KR100455531B1

KR100455531B1 - 티클로피딘을 활성성분으로 함유하는 각막 혈관신생억제조성물과 그 제조방법

Info

Publication number: KR100455531B1
Application number: KR10-2001-0070330A
Authority: KR
Inventors: 배선량
Original assignee: 배선량
Priority date: 2001-11-13
Filing date: 2001-11-13
Publication date: 2004-11-15
Also published as: KR20030039420A

Abstract

본 발명은 티클로피딘(Ticlopidine)을 활성성분으로 함유하는 각막 혈관신생 억제조성물과 그 제조방법에 관한 것이다.

하이드론을 에틸알콜에 용해하여 제조한 하이드론 24 % 의 에틸알콜 용해액에 티클로피딘을 1 ~ 5 mM 의 농도로 녹여서, 본 발명의 티클로피딘을 활성성분으로 함유하는 각막 혈관신생 억제조성물을 제조한다.

본 발명의 각막 혈관신생 억제조성물은, 각막의 외상이나 화상을 치료하거나, 각막 이식시 부작용 억제 및 각막 궤양의 치료, 콘텍트렌즈 착용에 따른 부작용의 치료 등에 사용된다.

Description

티클로피딘을 활성성분으로 함유하는 각막 혈관신생 억제조성물과 그 제조방법{THE COMPOSITON FOR CORNEAL ANGIOGENESIS INHIBITION WITH TICLOPIDINE, AND THE PRODUCING METHOD OF THEROF}

본 발명은 티클로피딘을 활성성분으로 함유하는 각막의 혈관신생 억제 조성물과 그 제조방법에 관한 것이다.

눈에 있어서 각막은 정상적으로 무혈관 조직이다.

그러나, 외상이나, 수술, 감염, 또는 독성물질의 접촉, 콘택트렌즈 착용 등에 의해 각막의 혈관신생이 유발될 수 있다.

각막에 유발된 혈관신생은 반흔이나 지방축적을 야기하여 심각한 시력저하 가 일어나거나 심하면 실명하는 경우도 발생한다,

이러한 각막의 혈관신생을 치료하기 위해서, 레이저 수술을 하거나, 약물 투여 등 다양한 방법이 시도되어 왔으나 아직까지 뚜렷한 효과가 없는 실정이다.

티클로피딘(Ticlopidine : C₁₄H₁₄ClNS : 분자량 263.78 ; 5-[(2-(Chlorophenyl)methyl]-4,5,6,7-Tetrahydrothieno[3,2-C]Pyridine)은 아래 화학식 1로 나타내며, 티에노피리딘(Thienopyridine) 계열의 공지의 물질이다.

<화학식 1>

혈소판 응집저해제로서의 티클로피딘은 만성 동맥폐쇄증, 허혈성 뇌혈관 장애, 관상동맥 질환 등의 치료에 사용되고 있다.

한국특허출원 10-1997-0072848(티클로피딘과 은행잎 추출물을 함유한 약제 조성물)에는, 티클로피딘을 단독으로 투여했을 때 보다, 티클로피딘과 항산화 작용을 지닌 은행잎 추출물을 혼합하여 투여했을 때, 혈중 호중구 세포의 수를 크게 감소시켰으며, 골수세포의 성장을 억제하는 세포독성은 감소하였다는 내용이 공지되어 있다.

한국특허출원 10-1997-7011414(혈전성 질환의 치료방법)에는, 유효량의 활성화 인간단백질 C 와 항혈소판제를 병용 투여하여, 환자의 혈전성 질환을 치료하는 방법이 공지되어 있으며, 아스피린, 클로피도그렐 등 여러 종류의 항혈소판제 들 중에 티클로피린을 사용하는 것이 공지되어 있다.

그러나, 아직까지 티클로피딘을 활성성분으로 하여 각막의 신생혈관을 억제하는 것에 관하여 보고된 것은 없다.

본 발명은 각막의 혈관신생을 억제하는 새로운 물질로 티클로피딘을 찾아내고, 그것을 약제로 제조하여 티클로피딘을 활성성분으로 함유하는 각막 혈관신생 억제조성물과 그 제조방법을 제공하는데 있다.

도 1은 본 발명의 티클로피딘을 활성성분으로 함유하는 각막 혈관신생 억제 조성물의 제조과정도.

도 2는 실험예 2 의 티클로피딘의 각막 혈관신생 억제 효과 비교

A : 대조군 사진 B : 티클로피딘 처리군 사진.

C : 대조군과 티클로피딘 처리군의 각막의 NV score를 나타낸 표.

