KR100490315B1 - Uncaria sinensis extract showing anti-aging effect on cells and cosmetics comprising the same - Google Patents

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Abstract

본 발명은 세포에 대한 노화억제 작용을 하는 조구등 추출물 및 이를 유효성분으로 함유하는 노화억제 기능성 화장품 및 식품 첨가물에 관한 것으로서, 본 발명의 조구등 추출물은 강한 항산화활성 및 산화적 스트레스에 대한 세포보호 작용을 나타내며, 텔로미어 길이의 단축을 억제하여 피부세포의 노화 억제에 효과적이므로, 피부노화 방지 효과를 나타내는 화장품 및 식품 첨가물 등에 유용하게 사용될 수 있다.The present invention relates to an extract for inhibiting aging against cells and to an anti-aging functional cosmetic and food additive containing the same as an active ingredient, the extract for extract of the present invention has a strong antioxidant activity and a cytoprotective effect against oxidative stress. Since it is effective in inhibiting the aging of skin cells by suppressing the shortening of the telomere length, it can be usefully used in cosmetics and food additives and the like, which exhibits an anti-aging effect.

Description

세포에 대한 노화 억제 작용을 하는 조구등 추출물 및 이를 함유하는 화장품{Uncaria sinensis extract showing anti-aging effect on cells and cosmetics comprising the same} Uncaria sinensis extract showing anti-aging effect on cells and cosmetics comprising the same}

본 발명은 세포에 대한 노화억제 작용을 하는 조구등 추출물 및 이를 유효성분으로 함유하는 노화억제 기능성 화장품 및 식품 첨가물에 관한 것으로서, 본 발명의 조구등 추출물은 강한 항산화활성 및 산화적 스트레스에 대한 세포보호 작용을 나타내며, 텔로미어 길이의 단축을 억제하여 피부세포의 노화 억제에 효과적이므로, 피부노화 방지 효과를 나타내는 화장품 및 식품 첨가물 등에 유용하게 사용될 수 있다.The present invention relates to an extract for inhibiting aging against cells and to an anti-aging functional cosmetic and food additive containing the same as an active ingredient, the extract for extract of the present invention has a strong antioxidant activity and a cytoprotective effect against oxidative stress. Since it is effective in inhibiting the aging of skin cells by suppressing the shortening of the telomere length, it can be usefully used in cosmetics and food additives and the like, which exhibits an anti-aging effect.

노화에 관해서는 현재까지도 많은 연구가 진행되고 있지만 다양한 현상과 복합적인 특징으로 인해 아직 정확한 기전은 규명되지 못하고 있다. 다만, 수많은 현상학적 연구를 통해 노화에 관한 몇 가지 가설이 제기되었는데, 그 중 대사과정에서 발생되는 활성산소가 노화의 원인이 된다는 것과 염색체 말단부분에 있는 텔로미어(telomere)가 세포분열을 거듭함에 따라 점차 소실되어 세포분열이 정지되고 결국 사멸에 이른다는 것이 중요하게 받아들여지고 있다(Harman, D., Free radical theory of aging: Role of free radicals in the origination and evolution of life, aging and disease processes, 3-49. Alan R Liss, New York (1986); Harley, C.B., Futcher, A.B., Greider, C.W. Telomeres shorten during aging of human fibroblasts. Nature, 345:458-460, (1990)). 즉, 정상적인 대사과정에서 부수적으로 생성되는 활성산소들은 세포내 산화적 스트레스를 증가시켜 각종 질병 및 노화의 원인이 되며, 염색체를 보호하는 텔로미어의 길이가 짧아지면 더 이상 세포가 분열하지 못하고 정체기에 들어가 결국 노화와 세포사멸에 이른다는 것이다.Much research has been conducted on aging to date, but the exact mechanism has not yet been determined due to various phenomena and complex features. However, numerous phenomenological studies have raised some hypotheses about aging, among which free radicals from metabolic processes contribute to aging and telomeres in the chromosome ends. It is increasingly accepted that gradual disappearance ceases cell division and eventually dies (Harman, D., Free radical theory of aging: Role of free radicals in the origination and evolution of life, aging and disease processes, 3- 49. Alan R Liss, New York ( 1986); Harley, CB, Futcher, AB, Greider, CW telomeres shorten during aging of human fibroblasts Nature, 345:. 458-460, (1990)). In other words, free radicals generated in the course of normal metabolism increase oxidative stress in the cell, causing various diseases and aging, and shortening the length of the telomer that protects the chromosome prevents the cells from splitting and enters the plateau phase. Eventually, aging and cell death.

텔로미어는 진핵세포 염색체의 말단 부분으로 TTAGGG 염기서열이 반복되는 특이한 구조로 이루어져 있는데, 특히 구아닌(G)이 많은 부분에서는 서로 수소결합을 통해 매우 안정한 G-quartet 구조를 형성함으로써 염색체를 안정화시켜 염색체를 보호하는데 중요한 역할을 한다. 하지만 세포분열을 거듭함에 따라 텔로미어의 길이가 점점 짧아져 그 보호 기능이 상실되어 염색체가 불안정하게 되거나, 뭉치거나 혹은 소실되어 결국 더 이상 분열 할 수 없게 될 뿐만 아니라 사멸(apotosis)을 유도하게 된다. Harley 등은 인간 정상세포를 계대배양함에 따라 텔로미어 길이가 짧아진다는 것을 보고하였고, Vaziri 등은 연령이 높은 사람에게서 얻은 세포는 텔로미어 길이가 짧고 배양을 해도 세포분열 회수가 적다는 것을 보고하였다(Harley, C.B., Futcher, A.B., Greider, C.W. Telomeres shorten during aging of human fibroblasts., Nature, 345:458-460, (1990); Vaziri, H., Schachter, F., Uchida, I., Wei, L., Zhu, X., Effros, R., Cohen, D., Harley, C.B. Loss of telomeric DNA during aging of normal and trisomy 21 human lymphocytes., Am. J. Hum. Genet., 52:661-667, (1993)). 또한, 최근의 연구에 의하면 산화적 스트레스가 텔로미어 길이 단축에 영향을 미친다는 사실이 보고되었다(Furumoto, K., Inoue, E., Nagao, N., Hiyama, E., Miwa, N., Age-dependent telomere shortening is slowed down by enrichment of intracellular vitamin C via suppression of oxidative stress. Life Sci., 63:935-948, (1998); Von Zglinicki, T., Role of oxidative stress in telomere length regulation and replicative senescence., Ann. N. Y. Acad. Sci., 908:99-110, (2000)). 이와 같이 텔로미어 길이의 단축은 세포의 노화와 수명에 직접적인 영향을 미치는 것으로 인식되므로, 텔로미어 길이의 단축을 억제할 수 있는 물질이나 추출물은 세포노화를 억제시킬 수 있을 것으로 기대된다. 이외에도 여러 가지 가설이 있지만 이러한 가설은 서로 상반된 것이 아니라 서로 보완적으로 작용하여 노화를 설명하고 있다.Telomeres consist of a unique structure in which the TTAGGG sequence is repeated as the terminal part of the eukaryotic chromosome. Especially, in the part of guanine (G), the chromosome is stabilized by forming a very stable G-quartet structure through hydrogen bonding with each other. Plays an important role in protection However, as cell division continues, telomeres become shorter in length and lose their protective function, resulting in instability, lumping, or loss of chromosomes, which eventually no longer divide and lead to apotosis. Harley et al. Reported that telomeres shortened with passage of normal human cells, and Vaziri et al. Reported that cells obtained from older people had shorter telomere lengths and fewer cell divisions even when cultured (Harley). , CB, Futcher, AB, Greider, CW Telomeres shorten during aging of human fibroblasts., Nature , 345 : 458-460, (1990); Vaziri, H., Schachter, F., Uchida, I., Wei, L. , Zhu, X., Effros, R., Cohen, D., Harley, CB Loss of telomeric DNA during aging of normal and trisomy 21 human lymphocytes., Am. J. Hum. Genet ., 52 : 661-667, ( 1993). In addition, recent studies have reported that oxidative stress affects telomere length shortening (Furumoto, K., Inoue, E., Nagao, N., Hiyama, E., Miwa, N., Age -dependent telomere shortening is slowed down by enrichment of intracellular vitamin C via suppression of oxidative stress.Life Sci ., 63 : 935-948, (1998); Von Zglinicki, T., Role of oxidative stress in telomere length regulation and replicative senescence ..., Ann NY Acad Sci , 908:. 99-110, (2000)). Since the shortening of the telomere length is recognized to have a direct effect on the aging and lifespan of the cells, it is expected that substances or extracts capable of suppressing the shortening of the telomere length may inhibit cell aging. There are many other hypotheses, but these hypotheses do not contradict each other but complement each other to explain aging.

