KR0173119B1 - 선형 소마토스타틴 유사체 - Google Patents

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KR0173119B1
KR0173119B1 KR1019900702668A KR900702668A KR0173119B1 KR 0173119 B1 KR0173119 B1 KR 0173119B1 KR 1019900702668 A KR1019900702668 A KR 1019900702668A KR 900702668 A KR900702668 A KR 900702668A KR 0173119 B1 KR0173119 B1 KR 0173119B1
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에이취. 코이 데비드
에이. 머피 윌리암
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닐 에이. 밴스로우
더 어드미니스트레이터스 오브 더 투레인 애드케이쇼날 펀드
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Abstract

성장호르몬의 분비를 억제하는 선형 옥타펩티드 유사체.
결과는 I125SRIF-14 결합을 50%억제하는 유사체의 농도(nM)(IC50)로 표시하였다.
괄호안의 수치는 실험횟수를 표시한다.
유사체의 구조는 다음과 같다.

Description

[발명의 명칭]
선형 소마토스타틴 유사체
[발명의 배경]
본 발명은 치료제용 펩티드에 관한 것이다.
자연에 존재하는 14개의 아미노산보다 적은수의 아미노산을 포함하는 유사체를 비롯하여, 성장 호르몬 방출을 억제하는 작용을 갖는 수많은 소마토스타틴 유사체가 문헌에 기술되어 있다.
예를 들면 본 명세서에 참고로 삽입되어 있는 코이 등(Coy et al.)의 미국 특허 제4,485,101호는 N-말단의 아세틸기, C-말단의 NH2, 6위치에 D-Trp 및 4위치에 p-Cl-Phe을 갖는 도데카펩티드를 기술하고 있다.(여기에서, 배위가 지정되어 있지 않은 경우에는 L-이성체를 의미한다.)
약어 : Nle=노르류신, Nal=나프틸알라닌
[발명의 개요]
전반적으로 본 발명은 하기 일반식의 선형 소마토스타틴 유사체, 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다.
상기 식 중, A1은 Ala, 피리딜 - Ala, Leu, lle, Val, Met, Nle, Trp, β-Nal, O-X-Phe(식중, X=H,CH3, Cl, Br, F, OH, OCH3, NO2), p-X-Phe(식중, X=H, CH3, Cl, Br, F, OH, OCH3, NO2), 2.4-디클로로-Phe, 펜타플루오로-Phe중 어느하나의 D-이성체이고; A2는 Ala, 피리딜-Ala, Leu, lle, Val, Met, Nle, Trp, β-Nal, O-X-Phe(식중, X=H, CH3, Cl, Br, F, OH, OCH3, NO2), p-X-Phe(식중, X=H, CH3, Cl, Br, F, OH, OCH3, NO2), 2.4-디클로로-Phe, 펜타플루오로-Phe중 어느하나이며 : A3는 Ala, 피리딜-Ala, Leu, lle, Val, Met, Nle, Trp, Tyr, β-Nal, O-X-Phe(식중, X=H, CH3, Cl, Br, F, OH, OCH3, NO2), p-X-Phe(식중, X=H, CH3, Cl, Br, F, OH, OCH3, NO2), 2.4-디클로로-Phe, 펜타플루오로-Phe중 어느하나이고 : A6는 Ala, 피리딜-Ala, Leu, lle, Val, Lys, Met, Nle, Thr, Trp, Ser, β-Nal, O-X-Phe(식중, X=CH3, Cl, Br, F, OH, OCH3, NO2), p-X-Phe(식중, X=CH3, Cl, Br, F, OH, OCH3, NO2), 2.4-디클로로-Phe, 또는 펜타플루오로-Phe중 어느하나이며 : A7은 Ala, 피리딜-Ala, Leu, lle, Val, Met, Nle, Trp, β-Nal, O-X-Phe(식중, X=H, CH3, Cl, Br, F, OH, OCH3, NO2), p-X-Phe(식중, X=H, CH3, Cl, Br, F, OH, OCH3, NO2), 2.4-디클로로-Phe, 또는 펜타플루오로-Phe중 어느하나이고 : A8은 Ala, 피리딜-Ala, Leu, lle, Ser, Thr, Val, Met, Nle, Trp, β-Nal, O-X-Phe(식중, X=CH3, Cl, Br, F, OH, OCH3, NO2), p-X-Phe(식중, X=CH3, Cl, Br, F, OH, OCH3, NO2), 2.4-디클로로-Phe 또는 펜타플루오로-Phe중 어느하나의 D-또는 L-이성체이며 R1및 R2는 각각 독립적으로 H, 저급(1~5탄소원자)아실, 또는 저급 알킬이고 : R3은 H, NH2, 또는 저급 알킬이며 : 단 A1및 A8중의 적어도 하나는 방향족 아미노산이어야 하고 : 또한 단 A2또는 A7중의 하나가 방향족 아미노산이면 A8은 방향족 아미노산일 수 없으며 : 또한 단 R4은 아무것도 아니거나 또는 Ser 또는 Thr의 히드록실기를 통해 결합된 탄수화물, 예를들면 Cx(H2O)y(식중, x는 1~18이고 y는 1~16이다) 일 수 있다.
