KR100625010B1 - 고추 및 파프리카에 발생하는 고추모틀바이러스,잠두위조바이러스2, 오이모자이크바이러스 및고추마일드모틀바이러스 진단용 프라이머 조합 - Google Patents

고추 및 파프리카에 발생하는 고추모틀바이러스,잠두위조바이러스2, 오이모자이크바이러스 및고추마일드모틀바이러스 진단용 프라이머 조합 Download PDF

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최홍수
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Abstract

본 발명은 고추 및 파프리카에 발생하는 고추모틀바이러스, 잠두위조바이러스2, 오이모자이크바이러스 및 고추마일드모틀바이러스를 단독 또는 동시에 진단할 수 있는 프라이머 조합에 관한 것이다.
고추모틀바이러스, 잠두위조바이러스2, 오이모자이크바이러스 및 고추마일드모틀바이러스는 고추 및 파프리카에 단독 또는 복합감염되어 식물병을 일으킨다. 본 발명은 상기 4종의 바이러스를 단독 또는 동시에 신속하게 진단할 수 있도록 4종의 바이러스 각각에 대하여 종특이적이고, 상기 4종의 바이러스 각각에 대하여 유연관계가 있는 다른 바이러스에 대하여는 비특이적인 반응을 보이지 않기 때문에, 상기 4종의 바이러스 단독 또는 이들이 조합되어 복합감염된 경우라도 RT-PCR법에 의하여 용이하게 검출할 수 있는 프라이머 조합에 관한 것이다.
고추모틀바이러스, 잠두위조바이러스2, 오이모자이크바이러스, 고추마일드모틀바이러스

Description

고추 및 파프리카에 발생하는 고추모틀바이러스, 잠두위조바이러스2, 오이모자이크바이러스 및 고추마일드모틀바이러스 진단용 프라이머 조합{DETECTING PRIMER SETS FOR PepMoV, BBWV2, CMV AND PMMoV INFECTING PEPPER AND PAPRIKA}
도1은 설계한 PepMoV 프라이머의 위치를 나타낸 그림이다.
도2는 PepMoV와 조합한 16 프라이머쌍의 RT-PCR 결과를 나타낸 그림이다.
도3은 설계한 BBWV2 프라이머의 위치를 나타낸 그림이다.
도4는 BBWV2와 조합한 12 프라이머쌍의 RT-PCR 결과를 나타낸 그림이다.
도5는 40가지 동시진단용 프라이머 조합의 RT-PCR 1차 선발 결과를 나타낸 그림이다.
도6은 1차 선발된 동시진단용 프라이머 조합의 2차 RT-PCR 선발 결과를 나타낸 그림이다.
도7은 최종 선발된 동시진단용 프라이머 조합과 4종 바이러스 감염 조합별 RT-PCR결과를 나타낸 그림이다.
본 발명은 고추 및 파프리카에 단독 또는 복합감염되어 식물병을 일으키는 고추모틀바이러스, 잠두위조바이러스2, 오이모자이크바이러스 및 고추마일드모틀바이러스를 신속하게 진단할 수 있는 프라이머 조합으로서, 상기 4종의 바이러스 각각에 대하여 종특이적이고, 상기 4종의 바이러스 각각에 대하여 유연관계가 있는 다른 바이러스에 대하여 비특이적인 반응을 보이지 않기 때문에, 상기 4종의 바이러스 단독 또는 이들이 조합되어 복합감염된 경우라도 RT-PCR법에 의하여 용이하게 검출할 수 있는 프라이머 조합에 관한 것이다.
식물병이란 식물기주에 대한 병원균 또는 환경요인의 지속적인 영향의 결과로 나타난 기주세포와 조직의 기능이상으로서, 식물의 형태, 생리 등에 비정상적인 변화가 나타난 상태를 말하며, 그 결과 나타난 경제적 가치의 감소를 포함하기도 한다. 이러한 식물병을 일으키는 원인으로는 곰팡이(Fungi), 박테리아(Bacteria), 선충(Nematode), 마이코플라스마(Mycoplasma), 원생동물(Protozoa) 및 바이러스(Virus)가 있다.
