JPWO2021186363A5 - - Google Patents

Description

本発明はまた、本発明の第２の態様の方法から得ることができるまたは得られたタンパク質（例えば、抗体）（前記タンパク質は、約１０ｐｐｍ～約４０００ｐｐｍ、または約１０ｐｐｍ～約３０００ｐｐｍ、または約１０ｐｐｍ～約２０００ｐｐｍ、または約１０ｐｐｍ～約８００ｐｐｍ、または約１０ｐｐｍ～約７００ｐｐｍで存在するインタクトなポリソルベートを含有する）もまた提供し、さらにまた、医薬における、例えば、ヒト対象に投与するための医薬製剤の調製における、前記タンパク質の使用も提供する。

本発明の方法を使用した分離に言及する場合、意味することは、インタクトなポリソルベートピーク（すなわち、モノエステル）が、オレイン酸ピークから分離されなければならないということである。オレイン酸ピークとインタクトなポリソルベートモノエステルピークの間の分解能は、１.５以上である。他のピークは、互いに単純に識別可能である必要がある。さらに、ある実施形態において、インタクトなポリソルベート（すなわち、モノエステル）の保持時間における、面積で約３％を超える妨害ピークが存在しないという特異性要件が存在する。ある実施形態において、本発明は、タンパク質（例えば、抗体サンプル）を含有するサンプル中のポリソルベートを同定する方法であって、以下の工程：
（ｉ）前記サンプルをメタノールまたはＩＰＡに曝露することによって、前記タンパク質を沈殿させる工程；
（ｉｉ）沈殿させた前記サンプルを遠心分離して前記タンパク質またはペプチドをペレット化することによって、沈殿させた前記サンプルから前記タンパク質を分離し、液体上清を得る工程；
（ｉｉｉ）前記上清を、約３００オングストロームの孔径を有し、かつ固定化シアノ基を備えるシリカカラムによる逆相ＨＰＬＣに適用し、ＡおよびＢからなる移動相組成物グラジエントを使用して溶出させることによって、前記ポリソルベートを分離する工程、ここで、Ａは、０.１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）のＨ_２Ｏ混合液であり、Ｂは、メタノールまたはアセトニトリルである；および
（ｉｖ）荷電化粒子検出器（ＣＡＤ）を使用して、分離された前記ポリソルベートを検出し、ポリソルベート産物を同定する工程
を含む、方法を提供する。