한편, 조구등(Uncaria sinensis, Rubiaceae)은 한방에서 고혈압 치료제, 해열 진경 진정제로 사용되어 왔으며(상해과학기술출판사, 중약대사전, 소학관, p. 1485, (1985); 이상인, 본초학, 의약사, p. 471, (1975)), 그 주요 성분은 테트라사이클릭(tetracyclic) 또는 펜타사이클릭 헤테로요힘바인(pentacyclic heteroyohimbine) 계, 옥시인돌(oxyindole) 계의 알칼로이드로 보고되었다(Haginiwa, J., Sakai, S., Aimi, N., Yamanaka, E., Shinma, N. Studies of plant containing indole alkaloids. On the alkaloids of Uncaria rhynchophylla Miq. Yakugaku Zasshi, 93:448, (1973); Nozoye, T., Shibanuma, Y., Shigehisa, A. Studies on Uncaria alkaloids. Separation of rhinchophylline and corynoxeine. Yakugaku Zasshi, 95:758 (1975)). 테트라사이클릭 옥시인돌계 알칼로이드인 코리노제인(corynoxeine), 린코필린(rhynchophylline), 이소코리노세인(isocorynoxeine), 이소린코필린(isorhynchophylline) 등이 Ca2+ 길항작용에 의해 혈압강하 작용을 나타낸다고 보고되었고(Endo, K., Oshima, Y., Kikuchi, H., Koshihara, Y., Hikino, H. Hypotensive principles of Uncaria hooks. J. Med. Plant Res., 49:188, (1983); Joji, Y., Shuji, M., Hisashi, M., Goro, K. Screening for calcium antagonists in natural products. The active principles of Uncariae ramulus et uncus. Nippon Yakurigaku Zasshi, 90:133, (1987)), 조구등에서 분리된 알칼로이드 성분이 글루탐산(glutamate)에 의한 신경손상을 보호한다는 효과도 보고되었다(Shimada, Y., Goto, H., Itoh, T., Sakakibara, I., Kubo, M., Sasaki, H., Terasawa, K. Evaluation of the protective effects of alkaloids isolated from the hooks and stems of Uncaria sinensis on glutamate-induced neuronal death in cultured cerebellar granule cells from rats. J. Pharm. Pharmacol., 51:715-722, (1999)). 그러나, 현재까지 세포 노화의 억제와 관련하여 조구등이 사용되었다는 구체적인 보고는 없는 실정이다.Meanwhile, Uncaria sinensis (Rubiaceae) has been used as an antihypertensive and antipyretic sedative in Chinese medicine (Shanghai Science and Technology Publishing House, Chinese Medicine Dictionary, Small Hakwan, p. 1485, (1985); Lee Sang-in, Herbology, Pharmacist, p. 471, (1975)), the main component of which has been reported as an alkaloid of tetracyclic or pentacyclic heteroyohimbine type, oxyindole type (Haginiwa, J., Sakai, S). ., Aimi, N., Yamanaka, E., Shinma, N. Studies of plant containing indole alkaloids.On the alkaloids of Uncaria rhynchophylla Miq.Yakugaku Zasshi , 93 : 448, (1973); Nozoye, T., Shibanuma, Y , Shigehisa, A. Studies on Uncaria alkaloids.Separation of rhinchophylline and corynoxeine.Yakugaku Zasshi , 95 : 758 (1975)). It is reported that tetracyclic oxyindole-based alkaloids such as corynoxeine, rhynchophylline, isochorynoxeine, and isorhynchophylline have hypotensive effects due to Ca 2+ antagonism. Endo, K., Oshima, Y., Kikuchi, H., Koshihara, Y., Hikino, H. Hypotensive principles of Uncaria hooks.J. Med. Plant Res ., 49 : 188, (1983); Joji, Y., Shuji, M., Hisashi, M., Goro, K. Screening for calcium antagonists in natural products.The active principles of Uncariae ramulus et uncus.Nippon Yakurigaku Zasshi , 90 : 133, (1987)), Has been reported to protect neuronal damage caused by glutamate (Shimada, Y., Goto, H., Itoh, T., Sakakibara, I., Kubo, M., Sasaki, H., Terasawa, K. Evaluation of the protective effects of alkaloids isolated from the hooks and stems of Uncaria sinensis on glutamate-induced neuronal death in cultur ed cerebellar granule cells from rats.J. Pharm. Pharmacol ., 51 : 715-722, (1999)). However, there have been no specific reports of the use of light bulbs in connection with the inhibition of cellular aging.

이에, 본 발명자들은 산화적 스트레스를 억제할 수 있는 물질로서 텔로미어 길이 단축 억제 및 피부노화 억제 활성을 나타내는 물질을 찾고자 노력한 결과, 알콜을 이용하여 추출한 조구등 추출물이 강한 항산화 활성으로 산화적 스트레스에 의한 세포보호 작용을 나타내며, 텔로미어의 길이 단축을 유의성 있게 억제시킬 수 있음을 밝히고, 이를 이용한 세포노화 억제용 화장품 및 식품 첨가물을 제공함으로써 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors have tried to find a substance that can suppress the oxidative stress telomere length shortening and skin aging inhibitory activity, as a result, the extract of the light bulbs extracted with alcohol has a strong antioxidant activity cell oxidative stress The present invention was completed by revealing a protective action, significantly shortening the length of telomeres, and providing a cosmetic and food additive for inhibiting cell aging using the same.

본 발명의 목적은 세포에 대한 노화 억제 작용을 하는 조구등 추출물 및 이를 유효성분으로 함유하는 세포 노화 억제용 화장품 및 세포 노화 억제용 식품 첨가물을 제공하는 것이다. It is an object of the present invention to provide a composition for inhibiting aging of cells and the like and extracts for cell aging and food additives for inhibiting cell aging containing the same as an active ingredient.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 세포에 대한 노화 억제 작용을 하며, 알콜을 추출용매로 사용하여 추출되는 조구등 추출물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention has an anti-aging effect on the cells, and provides an extract of the morning-light and the like extracted by using alcohol as an extraction solvent.

또한, 본 발명은 상기 조구등 추출물을 함유하는 세포 노화 억제용 화장품을 제공한다.In addition, the present invention provides a cosmetic for inhibiting cell aging containing the extract, such as light bulbs.

또한, 본 발명은 상기 조구등 추출물을 유효성분으로 함유하는 세포 노화 억제용 식품 첨가물을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a food additive for inhibiting cell aging containing the extract as an active ingredient.

또한, 본 발명은 상기 조구등 추출물을 유효성분으로 함유하는 세포 노화 억제제를 제공한다.In another aspect, the present invention provides a cell aging inhibitor containing the extract as an active ingredient.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 세포에 대한 노화 억제 작용을 하며, 알콜을 추출용매로 사용하여 추출되는 조구등 추출물을 제공한다.The present invention acts to inhibit the aging of the cells, and provides an extract of the morning-light and the like extracted by using alcohol as an extraction solvent.

본 발명의 노화 억제 작용을 하는 조구등 추출물은 알콜 등의 유기 용매를 이용한 통상적인 방법으로 조구등을 추출함으로써 제조된다. 상기에서, 알콜로는 메탄올, 에탄올, 프로판올 또는 부탄올을 사용할 수 있으며, 이중에서 에탄올을 사용하는 것이 바람직하다.The light bulb extract having an anti-aging effect of the present invention is prepared by extracting the light bulbs in a conventional manner using an organic solvent such as alcohol. In the above, alcohol, methanol, ethanol, propanol or butanol may be used, of which ethanol is preferred.

본 발명자들은 노화의 원인으로 알려진 세포내 산화 및 텔로미어(telomere) 단축에 대한 억제활성을 측정한 결과, 본 발명의 조구등 추출물이 처리된 경우에 각각의 실험에서 유의성 있는 결과를 나타내었다. 구체적으로, DPPH 라디칼(radical) 소거 및 지질과산화 억제 실험에서는 각각 IC50 값이 26.5, 15.1 ㎍/㎖로 강한 항산화활성을 나타내었고(표 1표 2 참조), t-BuOOH를 이용한 과산화지질 모델에서는 본 발명의 조구등 추출물을 3-30 ㎍/㎖의 농도로 처리했을 때 70.6 내지 86.0%의 세포보호작용을 나타내었다(도 1 참조). 또한, UV B를 조사하여 DNA 사슬 절단을 유도시켰을 때에도 조구등 추출물을 3 ㎍/㎖ 처리한 결과 유의성 있게 DNA 사슬 절단을 억제하였으며, UV A를 조사하여 세포내 산화적 스트레스를 증가시키는 실험에서도 조구등 추출물에 의해 뚜렷하게 억제되었다(도 2도 3 참조). 피부노화 억제를 위한 텔로미어 단축 억제 실험에서도 조구등 추출물을 3 ㎍/㎖ 씩 연속적으로 투여한 결과 투여하지 않은 대조군에 비해 인간 피부 각질세포(keratinocyte)의 수명이 2.05배 연장되는 것으로 나타났다(도 5도 6 참조). 이러한 세포의 수명연장 효과는 조구등 추출물이 각질세포의 텔로미어 DNA 길이가 짧아지는 것을 억제하기 때문에 나타난 것이며, 그 결과는 32-72일 동안 연속 배양된 다양한 연령의 세포들로부터 추출된 DNA의 서던 블롯(southern blot) 결과로부터 확인할 수 있다(도 4 참조). 하나의 각질세포 당 세포분열에 의해 발생된 세포들의 전체 수는 본 발명의 조구등 추출물을 처리함으로써 50,000배 증가하였다(도 7 참조).The present inventors measured the inhibitory activity against intracellular oxidation and telomere shortening, which are known to be the cause of aging, and showed significant results in each experiment when the light bulb extract of the present invention was treated. Specifically, the DPPH radical scavenging and lipid peroxidation inhibition experiments showed strong antioxidant activity with IC 50 values of 26.5 and 15.1 ㎍ / ml, respectively (see Table 1 and Table 2 ), and lipid peroxide model using t-BuOOH. In the present invention, when treated with a concentration of 3-30 ㎍ / ㎖, the extract of the present invention showed a cell protective action of 70.6 to 86.0% (see Fig. 1 ). In addition, when the DNA chain cleavage was induced by irradiating UV B, 3 ㎍ / ml of the crude light bulb extract was significantly inhibited, and DNA chain cleavage was significantly inhibited. Was clearly inhibited (see FIGS . 2 and 3 ). In the telomere shortening inhibition experiment for inhibiting skin aging, the lifespan of human dermal keratinocytes was extended by 2.05 times as compared to the control group which was not administered to the control group of 3 ㎍ / ml of the light bulbs ( FIG. 5 and FIG . 5) . 6 ). The prolonged lifespan of these cells was due to the inhibition of the shortening of telomere DNA of keratinocytes, resulting in a Southern blot of DNA extracted from cells of various ages cultured continuously for 32-72 days. southern blot) results (see FIG. 4 ). The total number of cells generated by cell division per one keratinocyte was increased by 50,000 times by treating the extract of the light bulb of the present invention (see FIG. 7 ).

