본 발명의 상기 목적은 돼지 전염성위장염(TGE) 코로나바이러스와 유해 미생물을 억제할 수 있는 내 산성, 내 담즙산성 신규 미생물 락토바실러스 살리바리우스 Probio-37 (Lactobacillus salivarius Probio-37), 식품, 의약품, 동물약품, 사료첨가제 등 상기 생균활성제를 함유한 조성물, 상기 미생물을 이용하여 돼지 전염성위장염(TGE) 코로나바이러스와 유해 미생물의 생육을 억제할 수 있는 방법을 제공함으로써 달성되었다.
본 발명 신규 미생물인 락토바실러스 살리바리우스 Probio-37은 돼지에서 유래한 장내세균으로, 혐기 상태에서 생존할 수 있으며 돼지 전염성 위장염 코로나바이러스 및 다른 해로운 장내 세균들의 생육을 억제할 수 있어, 결과적으로 가축의 설사병을 예방 및 치료 할 수 있는 것으로 나타났다.
본 발명은 코로나바이러스 감염과 관련된 설사병의 예방 또는 치료 개선 방법을 본 발명자들이 연구한 것으로, 현재 돼지 전염성위장염 코로나 바이러스 설사 병의 경우 돼지 유행성 설사병 바이러스 약독화주의 예방약이 개발되어 있으나, 국내의 열악한 사육환경이나 양돈 농가의 인식부족으로 인하여 현장에서 손쉽게 사용할 수 없으므로 아직까지 박멸되지 못하고 있는 실정인데, 본 발명은 이러한 돼지 코로나바이러스 및 장내 유해 미생물들의 감염과 관련된 설사 및/또는 위장염을 치료할 수 있는 효과적이고 잠재력 있는 프로바이오틱스를 제공한다. 그러므로, 본 발명 프로바이오틱 미생물은 가축의 사료를 포함한 식품 및 가축의 장내 서식하는 돼지 코로나바이러스 및 유해균의 수를 감소시키는데 사용될 수 있다.
본 발명 미생물은 장 세포에 흡착할 수 있을 뿐만 아니라, 다음과 같은 프로바이오틱 특성을 보유한다.
- 돼지 코로나바이러스 및 다른 장내 유해미생물의 생장 억제능
- 호기적, 혐기적 조건 및 다양한 pH에서의 생장능; 이러한 성질은 위장관내에서 변화되는 다양한 생리적 및 병리적 조건에 잘 적응할 수 있는 능력을 부여한다.
- 위산 및 담즙산 내성
- 동결건조에서의 생균활성 보유능
또한, 본 발명 신규 미생물은 공지의 다른 예방 또는 치료방법과 같이 항생제 내성이나 생물 독성 등의 부작용이 없는 것이 특징이다.
본 발명에 있어서, '프로바이오틱(Probiotic)' 은 '사람을 포함한 동물의 위 장관내에서 숙주의 장내 미생물 균형을 개선하여 숙주에 유익한 영향을 미치는 살아있는 미생물' 의 의미로 이해된다. 프로바이오틱 미생물은 프로바이오틱 활성을 갖는 살아 있는 미생물로 단일 또는 복합균주 형태로 사람이나 동물에 건조된 세포 형태나 발효산물 형태로 급여될 경우, 숙주의 장내균총에 유익한 영향을 미칠 수 있다.
본 발명에 있어서 "돼지의 코로나바이러스(coronavirus)" 는 돼지의 주요 바이러스성 전염병의 원인체로, 돼지 유행성설사 바이러스(Porcine epidemicdiarrheavirus; PEDV), 전염성 위장염 바이러스(Transmissible gastroenteritis virus; TGEV) 등을 말하는 것으로, 국내에서도 매년 발생하면서 양돈산업에 막대한 피해를 입히고 있다. 특히, 본 발명 미생물이 뛰어난 억제 활성을 보이는 전염성 위장염 바이러스(TGEV)는 매우 빠른 전염성의 특징을 갖고, 구토와 심각한 설사를 유발하며, 모든 연령의 돼지가 TGEV에 민감하다. 특히 태어난 지 2주 이하의 돼지에서는 영양분 흡수 및 체액조절을 담당하는 소장 세포를 선택적으로 감염하여 파괴시키기 때문에 이들 신생 어린 돼지에서 치명적인 설사질환을 유발하고 높은 치사율을 나타낸다(H. W. Moon, J. Am. Vet. Med. Assoc., 172, 443 (1978)).