도 3은 본 발명의 티클로피딘을 활성성분으로 함유하는 각막의 혈관신생 억제 조성물의 효과실험 비교도.

본 발명은, 티클로피딘(Ticlopidine)을 활성성분으로 함유하는 각막 혈관신생 억제조성물과 그 제조방법에 관한 것이다.

본 발명자는 티클로피딘이 각막의 혈관신생을 억제하는 효과가 높은 것을 찾아내고, 여러 차례의 실험을 거쳐 본 발명을 완성하게 되었다.

하이드론을 에틸알콜에 용해하여 제조한 하이드론 24 % 의 에틸알콜 용해액에 티클로피딘을 1 ~ 5 mM 의 농도로 녹여서, 본 발명의 티클로피딘을 활성성분으로 함유하는 각막 혈관신생 억제 조성물을 제조한다.

본 발명의 티클로피딘을 활성성분으로 함유하는 각막 혈관신생 억제조성물의 제조과정을 도 1을 참조하여 설명한다.

하이드론을 에틸알콜에 24 % 로 용해한 하이드론의 에틸알콜 용해액을 제조한다.

하이드론의 에틸알콜 용해액에 티클로피딘을 1 ~ 5 mM 의 농도로 녹여서, 본 발명의 티클로피딘을 활성성분으로 하는 각막 혈관신생 억제조성물을 제조한다.

이하 실험예 및 실시예를 들어 본 발명을 상세히 설명하나, 이들이 본 발명의 내용을 한정하는 것은 아니다.

<실험예 1> 각막의 혈관신생 억제 효과 비교 실험용 시료의 제조

하이드론(Hydron ; hydroxyethylmethacrylate)은 시그마사 제품 P-3932를 사용하였다.

혈관내피세포 성장인자 VEGF는 안지오랩사 제품 R-VEGF를 사용하였다.

하이드론 240 mg 을 에탄올(ethanol) 1 ㎖ 에 37 ℃ 에서 12시간 용해하여 24 % 의 균일한 하이드론 용해액을 제조하였다.

하이드론 용해액 12 ㎕ 에 VEGF 500 ng 과 티클로피딘 0.375 mg 을 첨가하였다.

이 혼합물을 5 ㎕ 씩 4 회에 걸쳐 페트리 디쉬에 떨어뜨린 다음, 후드 내에서 상온에서 건조시켰다.

크기가 1.5 X 1.5 X 0.5 mm³정도 되는 미세한 원반형 환약으로 된 시험시료를 제조하였다.

한편, 대조시료를 제조하기 위해, 하이드론 용해액 12 ㎕ 에 VEGF 500 ng 과 PBS (Sterile Phosphated Buffered saline) 0.375 mg 을 첨가하였다.

이 혼합물을 5 ㎕ 씩 4 회에 걸쳐 페트리디쉬에 떨어뜨린 다음, 후드 내에서 상온에서 건조시켰다.

크기가 1.5 X 1.5 X 0.5 mm³정도 되는 원반형 환약으로 된 대조시료를 수득하였다.

<실험예 2> 티클로피딘의 각막 혈관신생 억제 효과 비교실험

체중 1.5 ~ 2.0 kg 의 뉴질랜드 백색 가토를, 세극 등 현미경 검사를 시행하여 각막에 신생혈관이 없는 것을 대상으로, 암수 구별 없이 10 마리(20 안)를 사용하였다.

가토 1 마리 당, 케타민 하이드로클로라이드(ketamine hydrochloride) 45 mg/kg 과 자일라진(Xylazine) 4 mg/kg 을 근육주사하여 마취 시켰다.

무균상태로 수술현미경하에서 크레센트 나이프(crescent knife)를 이용하여 상부의 각결막 이행부에서 각막 중심 쪽으로 1 mm 떨어진 곳에 2.5 mm 의 절개창을만들고 간질내로 4 mm 깊이의 미세낭을 만들었다.

대조군 10 안 각각에 실험예 1에서 제조한 대조시료 환약을 미세낭에 삽입하였다.

시험군은 10 안 각각에 실험예 1에서 제조한 시험시료 환약을 미세낭에 삽입하였다.

시료 삽입 후, 3 일, 5 일, 7 일 째 두 사람의 관찰자가 각 군을 현미경으로 관찰하여 신생혈관의 개수와 윤부에서 부터의 길이를 측정하고, 카메라로 촬영하여 신생혈관의 분포정도를 평가하였다.