바이러스에 의하여 발생하는 식물병에 직접 작용하는 약제방제법은 현재까지 개발되어 있지 않은 실정이기 때문에, 바이러스에 의한 식물병을 관리하기 위해서는 먼저 식물체에 바이러스가 발생하였는지 여부와, 어떠한 바이러스가 발생하였는지 여부를 정밀하고 신속하게 진단하여야 한다. 그러나, 바이러스는 크기가 1㎛ 보다 작은 병원체로 광학현미경으로도 그 실체를 관찰할 수 없고, 전자현미경을 필요로 하기 때문에, 육안으로 식물체에 발생한 바이러스를 진단하는 것은 곤란하다. 이에 따라 바이러스를 진단하기 위한 다양한 방법들이 개발되어 사용되고 있다.
지금까지 바이러스를 진단하기 위하여 ELISA와 같은 혈청학적 진단법이 많이 사용되어왔다. 그러나 혈청학적 진단법은 많은 시료를 일반적인 정밀도에서 진단하는데 사용하는 경우에는 큰 무리가 없었으나, 진단대상 바이러스와 혈청학적 유연관계가 있는 바이러스가 존재할 경우에는 식물체에 발생한 바이러스를 잘못 동정하게 된다거나, 바이러스에 감염된 식물체의 종류에 따라 기주유래 물질이 달라지면서, 이 물질과 비특이적 반응으로 인하여 바이러스를 잘못 진단하게되는 문제가 발생하였다. 또한 2종 이상의 바이러스가 복합 감염된 경우에 이를 진단하기 위해서는 다른 종류의 항체를 사용해서 여러 번 진단해야 한다는 문제점이 있었다.
최근에는 식물체에 발생하는 바이러스를 정밀진단하기 위하여 역전사-중합효소연쇄반응(RT-PCR)법이 사용되고 있다. RT-PCR법에서는 사용하는 프라이머가 진단의 특이성과 정밀도를 결정짓는데, RT-PCR법에서 사용하는 프라이머는 일반적으로 바이러스의 유전자 클로닝을 목적으로 설계되기 때문에 종특이적이지 못하다는 문제가 있었다. 또한 식물체 또는 다른 바이러스에 의한 비특이적 산물을 생산하는 경우가 있기 때문에 진단용으로 사용하기에는 부적합한 경우가 많았다. 또한 같은 시료에서 여러 종의 바이러스를 진단하기 위해서는 여러 종류의 프라이머를 사용하여 각각 역전사-중합효소연쇄반응을 행해야 하기 때문에 많은 진단비용과 노동력이 소요된다는 문제점이 있었다.
본 발명은 상기와 같은 문제를 해결하기 위하여, 고추 및 파프리카에 발생하는 고추모틀바이러스, 잠두위조바이러스2, 오이모자이크바이러스 및 고추마일드모틀바이러스 4종에 종특이적인 프라이머로서, 상기 4종 바이러스 이외의 핵산과는 비특이적 반응이 없기 때문에, 상기 4종 바이러스에 대해서는 민감도가 우수하여 4종 바이러스의 단독감염 및 복합감염에도 모두 반응하고 검출감도가 뛰어난 진단용 프라이머 조합을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 상기 4종 바이러스 각각의 단독감염 및 복합감염에 대하여도 한번에 진단할 수 있는 동시진단법에 사용할 수 있는 프라이머 조합을 제공하므로써, 진단에 따른 비용 및 노동력을 4분의 1로 줄일 수 있고, 아울러 고추 및 파프리카에서 새로운 바이러스병을 신속하게 검출할 수 있도록 하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은 고추 및 파프리카에 발생하는 고추모틀바이러스(Pepper mottle virus; PepMoV), 잠두위조바이러스2(Broad bean wilt virus 2; BBWV2), 오이모자이크바이러스(Cucumber mosaic virus; CMV) 및 고추마일드모틀바이러스(Pepper mild mottle virus; PMMoV)를 단독으로 종특이적으로 진단할 수 있는 프라이머 조합 및 이들 4종 바이러스를 동시에 진단할 수 있는 프라이머 조합으로 구성된다.