구체적으로, 특히 돼지 위장염 코로나바이러스 및 장내 유해 미생물 생육억제 활성을 가지면서, 내 산성, 내 담즙산성을 보유한 미생물을 탐색하는 과정은 다음과 같다. 즉, 혐기백 (상품명 Gas Pack Pouch; BBL사 제품)에 돼지의 위장 내용물 30g을 정확히 채취하여 넣고, pH 2로 조정한 혐기 희석액 270㎖를 넣어 1:10 의 비율로 희석한 다음, 진탕기를 이용하여 120분간 진탕하였다. 진탕액 1㎖를 옥스갈 (디프코사 제품, 상품명) 0.5%를 첨가한 BL 고체배지 (일본 영연화학사 제품)에 도 말하고, 37℃에서 48시간 혐기장치를 이용하여 배양하였다. 배양이 끝난 후 형성된 집락(colony) 310개를 선발하여 GAM semi-agar 배지 (일본 일수제약사 제품)에 옮겨 배양한 뒤, 영하 80℃에서 보존하면서 실험에 사용하였다. 분리된 미생물들을 대상으로 한 유해미생물의 생장억제실험은 구로이와 등의 문헌 (Kuroiwa et al., 감염증학지, 64, 257, 1990)과 항생제 평가시 사용되는 미생물 13종을 대상으로 하였다. 이러한 미생물 13 종은 다음과 같다.: 대장균 (E. coli) KCTC 2441, 대장균(E. coli) KCTC 2571, Klebsiella pneumoniae KTCT 2208, Staphylococcus aureus KCTC 1621, Staphylococcus epidermidis KCTC 1917, Salmonella enteritidis , Shigella flexneri KCTC 2008, Salmonella gallinarum , Enterobacter cloacea KCTC 2361, Enterococcus lactis KCTC 1913, Salmonella typhimurium, Citrobacter freundii KCTC 2006, Bacillus subtilis KCTC 1021. 위의 유해 미생물들을 NB(nutrient broth) 액체배지에서 배양한(37℃, 18시간) 후 배양액 0.1㎖를 취하여 NA(nutrient agar) 고체배지에 도말 하고 건조시킨 다음 지름 8mm의 페이퍼디스크를 배지 위에 올려놓았다. 분리한 미생물들은 MRS 액체배지에서 혐기적으로 배양한(37℃, 18시간) 후, 위의 NA(nutrient agar) 배지에 올려놓은 지름 8mm의 페이퍼디스크에 배양액 30㎕를 접종하고 배양(37℃, 24시간)하였다. 일정 시간의 배양이 끝난 다음 형성된 생육 억제 환(clear zone)을 측정하여 대조구와 비교하고, 유해 미생물의 생육억제 활성이 가장 우수한 균주를 선별하여 Probio-37 로 명명하였다.
Probio-37 균주를 동정하기 위하여, 상기에서 선별된 균주들을 배양한 후, 형태; 생리ㆍ생화학적 특성; 16S rRNA 유전자의 염기 서열 결정 및 분석 실험 등을 수행하였다.
Probio-37의 형태 및 생리ㆍ생화학적 특성을 조사한 결과, Probio-37은 그람양성 세균으로 호기적인 조건과 혐기적인 조건에서 동시에 성장하며 포자를 형성하지 않고 운동성이 없으며, 세포의 형태는 간균이다. 상기 균주의 성장 조건으로는 30∼37℃이 바람직하다. 가스와 인돌을 생성하지 않으며 용혈성을 나타내지 않고 질산을 환원하지 않는다.
Probio-37의 16S rRNA 유전자의 염기 서열은 서열번호 1로 기재된다. 16S rDNA 염기서열에 기초한 분자계통분류학적 분석에서 Probio-37은 락토바실러스(Lactobacillus) 속에 속하는 균주로서 99.5%의 16S rDNA 상동성으로 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius )의 표준 균주에 가장 높은 분자계통학적 유연관계를 보여주는 균주로 동정되었다.