탄수화물기와 세린 또는 트레오닌의 히드록실기와의 결합은 알파 또는 베타 결합일 수 있다.
R4는 예를들면 보호된 글리코실 라디칼, 예를들면 자연에 존재하는 알데테트로스, 알도펜토스, 알도헥소스, 케토펜토스, 데옥시알도스, 아미노알도스에저 유도된 글루코프라노실 또는 글루코피라노실라디칼 및 이당류 및 삼당류같은 올리고당류, 그리고 그의 공간 이성체일 수 있다.
R4는 리보스, 아라비노스, 크실로스, 릭소스, 알로스, 알트로스, 글루코스, 만노스, 굴로스, 이도스, 갈락토스, 탈로스, 에리토스, 트레오스, 프시코스, 프룩토스, 소르보스, 타가토스, 크실룰로스, 푸코스, 람노스, 올리보스, 올리오스, 미카로스, 로도사민, N-아세틸-글루코사민, N-아세틸갈락토사민, N-아세틸-만노사민같은, 미생물, 식물, 동물 또는 인간에 존재하는 천연의 D-또는 L-단당류에서, 또는 말토스, 락토스, 셀로비오스, 겐티오비오스, N-아세틸-락토사민, 치토비오스, β-갈락토피라노실-(1, 3)-N-아세틸갈락토사민 및 β-갈락토피라노살-(1, 4)-N-아세틸글루코사민같은 이당류에서, 그리고 2-데옥시-, 2-아미노-, 2-아세트아미도-또는 2-할로게노, 특히 브로모- 및 요오도-당 같은 그의 합성유도체에서 유도될 수 있다.
보호기는 예를들면 (C1-C6)-알카노일(예, 아세틸, 트리클로로아세틸, 트리플루오로아세틸), 벤조일 또는 p-니트로벤조일 같은 (C1-C10)-아실기, 및 임의로 변형된 메틸, 메틸옥시메틸, 벤질, 테트라히드로피라닐, 벤질리덴, 이소프로필리덴 또는 트리틸기, 또는 아실 보호기, 예를들면 아세틸일 수 있다.
바람직하게는, A1및 A2중의 하나만이 방향족 아미노산이고 : A7및 A8중의 하나만이 방향족 아미노산이다.
바람직한 구현에서는, A1은 Trp, β-Nal, O-X-Phe(식중, X=CH3또는 OCH3), p-X-Phe(식중, X=CH3또는 OCH3)중 어느하나의 D-이성체이고, A8은 Ala, 피리딜-Ala, Leu, lle, Ser, Thr, Val, Met, Nle, O-X-Phe(식중, X=Cl, Br, F, OH, NO2), p-X-Phe(식중, X=Cl, Br, F, OH, NO2), 2.4-디클로로-Phe, 또는 펜타플루오로-Phe중 어느하나의 D-또는 L-이성체이다.
