JPWO2020247623A5 - - Google Patents
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Description
当業者は、本明細書に記載されるアッセイまたは他のプロセスで得られた値に起因する逸脱または誤差の典型的な基準を理解する。本発明の背景技術を説明するために及びその実施に関する追加の詳細を提供するために本明細書で参照された刊行物、ウェブサイト及び他の参考文献は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
遺伝子改変されたげっ歯類であって、その生殖細胞系列ゲノムは、
げっ歯類Ｃλ遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含む修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含み、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含み、
前記遺伝子改変されたげっ歯類のＢ細胞によって発現されるすべての免疫グロブリンλ軽鎖は、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンから発現されるヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを含む、前記遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目２)
前記遺伝子改変されたげっ歯類の前記生殖細胞系列ゲノムは、前記修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてホモ接合性である、項目１に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目３)
前記遺伝子改変されたげっ歯類の前記生殖細胞系列ゲノムは、前記修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてヘテロ接合性である、項目１に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目４)
前記生殖細胞系列ゲノムは、
１つ以上のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能に連結された１つ以上の非再編成ヒトＶ Ｈ 遺伝子セグメント、１つ以上の非再編成ヒトＤ Ｈ 遺伝子セグメント、及び１つ以上の非再編成ヒトＪ Ｈ 遺伝子セグメントを含む修飾された内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座をさらに含み、
前記遺伝子改変されたげっ歯類のＢ細胞によって発現されるすべての重鎖は、ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメイン及びげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、項目１～３のいずれかに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目５)
前記遺伝子改変されたげっ歯類の前記生殖細胞系列ゲノムは、前記修飾された内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてホモ接合性である、項目４に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目６)
前記遺伝子改変されたげっ歯類は、前記修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座でげっ歯類Ｃκ遺伝子を欠く、項目１～５のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目７)
前記ヒトＶλ遺伝子セグメントは、Ｖλ１－５１、Ｖλ５－４５、Ｖλ１－４４、Ｖλ１－４０、Ｖλ３－２１、またはＶλ２－１４を含む、項目１～６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目８)
前記ヒトＶλ遺伝子セグメントは、Ｖλ１－５１を含む、項目１～７のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目９)
前記ヒトＶλ遺伝子セグメントは、Ｖλ２－１４を含む、項目１～７のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目１０)
前記ヒトＪλ遺伝子セグメントは、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７を含む、項目１～９のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目１１)
前記ヒトＪλ遺伝子セグメントは、Ｊλ２を含む、項目１～１０のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目１２)
前記１つ以上の非再編成ヒトＶ Ｈ 遺伝子セグメント、１つ以上の非再編成ヒトＤ Ｈ 遺伝子セグメント、及び１つ以上の非再編成ヒトＪ Ｈ 遺伝子セグメントは、１つ以上の内因性Ｖ Ｈ 遺伝子セグメント、１つ以上の内因性Ｄ Ｈ 遺伝子セグメント、１つ以上の内因性Ｊ Ｈ 遺伝子セグメント、またはそれらの組み合わせの代わりである、項目４～１１のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目１３)
前記１つ以上の非再編成ヒトＶ Ｈ 遺伝子セグメント、１つ以上の非再編成ヒトＤ Ｈ 遺伝子セグメント、及び１つ以上の非再編成ヒトＪ Ｈ 遺伝子セグメントは、１つ以上の内因性Ｖ Ｈ 遺伝子セグメント、１つ以上の内因性Ｄ Ｈ 遺伝子セグメント、及び１つ以上の内因性Ｊ Ｈ 遺伝子セグメントにそれぞれ置き換わる、項目４～１２のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目１４)
前記１つ以上のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子は、１つ以上の内因性げっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子である、項目１２または１３に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目１５)
（ｉ）前記１つ以上の非再編成ヒトＶ Ｈ 遺伝子セグメントは、Ｖ Ｈ ３－７４、Ｖ Ｈ ３－７３、Ｖ Ｈ ３－７２、Ｖ Ｈ ２－７０、Ｖ Ｈ １－６９、Ｖ Ｈ ３－６６、Ｖ Ｈ ３－６４、Ｖ Ｈ ４－６１、Ｖ Ｈ ４－５９、Ｖ Ｈ １－５８、Ｖ Ｈ ３－５３、Ｖ Ｈ ５－５１、Ｖ Ｈ ３－４９、Ｖ Ｈ ３－４８、Ｖ Ｈ １－４６、Ｖ Ｈ １－４５、Ｖ Ｈ ３－４３、Ｖ Ｈ ４－３９、Ｖ Ｈ ４－３４、Ｖ Ｈ ３－３３、Ｖ Ｈ ４－３１、Ｖ Ｈ ３－３０、Ｖ Ｈ ４－２８、Ｖ Ｈ ２－２６、Ｖ Ｈ １－２４、Ｖ Ｈ ３－２３、Ｖ Ｈ ３－２１、Ｖ Ｈ ３－２０、Ｖ Ｈ １－１８、Ｖ Ｈ ３－１５、Ｖ Ｈ ３－１３、Ｖ Ｈ ３－１１、Ｖ Ｈ ３－９、Ｖ Ｈ １－８、Ｖ Ｈ ３－７、Ｖ Ｈ ２－５、Ｖ Ｈ ７－４－１、Ｖ Ｈ ４－４、Ｖ Ｈ １－３、Ｖ Ｈ １－２、Ｖ Ｈ ６－１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉ）前記１つ以上の非再編成ヒトＤ Ｈ 遺伝子セグメントは、Ｄ Ｈ １－１、Ｄ Ｈ ２－２、Ｄ Ｈ ３－３、Ｄ Ｈ ４－４、Ｄ Ｈ ５－５、Ｄ Ｈ ６－６、Ｄ Ｈ １－７、Ｄ Ｈ ２－８、Ｄ Ｈ ３－９、Ｄ Ｈ ３－１０、Ｄ Ｈ ５－１２、Ｄ Ｈ ６－１３、Ｄ Ｈ ２－１５、Ｄ Ｈ ３－１６、Ｄ Ｈ ４－１７、Ｄ Ｈ ６－１９、Ｄ Ｈ １－２０、Ｄ Ｈ ２－２１、Ｄ Ｈ ３－２２、Ｄ Ｈ ６－２５、Ｄ Ｈ １－２６、Ｄ Ｈ ７－２７、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉｉ）前記１つ以上の非再編成ヒトＪ Ｈ 遺伝子セグメントは、Ｊ Ｈ １、Ｊ Ｈ ２、Ｊ Ｈ ３、Ｊ Ｈ ４、Ｊ Ｈ ５、Ｊ Ｈ ６、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
項目４～１４のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目１６)
前記遺伝子改変されたげっ歯類の前記生殖細胞系列ゲノムは、１つ以上のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、その機能性オルソログ、機能性ホモログ、または機能性断片をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む、項目４～１５のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目１７)
前記げっ歯類Ｃλ遺伝子は、（ｉ）マウスＣλ１、（ｉｉ）マウスＣλ２、または（ｉｉｉ）マウスＣλ３遺伝子と少なくとも８０％同一の配列を有する、項目１～１６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目１８)
前記げっ歯類Ｃλ遺伝子は、マウスＣλ遺伝子を含む、項目１～１７のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目１９)
前記げっ歯類Ｃλ遺伝子は、マウスＣλ１遺伝子を含む、項目１～１７のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目２０)
前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、１つ以上のげっ歯類Ｖκ遺伝子セグメント、１つ以上のげっ歯類Ｊκ遺伝子セグメント、またはそれらの任意の組み合わせの代わりである、項目１～１９のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目２１)
不活性化内因性免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座をさらに含む、項目１～２０のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目２２)
前記遺伝子改変されたげっ歯類のＢ細胞によって発現されるすべての免疫グロブリン軽鎖は、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンから発現されるヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを含む、項目１～２１のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目２３)