따라서, 상기 분리된 균주는 생리적, 형태적 및 생화학적 결과에 따라 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius) 균주로 동정하고, 사단법인 한국 종균협회(Korean Federation of Culture Collections; 서울시 서대문구 홍제동 361-221번지 유림빌딩 2층)의 부설 균주기탁 및 보존기관인 한국미생물보존센터(Korean Culture Center of Microorganisms, 이하 "KCCM한국종균협회(KCCM)에 2001년 10월 27일 수탁번호 제KCCM-10328호(identification reference : Lactobacillus sp. Pro-37)로 기탁되어있다. 본 발명의 미생물은 장기간 안정적으로 보존하기 위해 글리세롤 성분을 포함하여 영하 80℃에 보관하거나 멸균된 10% 탈지유에 현탁하여 동결 건조하는 것이 바람직하다. 본 발명 균주는 통상적인 물리화학적 돌연변이 방법 등에 의해 이와 동등한 활성을 갖고 필드 안정성이 뛰어나거나 또는 보다 뛰어난 항바이러스 활성을 나타내도록 개선 또는 개량될 수 있음은 당업자에게 충분히 이해될 것이다.
본 발명 Probio-37 균주를 가지고 돼지 전염성위장염(TGE) 코로나바이러스의 생육 억제 실험결과 시험세포에 있어서 코로나 바이러스에 의한 세포변성효과가 관찰되지 않아 Probio-37은 코로나 바이러스에 대한 항바이러스 활성이 있는 것으로 나타났다. 또한, 본 발명 미생물은 위장관 내 유해 미생물들의 생장 억제능이 있으며, 항생제에 대한 감수성 실험결과 다양한 가축 항생제에 대해 저항성이 있는 것으로 확인되었다. 본 발명 미생물은 이미 지적한 바와 같이 돼지의 장관으로부터 분리된 것으로 정상적인 장내 미생물균총을 형성하기 때문에 특히 가축 사육에 더욱 잇점이 있다.
본 발명의 한 유익한 측면에 있어서, 본 발명은 상기 신규의 미생물을 함유하는 식품, 의약품, 동물약품, 사료첨가제를 제공한다. 본 발명 미생물은 허용가능한 담체와 함께 독립적으로, 또는 식품의 첨가제로 사용되거나 사람이나 가축이 섭취하기에 적합한 조성물 형태로 사용될 수 있다. 즉, 본 발명 미생물은 다른 프로바이오틱 세균을 함유하지 않은 식품(첨가되어 프로바이오틱 활성을 부여함) 및 이미 몇 가지의 프로바이오틱 세균을 함유한 식품(첨가되어 프로바이오틱 활성을 증 강시키거나 보완함)에 첨가되어 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적, 수의학적 또는 영양학적 조성물은 분리된 프로바이오틱 세균으로 락토바실러스 살리바리우스 Probio-37 또는 이와 함께 2종 이상의 다른 유익한 균주와 적당한 담체를 함께 포함할 수 있다.
예컨대, 본 발명 조성물에 본 발명 균주와 함께 사용 가능한 다른 미생물들은 동물이 섭취하기에 적합하고 섭취시 바이러스나 병원성 유해세균을 억제하거나 포유동물 장관 내의 미생물 균형을 개선시킬 수 있는 프로바이오틱 활성을 갖는 것들이 바람직하다. 그러한 프로바이오틱 미생물의 예로는 Saccharomyces, Candida, Pichia 및 Torulopsis를 포함하는 효모(yeasts), Aspergillus, Rhizopus, Mucor
, Penicllium 등과 같은 곰팡이 및 Lactobacillus, Bifidobacterium, Clostridium
, Leuconostoc, Bacteroides, Staphylococcus, Lactococcus, Bacillus, Streptococcus, Fusobacterium, Propionibacterium, Enterococcus, Pediococcus
, 그리고 Micrococcus 속 세균들이 있다. 적당한 프로바이오틱 미생물의 구체적인 예로는 Saccharomyces cereviseae, Bacillus coagulans, Bacillus licheniformis, Bacillus subtills, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum, Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus alimentarius, Lactobacillus casei, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus delbruckii, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus farciminus, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus sake, Lactococcus lactis, Micrococcus varians, Pediococcus acidilactici, 및 Staphylococcus xylosus 등을 들 수 있다. 바람직하게는 우수한 프로바이오틱 활성을 가지면서 돼지 설사병을 유발하는 로타바이러스(rotavirus) 억제능을 나타내는 락토바실러스 레우테리 Probio-16(KCCM 10214), 돼지 코로나바이러스 억제능을 나타내는 락토바실러스 프란타럼 Probio-38 (KCCM10329), 또는 이들의 혼합균을 본 발명 조성물에 추가로 포함할 수 있다. 본 발명 조성물에 함유될 수 있는 담체의 예로는 증량제, 고섬유 첨가제, 캡슐화제, 지질 등일 수 있으며 이러한 담체들의 예는 당업계에 충분히 공지되어 있다. 본 발명 락토바실러스 살리바리우스 Probio-37 균주는 동결건조되거나 캡슐화된 형태 또는 배양현탁액이나 건조분말 형태일 수 있다.