본 발명의 발명자는 바이러스 종 내에는 약간씩 다른 염기서열을 가지고 있는 계통 또는 분리주들이 존재하기 때문에, 분리주 특이적인 프라이머를 진단에 사용할 경우에는 바이러스의 진단에 실패할 위험이 많다는 점에 착안하여 본 발명을 하게 되었다.
본 발명의 제1관점은 고추모틀바이러스(PepMoV)와 종특이적으로 반응하는 진단용 프라이머로서, PepMo-C40/PepMo-N30, PepMo-C40/PepMo-N40 및 PepMo- C30/PepMo-N20으로 표현되는 프라이머 중에서 적어도 하나를 포함하는 조합프라이머인 것을 특징으로 한다. 또한 상기 조합 프라이머는, 바람직하게는 이를 구성하는 개별 염기서열의 상보적인 염기서열 또는 이들 염기서열에 의거한 변이가 실시된 변형서열을 포함할 수 있다.
상기에서 "변형서열"은 실질적으로 바이러스의 게놈과 혼성화능을 유지하는 범위내에서 일부 염기의 결실, 삽입, 부가 및 치환된 서열을 의미하는 것으로, 개별 변형서열은 다른 바이러스 게놈과 혼성화가 가능하지 않은 정도의 변형인 것이 바람직하다. 여기에서, 변이의 위치는 혼성화를 방해하지 않는 한 특별히 한정되지는 않지만, 바람직하게는 중합효소연쇄반응의 단계 중 신장단계에 영향을 미치는 3'말단 부위는 배제되거나, 최소한도의 변이만 허용되는 것이 바람직하다.
상기에서 "조합 프라이머"란 개별 염기서열인 다운스트림 프라이머와 업스트림 프라이머로 구성된 개별 프라이머의 조합을 의미한다. 또한, "프라이머 조합"에서 프라이머란 특별한 한정이 없는 한 상기 조합 프라이머를 의미한다.
본 발명의 제2관점은 잠두위조바이러스2(BBWV2)와 종특이적으로 반응하는 진단용 프라이머로서, BBW2-C20/BBW2-N50 및 BBW2-C40/BBW2-N30으로 표현되는 프라이머 중에서 적어도 하나를 포함하는 조합프라이머인 것을 특징으로 한다. 또한 상기 조합 프라이머는, 바람직하게는 이를 구성하는 개별 염기서열의 상보적인 염기서열 또는 이들 염기서열에 의거한 변이가 실시된 변형서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 제3관점은 PepMoV, BBWV2, CMV 및 PMMoV를 동시에 진단하기 위한 프라이머 조합으로서, PepMo-C40/PepMo-N40, BBW2-C40/BBW2-N30, CMR3-C30/CMR3- N50 및 PMMo-C20/PMMo-N50으로 구성되는 조합프라이머인 것을 특징으로 한다. 또한 상기 조합 프라이머는, 바람직하게는 이를 구성하는 개별 염기서열의 상보적인 염기서열 또는 이들 염기서열에 의거한 변이가 실시된 변형서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 프라이머 조합은 임의의 바이러스 게놈에 부가하여 PCR법에 의하여 얻어진 산물로부터 PepMoV, BBWV2, CMV 및 PMMoV를 단독 및 동시진단하는 방법에 사용될 수 있다.
이하 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명하지만, 본 발명이 이에 제한되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1:PepMoV 진단용 프라이머의 설계와 선발
[단계1:고추모틀바이러스의 분리]
본 발명의 프라이머 선발에 사용한 고추모틀바이러스(Pepper mottle virus: PepMoV)는 자연감염된 고추에서 분리하였으며, 명아주(Chenopodium amaranticolor)에서 단병반분리법을 이용하여 순수분리하였다. 순수분리된 바이러스는 고추에서 증식하였으며, 접종 3주후 모자이크 병징을 보이는 잎을 채취하여 전체 RNA를 분리하여 RT-PCR 주형(template)으로 사용하였다.