또한, 본 발명은 상기 조구등 추출물을 함유하는 세포 노화 억제용 화장품을 제공한다.In addition, the present invention provides a cosmetic for inhibiting cell aging containing the extract, such as light bulbs.

상기에서 화장품의 종류에는 영양크림, 로션 및 스킨 등이 있으나 반드시 여기에 국한되는 것은 아니다.The kind of cosmetic in the above, but there are nutrition cream, lotion and skin, but is not necessarily limited thereto.

본 발명의 조구등 추출물을 함유하는 화장품의 제조함에 있어서, 통상적으로 함유되는 화장품 조성물에 본 발명의 조구등 추출물이 1 내지 15 중량%, 바람직하게는 2 내지 10 중량%의 양으로 첨가된다.In the preparation of cosmetics containing the extract of the light bulb of the present invention, the light bulb extract of the present invention is added to the cosmetic composition usually contained in an amount of 1 to 15% by weight, preferably 2 to 10% by weight.

또한, 본 발명은 상기 조구등 추출물을 유효성분으로 함유하는 세포 노화 억제용 식품 첨가물을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a food additive for inhibiting cell aging containing the extract as an active ingredient.

본 발명의 조구등 추출물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조구등 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에는 본 발명의 조구등 추출물이 원료에 대하여 0.1 내지 15 중량%, 바람직하게는 0.2 내지 10 중량%의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있음은 확실하다.In the case of using the light bulb extract of the present invention as a food additive, the light bulb extract may be added as it is or used with other food or food ingredients, and may be appropriately used according to a conventional method. The blending amount of the active ingredient can be suitably determined according to the purpose of its use (prevention, health or therapeutic treatment). In general, in the preparation of food or beverage, the extract of the light bulb of the present invention is added in an amount of 0.1 to 15% by weight, preferably 0.2 to 10% by weight based on the raw materials. However, in the case of long-term intake for health and hygiene or health control, the amount may be below the above range, and the active ingredient may be used in an amount above the above range because there is no problem in terms of safety. Is sure.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.There is no particular limitation on the kind of food. Examples of the food to which the substance can be added include dairy products including meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, ice cream, various soups, drinks, tea, drinks, Alcoholic beverages and vitamin complexes, and the like and include all of the health foods in the conventional sense.

또한, 본 발명은 상기 조구등 추출물을 유효성분으로 함유하는 세포 노화 억제제를 제공한다.In another aspect, the present invention provides a cell aging inhibitor containing the extract as an active ingredient.

본 발명의 세포 노화 억제제는 통상적으로 사용되는 부형제, 붕해제, 감미제, 활택제, 향미제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 통상적인 방법에 의해 정제, 캅셀제, 산제, 과립제, 현탁제, 유제, 시럽제, 기타 액제로 제형화될 수 있다.The cell aging inhibitor of the present invention may further include conventionally used excipients, disintegrants, sweeteners, lubricants, flavoring agents, etc., tablets, capsules, powders, granules, suspensions, emulsions, It can be formulated into syrups, other liquids.

구체적으로 본 발명의 세포 노화 억제제는 경구 투여용 제형, 예를 들면 정제, 트로치제(troches), 로젠지(lozenge), 수용성 또는 유성현탁액, 조제분말 또는 과립, 에멀젼, 하드 또는 소프트 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르제(elixirs)로 제제화된다. 정제 및 캡슐 등의 제형으로 제제하기 위해 락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀룰로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제; 디칼슘 포스페이트와 같은 부형제; 옥수수 전분 또는 고구마 전분과 같은 붕해제; 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 칼슘, 스테아릴푸마르산 나트륨 또는 폴리에틸렌글리콜 왁스와 같은 윤활유가 함유된다. 캡슐제형의 경우는 상기에서 언급한 물질 이외에도 지방유와 같은 액체 담체를 함유한다.Specifically, the cell aging inhibitor of the present invention may be formulated for oral administration such as tablets, troches, lozenges, aqueous or oily suspensions, preparations or granules, emulsions, hard or soft capsules, syrups or It is formulated with elixirs. Binders such as lactose, saccharose, sorbitol, mannitol, starch, amylopectin, cellulose or gelatin for preparation in formulations such as tablets and capsules; Excipients such as dicalcium phosphate; Disintegrants such as corn starch or sweet potato starch; Lubricants such as magnesium stearate, calcium stearate, sodium stearyl fumarate or polyethylene glycol wax. Capsules contain liquid carriers, such as fatty oils, in addition to the substances mentioned above.

또한, 본 발명의 세포 노화 억제제는 비경구로 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식에 의한다. 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위해서는 본 발명의 조구등 추출물을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고 이를 앰플 또는 바이알의 단위 투여형으로 제제한다.In addition, the cell aging inhibitor of the present invention can be administered parenterally, parenteral administration is by subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection or intrathoracic injection injection method. To formulate into parenteral formulations, the bulbous extract of the present invention is mixed in water with a stabilizer or buffer to prepare a solution or suspension, which is formulated in unit dosage forms of ampoules or vials.

본 발명에 따른 유효성분의 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 불활성화율 및 배설속도, 환자의 연령, 성별 및 상태, 치료할 질병의 중증 정도에 따라 적절히 선택되나, 경구 투여제의 경우 일반적으로 성인에게 1일에 체중 1 ㎏당 본 발명의 조구등 추출물을 2∼200 ㎎의 양으로 1회 내지 수회 나누어 투여할 수 있으며, 10∼100 ㎎의 양으로 투여하는 것이 바람직하다.The dosage of the active ingredient according to the present invention is appropriately selected according to the absorption rate, inactivation rate and excretion rate of the active ingredient in the body, the age, sex and condition of the patient, the severity of the disease to be treated, but in the case of oral administration in general Adults can be administered once to several times in the amount of 2 to 200 mg of the extract of the composition of the present invention per kilogram of body weight per day, it is preferable to administer in an amount of 10 to 100 mg.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of examples.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.However, the following examples are merely to illustrate the invention, but the content of the present invention is not limited to the following examples.

<실시예 1> 조구등 추출물의 제조Example 1 Preparation of Extracts

본 발명에서 사용한 조구등은 서울시 소재의 진형무역에서 구입하여 감정한 것을 사용하였으며, 확증표본은 (주)한국신약 자광연구소 생약실험실에 보관되어있다. 먼저, 조구등을 적당히 세절한 후 1 kg의 조구등에 95%의 EtOH 3 ℓ를 첨가한 후 실온에서 2주간 추출하였고, 추출물을 완전히 건조시킨 후 무게를 측량하였다.Jogu, etc. used in the present invention was used by the appraisal purchased from Jinhyeong Trading Co., Ltd. in Seoul, and the confirmed sample is stored in the herbal medicine laboratory of Korea New Drug Magnetic Light Research Institute. First, after properly slicing the bulbs, 3 l of 95% EtOH was added to 1 kg of bulbs and extracted for 2 weeks at room temperature. The extracts were completely dried and weighed.

그 결과, 250 g의 조구등 추출물을 확보하였다.As a result, 250 g of light bulb extract was obtained.

<실험예 1> 조구등 추출물의 항산화활성 측정Experimental Example 1 Measurement of Antioxidant Activity of Extracts

<1-1> DPPH 라디칼의 소거 활성 측정<1-1> Determination of Scavenging Activity of DPPH Radicals

96 웰 플레이트에 본 발명의 조구등 추출물을 DMSO에 녹여 10 ㎕를 분주하고 에탄올에 용해된 2.0×10-4 M 농도의 DPPH (Sigma사) 용액 190 ㎕를 첨가한 후 실온에서 30분간 반응시켰고 각 반응액의 흡광도를 517 ㎚에서 측정하였다. 대조구로는 시료 대신 10 ㎕의 DMSO를 사용하였으며, DPPH 라디칼을 50% 소거시키는 시료의 농도를 IC50로 하였다. 이때, IC50 수치는 다섯 가지의 다른 농도를 사용한 실험을 세 번 수행하여 얻은 회귀선(regression line)에 의하여 결정되었다.Dissolve 10 μl of the bulbous bulb extract of the present invention in DMSO in a 96 well plate, add 190 μl of a 2.0 × 10 −4 M DPPH (Sigma) solution dissolved in ethanol, and react for 30 minutes at room temperature. The absorbance of the liquid was measured at 517 nm. As a control, 10 μl of DMSO was used instead of the sample, and the concentration of the sample that eliminates DPPH radicals by 50% was set to IC 50 . At this time, the IC 50 value was determined by the regression line obtained by performing three experiments using five different concentrations.

Acontrol : 시료를 첨가하지 않은 대조구의 흡광도A control : Absorbance of the control without added sample

Asample : 시료를 첨가한 반응구의 흡광도A sample : absorbance of the reaction sphere

그 결과, 조구등 추출물의 DPPH 라디칼 소거활성은 IC50 값이 26.5 ㎍/㎖로 나타났으며, 상기 결과로부터 양성 대조구로 사용했던 α-토코페롤 (IC50 26.0 ㎍/㎖)과 비슷한 정도의 라디칼 소거활성을 나타냄을 확인하였다 (표 1).As a result, the DPPH radical scavenging activity of the extract of Joong-gu etc. showed an IC 50 value of 26.5 ㎍ / ml, and the radical scavenging activity of α-tocopherol (IC 50 26.0 ㎍ / ml) was used as a positive control. It was confirmed to represent ( Table 1 ).