前記修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、前記内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座におけるそれらの内因性位置で１つ以上の内因性エンハンサーをさらに含む、項目１～２２のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目２４)
前記げっ歯類は、ラットまたはマウスである、項目１～２３のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目２５)
遺伝子改変されたマウスであって、その生殖細胞系列ゲノムは、
マウスＣλ１遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含む修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含み、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ１－５１遺伝子セグメント及びヒトＪλ２遺伝子セグメントを含み、
前記遺伝子改変されたマウスのＢ細胞によって発現されるすべての免疫グロブリンλ軽鎖は、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンから発現されるヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを含む、前記遺伝子改変されたマウス。
(項目２６)
遺伝子改変されたマウスであって、その生殖細胞系列ゲノムは、
マウスＣλ１遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含む修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含み、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ２－１４遺伝子セグメント及びヒトＪλ２遺伝子セグメントを含み、
前記遺伝子改変されたマウスのＢ細胞によって発現されるすべての免疫グロブリンλ軽鎖は、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンから発現されるヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを含む、前記遺伝子改変されたマウス。
(項目２７)
げっ歯類胚であって、そのゲノムは、げっ歯類Ｃλ遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含む修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含み、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む、前記げっ歯類胚。
(項目２８)
項目１～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスのＢ細胞であって、
前記修飾された内因性κ軽鎖遺伝子座の前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンを含む、前記Ｂ細胞。
(項目２９)
項目２８に記載のＢ細胞から生成されたハイブリドーマ。
(項目３０)
単一の遺伝子改変されたげっ歯類のＢ細胞の集団であって、前記げっ歯類は、その生殖細胞系列ゲノムにおいて、
（ａ）げっ歯類Ｃλ遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含む修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座であって、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＪλ遺伝子セグメントに機能可能に連結されたヒトＶλ遺伝子セグメントを含む、前記修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、及び
（ｂ）１つ以上の内因性免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能に連結された１つ以上の非再編成ヒトＶ Ｈ 遺伝子セグメント、１つ以上の非再編成ヒトＤ Ｈ 遺伝子セグメント、及び１つ以上の非再編成ヒトＪ Ｈ 遺伝子セグメントを含む修飾された内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座
を含み、
前記Ｂ細胞の集団によって発現されるすべての抗体は、
（ｉ）前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンから発現されるヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメイン、及び
（ｉｉ）少なくとも２つの異なる再編成されたヒト免疫グロブリン重鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンから発現される複数のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む、前記Ｂ細胞の集団。
(項目３１)
げっ歯類Ｃλ遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含む修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含む胚性幹細胞であって、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む、前記胚性幹細胞。
(項目３２)
抗体を発現する哺乳動物細胞であって、前記抗体は、ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む重鎖及びヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを含む軽鎖を含み、前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメイン、前記ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメイン、またはその両方は、項目４～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスから同定された、前記哺乳動物細胞。
(項目３３)
抗体を作製する方法であって、前記方法は、
（ａ）項目１～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを抗原に曝露すること；
（ｂ）前記遺伝子改変されたげっ歯類が前記抗原に対する免疫反応を起こすことを可能にすること；及び
（ｃ）前記遺伝子改変されたげっ歯類から前記抗原に特異的な抗体、前記抗原に特異的な抗体を発現するＢ細胞、または前記抗原に特異的な抗体をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を単離すること
を含む、前記方法。
(項目３４)
抗体を作製する方法であって、
（ａ）哺乳動物細胞において２つのヒト免疫グロブリンλ軽鎖及び２つのヒト免疫グロブリン重鎖を含む前記抗体を発現させる工程であって、各ヒト免疫グロブリンλ軽鎖は、ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを含み、各ヒト免疫グロブリン重鎖は、ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含み、前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインの少なくとも１つ、前記λ軽鎖可変ドメインの少なくとも１つ、またはそれらの組み合わせのアミノ酸配列は、項目４～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスにおいて同定された、前記発現させる工程；及び
（ｂ）前記抗体を得る工程
を含む、前記方法。
(項目３５)
二重特異的抗体を作製する方法であって、前記方法は、
（ａ）項目４～２６のいずれか１項に記載の第１の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを第１の抗原の第１のエピトープと接触させること、
（ｂ）項目４～２６のいずれか１項に記載の第２の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを第２の抗原の第２のエピトープと接触させること、
（ｃ）前記第１の遺伝子改変されたげっ歯類から前記第１の抗原の前記第１のエピトープに特異的な第１の抗体を発現するＢ細胞を単離し、前記第１の抗体の第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを決定すること；
（ｄ）前記第２の遺伝子改変されたげっ歯類から前記第２の抗原の前記第２のエピトープに特異的な第２の抗体を発現するＢ細胞を単離し、前記第２の抗体の第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを決定すること；
（ｅ）前記第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を、第１のヒト免疫グロブリン定常ドメインをコードするヌクレオチド配列と機能可能に連結させて第１のヒト重鎖をコードする第１のヌクレオチド配列を生成すること；
（ｆ）前記第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を、第２のヒト免疫グロブリン定常ドメインをコードするヌクレオチド配列と機能可能に連結させて第２のヒト重鎖をコードする第２のヌクレオチド配列を生成すること；
（ｇ）哺乳動物細胞において、
（ｉ）第１のヌクレオチド配列；
（ｉｉ）第２のヌクレオチド配列；及び
（ｉｉｉ）ヒト免疫グロブリンλ軽鎖定常領域に機能可能に連結された前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンを含む第３のヌクレオチド配列
を発現させること
を含む、前記方法。
(項目３６)
二重特異的抗体を作製する方法であって、前記方法は、
（ａ）哺乳動物細胞において、
（ｉ）第１のヒト免疫グロブリン定常領域に機能可能に連結された第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域を含む第１のヌクレオチド配列；
（ｉｉ）第２のヒト免疫グロブリン定常領域に機能可能に連結された第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域を含む第２のヌクレオチド配列；及び
（ｉｉｉ）ヒト免疫グロブリンλ軽鎖定常領域に機能可能に連結されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含む第３のヌクレオチド配列
を発現させることを含み、