[단계2:전체 RNA 분리]
전체 RNA는 페놀을 이용하여 바이러스 감염된 잎 조직 50㎎에서 분리하였다. 분리된 전체 RNA는 최종적으로 75% 에탄올로 3회 세척한 후 건조한 다음 증류수 50㎕에 녹인 다음 RT-PCR 분석에 사용하였다.
[단계3:역전사-중합효소연쇄반응(RT-PCR)]
역전사(Reverse transcription) 반응은 분리한 전체 RNA 0.5㎕, 12.5pmole 다운스트림 프라이머(downstream primer), 5배 역전사 완충액(250mM Tris-HCl, 150mM KCl, 40mM MgCl2, 5mM DTT, pH 8.5) 1㎕, 10mM dNTP 0.5㎕, 10U RNase 억제제, 그리고 2U AMV 역전사효소를 첨가한 반응액 5㎕를 42℃에서 30분간 항온 처리하여 실시한 다음 95℃에서 5분간 변성시켰다. 중합효소연쇄반응(Polymerase chain reaction)은 역전사반응액 5㎕에 12.5pmole 업스트림 프라이머(upstream primer), 1.25U Taq DNA 중합효소, 10배 중합효소연쇄반응 완충액(100mM Tris-HCl, 500mM KCl, 15mM MgCl2, pH 8.3) 2㎕를 첨가하고 증류수를 첨가하여 반응액을 25㎕로 만들었다. 이 반응액을 94℃ 45초, 55℃ 60초, 72℃ 80초로 40회 증폭시켰으며 마지막에는 72℃에서 10분간 처리하였다. RT-PCR 산물은 0.5×TBE 완충액과 1.5% 아가로즈 겔을 사용하여 전기영동한 후 EtBr(ethidium bromide)로 염색하여 확인하였다.
[단계4:PepMoV 공통염기서열 탐색]
PepMoV의 모든 계통에 사용할 수 있는 진단용 프라이머를 개발하기 위하여 현재까지 알려진 PepMoV 분리주들의 유전정보를 분석하였다. 염기서열 분석에 사용한 PepMoV 분리주들을 하기 표1에 나타내었다. 표1에 기재된 지금까지 알려진 5가지 PepMoV 분리주의 염기서열을 다중 비교하여 공통염기서열을 탐색하였다.
[표1:공통염기서열 분석에 사용한 PepMoV 분리주 염기서열]
Figure 112005023943932-pat00001
[단계5:종특이적인 염기서열의 탐색]
상기 단계4를 통하여 선발된 공통염기서열을 PepMoV와 분류학적으로 유사한 포티비리데(Potyviridae) 24종의 바이러스 염기서열(표 2)과 비교하여 종특이적인 서열을 탐색하였다.
[표2:종특이적 염기서열 탐색에 사용된 포티비리데 바이러스 유전자 24종]
Figure 112005023943932-pat00002
[단계6:PepMoV 진단용 프라이머의 설계]
상기 단계5를 통하여 탐색된 종특이적 염기서열들 중에서 프라이머 조건을 충족시키는 서열을 탐색하여 4개의 업스트림 프라이머와 4개의 다운스트림 프라이머를 하기 표3과 같이 합성하였다.
[표3:설계한 PepMoV 진단용 프라이머]
Figure 112005023943932-pat00003
상기 표3에 있어서, PepMo-N10은 서열번호1, PepMo-N20은 서열번호2, PepMo-N30은 서열번호3, PepMo-N40은 서열번호4, PepMo-C10은 서열번호5, PepMo-C20은 서열번호6, PepMo-C30은 서열번호7 및 PepMo-C40은 서열번호8이다.
상기 설계한 프라이머의 위치는 도1에 나타내었다.