DPPH 라디칼에 대한 조구등 추출물의 항산화 활성Antioxidant Activity of the Extracts of Light Bulbs against DPPH Radicals DPPH 라디칼 소거 활성 IC50 (㎍/㎖)DPPH radical scavenging activity IC 50 (µg / ml) 조구등의 EtOH 추출물Early EtOH Extract 26.526.5 α-토코페롤α-tocopherol 26.026.0

<1-2> 지질과산화 억제활성 측정<1-2> Measurement of lipid peroxidation inhibitory activity

조구등 추출물 10 ㎕에 50 mM 농도의 K-P 완충용액 (pH 7.4, KH2PO4-KOH) 740 ㎕, 래트의 뇌 균질물 (rat brain homogenate) (10 ㎎ 단백질/㎖) 50 ㎕, 0.1 mM 농도의 FeSO4·7H2O 100 ㎕ 및 1 mM 농도의 아스코르빈산(ascorbic acid) 100 ㎕를 첨가한 후 37℃에서 30분간 반응시켰다. 반응액에 20% TCA (Sigma사) 수용액 250 ㎕를 가하여 반응을 정지시킨 후 50 mM NaOH 용액에 녹인 1% TBA (Sigma사) 250 ㎕를 첨가하고 95℃에서 5분간 가열하였다. 9,000 rpm에서 10분간 원심분리 시킨 후 상등액을 취해 532 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 각 시료의 지질과산화 억제활성은 대조구에 대한 MDA (malonedialdehyde)의 생성 감소 정도로써 산출하였으며, 지질과산화 반응을 50% 억제시키는 농도를 IC50로 하였다. 이때, IC50 수치는 다섯 가지의 다른 농도를 사용한 실험을 세 번 수행하여 얻은 회귀선에 의하여 결정되었다.10 μl of bulbous extract, 740 μl of 50 mM KP buffer (pH 7.4, KH 2 PO 4 -KOH), 50 μl of rat brain homogenate (10 mg protein / ml), 0.1 mM 100 μl of FeSO 4 · 7H 2 O and 100 μl of ascorbic acid at a concentration of 1 mM were added, followed by reaction at 37 ° C. for 30 minutes. After the reaction was stopped by adding 250 µl of 20% TCA (Sigma) aqueous solution to the reaction solution, 250 µl of 1% TBA (Sigma) dissolved in 50 mM NaOH solution was added and heated at 95 ° C for 5 minutes. After centrifugation at 9,000 rpm for 10 minutes, the supernatant was taken and the absorbance was measured at 532 nm. Lipid peroxidation inhibitory activity of each sample was calculated as the degree of reduced production of MDA (malonedialdehyde) to the control, the concentration to inhibit the lipid peroxidation reaction 50% was set to IC 50 . At this time, the IC 50 value was determined by the regression line obtained by performing three experiments using five different concentrations.

Acontrol : 시료를 첨가하지 않은 대조구의 흡광도A control : Absorbance of the control without added sample

Asample : 시료를 첨가한 반응구의 흡광도A sample : absorbance of the reaction sphere

Ablank : 시료 및 FeSO4·7H2O/아스코르빈산 용액을 첨가하지 않은 블랭크의 흡광도A blank : Absorbance of blank without sample and FeSO 4 · 7H 2 O / ascorbic acid solution

그 결과, 쥐 뇌 균질화물을 이용한 지질과산화 억제활성 측정에서도 IC50 값이 15.1 ㎍/㎖로 양성 대조구로 사용한 α-토코페롤의 경우 (IC50 16.0 ㎍/㎖)와 비슷한 정도의 강한 억제활성을 나타냄을 확인하였다 (표 2).As a result, in the measurement of lipid peroxidation inhibitory activity using the mouse brain homogenate, the IC 50 value was 15.1 μg / ml, and the α-tocopherol used as a positive control showed a strong inhibitory activity similar to that of (IC 50 16.0 μg / ml). It was confirmed ( Table 2 ).

지질과산화에 대한 조구등 추출물의 항산화 활성Antioxidant Activity of the Extracts of Cellulose Root on Lipid Peroxidation 지질과산화 억제 활성 IC50 (㎍/㎖)Lipid peroxidation inhibitory activity IC 50 (㎍ / mL) 조구등의 EtOH 추출물Early EtOH Extract 15.115.1 α-토코페롤α-tocopherol 16.016.0

<실험예 2> 과산화에 의한 세포사멸 억제효과 측정Experimental Example 2 Measurement of Inhibition of Apoptosis by Peroxidation

인체 피부 각질세포(keratinocyte)인 HaCaT 세포주를 대수기까지 증식시킨 후 24-웰 플레이트에 접종시키고 24시간동안 배양시켰다. 10%의 FBS와 MEM을 함유하는 조구등 추출물을 상기 세포에 첨가하여 2시간동안 배양시킨 후 세척하였다. 0.02%의 에탄올-HBSS (Gibco사) 1 ㎖에 용해시킨 t-BuOOH(tert-butyl- hydroperoxide)을 세포에 24시간 투여하여 과산화를 유발시킨 후, 세포에 5 μM 농도의 에티디움 호모다이머(Et2, Millipore)를 30분간 반응시켰고, Millipore microplate fluorometer Cytofluor 2350(excitation: 485 nm, emission: 645 nm)을 이용하여 세포사멸을 측정하였다(Fujiwara M, Nagao N., Monden K., Misumi M., Kageyama K., Yamamoto K., Miwa N., Free Rad. Res., 27:97-104, (1996)).HaCaT cell lines, human skin keratinocytes, were grown to log phase and then inoculated in 24-well plates and incubated for 24 hours. A light bulb extract containing 10% FBS and MEM was added to the cells, incubated for 2 hours, and washed. T-BuOOH (tert-butyl-hydroperoxide) dissolved in 1 ml of 0.02% ethanol-HBSS (Gibco Co., Ltd.) was administered to the cells for 24 hours to induce peroxidation, and then the cells were treated with 5% M ethidium homodimer (Et). 2 , Millipore) was reacted for 30 minutes, and apoptosis was measured using a Millipore microplate fluorometer Cytofluor 2350 (excitation: 485 nm, emission: 645 nm) (Fujiwara M, Nagao N., Monden K., Misumi M., Kageyama K., Yamamoto K., Miwa N., Free Rad.Res. , 27 : 97-104, (1996)).

그 결과, 인체 피부 각질세포인 HaCaT 세포의 생존율은 700 μM t-BuOOH 처리에 의해 24시간 동안 28.0%로 감소하였으나, 조구등 추출물을 3 내지 30 ㎍/㎖의 농도로 처리하였을 경우에는 70.6 내지 86.0%의 세포 생존율을 보여, 본 발명의 조구등 추출물이 현저한 세포보호효과를 나타냄을 확인하였다(도 1).As a result, the survival rate of HaCaT cells, which are human skin keratinocytes, was reduced to 28.0% for 24 hours by 700 μM t-BuOOH treatment, but 70.6 to 86.0% when the bulbous bulb extract was treated at a concentration of 3 to 30 μg / ml. It was confirmed that the cell survival rate of the present invention, such as extracts of the present invention showed a significant cytoprotective effect ( Fig. 1 ).

<실험예 3> UV 조사에 대한 세포보호 효과 측정Experimental Example 3 Measurement of Cytoprotective Effect on UV Irradiation

인체 피부 각질세포인 HaCaT 세포주를 혈청이 첨가되지 않은 K-GM 배지(Kurabo 사)에서 배양시킨 후 24-웰 플레이트에 0.5∼4×104 세포/2 ㎝2가 되도록 접종시켰고 18시간동안 배양시켰다. 조구등 추출물을 투여한 후 2시간동안 배양시킨 후 PBS로 세척하였다. Spectronics UV transilluminator EBF-260(maximal wavelength, 312 nm; a half-peak intensity range, 297-328 nm)을 이용하여 세포에 UV를 조사한 후, UV 조사된 세포를 1-7시간 배양시키고 5 μM 농도의 Et2(Millipore 사)를 투여하였다. 30분 후 Millipore microplate fluorometer Cytofluor 2350(excitation: 485 nm, emission: 645 nm)을 이용하여 형광의 정도를 측정하였다. 인체 피부 각질세포인 HaCaT 세포를 35 mJ/cm2의 UV B로 조사하면 핵의 DNA 사슬이 끊어지는데 이를 TUNEL법을 사용하여 정량하였다(Kanatate K., Nagao N., Sugimoto M., Kageyama K., Fujimoto T., Miwa N., Cellular and Molecular Biology Research, 41:561-567, (1995)). 또한, HaCaT 세포주를 45 mJ/cm2의 UV A로 조사하면 과산화수소와 다양한 과산화물들이 생성되어 세포내 산화적 스트레스가 증가되는데, 이것을 산화환원 형광염료 전구물질인 CDCFH-DA를 이용하여 형광그래프 정량을 실시하였다. 이때, 세포 찌거기(debris)와 세포막이 파괴된 세포들은 Et2로 염색하였을 때 형광 현미경상에서 밝게 나타난다(三羽信比古, バイオ抗酸化劑プロビタミンC, 皮膚障害·ガン·老化の防御と實用化硏究, フレグランスジャ, ナル社, 東京, 93-144, (1999)).Human skin keratinocytes were cultured in serum-free K-GM medium (Kurabo), and then inoculated in 24-well plates to 0.5-4 × 10 4 cells / 2 cm 2 and incubated for 18 hours. . After inoculation with crude extract, the cells were incubated for 2 hours and washed with PBS. After UV irradiation of the cells using the Spectronics UV transilluminator EBF-260 (maximum wavelength, 312 nm; a half-peak intensity range, 297-328 nm), the UV-irradiated cells were incubated for 1-7 hours and 5 μM Et 2 (Millipore) was administered. After 30 minutes, the degree of fluorescence was measured using a Millipore microplate fluorometer Cytofluor 2350 (excitation: 485 nm, emission: 645 nm). HaCaT cells, which are human skin keratinocytes, were irradiated with UV B of 35 mJ / cm 2 and the DNA chains of the nucleus were cut off and quantitated using the TUNEL method (Kanatate K., Nagao N., Sugimoto M., Kageyama K. , Fujimoto T., Miwa N., Cellular and Molecular Biology Research , 41 : 561-567, (1995)). In addition, irradiation of HaCaT cell line with UV A of 45 mJ / cm 2 produces hydrogen peroxide and various peroxides to increase intracellular oxidative stress, which is determined by fluorescence graph quantitation using CDCFH-DA, a redox fluorescent dye precursor. Was carried out. At this time, cells debris and cell membranes that were destroyed appear bright under fluorescence microscopy when stained with Et 2 (Samsung Co., Ltd. Chemical, Fragrance, Nar, Tokyo, 93-144, (1999)).