신생혈관의 길이에 대한 등급을, 0.3 mm 미만을 0, 0.3 ~ 0.6 mm 는 1, 0.7 ~ 0.9 mm 는 2, 1.0 mm 이상은 3으로 정하였다.

혈관생성 점수는 신생혈관의 길이에 대한 등급에 신생혈관의 수를 곱한 값으로 산정하여 그 결과를 도 2 에 나타냈다.

도 2 의 A 와 같이 VEGF 만을 처리한 대조군에서는 많은 수의 신생혈관이 각막 중심부를 향하여 자라났다.

도 2의 B 와 같이 티클로피딘 처리군에서는 신생혈관의 수가 적고, 길이도 짧았다.

도 2의 C 와 같이, 티클로피딘 처리군의 NV score가 대조군 보다 약 50 % 정도 낮음을 알 수 있다.

<실시예 1> 본 발명의 티클로피딘을 함유하는 각막 혈관신생 억제 조성물의제조.

하이드론(Hydron ; hydroxyethylmethacrylate) 2.4 g을 에탄올(ethanol) 10 ㎖ 에 37 ℃ 에서 12시간 용해하여 24 % 의 균일한 하이드론의 에탄올 용해액을 제조하였다.

하이드론의 에탄올 용해액 120 ㎕ 에 티클로피딘 3.75 mg을 첨가하고, 용해하여, 본 발명의 티클로피딘을 활성성분으로 함유하는 각막 혈관신생 억제조성물을 제조하였다.

<실험예 3> 각막 혈관신생의 유도

체중 1.5 ~ 2.0 kg의 뉴질랜드 백색 가토를, 세극 등 현미경 검사를 시행하여 각막에 신생혈관이 없는 것을 대상으로, 암수 구별 없이 10 마리(20 안)를 사용하였다.

가토 1 마리 당, 케타민 하이드로클로라이드(ketamine hydrochloride) 45 mg/kg 과 자일라진(Xylazine) 4 mg/kg 을 근육주사하여 마취시켰다.

무균상태로 수술현미경하에서 크레센트 나이프(crescent knife)를 이용하여 상부의 각결막 이행부에서 각막 중심 쪽으로 1 mm 떨어진 곳에 2.5 mm의 절개창을 만들고 간질내로 4 mm 깊이의 미세낭을 만들었다.

20 안 각각에 실험예 1에서 제조한 대조시료인 VEGF를 함유한 환약을 미세낭에 삽입하였다.

시료 삽입 후 5 일 동안 각막에 신생혈관이 유도되었다.

<실험예 4> 본 발명의 티클로피딘을 유효성분으로 함유하는 각막 혈관신생 억제조성물의 효과 실험.

실험예 3 에서 신생혈관을 유도한 10 안에 대해, 실시예 1 에서 제조한 본 발명의 티클로피딘을 유효성분으로 함유하는 각막 혈관신생 억제제를 안구에 투여하였다.

0.5 ㎖ 씩 6 시간 간격으로 4회 투여하였다.

최종 투여 12 시간 후에 그 결과를 조사하여 도 3에 나타냈다.

대조군으로 실험예 3에서 신생혈관을 유도한 10 안에 대해 티클로피딘 대신 PBS를 함유한 조성물을 6시간 간격으로 4 회 투여하였다.

최종 투여 후 그 결과를 조사하여 도 3에 나타냈다.

도 3과 같이 본 발명의 티클로피딘을 함유한 조성물에서는 신생혈관이 많이 줄어들었으나, 대조군에서는 생성된 신생혈관이 거의 그대로 유지되었다.

본 발명에 의해, 티클로피딘을 활성성분으로 함유하는 각막 혈관신생 억제조성물과 그 제조방법이 제공된다.

본 발명의 각막혈관 신생억제 조성물은, 각막의 외상이나 화상을 치료하거나, 각막 이식시 부작용 억제 및 각막 궤양의 치료, 콘텍트렌즈 착용에 따른 부작용의 치료 등에 사용된다.

Claims

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티클로피딘을 활성성분으로 함유하는 혈관신생억제 조성물의 제조방법에 있어서,

하이드론(hydroxyethylmethacrylate)을 에틸알콜에 용해하여 하이드론의 농도가 24 %인 하이드론 용해액을 제조한 다음,

이 하이드론 용해액에 티클로피딘을 첨가하고 용해하여 티클로피딘의 농도가 1 ~ 5 mM 이며, 각막혈관신생억제 효과를 나타내는 조성물을 제조하는 것으로 구성된,

티클로피딘을 활성성분으로 함유하는 각막혈관신생억제 조성물의 제조방법.
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