통상적인 항생제 대신에, 본 발명 신규 미생물 및 조성물은 생균활성제로 동물에 투여되거나 식품, 의약품, 동물약품, 또는 사료첨가제와 함께 동물에 투여될 수 있다. 이러한 생균활성제는 기존 항생제의 대체용으로 인체 및 각종 가축에 대해 장내 유해한 미생물을 억제하며 안정된 장내 균총의 유지를 통해 동물체의 건강상태를 양호하게 하고 가축의 증체량과, 육질을 개선시키며, 산유량 및 면역력을 증가시키는 등의 목적으로 사용할 수 있다. 본 발명 조성물은 또한 장내 미생물균총을 유지하기 위해 항생제 투여 후에도 투여될 수 있다.
특히, 항바이러스 활성능을 갖는 본 발명 신규 미생물은 특히, 다른 치료법이 비효과적이거나 임상적으로 부작용이 있는 코로나 바이러스의 감염에 의해 유발된 대부분의 증상 완화나 치료에 매우 유용하다.
그리하여, 본 발명은 신규 미생물 또는 이를 유효량 함유한 조성물을 사용하여 코로나바이러스 감염의 발생을 저지하거나 감염에 의한 위장염 및 설사 등을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 장내 유해 병원성 미생물의 발생을 저지하거나 감염에 의한 위장염 및 설사 등을 치료하는 방법을 제공한다.
이하, 실시 예를 통하여 본 발명의 구성 및 작용효과를 보다 구체적으로 설명한다. 단, 하기 실시 예는 본 발명을 예시하기 위한 목적으로 발명의 권리범위가 하기 실시 예에 한정되는 것은 아니다.
실시 예 1 : 내 산성, 내 담즙산성 특성을 갖는 세균의 분리
건강한 돼지의 위장 내용물을 채취하여 혐기백 (상품명 Gas Pack pouch; BBL사 제품)에 넣은 다음 혐기적으로 운반하여 실험에 사용하였다. 채취한 위 내용물 30g을 pH 2로 조정한 혐기 희석액 (0.78% K2HPO4, 염혼합액 37.5㎖, L-cystein 0.5g, 25% L-ascorbic acid 2㎖, 8% Na2C03 50㎖, 0.1% resazurin 1㎖를 증류수 860㎖에 녹이고, Agar 0.5g을 첨가) 270㎖에 1:10 의 비율로 희석하고, 진탕기를 이용하여 120분간 진탕하였다. 진탕액 1 ㎖를 옥스갈 (디프코사 제품, 상품명) 0.5%를 첨가한 BL 고체배지 (일본 영연화학사 제품)[ Lab-lemco powder 2.4g, Proteose peptone No.3 10g, Trypticase 5g, Phytone peptone 3g, Yeast extract 5g, Liver extract 150ml, Glucose 10g, Soluble starch 0.5g, soln.A 10㎖, soln.B 5㎖, 10% FS antifoam F-20 5㎖, Tween 80 1g, L-cystein 0.5g, Horse serum 50㎖를 증류수 1000㎖에 녹이고, Agar 15g을 첨가; soln.A 의 조성, 10% KH2PO4과 10% K2HPO
4을 혼 합한 것이며; soln.B의 조성, 황산마그네슘 10g, 황산철 0.5g, 소금 0.5g, 황산망간 0.337g을 증류수 250㎖에 녹임)에 도말하고, 37℃에서 48시간 배양하였다. 일정 시간이 지난 후 나타나는 콜로니를 310개 선발하여 GAM semi-agar 배지 (일본 일수제약사 제품) [Peptone 10g, Soya peptone 3g, Proteose peptone No.3 10g, Peptonized whale serum 13.5g, Yeast extract 5g, Beef extract 2.2g, Liver extract 1.2g, KH2PO4 2.5g, NaCl 3g, L-cystein 0.3g, Na thioglycolate 0.3g, glucose 2g를 증류수 1000㎖에 녹이고, Agar 1.5g을 첨가] 에 옮겨 37℃에서 배양하고, 영하 80℃에서 보존하였다.
