JPWO2020264253A5 - - Google Patents

Claims (49)

1. 少なくとも１つの目的の配列（ＳＯＩ）を発現する標的化組込み（ＴＩ）宿主細胞のライブラリを生成及びハイスループット・スクリーニングするための方法であって、
   ａ）１つ又は複数のＳＯＩを発現する複数のＴＩ宿主細胞を含むＴＩ宿主細胞の前記ライブラリを、
   ｉ）複数のＴＩ宿主細胞を提供すること、
   ｉｉ）前記複数のＴＩ宿主細胞を、１つ又は複数のＳＯＩを含む複数のベクターと接触させること、
   ｉｉｉ）前記１つ又は複数のＳＯＩを前記複数のＴＩ宿主細胞のうちの１つ又は複数の、ＮＷ＿００６８８１２９６．１の配列と少なくとも約９０％相同のゲノムの遺伝子座内に導入すること、によって生成することと、
   ｂ）前記ライブラリを単一クローンに分離することと、
   ｃ）特定の細胞又は産物属性について前記クローンをスクリーニングすることと、を含む、方法。
2. 前記１つ又は複数のＳＯＩが、リコンビナーゼ媒介性組込み又は遺伝子編集媒介性組込みによって前記複数のＴＩ宿主細胞のうちの１つ又は複数に導入される、請求項１に記載の方法。
3. 前記１つ又は複数のＳＯＩが、１つ又は複数の調節可能なプロモーターに作用可能に連結されている、請求項１に記載の方法。
4. 前記ＴＩ宿主細胞が哺乳動物宿主細胞である、請求項１に記載の方法。
5. 前記ＳＯＩが、一本鎖抗体、抗体軽鎖、抗体重鎖、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、又はＦｃ融合タンパク質をコードする、請求項１に記載の方法。
6. 前記特定の細胞属性が、細胞増殖、細胞力価、比生産性、体積生産性、クローン安定性から選択される、請求項１に記載の方法。
7. 前記特定の産物属性が、グリコシル化のレベル、電荷分散のレベル、ミスマッチの減少、タンパク質／ペプチド凝集の減少、タンパク質配列不均一性から選択される、請求項１に記載の方法。
8. 少なくとも１つの目的の配列（ＳＯＩ）を発現する標的化組込み（ＴＩ）宿主細胞のライブラリを生成及びハイスループット・スクリーニングするための方法であって、
   ａ）１つ又は複数のＳＯＩを発現する複数のＴＩ宿主細胞を含むＴＩ宿主細胞の前記ライブラリを、
   ｉ）複数のＴＩ宿主細胞を提供すること、
   ｉｉ）前記複数のＴＩ宿主細胞を、１つ又は複数のＳＯＩを含む複数のベクターと接触させること、
   ｉｉｉ）前記１つ又は複数のＳＯＩを前記複数のＴＩ宿主細胞のうちの１つ又は複数の、ＮＷ＿００６８８４５９２．１の配列と少なくとも約９０％相同のゲノムの遺伝子座内に導入すること、によって生成することと、
   ｂ）前記ライブラリを単一クローンに分離することと、
   ｃ）特定の細胞又は産物属性について前記クローンをスクリーニングすることと、を含む方法。
9. 前記１つ又は複数のＳＯＩが、リコンビナーゼ媒介性組込み又は遺伝子編集媒介性組込みによって前記複数のＴＩ宿主細胞のうちの１つ又は複数に導入される、請求項８に記載の方法。
10. 前記１つ又は複数のＳＯＩが、１つ又は複数の調節可能なプロモーターに作用可能に連結されている、請求項８に記載の方法。
11. 前記ＴＩ宿主細胞が哺乳動物宿主細胞である、請求項８に記載の方法。
12. 前記ＳＯＩが、一本鎖抗体、抗体軽鎖、抗体重鎖、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、又はＦｃ融合タンパク質をコードする、請求項８に記載の方法。
13. 前記特定の細胞属性が、細胞増殖、細胞力価、比生産性、体積生産性、クローン安定性から選択される、請求項８に記載の方法。
14. 前記特定の産物属性が、グリコシル化のレベル、電荷分散のレベル、ミスマッチの減少、タンパク質／ペプチド凝集の減少、タンパク質配列不均一性から選択される、請求項８に記載の方法。
15. 少なくとも１つの目的の配列（ＳＯＩ）を発現する標的化組込み（ＴＩ）宿主細胞のライブラリを生成及びハイスループット・スクリーニングするための方法であって、
    ａ）１つ又は複数のＳＯＩを発現する複数のＴＩ宿主細胞を含むＴＩ宿主細胞のライブラリを、
    ｉ）複数のＴＩ宿主細胞を提供すること、
    ｉｉ）前記複数のＴＩ宿主細胞を、１つ又は複数のＳＯＩを含む複数のベクターと接触させること、
    ｉｉｉ）前記１つ又は複数のＳＯＩを前記複数のＴＩ宿主細胞のうちの１つ又は複数の、ＮＷ＿００６８８１２９６．１の配列と少なくとも約９０％相同のゲノムの遺伝子座内に導入すること、によって生成することと、
