KR100660818B1 - 활성부위 루프 영역에 추가적 아미노산 잔기를 가지는서브그룹 i-s1과 i-s2의 서브틸라제 효소 - Google Patents
활성부위 루프 영역에 추가적 아미노산 잔기를 가지는서브그룹 i-s1과 i-s2의 서브틸라제 효소 Download PDFInfo
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Abstract
Description
유럽 | 세제 95 | 미국 | |
세제 투여량 | 4g/l | 3g/l | 1g/l |
세척온도 | 30℃ | 15℃ | 25℃ |
세척시간 | 30분 | 15분 | 10분 |
물의 경도 | 18°dH (Ca2+/Mg2+ = 5:1) | 6°dH | 6°dH (Ca2+/Mg2+ = 2:1) |
pH | 조정하지 않음 | 10.5 | 조정하지 않음 |
효소 농도 | 1, 2, 5, 10, 30, nM | 1, 2, 5, 10, 30, nM | |
시험 시스템 | 교반막대를 가지는 150ml 유리비커 | 10 nm | 교반막대를 가지는 150ml 유리비커 |
직물/부피 | 50ml 세제 내에 5 개의 직물조각 (Ø2.5cm) | 50ml 세제 내에 5 개의 직물조각 (Ø2.5cm) | 50ml 세제 내에 5 개의 직물조각 (Ø2.5cm) |
시험물질 | EMPA116 | EMPA117 | EMPA117 |
변이체 | P |
S99ASG+S101T | 1.4 |
S99TG+S101G | 1.3 |
변이체 | P |
S99SA | 1.4 |
S99TP | 1.1 |
S99TK | 1.0 |
S99TN | 1.7 |
S99TR | 1.1 |
S99TQ | 1.5 |
S99SSG | 2.3 |
S99ASG+S101T | 2.1 |
S99TC+S101C | 0.7 |
S99TG+S101G | 1.5* |
A98G+S99SQ | 1.2 |
Claims (34)
- 위치 95 내지 103의 활성부위 루프 (b) 영역의 위치 99에 1개 또는 2개의 추가적 아미노산 잔기를 가짐으로써, 상기 추가적 아미노산 잔기는 위치 99와 100 사이의 1개 또는 2개의 아미노산 잔기의 삽입에 대응하고, 아미노산 잔기는 T, S, D, E, P, G, H, I, A, K, N, Q, R, 및 C로 구성되는 군으로부터 선택되고;서브틸라제 효소는(a) 아미노산 서열:1 10 20 30A-Q-T-V-P-Y-G-I-P-L-I-K-A-D-K-V-Q-A-Q-G-F-K-G-A-N-V-K-V-A-V40 50 60L-D-T-G-I-Q-A-S-H-P-D-L-N-V-V-G-G-A-S-F-V-A-G-E-A-*-Y-N-T-D70 80 90G-N-G-H-G-T-H-V-A-G-T-V-A-A-L-D-N-T-T-G-V-L-G-V-A-P-S-V-S-L99a 110 120Y-A-V-K-V-L-N-S-S-X-G-S-G-T-Y-S-G-I-V-S-G-I-E-W-A-T-T-N-G-M-D130 140 150V-I-N-M-S-L-G-G-P-S-G-S-T-A-M-K-Q-A-V-D-N-A-Y-A-R-G-V-V-V-V160 170 180A-A-A-G-N-S-G-S-S-G-N-T-N-T-I-G-Y-P-A-K-Y-D-S-V-I-A-V-G-A-V190 200 210D-S-N-S-N-R-A-S-F-S-S-V-G-A-E-L-E-V-M-A-P-G-A-G-V-Y-S-T-Y-P220 230 240T-S-T-Y-A-T-L-N-G-T-S-M-A-S-P-H-V-A-G-A-A-A-L-I-L-S-K-H-P-N250 260 270L-S-A-S-Q-V-R-N-R-L-S-S-T-A-T-Y-L-G-S-S-F-Y-Y-G-K-G-L-I-N-V275E-A-A-A-Q을 가지는 서브그룹 I-S1에 속하는 서브틸라제 또는(b) 아미노산 서열:1 10 20 30A-Q-S-V-P-W-G-I-S-R-V-Q-A-P-A-A-H-N-R-G-L-T-G-S-G-V-K-V-A-V-40 50 60L-D-T-G-I-*-S-T-H-P-D-L-N-I-R-G-G-A-S-F-V-P-G-E-P-*-S-T-Q-D-70 80 90G-N-G-H-G-T-H-V-A-G-T-I-A-A-L-N-N-S-I-G-V-L-G-V-A-P-S-A-E-L-99a 110 120Y-A-V-K-V-L-G-A-S-X-G-S-G-S-V-S-S-I-A-Q-G-L-E-W-A-G-N-N-G-M-H-130 140 