前記第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域は、第１の抗原の第１のエピトープで免疫された第１の遺伝子改変されたげっ歯類における第１の抗体から同定された第１のヒト重鎖可変ドメインをコードし、前記第１の抗体は、前記第１の抗原の前記第１のエピトープに特異的に結合し；
前記第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域は、第２の抗原の第２のエピトープで免疫された第２の遺伝子改変されたげっ歯類における第２の抗体から同定された第２のヒト重鎖可変ドメインをコードし、前記第２の抗体は、前記第２の抗原の前記第２のエピトープに特異的に結合し；
前記第１及び第２の遺伝子改変されたげっ歯類はそれぞれ、項目４～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスであり；
前記第３のヌクレオチドの前記ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンである、前記方法。
(項目３７)
ヒト免疫グロブリン重鎖を作製するための方法であって、前記方法は、
（ａ）項目４～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを対象となる抗原に曝露する工程；
（ｂ）前記抗原に特異的に結合し、かつ前記遺伝子改変されたげっ歯類によって生成された抗体のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列を得る工程；及び
（ｃ）前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列をヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメイン配列に機能可能に連結させてヒト免疫グロブリン重鎖を形成する工程
を含む、前記方法。
(項目３８)
ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを作製するための方法であって、前記方法は、
（ａ）項目４～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを対象となる抗原に曝露する工程；及び
（ｂ）前記抗原に特異的に結合し、かつ前記遺伝子改変されたげっ歯類によって生成された抗体のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列を得る工程
を含む、前記方法。
(項目３９)
ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインのコレクションを作製する方法であって、
（ａ）項目４～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを対象となる抗原に曝露すること、及び
（ｂ）前記遺伝子改変されたげっ歯類から前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインのコレクションを単離すること
を含み、
前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインのコレクションはそれぞれ、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンから発現されるヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインに結合し、
前記コレクションにおける前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインのいずれか１つと対合した前記ヒトλ軽鎖可変ドメインは、前記抗原に結合する、前記方法。
(項目４０)
ヒト免疫グロブリンλ軽鎖を作製するための方法であって、前記方法は、
（ａ）項目１～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを対象となる抗原に曝露する工程；
（ｂ）前記抗原に特異的に結合し、かつ前記遺伝子改変されたげっ歯類によって生成された抗体のヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメイン配列を得る工程；及び
（ｃ）前記ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメイン配列をヒト免疫グロブリンλ軽鎖定常ドメイン配列に機能可能に連結させてヒト免疫グロブリンλ軽鎖を形成する工程
を含む、前記方法。
(項目４１)
ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを生成するための方法であって、前記方法は、
（ａ）項目１～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを対象となる抗原に曝露する工程；及び
（ｂ）前記抗原に特異的に結合し、かつ前記遺伝子改変されたげっ歯類によって生成された抗体のヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメイン配列を得る工程
を含む、前記方法。
(項目４２)
ヒト免疫グロブリン重鎖をコードするヌクレオチド配列を作製するための方法であって、前記方法は、
（ａ）項目４～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを対象となる抗原に曝露する工程；
（ｂ）前記抗原に特異的に結合し、かつ前記遺伝子改変されたげっ歯類によって生成された抗体のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列をコードするヒト免疫グロブリン重鎖可変領域を得る工程；及び
（ｃ）前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域をヒト免疫グロブリン重鎖定常領域配列に機能可能に連結させてヒト免疫グロブリン重鎖をコードするヌクレオチド配列を形成する工程
を含む、前記方法。
(項目４３)
ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域を含むヌクレオチド配列を作製するための方法であって、前記方法は、
（ａ）項目４～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを対象となる抗原に曝露する工程；及び
（ｂ）前記抗原に特異的に結合し、かつ前記遺伝子改変されたげっ歯類によって生成された抗体のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列をコードするヒト免疫グロブリン重鎖可変領域を得る工程
を含む、前記方法。
(項目４４)
ヒト免疫グロブリンλ軽鎖をコードするヌクレオチド配列を作製するための方法であって、前記方法は、
（ａ）項目１～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを対象となる抗原に曝露する工程；
（ｂ）前記抗原に特異的に結合し、かつ前記遺伝子改変されたげっ歯類によって生成された抗体のヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメイン配列をコードするヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を得る工程；及び
（ｃ）前記ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域をヒト免疫グロブリンλ軽鎖定常領域配列に機能可能に連結させてヒト免疫グロブリンλ軽鎖をコードするヌクレオチド配列を形成する工程
を含む、前記方法。
(項目４５)
ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含むヌクレオチド配列を作製するための方法であって、前記方法は、
（ａ）項目１～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを対象となる抗原に曝露する工程；及び
（ｂ）前記抗原に特異的に結合し、かつ前記遺伝子改変されたげっ歯類によって生成された抗体のヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメイン配列をコードするヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を得る工程
を含む、前記方法。
(項目４６)
ターゲティングベクターであって、
（ｉ）内因性げっ歯類κ軽鎖遺伝子座における５’標的配列に対応するヌクレオチド配列を含む５’ホモロジーアーム；
（ｉｉ）Ｖλ遺伝子セグメント及びＪλ遺伝子セグメントを含む単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域；
（ｉｉｉ）げっ歯類Ｃλ遺伝子セグメント；及び
（ｉｖ）前記内因性げっ歯類κ軽鎖遺伝子座における３’標的配列に対応するヌクレオチド配列を含む３’ホモロジーアーム
を含む、前記ターゲティングベクター。
(項目４７)
遺伝子改変されたげっ歯類を作製する方法であって、
（ａ）ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を、げっ歯類ＥＳ細胞のゲノムにおける修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に導入する工程；及び
（ｂ）工程（ａ）において生成された前記げっ歯類ＥＳ細胞を使用してげっ歯類を生成する工程
を含む、前記方法。
(項目４８)
遺伝子改変されたげっ歯類を作製する方法であって、
（ａ）げっ歯類Ｃλ遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を、げっ歯類ＥＳ細胞のゲノムにおける修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に導入する工程であって、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む、前記導入する工程；及び
（ｂ）工程（ａ）において生成された前記げっ歯類ＥＳ細胞を使用してげっ歯類を生成する工程
を含む、前記方法。
(項目４９)
遺伝子改変されたげっ歯類ＥＳ細胞を作製する方法であって、
ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を、げっ歯類ＥＳ細胞のゲノムにおける修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に導入する工程
を含む、前記方法。
(項目５０)
遺伝子改変されたげっ歯類ＥＳ細胞を作製する方法であって、
げっ歯類Ｃλ遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を、げっ歯類ＥＳ細胞のゲノムにおける修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に導入する工程であって、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む、前記導入する工程