그 결과, 조구등 추출물을 3 ㎍/㎖의 농도로 전처리한 경우에는 UV B에 의한 DNA 사슬 절단이 현저하게 감소되었으며 (도 2), 또한 UV A를 조사한 경우에도 3 ㎍/㎖ 농도의 조구등 추출물을 처리한 경우에는 세포내 산화적 스트레스 증가가 현저하게 억제되었음을 확인하였다 (도 3).As a result, when pre-treatment of the light bulbs extract at a concentration of 3 ㎍ / ㎖, DNA chain cleavage by UV B was significantly reduced ( Fig. 2 ), and even when the UV A irradiation, the extracts of 3 ㎍ / ㎖ In the case of treatment, it was confirmed that the increase in intracellular oxidative stress was significantly suppressed ( FIG. 3 ).

<실험예 4> 텔로미어 길이 단축 억제활성 측정Experimental Example 4 Measurement of Telomere Shortening Inhibition Activity

본 발명의 조구등 추출물의 텔로미어 길이 단축 억제활성을 측정하기 위하여, 본 실험예에서는 피부의 또 다른 주성분인 섬유아세포를 인간 신생아 표피로부터 분리한 후 유리딘 브로마이드 (uridine bromide)로 처리하여 제조한 NHEK-F 세포를 사용하였으며, 이를 10%의 FBS를 포함하는 DMEM 배지에서 배양시켰다.In order to measure the telomeres shortening inhibitory activity of the extracts of the present invention, NHEK- was prepared by separating fibroblasts, another main component of the skin, from the human neonatal epidermis and treating with uridine bromide. F cells were used and cultured in DMEM medium containing 10% of FBS.

<4-1> 서던 블롯에 의한 텔로미어의 길이 측정<4-1> Length measurement of telomeres by Southern blot

게놈 DNA는 이소퀵 핵산 추출 키트 (ORCA Research Inc.)를 이용하여 각각의 연령의 세포들로부터 추출하였으며, 추출된 DNA는 TE 버퍼(10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0)에 용해시켜 4℃에서 보관하였다. 1.5 ㎖ 튜브에 10×H 버퍼 (TaKaRa 사) 2 ㎕, 추출된 게놈 DNA 용액 2 ㎕ 및 15 ㎕의 3차 증류수를 넣어 전체를 19 ㎕가 되도록 한 후 제한 효소 Hinf I (6 U/㎕, TaKaRa) 1 ㎕를 첨가하였고, 37℃에서 3 내지 4시간 반응시킨 후 전기영동을 실시하였다. 아가로스(type I, Sigma) 겔의 농도는 브리지 부분이 1%, 베드부분이 0.8%가 되도록 겔판을 작성하였으며(마리솔 KS-8405, 20×14 cm), 이때 1×Boyer 버퍼 (50 mM Tris-HCl, 20 mM sodium acetate, 2 mM EDTA, 18 mM NaCl, pH 8.0)를 사용하여 제조하였다. 마커로는 1 kb 길이의 DNA ladder (GIBCO BRL) 0.5 ㎍을 사용하였으며, 로딩 버퍼 3 ㎕ 씩을 넣고 35 V/cm로 20시간동안 전기영동을 실시하였다. 전기영동이 완료된 후 2 ㎍/㎖ 농도의 EtBr로 15분간 염색하였으며, 이를 UV 트랜스 일루미네이터에서 확인하였다. 이어서 겔을 0.25 N HCl에 넣어 15분간 진탕한 후 증류수로 2회 세척하였다. 세척한 겔을 변성액 (0.2 N NaOH, 0.6 M NaCl)에 담그고 실온에서 25분간 진탕한 뒤 증류수로 3회 세척하였다. 6×SSC를 채운 블로팅 장치에 니트로셀룰로스 막 Optitran BA-S 85 (Schleicher & Schuel), 3 MM 노지, 페이퍼 타월, 유리판, 추(2 ㎏)의 순서대로 얹고 하루 밤 동안 블로팅시켰다. 블로팅 완료 후에 막 필터를 3×SSC에 침지시키고 가볍게 수분을 제거한 후 UV 트랜스 일루미네이터에서 웰의 위치를 기입하였다. 노지에 꽂아 80℃에서 하룻밤 동안 베이킹(baking)하였고, 변성된 연어 정충 (denatured salmon sperm) DNA (Wako)를 사용하여 65℃에서 전교잡반응 (prehybridization)을 실시한 후, 교잡반응 버퍼(1×Denhan solution, 1 M NaCl, 50 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA, 0.1% SDS, 50 ㎍/㎖의 변성된 연어 정충 DNA)와 5′-말단에 32P-표지된 (TTAGGG)4 를 사용하여 50℃에서 교잡반응을 실시하였다. 세정액(4×SSC/0.1% SDS)에 막을 침지시키고 55℃에서 15분동안 진탕하였다. 막을 건조시킨 후 랩으로 덮고 X-ray 필름(Scientific Imaging Film, Kodak)과 함께 증감지를 붙인 카세트에 세트하여 -80℃에서 하룻밤동안 방사선사진(autoradiography)을 실시하였다. 현상한 필름과 막의 위치를 합해 매직으로 웰의 위치를 표시하였으며, TRFs의 밀도 피크를 laser densitometer UltroScan XL (Pharmacia)로 검출하여 그 이동도를 산출하였다(Furumoto K., Inoue E., Nagao N., Hiyama E., Miwa N., Life Science, 63:935-948, (1998); 三羽信比古, バイオ抗酸化劑プロビタミンC, 皮膚障害·ガン·老化の防御と實用化硏究, フレグランスジャ, ナル社, 東京, 93-144, (1999)).Genomic DNA was extracted from cells of each age using an isoquic nucleic acid extraction kit (ORCA Research Inc.), and the extracted DNA was dissolved in TE buffer (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0). Store at 4 ° C. Add 2 µl of 10 × H buffer (TaKaRa), 2 µl of extracted genomic DNA solution and 15 µl of tertiary distilled water to 1.5 µl tube to make 19 µl total, and then limit the enzyme Hinf I (6 U / µl, TaKaRa). ) 1 μl was added and reacted at 37 ° C. for 3 to 4 hours, followed by electrophoresis. The gel plate was prepared so that the concentration of agarose (type I, Sigma) gel was 1% in the bridge part and 0.8% in the bed part (Marisol KS-8405, 20 × 14 cm), where 1 × Boyer buffer (50 mM Tris -HCl, 20 mM sodium acetate, 2 mM EDTA, 18 mM NaCl, pH 8.0). As a marker, 0.5 µg of a 1 kb DNA ladder (GIBCO BRL) was used. 3 µl of loading buffer was added and electrophoresis was performed at 35 V / cm for 20 hours. After electrophoresis was completed, staining with EtBr of 2 ㎍ / ㎖ concentration for 15 minutes, which was confirmed in a UV trans-illuminator. The gel was then shaken for 15 minutes in 0.25 N HCl and washed twice with distilled water. The washed gel was immersed in a denatured solution (0.2 N NaOH, 0.6 M NaCl), shaken for 25 minutes at room temperature, and washed three times with distilled water. A blotting device filled with 6 × SSC was placed in the order of nitrocellulose membrane Optitran BA-S 85 (Schleicher & Schuel), 3 MM noji, paper towels, glass plates, weights (2 kg) and blotted overnight. After blotting, the membrane filter was immersed in 3 × SSC, lightly dehydrated and the wells positioned in the UV transilluminator. Baked at 80 ° C. overnight at 80 ° C., prehybridization at 65 ° C. using denatured salmon sperm DNA (Wako), and then hybridization buffer (1 × Denhan). solution, 1 M NaCl, 50 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA, 0.1% SDS, 50 μg / ml of denatured salmon sperm DNA) and 50 using 32 P-labeled (TTAGGG) 4 at the 5′-end. Hybridization reaction was carried out at ℃. The membrane was immersed in the wash solution (4 x SSC / 0.1% SDS) and shaken at 55 ° C. for 15 minutes. After the film was dried, the film was covered with a wrap, placed in a sensitized cassette together with an X-ray film (Scientific Imaging Film, Kodak), and subjected to autoradiography overnight at -80 ° C. The position of the wells was marked by combining the positions of the developed film and the film, and the density peaks of TRFs were detected by laser densitometer UltroScan XL (Pharmacia) to calculate the mobility (Furumoto K., Inoue E., Nagao N.). , Hiyama E., Miwa N., Life Science, 63 : 935-948, (1998); 三 羽 信 比 古, ビ オ 抗 酸化劑 プ ロ ビ タ ミ ン C, ガ, ガ ン 老化 の 防御 と 實用 化 硏 究,フ レ グ ラ ン ス ジ ャ, ナ ル company, Tokyo, 93-144, (1999)).