다른 바람직한 구현예에서는, A1은 O-X-Phe(식중, X=H, Cl, Br, F, OH, 또는 NO2), p-X-Phe(식중, X=H, Cl, Br, F, OH, 또는 NO2), 2.4-디클로로-Phe, 펜타플루오로-Phe 중 어느하나의 D-이성체이고 : A8은 Ala, 피리딜-Ala, Leu, lle, Thr, Val, Met, Nle, Trp, β-Nal, O-X-Phe(식중, X=CH3또는 OCH3), 또는 p-X-Phe(식중, X=CH3또는 OCH3)중 어느하나의 D-또는 L-이성체이다.
다른 바람직한 구현에서는, A8은 Thr, Trp, β-Nal, O-X-Phe(식중, X=CH3또는 OCH3), 또는 p-X-Phe(식중, X=CH3또는 OCH3)중 어느하나의 D-또는 L-이성체이고 : A1은 Phe 또는 Ala, 피리딜-Ala, Leu, lle, Val, Met, Nle, O-X-Phe(식중, X=H, Cl, Br, F, OH, NO2), p-X-Phe(식중, X=H, Cl, Br, F, OH, NO2), 2.4-디클로로-Phe 또는 펜타플루오로-Phe중 어느하나의 D-이성체이다.
다른 바람직한 구현예에서는, A8은 Ser, Thr, O-X-Phe(식중, X=Cl, Br, F, OH 또는 NO2), p-X-Phe(식중, X=Cl, Br, F, OH 또는 NO2), 2.4-디클로로-Phe, 또는 펜타플루오로-Phe중 어느하나의 D-또는 L-이성체이고 : A1은 Ala, 피리딜-Ala, Leu, lle, Val, Met, Nle, Trp, β-Nal, O-X-Phe(식중, X=CH3또는 OCH3), 또는 p-X-Phe(식중, X=CH3또는 OCH3)중 어느하나의 D-이성체이다.
보다 바람직하게는, A1= β-D-Nal 또는 D-Phe이고 : A2= Ala, Phe 또는 p-클로로-Phe이며 : A3= Tyr 또는 Phe이고 : A6= Val, Lys, 또는 Thr이며 : A7= Ala 또는 Phe이고 : A8= Thr 또는 D-β-Nal이다.
본 발명의 바람직한 화합물에는 D - Phe - p - 클로로 - Phe - Tyr - D - Trp - Lys - Val - Phe - Thr - NH2:
D-Phe-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH2: D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH2: 및 D-Phe-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Ala-β-D-Nal-NH2가 포함된다.
다른 바람직한 구현예에서는, 치료학적으로 유효한 양의 치료화합물 및 제약학적으로 허용되는 담체물질, 예를들면 탄산마그네슘, 락토스, 또는 치료화합물과 함께 미셀을 형성할수 있는 인지질이 서로 함께 치료조성물, 예를 들면 환자에게 경구투여 하기위한 환제, 정제, 캡슐, 또는 액체, 국소적으로 적용하거나 또는 화합물을 필요로하는 환자의 피부를 통해 이온삼투요법적으로 도입시키기 위한 도포성 크림, 겔, 로션, 또는 연고, 코에 점적하거나 또는 분무할 수 있는 액체, 또는 정맥내, 비경구, 피하 또는 복강내 투여할 수 있는 액체를 형성한다.
환제, 정제 또는 캡슐은 조성물이 붕해되지 않은채로 환자의 소장에 침투하기에 충분한 시간동안 조성물이 환자의 위의 위산으로부터 보호받도록 할 수 있는 물질로 피복할 수 있다.
치료조성물은 근육내 투여를 위한 생분해성 또는 비생분해성의 서방성 제제의 형태일 수 있다.
최고의 효능을 얻기위해서는, 제로(0)차수의 방출이 요구되며, 이것은 치료조성물을 투여하기 위해 이식가능한 또는 외부의 펌프, 예를 들면 인퓨소이드TM(Infusoid)펌프를 이용하여 달성할 수 있다.