    ｂ）前記ライブラリを単一クローンに分離することと、
    ｃ）特定の細胞又は産物属性について前記クローンをスクリーニングすることと、を含む方法。
16. 前記１つ又は複数のＳＯＩが、リコンビナーゼ媒介性組込み又は遺伝子編集媒介性組込みによって前記複数のＴＩ宿主細胞のうちの１つ又は複数に導入される、請求項１５に記載の方法。
17. 前記１つ又は複数のＳＯＩが、１つ又は複数の調節可能なプロモーターに作用可能に連結されている、請求項１５に記載の方法。
18. 前記ＴＩ宿主細胞が哺乳動物宿主細胞である、請求項１５に記載の方法。
19. 前記ＳＯＩが、一本鎖抗体、抗体軽鎖、抗体重鎖、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、又はＦｃ融合タンパク質をコードする、請求項１５に記載の方法。
20. 前記特定の細胞属性が、細胞増殖、細胞力価、比生産性、体積生産性、クローン安定性から選択される、請求項１５に記載の方法。
21. 前記特定の産物属性が、グリコシル化のレベル、電荷分散のレベル、ミスマッチの減少、タンパク質／ペプチド凝集の減少、タンパク質配列不均一性から選択される、請求項１５に記載の方法。
22. 少なくとも１つの目的の配列（ＳＯＩ）を発現する標的化組込み（ＴＩ）宿主細胞のライブラリを生成及びハイスループット・スクリーニングするための方法であって、
    ａ）１つ又は複数のＳＯＩを発現する複数のＴＩ宿主細胞を含むＴＩ宿主細胞の前記ライブラリを、
    ｉ）複数のＴＩ宿主細胞を提供すること、
    ｉｉ）前記複数のＴＩ宿主細胞を、１つ又は複数のＳＯＩを含む複数のベクターと接触させること、
    ｉｉｉ）前記１つ又は複数のＳＯＩを前記複数のＴＩ宿主細胞のうちの１つ又は複数の、ＮＷ＿００３６１６４１２．１の配列と少なくとも約９０％相同のゲノムの遺伝子座内に導入すること、によって生成することと、
    ｂ）前記ライブラリを単一クローンに分離することと、
    ｃ）特定の細胞又は産物属性について前記クローンをスクリーニングすることと、を含む、方法。
23. 前記１つ又は複数のＳＯＩが、リコンビナーゼ媒介性組込み又は遺伝子編集媒介性組込みによって前記複数のＴＩ宿主細胞のうちの１つ又は複数に導入される、請求項２２に記載の方法。
24. 前記１つ又は複数のＳＯＩが、１つ又は複数の調節可能なプロモーターに作用可能に連結されている、請求項２２に記載の方法。
25. 前記ＴＩ宿主細胞が哺乳動物宿主細胞である、請求項２２に記載の方法。
26. 前記ＳＯＩが、一本鎖抗体、抗体軽鎖、抗体重鎖、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、又はＦｃ融合タンパク質をコードする、請求項２２に記載の方法。
27. 前記特定の細胞属性が、細胞増殖、細胞力価、比生産性、体積生産性、クローン安定性から選択される、請求項２２に記載の方法。
28. 前記特定の産物属性が、グリコシル化のレベル、電荷分散のレベル、ミスマッチの減少、タンパク質／ペプチド凝集の減少、タンパク質配列不均一性から選択される、請求項２２に記載の方法。
29. 少なくとも１つの目的の配列（ＳＯＩ）を発現する標的化組込み（ＴＩ）宿主細胞のライブラリを生成及びハイスループット・スクリーニングするための方法であって、
    ａ）１つ又は複数のＳＯＩを発現する複数のＴＩ宿主細胞を含むＴＩ宿主細胞の前記ライブラリを、
    ｉ）複数のＴＩ宿主細胞を提供すること、
    ｉｉ）前記複数のＴＩ宿主細胞を、１つ又は複数のＳＯＩを含む複数のベクターと接触させること、
    ｉｉｉ）前記１つ又は複数のＳＯＩを前記複数のＴＩ宿主細胞のうちの１つ又は複数の、ＮＷ＿００３６１５０６３．１の配列と少なくとも約９０％相同のゲノムの遺伝子座内に導入すること、によって生成することと、
    ｂ）前記ライブラリを単一クローンに分離することと、
    ｃ）特定の細胞又は産物属性について前記クローンをスクリーニングすることと、を含む、方法。
30. 前記１つ又は複数のＳＯＩが、リコンビナーゼ媒介性組込み又は遺伝子編集媒介性組込みによって前記複数のＴＩ宿主細胞のうちの１つ又は複数に導入される、請求項２９に記載の方法。
31. 前記１つ又は複数のＳＯＩが、１つ又は複数の調節可能なプロモーターに作用可能に連結されている、請求項２９に記載の方法。