150V-A-N-L-S-L-G-S-P-S-P-S-A-T-L-E-Q-A-V-N-S-A-T-S-R-G-V-L-V-V-160 170 180A-A-S-G-N-S-G-A-*-G-S-I-S-*-*-*-Y-P-A-R-Y-A-N-A-M-A-V-G-A-T-190 200 210D-Q-N-N-N-R-A-S-F-S-Q-Y-G-A-G-L-D-I-V-A-P-G-V-N-V-Q-S-T-Y-P-220 230 240G-S-T-Y-A-S-L-N-G-T-S-M-A-T-P-H-V-A-G-A-A-A-L-V-K-Q-K-N-P-S-250 260 270W-S-N-V-Q-I-R-N-H-L-K-N-T-A-T-S-L-G-S-T-N-L-Y-G-S-G-L-V-N-A-275E-A-A-T-R을 가지는 서브그룹 I-S2에 속하는 서브틸라제, 또는(c) (a) 또는 (b)의 서브틸라제와 95% 이상의 동일성을 갖는 상동성 서브틸라제인 것을 특징으로 하는 서브틸라제 효소.
- 제 1 항에 있어서,S99SA,S99ST,S99SG,S99SS,S99SD,S99SE,S99SK,S99SR,S99SH,S99SC,S99SN,S99SQ,S99SI, 및S99SP를 포함하는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 분리된 서브틸라제 효소.
- 제 1 항에 있어서, K27R, *36D, S57P, N76D, S87N, G97N, S101G, V104A, V104N, V104Y, H120D, N123S, Y167X, R170X, Q206E, N218S, M222S, M222A, T224S, K235L, T274A, P129K, P131H, A133P, A133D, 및 A194P를 포함하는 군으로부터 선택된 변형을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 서브틸라제 효소.
- 제 3 항에 있어서, 상기 변형은 S101G+V104N, S87N+S101G+V104N, K27R+V104Y+N123S+T274A, N76D+S103A+V104I 또는 N76D+V104A, 또는 이들 돌연변이 (V104N, S101G, K27R, V104Y, N123S, T274A, N76D, V104A)의 다른 조합을 포함하는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 서브틸라제 효소.
- 제 2 항에 있어서, S99SSG, S99ASG+S101T, S99TG+S101G, S99TC+S101C, S99TP, A98G+S99SQ, S99TK, S99TN, S99TQ, S99TR을 포함하는 군으로부터 선택되는 변형을 포함하는 것을 특징으로 하는 서브틸라제 효소.
- 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항의 서브틸라제 효소를 코딩하는 분리된 DNA 서열.
- 제 6 항의 분리된 DNA 서열을 포함하는 발현 벡터.
- 제 7 항의 발현 벡터로 형질전환된 미생물 숙주세포.
- 제 8 항에 있어서, 미생물 숙주세포는 Bacillus lentus인 것을 특징으로 하는 미생물 숙주세포.
- 제 8 항에 있어서, 미생물 숙주세포는 Aspergillus인 것을 특징으로 하는 미생물 숙주세포.
- 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항의 서브틸라제 효소를 생산하는 방법으로서, 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항의 서브틸라제 효소를 코딩하는 분리된 DNA 서열을 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 미생물 숙주 세포를 상기 효소의 발현과 분비에 도움이 되는 조건하에서 배양하고 효소를 회수하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 따른 서브틸라제 효소를 포함하는 조성물.
- 제 12 항에 있어서, 셀룰라제, 리파제, 큐티나제, 산화환원효소, 다른 프로테아제 또는 아밀라제를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
- 제 12항에 있어서, 조성물은 세제 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
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