본 발명의 화합물은 성장호르몬, 소마토메딘(예, IGF-1), 인슐린, 글루카곤 및, 기타의 자동부분비 성장인자 또는 췌장의 성장인자의 분비를 억제하는 작용을 갖는다.
본 발명의 화합물은 비환족 화합물이기 때문에 안정하고 산화에 대해 저항성을 갖는다.
덧붙여, 펩티드의 비환족 특성은 합성 및 정제를 용이하게하여, 효율을 개선하고 제작비를 절감하게 한다.
본 발명의 다른 특성 및 장점은 다음의 바람직한 구현예의 설명 및 특허청구의 범위에서 드러날 것이다.
[바람직한 구현예의 설명]
도면을 먼저 설명한다.
[도면]
제1도는 쥐의 뇌하수체 세포에서 성장호르몬이 분비되는 것에 미치는 선형 유사체의 영향을 나타내는 그래프이다.
제2도는 쥐의 뇌하수체 세포에서 성장 호르몬이 분비되는 것에 미치는 선형 유사체의 영향을 나타내는 그래프이다.
[구조]
본 발명의 화합물은 상기 발명의 개요란에 언급된 일반식을 갖는다.
이 화합물은 모두 4-위치에 D-Trp 을 그리고 5-위치에 Lys을 갖는 소마토스타틴의 옥타펩티드 유사체이다.
A2위치의 p-클로로-페닐알라닌 및 A8위치의 트레오닌이 특히 활성을 증강시키는 변형이라는 것이 밝혀져 있다.
그러나, A8위치에 방향족 아미노산을 갖는 화합물은 A2및 A7위치 중 어느하나, 또는 두곳 모두에 방향족 아미노산이 있는 경우에는 활성을 갖지 못한다.
화합물은 제약학적으로 허용되는 염의형태로 제공된다.
바람직한 염의 예는 치료학적으로 허용되는 유기산, 예를들면 아세트산, 락트산, 말레산, 시트르산, 말산, 아스코르브산, 숙신산, 벤조산, 살리실산, 메탄술폰산, 톨루엔술폰산 또는 파모산 뿐만아니라 탄닌산 또는 카르복시메틸 셀룰로스같은 중합체산에 의한 염, 및 할로겐화수소산, 예를 들면 염화수소산, 황산 또는 인산같은 무기산에 의한 염이다.
[합성]
한가지 치료용 펩티드의 합성은 다음과 같다.
다른 펩티드는 당분야에서 통상의 기술을 가진자의 능력내에서 다음의 합성법을 적절히 변형시켜 제조할 수 있다.
펩티드 : D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH2의 제조에 있어 첫 번째 단계는 다음과 같이 중간체 : Boc-D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-N-벤젤옥시카르보닐-Lys-O-벤질-Thr-Phe-O-벤질-Thr-벤즈히드릴아민수지를 제조하는 것이다.
염화물 이온형태의 벤즈히드릴아민-폴리스티렌 수지(Advanced Chemtech, Inc.)(1.2g, 0.5mmole)를 다음반응 사이클을 수행하도록 프로그램된 Advanced Chemtech 펩티드 합성기의 반응용기에 넣는다.
(a)메틸렌 클로라이드 : (b)메틸렌 클로라이드에 용해시킨 33% 트리플루오로아세트산 (각각 1분 및 25분씩 2회) : (c)메틸렌 클로라이드 : (d)에탄을 : (e)메틸렌 클로라이드 : 및 (f)클로로포름에 용해시킨 10% 트리에틸아민.
중화된 수지를 메틸렌 클로라이드에 용해시킨 Boc-0-벤질-트레오닌 및 디이소프로필카르보디이미드(각각 1.5 mmole)와 함께 1시간동안 교반하고 생성된 아미노산 수지를 상기 세척 프로그램중의 (a)단계~(f)단계에 걸쳐 순환시킨다.
동일한 과정에 의해 다음 아미노산들(1.5 mmole)을 연속적으로 결합시킨다 : Boc-Phe, Boc-0-벤질-Thr, Boc-N-벤질옥시카로보닐리신, Boc-D-Trp, Boc-Phe, 및 Boc-Phe 및 Boc-D-Phe.
