JPWO2021188554A5 - - Google Patents

Claims (10)

1. 遺伝子改変微生物であって、前記遺伝子改変微生物は、
   内因性ｃａｓ３ヌクレアーゼの欠失または変異、
   Ｃａｓｃａｄｅオペロンの条件付き過剰発現を可能にするプロモーターに作動可能に連結されたＣａｓｃａｄｅオペロン、および
   少なくとも１つのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓｃａｄｅ ｇＲＮＡが条件付きで発現され得るガイドアレイであって、前記ガイドアレイの発現が、少なくとも１つの遺伝子の発現減少をもたらす、ガイドアレイ、を有し、
   内因性ｃａｓ３ヌクレアーゼの欠失もしくは変異またはＣａｓｃａｄｅオペロンの条件付き発現を欠く遺伝子改変微生物と比較した場合、前記ガイドアレイの安定性の向上を特徴とする、遺伝子改変微生物。
2. 内因性ｃａｓ１遺伝子が、欠失または変異している、請求項１に記載の遺伝子改変微生物。
3. Ｃａｓｃａｄｅオペロンが、厳密に抑制される誘導性プロモーターの制御下で過剰発現する、請求項１に記載の遺伝子改変微生物。
4. 厳密に抑制される誘導性プロモーターが、ＰｈｏＢ活性化される、請求項３に記載の遺伝子改変微生物。
5. 遺伝子改変微生物が、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）微生物である、請求項１に記載の遺伝子改変微生物。
6. 発現減少遺伝子が、ｆａｂＩ、ｇｌｔＡ１、ｇｌｔＡ２、ｕｄｈＡ、およびｚｗｆからなる群から選択される、請求項１に記載の遺伝子改変微生物。
7. 遺伝子改変微生物において遺伝子を条件付きでサイレンシングする方法であって、
   内因性ｃａｓ３ヌクレアーゼの欠失または変異；
   Ｃａｓｃａｄｅオペロン；および
   少なくとも１つのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓｃａｄｅ ｇＲＮＡを含む少なくとも１つのガイドアレイ
   を特徴とする遺伝子改変微生物を提供することと、
   前記ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓｃａｄｅ ｇＲＮＡの発現が、前記遺伝子改変微生物の少なくとも１つの遺伝子の発現減少をもたらす条件下で、前記遺伝子改変微生物を増殖させることと、
   を含む、方法。
8. 遺伝子改変微生物が、内因性ｃａｓ１遺伝子の欠失または変異をさらに含む、請求項７に記載の方法。
9. 遺伝子改変微生物が、ＰｈｏＢ活性化される誘導性プロモーターの制御下にあるＣａｓｃａｄｅオペロンによってさらに特徴付けられる、請求項７に記載の方法。
10. 遺伝子改変微生物が、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）微生物である、または発現減少遺伝子が、ｆａｂＩ、ｇｌｔＡ１、ｇｌｔＡ２、ｕｄｈＡ、およびｚｗｆからなる群から選択される、請求項７に記載の方法。