を含む、前記方法。
(項目５１)
遺伝子改変されたげっ歯類を作製する方法であって、
（ａ）前記げっ歯類の前記生殖細胞系列ゲノムにおける内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を、げっ歯類Ｃλ遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含むように修飾する工程であって、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む、前記修飾する工程を含み、
これにより前記遺伝子改変されたげっ歯類のＢ細胞によって発現されるすべての免疫グロブリンλ軽鎖は、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンから発現されるヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを含む、前記方法。
(項目５２)
組換えげっ歯類細胞を生成するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ方法であって、前記組換えげっ歯類細胞のゲノムを、
げっ歯類Ｃλ遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含む修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含むように改変することを含み、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む、前記ｉｎ ｖｉｔｒｏ方法。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
遺伝子改変されたげっ歯類であって、その生殖細胞系列ゲノムは、
げっ歯類Ｃλ遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含む修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含み、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含み、
前記遺伝子改変されたげっ歯類のＢ細胞によって発現されるすべての免疫グロブリンλ軽鎖は、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンから発現されるヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを含む、前記遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目２)
前記遺伝子改変されたげっ歯類の前記生殖細胞系列ゲノムは、前記修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてホモ接合性である、項目１に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目３)
前記遺伝子改変されたげっ歯類の前記生殖細胞系列ゲノムは、前記修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてヘテロ接合性である、項目１に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目４)
前記生殖細胞系列ゲノムは、
１つ以上のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能に連結された１つ以上の非再編成ヒトＶ Ｈ 遺伝子セグメント、１つ以上の非再編成ヒトＤ Ｈ 遺伝子セグメント、及び１つ以上の非再編成ヒトＪ Ｈ 遺伝子セグメントを含む修飾された内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座をさらに含み、
前記遺伝子改変されたげっ歯類のＢ細胞によって発現されるすべての重鎖は、ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメイン及びげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、項目１～３のいずれかに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目５)
前記遺伝子改変されたげっ歯類の前記生殖細胞系列ゲノムは、前記修飾された内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてホモ接合性である、項目４に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目６)
前記遺伝子改変されたげっ歯類は、前記修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座でげっ歯類Ｃκ遺伝子を欠く、項目１～５のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目７)
前記ヒトＶλ遺伝子セグメントは、Ｖλ１－５１、Ｖλ５－４５、Ｖλ１－４４、Ｖλ１－４０、Ｖλ３－２１、またはＶλ２－１４を含む、項目１～６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目８)
前記ヒトＶλ遺伝子セグメントは、Ｖλ１－５１を含む、項目１～７のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目９)
前記ヒトＶλ遺伝子セグメントは、Ｖλ２－１４を含む、項目１～７のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目１０)
前記ヒトＪλ遺伝子セグメントは、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７を含む、項目１～９のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目１１)
前記ヒトＪλ遺伝子セグメントは、Ｊλ２を含む、項目１～１０のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目１２)
前記１つ以上の非再編成ヒトＶ Ｈ 遺伝子セグメント、１つ以上の非再編成ヒトＤ Ｈ 遺伝子セグメント、及び１つ以上の非再編成ヒトＪ Ｈ 遺伝子セグメントは、１つ以上の内因性Ｖ Ｈ 遺伝子セグメント、１つ以上の内因性Ｄ Ｈ 遺伝子セグメント、１つ以上の内因性Ｊ Ｈ 遺伝子セグメント、またはそれらの組み合わせの代わりである、項目４～１１のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目１３)
前記１つ以上の非再編成ヒトＶ Ｈ 遺伝子セグメント、１つ以上の非再編成ヒトＤ Ｈ 遺伝子セグメント、及び１つ以上の非再編成ヒトＪ Ｈ 遺伝子セグメントは、１つ以上の内因性Ｖ Ｈ 遺伝子セグメント、１つ以上の内因性Ｄ Ｈ 遺伝子セグメント、及び１つ以上の内因性Ｊ Ｈ 遺伝子セグメントにそれぞれ置き換わる、項目４～１２のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目１４)
前記１つ以上のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子は、１つ以上の内因性げっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子である、項目１２または１３に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目１５)
（ｉ）前記１つ以上の非再編成ヒトＶ Ｈ 遺伝子セグメントは、Ｖ Ｈ ３－７４、Ｖ Ｈ ３－７３、Ｖ Ｈ ３－７２、Ｖ Ｈ ２－７０、Ｖ Ｈ １－６９、Ｖ Ｈ ３－６６、Ｖ Ｈ ３－６４、Ｖ Ｈ ４－６１、Ｖ Ｈ ４－５９、Ｖ Ｈ １－５８、Ｖ Ｈ ３－５３、Ｖ Ｈ ５－５１、Ｖ Ｈ ３－４９、Ｖ Ｈ ３－４８、Ｖ Ｈ １－４６、Ｖ Ｈ １－４５、Ｖ Ｈ ３－４３、Ｖ Ｈ ４－３９、Ｖ Ｈ ４－３４、Ｖ Ｈ ３－３３、Ｖ Ｈ ４－３１、Ｖ Ｈ ３－３０、Ｖ Ｈ ４－２８、Ｖ Ｈ ２－２６、Ｖ Ｈ １－２４、Ｖ Ｈ ３－２３、Ｖ Ｈ ３－２１、Ｖ Ｈ ３－２０、Ｖ Ｈ １－１８、Ｖ Ｈ ３－１５、Ｖ Ｈ ３－１３、Ｖ Ｈ ３－１１、Ｖ Ｈ ３－９、Ｖ Ｈ １－８、Ｖ Ｈ ３－７、Ｖ Ｈ ２－５、Ｖ Ｈ ７－４－１、Ｖ Ｈ ４－４、Ｖ Ｈ １－３、Ｖ Ｈ １－２、Ｖ Ｈ ６－１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉ）前記１つ以上の非再編成ヒトＤ Ｈ 遺伝子セグメントは、Ｄ Ｈ １－１、Ｄ Ｈ ２－２、Ｄ Ｈ ３－３、Ｄ Ｈ ４－４、Ｄ Ｈ ５－５、Ｄ Ｈ ６－６、Ｄ Ｈ １－７、Ｄ Ｈ ２－８、Ｄ Ｈ ３－９、Ｄ Ｈ ３－１０、Ｄ Ｈ ５－１２、Ｄ Ｈ ６－１３、Ｄ Ｈ ２－１５、Ｄ Ｈ ３－１６、Ｄ Ｈ ４－１７、Ｄ Ｈ ６－１９、Ｄ Ｈ １－２０、Ｄ Ｈ ２－２１、Ｄ Ｈ ３－２２、Ｄ Ｈ ６－２５、Ｄ Ｈ １－２６、Ｄ Ｈ ７－２７、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉｉ）前記１つ以上の非再編成ヒトＪ Ｈ 遺伝子セグメントは、Ｊ Ｈ １、Ｊ Ｈ ２、Ｊ Ｈ ３、Ｊ Ｈ ４、Ｊ Ｈ ５、Ｊ Ｈ ６、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
項目４～１４のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目１６)
前記遺伝子改変されたげっ歯類の前記生殖細胞系列ゲノムは、１つ以上のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、その機能性オルソログ、機能性ホモログ、または機能性断片をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む、項目４～１５のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目１７)
前記げっ歯類Ｃλ遺伝子は、（ｉ）マウスＣλ１、（ｉｉ）マウスＣλ２、または（ｉｉｉ）マウスＣλ３遺伝子と少なくとも８０％同一の配列を有する、項目１～１６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目１８)
前記げっ歯類Ｃλ遺伝子は、マウスＣλ遺伝子を含む、項目１～１７のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目１９)
前記げっ歯類Ｃλ遺伝子は、マウスＣλ１遺伝子を含む、項目１～１７のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目２０)