세척 및 건조후에, 완결된 수지의 무게는 1.70g이었다.
이어서, 수지(1.70g, 0.5mmole)를 클레졸(5 ml), 디티오트레이톨(100mg) 및 무수불화수소(35m1)와 함께 0℃에서 혼합하고 45분간 교반한다.
과량의 불화수소를 무수 질소기류하에 빠르게 증발시키고, 유리 펩티드를 침전시키고 에테르로 세척한다.
조 펩티드를 최소량의 50% 아세트산에 용해시키고 동일용매를 이용하여 세파덱스 G-25컬럼 (2.5×100cm)상에서 용출시킨다.
UV 흡광 및 얇은막 크로마토그래피에 의한 주요성분을 함유하는 분획을 푸울링하고, 증발시켜 소량으로 만들고 비닥(Vydac)옥타데실실란 실리카(10~15㎛)의 칼럼(2.5 x50cm)에 작용시킨다.
칼럼을 물에 용해시킨 0.1%트리플루오로아세트산중의 농도가 10~45%로 직선농도 구배를 갖는 아세토니트릴로 용출시켰다.
얇은막 크로마토그래피 및 분석고성능 액체 크로마토그래피에 의해 분획을 시험하고 푸울링하여 최고의 순도를 얻었다.
용액을 반복하여 동결건조시켜 물을 제거하면 65mg의 생성물이 백색의 보풀상 분말로 얻어진다.
생성물은 hplc 및 tlc에 의해 균질한 것으로 밝혀졌다.
산 가수분해물의 아미노산 분석에 의해 옥타펩티드의 조성이 확인된다.
본 발명의 다른 펩티드는 상술한 것과 유사한 방법으로 제조한다.
[배양된 쥐 뇌하수체 세포분산액에서 성장호르몬 분비에 미치는 선형 소마토스타틴 유사체의 영향]
본 발명은 옥터펩티드에 대하여, 다음과 같이 쥐의 뇌하수체 세포를 이용하여 성장 호르몬-방출활성의 억제를 시험한다.
무게가 200~250g이고 조절된 조건(0500~1900h 조사)에서 거주시킨 성숙한 찰스리버 CD 숫컷 쥐(Wilmington, MA)에서 얻은 뇌하수체 전엽을, 기존의 방법(Hoefer et al. 1984, Mol. Cell. Endocrinol, 35 : 229 : Ben Jonathan et al., 1983, Methods Enzymol. 103 : 249 : Heiman et al., 1985, Endocrinology 116 : 410)을 변형시킨 무균기술에 의해 분산 및 배양하였다.
단두한 쥐에서 뇌하수체를 꺼내어 절단하고, 1% 소 혈청 알부민, 14mM글루코스, 변형이글배지(MEM) 비타민 용액 및 MEM아미노산(Gibco Laboratories, Grand Island, NY)(KRBGA)이 보충된 멸균여과된 크랩스-링거 중탄산염 완충액(KRBGA)에 용해시킨, 2ml 0.2% 트립신(Worthington Biochemicals, Freehold, NJ)을 포함하는 실리콘화된 액체 신틸레이션 바이알에 넣었다.
모든 유리용기는 세이어스등(Sayers et al., 1971, Endocrinology 88 : 1063)에 기술된대로 실리콘화하였다.
단편을 수욕중에서 교반하에 37℃에서 35분간 보온하였다.
바이알의 내용물을 KRBGA에 용해시킨 0.1% DNase(Sigma Chemical Co., St. Louis, MO)2ml를 함유하는 신틸레이션 바이알에 쏟고, 37℃에서 교반하에 2분간 보온하였다.
보온후에, 조직을 원심분리용 튜브에 경사분리해 넣고 침전되도록 하였다.
배지를 버리고, 뇌하수체 절편을 1ml의 신선한 KRBGA로 3회 세척하였다.