실시 예 2 : 분리한 미생물 Probio-37의 동정
실시 예 1에서 분리된 Probio-37 균주를 MRS 배지 (Difco 제품)에서 37℃ 조건으로 배양하였다. Probio-37 균주를 동정하기 위하여, 형태 및 생리학적 특성은 윤 등 (Yoon ef al., Int. J. Syst. Bacteriol., 47, 904, 1997)의 방법과 API 32A 및 CHL 키트 (바이오메리오사 제품)를 사용하여 결정하였다. 16s rRNA 유전자의 염기 서열 결정 및 분석은 윤 등 (Yoon et al., Int. J. Syst. Bacteriol., 47, 933, 1997)의 방법을 사용하였다. Probio-37의 형태 및 생리ㆍ생화학적 특성은 표 1과 같다.
표 1에서 보는 바와 같이 Probio-37은 그람양성의 세균으로 호기적인 조건과 혐기적인 조건에서 동시에 성장하며 포자를 형성하지 않고 운동성이 없으며, 세포의 형태는 간균이다. 상기 균주의 성장 조건으로는 30℃∼37℃가 바람직하다. 가스와 인 돌을 생성하지 않으며 용혈성을 나타내지 않고 질산을 환원하지 않는다. 0.5% 담즙 산에 내성을 나타낸다.
Probio-37의 16S rRNA 유전자의 염기 서열은 서열번호 1로 기재된다(도 1).
16S rDNA 염기서열에 기초한 분자계통분류학적 분석에서 Probio-37은 락토바실러스 (Lactobacillus) 속에 속하는 균주로서 99.5%의 16S rDNA 상동성으로 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius)의 표준 균주에 가장 높은 분자계통학적 유연관계를 보여주는 균주로 동정되었다. 따라서 이상의 결과에 기초하여 Probio-37은 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius)의 균주로 동정하고, 한국미생물보존센터에 2001년 10월 27일자로 기탁하였다(수탁번호: KCCM-10328).
실시 예 3 : 분리된 미생물의 코로나바이러스 생장 억제 실험
본 실시 예에서는 전염성 위장염(TGE) 바이러스(vaccine strain) 및 ST cell을 준비하여 본 발명 분리 미생물의 코로나바이러스 생장 억제 실험을 수행하였다.
(1) 바이러스 준비(Virus culture)
ST cell monolayer(단층 세포)에 TGE virus를 접종하고 약 30분간 바이러스를 세포에 흡착시킨 후 소 혈청(bovine serum) 5%를 포함하는 MEM(Eagle's minimum essential medium)을 적당량 첨가하고 5% CO2를 함유한 37℃ 세포배양기에서 배양하면서 세포변성효과(cytopathic effects:CPE)를 관찰하였다.
단층세포에 CPE가 약 70% 정도 관찰될 때 MEM 배지를 포함한 감염세포를 영하 70℃에서 2차례 냉동 및 해동을 반복한 후 채독(harvest)한 다음 원심 분리하여 세포성분(cell debris)을 제거한 상층 액을 영하 70℃에 보관하면서 시험에 공여하였다.
(2) 바이러스 정량( virus titration )
96공 (96-well) 세포배양 plate에 ST monolayer를 준비하고 영하 70℃에 보관 중인 TGE 바이러스를 10배 단계 희석법(10-fold serial dilution)으로 희석 한 다음 각 희석 단계 별로 10개의 공(well)에 접종하고 72시간 동안 5% CO2를 포함하 는 37℃ 세포배양기내에서 배양하면서 CPE를 관찰한다. CPE 관찰 결과를 토대로 Reed & Muench 방법에 의하여 배양액 내에 존재하는 바이러스의 함량을 정량 하였다.
(3) 항바이러스 활성 테스트(Antiviral activity test)
TGE virus 배양액을 소 혈청 10%가 첨가된 MEM으로 희석하여 바이러스 역가(virus titer)가 10.0 TCID50/0.1㎖, 100 TCID50/0.1㎖, 및 1000 TCID50
/0.1㎖ 이 되도록 하였다.