前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、１つ以上のげっ歯類Ｖκ遺伝子セグメント、１つ以上のげっ歯類Ｊκ遺伝子セグメント、またはそれらの任意の組み合わせの代わりである、項目１～１９のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目２１)
不活性化内因性免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座をさらに含む、項目１～２０のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目２２)
前記遺伝子改変されたげっ歯類のＢ細胞によって発現されるすべての免疫グロブリン軽鎖は、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンから発現されるヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを含む、項目１～２１のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目２３)
前記修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、前記内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座におけるそれらの内因性位置で１つ以上の内因性エンハンサーをさらに含む、項目１～２２のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目２４)
前記げっ歯類は、ラットまたはマウスである、項目１～２３のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
(項目２５)
遺伝子改変されたマウスであって、その生殖細胞系列ゲノムは、
マウスＣλ１遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含む修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含み、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ１－５１遺伝子セグメント及びヒトＪλ２遺伝子セグメントを含み、
前記遺伝子改変されたマウスのＢ細胞によって発現されるすべての免疫グロブリンλ軽鎖は、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンから発現されるヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを含む、前記遺伝子改変されたマウス。
(項目２６)
遺伝子改変されたマウスであって、その生殖細胞系列ゲノムは、
マウスＣλ１遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含む修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含み、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ２－１４遺伝子セグメント及びヒトＪλ２遺伝子セグメントを含み、
前記遺伝子改変されたマウスのＢ細胞によって発現されるすべての免疫グロブリンλ軽鎖は、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンから発現されるヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを含む、前記遺伝子改変されたマウス。
(項目２７)
げっ歯類胚であって、そのゲノムは、げっ歯類Ｃλ遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含む修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含み、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む、前記げっ歯類胚。
(項目２８)
項目１～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスのＢ細胞であって、
前記修飾された内因性κ軽鎖遺伝子座の前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンを含む、前記Ｂ細胞。
(項目２９)
項目２８に記載のＢ細胞から生成されたハイブリドーマ。
(項目３０)
単一の遺伝子改変されたげっ歯類のＢ細胞の集団であって、前記げっ歯類は、その生殖細胞系列ゲノムにおいて、
（ａ）げっ歯類Ｃλ遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含む修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座であって、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＪλ遺伝子セグメントに機能可能に連結されたヒトＶλ遺伝子セグメントを含む、前記修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、及び
（ｂ）１つ以上の内因性免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能に連結された１つ以上の非再編成ヒトＶ Ｈ 遺伝子セグメント、１つ以上の非再編成ヒトＤ Ｈ 遺伝子セグメント、及び１つ以上の非再編成ヒトＪ Ｈ 遺伝子セグメントを含む修飾された内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座
を含み、
前記Ｂ細胞の集団によって発現されるすべての抗体は、
（ｉ）前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンから発現されるヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメイン、及び
（ｉｉ）少なくとも２つの異なる再編成されたヒト免疫グロブリン重鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンから発現される複数のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む、前記Ｂ細胞の集団。
(項目３１)
げっ歯類Ｃλ遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含む修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含む胚性幹細胞であって、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む、前記胚性幹細胞。
(項目３２)
抗体を発現する哺乳動物細胞であって、前記抗体は、ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む重鎖及びヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを含む軽鎖を含み、前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメイン、前記ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメイン、またはその両方は、項目４～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスから同定された、前記哺乳動物細胞。
(項目３３)
抗体を作製する方法であって、前記方法は、
（ａ）項目１～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを抗原に曝露すること；
（ｂ）前記遺伝子改変されたげっ歯類が前記抗原に対する免疫反応を起こすことを可能にすること；及び
（ｃ）前記遺伝子改変されたげっ歯類から前記抗原に特異的な抗体、前記抗原に特異的な抗体を発現するＢ細胞、または前記抗原に特異的な抗体をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を単離すること
を含む、前記方法。
(項目３４)
抗体を作製する方法であって、
（ａ）哺乳動物細胞において２つのヒト免疫グロブリンλ軽鎖及び２つのヒト免疫グロブリン重鎖を含む前記抗体を発現させる工程であって、各ヒト免疫グロブリンλ軽鎖は、ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを含み、各ヒト免疫グロブリン重鎖は、ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含み、前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインの少なくとも１つ、前記λ軽鎖可変ドメインの少なくとも１つ、またはそれらの組み合わせのアミノ酸配列は、項目４～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスにおいて同定された、前記発現させる工程；及び
（ｂ）前記抗体を得る工程
を含む、前記方法。
(項目３５)
二重特異的抗体を作製する方法であって、前記方法は、
（ａ）項目４～２６のいずれか１項に記載の第１の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを第１の抗原の第１のエピトープと接触させること、
（ｂ）項目４～２６のいずれか１項に記載の第２の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを第２の抗原の第２のエピトープと接触させること、
（ｃ）前記第１の遺伝子改変されたげっ歯類から前記第１の抗原の前記第１のエピトープに特異的な第１の抗体を発現するＢ細胞を単離し、前記第１の抗体の第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを決定すること；
（ｄ）前記第２の遺伝子改変されたげっ歯類から前記第２の抗原の前記第２のエピトープに特異的な第２の抗体を発現するＢ細胞を単離し、前記第２の抗体の第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを決定すること；
（ｅ）前記第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を、第１のヒト免疫グロブリン定常ドメインをコードするヌクレオチド配列と機能可能に連結させて第１のヒト重鎖をコードする第１のヌクレオチド配列を生成すること；
（ｆ）前記第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を、第２のヒト免疫グロブリン定常ドメインをコードするヌクレオチド配列と機能可能に連結させて第２のヒト重鎖をコードする第２のヌクレオチド配列を生成すること；