그 결과, 본 발명의 조구등 추출물을 처리하지 않은 대조 세포들의 경우, 텔로미어 DNA는 PDL 2.8일 때 12.0 kb에서 PDL 14.8일 때 7.9 kb로 점진적으로 단축되는 것으로 나타났다. 이와는 대조적으로 본 발명의 조구등 추출물을 연속 투여한 경우에는 텔로미어의 길이 단축이 억제되었다 (도 4도 6). 즉, 조구등 추출물이 투여된 세포들의 경우, 텔로미어의 단축 속도는 평균 159 bp/PDL로, 대조구의 342 bp/PDL 보다 느린 것으로 관찰되었다(도 6).As a result, in the control cells not treated with the extract of the light bulb of the present invention, the telomere DNA was gradually reduced from 12.0 kb when the PDL 2.8 to 7.9 kb when the PDL 14.8. In contrast, in the case of continuous administration of the light bulb extract of the present invention, the shortening of the telomeres was suppressed ( FIGS. 4 and 6 ). That is, in the case of the cells administered with the early morning light extract, the shortening rate of telomeres was 159 bp / PDL on average, which was observed to be slower than 342 bp / PDL of the control group ( FIG .

<4-2> 세포의 노화에 미치는 영향 측정<4-2> Measuring the Effects on Cell Aging

본 발명의 조구등 추출물이 각질세포인 NHEK-F 세포의 노화에 미치는 영향을 측정하기 위하여, 먼저 세포를 1:8의 희석 비율로 연속적으로 배양하였다. 세포들을 조구등 추출물을 첨가하지 않은 상태에서 약 3의 PDL (population doubling level)에 이르기까지 성장시키고, 이후 배양하는 동안 조구등 추출물을 3 ㎍/㎖씩 투여하였다. 배지교환은 동일한 농도의 조구등 추출물을 함유하는 신선하게 제조된 DMEM-10% FBE를 첨가하여 3일마다 수행하였다(Furumoto K., Inoue E., Nagao N., Hiyama E., Miwa N., Life Science, 63:935-948, (1998); 三羽信比古, バイオ抗酸化劑プロビタミンC, 皮膚障害·ガン·老化の防御と實用化硏究, フレグランスジャ, ナル社, 東京, 93-144, (1999)).In order to measure the effect of the extracts of the present invention on the aging of NHEK-F cells, keratinocytes, cells were first cultured continuously at a dilution ratio of 1: 8. Cells were grown to a population of about 3 PDL (population doubling level) without the addition of the light bulb extract, and then 3 μg / ml of the light bulb extract was administered during incubation. Medium exchange was performed every 3 days with the addition of freshly prepared DMEM-10% FBE containing the same concentration of crude bulb extract (Furumoto K., Inoue E., Nagao N., Hiyama E., Miwa N., Life). Science, 63 : 935-948, (1998); 羽 羽 信 比 古, 抗酸 化 比 プ ロ ビ タ ミ ン C, ガ, ン, 老化 の 防御 と 硏 究 化 硏 究, Fragrasja, Nar, Tokyo, 93- 144, (1999).

그 결과, 인간 피부 각질세포인 NHEK-F 세포의 수명은 본 발명의 조구등 추출물을 첨가하지 않은 대조군 (PDL 14.9)에 비해 조구등 추출물이 첨가된 세포들의 경우에 각각 PDL 30.5까지 연장되었다(도 5). 상기 결과로부터, 대조군의 최대 PDL와 비교하였을 때, 본 발명의 조구등 추출물에 의하여 세포의 수명이 약 2.05배 연장되었음을 알 수 있었다.As a result, the lifespan of NHEK-F cells, which are human skin keratinocytes, was extended to PDL 30.5 in the case of cells to which the light bulb extract was added compared to the control group without the light bulb extract of the present invention (PDL 14.9) ( FIG. 5 ). . From the above results, it can be seen that the life span of the cells was extended by about 2.05 times by the light bulb extract of the present invention when compared with the maximum PDL of the control group.

피부 각질세포 및 섬유아세포들은 통상적으로 자외선 조사, 지질 과산화, 건조한 상태 및 기계적 부상 및 피부 세포들에 대해 세포 파괴 작용을 발휘하는 모든 요인들에 의해 손상된다고 알려져 있다. 새로운 세포의 분열은 텔로미어 DNA가 임계 DNA 길이 (인간 피부 각질세포의 경우에는 7.9 내지 8.4 kb인 것으로 추정) 이상으로 유지되는 한 계속될 수 있는데, 이러한 관점에서 본 발명의 조구등 추출물은 텔로미어 DNA가 단축되는 속도를 지연시켜 임계치에 도달하는 속도를 늦춤으로써 세포분열 능력이 종료되는 주기를 연장시킬 수 있음을 알 수 있다(도 6).Cutaneous keratinocytes and fibroblasts are commonly known to be damaged by ultraviolet radiation, lipid peroxidation, dryness and mechanical injury and all factors exerting cell disruption on skin cells. The division of the new cells can continue as long as the telomere DNA is maintained above the critical DNA length (estimated to be 7.9 to 8.4 kb for human skin keratinocytes). It can be seen that it is possible to prolong the period at which cell division capacity is terminated by slowing down the rate of reaching the threshold by slowing the rate of reaching the threshold ( FIG. 6 ).

<실험예 5> 인간 피부 각질세포의 일생 세포 공급 능력에 미치는 영향 측정Experimental Example 5 Influence of Human Skin Keratinocytes on Lifetime Cell Supply Ability

하나의 세포가 생명 전반에 걸쳐 공급하는 세포의 수를 "일생 세포 공급 능력"이라고 한다. 본 발명자들은 인간 피부 각질세포인 NHEK-F 세포의 일생 세포 공급 능력에 본 발명의 조구등 추출물이 미치는 영향을 측정하였다.The number of cells that a cell supplies throughout life is called "lifetime cell supply capacity." The present inventors measured the effect of the extract of the light bulb of the present invention on the lifetime cell supply ability of NHEK-F cells, which are human skin keratinocytes.

그 결과, 인간 피부 각질세포인 NHEK-F 세포는 제 1 세포분열로부터 최종 세포분열에 이르기까지 세포의 생명 전반에 걸쳐 하나의 조상 세포당 전체수 3.02 × 104의 세포들을 공급하는 것으로 나타났으며, 본 발명의 조구등 추출물을 투여한 경우에는 일생 세포 공급 능력이 1.51 × 109으로 나타났다. 상기 결과로부터, 일생 세포 공급 능력의 증가는 대조군에 비해 조구등 추출물을 첨가한 경우에 50,000배 높게 나타남을 확인하였다(도 7).As a result, NHEK-F cells, which are human skin keratinocytes, provide a total number of cells of 3.02 × 10 4 per ancestral cell throughout the life of the cell from the first cell division to the final cell division. In the case of administering the extracts of the present invention, the cell supply capacity of the cells was found to be 1.51 × 10 9 . From the above results, it was confirmed that the increase in life-time cell supply capacity was shown to be 50,000 times higher when added to the extract of crude light ( Fig. 7 ).

세포내의 과산화는 텔로미어 DNA의 단일 스트랜드 분열을 제공할 수 있고 텔로미어의 길이를 증가시키는 효소를 코딩하는 유전자들을 손상시킬 수 있다. 이와 같이, DNA를 손상시키는 과산화물의 소거를 통해, 본 발명의 조구등 추출물은 텔로미어 DNA 길이의 단축을 방지할 수 있고, 이는 인간 피부 각질세포의 세포 공급 능력 증진 및 피부노화 방지에 효과를 나타낼 수 있으므로, 본 발명의 조구등 추출물은 피부 노화억제용 화장품 등의 개발에 유용하게 사용될 수 있다.Intracellular peroxidation can provide single stranded cleavage of telomere DNA and damage genes encoding enzymes that increase the length of telomeres. As such, through the scavenging of the peroxide damaging DNA, the extract of the present invention can prevent the shortening of the length of the telomere DNA, which can be effective in improving the cell supply capacity of human skin keratinocytes and preventing skin aging. , The composition of the present invention may be usefully used in the development of skin anti-aging cosmetics and the like.

<제제예 1> 조구등 추출물을 함유하는 화장품의 제조Preparation Example 1 Preparation of Cosmetics Containing Extracts, such as Headache

본 발명자들은 본 발명의 조구등 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품을 하기 표 3 내지 표 5와 같이 제조하였다.The inventors of the present invention prepared cosmetics containing the extract of the present invention as an active ingredient, as shown in Tables 3 to 5 .