32. 前記ＴＩ宿主細胞が哺乳動物宿主細胞である、請求項２９に記載の方法。
33. 前記ＳＯＩが、一本鎖抗体、抗体軽鎖、抗体重鎖、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、又はＦｃ融合タンパク質をコードする、請求項２９に記載の方法。
34. 前記特定の細胞属性が、細胞増殖、細胞力価、比生産性、体積生産性、クローン安定性から選択される、請求項２９に記載の方法。
35. 前記特定の産物属性が、グリコシル化のレベル、電荷分散のレベル、ミスマッチの減少、タンパク質／ペプチド凝集の減少、タンパク質配列不均一性から選択される、請求項２９に記載の方法。
36. 少なくとも１つの目的の配列（ＳＯＩ）を発現する標的化組込み（ＴＩ）宿主細胞のライブラリを生成及びハイスループット・スクリーニングするための方法であって、
    ａ）１つ又は複数のＳＯＩを発現する複数のＴＩ宿主細胞を含むＴＩ宿主細胞の前記ライブラリを、
    ｉ）複数のＴＩ宿主細胞を提供すること、
    ｉｉ）前記複数のＴＩ宿主細胞を、１つ又は複数のＳＯＩを含む複数のベクターと接触させること、
    ｉｉｉ）前記１つ又は複数のＳＯＩを前記複数のＴＩ宿主細胞のうちの１つ又は複数の、ＮＷ＿００６８８２９３６．１の配列と少なくとも約９０％相同のゲノムの遺伝子座内に導入すること、によって生成することと、
    ｂ）前記ライブラリを単一クローンに分離することと、
    ｃ）特定の細胞又は産物属性について前記クローンをスクリーニングすることと、を含む、方法。
37. 前記１つ又は複数のＳＯＩが、リコンビナーゼ媒介性組込み又は遺伝子編集媒介性組込みによって前記複数のＴＩ宿主細胞のうちの１つ又は複数に導入される、請求項３６に記載の方法。
38. 前記１つ又は複数のＳＯＩが、１つ又は複数の調節可能なプロモーターに作用可能に連結されている、請求項３６に記載の方法。
39. 前記ＴＩ宿主細胞が哺乳動物宿主細胞である、請求項３６に記載の方法。
40. 前記ＳＯＩが、一本鎖抗体、抗体軽鎖、抗体重鎖、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、又はＦｃ融合タンパク質をコードする、請求項３６に記載の方法。
41. 前記特定の細胞属性が、細胞増殖、細胞力価、比生産性、体積生産性、クローン安定性から選択される、請求項３６に記載の方法。
42. 前記特定の産物属性が、グリコシル化のレベル、電荷分散のレベル、ミスマッチの減少、タンパク質／ペプチド凝集の減少、タンパク質配列不均一性から選択される、請求項３６に記載の方法。
43. 少なくとも１つの目的の配列（ＳＯＩ）を発現する標的化組込み（ＴＩ）宿主細胞のライブラリを生成及びハイスループット・スクリーニングするための方法であって、
    ａ）１つ又は複数のＳＯＩを発現する複数のＴＩ宿主細胞を含むＴＩ宿主細胞の前記ライブラリを、
    ｉ）複数のＴＩ宿主細胞を提供すること、
    ｉｉ）前記複数のＴＩ宿主細胞を、１つ又は複数のＳＯＩを含む複数のベクターと接触させること、
    ｉｉｉ）前記１つ又は複数のＳＯＩを前記複数のＴＩ宿主細胞のうちの１つ又は複数の、ＮＷ＿００３６１５４１１．１の配列と少なくとも約９０％相同のゲノムの遺伝子座内に導入すること、によって生成することと、
    ｂ）前記ライブラリを単一クローンに分離することと、
    ｃ）特定の細胞又は産物属性について前記クローンをスクリーニングすることと、を含む、方法。
44. 前記１つ又は複数のＳＯＩが、リコンビナーゼ媒介性組込み又は遺伝子編集媒介性組込みによって前記複数のＴＩ宿主細胞のうちの１つ又は複数に導入される、請求項４３に記載の方法。
45. 前記１つ又は複数のＳＯＩが、１つ又は複数の調節可能なプロモーターに作用可能に連結されている、請求項４３に記載の方法。
46. 前記ＴＩ宿主細胞が哺乳動物宿主細胞である、請求項４３に記載の方法。
47. 前記ＳＯＩが、一本鎖抗体、抗体軽鎖、抗体重鎖、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、又はＦｃ融合タンパク質をコードする、請求項４３に記載の方法。
48. 前記特定の細胞属性が、細胞増殖、細胞力価、比生産性、体積生産性、クローン安定性から選択される、請求項４３に記載の方法。
49. 前記特定の産物属性が、グリコシル化のレベル、電荷分散のレベル、ミスマッチの減少、タンパク質／ペプチド凝集の減少、タンパク質配列不均一性から選択される、請求項４３に記載の方法。