（ｇ）哺乳動物細胞において、
（ｉ）第１のヌクレオチド配列；
（ｉｉ）第２のヌクレオチド配列；及び
（ｉｉｉ）ヒト免疫グロブリンλ軽鎖定常領域に機能可能に連結された前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンを含む第３のヌクレオチド配列
を発現させること
を含む、前記方法。
(項目３６)
二重特異的抗体を作製する方法であって、前記方法は、
（ａ）哺乳動物細胞において、
（ｉ）第１のヒト免疫グロブリン定常領域に機能可能に連結された第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域を含む第１のヌクレオチド配列；
（ｉｉ）第２のヒト免疫グロブリン定常領域に機能可能に連結された第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域を含む第２のヌクレオチド配列；及び
（ｉｉｉ）ヒト免疫グロブリンλ軽鎖定常領域に機能可能に連結されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含む第３のヌクレオチド配列
を発現させることを含み、
前記第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域は、第１の抗原の第１のエピトープで免疫された第１の遺伝子改変されたげっ歯類における第１の抗体から同定された第１のヒト重鎖可変ドメインをコードし、前記第１の抗体は、前記第１の抗原の前記第１のエピトープに特異的に結合し；
前記第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域は、第２の抗原の第２のエピトープで免疫された第２の遺伝子改変されたげっ歯類における第２の抗体から同定された第２のヒト重鎖可変ドメインをコードし、前記第２の抗体は、前記第２の抗原の前記第２のエピトープに特異的に結合し；
前記第１及び第２の遺伝子改変されたげっ歯類はそれぞれ、項目４～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスであり；
前記第３のヌクレオチドの前記ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンである、前記方法。
(項目３７)
ヒト免疫グロブリン重鎖を作製するための方法であって、前記方法は、
（ａ）項目４～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを対象となる抗原に曝露する工程；
（ｂ）前記抗原に特異的に結合し、かつ前記遺伝子改変されたげっ歯類によって生成された抗体のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列を得る工程；及び
（ｃ）前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列をヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメイン配列に機能可能に連結させてヒト免疫グロブリン重鎖を形成する工程
を含む、前記方法。
(項目３８)
ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを作製するための方法であって、前記方法は、
（ａ）項目４～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを対象となる抗原に曝露する工程；及び
（ｂ）前記抗原に特異的に結合し、かつ前記遺伝子改変されたげっ歯類によって生成された抗体のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列を得る工程
を含む、前記方法。
(項目３９)
ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインのコレクションを作製する方法であって、
（ａ）項目４～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを対象となる抗原に曝露すること、及び
（ｂ）前記遺伝子改変されたげっ歯類から前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインのコレクションを単離すること
を含み、
前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインのコレクションはそれぞれ、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンから発現されるヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインに結合し、
前記コレクションにおける前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインのいずれか１つと対合した前記ヒトλ軽鎖可変ドメインは、前記抗原に結合する、前記方法。
(項目４０)
ヒト免疫グロブリンλ軽鎖を作製するための方法であって、前記方法は、
（ａ）項目１～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを対象となる抗原に曝露する工程；
（ｂ）前記抗原に特異的に結合し、かつ前記遺伝子改変されたげっ歯類によって生成された抗体のヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメイン配列を得る工程；及び
（ｃ）前記ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメイン配列をヒト免疫グロブリンλ軽鎖定常ドメイン配列に機能可能に連結させてヒト免疫グロブリンλ軽鎖を形成する工程
を含む、前記方法。
(項目４１)
ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを生成するための方法であって、前記方法は、
（ａ）項目１～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを対象となる抗原に曝露する工程；及び
（ｂ）前記抗原に特異的に結合し、かつ前記遺伝子改変されたげっ歯類によって生成された抗体のヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメイン配列を得る工程
を含む、前記方法。
(項目４２)
ヒト免疫グロブリン重鎖をコードするヌクレオチド配列を作製するための方法であって、前記方法は、
（ａ）項目４～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを対象となる抗原に曝露する工程；
（ｂ）前記抗原に特異的に結合し、かつ前記遺伝子改変されたげっ歯類によって生成された抗体のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列をコードするヒト免疫グロブリン重鎖可変領域を得る工程；及び
（ｃ）前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域をヒト免疫グロブリン重鎖定常領域配列に機能可能に連結させてヒト免疫グロブリン重鎖をコードするヌクレオチド配列を形成する工程
を含む、前記方法。
(項目４３)
ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域を含むヌクレオチド配列を作製するための方法であって、前記方法は、
（ａ）項目４～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを対象となる抗原に曝露する工程；及び
（ｂ）前記抗原に特異的に結合し、かつ前記遺伝子改変されたげっ歯類によって生成された抗体のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列をコードするヒト免疫グロブリン重鎖可変領域を得る工程
を含む、前記方法。
(項目４４)
ヒト免疫グロブリンλ軽鎖をコードするヌクレオチド配列を作製するための方法であって、前記方法は、
（ａ）項目１～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを対象となる抗原に曝露する工程；
（ｂ）前記抗原に特異的に結合し、かつ前記遺伝子改変されたげっ歯類によって生成された抗体のヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメイン配列をコードするヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を得る工程；及び
（ｃ）前記ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域をヒト免疫グロブリンλ軽鎖定常領域配列に機能可能に連結させてヒト免疫グロブリンλ軽鎖をコードするヌクレオチド配列を形成する工程
を含む、前記方法。
(項目４５)
ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含むヌクレオチド配列を作製するための方法であって、前記方法は、
（ａ）項目１～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを対象となる抗原に曝露する工程；及び
（ｂ）前記抗原に特異的に結合し、かつ前記遺伝子改変されたげっ歯類によって生成された抗体のヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメイン配列をコードするヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を得る工程
を含む、前記方法。
(項目４６)
ターゲティングベクターであって、
（ｉ）内因性げっ歯類κ軽鎖遺伝子座における５’標的配列に対応するヌクレオチド配列を含む５’ホモロジーアーム；
（ｉｉ）Ｖλ遺伝子セグメント及びＪλ遺伝子セグメントを含む単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域；
（ｉｉｉ）げっ歯類Ｃλ遺伝子セグメント；及び
（ｉｖ）前記内因性げっ歯類κ軽鎖遺伝子座における３’標的配列に対応するヌクレオチド配列を含む３’ホモロジーアーム
を含む、前記ターゲティングベクター。
(項目４７)
遺伝子改変されたげっ歯類を作製する方法であって、
（ａ）ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を、げっ歯類ＥＳ細胞のゲノムにおける修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に導入する工程；及び
（ｂ）工程（ａ）において生成された前記げっ歯類ＥＳ細胞を使用してげっ歯類を生成する工程
を含む、前記方法。
(項目４８)
遺伝子改変されたげっ歯類を作製する方法であって、