[단계7:PepMoV 진단용 프라이머의 선발]
상기 단계6을 통하여 설계한 PepMoV 프라이머들을 하기 표4에 기재된 바와 같이 16가지로 조합한 다음 PepMoV 및 고추 및 파프리카에 발생하는 BBWV2, CMV 및 PMMoV와 RT-PCR을 수행하여, 그 결과를 도2에 나타내었다. 도2에 나타낸 결과를 통하여 진단용 프라이머 PepMo-C40(서열번호8)/PepMo-N30(서열번호3), PepMo-C40(서열번호8)/PepMo-N40(서열번호4) 및 PepMo-C30(서열번호7)/PepMo-N20(서열번호2)으로 표현되는 표5의 선발된 PepMoV 종특이적 조합프라이머가 비특이적 반응을 일으키지 않는 것을 확인할 수 있다.
[표4:PepMoV 프라이머 조합과 RT-PCR 산물]
Figure 112005023943932-pat00004
[표5:선발된 PepMoV 종특이적 프라이머 조합]
Figure 112005023943932-pat00005
실시예 2:BBWV2 진단용 프라이머의 설계와 선발
[단계1:BBWV2의 분리]
본 발명의 프라이머 선발에 사용한 잠두위조바이러스2(Broad bean wilt virus, BBWV2)는 자연감염된 파프리카에서 분리하였으며, 명아주(Chenopodium amaranticolor)에서 단병반분리법을 이용하여 순수분리하였다. 순수분리된 바이러스는 파프리카에서 증식하였으며, 접종 3주후 모자이크 병징을 보이는 잎을 채취하여 전체 RNA를 분리하여 RT-PCR 주형(template)으로 사용하였다.
[단계2:전체 RNA 분리]
전체 RNA는 페놀을 이용하여 바이러스 감염된 잎 조직 50㎎에서 분리하였다. 분리된 전체 RNA는 최종적으로 75% 에탄올로 3회 세척한 후 건조한 다음 증류수 50㎕에 녹인 다음 RT-PCR 분석에 사용하였다.
[단계3:역전사-중합효소연쇄반응(RT-PCR)]
역전사(Reverse transcription) 반응은 분리한 전체 RNA 0.5㎕, 12.5pmole 다운스트림 프라이머(downstream primer), 5배 역전사 완충액(250mM Tris-HCl, 150mM KCl, 40mM MgCl2, 5mM DTT, pH 8.5) 1㎕, 10mM dNTP 0.5㎕, 10U RNase 억제제, 그리고 2U AMV 역전사효소를 첨가한 반응액 5㎕를 42℃에서 30분간 항온 처리하여 실시한 다음 95℃에서 5분간 변성시켰다. 중합효소연쇄반응(Polymerase chain reaction)은 역전사반응액 5㎕에 12.5pmole 업스트림 프라이머(upstream primer), 1.25U Taq DNA 중합효소, 10배 중합효소연쇄반응 완충액(100mM Tris-HCl, 500mM KCl, 15mM MgCl2, pH 8.3) 2㎕를 첨가하고 증류수를 첨가하여 반응액을 25㎕로 만들었다. 이 반응액을 94℃ 45초, 55℃ 60초, 72℃ 80초로 40회 증폭시켰으며, 마지막에는 72℃에서 10분간 처리하였다. RT-PCR 산물은 0.5×TBE 완충액과 1.5% 아가로즈 겔을 사용하여 전기영동한 후 EtBr(ethidium bromide)로 염색하여 확인하였다.
[단계4:BBWV2 공통염기서열 탐색]
BBWV2의 모든 계통에 사용할 수 있는 진단용 프라이머를 개발하기 위하여 현재까지 알려진 BBWV2 분리주들의 유전정보를 분석하였다. 염기서열 분석에 사용한 BBWV2 분리주들을 하기 표6에 나타내었다. 표1에 기재된 지금까지 알려진 6가지 BBWV2 분리주의 염기서열을 다중 비교하여, 공통염기서열을 탐색하였다.
[표6:공통염기서열 분석에 사용한 BBWV2 분리주 염기서열]
Figure 112005023943932-pat00006
[단계5:종특이적인 염기서열의 탐색]
상기 단계4를 통하여 선발된 공통염기서열을 BBWV2와 분류학적으로 유사한 코모바이러스(Comovirus)(표7)와 비교하여, 종특이적인 서열을 탐색하였다.