불로 연마한 실리콘화된 파스퇴르 피펫을 이용하여 세포를 부드럽게 0.05% NBI(리마빔 트립신 인히비터, Worthington Biochemicals) 2ml에 분산시켰다.
분산된 세포를 630㎛ 직경의 나일론 메쉬(Tetko, Elmsford, NY)에 통과시켜 새로운 15m1 원심분리 튜브내로 여과시키고 100×g에서 1분간 원심분리하여 수확하였다.
17분간 원심분리하여 서서히 최종속도에 도달하였다.
원심분리후에, 배지를 버리고 펠릿화된 세포를 파스퇴르 피펫을 이용하여 새로운 LBI(2ml)에 재현탁시켰다.
이어서, 분산된 세포를 2.5% 태내 송아지 혈청(GIBCO), 3% 말 혈청(GIBCO), 뇌하수체도너로부터 채취한 10% 신선한 쥐 혈청(1시간 미만동안 얼음에서 보존), 1% MEM비필수 아미노산(GIBCO), 겐타마이신(10ng/m1 : Sigma) 및 니아타틴(10,000U/m1 : GIBCO)가 보충된 멸균-여과된 둘베코의 변형 이글배지(GIBCO) 약 15m1로 희석하였다.
세포를 큰 직경의 입구를 갖는 50m1 등근바닥 유리 추출 플라스크에 쏟아붓고 레마혈구계산기를 계수하고 (뇌하수체당 대략 2,000,000 세포)각 웰(Co-star cluster 24 : Rochester Scientific Co., Rochester, NY)당 200,000세포의 밀도로 불규칙하게 도포하였다.
도포된 세포를 95% 공기 및 5% CO2, 37℃의 가습대기에서 96시간동안 상기 두레코 배지에서 유지시켰다.
호르몬 방출 억제시험을 준비하기 위하여, 세포를 배지 199(GIBCO)로 3회 세척하여 낡은 배지와 부유세포를 제거하였다.
각 용량의 유사체(실리콘화 시험관내에서 정상 식염수로 희석)를 4개의 웰내에서 InM GRF(1-29) NH2(성장호르몬 방출인자)의 존재하에 1% BSA(분획 V ; Sigma)-함유하는 1ml 배지 199의 총 부피로 시험하였다.
공기/이산화탄소 대기(95/5%)내에서 37℃에서 3시간이 경과한 후에, 배지를 제거하여 호르몬 함량을 분석할때까지 -20℃에서 보존하였다.
항-성장 호르몬 항체를 이용하는 통상적인 방사능면역분석법으로 성장 호르몬을 측정 하였다.
배양된 쥐에 뇌하수체 세포에서 성장호르몬의 방출에 미치는 9가지의 다른 펩티드의 영향을 제1도 및 제2도에 나타내었다.
펩티드 DC-25-4(제1도) 및 DC-25-24(제2도)가 성장호르몬의 방출을 억제하는데 있어서 가장 큰 활성을 나타내었다.
DC-25-4와 DC-25-24는 모두 분자의 한쪽 끝 가까이에 전자 끌어당김기, 그리고 분자의 반대쪽 끝 가까이에 전자 공여기를 갖는다.
본 발명에 속하지 않는 펩티드 DC-23-85(제1도) 및 DC-25-16(제 2도)는 물론 활성을 나타내지 않는다.
선형 소마토스타틴 유사체에 의한 I125소마트토로핀-방출-억제 인자(SRIF-14) 결합의 억제
쥐의 췌장, 대뇌피질, 또는 인간의 스몰(small)세포 폐육종(NCI-H69)
세포를 빙냉한 50mM 트리스-HCI에서 균둥질화하고(Polytron, 세팅 6, 15초), 중간에 새로운 완충액에 재현탁시키면서 39,000×g(10분)에서 2회 원심분리하므로써 상기 조직 또는 세포로부터 조 막 제제를 수득하였다.
최종 펠릿은 분석을 위해 10mM 트리스-HCI에 재현탁시켰다.