<1-1> 영양크림의 제조<1-1> Preparation of nutrition cream

원료명Raw material name 분량(㎏)Quantity (kg) 세토스테아릴알콜Cetostearyl alcohol 2.802.80 밀난Smuggling 2.602.60 스테아린산Stearic acid 1.401.40 친유형모노스테아린산글리세린Lipophilic Monostearic Acid Glycerin 2.002.00 피이지-100 스테아레이트Fiji-100 Stearate 1.001.00 세스퀴올레인산소르비탈Sesquioleate Sorbate 1.401.40 호호바오일Jojoba oil 4.004.00 스쿠알란Squalane 3.803.80 폴리소르베이트 60Polysorbate 60 1.101.10 마카다이아오일Macadamia oil 2.002.00 초산토코페롤Tocopherol Acetate 0.200.20 메칠폴리실록산Methyl Polysiloxane 0.400.40 에칠파라벤Eichparaben 0.100.10 프로필파라벤Propylparaben 0.100.10 Euxyl K-400Euxyl K-400 0.100.10 1,3-부칠렌글리콜1,3-butylene glycol 7.007.00 메칠파라벤Methylparaben 0.050.05 글리세린glycerin 6.006.00 d-판데놀d-pandenol 0.200.20 조구등추출물Light bulb extract 3.503.50 상백피추출물Cereal Extract 2.002.00 갈조추출물Brown algae extract 1.501.50 당귀추출물Angelica Extract 0.800.80 의이안추출물Ian Extract 2.602.60 목단피추출물Bark Extract 0.800.80 마치현추출물March extract 3.003.00 감잎추출물Persimmon Leaf Extract 1.201.20 센텔라추출물Centella Extract 0.800.80 트리에탄올아민Triethanolamine 0.200.20 pt 41891pt 41891 0.200.20 p-H2OpH 2 O 47.1547.15 합계Sum 100100

<1-2> 로션의 제조<1-2> Preparation of Lotion

원료명Raw material name 분량(㎏)Quantity (kg) 세토스테아릴알콜Cetostearyl alcohol 1.601.60 스테아린산Stearic acid 1.401.40 친유형모노스테아린산글리세린Lipophilic Monostearic Acid Glycerin 1.801.80 피이지-100 스테아레이트Fiji-100 Stearate 2.602.60 세스퀴올레인산소르비탈Sesquioleate Sorbate 0.600.60 스쿠알란Squalane 4.804.80 마카다이아오일Macadamia oil 2.002.00 호호바오일Jojoba oil 2.002.00 초산토코페롤Tocopherol Acetate 0.400.40 메칠폴리실록산Methyl Polysiloxane 0.200.20 에칠파라벤Eichparaben 0.100.10 프로필파라벤Propylparaben 0.100.10 1,3-부칠렌글리콜1,3-butylene glycol 4.004.00 메칠파라벤Methylparaben 0.100.10 산탄검Xanthan Gum 0.100.10 글리세린glycerin 4.004.00 d-판데놀d-pandenol 0.150.15 알란토인Allantoin 0.100.10 조구등추출물Light bulb extract 2.602.60 당귀추출물Angelica Extract 2.502.50 녹차추출물Green Tea Extract 0.200.20 의이안추출물Ian Extract 2.002.00 목단피추출물Bark Extract 1.201.20 갈조추출물Brown algae extract 3.403.40 마치현추출물March extract 3.603.60 감잎추출물Persimmon Leaf Extract 1.201.20 센텔라추출물Centella Extract 0.800.80 카르보내(2% aq. Sol)Carbona (2% aq.Sol) 4.004.00 트리에탄올아민Triethanolamine 0.150.15 에탄올ethanol 3.003.00 pt 41891pt 41891 0.100.10 p-H2OpH 2 O 49.2049.20 합계Sum 100100

<1-3> 스킨의 제조<1-3> Preparation of Skin

원료명Raw material name 분량(㎏)Quantity (kg) 프로필렌글리콜Propylene glycol 8.008.00 메칠파라벤Methylparaben 0.100.10 산탄검Xanthan Gum 0.100.10 알란토인Allantoin 0.100.10 글리시리진산디칼륨Dipotassium glycyrrhinate 0.100.10 에칠렌디아민테트라초산디나트륨Ethylenediaminetetradiacetic acid sodium 0.050.05 피이지60 하이드로게네티드카스티오일Fiji 60 Hydrogenated Castioyl 0.100.10 조구등추출물Light bulb extract 5.005.00 갈조추출물Brown algae extract 3.603.60 당귀추출물Angelica Extract 2.402.40 의이안추출물Ian Extract 2.402.40 녹차추출물Green Tea Extract 1.001.00 목단피추출물Bark Extract 2.402.40 마치현추출물March extract 4.004.00 위치하젤추출물Witch Hazel Extract 3.503.50 센텔라추출물Centella Extract 1.001.00 이미다졸리디닐우레아Imidazolidinylurea 0.100.10 트리에탄올아민Triethanolamine 0.100.10 에탄올ethanol 2.502.50 pt 4291pt 4291 0.100.10 p-H2OpH 2 O 63.3563.35 합계Sum 100100

<제제예 2> 조구등 추출물을 함유하는 식품 및 음료의 제조Preparation Example 2 Preparation of Foods and Beverages Containing Extracts of Light Bulbs

본 발명자들은 상기 조구등 추출물을 유효성분으로 함유하는 식품 또는 음료 조성물을 하기와 같이 제조하였다.The present inventors prepared the food or beverage composition containing the above-mentioned extracts of the light bulbs as an active ingredient as follows.

<2-1> 츄잉껌의 제조<2-1> Preparation of Chewing Gum

껌베이스 20 %Gum base 20%

설탕 76.36 ∼ 76.76 %Sugar 76.36-76.76%

조구등 추출물 0.24 ∼ 0.64 %Headlight Lamp Extract 0.24 ~ 0.64%

후르츠향 1 %1% fruit flavor

물 2 %Water 2%

상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 츄잉껌을 제조하였다.Chewing gum was prepared using conventional methods using the above composition and content.

<2-2> 캔디의 제조<2-2> Preparation of Candy

설탕 50 ∼ 60 %50 to 60% sugar

물엿 39.26 ∼ 49.66 %Starch syrup 39.26-49.66%

조구등 추출물 0.24 ∼ 0.64 %Headlight Lamp Extract 0.24 ~ 0.64%

오렌지향 0.1 %Orange flavor 0.1%

상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 캔디를 제조하였다.Candy was prepared using conventional methods with the above composition and content.

<2-3> 비스켓의 제조<2-3> Preparation of Biscuits

박력1급 88 ㎏Force Class 1 88 kg

중력1급 76.4 ㎏Gravity First Class 76.4 ㎏

정백당 16.5 ㎏16.5 kg per white

식염 2.5 ㎏2.5 kg of salt

포도당 2.7 ㎏2.7 kg of glucose

팜쇼트닝 40.5 ㎏Palm shortening 40.5 kg

암모 5.3 ㎏5.3 kg of ammo

중조 0.6 ㎏Medium kg 0.6 kg

중아황산나트륨 0.55 ㎏0.55 kg sodium bisulfite

쌀가루 5.0 ㎏Rice flour 5.0 kg

비타민 B1 0.003 ㎏Vitamin B1 0.003 kg

비타민 B2 0.003 ㎏0.003 kg of vitamin B2

밀크향 0.16 ㎏Milk Flavor 0.16 ㎏

물 71.1 ㎏71.1 kg of water

전지분유 4 ㎏Whole milk powder 4 kg

대용분유 1 ㎏Substitute powder 1 kg

제일인산칼슘 0.1 ㎏0.1 kg of calcium phosphate

살포염 1 ㎏Spray salt 1 kg

분무유 25 ㎏25 kg of spray oil

조구등 추출물 0.1 ∼ 0.5 ㎏Cocktail Lamp Extract 0.1 ~ 0.5 ㎏

상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 비스켓을 제조하였다.Biscuits were prepared using conventional methods with the above composition and content.

<2-4> 아이스크림의 제조<2-4> Preparation of Ice Cream

유지방 10.0 %Milkfat 10.0%

무지유고형분 10.8 %Non-fat solids 10.8%

설탕 12.0 %Sugar 12.0%

물엿 3.0 %Starch syrup 3.0%

유화안정제(스팬,span) 0.5 %Emulsifying stabilizer (span) 0.5%

향료(스트로베리) 0.15 %Spices (Strawberries) 0.15%

물 63.31 ∼ 62.91 %Water 63.31-62.91%

조구등 추출물 0.24 ∼ 0.64 %Headlight Lamp Extract 0.24 ~ 0.64%

상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 아이스크림을 제조하였다.Ice cream was prepared using conventional methods using the above composition and content.

<2-5> 음료의 제조<2-5> Preparation of Drink

꿀 522 ㎎522 mg of honey

치옥토산아미드 5 ㎎Chioctosanamide 5 mg

니코틴산아미드 10 ㎎Nicotinamide 10 mg

염산리보플라빈나트륨 3 ㎎Riboflavin Sodium Hydrochloride 3 mg

염산피리독신 2 ㎎Pyridoxine hydrochloride 2 mg

이노시톨 30 ㎎Inositol 30 mg

오르트산 50 ㎎Orthoic acid 50 mg

조구등 추출물 0.48 ∼ 1.28 ㎎Morning Glory Extract 0.48-1.28 mg

물 200 ㎖200 ml of water

상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 음료를 제조하였다.With the above composition and content, drinks were prepared using conventional methods.

<2-6> 소세지의 제조<2-6> preparation of sausage

돈육 63.6 %Pork 63.6%

계육 27.5 % Chicken 27.5%

전분 3.5 %Starch 3.5%

대두단백 1.7 %Soy Protein 1.7%

식염 1.62 %Saline 1.62%

포도당 0.5 %Glucose 0.5%

기타첨가물(글리세린) 0.94 ∼ 1.34 %Other additives (glycerine) 0.94-1.34%

조구등 추출물 0.24 ∼ 0.64 %Headlight Lamp Extract 0.24 ~ 0.64%

상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 소세지를 제조하였다.Sausages were prepared using conventional methods using the above composition and content.

<2-7> 쵸코렛의 제조<2-7> Preparation of Chocolate

설탕 34.36 ∼ 34.76 %Sugar 34.36-34.76%

코코아 버터 34 %Cocoa Butter 34%

코코아 매스 15 %Cocoa Mass 15%

코코아 파우다 15 %Cocoa Powder 15%

레시틴 0.5 %Lecithin 0.5%

바닐라향 0.5 %0.5% vanilla

조구등 추출물 0.24 ∼ 0.64 %Headlight Lamp Extract 0.24 ~ 0.64%

상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 초코렛을 제조하였다.With the above composition and content, chocolate was prepared using conventional methods.