（ａ）げっ歯類Ｃλ遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を、げっ歯類ＥＳ細胞のゲノムにおける修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に導入する工程であって、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む、前記導入する工程；及び
（ｂ）工程（ａ）において生成された前記げっ歯類ＥＳ細胞を使用してげっ歯類を生成する工程
を含む、前記方法。
(項目４９)
遺伝子改変されたげっ歯類ＥＳ細胞を作製する方法であって、
ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を、げっ歯類ＥＳ細胞のゲノムにおける修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に導入する工程
を含む、前記方法。
(項目５０)
遺伝子改変されたげっ歯類ＥＳ細胞を作製する方法であって、
げっ歯類Ｃλ遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を、げっ歯類ＥＳ細胞のゲノムにおける修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に導入する工程であって、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む、前記導入する工程
を含む、前記方法。
(項目５１)
遺伝子改変されたげっ歯類を作製する方法であって、
（ａ）前記げっ歯類の前記生殖細胞系列ゲノムにおける内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を、げっ歯類Ｃλ遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含むように修飾する工程であって、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む、前記修飾する工程を含み、
これにより前記遺伝子改変されたげっ歯類のＢ細胞によって発現されるすべての免疫グロブリンλ軽鎖は、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンから発現されるヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを含む、前記方法。
(項目５２)
組換えげっ歯類細胞を生成するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ方法であって、前記組換えげっ歯類細胞のゲノムを、
げっ歯類Ｃλ遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含む修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含むように改変することを含み、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む、前記ｉｎ ｖｉｔｒｏ方法。
Claims (32)
- 遺伝子改変されたげっ歯類であって、その生殖細胞系列ゲノムは、
げっ歯類Ｃλ遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含む修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含み、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含み、
前記遺伝子改変されたげっ歯類のＢ細胞によって発現されるすべての免疫グロブリンλ軽鎖は、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンから発現されるヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを含む、前記遺伝子改変されたげっ歯類。 - 前記遺伝子改変されたげっ歯類の前記生殖細胞系列ゲノムは、前記修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてホモ接合性である、請求項１に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
- 前記遺伝子改変されたげっ歯類の前記生殖細胞系列ゲノムは、前記修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてヘテロ接合性である、請求項１に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
- 前記生殖細胞系列ゲノムは、
１つ以上のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能に連結された１つ以上の非再編成ヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つ以上の非再編成ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つ以上の非再編成ヒトＪＨ遺伝子セグメントを含む修飾された内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座をさらに含み、
前記遺伝子改変されたげっ歯類のＢ細胞によって発現されるすべての重鎖は、ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメイン及びげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、請求項１～３のいずれかに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。 - 前記遺伝子改変されたげっ歯類の前記生殖細胞系列ゲノムは、前記修飾された内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてホモ接合性である、請求項４に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
- 前記遺伝子改変されたげっ歯類は、前記修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座でげっ歯類Ｃκ遺伝子を欠く、請求項１～５のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
- 前記ヒトＶλ遺伝子セグメントは、Ｖλ１－５１、Ｖλ５－４５、Ｖλ１－４４、Ｖλ１－４０、Ｖλ３－２１、またはＶλ２－１４を含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
- 前記ヒトＶλ遺伝子セグメントは、Ｖλ１－５１を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
- 前記ヒトＶλ遺伝子セグメントは、Ｖλ２－１４を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
- 前記ヒトＪλ遺伝子セグメントは、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
- 前記ヒトＪλ遺伝子セグメントは、Ｊλ２を含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
- 前記１つ以上の非再編成ヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つ以上の非再編成ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つ以上の非再編成ヒトＪＨ遺伝子セグメントは、１つ以上の内因性ＶＨ遺伝子セグメント、１つ以上の内因性ＤＨ遺伝子セグメント、１つ以上の内因性ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの組み合わせの代わりである、請求項４～１１のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
- 前記１つ以上の非再編成ヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つ以上の非再編成ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つ以上の非再編成ヒトＪＨ遺伝子セグメントは、１つ以上の内因性ＶＨ遺伝子セグメント、１つ以上の内因性ＤＨ遺伝子セグメント、及び１つ以上の内因性ＪＨ遺伝子セグメントにそれぞれ置き換わる、請求項４～１２のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
- 前記１つ以上のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子は、１つ以上の内因性げっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子である、請求項１２または１３に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
- （ｉ）前記１つ以上の非再編成ヒトＶＨ遺伝子セグメントは、ＶＨ３－７４、ＶＨ３－７３、ＶＨ３－７２、ＶＨ２－７０、ＶＨ１－６９、ＶＨ３－６６、ＶＨ３－６４、ＶＨ４－６１、ＶＨ４－５９、ＶＨ１－５８、ＶＨ３－５３、ＶＨ５－５１、ＶＨ３－４９、ＶＨ３－４８、ＶＨ１－４６、ＶＨ１－４５、ＶＨ３－４３、ＶＨ４－３９、ＶＨ４－３４、ＶＨ３－３３、ＶＨ４－３１、ＶＨ３－３０、ＶＨ４－２８、ＶＨ２－２６、ＶＨ１－２４、ＶＨ３－２３、ＶＨ３－２１、ＶＨ３－２０、ＶＨ１－１８、ＶＨ３－１５、ＶＨ３－１３、ＶＨ３－１１、ＶＨ３－９、ＶＨ１－８、ＶＨ３－７、ＶＨ２－５、ＶＨ７－４－１、ＶＨ４－４、ＶＨ１－３、ＶＨ１－２、ＶＨ６－１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉ）前記１つ以上の非再編成ヒトＤＨ遺伝子セグメントは、ＤＨ１－１、ＤＨ２－２、ＤＨ３－３、ＤＨ４－４、ＤＨ５－５、ＤＨ６－６、ＤＨ１－７、ＤＨ２－８、ＤＨ３－９、ＤＨ３－１０、ＤＨ５－１２、ＤＨ６－１３、ＤＨ２－１５、ＤＨ３－１６、ＤＨ４－１７、ＤＨ６－１９、ＤＨ１－２０、ＤＨ２－２１、ＤＨ３－２２、ＤＨ６－２５、ＤＨ１－２６、ＤＨ７－２７、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉｉ）前記１つ以上の非再編成ヒトＪＨ遺伝子セグメントは、ＪＨ１、ＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、ＪＨ６、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
