 (Conjugate) 및 발색기질 용액을 이용하여 검출하는 단계; 및
    4) 검체 혈액과 대조군에 대한 검출 결과를 비교하는 단계를 포함하는, 검체 혈액으로부터 폐암진단용 퍼옥시레독신-I 단백질 마커를 검출하는 방법.
  12. 제11항에 있어서, 상기 고정체가 니트로셀룰로오즈 막, PVDF 막, 폴리비닐 (Polyvinyl) 또는 폴리스티렌 (Polystyrene) 수지로 합성된 웰 플레이트 및 유리로 된 슬라이드 글래스로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
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