<제제예 3> 조구등 추출물을 유효성분으로 함유하는 세포 노화 억제제의 제조Preparation Example 3 Preparation of Cell Aging Inhibitor Containing Extracts of Crude Oil as Active Ingredients

본 발명자들은 상기 조구등 추출물을 유효성분으로 함유하는 식품 또는 음료 조성물을 하기와 같이 제조하였다.The present inventors prepared the food or beverage composition containing the above-mentioned extracts of the light bulbs as an active ingredient as follows.

<3-1> 주사액제의 제조방법<3-1> Manufacturing method of injection liquid

유효성분 10 ㎎을 함유하는 주사액제는 다음과 같은 방법으로 제조하였다.Injection solution containing 10 mg of the active ingredient was prepared by the following method.

조구등 추출물 1 g, 염화나트륨 0.6 g 및 아스코르브산 0.1 g을 증류수에 용해시켜서 100 ㎖을 만들었다. 이 용액을 병에 넣고 20 ℃에서 30분간 가열하여 멸균시켰다.100 g of crude bulb lamp extract, 0.6 g of sodium chloride and 0.1 g of ascorbic acid were dissolved in distilled water. The solution was bottled and sterilized by heating at 20 ° C for 30 minutes.

상기 주사액제의 구성성분은 다음과 같다.The components of the injection solution are as follows.

조구등 추출물················· ·1 gExtract of light bulbs, etc. ··········· 1

염화나트륨···················0.6 gSodium Chloride ・ ・ ・ ・ 0.6 g

아스코르브산··················0.1 g0.1 g of ascorbic acid

증류수·····················정량Distilled water ··················

<3-2> 시럽제의 제조방법<3-2> Manufacturing method of syrup

본 발명의 조구등 추출물을 유효성분 2 %(중량/부피)로 함유하는 시럽은 다음과 같은 방법으로 제조한다.Syrup containing the crude extract of the present invention as an active ingredient 2% (weight / volume) is prepared by the following method.

조구등 추출물, 사카린, 당을 온수 80 g에 용해시켰다. 이 용액을 냉각시킨 후, 여기에 글리세린, 사카린, 향미료, 에탄올, 소르브산 및 증류수로 이루어진 용액을 제조하여 혼합하였다. 이 혼합물에 물을 첨가하여 100 ㎖이 되게 하였다.The bulbous extract, saccharin, and sugar were dissolved in 80 g of warm water. After the solution was cooled, a solution consisting of glycerin, saccharin, spices, ethanol, sorbic acid and distilled water was prepared and mixed thereto. Water was added to this mixture to make 100 ml.

상기 시럽제의 구성성분은 다음과 같다.The components of the syrup are as follows.

조구등 추출물 ····················2 gExtract of light bulbs, etc ... 2 g

사카린 ····· ·················0.8 gSaccharin: 0.8 g ················

당 ························ 25.4 g25.4 g of sugar

글리세린······················ 8.0 gGlycerin ... 8.0 g

향미료 ······················ 0.04 gSpices ··················· 0.04 g

에탄올 ·······················4.0 gEthanol 4.0 g

소르브산 ······················0.4 g0.4 g of sorbic acid

증류수 ·······················정량Distilled water ·····················

<3-3> 정제의 제조방법<3-3> Manufacturing method of tablet

유효성분 15 ㎎이 함유된 정제는 다음과 같은 방법으로 제조한다.A tablet containing 15 mg of active ingredient is prepared by the following method.

조구등 추출물 250 g, 락토오스 175.9 g, 감자전분 180 g 및 콜로이드성 규산 32 g과 혼합하였다. 상기 혼합물에 10 % 젤라틴 용액을 첨가시킨 후, 분쇄해서 14 메쉬체를 통과시켰다. 이것을 건조시키고 여기에 감자전분 160 g, 활석 50 g 및 스테아린산 마그네슘 5 g을 첨가해서 얻은 혼합물을 정제로 만들었다.It was mixed with 250 g of bulbous extract, 175.9 g of lactose, 180 g of potato starch, and 32 g of colloidal silicic acid. 10% gelatin solution was added to the mixture, which was then ground and passed through a 14 mesh sieve. It was dried and the mixture obtained by adding 160 g of potato starch, 50 g of talc and 5 g of magnesium stearate was made into a tablet.

상기 정제의 구성성분은 다음과 같다.The components of the tablet are as follows.

조구등 추출물 ················· 250 g250 g of light bulbs, extracts ... ········ 250 g

락토오스 ···················175.9 gLactose ········ 175.9 g

감자전분 ····················180 gPotato starch ········· 180 g

콜로이드성 규산 ················ 32 gColloidal silicic acid 32 g

10% 젤라틴 용액10% gelatin solution

감자전분 ····················160 gPotato starch · 160 g

활석 ······················ 50 gTalc · 50 g

스테아르산 마그네슘 ··············· 5 gMagnesium stearate 5 g

상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 조구등 추출물은 강한 항산화 활성으로 산화적 스트레스에 의한 세포보호 작용을 나타내며, 텔로미어 길이의 단축을 억제하여 세포의 노화 억제에 효과적이므로, 피부노화 방지 효과를 나타내는 화장품 및 세포 노화 억제용 건강식품 등에 유용하게 사용될 수 있다. As described above, the light bulb extract of the present invention exhibits a cytoprotective effect of oxidative stress with a strong antioxidant activity, inhibits the shortening of the telomere length and is effective in inhibiting the aging of the cells, and thus exhibits a cosmetic anti-aging effect. It can be usefully used for health food for cell aging inhibition.

도 1은 인간 피부 각질세포인 HaCaT 세포에 있어서 과산화지질에 의하여 유도되는 세포사멸에 대한 본 발명의 조구등 추출물의 세포보호 작용을 보여주는 그래프이고, 1 is a graph showing the cytoprotective action of the extract of the light bulb of the present invention against apoptosis induced by lipid peroxide in HaCaT cells, which are human skin keratinocytes,

도 2는 UV B에 의해 유도되는 DNA의 절단에 대한 본 발명의 조구등 추출물의 억제효과를 보여주는 사진이고, Figure 2 is a photograph showing the inhibitory effect of the bulbous extract of the present invention on the cleavage of the DNA induced by UV B,

A : 대조군, B : UV B 처리군, C : UV B/조구등 추출물 처리군A: control group, B: UV B treatment group, C: UV B / light bulb extract treatment group

도 3은 UV A에 의해 생성되는 세포내 항산화 스트레스에 대한 본 발명의 조구등 추출물의 소거효과를 보여주는 사진이고, Figure 3 is a photograph showing the scavenging effect of the light bulb extract of the present invention on the intracellular antioxidant stress produced by UV A,

A : 대조군, B : UV A 처리군, C : UV A/조구등 추출물 처리군A: control group, B: UV A treatment group, C: UV A / light bulb extract treatment group

도 4는 본 발명의 조구등 추출물이 처리되거나 또는 처리되지 않은 경우에, 연속적으로 계대배양된 NHEK-F 세포의 PDL에 텔로미어의 길이가 미치는 영향을 보여주는 서던 블롯(southern blot) 사진이고, FIG. 4 is a Southern blot photograph showing the effect of telomeres on the PDL of successively passaged NHEK-F cells when the bulbous extract of the present invention was treated or not,

도 5는 인간 신생아의 피부 외피에서 유래된 각질세포인 NHEK-F 세포의 수명에 본 발명의 조구등 추출물이 미치는 효과를 보여주는 그래프이고, 5 is a graph showing the effect of the bulbous extract of the present invention on the lifespan of NHEK-F cells, keratinocytes derived from the skin envelope of a human newborn,

○: 대조군, □: 조구등 추출물 처리군○: control group, □: extract treatment group

도 6은 본 발명의 조구등 추출물이 처리되거나 또는 처리되지 않은 NHEK-F 세포의 수명(PDL)에 텔로미어 DNA의 길이가 미치는 영향을 보여주는 그래프이고, Figure 6 is a graph showing the effect of the length of telomeres DNA on the lifespan (PDL) of NHEK-F cells treated or untreated with the light bulb extract of the present invention,

○: 대조군, □: 조구등 추출물 처리군○: control group, □: extract treatment group

도 7은 본 발명의 조구등 추출물이 인간 피부 각질세포의 일생 세포 공급 능력에 미치는 영향을 보여주는 그래프이다. Figure 7 is a graph showing the effect of the morninglight extract of the present invention on the life cell supply capacity of human skin keratinocytes.

Claims (7)

조구등의 알콜 추출물을 함유하는 피부노화 억제용 화장품.Cosmetics for inhibiting skin aging containing alcohol extracts, such as, for example. 제 1항에 있어서, 상기 알콜은 에탄올인 것을 특징으로 하는 피부노화 억제용 화장품.The cosmetic for inhibiting skin aging according to claim 1, wherein the alcohol is ethanol. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 추출물이 자외선에 의한 피부세포 손상을 억제하는 것을 특징으로 하는 피부노화 억제용 화장품.The cosmetic for inhibiting skin aging according to claim 1 or 2, wherein the extract inhibits skin cell damage caused by ultraviolet rays. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 추출물이 텔로미어의 길이단축을 억제하여 피부세포의 수명을 연장하고 일생세포공급능력을 향상시키는 것을 특징으로 하는 피부노화 억제용 화장품.The cosmetic for inhibiting skin aging according to claim 1 or 2, wherein the extract inhibits the shortening of the telomeres to extend the lifespan of skin cells and to improve the life supply of life cells. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 화장품이 영양크림, 로션 및 스킨으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 피부노화 억제용 화장품.The cosmetic for inhibiting skin aging according to claim 1 or 2, wherein the cosmetic is selected from the group consisting of nourishing cream, lotion and skin. 삭제delete 삭제delete
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