請求項４～１４のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。 - 前記遺伝子改変されたげっ歯類の前記生殖細胞系列ゲノムは、１つ以上のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、その機能性オルソログ、機能性ホモログ、または機能性断片をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む、請求項４～１５のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
- 前記げっ歯類Ｃλ遺伝子は、（ｉ）マウスＣλ１、（ｉｉ）マウスＣλ２、または（ｉｉｉ）マウスＣλ３遺伝子と少なくとも８０％同一の配列を有する、請求項１～１６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
- 前記げっ歯類Ｃλ遺伝子は、マウスＣλ遺伝子を含む、請求項１～１７のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
- 前記げっ歯類Ｃλ遺伝子は、マウスＣλ１遺伝子を含む、請求項１～１７のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
- 前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、１つ以上のげっ歯類Ｖκ遺伝子セグメント、１つ以上のげっ歯類Ｊκ遺伝子セグメント、またはそれらの任意の組み合わせの代わりである、請求項１～１９のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
- 不活性化内因性免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座をさらに含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
- 前記遺伝子改変されたげっ歯類のＢ細胞によって発現されるすべての免疫グロブリン軽鎖は、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンから発現されるヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを含む、請求項１～２１のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
- 前記修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、前記内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座におけるそれらの内因性位置で１つ以上の内因性エンハンサーをさらに含む、請求項１～２２のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
- 前記げっ歯類は、ラットまたはマウスである、請求項１～２３のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
- 遺伝子改変されたマウスであって、その生殖細胞系列ゲノムは、
マウスＣλ１遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含む修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含み、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ１－５１遺伝子セグメント及びヒトＪλ２遺伝子セグメントを含み、
前記遺伝子改変されたマウスのＢ細胞によって発現されるすべての免疫グロブリンλ軽鎖は、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンから発現されるヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを含む、前記遺伝子改変されたマウス。 - 遺伝子改変されたマウスであって、その生殖細胞系列ゲノムは、
マウスＣλ１遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含む修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含み、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ２－１４遺伝子セグメント及びヒトＪλ２遺伝子セグメントを含み、
前記遺伝子改変されたマウスのＢ細胞によって発現されるすべての免疫グロブリンλ軽鎖は、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンから発現されるヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを含む、前記遺伝子改変されたマウス。 - 抗体を作製する方法であって、前記方法は、
（ａ）請求項１～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを抗原に曝露すること；
（ｂ）前記遺伝子改変されたげっ歯類が前記抗原に対する免疫反応を起こすことを可能にすること；及び
（ｃ）前記遺伝子改変されたげっ歯類から前記抗原に特異的な抗体、前記抗原に特異的な抗体を発現するＢ細胞、または前記抗原に特異的な抗体をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を単離すること
を含む、前記方法。 - 抗体を作製する方法であって、
（ａ）哺乳動物細胞において２つのヒト免疫グロブリンλ軽鎖及び２つのヒト免疫グロブリン重鎖を含む前記抗体を発現させる工程であって、各ヒト免疫グロブリンλ軽鎖は、ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを含み、各ヒト免疫グロブリン重鎖は、ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含み、前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインの少なくとも１つ、前記λ軽鎖可変ドメインの少なくとも１つ、またはそれらの組み合わせのアミノ酸配列は、請求項４～２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスにおいて同定された、前記発現させる工程；及び
（ｂ）前記抗体を得る工程
を含む、前記方法。 - 二重特異的抗体を作製する方法であって、前記方法は、
（ａ）請求項４～２６のいずれか１項に記載の第１の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを第１の抗原の第１のエピトープと接触させること、
（ｂ）請求項４～２６のいずれか１項に記載の第２の遺伝子改変されたげっ歯類またはマウスを第２の抗原の第２のエピトープと接触させること、
（ｃ）前記第１の遺伝子改変されたげっ歯類から前記第１の抗原の前記第１のエピトープに特異的な第１の抗体を発現するＢ細胞を単離し、前記第１の抗体の第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを決定すること；
（ｄ）前記第２の遺伝子改変されたげっ歯類から前記第２の抗原の前記第２のエピトープに特異的な第２の抗体を発現するＢ細胞を単離し、前記第２の抗体の第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを決定すること；
（ｅ）前記第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を、第１のヒト免疫グロブリン定常ドメインをコードするヌクレオチド配列と機能可能に連結させて第１のヒト重鎖をコードする第１のヌクレオチド配列を生成すること；
（ｆ）前記第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を、第２のヒト免疫グロブリン定常ドメインをコードするヌクレオチド配列と機能可能に連結させて第２のヒト重鎖をコードする第２のヌクレオチド配列を生成すること；
（ｇ）哺乳動物細胞において、
（ｉ）第１のヌクレオチド配列；
（ｉｉ）第２のヌクレオチド配列；及び
（ｉｉｉ）ヒト免疫グロブリンλ軽鎖定常領域に機能可能に連結された前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンを含む第３のヌクレオチド配列
を発現させること
を含む、前記方法。 - 遺伝子改変されたげっ歯類を作製する方法であって、
（ａ）ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を、げっ歯類ＥＳ細胞のゲノムにおける修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に導入する工程；及び
（ｂ）工程（ａ）において生成された前記げっ歯類ＥＳ細胞を使用してげっ歯類を生成する工程
を含む、前記方法。 - 遺伝子改変されたげっ歯類を作製する方法であって、
（ａ）げっ歯類Ｃλ遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を、げっ歯類ＥＳ細胞のゲノムにおける修飾された内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に導入する工程であって、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む、前記導入する工程；及び
（ｂ）工程（ａ）において生成された前記げっ歯類ＥＳ細胞を使用してげっ歯類を生成する工程
を含む、前記方法。 - 遺伝子改変されたげっ歯類を作製する方法であって、
（ａ）前記げっ歯類の前記生殖細胞系列ゲノムにおける内因性免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を、げっ歯類Ｃλ遺伝子セグメントに機能可能に連結された単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域を含むように修飾する工程であって、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域は、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む、前記修飾する工程を含み、
これにより前記遺伝子改変されたげっ歯類のＢ細胞によって発現されるすべての免疫グロブリンλ軽鎖は、前記単一の再編成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域またはその体細胞超変異バージョンから発現されるヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを含む、前記方法。
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