96공 세포배양 plate에 ST cell monolayer를 준비한 다음 첫째, 둘째 및 셋째 공에 각각 90㎕의 10.0 TCID50/0.1㎖, 100 TCID50/0.1㎖, 및 1000 TCID50
/0.1㎖를 넣고 즉시 10㎕(10%)의 Probio-37 배약액을 각 공(well)에 첨가 한 후 5% CO2를 함유하는 37℃ 세포 배양기에서 배양하면서 시험 후 24시간, 48시간 및 72시간에서 CPE를 관찰하였다.
상기 방법에 따라 세포변성효과(cytopathic effects)가 관찰될 경우 Probio-37 배양액이 항바이러스 활성(antiviral activity)이 없는 것으로 판정하였다.
락토바실러스 살리바리우스 Probio-37의 코로나바이러스에 대한 억제활성은 하기 표 2와 같다. 실험결과 세포변성효과가 관찰되지 않았으므로 Probio-37은 코로나바이러스에 대한 항바이러스 활성이 있는 것으로 판정하였다.
[표 2]
Probio-37의 TGE 코로나바이러스에 대한 세포변성효과(CPE)
실시 예 4 : 분리된 미생물의 유해 미생물 생장 억제 실험
분리된 미생물들을 대상으로 한 유해미생물의 생장억제실험은 구로이와 등 (Kuroiwa et al., 감염증학회지, 64, 257, 1990) 의 방법을 이용하여 항생제 평가시 사용되는 다음의 미생물 13종을 대상으로 하였다. : 대장균 (E. cole) KCTC 2441, 대장균 (E. coli) KCTC 2571, Klebsiella pneumoniae KCTC 2208, Staphylococcus aureus KCTC 1621, Stphylococcus epidermidis KCTC 1917, Salmonella enteritidis , Shigella flexneri KCTC 2008, Salmonella gallinarum , Enterobacter cloacea KCTC 2361, Enterococcus lactis KCTC 1913, Salmonella typhimurium, Citrobacter freundii KCTC 2006, Bacillus subtilis KCTC 1021.
위의 유해 미생물들을 NB(nutrient broth) 액체배지에서 배양한(37℃, 18시간) 후 배양액 0.1㎖를 취하여 NA(nutrient agar) 고체배지에 도말 하고 건조시킨 다음 지름 8mm의 페이퍼디스크를 배지 위에 올려놓았다. 분리한 미생물들은 MRS 액체배지에서 혐기적으로 배양한(37℃, 18시간) 후, 위의 NA(nutrient agar) 배지에 올려놓은 지름 8mm의 페이퍼디스크에 배양액 30㎕를 접종하고 배양(37℃, 24시간)하였다. 일정 시간의 배양이 끝난 다음 형성된 생육 억제 환(clear zone)을 측정하여 대조구와 비교하고, 유해미생물의 생육억제 활성이 가장 우수한 균주를 선별하 여 Probio-37로 명명하였다. Probio-37의 유해 미생물에 대한 억제 활성은 하기 표 3과 같다
표 3에서 보는 바와 같이 Probio-37은 사용한 유해미생물 13종에 대해서 대부분 억제 활성을 지니는 매우 유용한 미생물인 것으로 확인되었다.
실시 예 5 : Probio-37의 항생제에 대한 감수성 실험
Probio-37의 항생제에 대한 감수성 실험은 Becton Dickinson Microbiology Systems의 방법에 따라 BBL Sensi-Disc를 사용하여 실험하였고 11종의 항생제에 대해 수행하였으며, 그 종류는 다음과 같다. 즉, Tetracycline(30㎍), Ampicillin(10㎍), Gentamicin(10㎍), Cephalothin(30㎍), Sulfisoxazole(25㎍), Carbenicillin(100㎍), Streptomycin(10㎍), Lincomycin(2㎍), Neomycin(30㎍), Penicillin(10㎍), Erythromycin(15㎍) 이었다.
Probio-37을 MRS 액체배지에서 배양한(37℃, 18시간) 후, MRS 고체배지 Plate에 균액을 균일하게 도말하고, BBL Sensi-Disc(직경 6mm)를 이 배지에 올려놓은 다음 배양(37°C, 24시간)하였다. 일정 시간의 배양이 끝난 다음 형성된 생육 억제환(clear zone)의 직경을 측정하여 항생제에 대한 Probio-37의 감수성 결과를 표 4에 나타내었다.
표 4에서와 같이 Probio-37은 Ampicillin, Cephalothin, Carbenicillin, Erythromycin에 대하여 높은 감수성을 나타내었다.