[표7:종특이적 염기서열 탐색에 사용된 코모바이러스 유전자]
Figure 112005023943932-pat00007
[단계6:BBWV2 진단용 프라이머의 설계]
상기 단계5를 통하여 탐색된 종특이적 염기서열들 중에서 프라이머 조건을 충족시키는 서열을 탐색하여 6개의 업스트림 프라이머와 6개의 다운스트림 프라이머를 하기 표8과 같이 합성하였다.
[표8:설계한 BBWV2 진단용 프라이머]
Figure 112005023943932-pat00008
상기 표8에 있어서, BBW2-N10은 서열번호9, BBW2-N20은 서열번호10, BBW2-N30은 서열번호11, BBW2-N40은 서열번호12, BBW2-N50은 서열번호13, BBW2-N60은 서열번호14, BBW2-C10은 서열번호15, BBW2-C20은 서열번호16, BBW2-C30은 서열번호17, BBW2-C40은 서열번호18, BBW2-C50은 서열번호19 및 BBW2-C60은 서열번호20이다.
상기 설계한 프라이머의 위치는 도3에 나타내었다.
[단계7:BBWV2 진단용 프라이머의 선발]
상기 단계6을 통하여 설계한 BBWV2 프라이머들을 하기 표9에 기재된 바와 같이 12가지로 조합한 다음 BBWV2 및 고추 및 파프리카에 발생하는 PepMoV, CMV 및 PMMoV와 RT-PCR을 수행하여, 그 결과를 도4에 나타내었다. 도4에 나타낸 결과를 통하여 진단용 프라이머 BBW2-C20(서열번호16)/BBW2-N50(서열번호13) 및 BBW2-C40(서열번호18)/BBW2-N30(서열번호11)으로 표현되는 표10의 선발된 BBWV2 종특이적 조합프라이머가 비특이적 반응을 일으키지 않는 것을 확인할 수 있다.
[표9:BBWV2 프라이머 조합과 RT-PCR 산물]
Figure 112005023943932-pat00009
조합 12a는 BBWV1과 BBWV2 공통 프라이머임.
[표10:선발된 BBWV2 종특이적 프라이머 조합]
Figure 112005023943932-pat00010
실시예 3:고추 및 파프리카 발생 4종 바이러스 동시진단법 개발
고추 및 파프리카에 발생하는 PepMoV, BBWV2, CMV 및 PMMoV에 대하여 실시예 1 및 2에서와 동일한 방법으로 표5에 기재되어 있는 PepMoV 진단용 프라이머 3쌍, 표10에 기재되어 있는 BBWV2 프라이머 2쌍을 선발하고, 표11에 나타낸 CMV 프라이머 7쌍 및 표12에 나타낸 PMMoV 4쌍을 선발하여 조합하였다. 프라이머의 조합은 RT-PCR 산물의 크기로 바이러스를 쉽게 구별할 수 있도록 이루어졌다. 이 결과 표 13과 같이 40가지 동시진단용 프라이머 조합을 설계하였다.
[표11:선발된 CMV 종특이적 프라이머 조합]
Figure 112005023943932-pat00011
상기 표11에 있어서, CMR3-N21은 서열번호21, CMR3-N30은 서열번호22, CMR3-N40은 서열번호23, CMR3-N50은 서열번호24, CMR3-N60은 서열번호25, CMR3-C10은 서열번호26, CMR3-C20은 서열번호27, CMR3-C30은 서열번호 28, CMR3-C40은 서열번호29 및 CMR3-C50은 서열번호30이다.
[표12:선발된 PMMoV 종특이적 프라이머 조합]
Figure 112005023943932-pat00012
상기 표12에 있어서, PMMo-N20은 서열번호31, PMMo-N50은 서열번호32, PMMo-C20은 서열번호33, PMMo-C30은 서열번호34 및 PMMo-C60은 서열번호35이다.