막 제제의 부분표본을 소 혈청 알부민(10mg/m1 : 분획 V, Sigma Chem.), MgCl2(5mM), 트라실롤(20KIU/ml), 바시트라신(0.02mg/m1) 및 페닐메틸술포닐 플루오라이드(0.02mg/m1)를 함유하는 50mM HEPES(pH 7.4)에서, 표지화 소마토트로핀-방출-억제 인자인 [1251-Tyr11] SRIF-14(2000Ci/mmole, Amersham Corp.)와 함께 30℃에서 25분간 보온하였다.
최종분석 부피는 0.3ml였다.
감압하여 화트만 GF/C 필터(0.3% 폴리에틸렌이민에 예비침적시킴)를 통하여 고속 여과하므로써 보온을 종결하였다.
이어서, 각 튜브와 필터를 빙냉 완충액의 부분표본 5ml로 3회 세척하였다.
특이적 결합은 총 [125I] SRIF-14결합에서 200nM 비표지된 SRIF-14의 존재하에서의 결합을 뺀 것으로 정의하였다.
표1은 본 발명의 선형펩티드에 의한 [125I] SRIF-14 결합억제의 결과를 보여준다.
결과는 I SRIF-14 결합을 50% 억제하는 유사체의 농도(nM)(IC)로 표시하였다.
괄호안의 수치는 실험횟수를 표시한다.
유사체의 구조는 다음과 같다.
BIM-23049/DC-23-76--β-D-Nal-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Ala-Thr-NH;
BIM-23050/DC-23-85--n-메틸-D--Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-NH;
BIM-23051/DC-23-89--D-Phe-Ala-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Ala-Thr-NH;
BIM-23052/DC-23-99--D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH;
BIM-23053/DC-25-4--D-Phe-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Ala-β-D-Nal-NH.
SRIF-14의 구조는 Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Ser-OH이다.
[ I] SRIFr-14의 농도는 대략 0.05nM이었다(괄호안의 숫자는 독립적인 결정횟수를 나타낸다). nM값으로 표시싼 IC(50% 경쟁억제를 일으키는 유사체의 농도)은 췌장, 스몰 세포 폐육종 (SCLS) 및 뇌에 대하여 나타내었다.
결과는 유사체 DC-25-4 및 DC-23-99가 I SRIF-14의 결합을 억제하는데 특히 효과적이라는 것을 보여준다.
본 발명에 속하지 않는 펩티드 DC-23-85는 약하게 1 SRIF-14의 결합을 억제한다.
[이용]
포유동물, 특히 인간에게(예를들면 서방형 제제, 생분해성 또는 비생분해성 제형으로 경구, 국소, 정맥내, 비경구 투여하거나, 코를 통하여 또는 좌약의 형태로)투여했을때, 본 화합물은 성장호르몬 방출을 억제하는데 뿐만아니라 소마토메딘(예, IGF-1), 인슐린, 글루카곤, 기타 자동부분비성장호르몬 또는 췌장의 외분비 분비물을 억제하는데 효과적일수 있으며, 또한 중추신경계에 치료학적인 영향을 줄 수 있다.
본 화합물은 소마토스타틴에 사용되는 용량으로, 또는 그의 강력한 역가 때문에 보다 적은 용량으로 포유동물, 예를들면 인간에게 투여할 수 있다.
본 발명의 화합물은 암, 특히 성장 호르몬-의존성 암 (예를 들면, 뼈, 연골, 췌장(내분비 및 외분비), 전립선 또는 유방), 선단거대증 및 관련된 과분비 내분비 상태의 치료, 또는 구급환자 및 췌장염 또는 설사로 고통받는 환자의 출혈성 궤양을 치료하는데 사용될수 있다.
본 화합물은 또한 당뇨병의 처치 및 경변 및 간염으로 고생하는 환자의 간을 보호하기 위해 사용될수도 있다.
본 화합물은 또한 알쯔하이머 병을 치료하는데 사용될수 있고, 특정 오피에이트 수용체에 특이적으로 작용하므로 동통을 치료하기 위한 진통제로, 그리고 궤양치료를 위한 위 세포보호 화합물로 사용될 수도 있다.