[표13:고추 및 파프리카에 발생하는 4종 바이러스 동시진단용 프라이머 조합 설계]
Figure 112005023943932-pat00013
상기 40가지 조합에 대하여 4종 바이러스 단독감염 및 모든 복합감염 경우 에 대해 실시예 1에서와 동일한 방법으로 RT-PCR을 수행한 다음, 그 결과를 도5, 도6 및 도7에 나타내었다. 상기 도5, 도6 및 도7로부터, 40가지 프라이머 조합 중에서 고추 및 파프리카에 발생하는 PepMoV, BBWV2, CMV 및 PMMoV에 효과적으로 반응하는 조합은 표14에 기재된 바와 같이 PepMo-C40(서열번호8)/PepMo-N40(서열번호4), BBW2-C40(서열번호18)/BBW2-N30(서열번호11), CMR3-C30(서열번호28)/CMR3-N50(서열번호24) 및 PMMo-C20(서열번호33)/PMMo-N50(서열번호32)으로 구성되는 조합프라이머인 것을 확인할 수 있다.
[표14:최종선발된 고추 및 파프리카 발생 4종 바이러스 동시 진단용 프라이머 조합]
Figure 112005023943932-pat00014
본 발명의 진단용 조합프라이머를 이용하여 고추 및 파프리카에 발생하는 PepMoV, BBWV2, CMV 및 PMMoV에 대한 RT-PCR 진단을 행하면 기존의 항혈청을 이용한 진단법보다 검출한계가 현저히 높아지고, 지금까지 알려진 종 내의 모든 바이러스 계통들과의 비특이적 반응이 없기 때문에 훨씬 정밀한 진단이 가능하다. 또한 한번의 진단으로 4종 바이러스를 진단할 수 있기 때문에, 진단에 따른 비용 및 노 동력을 4분의 1로 줄일 수 있고, 아울러 고추 및 파프리카에서 새로운 바이러스병의 신속한 검출도 용이하다.
서열목록 전자파일 첨부

Claims (3)

  1. 고추 및 파프리카에 발생하는 바이러스를 진단하기 위한 프라이머 조합으로서, 고추모틀바이러스와 종특이적으로 반응하는 서열번호8/서열번호3, 서열번호8/서열번호4 및 서열번호7/서열번호2 중 적어도 하나를 포함하는 것을 특징으로 하는 조합프라이머.
  2. 고추 및 파프리카에 발생하는 바이러스를 진단하기 위한 프라이머 조합으로서, 잠두위조바이러스2와 종특이적으로 반응하는 서열번호16/서열번호13 및 서열번호18/서열번호11 중 적어도 하나를 포함하는 것을 특징으로 하는 조합프라이머.
  3. 고추 및 파프리카에 발생하는 바이러스를 동시에 진단하기 위한 프라이머 조합으로서, 서열번호8/서열번호4, 서열번호18/서열번호11, 서열번호28/서열번호24 및 서열번호33/서열번호32로 구성되는, 고추모틀바이러스, 잠두위조바이러스2, 오이모자이크바이러스 및 고추마일드모틀바이러스 동시진단용 프라이머 조합.
KR1020050038084A 2005-05-06 2005-05-06 고추 및 파프리카에 발생하는 고추모틀바이러스,잠두위조바이러스2, 오이모자이크바이러스 및고추마일드모틀바이러스 진단용 프라이머 조합 KR100625010B1 (ko)

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN105274258A (zh) * 2015-11-27 2016-01-27 湖南省植物保护研究所 用于检测辣椒斑驳病毒的引物组合物及其应用、由其组成的试剂盒及试剂盒的应用
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KR102201162B1 (ko) 2019-08-29 2021-01-12 강원대학교산학협력단 오이모자이크바이러스 검출을 위한 프라이머 세트 및 이의 용도

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CN105274258B (zh) * 2015-11-27 2018-09-18 湖南省植物保护研究所 用于检测辣椒斑驳病毒的引物组合物及其应用、由其组成的试剂盒及试剂盒的应用
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