본 화합물은 또한 특정종류의 버섯중독을 치로하는데 이용될 수도 있다.
본 화합물은 또한 당뇨병-관련 망막증을 치료하는데 이용될 수도 있다.
본 화합물은 항-암작용은 상피세포 성장인자 같은 암-관련 성장인자를 길항할 수 있는 능력과 관련되어 있다.
본 화합물은 0.01~1000mcg/kg/일, 바람직하게는 0.1~100mcg/kg/일의 용량으로 포유동물, 예를들면 사람에게 투여할수 있다.
[기전]
기존의 소마토스타틴의 유사체의 작용은 펩티드 말단에 또는 그 부근에 위치한 시스템인 잔기사이의 디술피드 결합의 존재에 의존한다(예를들면, 본 명세서에는 참고로 삽입한 코이등(Coy et al.)의 미국특허 제4,485,101호 참조).
디술피드 결합은 작용에 고리형 배위가 필수적이라는 결과를 낳는다.
디술피드 결합의 존재는 이들 합성 펩티드에서 바람직하지 않은 점인데, 이는 디술피드 결합의 합성을 유리하게 만드는 단계가 합성의 총수율을 엄청나게 떨어뜨리기 때문이다.
덧붙여, 디술피드 결합은 산화의 대상이 되버 덜 안정한 생성물을 낳는다.
본 발명은 디술피드 결합의 이용을 피하여 그에 부수되는 결점을 피하였다.
본 발명의 옥타펩티드는 임계적으로 배치시킨 구성 아미노산 잔기의 측쇄 사이의 비공유적 상호작용을 이용하여 펩티드상에 헤어핀 또는 준-고리형 배위를 '부여하였다.
본 발명의 아미노산 잔기의 측쇄 및 치환된 측쇄는 펩티드상에 바람직한 삼차구조를 부여하려는 경향이 있는 두 종류의 상호작용을 받는다.
첫번째 종류의 상호작용은, 소수성 측쇄를 갖는 아미노산이 펩티드의 양 말단에 또는 그 가까이에 위치해 있을 때 발생한다.
이 구조의 펩티드는 소수성 부위가 극성물질과 접촉하기를 꺼려하는 경향을 나타낸다.
펩티드의 각 말단에 있는 소수성 기사이의 상호작용은 이들 기와 생리적 환경의 극성 용매사이의 상호작용보다 우세하여 펩티드상에 헤어핀 또는 준-고리형 배위를 부여 한다.
두 번째 종류의 상호작용은 펩티드의 반대쪽 말단에 있는 아미노산 전자-공여부위와 전자-끌어당김 부위의 상호작용의 결과로 발생한다.
본 발명은 전자-공여기를 갖는 아미노산이 펩티드의 한쪽 말단영역에 위치한 한편, 전자-끌어당김 기를 갖는 아미노산이 펩티드의 다른쪽 말단 영역에 위치해있는 펩티드를 특징으로 한다.
펩티드의 한쪽 말단에 있는 전자-공여기와 펩티드의 다른쪽 말단에 있는 전자-끌어당김기 사이의 인력이 펩티드 상에 헤어핀 또는 준-고리형 구조를 부여하도록 작용한다.
주어진 펩티드 안에서 소수성-소수성 상호작용 및 전자공여~전자 끌어당김 상호작용 모두가 작용할 수 있다.
다른 구현예는 다음의 특허청구의 범위내에 있다.

Claims (2)

  1. 하기 식을 갖는 옥타펩티드 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염:
  2. 성장호르몬, 인슐린, 소마토메딘류(예, IGF-1), 글루카곤, 기타 자동부분비 성장인자, 또는 췌장의 외분비 분비물의 감소가 필요한 포유동물에게 치료학적으로 유효한 양의 제1항의 화합물을 투여함을 특징으로 하는, 성장호르몬, 인슐린, 소마토메딘류(예, IGF-1), 글루카곤, 기타 자동부분비 성장인자, 또는 췌장의 외분비 분비물의 감소가 필요한 인간을 제외한 포유동물의 치료방법.
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